JP2002085919A - 核酸分離精製用多重層フィルター - Google Patents
核酸分離精製用多重層フィルターInfo
- Publication number
- JP2002085919A JP2002085919A JP2000302332A JP2000302332A JP2002085919A JP 2002085919 A JP2002085919 A JP 2002085919A JP 2000302332 A JP2000302332 A JP 2000302332A JP 2000302332 A JP2000302332 A JP 2000302332A JP 2002085919 A JP2002085919 A JP 2002085919A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- filter
- nucleic acid
- filter layer
- multilayer
- layer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D39/00—Filtering material for liquid or gaseous fluids
- B01D39/14—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material
- B01D39/16—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material of organic material, e.g. synthetic fibres
- B01D39/1607—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material of organic material, e.g. synthetic fibres the material being fibrous
- B01D39/1623—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material of organic material, e.g. synthetic fibres the material being fibrous of synthetic origin
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D39/00—Filtering material for liquid or gaseous fluids
- B01D39/14—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material
- B01D39/16—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material of organic material, e.g. synthetic fibres
- B01D39/1607—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material of organic material, e.g. synthetic fibres the material being fibrous
- B01D39/1615—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material of organic material, e.g. synthetic fibres the material being fibrous of natural origin
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D39/00—Filtering material for liquid or gaseous fluids
- B01D39/14—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material
- B01D39/20—Other self-supporting filtering material ; Other filtering material of inorganic material, e.g. asbestos paper, metallic filtering material of non-woven wires
- B01D39/2003—Glass or glassy material
- B01D39/2017—Glass or glassy material the material being filamentary or fibrous
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
- C12N15/1017—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by filtration, e.g. using filters, frits, membranes
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D2239/00—Aspects relating to filtering material for liquid or gaseous fluids
- B01D2239/04—Additives and treatments of the filtering material
- B01D2239/0464—Impregnants
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D2239/00—Aspects relating to filtering material for liquid or gaseous fluids
- B01D2239/06—Filter cloth, e.g. knitted, woven non-woven; self-supported material
- B01D2239/065—More than one layer present in the filtering material
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D2239/00—Aspects relating to filtering material for liquid or gaseous fluids
- B01D2239/10—Filtering material manufacturing
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Geology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Filtering Materials (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 高効率、高選択性、高強度の核酸分離精製用
多重層フィルターを提供すること。 【解決手段】 本発明の核酸分離精製用多重層フィルタ
ーは、多孔質合成樹脂層、ガラス層、紙層からなり、常
圧では核酸を含有した細胞破砕溶液全体の透過を防止す
るが、減圧濾過時には核酸含有溶液のみを透過させ細胞
