JP2002017389A

JP2002017389A - 茸細胞外多糖体の製造方法

Info

Publication number: JP2002017389A
Application number: JP2000200244A
Authority: JP
Inventors: Shinei Ri; 神榮李; Keibin Ri; 奎旻李
Original assignee: MBIOTEC CO Ltd
Current assignee: MBIOTEC CO Ltd
Priority date: 2000-06-30
Filing date: 2000-06-30
Publication date: 2002-01-22
Also published as: US6416978B1

Abstract

(57)【要約】【課題】菌糸の形態をはじめ、液体培地内での流動学
的特性を最適化して茸、特に霊芝茸からより効率的に、
またより安定的に細胞外多糖体を産生させる茸細胞外多
糖体の製造方法を提供する。【解決手段】アンモニウムイオンを添加したｐＨ２〜
６の液体培地にて菌糸体を培養する菌糸体培養工程と、
この菌糸体培養工程により得られた菌糸体をｐＨ３〜７
の液体培地にて培養して細胞外多糖体を産生させる多糖
体生産工程を備える。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、茸細胞外多糖体
（Ｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ）の製造方法
に関するもので、より詳細には初期の液体培地内の環境
をｐＨ２〜６に調整し、選択的にアンモニウムイオンを
添加する茸菌糸体を生産する工程と、上記菌糸体を含む
液体培地内の環境をｐＨ３〜７に調整してより効率的に
細胞外多糖体を生産する工程からなる２段階の工程を含
む茸細胞外多糖体の製造方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】茸は、食品及び生薬等の素材として非常
に多くの関心が高まっているが、茸の主成分である多糖
類は茸や分泌物に存在して生物工学に応用されている。
最近、培養ろ液から細胞多糖を直接製造することによ
り、抽出工程を省略することができると共に比較的簡単
な精製が可能であるので、細胞外多糖に関する研究が盛
んになっている。しかし、細胞外多糖による菌糸体の大
量生産工程は、細胞外多糖の低い収率、粘度及び形態変
化による培養液の物性変化等の制約によって極めて難し
い実状がある。菌糸体の生育による培養液の粘度増加
は、酸素伝達の制限と剪断応力を増加させるため、高い
剪断応力は菌糸形態を変化させて菌糸の生育減少を誘発
し、これがさらに細胞外多糖の生成を減少させることと
なる。

【０００３】既存の研究では、液体培地内にアンモニウ
ムイオンを添加しているが、アンモニウムイオンの添加
条件についての研究は殆どないのが実状である。但し、
糸状菌の場合、アンモニウムイオンを添加することによ
る菌糸の生育増加は、アンモニウムイオンが菌糸体への
炭素源の流入を促進するためであると説明されている。
さらに、抗生物質を産生する際には過剰のアンモニウム
イオンの添加は、菌糸体に対する抑制効果を示すと報告
された。

【０００４】一方、霊芝茸（Ｇａｎｏｄｅｒｍａｌｕ
ｃｉｄｕｍ）は、多孔菌科不老草属（Ｇａｎｏｄｅｒｍ
ａ）に属する担子菌で、その子実体を霊芝という。霊芝
茸は、旧来から高血圧、利尿、強壮、強心、胃腸治療等
において多様な薬効を発揮することが知られている。上
記霊芝の生産方法としては、これまで農家で主に利用し
た来た鋸屑栽培や原木栽培のような固体培養法がある
が、この固体培養法は培養期間が長く、多くの労働力が
要求されると共に子実体から多糖を抽出する工程が極め
て難しい問題があった。従って、このような問題を改善
するために、常に一定の条件下で培養が可能であり、均
一な品質の菌糸体を高効率で多量に得ることができ、ま
た低費用で生産できる液体培養法が最近広く試みられて
いる。しかし、このような液体培養法は、菌糸体から霊
芝茸の生理活性成分である多糖類（抗癌活性のβ−１，
３−ｇｌｕｃａｎ）の抽出工程が煩雑であり、さらに収
率が非常に低いので、産業的適用において制限が多いと
いう問題がある。

