JP2002069095A - 蛋白質複合体取得システム - Google Patents
蛋白質複合体取得システムInfo
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 転写制御因子とそれに会合した蛋白質からな
る蛋白質複合体を、複合体構造を維持したまま分離精製
して取得できるシステムを提供する。 【解決手段】 核供与部１およびカリウム溶液槽２が反
応槽３に接続され、反応槽３、前処理部４、高回収率カ
ラム５、高特異性カラム６、回収部７が順に接続され、
高回収率カラム５には第一洗浄液槽８および第一溶出液
槽９が、高特異性カラム６には第二洗浄液槽１１および
第二溶出液槽１２が接続されたシステム。各部は送液管
を介して接続されている。制御部１５の指令により送液
部１４が駆動して、核供与部１から反応槽３に核懸濁液
が、カリウム溶液槽２から反応槽３にカリウム溶液が流
され、反応槽３から前処理部４へ核抽出液が流され、前
処理部４で得られた蛋白質担体懸濁液が高回収率カラム
５に流され、それを通過した液が高特異性カラム６に流
され、それを通過した液が回収部７に流される。
る蛋白質複合体を、複合体構造を維持したまま分離精製
して取得できるシステムを提供する。 【解決手段】 核供与部１およびカリウム溶液槽２が反
応槽３に接続され、反応槽３、前処理部４、高回収率カ
ラム５、高特異性カラム６、回収部７が順に接続され、
高回収率カラム５には第一洗浄液槽８および第一溶出液
槽９が、高特異性カラム６には第二洗浄液槽１１および
第二溶出液槽１２が接続されたシステム。各部は送液管
を介して接続されている。制御部１５の指令により送液
部１４が駆動して、核供与部１から反応槽３に核懸濁液
が、カリウム溶液槽２から反応槽３にカリウム溶液が流
され、反応槽３から前処理部４へ核抽出液が流され、前
処理部４で得られた蛋白質担体懸濁液が高回収率カラム
５に流され、それを通過した液が高特異性カラム６に流
され、それを通過した液が回収部７に流される。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、複数の蛋白質が会
合してなる蛋白質複合体を取得するシステムに関する。
合してなる蛋白質複合体を取得するシステムに関する。
【０００２】
【従来の技術】複数の蛋白質が混在する溶液中から所望
の蛋白質のみを取得するには、所望の蛋白質にタグとよ
ばれるオリゴペプチドを付加し、該タグが結合するまた
は会合するカラムに蛋白質溶液を流して、該カラムに当
該所望する蛋白質をタグを介して付着させることがなさ
れている。
の蛋白質のみを取得するには、所望の蛋白質にタグとよ
ばれるオリゴペプチドを付加し、該タグが結合するまた
は会合するカラムに蛋白質溶液を流して、該カラムに当
該所望する蛋白質をタグを介して付着させることがなさ
れている。
【０００３】
【発明が解決使用とする課題】組み換え蛋白質技術を使
用して転写制御因子に分類される蛋白質を細胞の核内で
作製すると、該転写制御因子に他の蛋白質が会合して蛋
白質複合体が得られる。その蛋白質複合体を細胞の核液
から取得することは、従来の蛋白質取得システムでは困
難であった。当該蛋白質複合体の量が少量であるので、
従来のシステムでは分離精度が十分でないことがその原
因と考えられる。また、分離抽出課程で会合していた蛋
白質が離れてしまって蛋白質複合体が壊れてしまうこと
もその原因と考えられる。
用して転写制御因子に分類される蛋白質を細胞の核内で
作製すると、該転写制御因子に他の蛋白質が会合して蛋
白質複合体が得られる。その蛋白質複合体を細胞の核液
から取得することは、従来の蛋白質取得システムでは困
難であった。当該蛋白質複合体の量が少量であるので、
従来のシステムでは分離精度が十分でないことがその原
因と考えられる。また、分離抽出課程で会合していた蛋
白質が離れてしまって蛋白質複合体が壊れてしまうこと
もその原因と考えられる。