残留物は捕集するトラッピングフィルターと、カオトロ
ピック塩の存在下ではプラスミドＤＮＡを吸着し、溶離
緩衝液を添加する場合にはプラスミドＤＮＡを脱着させ
るバインディングフィルターと、に大別されることを特
徴とする。
多重層フィルターを提供すること。 【解決手段】 本発明の核酸分離精製用多重層フィルタ
ーは、多孔質合成樹脂層、ガラス層、紙層からなり、常
圧では核酸を含有した細胞破砕溶液全体の透過を防止す
るが、減圧濾過時には核酸含有溶液のみを透過させ細胞
残留物は捕集するトラッピングフィルターと、カオトロ
ピック塩の存在下ではプラスミドＤＮＡを吸着し、溶離
緩衝液を添加する場合にはプラスミドＤＮＡを脱着させ
るバインディングフィルターと、に大別されることを特
徴とする。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は生体試料から核酸を
分離及び精製するフィルターに係り、さらに詳しくは親
水生及び／又は孔径の異なる多数のフィルターが層状構
造になっている核酸精製用多重層複合フィルターに関す
る。
分離及び精製するフィルターに係り、さらに詳しくは親
水生及び／又は孔径の異なる多数のフィルターが層状構
造になっている核酸精製用多重層複合フィルターに関す
る。
【０００２】
【従来の技術】生体試料から核酸を分離及び精製する過
程は、遺伝子増幅、塩基序列分析、遺伝子再組合などを
行うときに求められる必修的な過程である。現在まで、
血液、喀痰、生体組織、動物細胞、植物組織、大腸菌、
ビールスなどの生体試料とアガロース又はポリアクリル
アミドゲルなどとに分散されている核酸を分離及び精製
するために多様な方法が一般に知られている。
程は、遺伝子増幅、塩基序列分析、遺伝子再組合などを
行うときに求められる必修的な過程である。現在まで、
血液、喀痰、生体組織、動物細胞、植物組織、大腸菌、
ビールスなどの生体試料とアガロース又はポリアクリル
アミドゲルなどとに分散されている核酸を分離及び精製
するために多様な方法が一般に知られている。
【０００３】例えば、大腸菌又はバクテリアを形質転換
させて得た形質転換体の培養液からプラスミドＤＮＡを
分離する加熱法(boiling method； holmes, D.S. a
nd M.Quigley, １９８１, Anal. Biochem. １１
４:１９３)と、 アルカリ溶菌法(alkaline lysis me
thod; Birnboim、Ｈ．Ｃ．及びＪ．Doly、１９７９、N
ucleic Acids Res．７：１５１３)とが知られてお
り、塩化セシウム 密度勾配遠心分離によるプラスミド
分離及び精製方法などが高純度の核酸を得るための方法
として一般に知られている。
させて得た形質転換体の培養液からプラスミドＤＮＡを
分離する加熱法(boiling method； holmes, D.S. a
nd M.Quigley, １９８１, Anal. Biochem. １１
４:１９３)と、 アルカリ溶菌法(alkaline lysis me
thod; Birnboim、Ｈ．Ｃ．及びＪ．Doly、１９７９、N
ucleic Acids Res．７：１５１３)とが知られてお
り、塩化セシウム 密度勾配遠心分離によるプラスミド
分離及び精製方法などが高純度の核酸を得るための方法
として一般に知られている。
【０００４】生体試料から純粋な核酸を分離する方法と
して、ＮａＩ又はＮａＣＩＯ４ などのカオトロピック
塩の存在下で核酸をシリカ又はガラス表面に吸着させて
分離する方法がよく知られている(Marko、 M. A. et
al. １９８２. A procedure for the large s
cale isolation of highly purified plasmid DN
A using alkaline extraction and binding to
glass powder. Anal.Biochem. １２１：３８２−３
８７; Vogeistein. B. et al. １９７９.Preparat
ive and analytical purification of DNA from
agarose. Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ ７
６：６１５−６１９)。このようなシリカ又はガラス表
面に核酸のカオトロピック塩誘導吸着方法は、細胞破砕
物から染色体及びプラスミドＤＮＡを精製する一般的な
方法である(Buffone, G. J., etal. １９９１. Cli
n. Chem. ３７., １９４５)。
して、ＮａＩ又はＮａＣＩＯ４ などのカオトロピック
塩の存在下で核酸をシリカ又はガラス表面に吸着させて
分離する方法がよく知られている(Marko、 M. A. et
al. １９８２. A procedure for the large s
cale isolation of highly purified plasmid DN
A using alkaline extraction and binding to
glass powder. Anal.Biochem. １２１：３８２−３
８７; Vogeistein. B. et al. １９７９.Preparat
ive and analytical purification of DNA from
agarose. Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ ７
６：６１５−６１９)。このようなシリカ又はガラス表
面に核酸のカオトロピック塩誘導吸着方法は、細胞破砕
物から染色体及びプラスミドＤＮＡを精製する一般的な
方法である(Buffone, G. J., etal. １９９１. Cli
n. Chem. ３７., １９４５)。
【０００５】上記の核酸吸着反応は、核酸が結合するよ
うになる高敏感性表面を提供するシリカ粉末分散液や圧
縮されたガラス繊維を用いて、ｐＨ４〜５のグアニジン
塩酸塩緩衝溶液又はｐＨ７．５〜ｐＨ８の４Ｍのヨウ化
ナトイウム緩衝溶液内で行われる。
うになる高敏感性表面を提供するシリカ粉末分散液や圧
縮されたガラス繊維を用いて、ｐＨ４〜５のグアニジン
塩酸塩緩衝溶液又はｐＨ７．５〜ｐＨ８の４Ｍのヨウ化
ナトイウム緩衝溶液内で行われる。
【０００６】現在まで、核酸含有溶液で核酸を分離及び
精製するための各種手動又は自動化装置が開発されつつ
あり、これら装置の使用に適した核酸分離精製用フィル
ターの開発が行われている。しかし、現在まで開発され
た核酸分離用フィルターは、細胞破砕物溶液に含有され
た固形物によってフィルターの気孔が早期に閉鎖される
ため、長時間の連続的使用に限界があり、高速減圧濾過
時に発生する圧力に耐えることができる機械的強度が十
分でない、核酸の選択的吸着能力に限界があった。ま
た、界面活性剤を含んだ溶液を用いるとき、フィルター
層が濡れてしまって常圧でも溶液が漏れるという問題点
が発生した。
精製するための各種手動又は自動化装置が開発されつつ
あり、これら装置の使用に適した核酸分離精製用フィル
ターの開発が行われている。しかし、現在まで開発され
た核酸分離用フィルターは、細胞破砕物溶液に含有され
た固形物によってフィルターの気孔が早期に閉鎖される
ため、長時間の連続的使用に限界があり、高速減圧濾過
時に発生する圧力に耐えることができる機械的強度が十
分でない、核酸の選択的吸着能力に限界があった。ま
た、界面活性剤を含んだ溶液を用いるとき、フィルター