【０００５】また、下等菌類に対する多様な研究とは異
なり、液体培養をする際に多孔菌科不老草属（Ｇａｎｏ
ｄｅｒｍａ）の菌糸体等の高等菌類である担子菌類にお
いては、形態学的及び流動学的特性に対する研究が不充
分であり、特に担子菌類と細胞外多糖体の生産との相関
性に対しては全く報告されていなかった。より詳しく
は、菌糸体及び細胞外多糖を大量生産するためには、こ
れらの関係を究明して、調整、制御することが重要であ
るといえる。特に、安定性及び生産性をより向上させる
ためには、培地組成及び培養条件を変えながら培養さ
せ、形態学的な変化や流動学的挙動を菌体濃度及び生成
物と関連させて検討する必要がある。さらに、ｐＨをは
じめ、窒素源、菌糸体の形態や流動学的特性、菌糸体の
生育及び細胞外多糖体の産生との相関性に対しては、こ
れまであまり検討されておらず、これらに対する研究の
必要性が要求されている現状である。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】このような研究の一環
として、本発明者らは、菌糸体の生育条件と細胞外多糖
体の生産条件との最適条件において互いに相違点がある
ことを見出し、それぞれの生産目的物に従って液体培地
における培養条件を最適化させて培養することにより効
率的に細胞外多糖体を得ることを見出して本発明を完成
した。

【０００７】従って、本発明は、菌糸体の培養工程と細
胞外多糖体の生産工程とにおいて、それぞれｐＨ範囲が
異なる２段階によるｐＨ調整を含む茸細胞外多糖体の大
量製造方法を提供することにその目的がある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】上記目的を達成するた
め、本発明における茸細胞外多糖体の製造方法は、アン
モニウムイオンを添加したｐＨ２〜６の液体培地にて菌
糸体を培養する菌糸体培養工程と、この菌糸体培養工程
により得られた菌糸体をｐＨ３〜７の液体培地にて培養
して細胞外多糖体を産生させる多糖体生産工程を備え
る。

【０００９】前記茸は霊芝茸であり、多孔菌科不老草属
（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ）に属する担子菌が好適であり、
前記菌糸体培養工程に用いる液体培地のｐＨが３〜４で
あることが好適であり、菌糸体培養工程に用いる液体培
地は、０．０１〜５重量％のアンモニウムイオンを含む
ことが望ましい。また、多糖体生産工程に用いる液体培
地のｐＨが５〜６であることが好適であり、菌糸体培養
工程に用いる液体培地及び多糖体生産工程に用いる液体
培地は、各工程における培養過程で一定範囲のｐＨに維
持しても良い。

【００１０】

【発明の実施の形態】このような本発明による茸細胞外
多糖体の製造方法について、以下具体的に説明する。茸
細胞外多糖体の製造方法は、アンモニウムイオンを添加
してｐＨ２〜６の液体培地で菌糸体を培養する菌糸体培
養工程及びこの菌糸体培養工程により得られる菌糸体
を、ｐＨ３〜７の液体培地で培養して細胞外多糖体を産
生させるものである。

【００１１】はじめに菌糸体を培養する菌糸体培養工程
について説明する。先ず、本発明で挙げられている代表
的な例として用いられる霊芝茸（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ）
は、ガノデルマルシダム（Ｇａｎｏｄｅｒｍａｌｕ
ｃｉｄｕｍ），ガノデルマアプラナータム（Ｇａｎｏ
ｄｅｒｍａａｐｐｌａｎａｔｕｍ），ガノデルマ
ツガーエ（Ｇａｎｏｄｅｒｍａｔｓｕｇａｅ）、ガノ
デルマネオジャポニカム（Ｇａｎｏｄｅｒｍａｎｅ
ｏ−ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）、或いは多孔菌科不老草属
（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ）に属する全ての担子菌を含
む。上記菌株は、ｐＨ２〜６、より望ましくはｐＨ３〜
４の液体培地にて培養する。その理由としては、液体培
地でｐＨ条件が２未満であれば培地内の水素イオン濃度
が高過ぎて菌体の生育が阻害されるばかりでなく、細胞
外多糖体の生成も抑制される問題がある。一方で、ｐＨ
が６を超過すれば菌体の生育が抑制され、細胞外多糖体
の生成も徐々に減少するからである。

