JP2002051773A - 酒石酸耐性酸性ホスファターゼに対するモノクローナル抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 酒石酸耐性酸性ホスファターゼ５ａに特異的
なモノクローナル抗体を提供することを目的とする。 【解決手段】 酒石酸耐性酸性ホスファターゼの１４３
〜１６０番目に相当するアミノ酸配列領域からなるペプ
チドを抗原として用いて、モノクローナル抗体を作製す
ることにより、酒石酸耐性酸性ホスファターゼ５ａに特
異的なモノクローナル抗体であって、酒石酸耐性酸性ホ
スファターゼ５ｂ、前立腺由来、赤血球由来、血小板由
来及びポテト由来の酸性ホスファターゼのいずれとも交
差反応性を持たないかあるいは交差反応性が１０％以下
のモノクローナル抗体が得られ、このモノクローナル抗
体は血中の酒石酸耐性酸性ホスファターゼ５ａを高精度
に測定することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ヒト酒石酸耐性酸
性ホスファターゼ５aを特異的に認識するモノクローナ
ル抗体、該モノクローナル抗体を産生するハイブリドー
マ、該モノクローナル抗体を用いた検体中の酒石酸耐性
酸性ホスファターゼ５aの測定方法、更には該ハイブリ
ドーマを作製するための免疫原としてのペプチドに関す
るものである。

【０００２】

【従来の技術】ヒト酸性ホスファターゼは、ＳＤＳ−Ｐ
ＡＧＥによって少なくともバンド０〜５の６個のバンド
に分けられることが知られている。この中でバンド５に
相当するタイプ５のアイソザイムは、酒石酸による抑制
に対して耐性を示すことからヒト酒石酸耐性酸性ホスフ
ァターゼと呼ばれている。従って、本明細書において
は、酒石酸耐性酸性ホスファターゼとは、酸性ホスファ
ターゼのバンド５に相当する酵素をいうものとする。ヒ
ト酒石酸耐性酸性ホスファターゼは、 骨代謝異常やHai
ry cell leukemia、Paget病、Gaucher病などの患者にお
いて、その血中濃度が優位に上昇すると考えられてい
る。従って、ヒト酒石酸耐性酸性ホスファターゼの血中
濃度の測定は、これらの疾患の診断に適用できることか
ら、これまで幾つかの測定法が提案されているが、いず
れの測定法も、他の酸性ホスファターゼのアイソザイム
をともに測定してしまうため特異的かつ精密な測定法が
なかった。また、このヒト酒石酸耐性酸性ホスファター
ゼは血中存在量が少ないこと、不安定であること、抗原
性が低いことなどが原因で、ヒト酒石酸耐性酸性ホスフ
ァターゼに対する抗体を作成するための免疫用抗原とし
て大量に精製し、利用することが難しかった。従って、
ペプチド抗原を利用してヒト酒石酸耐性酸性ホスファタ
ーゼに対するモノクローナル抗体を作成する方法（Hybr
idoma.14,91-94.1995）が試みられたこともあるがこれ
まで成功していない。