層が濡れてしまって常圧でも溶液が漏れるという問題点
が発生した。
【０００７】従って、核酸を含有する生体試料から核酸
を効率的に分離させるためには、一回に多量の生体試料
を処理することができ、核酸に対する選択的吸着能力が
優秀であり、高速減圧濾過に耐える十分な強度を有し、
各種溶解溶液の処理時にも漏れない、自動化された核酸
分離精製装置に容易に装着し得る形状に加工しやすいフ
ィルターの開発が求められている。
を効率的に分離させるためには、一回に多量の生体試料
を処理することができ、核酸に対する選択的吸着能力が
優秀であり、高速減圧濾過に耐える十分な強度を有し、
各種溶解溶液の処理時にも漏れない、自動化された核酸
分離精製装置に容易に装着し得る形状に加工しやすいフ
ィルターの開発が求められている。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】本発明はかかる従来の
問題点を解決するためのもので、その目的は上述した如
き物性を充足させる、高効率、高選択性、高強度の核酸
分離精製用フィルターを提供することにある。
問題点を解決するためのもので、その目的は上述した如
き物性を充足させる、高効率、高選択性、高強度の核酸
分離精製用フィルターを提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明の核酸分離精製用
多重層フィルターは、多孔質合成樹脂層、ガラス層、紙
層からなり、常圧では核酸を含有した細胞破砕溶液全体
の透過を防止するが、減圧濾過時には核酸含有溶液のみ
を透過させ細胞残留物は捕集するトラッピングフィルタ
ーと、カオトロピック塩の存在下ではプラスミドＤＮＡ
を吸着し、溶離緩衝液を添加する場合にはプラスミドＤ
ＮＡを脱着させるバインディングフィルターと、に大別
されることを特徴とする。
多重層フィルターは、多孔質合成樹脂層、ガラス層、紙
層からなり、常圧では核酸を含有した細胞破砕溶液全体
の透過を防止するが、減圧濾過時には核酸含有溶液のみ
を透過させ細胞残留物は捕集するトラッピングフィルタ
ーと、カオトロピック塩の存在下ではプラスミドＤＮＡ
を吸着し、溶離緩衝液を添加する場合にはプラスミドＤ
ＮＡを脱着させるバインディングフィルターと、に大別
されることを特徴とする。
【００１０】
【発明の実施の形態】以下、添付図面を参照しつつ、本
発明の核酸分離精製用多重層フィルターの構成を説明す
る。
発明の核酸分離精製用多重層フィルターの構成を説明す
る。
【００１１】本発明のトラッピングフィルターは、常圧
で細胞破砕溶液の透過及び核酸の吸着を防止するため、
疎水性を持つ多孔質合成樹脂又は疎水性によって表面処
理された多孔質ガラスで製作される。トラッピングフィ
ルターは、核酸は通過できるが、他の細胞残留物は透過
できない孔径の気孔を持つ。また、多様な大きさの残留
物を逐次分散／濾過させて一回に濾過することができる
溶液の量を極大化するため、孔径が互いに異なる疎水性
フィルター層を多数積み重ねた構造を有する。
で細胞破砕溶液の透過及び核酸の吸着を防止するため、
疎水性を持つ多孔質合成樹脂又は疎水性によって表面処
理された多孔質ガラスで製作される。トラッピングフィ
ルターは、核酸は通過できるが、他の細胞残留物は透過
できない孔径の気孔を持つ。また、多様な大きさの残留
物を逐次分散／濾過させて一回に濾過することができる
溶液の量を極大化するため、孔径が互いに異なる疎水性
フィルター層を多数積み重ねた構造を有する。
【００１２】本発明のトラッピングフィルターの最下層
１には、蛋白質、ゲノムＤＮＡ、各種細胞残留物などは
透過できないが、プラスミドＤＮＡは透過できるフィル
ター層として、疎水性フィルター層が配置され、ここで
疎水性フィルター層は合成樹脂フィルター層又は紙フィ
ルター層又は疎水性によって表面処理されたガラスフィ
ルター層である。前記疎水性フィルター層上に疎水性合
成樹脂フィルター層又は紙フィルター層２〜９を多層に
積み重ねた構造を有する。このようなトラッピングフィ
ルターは、常圧では細胞溶解液を透過させないが、細胞
溶解液に遠心力が加えられるか又はフィルター層の下部
で減圧吸入する場合には核酸含有溶液のみをフィルター
下部に透過させる。
１には、蛋白質、ゲノムＤＮＡ、各種細胞残留物などは
透過できないが、プラスミドＤＮＡは透過できるフィル
ター層として、疎水性フィルター層が配置され、ここで
疎水性フィルター層は合成樹脂フィルター層又は紙フィ
ルター層又は疎水性によって表面処理されたガラスフィ
ルター層である。前記疎水性フィルター層上に疎水性合
成樹脂フィルター層又は紙フィルター層２〜９を多層に
積み重ねた構造を有する。このようなトラッピングフィ
ルターは、常圧では細胞溶解液を透過させないが、細胞
溶解液に遠心力が加えられるか又はフィルター層の下部
で減圧吸入する場合には核酸含有溶液のみをフィルター
下部に透過させる。
【００１３】従って、本発明のトラッピングフィルター
は、細胞培養及び細胞溶解過程で使用される容器の下端
部材料として用いられるもので、細胞溶解液を別途の濾
過容器に移せずそのまま減圧濾過することにより、細胞
残骸物は捕集し、核酸含有溶液は透過させる過程で用い
られる。
は、細胞培養及び細胞溶解過程で使用される容器の下端
部材料として用いられるもので、細胞溶解液を別途の濾
過容器に移せずそのまま減圧濾過することにより、細胞
残骸物は捕集し、核酸含有溶液は透過させる過程で用い
られる。
【００１４】本発明のトラッピングフィルターは、該ト
ラッピングフィルターを用いることにより、細胞培養過
程、細胞破砕過程、及び濾過過程を容器の交替作業無し
で連続的に進行することができるので、現在開発中の多
様な種類の核酸分離精製装置の自動化に極めて役に立
つ。また、本発明のトラッピングフィルターは、多数の
フィルター層が積み重なった構造を有するので、高速減
圧濾過時にフィルター層に加えられる圧力に耐えること
ができ、孔径／厚さが一定な従来のフィルターに比べて
一回に多量の細胞培養液を処理することができるので、
核酸分離精製装置の効率化に役に立つ。
ラッピングフィルターを用いることにより、細胞培養過
程、細胞破砕過程、及び濾過過程を容器の交替作業無し
で連続的に進行することができるので、現在開発中の多
様な種類の核酸分離精製装置の自動化に極めて役に立
つ。また、本発明のトラッピングフィルターは、多数の
フィルター層が積み重なった構造を有するので、高速減
圧濾過時にフィルター層に加えられる圧力に耐えること
ができ、孔径／厚さが一定な従来のフィルターに比べて
一回に多量の細胞培養液を処理することができるので、
核酸分離精製装置の効率化に役に立つ。
【００１５】本発明のトラッピングフィルターは、通常
核酸の分離精製に用いられる円周形状のチューブの下端
部に装着することができ、好ましくは市中で購入可能な
標準マルチウェルプレート、例えば、９６(１２■８)の
ウェルプレートのウェルに挿着することができ、底面に
吸入口が形成されているため真空吸入による減圧濾過の
可能なチューブやウェルの内部に装着する。全体の厚さ
は濾過の効率を考慮して適切に調節することができる。
核酸の分離精製に用いられる円周形状のチューブの下端
部に装着することができ、好ましくは市中で購入可能な
標準マルチウェルプレート、例えば、９６(１２■８)の
ウェルプレートのウェルに挿着することができ、底面に
吸入口が形成されているため真空吸入による減圧濾過の
可能なチューブやウェルの内部に装着する。全体の厚さ
は濾過の効率を考慮して適切に調節することができる。
【００１６】本発明のトラッピングフィルターの好まし