【００１２】また、上記液体培地のｐＨは、培養の初期
培地条件、若しくは培養工程中において、水酸化ナトリ
ウム（ＮａＯＨ）を添加してｐＨを一定範囲に維持する
ことが望ましい。この時、上記ｐＨ調整用の水酸化ナト
リウム（ＮａＯＨ）を過量使用すれば菌糸体が溶菌（ｌ
ｙｓｉｓ）されて減少する問題があるので、ｐＨ７を超
えない量とすることが望ましい。また、上記液体培地
は、０．０１〜５重量％のアンモニウムイオンを選択的
に含むことが好適である。その理由としては、上記アン
モニウムイオン添加の有無、添加量が培養液の粘稠度指
数や流動指数等のような、培養中における流動学的挙動
に大きな影響を及ぼすからである。

【００１３】次工程としての茸細胞外多糖体を産生させ
る多糖体生産工程においては、上記最適化された菌糸体
培養工程から得られた菌糸体を含む培地に水酸化ナトリ
ウム（ＮａＯＨ）を添加し、上記菌糸体培養工程におけ
る培地環境とは異なり、ｐＨ３〜７、より望ましくはｐ
Ｈ５〜６の液体培地で培養する。この時、液体培地のｐ
Ｈが３未満の場合、培養液の見かけ粘度が増加すること
により菌糸体に必要な培養液内の酸素移動を低下させる
問題があるので、細胞外多糖体の生成を阻害することと
なる。一方で、ｐＨ７を超過する場合には、菌糸体の溶
菌が生じるため望ましくない。また、上記液体培地のｐ
Ｈは培養初期の培地条件、若しくは培養工程中におい
て、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）を添加してそのｐＨ
を一定範囲に維持しながら、培養を進行させる。この
時、上記ｐＨ調整用の水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）を
過量使用すると菌糸体の溶菌（ｌｙｓｉｓ）により多糖
体の生成が減少する問題があるため、ｐＨ７を超えない
量を使用することが望ましい。

【００１４】一方、液体培養を行う時、培地内でのアン
モニウムイオンの有無が霊芝茸の細胞外多糖体の生産及
び菌糸体の生育に重要な影響を及ぼす。培養中の菌糸形
態は、培地内に添加されたアンモニウムイオンの濃度が
低濃度（０．０１〜３ｇ／Ｌ）から高濃度（５〜１１ｇ
／Ｌ）に移行すると、糸状（ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ）
形態からペレット（ｐｅｌｌｅｔ）形態に変わる。

【００１５】また、培地中のアンモニウムイオン濃度が
低濃度の場合、液体培養の際に栄養成分の制限により菌
糸形態としては糸状にて現れるが、最適な細胞外多糖体
の産生は、アンモニウムイオンの濃度が低濃度の場合或
いは欠乏するような状態のときに認められる。なお、培
養液と培養ろ液との流動学的挙動は、ヘルシャル−バル
クレ−（Ｈｅｒｓｃｈｅｌ−Ｂｕｌｋｌｅｙ）モデルと
よく一致し、アンモニウムイオンの濃度に由来する菌糸
の形態的変化は培養液内の流動学的挙動と比例関係を示
し、細胞外多糖体の生産とは反比例的な関係を示す。

【００１６】一方、本発明において用いるエアリフト発
酵槽（ａｉｒ−ｌｉｆｔｆｅｒｍｅｎｔｏｒ）は、短
期培養において高密度の菌糸体を維持するために使用し
ており、従来のジャーファーメンタ（ｊａｒｆｅｒｍ
ｅｎｔｏｒ）を使用して２段階によるｐＨの調整方法を
通じて菌糸体の生育及び細胞外多糖体の生産を向上させ
て最適ｐＨを見出すことも可能である。

【００１７】従って、本発明における茸細胞外多糖体の
製造方法では、上述したように培地中のアンモニウムイ
オンの濃度を調整し、流動学的挙動と形態学的な特性と
の相関関係により最適な菌糸体の生育及び細胞外多糖体
の生産が可能である。