【０００４】本発明は、転写制御因子とそれに会合した
蛋白質からなる蛋白質複合体を、それが少量であって
も、複合体構造を維持したまま分離精製して取得できる
蛋白質複合体取得システムを提供することを課題とす
る。
蛋白質からなる蛋白質複合体を、それが少量であって
も、複合体構造を維持したまま分離精製して取得できる
蛋白質複合体取得システムを提供することを課題とす
る。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明のシステムでは、
核供与部およびカリウム溶液槽がそれぞれ送液管を介し
て反応槽に接続されている。そして、前記反応槽、前処
理部、高回収率アフィニティーカラム（以下高回収率カ
ラムという）、高特異性アフィニティーカラム（以下高
特異性カラムという）、回収部が順に送液管を介して接
続されている。前記高回収率カラムには第一洗浄液槽お
よび第一溶出液槽が、前記高特異性カラムには第二洗浄
液槽および第二溶出液槽がそれぞれ送液管を介して接続
されている。前記核供与部から前記反応槽に核懸濁液
が、前記カリウム溶液槽から前記反応槽にカリウム溶液
が流される。前記反応槽内で核からカリウム溶液中に蛋
白質が抽出され核抽出液が得られる。前記反応槽から前
記前処理部へこの核抽出液が流される。前記前処理部で
蛋白質溶液が濾過され、得られた濾過液が透析され、得
られた透析液に高回収率カラムの担体が加えられ懸濁さ
れる。こうして蛋白質担体懸濁液が得られ、この液は高
回収率カラムに流される。その後、前記第一洗浄液槽か
ら前記高回収率カラムに第一洗浄液が流される。その
後、前記第一溶出液槽から前記高回収率カラムに第一溶
出液が流される。前記高回収率カラムを通過した液が前
記高特異性カラムに流される。その後、前記第二洗浄液
槽から前記高特異性カラムに第二洗浄液が流される。そ
の後前記第二溶出液槽から前記高特異性カラムに第二溶
出液が流される。前記高特異性カラムを通過した液が前
記回収部に流され、その液に含まれる蛋白質複合体が前
記回収部にて回収される。前記各送液管は送液部に接続
されている。制御部の指令により前記送液部が駆動し
て、前記各液が各送液管中を流れる。なお、本明細書で
は、管状の容器に担体が充填されたもの全体をカラムと
いう。
核供与部およびカリウム溶液槽がそれぞれ送液管を介し
て反応槽に接続されている。そして、前記反応槽、前処
理部、高回収率アフィニティーカラム（以下高回収率カ
ラムという）、高特異性アフィニティーカラム（以下高
特異性カラムという）、回収部が順に送液管を介して接
続されている。前記高回収率カラムには第一洗浄液槽お
よび第一溶出液槽が、前記高特異性カラムには第二洗浄
液槽および第二溶出液槽がそれぞれ送液管を介して接続
されている。前記核供与部から前記反応槽に核懸濁液
が、前記カリウム溶液槽から前記反応槽にカリウム溶液
が流される。前記反応槽内で核からカリウム溶液中に蛋
白質が抽出され核抽出液が得られる。前記反応槽から前
記前処理部へこの核抽出液が流される。前記前処理部で
蛋白質溶液が濾過され、得られた濾過液が透析され、得
られた透析液に高回収率カラムの担体が加えられ懸濁さ
れる。こうして蛋白質担体懸濁液が得られ、この液は高
回収率カラムに流される。その後、前記第一洗浄液槽か
ら前記高回収率カラムに第一洗浄液が流される。その
後、前記第一溶出液槽から前記高回収率カラムに第一溶
出液が流される。前記高回収率カラムを通過した液が前
記高特異性カラムに流される。その後、前記第二洗浄液
槽から前記高特異性カラムに第二洗浄液が流される。そ
の後前記第二溶出液槽から前記高特異性カラムに第二溶
出液が流される。前記高特異性カラムを通過した液が前
記回収部に流され、その液に含まれる蛋白質複合体が前
記回収部にて回収される。前記各送液管は送液部に接続
されている。制御部の指令により前記送液部が駆動し
て、前記各液が各送液管中を流れる。なお、本明細書で
は、管状の容器に担体が充填されたもの全体をカラムと
いう。