い実施例は、疎水性によって表面処理されたガラスフィ
ルター層１と疎水性合成樹脂フィルター層２〜９とを多
層に積み重ねた形態である。このとき、中間に挿入され
るフィルターの疎水性の有無はあまり問題にならない
が、最上層９のフィルターとしては疎水性を持つフィル
ターが望ましい。このようなフィルターには、常圧では
水溶液を濾過させなく、ただ減圧又は遠心分離したとき
にのみ水溶液を濾過させるという特性を持たせる。この
ようなフィルターとしては、ポリエチレンやポリプロピ
レンなどのポリオレフィン系樹脂フィルターが望まし
い。本発明の疎水性ガラスフィルター層１は、通常なガ
ラスフィルターを、クロロホルム溶媒に溶かした３％の
ジメチルジクロライドシラン溶液又は３％のジエチルク
ロライドシラン溶液に含浸させた後に乾燥させることに
より、表面を疎水性に変化させたフィルターである。こ
のように処理する場合、核酸がフィルターに吸着される
ことを防止することができる。このように疎水化処理し
たガラスフィルター層１の孔径は１μｍ〜1０μｍであ
るが、好ましくは２μｍ 〜５μｍである。疎水性合成
樹脂フィルター層２〜９の孔径は５μｍ〜４０μｍであ
るが、好ましくは１０μｍ〜４０μｍ、さらに好ましく
は１０μｍ〜２０μｍである。
い実施例は、疎水性によって表面処理されたガラスフィ
ルター層１と疎水性合成樹脂フィルター層２〜９とを多
層に積み重ねた形態である。このとき、中間に挿入され
るフィルターの疎水性の有無はあまり問題にならない
が、最上層９のフィルターとしては疎水性を持つフィル
ターが望ましい。このようなフィルターには、常圧では
水溶液を濾過させなく、ただ減圧又は遠心分離したとき
にのみ水溶液を濾過させるという特性を持たせる。この
ようなフィルターとしては、ポリエチレンやポリプロピ
レンなどのポリオレフィン系樹脂フィルターが望まし
い。本発明の疎水性ガラスフィルター層１は、通常なガ
ラスフィルターを、クロロホルム溶媒に溶かした３％の
ジメチルジクロライドシラン溶液又は３％のジエチルク
ロライドシラン溶液に含浸させた後に乾燥させることに
より、表面を疎水性に変化させたフィルターである。こ
のように処理する場合、核酸がフィルターに吸着される
ことを防止することができる。このように疎水化処理し
たガラスフィルター層１の孔径は１μｍ〜1０μｍであ
るが、好ましくは２μｍ 〜５μｍである。疎水性合成
樹脂フィルター層２〜９の孔径は５μｍ〜４０μｍであ
るが、好ましくは１０μｍ〜４０μｍ、さらに好ましく
は１０μｍ〜２０μｍである。
【００１７】本発明のトラッピングフィルターに用いら
れる疎水性合成樹脂フィルターは、表面が疎水性である
公知の合成樹脂で製作し、ポリエチレンやポリプロピレ
ンなどのポリオレフィン系樹脂で製作することが望まし
い。
れる疎水性合成樹脂フィルターは、表面が疎水性である
公知の合成樹脂で製作し、ポリエチレンやポリプロピレ
ンなどのポリオレフィン系樹脂で製作することが望まし
い。
【００１８】本発明のトラッピングフィルターのさらに
好ましい実施例は、孔径が互いに異なる合成樹脂層と紙
フィルター層とを交代に積み重ねた多重層複合フィルタ
ーである。最下層合成樹脂フィルター層１の孔径は１μ
ｍ〜1０μｍであり、好ましくは２μｍ〜５μｍであ
り、最下層上の合成樹脂フィルター層２〜９の孔径は５
μｍ〜４０μｍであるが、好ましくは１０μｍ〜４０μ
ｍである。
好ましい実施例は、孔径が互いに異なる合成樹脂層と紙
フィルター層とを交代に積み重ねた多重層複合フィルタ
ーである。最下層合成樹脂フィルター層１の孔径は１μ
ｍ〜1０μｍであり、好ましくは２μｍ〜５μｍであ
り、最下層上の合成樹脂フィルター層２〜９の孔径は５
μｍ〜４０μｍであるが、好ましくは１０μｍ〜４０μ
ｍである。
【００１９】紙フィルター層１０としては、公知の紙フ
ィルターをｐＨ３〜ｐＨ７、好ましくはｐＨ４〜ｐＨ６
で緩衝されたＮａＯＡｃ(sodium acetate)又はＫＯＡ
ｃ(potassium acetate)溶液に含浸させた後に乾燥させ
た紙フィルターを用いる。ここで、前記紙フィルタとし
ては、平均孔径５μｍ〜２５μｍ／厚さ０．５ｍｍ〜２
ｍｍのフィルターを用いることができる。このように処
理された紙フィルター層１０は、培養された細胞の溶解
時に用いる界面活性剤により、常圧で核酸含有溶液が合
成樹脂フィルター層を透過する場合でもそれ以上の溶液
透過を防ぐ役割をする。前記紙フィルター層１０は合成
樹脂フィルター層２〜９の間に装着することが望まし
い。
ィルターをｐＨ３〜ｐＨ７、好ましくはｐＨ４〜ｐＨ６
で緩衝されたＮａＯＡｃ(sodium acetate)又はＫＯＡ
ｃ(potassium acetate)溶液に含浸させた後に乾燥させ
た紙フィルターを用いる。ここで、前記紙フィルタとし
ては、平均孔径５μｍ〜２５μｍ／厚さ０．５ｍｍ〜２
ｍｍのフィルターを用いることができる。このように処
理された紙フィルター層１０は、培養された細胞の溶解
時に用いる界面活性剤により、常圧で核酸含有溶液が合
成樹脂フィルター層を透過する場合でもそれ以上の溶液
透過を防ぐ役割をする。前記紙フィルター層１０は合成
樹脂フィルター層２〜９の間に装着することが望まし
い。
【００２０】本発明のバインディングフィルターは、核
酸含有溶液から核酸のみを選択的に吸着するフィルター
層を含んだ多重層複合フィルターであって、最下層に配
置された疎水性フィルター層１１とその上に積み重なる
多数の通常なガラスフィルター層１２〜１９とが結合さ
れたフィルタである。
酸含有溶液から核酸のみを選択的に吸着するフィルター
層を含んだ多重層複合フィルターであって、最下層に配
置された疎水性フィルター層１１とその上に積み重なる
多数の通常なガラスフィルター層１２〜１９とが結合さ
れたフィルタである。
【００２１】さらに詳しくは、疎水化処理されたガラス
フィルター層及び／又は疎水性合成樹脂フィルター層が
最下層１１に配置され、その上に１層〜８層、好ましく
は１層〜５層の通常なガラスフィルター層１２〜１９が
配置される。最下層に配置されるガラスフィルター層１
１は、クロロホルム溶媒に溶かした３％のジメチルジク
ロライドシラン溶液又は３％のジエチルジクロライドシ
ラン溶液に含浸させた後に乾燥させることにより、表面
を疎水化処理したフィルター層である。
フィルター層及び／又は疎水性合成樹脂フィルター層が
最下層１１に配置され、その上に１層〜８層、好ましく
は１層〜５層の通常なガラスフィルター層１２〜１９が
配置される。最下層に配置されるガラスフィルター層１
１は、クロロホルム溶媒に溶かした３％のジメチルジク
ロライドシラン溶液又は３％のジエチルジクロライドシ
ラン溶液に含浸させた後に乾燥させることにより、表面
を疎水化処理したフィルター層である。
【００２２】合成樹脂フィルター層を最下層１１に配置
する場合、前記合成樹脂フィルター層は、ポリエチレン
やポリプロピレンなどのポリオレフィン系樹脂で製作す
るのが好ましい。疎水化フィルター層１１は、常圧では
核酸含有溶液を透過させないが、溶液に遠心力が加えら
れるか又はフィルター層の下部で減圧吸入する場合には
前記核酸含有溶液を下部に透過させる。また、合成樹脂
フィルター層は、減圧及び遠心力が作用する場合にも機
械的な強度が優れているのでフィルターの微細片が落ち
ないばかりでなく、減圧及び遠心力下でガラスフィルタ
ー層１２から落ちてしまう微細ガラス片を濾過させる役
割と共に、ガラスフィルター層がやぶれないように支持
する役割もする。
する場合、前記合成樹脂フィルター層は、ポリエチレン