【００１８】次に本発明について実施例及び実験例によ
り具体的に説明する。なお、実施例は本発明をさらに詳
細に説明するものであり、これら実施例及び実験例に本
発明の範囲が限定されるものではない。

【００１９】［実施例１］：２段階による培養（１）本実施例において、菌株はガノデルマルシダム（Ｇａ
ｎｏｄｅｒｍａｌｕｃｉｄｕｍ）ＡＳＩ７００４
を使用した。ポテト・デキストロース・アガー（ｐｏｔ
ａｔｏｄｅｘｔｒｏｓｅａｇａｒ：ＰＤＡ）の平板
培地で３０℃、７日間培養させた後、４℃で保存し、３
か月毎に継代培養して用いた。このように生育された菌
糸体について直径が５ｍｍであるステンレス鋼管（ｓｔ
ａｉｎｌｅｓｓｓｔｅｅｌｐｉｐｅ）により菌糸体
ディスク（ｍｙｃｅｌｉｕｍｄｉｓｋ）を作製し、こ
の菌糸体ディスクの内から４つ或いは５つを５０ｍｌの
培地を入れた２５０ｍｌの三角フラスコに接種した。３
０℃で７日間培養させた後、再度５０ｍｌの種菌用培地
を含んだ２５０ｍｌの三角フラスコに５％（ｖ／ｖ）の
前培養を接種した。つづいて、３０℃、１００ｒｐｍで
５日間振とう培養した。その後、前培養は均質器（東洋
（株）、モデル０８２０）により３０秒間均質化させて
本培養の接種用とし、実験毎に新たに培養して使用し
た。この時、種菌培養に使用した前培養の培地は、ソン
ら［Ｓｏｎｅ，Ｙ．，Ｏｋｕｄａ，Ｒ．，Ｗａｄａ，
Ａ．，Ｋｉｓｈｉｄａ，Ａ．ａｎｄＭｉｓａｋｉ，
Ａ．，ＳｔｒｕｃｔｕｒｅｓａｎｄＡｎｔｉｔｕｍ
ｏｒＡｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｔｈｅＰｏｌｙｓ
ａｃｃｈａｒｉｄｅｓＩｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍ
ＦｒｕｉｔｉｎｇＢｏｄｙａｎｄｔｈｅＧｒｏ
ｗｉｎｇＣｕｌｔｕｒｅｏｆＭｙｃｅｌｉｕｍｏ
ｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４９（９），２６４２−２６５
０（１９８５）参照］が使用したガノデルマアプラナ
ータム（Ｇａｎｏｄｅｒｍａａｐｐｌａｎａｔｕｍ）
の振とう培養用培地を使用した。本培養には、李ら［Ｌ
ｅｅ，Ｓ．Ｙ．，Ｋａｎｇ，Ｔ．Ｓ．ａｎｄＬｅ
ｅ，Ｍ．Ｃ．，ＣｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆＥｘｏ−ｐ
ｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
ｆｒｏｍＳｕｂｍｅｒｇｅｄＭｙｃｅｌｉａｌＣｕ
ｌｔｕｒｅｏｆＧａｎｏｄｅｒｍａｌｕｃｉｄｕ
ｍｂｙＵｓｉｎｇＡｉｒ−ｌｉｆｔＦｅｒｍｅ
ｎｔｅｒＳｙｓｔｅｍ，Ｋｏｒ．Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈ
ｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，１３（５），１−７（１９９
８）参照］が液体培養により細胞外多糖体生産の最適培
地として報告した培地［６０ｇ／Ｌのグルコース、６ｇ
／Ｌの酵母抽出物、０．５ｇ／ＬのＫＨ_２ＰＯ_４、１ｇ
／Ｌの（ＮＨ_４）_２ＨＰＯ_４］について、１２１℃で１
５分間加圧滅菌を行って使用した。