【０００６】
【発明の実施の形態】所望の転写制御因子を高回収率タ
グと高特異性タグとが付加された状態で適宜の宿主細胞
内で発現させる。前記転写制御因子はそれに会合する蛋
白質が会合した蛋白質複合体の状態で細胞内に存在す
る。この宿主細胞から超遠心分離により核を抽出して懸
濁液の状態で本発明のシステムの核供与部に与える。核
を抽出する溶媒にはＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ、２０％ショ
糖、１０％グリセリン液（ｐＨ７．６）等が使用され
る。
グと高特異性タグとが付加された状態で適宜の宿主細胞
内で発現させる。前記転写制御因子はそれに会合する蛋
白質が会合した蛋白質複合体の状態で細胞内に存在す
る。この宿主細胞から超遠心分離により核を抽出して懸
濁液の状態で本発明のシステムの核供与部に与える。核
を抽出する溶媒にはＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ、２０％ショ
糖、１０％グリセリン液（ｐＨ７．６）等が使用され
る。
【０００７】以下本発明のシステムについて図１および
図２を参照して説明する。本発明のシステム全体につい
ては図１を参照して説明し、本発明のシステムの前処理
部については図２を参照して説明する。核供与部１に核
懸濁液が与えられると、制御部１５からの指令により弁
１８が開かれ、かつ送液部１４が駆動して、核供与部１
から反応槽３へ前記核懸濁液が流される。そして、制御
部１５からの指令により、弁１９が開かれ、かつ送液部
１４が駆動してカリウム溶液槽２から反応槽３へカリウ
ム溶液が流される。反応槽３中で核懸濁液とカリウム溶
液とが混合され、核から蛋白質が抽出される。このとき
弁２０は閉じられている。各弁はμｌ単位での送液が可
能であるようにマイクロバルブであることが好ましい。
カリウム溶液には塩化カリウム溶液、酢酸カリウム溶液
等がある。動物細胞等の核には塩化カリウム溶液が好ま
しく、酵母の核には酢酸カリウム溶液が好ましい。
図２を参照して説明する。本発明のシステム全体につい
ては図１を参照して説明し、本発明のシステムの前処理
部については図２を参照して説明する。核供与部１に核
懸濁液が与えられると、制御部１５からの指令により弁
１８が開かれ、かつ送液部１４が駆動して、核供与部１
から反応槽３へ前記核懸濁液が流される。そして、制御
部１５からの指令により、弁１９が開かれ、かつ送液部
１４が駆動してカリウム溶液槽２から反応槽３へカリウ
ム溶液が流される。反応槽３中で核懸濁液とカリウム溶
液とが混合され、核から蛋白質が抽出される。このとき
弁２０は閉じられている。各弁はμｌ単位での送液が可
能であるようにマイクロバルブであることが好ましい。
カリウム溶液には塩化カリウム溶液、酢酸カリウム溶液
等がある。動物細胞等の核には塩化カリウム溶液が好ま
しく、酵母の核には酢酸カリウム溶液が好ましい。
【０００８】所定の時間経過後、制御部１５からの指令
により弁２０が開かれ、かつ送液部１４が駆動して反応
槽３中の核抽出液が前処理部４に流される。このとき弁
３１は閉じている。
により弁２０が開かれ、かつ送液部１４が駆動して反応
槽３中の核抽出液が前処理部４に流される。このとき弁
３１は閉じている。
【０００９】前処理部４は濾過部２６、透析部２７、担
体混合部２８、担体供与部２９および担体供与手段３０
から構成される。濾過部２６で核抽出液が濾過膜を通過
することによって、該核抽出液から核が除去される。濾
過膜は孔径０．２ないし１．５μｍのものが好ましい。
反応槽３から流される核抽出液が濾過膜を通過するよう
に送液部１４を駆動させて送液圧を調整する。濾過され
た核抽出液は透析部２７に移動し、所定の時間、透析部
２７で透析され、液中の塩分が除去される。このとき弁
３１は閉じている。制御部１５の指令により、弁３１が
開かれて、得られた透析液は担体混合部２８に移動す
る。透析液が担体混合部２８に移動すると、制御部１５