やポリプロピレンなどのポリオレフィン系樹脂で製作す
るのが好ましい。疎水化フィルター層１１は、常圧では
核酸含有溶液を透過させないが、溶液に遠心力が加えら
れるか又はフィルター層の下部で減圧吸入する場合には
前記核酸含有溶液を下部に透過させる。また、合成樹脂
フィルター層は、減圧及び遠心力が作用する場合にも機
械的な強度が優れているのでフィルターの微細片が落ち
ないばかりでなく、減圧及び遠心力下でガラスフィルタ
ー層１２から落ちてしまう微細ガラス片を濾過させる役
割と共に、ガラスフィルター層がやぶれないように支持
する役割もする。
【００２３】最下層１１フィルター層の孔径は０．７μ
ｍ〜４０μｍであり、好ましくは１μｍ〜２０μｍであ
り、さらに好ましくは２μｍ〜５μｍである。上述した
如き孔径と表面疎水性を有する合成樹脂フィルターであ
れば何でも本発明のバインディングフィルターの最下層
に用いることができ、本質的に疎水性を示すポリエチレ
ンやポリプロピレンなどのポリオレフィン樹脂からなる
多孔質発布体や不織布の形態が適合である。
ｍ〜４０μｍであり、好ましくは１μｍ〜２０μｍであ
り、さらに好ましくは２μｍ〜５μｍである。上述した
如き孔径と表面疎水性を有する合成樹脂フィルターであ
れば何でも本発明のバインディングフィルターの最下層
に用いることができ、本質的に疎水性を示すポリエチレ
ンやポリプロピレンなどのポリオレフィン樹脂からなる
多孔質発布体や不織布の形態が適合である。
【００２４】前記の疎水化処理されなかった通常なガラ
スフィルター層１２〜１９は、カオトロピック塩の存在
下で核酸を選択的に吸着する。カオトロピック塩として
は、グアニジン塩、ヨウ化ナトイウム(ＮａＩ)、ヨウ化
カリウム(ＫＩ)、過塩素酸塩ナトリウム(ＮａＣＬＯ
４)、イソプロバノール(isopropanol)などを用いること
ができる。これらの核酸吸着層１２〜１９には、現在市
販中の一般的なガラスフィルター、例えばウットマン(W
hatman)社が市販しているＧＦ／Ｂフィルターを用いる
ことができ、バインディング緩衝液に含まれているカオ
トロピック塩により核酸吸着能力が増加する。これらの
核酸吸着層１２〜１９は、カオトロピック塩の存在下で
は核酸を吸着するが、 １０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌな
どの溶離緩衝液を添加すれば、核酸を脱着する機能を行
う。一回の濾過過程を通して吸着することができる核酸
の量を極大化するために、前記核酸吸着層１２〜１９の
厚さを増加させるか、多層に積み重ねて配置することが
望ましい。前記核酸吸着層１２〜１９の孔径は０．１μ
ｍ〜1０μｍであるが、好ましくは０．５μｍ〜５μ
ｍ、さらに好ましくは０．７μｍ〜３μｍである。
スフィルター層１２〜１９は、カオトロピック塩の存在
下で核酸を選択的に吸着する。カオトロピック塩として
は、グアニジン塩、ヨウ化ナトイウム(ＮａＩ)、ヨウ化
カリウム(ＫＩ)、過塩素酸塩ナトリウム(ＮａＣＬＯ
４)、イソプロバノール(isopropanol)などを用いること
ができる。これらの核酸吸着層１２〜１９には、現在市
販中の一般的なガラスフィルター、例えばウットマン(W
hatman)社が市販しているＧＦ／Ｂフィルターを用いる
ことができ、バインディング緩衝液に含まれているカオ
トロピック塩により核酸吸着能力が増加する。これらの
核酸吸着層１２〜１９は、カオトロピック塩の存在下で
は核酸を吸着するが、 １０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌな
どの溶離緩衝液を添加すれば、核酸を脱着する機能を行
う。一回の濾過過程を通して吸着することができる核酸
の量を極大化するために、前記核酸吸着層１２〜１９の
厚さを増加させるか、多層に積み重ねて配置することが
望ましい。前記核酸吸着層１２〜１９の孔径は０．１μ
ｍ〜1０μｍであるが、好ましくは０．５μｍ〜５μ
ｍ、さらに好ましくは０．７μｍ〜３μｍである。
【００２５】以下、本発明を実施例によりさらに詳しく
説明するが、本発明の範囲は下記の実施例により限度さ
れるものではない。
説明するが、本発明の範囲は下記の実施例により限度さ
れるものではない。
【００２６】第１実施例：トラッピングフィルターの製
作
作
【００２７】平均孔径５μｍ／厚さ１．５μｍのポリエ
チレンフィルター層１上に平均孔径２０μｍ／厚さ１．
５ｍｍのポリエチレンフィルター２層を配置し、その上
に０．５Ｍ ＫＯＡｃ溶液で含浸させた後に乾燥させた
紙フィルター(Whatman paperfilter no.１、孔径１１
μｍ)層を配置し、その上に平均孔径２０μｍ／厚さ
１．５ｍｍのポリエチレンフィルター１層を配置してト
ラッピングフィルター１を製作した。
チレンフィルター層１上に平均孔径２０μｍ／厚さ１．
５ｍｍのポリエチレンフィルター２層を配置し、その上
に０．５Ｍ ＫＯＡｃ溶液で含浸させた後に乾燥させた
紙フィルター(Whatman paperfilter no.１、孔径１１
μｍ)層を配置し、その上に平均孔径２０μｍ／厚さ
１．５ｍｍのポリエチレンフィルター１層を配置してト
ラッピングフィルター１を製作した。
【００２８】第２実施例：トラッピングフィルター２の
製作
製作
【００２９】ウットマン社が市販している孔径２．７μ
ｍのガラスフィルター(Whatsman glass filter ＧＦ
／Ｄ)を、クロロホルムを溶媒とした３％のジメチルジ
クロライドシラン溶液又は３％のジエチルジクロライド
シラン溶液に含浸させた後に大気中で完全に乾燥させ
た。このように疎水性処理されたガラスフィルター層１
上に平均孔径２０μｍ／厚さ１．５μｍのポリエチレン
フィルター層２〜９を配置してトラッピンクフィルター
２を製作した。
ｍのガラスフィルター(Whatsman glass filter ＧＦ
／Ｄ)を、クロロホルムを溶媒とした３％のジメチルジ
クロライドシラン溶液又は３％のジエチルジクロライド
シラン溶液に含浸させた後に大気中で完全に乾燥させ
た。このように疎水性処理されたガラスフィルター層１
上に平均孔径２０μｍ／厚さ１．５μｍのポリエチレン
フィルター層２〜９を配置してトラッピンクフィルター
２を製作した。
【００３０】一方、ＴＢ培地で約１６時間培養したE. c
oli (pBluescriptII SK(+)／ＤＨ５)培養液１ｍＬを遠
心分離して培地成分を除去した溶液に、 ５０ｍＭのＴ
ｒｉｓ−ＨＣｌ、１０ｍＭのＥＤＴＡ、1００μg／ｍｌ
のＲＮａｓｅからなる再懸濁溶液(resuspension solut
ion)２５０■を入れて完全に混合した。このように製造
した溶液を前記トラッピングフィルター１又はトラッピ
ングフィルター２が下端部に装着された円周形容器に入
れ、１％のナトリウムドデシルスルホナート(sodium d
odecyl sulfonate)と０．２ＭのＮａＯＨからなる細胞
溶解液２５０■を添加して混ぜた。この時、界面活性剤
のＳＤＳが添加されても溶液が漏れなかった。５分間バ
インディング緩衝液(４M Guanidine hydrochloride,
０．５ KOAcpH ４．２)３５０■を添加して混ぜた。
常圧では溶液が前記トラッピングフィルター１及びトラ
ッピングフィルター２を透過しなかったが、これらの容
器の下部を真空吸入する場合、核酸含有溶液はトラッピ
ングフィルター１及びトラッピングフィルター２を透過
することができ、蛋白質、ゲノムＤＮＡ、各種細胞残留
物などはトラッピングフィルター１及びトラッピングフ
ィルター２を透過することができなかった。