【０００３】また、ヒト酒石酸耐性酸性ホスファターゼ
は、高精度の電気泳動により、更に二つのバンドに分け
られ、それらはヒト酒石酸耐性酸性ホスファターゼ５a
及びヒト酒石酸耐性酸性ホスファターゼ５bと呼ばれて
いる。ヒト酒石酸耐性酸性ホスファターゼ５aと５bは、
それらの蛋白のアミノ酸配列は同一であるが、糖鎖が異
なり、ヒト酒石酸耐性酸性ホスファターゼ５bは、その
糖鎖においてシアリル酸残基が欠失しており、パラニト
ロフェニルリン酸（ｐＮＰＰ）を基質とした場合の至適
ｐＨ値が約５．７と約６．０の間にあり、他方、ヒト酒
石酸耐性酸性ホスファターゼ５aは、その糖鎖において
シアリル酸残基が欠失しておらず、ｐＮＰＰを基質とし
た場合の至適pH値が約４．９であることが知られている
(Clin. Chem. 24(7): 1105-1108, 1978; Clin. Bioche
m. 14, 177-181, 1981)。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】ヒト酒石酸耐性酸性ホ
スファターゼ５aと５bは、それぞれに臨床的意義がある
といわれているが、これまで精密測定系がないため測定
が難しかった。即ち、例えば、ヒト酒石酸耐性酸性ホス
ファターゼ５aに特異的に結合するモノクローナル抗体
として、組換えヒト酒石酸耐性酸性ホスファターゼを抗
原として作成したモノクローナル抗体４E６が報告され
ている(Clin. Chem. 41(10): 1495-149、 1995)が、そ
の後の研究により、このモノクローナル抗体４E６は、
ポテト酸性ホスファターゼとも高い結合性を有すること
が明らかにされており(Immuno. Lett.70(1999), 143-14
9)、 選択性が十分とは言えないものである。従って、
本発明の目的は、ヒト酒石酸耐性酸性ホスファターゼ５
aと特異的に反応し、他の酸性ホスファターゼのアイソ
ザイムとは交差反応性を示さない、あるいは示しても極
めて低い交差反応性しか示さないモノクローナル抗体、
それを産生するハイブリドーマ、それを利用したヒト酒
石酸耐性酸性ホスファターゼ５aの測定法、更には該ハ
イブリドーマを作製するための免疫原としてのペプチド
を提供することを目的とする。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者は、組換えヒト
酒石酸耐性酸性ホスファターゼなどの複雑な蛋白作製を
伴わないペプチドによる、ヒト酒石酸耐性酸性ホスファ
ターゼ５aに特異的なモノクローナル抗体の作製を目的
として鋭意研究した結果、抗原ペプチドとして特定のペ
プチドを選択することにより、ヒト酒石酸耐性酸性ホス
ファターゼ５aに特異的なモノクローナル抗体が得られ
ることを見出して、本発明を完成させた。

【０００６】従って、本発明は、酒石酸耐性酸性ホスフ
ァターゼ５aに対するモノクローナル抗体であって、酒
石酸耐性酸性ホスファターゼ５b、前立腺由来、赤血球
由来、血小板由来及びポテト由来の酸性ホスファターゼ
のいずれとも交差反応性を持たないかあるいは交差反応
性が１０％以下のモノクローナル抗体に関する。更に本
発明は、上記のモノクローナル抗体を産生するハイブリ
ドーマに関する。更に本発明は、上記モノクローナル抗
体を用いることを特徴とする検体中の酒石酸耐性酸性ホ
スファターゼ５aの測定方法に関する。更に本発明は、
配列表の配列番号１に示すアミノ酸配列からなるペプチ
ド、又は該ペプチドと実質的に同様の免疫原性を有する
ペプチドに関する。