の指令により、担体供与部２９から担体混合部２８に高
回収率カラムの担体が担体供与手段送３０により送ら
れ、透析液と該担体とが混合され、蛋白質担体懸濁液と
なる。このとき、透析液中の転写制御因子に付加されて
いた高回収率タグが前記担体に付着する。この担体には
直径数十μｍのニッケルアガロースビーズが好ましい。
体混合部２８、担体供与部２９および担体供与手段３０
から構成される。濾過部２６で核抽出液が濾過膜を通過
することによって、該核抽出液から核が除去される。濾
過膜は孔径０．２ないし１．５μｍのものが好ましい。
反応槽３から流される核抽出液が濾過膜を通過するよう
に送液部１４を駆動させて送液圧を調整する。濾過され
た核抽出液は透析部２７に移動し、所定の時間、透析部
２７で透析され、液中の塩分が除去される。このとき弁
３１は閉じている。制御部１５の指令により、弁３１が
開かれて、得られた透析液は担体混合部２８に移動す
る。透析液が担体混合部２８に移動すると、制御部１５
の指令により、担体供与部２９から担体混合部２８に高
回収率カラムの担体が担体供与手段送３０により送ら
れ、透析液と該担体とが混合され、蛋白質担体懸濁液と
なる。このとき、透析液中の転写制御因子に付加されて
いた高回収率タグが前記担体に付着する。この担体には
直径数十μｍのニッケルアガロースビーズが好ましい。
【００１０】制御部１５の指令により、弁２２が開か
れ、かつ送液部１４が駆動して、担体混合部２８から高
回収率カラム５に蛋白質担体懸濁液が流される。このと
き弁１６は閉じている。前記蛋白質担体懸濁液の送出圧
は１ないし２気圧が好ましい。続いて、制御部１５の指
令により弁２２が開かれ、かつ送液部１４が駆動して、
第一洗浄液槽８から高回収率カラム５に第一洗浄液が流
される。このとき、高回収率かラム５を通過した液が廃
液槽１０に流れるように、制御部１５からの指令により
弁１６が開かれ、カラム５に付着しない蛋白質が廃液槽
１０に流される。第一洗浄液の送出が完了すると制御部
１５からの指令により弁２２が閉じられる。第一洗浄液
は、高回収率カラムの担体にニッケルアガロースを用い
た場合は、以下の組成の液が好ましい。２０ｍＭ Ｈｅ
ｐｅｓ−ＫＯＨ（ｐＨ７．６）、２０％グリセロール、
０．０１％ＮＰ４０、０．２％Ｔｗｅｅｎ２０、２０ｍ
Ｍイミダゾール、５ｍＭ ２−ＭＥ、阻害剤混合液（１
ｍＭ ＰＭＳＦ、１０μｇ／ｍｌペプスタチンＡ、１０
μｇ／ｍｌロイペプチン）、５００ｍＭ酢酸カリウム溶
液。
れ、かつ送液部１４が駆動して、担体混合部２８から高
回収率カラム５に蛋白質担体懸濁液が流される。このと
き弁１６は閉じている。前記蛋白質担体懸濁液の送出圧
は１ないし２気圧が好ましい。続いて、制御部１５の指
令により弁２２が開かれ、かつ送液部１４が駆動して、
第一洗浄液槽８から高回収率カラム５に第一洗浄液が流
される。このとき、高回収率かラム５を通過した液が廃
液槽１０に流れるように、制御部１５からの指令により
弁１６が開かれ、カラム５に付着しない蛋白質が廃液槽
１０に流される。第一洗浄液の送出が完了すると制御部
１５からの指令により弁２２が閉じられる。第一洗浄液
は、高回収率カラムの担体にニッケルアガロースを用い
た場合は、以下の組成の液が好ましい。２０ｍＭ Ｈｅ
ｐｅｓ−ＫＯＨ（ｐＨ７．６）、２０％グリセロール、
０．０１％ＮＰ４０、０．２％Ｔｗｅｅｎ２０、２０ｍ
Ｍイミダゾール、５ｍＭ ２−ＭＥ、阻害剤混合液（１
ｍＭ ＰＭＳＦ、１０μｇ／ｍｌペプスタチンＡ、１０
μｇ／ｍｌロイペプチン）、５００ｍＭ酢酸カリウム溶
液。
【００１１】次に、制御部１５からの指令により弁２３
が開かれ、かつ送液部１４が駆動して、第一溶出液槽９
から高回収率カラム５に第一溶出液が流される。第一溶
出液が流され始めると、カラム５を通過した液が高特異
性カラム６に流れるように弁１６の開閉が制御部１５の
指令により切り替えられ、高回収率カラム５に高回収率
タグを介して付着していた蛋白質複合体が溶出され、高