【００２０】発酵槽（ｆｅｒｍｅｎｔｏｒ）は、上記李
らが自ら作製した３Ｌ（実質容量：ｗｏｒｋｉｎｇｖ
ｏｌｕｍｅ、２Ｌ）のエアリフト発酵槽（ａｉｒ−ｌｉ
ｆｔｆｅｒｍｅｎｔｏｒ）にて、５％（ｖ／ｖ）の接種
量、３０℃で２．５ｖｖｍの通気速度に固定して培養し
た。ここで、上記発酵槽は従来のジャーファーメンタ
（ｊａｒｆｅｒｍｅｎｔｏｒ）と比較して剪断応力を
減らす同心通通気管内部ループ（ｃｏｎｃｅｎｔｒｉｃ
ｄｒａｕｇｈｔ−ｔｕｂｅｉｎｔｅｒｎａｌｌｏ
ｏｐ）形態の発酵槽であり、撒布器は円筒形セラミック
の形態の撒布器であり、蒸発した培地は培養器に接続さ
れた凝縮機により凝縮・回収された。

【００２１】このような菌株と培地を使用して、先ず液
体培地の初期ｐＨを水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）によ
りｐＨ３に調整し、６時間、１８時間、２４時間、４８
時間、７２時間の期間培養した。この後、それぞれ培地
のｐＨを６に調整して、さらに継続して培養した。ま
た、これらについて２４時間毎に６日間菌糸体の最大菌
糸体乾燥重量（ｍｙｃｅｌｉａｌｄｒｙｗｅｉｇｈ
ｔ：ＭＤＷ）と細胞外粗多糖（ｃｒｕｄｅｅｘｏ−ｐ
ｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ：ＥＰＳ）を測定した。そ
の結果は図１及び図２に示したとおりである。菌糸体の
最大菌糸体乾燥重量（ＭＤＷ）は１８．４ｇ／Ｌであ
り、細胞外粗多糖（ＥＰＳ）は７．２７ｇ／Ｌを得た。
この時、菌糸体の最大菌糸体乾燥重量の測定方法は、培
養液を１０，０００×ｇで１５分間遠心分離し、沈殿し
た菌糸体を濾紙（ｆｉｌｔｅｒｐａｐｅｒ；Ｎｏ．
２、Ａｄｖａｎｔｅｃ社製）により濾過した後、蒸留水
を使用して２〜３回洗浄し、７０℃で２４時間にわたっ
て乾燥した後、デシケータ（ｄｅｓｉｃｃａｔｏｒ）で
恒量になるまで放置し、菌糸体の重量を測定した。ま
た、細胞外多糖は、培養液を１０，０００×ｇで１５分
間遠心分離して菌糸体を除去した後、得られた培養ろ液
に２倍量のアセトンを加えて析出した沈殿物を７０℃で
２４時間にわたって乾燥した後、重量を測定して定量す
る方法を採用した。

【００２２】［実施例２］：２段階による培養（２）１３mg／dＬのアンモニウムイオンを培地に添加し、さ
らに培養をして６時間が経過した後、液体培地内のｐＨ
を６に調整して培養したことを除き、上記実施例１と同
様の方法により菌糸体の培養及び細胞外多糖を産生させ
た。これらにつき上記実施例１と同様の方法により菌糸
体乾燥重量（ＭＤＷ）と細胞外粗多糖（ＥＰＳ）を測定
した。その結果は図３に要約して示したとおりであっ
た。ＭＤＷは８．２３ｇ／Ｌであり、ＥＰＳは２０．０
４ｇ／Ｌを得た。

【００２３】［実施例３］：２段階による培養（３）培養を開始して２日が経過した後、液体培地のｐＨを６
に調整して培養を継続したことを除き、上記実施例２と
同様の方法により菌糸体及び細胞外多糖を培養した。ま
た菌糸体の最大菌糸体乾燥重量（ＭＤＷ）と細胞外粗多
糖（ＥＰＳ）ついて、上記実施例１と同様の方法により
測定してその結果を図４に要約して示した。菌糸体の最
大菌糸体乾燥重量（ＭＤＷ）は８．８９ｇ／Ｌであり、
細胞外粗多糖（ＥＰＳ）は１７．０３ｇ／Ｌを得た。