【０００７】

【発明の実施の形態】以下、本明細書においては、酸性
ホスファターゼ、酒石酸耐性酸性ホスファターゼ５a及
び酒石酸耐性酸性ホスファターゼ５bを、それぞれACP、
TrACP５a及びTrACP５bと略記する。上記モノクローナ
ル抗体は、配列表の配列番号１に示すアミノ酸配列から
なるペプチド、又は該ペプチドと実質的に同様の免疫原
性を有するペプチドを免疫原として利用することにより
得ることができる。配列表の配列番号１に示すアミノ酸
配列は、ヒトＴｒＡＣＰのアミノ酸番号１４３〜１６０
の領域に相当する(Gene, 13(1993), 201-207)。配列番
号１のアミノ酸配列からなるぺプチドは、天然型のヒト
TrACPに近い抗原性を有しているものと考えられるの
で、このペプチドを免疫原として用いることにより、ヒ
トTrACP５aに特異性を持つモノクローナル抗体を得るこ
とができる。免疫原として用いるペプチドは、配列表の
配列番号１に示すアミノ酸配列からなるペプチドと実質
的に同様の免疫原性を有するペプチドであってもよい。
このようなペプチドとしては、配列表の配列番号１に示
すアミノ酸配列において１個または数個のアミノ酸が欠
失、置換、または付加されたアミノ酸配列からなるペプ
チドであって実質的に同様の免疫原性を有するペプチド
が挙げられる。また、配列表の配列番号１に示すアミノ
酸配列において、連続した３個以上、好ましくは６個以
上、より好ましくは１２個以上のアミノ酸残基からなる
実質的に同様の免疫原性を有するペプチドであってもよ
い。また、更には、このようなペプチドを含むペプチド
であって実質的に同様の免疫原性を有するペプチドであ
ってもよい。このようなペプチドとしては、アミノ酸残
基５０個までからなるペプチドが挙げられる。免疫原と
して用いる上記したペプチドは化学合成によって得る事
ができる。あるいは、ヒトTrACP遺伝子のクローニング
により明らかにされた塩基配列（Gene.130,201-207.199
3）を参考にして、ペプチドをコードする遺伝子をPCR法
によって増幅し、発現ベクターに導入して適当な宿主細
胞に形質転換し、形質転換細胞を培養してペプチドをコ
ードする遺伝子を発現させることによって作製すること
もできる。また、ペプチドを融合蛋白として発現させて
もよい。免疫原として用いるペプチドは、 必ずしも高
純度に精製したものでなくともよく、粗精製品であって
もよい。また、 ペプチドは、通常ハプテンとなるキャ
リアープロテインに化学結合して、抗原として用いられ
る。

【０００８】本発明のモノクローナル抗体は、上記ペプ
チドを免疫原として動物を免疫し、その抗ペプチド抗体
産生細胞と骨髄腫瘍細胞とを融合させることによって得
られるハイブリドーマによって産生される。このハイブ
リドーマは以下の方法によって得ることができる。即
ち、上記したようにして得たペプチドを、必要に応じて
ハプテンに結合し、これをフロイントの完全、不完全ア
ジュバント、またはPBSなどの緩衝液とともに数回に分
けてマウス等の動物に２〜３週間おきに腹腔内または尾
静脈投与することによって免疫する。次いで脾臓等に由
来する抗体産生細胞と骨髄腫瘍細胞（ミエローマ細胞）
等の試験管内で増殖能力を有する細胞とを融合する。融
合法としては、ケーラーとミルスタインの方法（Natur
e.256,495.1975）によってポリエチレングリコール（PE
G）を用いることにより融合できる。またセンダイウィ
ルスによっても融合を行うことができる。上記融合した
細胞からヒトＴｒＡＣＰ５ａを認識する抗体を産生する
ハイブリドーマの選択は、以下のようにして行うことが
できる。即ち、上記融合した細胞から限界希釈法によっ
てＨＡＴ培地及びHT培地で生存している細胞により作ら
れるコロニーからハイブリドーマを選択する。このコロ
ニー培養上清中にヒトＴｒＡＣＰ５aに対する抗体が含
まれている場合には、免疫原として用いたペプチドをそ
のプレート上に固定化したアッセイプレート上に上清を
のせ、反応後に抗マウスイムノグロブリン−ＨＲＰ標識
抗体等、２次標識抗体を反応させるＥＩＡ法により、ヒ
トTrACP５aに対するモノクローナル抗体産生クローンを
選択できる。目的とするモノクローナル抗体を産生する
ハイブリドーマを、通常細胞培養に用いられる培地にお
いて培養し、その培養上清より目的とするモノクローナ
ル抗体を回収することができる。またハイブリドーマが
由来する動物をあらかじめプリスタン処理しておき、そ
の動物に細胞を腹腔内注射することによって腹水を貯留
させ、その腹水からモノクローナル抗体を回収すること
もできる。上清、腹水よりモノクローナル抗体を回収す
る方法としては、通常の方法を用いることができる。即
ち、例えばクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグ
ラフィー、プロテインＡなどによるアフィニティクロマ
トグラフィーなどが挙げられる。