特異性カラム６に与えられる。このとき弁１７は閉じて
いる。第一溶出液の送出が完了すると制御部１５からの
指令により弁２３が閉じられる。ニッケルアガロースカ
ラムを使用した場合、第一溶出液には以下の組成の液が
好ましい。２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ−ＫＯＨ（ｐＨ７．
６）、２０％グリセロール、０．０１％ＮＰ４０、０．
２％Ｔｗｅｅｎ２０、１００ｍＭイミダゾール、５ｍＭ
２−ＭＥ、阻害剤混合（１ｍＭ ＰＭＳＦ、１０μｇ
／ｍｌペプスタチンＡ、１０μｇ／ｍｌロイペプチン）
液、５００ｍＭ酢酸カリウム溶液。
が開かれ、かつ送液部１４が駆動して、第一溶出液槽９
から高回収率カラム５に第一溶出液が流される。第一溶
出液が流され始めると、カラム５を通過した液が高特異
性カラム６に流れるように弁１６の開閉が制御部１５の
指令により切り替えられ、高回収率カラム５に高回収率
タグを介して付着していた蛋白質複合体が溶出され、高
特異性カラム６に与えられる。このとき弁１７は閉じて
いる。第一溶出液の送出が完了すると制御部１５からの
指令により弁２３が閉じられる。ニッケルアガロースカ
ラムを使用した場合、第一溶出液には以下の組成の液が
好ましい。２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ−ＫＯＨ（ｐＨ７．
６）、２０％グリセロール、０．０１％ＮＰ４０、０．
２％Ｔｗｅｅｎ２０、１００ｍＭイミダゾール、５ｍＭ
２−ＭＥ、阻害剤混合（１ｍＭ ＰＭＳＦ、１０μｇ
／ｍｌペプスタチンＡ、１０μｇ／ｍｌロイペプチン）
液、５００ｍＭ酢酸カリウム溶液。
【００１２】次に、制御部１５からの指令により弁２４
が開かれ、かつ送液部１４が駆動して、第二洗浄液槽１
１から高特異性カラム６に第二洗浄液が流される。この
とき高特異性カラム６を通過した液が廃液槽１３に流さ
れるように、制御部１５からの指令により弁１７が開か
れ、カラム６に付着しない蛋白質が廃液槽１３に流され
る。所望の転写制御因子は蛋白質複合体の状態で高特異
性カラム６に付着する。第二洗浄液の送出が完了すると
制御部１５からの指令により弁２４が閉じられる。第二
洗浄液の送出が完了すると制御部１５からの指令により
弁２４が閉じられる。次に制御部１５からの指令により
弁２５が開かれ、かつ送液部１４が駆動して、第一溶出
液槽１２から高特異性カラム６に第二溶出液が流され
る。第二溶出液が流され始めると、カラム６を通過した
液が回収部７に流されるように弁１７の開閉が制御部１
５からの指令により切り替えられ、高特異性カラム６に
高特異性タグを介して付着していた蛋白質複合体が溶出
され、回収部７に移る。第二溶出液の送出が完了すると
制御部１５からの指令により弁２５が閉じられる。こう
して、転写制御因子に蛋白質が会合した蛋白質複合体が
回収部に溜められる。
が開かれ、かつ送液部１４が駆動して、第二洗浄液槽１
１から高特異性カラム６に第二洗浄液が流される。この
とき高特異性カラム６を通過した液が廃液槽１３に流さ
れるように、制御部１５からの指令により弁１７が開か
れ、カラム６に付着しない蛋白質が廃液槽１３に流され
る。所望の転写制御因子は蛋白質複合体の状態で高特異
性カラム６に付着する。第二洗浄液の送出が完了すると
制御部１５からの指令により弁２４が閉じられる。第二
洗浄液の送出が完了すると制御部１５からの指令により
弁２４が閉じられる。次に制御部１５からの指令により
弁２５が開かれ、かつ送液部１４が駆動して、第一溶出
液槽１２から高特異性カラム６に第二溶出液が流され
る。第二溶出液が流され始めると、カラム６を通過した
液が回収部７に流されるように弁１７の開閉が制御部１
５からの指令により切り替えられ、高特異性カラム６に
高特異性タグを介して付着していた蛋白質複合体が溶出
され、回収部７に移る。第二溶出液の送出が完了すると
制御部１５からの指令により弁２５が閉じられる。こう