【００２４】上記実施例２及び３の結果に示されるとお
り、菌糸体の生育は、培養開始６時間及び２日が経過し
た後、ｐＨを再調整した場合には、培養期間が５日まで
増加（８．２３ｇ／Ｌ及び８．８９ｇ／Ｌ）し、その後
に減少した点では、ｐＨの再調整の時間に関わりなく一
致したが、図１に比較して乾燥菌体量はそれぞれ減少し
ている（８１％及び４９％）。しかしながら、特に、ｐ
Ｈ３で６時間にわたって培養してからｐＨ６に再調整し
た場合には、最大細胞外多糖（２０．０４ｇ／Ｌ）を産
生することが確認された。

【００２５】上記実施例２及び３の場合には、初期培養
時にアンモニウムイオンが急激に減少して、培養開始か
ら３日が経過した後にはほぼ枯渇し、この時点からグル
コースが急激に消費されて細胞外多糖の産生が徐々に増
加した。しかし、菌糸体の生育速度は、アンモニウムイ
オン濃度の減少に沿って低下する傾向を示し、水酸化ナ
トリウム（ＮａＯＨ）を添加したことにより、溶菌現象
を起こして乾燥菌体量が低下する傾向を示した。しか
し、アンモニウムイオンがほぼ枯渇した時点から細胞外
多糖の産生速度が増加し、培養液中にアンモニウムイオ
ンが存在する場合には、多糖の産生が抑制されることが
確認された。

【００２６】［実施例４］：アンモニウムイオンを含有
しない培地の初期ｐＨによる影響アンモニウムイオンを含有しない培地中で初期ｐＨをそ
れぞれ３、４、５、６に調整した後、９日間継続的に培
養し、１２時間毎に上記実施例１と同様の方法により菌
糸体の最大菌糸体乾燥重量（ＭＤＷ）と細胞外粗多糖
（ＥＰＳ）を測定した。また、その結果を図５の
（ａ）、（ｂ）及び表１に要約して示した。

【００２７】

【表１】

【００２８】［実施例５］：アンモニウムイオンを含有
しない培地のｐＨ維持調整による影響水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）を使用して液体培地のｐ
Ｈを一定範囲に維持調整したことを除き、上記実施例４
と同様の方法により９日間継続的に培養した。また、１
２時間毎に上記実施例１と同様の方法により菌糸体の最
大菌糸体乾燥重量（ＭＤＷ）と細胞外粗多糖（ＥＰＳ）
を測定した。また、その結果を図６の（ａ）、（ｂ）及
び表２に示した。

【００２９】

【表２】

【００３０】［実施例６］：アンモニウムイオンを含む
培地の初期ｐＨによる影響１ｇ／Ｌのアンモニウムイオンを液体培地中に添加した
ことを除き、上記実施例４と同様の方法により９日間継
続的に培養し、１２時間毎に上記実施例１と同様の方法
により菌糸体の最大菌糸体乾燥重量（ＭＤＷ）と細胞外
粗多糖（ＥＰＳ）を測定した。また、その結果を図７の
（ａ）、（ｂ）及び表３に示した。

【００３１】

【表３】

【００３２】［実施例７］：アンモニウムイオンを含む
培地のｐＨ維持調整による影響水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）を使用して液体培地のｐ
Ｈを一定範囲に維持調整したことを除き、上記実施例６
と同様の方法により９日間継続的に培養し、１２時間毎
に上記実施例１と同様の方法により菌糸体の最大菌糸体
乾燥重量（ＭＤＷ）と細胞外粗多糖（ＥＰＳ）を測定し
た。また、その結果を図８の（ａ）、（ｂ）及び表４に
示した。