【０００９】上記した方法により、酒石酸耐性酸性ホス
ファターゼ５aに対するモノクローナル抗体であって、
酒石酸耐性酸性ホスファターゼ５b、前立腺由来、赤血
球由来、血小板由来及びポテト由来の酸性ホスファター
ゼのいずれとも交差反応性を持たないかあるいは交差反
応性が１０％以下のモノクローナル抗体が得られた。こ
のモノクローナル抗体は、タイプＩｇＭ、軽鎖κ、分子
量 約９５万ダルトンの特性を有していた。また、この
モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマとしてTr
K７３が確立された。このハイブリドーマは、 工業技術
院生命工学工業技術研究所に平成１２年６月２８日に寄
託され、受託番号としてＦＥＲＭ Ｐ−１７９２７が付
与されている。

【００１０】本発明のモノクローナル抗体を用いた測定
法によって検体中のヒトＴｒＡＣＰ５ａ濃度を知ること
ができる。このような測定法としては、酵素免疫測定法
(EIA)、酵素固定化免疫測定法(ＥＬＩＳＡ)、放射免疫
測定法(ＲＩＡ)などが挙げられる。このような測定法に
は、通常用いられる固相、例えば、ポリスチレン等のポ
リマー、ガラスビーズ、磁性粒子、マイクロプレート、
グラスフィルターなどが用いられる。標識としては、例
えば、ホースラデシュパーオキシダーゼ、ワサビペルオ
キシダーゼなどが挙げられる。これらの試薬を用いた免
疫測定法それ自体は当業者に既に周知であり、周知の方
法により本発明のモノクローナル抗体を用いた免疫測定
法を容易に実施できる。

【００１１】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明を更に詳しく説
明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものでは
ない。 実施例１ハイブリドーマ及びモノクローナル抗体の作製 （１）抗原の作製と免疫 既に発表されているヒトTrACPの遺伝子の塩基配列（Gen
e.130,201-207.1993）を基にしてアミノ酸配列１４３〜
１６０番目に相当する領域を選び、配列表の配列番号１
に示すアミノ酸配列からなるペプチドを化学的に全合成
した後、これをキーホール・リンペット・ヘモシアニン
（KLH）と結合させて抗原とした。これをフロイント完
全アジュバントで乳化させて感作抗原とし、Balb/c ６
週齢雌性マウスに５０μgを腹腔内投与した。２回目以
降はフロイント不完全アジュバントを用い２週間おきに
３回免疫を行い、最終回はPBS溶液にて尾静脈投与し
た。

【００１２】（２） 細胞融合とスクリーニング 最終ブーストの３日後に外科的に脾臓を摘出し、細胞融
合に用いた。融合はケーラーとミルスタインの方法（Na
ture.256,495.1975）に従い、ポリエチレングリコール
を用いて脾細胞とP3-X63-Ag8-U1（P3U1）を融合した。
融合細胞はＨＡＴ培地に分散し９６穴マイクロタイター
カルチャープレートに分注して３７℃、５％CO₂条件に
て培養した。約２週間後にコロニーの生育を確認してス
クリーニングを実施した。スクリーニングの方法を以下
に述べる。スクリーニング用プレートを作製するために
上記（１）にて作製した合成ペプチドをＰＢＳ中に溶解
し、０．５μg/１００μl/wellとなるように９６穴ウエ
ルに分注した。プレートを４℃で２晩静置した後に０．
００５% Tween ２０を含むＰＢＳで３回洗浄し、非特異
的反応を抑えるために１．５％BSA溶液を２００μl分注
して、更に４℃で１晩静置した。完成したプレートを
０．００５% Tween ２０を含むＰＢＳで３回洗浄した後
に培養上清１００μlを反応させ、更に洗浄を行った後
に２次抗体であるホースラデシュパーオキシダーゼ(Ｈ
ＲＰ)標識抗マウスイムノグロブリン抗体を加えて反応
させた。洗浄後にＨＲＰの発色基質であるＯＰＤを加え
て吸光度を測定した。上記のようにして陽性になったク
ローンは限界希釈法によって再クローニングされ上清を
再度チエックした。 （３）抗体の確認 得られた抗体をモノクローナル抗体タイピングキットに
て検定した結果、以下のような結果であった。 クラス ＩｇＭ 軽鎖 κ また、分子量は、約９５万ダルトンであった。 （４）腹水採取と抗体精製 上記（２）で得られたハイブリドーマ、Ｔｒｋ７３の１
×１０⁷細胞個をプリスタン０．５ml投与後２週間のBal
b/c１０週齢雌性マウスに腹腔内投与し、約２週間後に
マウス腹腔内に貯留した腹水を外科的に採取した。スク
リーニングで行ったＥＩＡ法によって腹水をサンプルと
して確認すると高濃度の本発明のモノクローナル抗体
（以下、このモノクローナル抗体をモノクローナル抗体
Ｔｒｋ７３と記載することもある）が含まれていた。こ
の腹水を硫安５０％で処理し、ＰＢＳに透析した後、Ｓ
−３００カラムによりＩｇＭフラクションを精製した。