して、転写制御因子に蛋白質が会合した蛋白質複合体が
回収部に溜められる。
【００１３】図１には、送液部１４を一箇所にまとめて
示したが、各送液管に設けてもよい。また、各液槽にシ
リンジポンプを設け、それにより送液するようにしても
よい。
示したが、各送液管に設けてもよい。また、各液槽にシ
リンジポンプを設け、それにより送液するようにしても
よい。
【００１４】高特異性カラムには抗フラッグ抗体カラム
が好ましい。抗フラッグ抗体には、シグマ社から販売さ
れているＭ２抗体がある。抗フラッグ抗体カラムとして
シグマ社からＭ２アガロースカラムが販売されているの
でこれを使用できる。この場合、第二洗浄液には以下の
組成の液が好ましい。２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ−ＫＯＨ
（ｐＨ７．６）、２０％グルセロール、０．０１％ＮＰ
４０、０．２％Ｔｗｅｅｎ２０、５ｍＭ ２−ＭＥ、阻
害剤混合液（１ｍＭ ＰＭＳＦ、１０μｇ／ｍｌペプス
タチンＡ、１０μｇ／ｍｌロイペプチン）、５００ｍＭ
酢酸カリウム溶液。第二溶出液には以下の組成の液が好
ましい。２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ−ＫＯＨ（ｐＨ７．
６）、２０％グリセロール、０．０１％ＮＰ４０、０．
２％Ｔｗｅｅｎ２０、５ｍＭ ２−ＭＥ、阻害剤混合液
（１ｍＭ ＰＭＳＦ、１０μｇ／ｍｌペプスタチンＡ、
１０μｇ／ｍｌロイペプチン）、５００ｍＭ酢酸カリウ
ム溶液、０．５ｍｇ／ｍｌフラッグペプチド。
が好ましい。抗フラッグ抗体には、シグマ社から販売さ
れているＭ２抗体がある。抗フラッグ抗体カラムとして
シグマ社からＭ２アガロースカラムが販売されているの
でこれを使用できる。この場合、第二洗浄液には以下の
組成の液が好ましい。２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ−ＫＯＨ
（ｐＨ７．６）、２０％グルセロール、０．０１％ＮＰ
４０、０．２％Ｔｗｅｅｎ２０、５ｍＭ ２−ＭＥ、阻
害剤混合液（１ｍＭ ＰＭＳＦ、１０μｇ／ｍｌペプス
タチンＡ、１０μｇ／ｍｌロイペプチン）、５００ｍＭ
酢酸カリウム溶液。第二溶出液には以下の組成の液が好
ましい。２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ−ＫＯＨ（ｐＨ７．
６）、２０％グリセロール、０．０１％ＮＰ４０、０．
２％Ｔｗｅｅｎ２０、５ｍＭ ２−ＭＥ、阻害剤混合液
（１ｍＭ ＰＭＳＦ、１０μｇ／ｍｌペプスタチンＡ、
１０μｇ／ｍｌロイペプチン）、５００ｍＭ酢酸カリウ
ム溶液、０．５ｍｇ／ｍｌフラッグペプチド。
【００１５】ニッケルアガロースカラム、抗フラッグ抗
体カラムを使用する場合、転写制御因子に付加するタグ
には、ヒスチジンタグおよびフラッグタグが好ましい。
ヒスチジンタグがニッケルアガロースカラムに結合し、
フラッグタグが抗フラッグ抗体カラムに会合する。この
場合、ヒスチジンタグにはヒスチジンが６個ないし１０
個連結されたタグが好ましい。本発明で使用するフラッ
グタグは配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列から
なるオリゴペプチドが好ましい。配列番号１に記載のア
ミノ酸配列のＣ末端に任意のアミノ酸を付加してもよ
い。転写制御因子とヒスチジンタグとの間、またはヒス
チジンタグとフラッグタグとの間にはスペーサペプチド
を入れてもよい。該スペーサペプチドはニッケルおよび
抗フラッグ抗体のいずれにも会合しないものであり、か
つヒスチジンとニッケルとの会合およびフラッグペプチ
ドと抗フラッグ抗体との会合のいずれの障害にならない
立体構造のものであればよい。
体カラムを使用する場合、転写制御因子に付加するタグ
には、ヒスチジンタグおよびフラッグタグが好ましい。
ヒスチジンタグがニッケルアガロースカラムに結合し、
フラッグタグが抗フラッグ抗体カラムに会合する。この