【００３３】

【表４】

【００３４】上記実施例４乃至実施例７の結果から、乾
燥菌体量については、ｐＨ調整を行った場合及びｐＨ調
整を行わない場合を含めて、全てのアンモニウムイオン
を含有した培地がアンモニウムイオンを含まない培地に
比して高いことが確認された。細胞外多糖の産生量につ
いては、アンモニウムイオンを含有しない培地が高いこ
とが確かめられた。また、ｐＨ調整を行った場合の乾燥
菌体量については、対応するｐＨにおいてそれぞれｐＨ
調整を行わない場合よりも低かったが、多糖の産生量は
高かった。細胞外多糖の最大産生量は、ｐＨ６にｐＨ調
整してアンモニウムイオンを含有しない培地から得ら
れ、その量は１５．７１ｇ／Ｌであった。なお、上記実
施例２におけるｐＨ３で６時間培養してからｐＨ６に再
調整した場合には、最大細胞外多糖の産生量は、２０．
０４ｇ／Ｌであり、この実施例５の場合の約１．２８倍
に相当する。また、ｐＨ６で一定に維持調整した場合、
アンモニウムイオンを含有しない培地はアンモニウムイ
オンを含む培地に比して１．１３倍に相当する多糖の産
生量増加を示したが、アンモニウムイオンを含む培地か
らの多糖の産生量は、ｐＨ調整を行わない場合に比較し
て約２．４倍増加し、アンモニウムイオンを含有しない
培地では約２．７４倍の増加を示した。従って、ガノデ
ルマルシダム（Ｇａｎｏｄｅｒｍａｌｕｃｉｄｕ
ｍ）の細胞外多糖を製造する場合において、ｐＨ調整を
行うことがアンモニウムイオンを添加することと比較す
るとより効果的であると判断された。

【００３５】［比較例１］：アンモニウムイオンを含有
しない培地の初期ｐＨによる影響液体培地のｐＨを２に調整したことを除き、上記実施例
４と同様の方法により９日間継続的に培養し、１２時間
毎に上記実施例１と同様の方法により菌糸体の最大菌糸
体乾燥重量（ＭＤＷ）と細胞外粗多糖（ＥＰＳ）を測定
した。また、その結果を図６ａ、図６ｂ及び表５に示
す。その結果、菌糸体の最大菌糸体乾燥重量（ＭＤＷ）
は０．８ｇ／Ｌ、細胞外粗多糖（ＥＰＳ）は１．７０ｇ
／Ｌを得た。

【００３６】［比較例２］：アンモニウムイオンを含む
培地の初期ｐＨの影響液体培地内のｐＨを２と７に調整したことを除き、上記
実施例６と同様の方法により９日間継続的に培養し、１
２時間毎に上記実施例１と同様の方法により菌糸体の最
大最大菌糸体乾燥重量（ＭＤＷ）と細胞外粗多糖（ＥＰ
Ｓ）を測定した。また、その結果を図６ａ、図６ｂ及び
表５に示す。その結果、菌糸体の最大菌糸体乾燥重量
（ＭＤＷ）は０．８ｇ／Ｌ、細胞外粗多糖（ＥＰＳ）は
１．７０ｇ／Ｌを得た。

【００３７】

【表５】

【００３８】［比較例３］：アンモニウムイオンを含む
培地でｐＨの調整による影響液体培地内のｐＨを２に調整したことを除き、上記実施
例７と同様の方法により９日間継続的に培養し、１２時
間毎に上記実施例１と同様の方法により菌糸体の最大菌
糸体乾燥重量（ＭＤＷ）と細胞外粗多糖（ＥＰＳ）を測
定した。また、その結果を図６ａ、図６ｂ及び表５に示
す。その結果、菌糸体の最大菌糸体乾燥重量（ＭＤＷ）
は３．０９ｇ／Ｌ、細胞外粗多糖（ＥＰＳ）は２．１３
ｇ／Ｌを得た。