【００１３】（５） ウエスタン・ブロッティング ウエスタン・ブロッティング用サンプルとして既に公知
の方法(Clin.Chem.24:7,1105-1108.1978)によりヒトCor
d plasmaよりTrACPを精製した。このヒトＴｒＡＣＰを
更に分離精製しヒトＴｒＡＣＰ５ａ及びヒトＴｒＡＣＰ
５ｂの２種類の酵素を得た。精製したヒトＴｒＡＣＰ５
ａ及びヒトＴｒＡＣＰ５ｂは、ディスク電気泳動法(Cli
n.Chem.24:2,309-312.1978)及びフッ素阻害による活性
測定法(Clin.Chem.46:4,469-473.2000)により、いずれ
も単一であることを確認した。これらのヒトＴｒＡＣＰ
５ａとヒトＴｒＡＣＰ５ｂの２種の酵素をそれぞれ２μ
g取り、非還元条件下にてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行い、ウ
エスタン・ブロッティング法により反応性を確認した。
その結果、ヒトＴｒＡＣＰ５ａでは約３３Ｋダルトン
（非分解物）及び約２３Kダルトン付近にバンドが認め
られた。ヒトＴｒＡＣＰ５ｂでは、約３３Ｋダルトン及
び約２３Ｋダルトンのいずれにもバンドが認められなか
った。この結果は、モノクローナル抗体Trk７３がヒト
ＴｒＡＣＰ５ａと反応性を持つこと、また公知の報告(A
rch.Biochem.Biophys.345,230-236.1997)で現れると考
えられる２３Ｋダルトンの分解ラージフラグメントと反
応することを示している。他方、モノクローナル抗体Ｔ
ｒｋ７３は、ヒトＴｒＡＣＰ５ｂと反応性を持たないこ
とを示している。 （６）特異性検定 モノクローナル抗体Ｔｒｋ７３の特異性を調べるため、
上記のヒトＴｒＡＣＰ５ａ及びヒトＴｒＡＣＰ５ｂの他
に、赤血球由来ＡＣＰ、血小板由来ＡＣＰ、前立腺由来
ＡＣＰ及びポテト由来ＡＣＰを９６穴マイクロタイター
プレートに０．５μｇ／１００μl ＰＢＳ／ｗｅｌｌと
なるように分注した。その後上記（２）と同様にブロッ
キングを行いプレートの作成をした。別にＢＳＡ、カゼ
インのみ(ブロッキング剤のみ)のプレートをコントロー
ルとして同時に作成した。結果のブランク吸光度の２倍
値までをマイナス(-)、３倍値までをプラス・マイナス
(±)、３倍以上５倍以下をプラス(+)、５倍以上をスト
ロング・ポジティブ(++)と判断した。得られた結果を表
１に示した。

【００１４】

【表１】 表１から明らかなように、ＴｒＡＣＰ５ａだけがストロ
ング・ポジティブであり、他はすべてマイナスであっ
た。また、モノクローナル抗体Ｔｒｋ７３は、ＴｒＡＣ
Ｐ５ｂ、赤血球由来ＡＣＰ、血小板由来ＡＣＰ、前立腺
由来ＡＣＰ及びポテト由来ＡＣＰのいずれとも１０％以
下の交差反応性しか持たないことが判った。