oli (pBluescriptII SK(+)／ＤＨ５)培養液１ｍＬを遠
心分離して培地成分を除去した溶液に、 ５０ｍＭのＴ
ｒｉｓ−ＨＣｌ、１０ｍＭのＥＤＴＡ、1００μg／ｍｌ
のＲＮａｓｅからなる再懸濁溶液(resuspension solut
ion)２５０■を入れて完全に混合した。このように製造
した溶液を前記トラッピングフィルター１又はトラッピ
ングフィルター２が下端部に装着された円周形容器に入
れ、１％のナトリウムドデシルスルホナート(sodium d
odecyl sulfonate)と０．２ＭのＮａＯＨからなる細胞
溶解液２５０■を添加して混ぜた。この時、界面活性剤
のＳＤＳが添加されても溶液が漏れなかった。５分間バ
インディング緩衝液(４M Guanidine hydrochloride,
０．５ KOAcpH ４．２)３５０■を添加して混ぜた。
常圧では溶液が前記トラッピングフィルター１及びトラ
ッピングフィルター２を透過しなかったが、これらの容
器の下部を真空吸入する場合、核酸含有溶液はトラッピ
ングフィルター１及びトラッピングフィルター２を透過
することができ、蛋白質、ゲノムＤＮＡ、各種細胞残留
物などはトラッピングフィルター１及びトラッピングフ
ィルター２を透過することができなかった。
【００３１】第３実施例：バインディングフィルター１
の製作
の製作
【００３２】ウットマン社が市販しているガラスフィル
ター(Watsman glass filter ＧＦ／Ａ)を、クロロホ
ルムを溶媒とした３％のジメチルジクロライドシラン溶
液又はジエチルクロライドシラン溶液に含浸させた後に
大気中で完全に乾燥した。このように疎水化処理された
ガラスフィルター層１１上に平均孔径１．０μｍのガラ
スフィルター(whatman ＧＦ／Ｂ：ウットマン社市販)
３枚を積み重ねてバインディングフィルター１を製作し
た。
ター(Watsman glass filter ＧＦ／Ａ)を、クロロホ
ルムを溶媒とした３％のジメチルジクロライドシラン溶
液又はジエチルクロライドシラン溶液に含浸させた後に
大気中で完全に乾燥した。このように疎水化処理された
ガラスフィルター層１１上に平均孔径１．０μｍのガラ
スフィルター(whatman ＧＦ／Ｂ：ウットマン社市販)
３枚を積み重ねてバインディングフィルター１を製作し
た。
【００３３】第４実施例：バインディングフィルター２
の製作
の製作
【００３４】平均孔径５μｍ／厚さ１．５ｍｍのポリエ
チレンフィルター層１１上に平均孔径１．０μｍのガラ
スフィルター(whatman ＧＦ／Ｂ：ウットマン社市販)
３枚を積み重ねてバインディングフィルター２を製作し
た。
チレンフィルター層１１上に平均孔径１．０μｍのガラ
スフィルター(whatman ＧＦ／Ｂ：ウットマン社市販)
３枚を積み重ねてバインディングフィルター２を製作し
た。
【００３５】このように製作された本発明のバインディ
ングフィルター１又はバインディングフィルター２を円
周形容器の下端部に装着し、フィルター層上にフィルタ
ー固定用のＯ―リングを装着し、この容器に前記トラッ
ピングフィルターで濾過した核酸含有溶液を入れ、核酸
含有溶液が入っている前記容器の下部を真空吸入するこ
とにより、核酸以外の溶媒を容器から濾過させた。第３
実施例又は第４実施例で製作されたバインディングフィ
ルター１又はバインディングフィルター２は共に常圧で
は核酸含有溶液を透過させなかった。前記溶媒が排出さ
れた容器に８０％のエタノール、２ ０ｍＭのＮａＣ
ｌ、２ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ６．８からなる洗
浄緩衝液１ｍｌを添加し、再び容器の下部を真空吸入す
る過程を複数回繰り返すことにより、バインディングフ
ィルターに吸着された核酸を洗浄した。このように洗浄
した核酸が入っている容器の下部を約１０分間真空吸入
することにより、吸着された核酸を乾燥させた後、１０
ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．５からなる溶離緩衝
液１００Ｌを添加し、約５分間放置して核酸をバインデ
ィングフィルターから脱着させ、減圧濾過することによ
り、精製されたプラスミドを取得した。
ングフィルター１又はバインディングフィルター２を円
周形容器の下端部に装着し、フィルター層上にフィルタ
ー固定用のＯ―リングを装着し、この容器に前記トラッ
ピングフィルターで濾過した核酸含有溶液を入れ、核酸
含有溶液が入っている前記容器の下部を真空吸入するこ
とにより、核酸以外の溶媒を容器から濾過させた。第３
実施例又は第４実施例で製作されたバインディングフィ
ルター１又はバインディングフィルター２は共に常圧で
は核酸含有溶液を透過させなかった。前記溶媒が排出さ
れた容器に８０％のエタノール、２ ０ｍＭのＮａＣ
ｌ、２ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ６．８からなる洗
浄緩衝液１ｍｌを添加し、再び容器の下部を真空吸入す
る過程を複数回繰り返すことにより、バインディングフ
ィルターに吸着された核酸を洗浄した。このように洗浄
した核酸が入っている容器の下部を約１０分間真空吸入
することにより、吸着された核酸を乾燥させた後、１０
ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．５からなる溶離緩衝
液１００Ｌを添加し、約５分間放置して核酸をバインデ
ィングフィルターから脱着させ、減圧濾過することによ
り、精製されたプラスミドを取得した。
【００３６】上述した如き方法で精製された核酸をアガ
ロースゲールにより電気泳動を行い、その結果を図３に
示した。図３に示すように、ＤＮＡが高純度で効率的に
分離されることを知ることができた。また、一般にＤＮ
Ａ溶液の純度を知らせる指標の一つである分光光度計(S
pectrophotometer) により吸光度測定した結果、波長２
８０nmの吸光度に対する波長２６０nmの吸光度の比が
１．８以上 であれば、核酸の精製度が高いといえる。
本発明の方法で精製したプラスミドＤＮＡが前記の条件
を充足させた
ロースゲールにより電気泳動を行い、その結果を図３に
示した。図３に示すように、ＤＮＡが高純度で効率的に
分離されることを知ることができた。また、一般にＤＮ
Ａ溶液の純度を知らせる指標の一つである分光光度計(S
pectrophotometer) により吸光度測定した結果、波長２
８０nmの吸光度に対する波長２６０nmの吸光度の比が
１．８以上 であれば、核酸の精製度が高いといえる。
本発明の方法で精製したプラスミドＤＮＡが前記の条件
を充足させた
【００３７】
【発明の効果】以上説明したように、本発明のトラッピ
ングフィルターは、細胞培養過程及び細胞溶解過程で使
用される容器の下端部材料として用いるもので、細胞溶
解溶液を別途の濾過用容器に移せずそのまま減圧濾過す
ることにより、細胞破砕物は捕集し核酸含有溶液は透過
させる過程に用いることができる。さらに、本発明のト
ラッピングフィルターは、トラッピングフィルターを用
いることにより、細胞培養過程、細胞溶解過程、及び濾
過過程を容器の交替作業無しで連続的に進行することが
できるので、現在開発中の多様な種類の核酸分離精製装
置の自動化に極めて役に立てるという効果がある。
ングフィルターは、細胞培養過程及び細胞溶解過程で使
用される容器の下端部材料として用いるもので、細胞溶
解溶液を別途の濾過用容器に移せずそのまま減圧濾過す