場合、ヒスチジンタグにはヒスチジンが６個ないし１０
個連結されたタグが好ましい。本発明で使用するフラッ
グタグは配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列から
なるオリゴペプチドが好ましい。配列番号１に記載のア
ミノ酸配列のＣ末端に任意のアミノ酸を付加してもよ
い。転写制御因子とヒスチジンタグとの間、またはヒス
チジンタグとフラッグタグとの間にはスペーサペプチド
を入れてもよい。該スペーサペプチドはニッケルおよび
抗フラッグ抗体のいずれにも会合しないものであり、か
つヒスチジンとニッケルとの会合およびフラッグペプチ
ドと抗フラッグ抗体との会合のいずれの障害にならない
立体構造のものであればよい。
【００１６】
【発明の効果】本発明のシステムは、高回収率カラムと
高特異性カラムとを直列に接続したので、転写制御因子
が他の蛋白質と会合した蛋白質複合体を十分な特異性で
十分な量回収できる。したがってので、転写制御因子を
始め種々の蛋白質を分離精製するためのシステムとして
利用可能である。さらに、本発明のシステムは前処理部
を有しているので、粘調液である核抽出液を高回収率カ
ラムに展開することが容易である。これにより本発明の
システムは、所望する転写制御因子を発現させた細胞の
核から、前記転写制御因子が他の蛋白質と会合してなる
蛋白質複合体を得るまでの一連の操作を制御部の指令に
より人手を介さずに自動的に行う。
高特異性カラムとを直列に接続したので、転写制御因子
が他の蛋白質と会合した蛋白質複合体を十分な特異性で
十分な量回収できる。したがってので、転写制御因子を
始め種々の蛋白質を分離精製するためのシステムとして
利用可能である。さらに、本発明のシステムは前処理部
を有しているので、粘調液である核抽出液を高回収率カ
ラムに展開することが容易である。これにより本発明の
システムは、所望する転写制御因子を発現させた細胞の
核から、前記転写制御因子が他の蛋白質と会合してなる
蛋白質複合体を得るまでの一連の操作を制御部の指令に
より人手を介さずに自動的に行う。
【図１】本発明のシステムの構成を示す概念図である。
【図２】本発明のシステムの前処理部の構成を示す概念
図である。
図である。
１：核供与部 ２：カリウム溶液槽 ３：反応槽 ４：前処理部 ５：高回収率カラム ６：高特異性カラム ７：回収部 ８：第一洗浄液槽 ９：第一溶出液槽 １０：廃液槽 １１：第二洗浄液槽 １２：第二溶出液槽 １３：廃液槽 １４：送液部 １５：制御部 １６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２
４、２５、３１：弁 ２６：濾過部 ２７：透析部 ２８：担体混合部 ２９：担体供与部 ３０：担体供与手段
４、２５、３１：弁 ２６：濾過部 ２７：透析部 ２８：担体混合部 ２９：担体供与部 ３０：担体供与手段
【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Sumitomo Electric Industries,Ltd. <120> Protein complex obtaining system <130> 100Y0229 <160> 1 <210> 1 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> Met Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 三牧 幸代 神奈川県横浜市栄区田谷町１番地 住友電 気工業株式会社横浜製作所内 (72)発明者 相馬 麗 神奈川県横浜市栄区田谷町１番地 住友電 気工業株式会社横浜製作所内 (72)発明者 根本 文子 神奈川県横浜市栄区田谷町１番地 住友電 気工業株式会社横浜製作所内 (72)発明者 森 祐子 神奈川県横浜市栄区田谷町１番地 住友電 気工業株式会社横浜製作所内 Ｆターム(参考） 4D017 AA09 BA07 CA14 CB10 DA03 EA01 4H045 AA40 BA15 BA40 GA26