【００１５】実施例２モノクローナル抗体を利用したEIAによるヒトTrACP５a
の測定 実施例１の（６）と同様の方法で精製したTrACP５aをマ
イクロタイタープレートに結合させ、プレートを作製し
た。ＴｒＡＣＰ５ａは、それぞれ３０００ｎｇからの１
０倍希釈であり、３０００ｎｇ、３００ｎｇ、３０ｎ
ｇ、３ｎｇ、０．３ｎｇ、０．００３ｎｇの６段階の濃
度を調整した。１次抗体としてモノクローナル抗体Ｔｒ
ｋ７３を１００μl／ｗｅｌｌで分注し、実施例１の
（２）と同様に抗マウスイムノグロブリン‐ＨＲＰ標識
２次抗体を反応させる方法で検定した。得られた感度検
定結果を図１に示した。図１から明らかなように０．３
ngまでの濃度のＴｒＡＣＰ５ａが検出可能であることが
判った。

【００１６】実施例３モノクローナル抗体を利用したEIAによるヒトＴｒＡＣ
Ｐ５ａの測定 まず、一次抗体を調製するために組換えヒトＴｒＡＣＰ
（ｒＴｒＡＣＰ）をハイマンらの方法(J.Biol.Chem.26
9,1294-1300.1994)により作製した。このｒＴｒＡＣＰ
を、実施例１の（１）でマウスに行ったのと同様の方法
にてＷｉｓｔｅｒ系６週齢雌性ラットに感作した。最終
感作３日後に頸静脈より全採血し、血清を得た。さらに
血清をプロテインAカラム処理してＩｇＧ分画を作成し
た。このポリクローナルなＩｇＧ分画を５μg/１００μ
ｌ ＰＢＳ／ｗｅｌｌとなるようにマイクロタイタープ
レートに分注し、実施例１の（６）と同様の方法にてブ
ロッキングを行って固相プレートを作成した。別に精製
したモノクローナル抗体Ｔｒｋ７３を４ｍｇと西洋ワサ
ビペルオキシダーゼ１ｍｇを過ヨウ素酸法にて結合さ
せ、二次標識抗体を作成した。このプレートと標識抗体
を用いて、精製したヒトＴｒＡＣＰ５ａを検体としてＥ
ＩＡ測定系を作ったところ、図２のような検量線を得
た。上記方法において、精製したＴｒＡＣＰ５ａの代わ
りに、実際の検体として６例のヒト血清を使用して、血
清中のＴｒＡＣＰ５ａを測定したところ表２に示した結
果を得た。これらの結果から、ヒト血清中のＴｒＡＣＰ
５ａの濃度の平均値は２．５８ ｎｇ／ｍｌであった。

【００１７】

【表２】

【００１８】

【発明の効果】本発明により、酒石酸耐性酸性ホスファ
ターゼの１４３〜１６０番目に相当するアミノ酸配列領
域からなるペプチドあるいはそれと同様の免疫原性を有
するペプチドを抗原として用いて、モノクローナル抗体
を作製することにより、酒石酸耐性酸性ホスファターゼ
５aに特異的なモノクローナル抗体であって、酒石酸耐
性酸性ホスファターゼ５b、前立腺由来、赤血球由来、
血小板由来及びポテト由来の酸性ホスファターゼのいず
れとも交差反応性を持たないかあるいは交差反応性が１
０％以下のモノクローナル抗体が得られ、このモノクロ
ーナル抗体は血中の酒石酸耐性酸性ホスファターゼ５ａ
を高精度に測定することができる。

【００１９】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Nitto Boseki Co., Ltd. <120> Monoclonal Antibody Specific for Tartaric acid - Resitant Acid Phosphatase <130> DA-02967 <160> 1 <210> 1 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence composed of amino acid residues 143 - 160 of tartaric acid - resistant acid phosphatase <400> 1 Gly Asn Ser Asp Asp Phe Leu Ser Gln Gln Pro Glu Arg Pro Arg Asp 1 5 10 15 Val Lys