ることにより、細胞破砕物は捕集し核酸含有溶液は透過
させる過程に用いることができる。さらに、本発明のト
ラッピングフィルターは、トラッピングフィルターを用
いることにより、細胞培養過程、細胞溶解過程、及び濾
過過程を容器の交替作業無しで連続的に進行することが
できるので、現在開発中の多様な種類の核酸分離精製装
置の自動化に極めて役に立てるという効果がある。
【００３８】尚、本発明のバインディングフィルタは、
常圧では核酸含有溶液を透過させないが、溶液に遠心力
が加えるか又はフィルターの下部で減圧吸入する場合に
は核酸含有溶液を透過させる疎水性フィルター層と、カ
オトロピック塩の存在下では核酸を吸着し、溶離緩衝液
を添加すれば核酸を脱着させる多数のフィルター層と、
から構成されるので、核酸含有溶液から核酸を多量分離
する自動核酸分離装置に用いることができる。
常圧では核酸含有溶液を透過させないが、溶液に遠心力
が加えるか又はフィルターの下部で減圧吸入する場合に
は核酸含有溶液を透過させる疎水性フィルター層と、カ
オトロピック塩の存在下では核酸を吸着し、溶離緩衝液
を添加すれば核酸を脱着させる多数のフィルター層と、
から構成されるので、核酸含有溶液から核酸を多量分離
する自動核酸分離装置に用いることができる。
【００３９】シリカ浮遊物を利用してＤＮＡを吸着させ
る従来の方法は、浮遊物が沈まないように処理すべきで
あるので、自動化が困難であり、最終的にシリカ粒子を
除去しにくかった。しかし、本発明のバインディングフ
ィルターを利用すると、シリカ浮遊物を別に分注する必
要がないだけでなく、最下層のフィルターが微細ガラス
片を濾過させるので、不純物が含まれていない純粋なプ
ラスミドＤＮＡ溶液を得ることができる。
る従来の方法は、浮遊物が沈まないように処理すべきで
あるので、自動化が困難であり、最終的にシリカ粒子を
除去しにくかった。しかし、本発明のバインディングフ
ィルターを利用すると、シリカ浮遊物を別に分注する必
要がないだけでなく、最下層のフィルターが微細ガラス
片を濾過させるので、不純物が含まれていない純粋なプ
ラスミドＤＮＡ溶液を得ることができる。
【００４０】本発明の核酸分離精製用多重層フィルター
は、従来の核酸分離用フィルターに比べて、一回に多量
の生体試料を処理することができ、核酸に対する選択的
吸着能力が優秀であり、高速減圧濾過に耐えることがで
きる十分な強度を持つので、自動化された核酸分離精製
装置に用いることができる。
は、従来の核酸分離用フィルターに比べて、一回に多量
の生体試料を処理することができ、核酸に対する選択的
吸着能力が優秀であり、高速減圧濾過に耐えることがで
きる十分な強度を持つので、自動化された核酸分離精製
装置に用いることができる。
【図１】 本発明のトラッピングフィルターの断面図で
ある。
ある。
【図２】 本発明のバインディングフィルターの断面図
である。
である。
【図３】 本発明のフィルターを用いて精製したプラス
ミドＤＮＡを０．８％のアガロースゲールにより電気泳
動を行った写真である。
ミドＤＮＡを０．８％のアガロースゲールにより電気泳
動を行った写真である。
１ トラッピングフィルターの疎水性最下層 ２〜９ 疎水性合成樹脂フィルター層 １０ 疎水性紙フィルター層 １１ バインディングフィルターの疎水性最下層 １２〜１９ 核酸吸着層
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 金 恒來 大韓民国忠清北道清原郡南二面尺北里124 番地 株式會社 バイオニア内 Ｆターム(参考） 4B029 AA09 BB20 CC04 HA06 4D006 GA02 HA42 JA02A JA02B JA02C JA03A JA03B JA03C JA23Z JA53Z KA12 KC06 MA03 MA08 MA09 MA10 MA22 MB02 MB06 MB09 MB10 MC04 MC04X MC11 MC22 MC22X MC23 MC86 NA64 PA05 PB70 PC41 4D019 AA03 BA04 BA13 BB05 BB08 BB10 BC13 BD01 CB04
Claims (11)
- 【請求項１】 平均孔径１μｍ〜1０μｍの疎水性フィ
ルター層１上に、平均孔径５μｍ〜４０μｍの合成樹脂
フィルター層２〜９が１層〜８層に配置された核酸分離
精製用多重層フィルター。 - 【請求項２】 疎水性フィルタ層１は疎水性合成樹脂フ
ィルター層又は疎水性によって表面処理されたガラスフ
ィルター層であることを特徴とする請求項１記載の核酸
分離精製用多重層フィルター。 - 【請求項３】 前記合成樹脂フィルター層１はポリオレ
フィン樹脂からなることを特徴とする請求項１または請
求項２のいずれかに記載の核酸分離精製用多重層フィル
ター。 - 【請求項４】 前記ポリオレフィン樹脂はポリエチレン
樹脂であることを特徴とする請求項３記載の核酸分離精
製用多重層フィルター。 - 【請求項５】 前記ガラスフィルター層はジメチルジク
ロライドシラン又はジエチルジクロライドシランのいず
れか若しくはこれらの混合物で被服されたことを特徴と
する請求項２記載の核酸分離精製用多重層フィルター。 - 【請求項６】 前記疎水性フィルター層１上に、酢酸ナ
トリウムまたは酢酸カリウムのいずれかを含有するｐＨ
３〜ｐＨ７の緩衝溶液に含浸させた後に乾燥させた、平
均孔径５μｍ〜２５μｍ／厚さ１ｍｍ〜２ｍｍの紙フィ
ルター層をさらに含むことを特徴とする請求項１記載の
核酸分離精製用多重層フィルター。 - 【請求項７】 前記紙フィルター層１０が前記合成樹脂
フィルター層２〜９間に追加挿入されたことを特徴とす
る請求項６記載の核酸分離精製用多重層フィルター。 - 【請求項８】 平均孔径１μｍ〜１０μｍの合成樹脂フ
ィルター層１１上に、平均孔径０．１μｍ〜１０μｍの
ガラスフィルター層１２〜１９が１層〜８層に配置され
たことを特徴とする核酸分離精製用多重層フィルター。 - 【請求項９】 前記合成樹脂フィルター層１１はポリオ
レフィン樹脂からなることを特徴とする請求項８記載の
核酸分離精製用多重層フィルター。 - 【請求項１０】 前記ポリオレフィン樹脂はポリエチレ
ン樹脂であることを特徴とする請求項９記載の核酸分離
精製用多重層フィルター。 - 【請求項１１】 ジメチルジクロライドシラン又はジエ
チルクロライドシランのいずれか若しくはこれらの混合
物で被服され、平均孔径１μｍ〜１０μｍのガラスフィ
ルター層１１上に、平均孔径０．１μｍ〜１０μｍのガ
ラスフィルター層１２〜１９が１層〜８層に配置された
ことを特徴とする核酸分離精製用多重層フィルター。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR2000-54999 | 2000-09-19 | ||
| KR10-2000-0054999A KR100404235B1 (ko) | 2000-09-19 | 2000-09-19 | 핵산 분리 정제용 다중층 필터 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002085919A true JP2002085919A (ja) | 2002-03-26 |
Family
ID=19689371
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000302332A Pending JP2002085919A (ja) | 2000-09-19 | 2000-10-02 | 核酸分離精製用多重層フィルター |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2002085919A (ja) |