Claims (1)
- 【請求項１】 核供与部およびカリウム溶液槽がそれぞ
れ送液管を介して反応槽に接続され、前記反応槽、前処
理部、高回収率アフィニティーカラム、高特異性アフィ
ニティーカラム、回収部が順に送液管を介して接続さ
れ、前記高回収率アフィニティーカラムには第一洗浄液
槽および第一溶出液槽が、前記高特異性アフィニティー
カラムには第二洗浄液槽および第二溶出液槽がそれぞれ
送液管を介して接続され、前記各送液管は送液部に接続
され、制御部の指令により前記送液部が駆動して、前記
核供与部から前記反応槽に核懸濁液が、前記カリウム溶
液槽から前記反応槽にカリウム溶液が、前記反応槽から
前記前処理部に核抽出液が、前記前処理部から前記高回
収率アフィニティーカラムに蛋白質担体懸濁液が、前記
第一洗浄液槽または前記第一溶出液槽から前記高回収率
アフィニティーカラムに第一洗浄液または第一溶出液が
それぞれ、前記第二洗浄液槽または前記第二溶出液槽か
ら前記高特異性アフィニティーカラムに第二洗浄液また
は第二溶出液がそれぞれ流され、前記高特異性アフィニ
ティーカラムを通過した液に含まれる蛋白質複合体が前
記回収部にて回収される蛋白質複合体取得システム。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000256020A JP2002069095A (ja) | 2000-08-25 | 2000-08-25 | 蛋白質複合体取得システム |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000256020A JP2002069095A (ja) | 2000-08-25 | 2000-08-25 | 蛋白質複合体取得システム |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002069095A true JP2002069095A (ja) | 2002-03-08 |
Family
ID=18744693
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000256020A Pending JP2002069095A (ja) | 2000-08-25 | 2000-08-25 | 蛋白質複合体取得システム |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2002069095A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010140598A1 (en) * | 2009-06-02 | 2010-12-09 | Canon Kabushiki Kaisha | Method for preparing protein, dna, and rna from cell |
-
2000
- 2000-08-25 JP JP2000256020A patent/JP2002069095A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010140598A1 (en) * | 2009-06-02 | 2010-12-09 | Canon Kabushiki Kaisha | Method for preparing protein, dna, and rna from cell |
| US9169480B2 (en) | 2009-06-02 | 2015-10-27 | Canon Kabushiki Kaisha | Method for preparing protein, DNA, and RNA from cell |
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