【００２０】

【配列表フリーテキスト】配列表の配列番号１のアミノ
酸配列は、ヒト酒石酸耐性酸性フォスファターゼの１４
３〜１６０番目のアミノ酸配列に相当するものである。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、本発明のモノクローナル抗体を利用し
たEIAによるヒトＴｒＡＣＰ５ａの感度検定結果を示
す。

【図２】図２は、本発明のモノクローナル抗体を利用し
たＥＩＡによるヒトＴｒＡＣＰ５ａの測定の検量線を示
す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｇ０１Ｎ 33/573 Ａ ４Ｈ０４５ Ｃ１２Ｑ 1/42 33/577 Ｂ Ｇ０１Ｎ 33/573 (Ｃ１２Ｐ 21/08 33/577 Ｃ１２Ｒ 1:91） //(Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＣ Ｃ１２Ｒ 1:91） 5/00 Ｂ (72)発明者 水野 久美子 福島県郡山市久保田字伊賀河原103−３− 203 (72)発明者 黒潟 希代子 福島県郡山市長者２−16−19 301 (72)発明者 片山 勝博 福島県郡山市富田町字大十内80−21 Ｆターム(参考） 4B024 AA11 BA44 GA03 GA18 HA15 4B050 CC04 DD11 LL03 4B063 QA01 QA19 QQ02 QQ33 QQ96 QR48 QR84 QS33 4B064 AG27 CA10 CA20 CC24 CE04 CE10 DA13 4B065 AA91X AA92X AB05 AC14 BA08 BB01 CA25 CA46 4H045 AA11 AA20 AA30 BA17 CA42 DA76 DA86 EA50 FA72 GA06 GA21 HA07

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 酒石酸耐性酸性ホスファターゼ５aに対
   するモノクローナル抗体であって、酒石酸耐性酸性ホス
   ファターゼ５b、前立腺由来、赤血球由来、血小板由来
   及びポテト由来の酸性ホスファターゼのいずれとも交差
   反応性を持たないかあるいは交差反応性が１０％以下の
   モノクローナル抗体。
2. 【請求項２】 タイプＩｇＭ、軽鎖κ、分子量約９５万
   ダルトンである請求項１記載のモノクローナル抗体。
3. 【請求項３】 工業技術院生命工学工業技術研究所に受
   託番号ＦＥＲＭ Ｐ-１７９２７として寄託されている
   ハイブリドーマＴｒｋ７３により産生される請求項１又
   は２記載のモノクローナル抗体。
4. 【請求項４】 請求項１又は２記載のモノクローナル抗
   体を産生するハイブリドーマ。
5. 【請求項５】 酒石酸耐性酸性ホスファターゼの断片ペ
   プチドを哺乳動物に免疫することにより得られるリンパ
   球と、ミエローマ細胞とを融合してなる請求項４記載の
   ハイブリドーマ。
6. 【請求項６】 断片ペプチドが、配列表の配列番号１に
   示すアミノ酸配列からなるペプチド、又は該ペプチドと
   実質的に同様の免疫原性を有するペプチドである請求項
   ５記載のハイブリドーマ。
7. 【請求項７】 工業技術院生命工学工業技術研究所に受
   託番号ＦＥＲＭ Ｐ-１７９２７として寄託されている
   ハイブリドーマＴｒｋ７３である請求項４から６のいず
   れかに記載のハイブリドーマ。
8. 【請求項８】 請求項１から３のいずれかに記載のモノ
   クローナル抗体を用いることを特徴とする検体中の酒石
   酸耐性酸性ホスファターゼ５aの測定方法。
9. 【請求項９】 配列表の配列番号１に示すアミノ酸配列
   からなるペプチド、又は該ペプチドと実質的に同様の免
   疫原性を有するペプチド。
10. 【請求項１０】 請求項４から７のいずれかに記載のハ
    イブリドーマを作製するための請求項９記載のペプチ
    ド。