| KR (1) | KR100404235B1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011110073A1 (zh) * | 2010-03-08 | 2011-09-15 | 北京清大天一科技有限公司 | 细胞培养混合物的分离纯化方法 |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100816528B1 (ko) * | 2001-09-14 | 2008-04-10 | (주)바이오니아 | 핵산 분리 정제용 다중층 필터 |
| KR100673393B1 (ko) * | 2005-06-10 | 2007-01-24 | (주)진올바이오테크놀러지 | 디옥시리보 핵산 분리 이중 필터 |
| US10421937B2 (en) * | 2015-03-05 | 2019-09-24 | Saint-Gobain Performance Plastics Corporation | High gas flow rate bio-reactive container filter apparatus |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5997056A (ja) * | 1982-11-25 | 1984-06-04 | Shimadzu Corp | 試薬担持多孔性基材およびその製造用器具 |
| CA2165065A1 (en) * | 1993-06-23 | 1995-01-05 | Henrietta Margolis-Nunno | System for viral inactivation of blood |
| US5635349A (en) * | 1994-12-02 | 1997-06-03 | Tularik, Inc. | High-throughput screening assay for inhibitors of nucleic acid polymerases |
| GB2337261B (en) * | 1998-05-15 | 2002-09-18 | Fsm Technologies Ltd | Separation of nucleic acids |
-
2000
- 2000-09-19 KR KR10-2000-0054999A patent/KR100404235B1/ko active IP Right Grant
- 2000-10-02 JP JP2000302332A patent/JP2002085919A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011110073A1 (zh) * | 2010-03-08 | 2011-09-15 | 北京清大天一科技有限公司 | 细胞培养混合物的分离纯化方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20020022286A (ko) | 2002-03-27 |
| KR100404235B1 (ko) | 2003-11-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3329813B2 (ja) | 天然原料から核酸のような細胞成分を単離する方法及び装置 | |
| US6274371B1 (en) | Process and device for the isolation of cell components, such as nucleic acids, from natural sources | |
| US11643646B2 (en) | Method for isolating and purifying nucleic acids using a solid-liquid phase system | |
| US5916775A (en) | Method for the purification of DNA | |
| US20030091989A1 (en) | DNA purification and recovery from high particulate and solids samples | |
| WO2008150826A1 (en) | Modified spin column for simple and rapid plasmid dna extraction | |
| JP2003533212A (ja) | 分離装置 | |
| JP2003530854A (ja) | 限外濾過を使用するプラスミド回収の方法及び装置 | |
| JP5230196B2 (ja) | 核酸のより効率的な単離のための器具および方法 | |
| EP1719816B1 (en) | Mechanism of separating and purifying dna | |
| EP3108238A1 (en) | Spin columns comprising poly(acid) membrane separation matrices, and methods of making and using the same | |
| EP1903110B1 (en) | Device for recovering nucleic acid and method for recovering nucleic acid | |
| JP2002085919A (ja) | 核酸分離精製用多重層フィルター | |
| JP6737179B2 (ja) | 核酸の分離精製方法および固相担体、デバイス、キット | |
| WO1999051734A1 (en) | Glass microfiber column and method for the preparation and purification of plasmid dna using the same | |
| US5834303A (en) | Method and device for extraction and purification of DNA | |
| TW416867B (en) | Separation apparatus, separation method, nucleic acid separation purification method, nucleic acid separation purification kit | |
| KR20240136363A (ko) | 세포외소포의 분리 정제 방법 | |
| KR100816528B1 (ko) | 핵산 분리 정제용 다중층 필터 | |
| WO2009134652A1 (en) | Method for separation of double-stranded and single-stranded nucleic acids | |
| JP5627162B2 (ja) | 核酸の分離精製方法および当該方法を利用した核酸分離キット | |
| US20220396826A1 (en) | Nucleic acid separation method, detection method, nucleic acid purification column and method of producing same |