【００３９】［実験例１］：菌糸の形態（１）アンモニウムイオンを含む培地にて、ｐＨ３で６時間に
わたって培養した後、ｐＨ６に再調整して２段階により
培養を行った上記実施例２において、その培養液内に存
在する菌糸の形態を観察するために、１ｍｌの試料を無
作為に採取した後、同量の固定化溶液［１３ｍｌの４０
％ホルムアルデヒド（ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ）＋５
ｍｌの氷酢酸（ｇｌａｃｉａｌａｃｅｔｉｃａｃｉ
ｄ）＋２００ｍｌの５０％（ｖ／ｖ）エタノール］によ
り固定させて２０倍希釈した後、スライドガラスに希釈
した０．５ｍｌの試料を噴射して通気・乾燥し、無水ア
ルコール（ａｂｓｏｌｕｔｅａｌｃｏｈｏｌ）で洗浄
した後、メチレンブルー（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｂｌｕ
ｅ）で染色した。また、イメージ捕獲板（ｉｍａｇｅ
ｃａｐｔｕｒｉｎｇｂｏａｒｄ）を使用してパソコン
（ＰＣ：Ｓａｍｓｕｎｇ，Ｐｅｎｔｉｕｍ（登録商標）
１００）に連結したイメージ分析システム（Ｏｐｔｉ
ｍａｓＣｏ．，Ｕ．Ｓ．Ａ）により菌糸体の形態を観
察、分析し、その結果を図９及び図１１に示した。

【００４０】［実験例２］：菌糸の形態（２）アンモニウムイオンを含む培地にて、ｐＨ３で２日間培
養した後、ｐＨ６に再調整して２段階により培養を行っ
た上記実施例３において、その培養液内に存在する菌糸
の形態を観察、分析したことを除き、上記実験例１と同
様の方法により試料を準備して菌糸体の形態を観察、分
析し、その結果を図１０及び図１１に示した。

【００４１】上記実験例１及び実験例２の結果による
と、培養条件に関わりなく菌糸体は、ペレットの形態と
して生育された。培養開始から６時間が経過した後に、
ｐＨを再調整した場合には、培養の末期においても適正
な大きさと一定範囲の頻度数のペレットを維持した。し
かし、培養開始から２日が経過した後に、ｐＨを再調整
した場合には、培養の中期からペレットの大きさ及び頻
度数が減少した。霊芝茸のペレットは培養初期に大きさ
が増加した後、培養時間が経過するにしたがい徐々に減
少する傾向を示した。特に、細胞外多糖の産生が最大と
なる培養開始６時間経過後に、ｐＨを再調整した場合
（１．７〜２．４ｍｍ）には、培養開始２日経過後に、
ｐＨを再調整した場合（０．９９〜２．０２ｍｍ）と比
較してペレットの平均直径が相対的に大きく、細胞外多
糖の産生においては、適正な大きさと一定範囲の頻度数
のペレットを維持することが有利であると判断された。

【００４２】［実験例３］：培地のｐＨが維持調整さ
れ、アンモニウムイオンを含む培地に存在するペレット
形態の分布１ｇ／Ｌのアンモニウムイオンを含む液体培地にて水酸
化ナトリウム（ＮａＯＨ）を使用して培地のｐＨを一定
範囲に維持調整して培養された上記実施例７において、
液体培地内の菌糸の形態を分析し（図１３）、図１２に
全体の菌糸体に対するペレット形態の分率を示した。そ
の結果、図１２に示されたとおり、各ｐＨにて、培養の
初期には全てペレットの比率は１００％近く存在してい
るが、培養開始から３日が経過した後、減少する傾向を
示し、培養開始６日目にペレットが占める比率は、ｐＨ
６、ｐＨ５、ｐＨ４及びｐＨ３で、それぞれ４８．５
％，２４％，１０．４％及び９．３％まで減少した。ま
た、ｐＨ６＞ｐＨ５＞ｐＨ４＞ｐＨ３の順でペレットの
比率が減少し、このｐＨ範囲ではｐＨが低い場合には、
糸状の形態の比率が高くなり、ｐＨが高い場合にはペレ
ットの比率が高まることが確認された。従って、上記結
果によると、細胞外多糖の産生はｐＨ６で最大であり、
ｐＨ３で最小であった。図８の（ｂ）の結果を併せて考
慮すると、菌糸体濃度はペレットの形態に生育する場合
に高く、細胞外多糖の産生量は、糸状の形態に生育する
場合に多くなるものと判断された。また、多糖の生産性
が高いｐＨ５〜６における培養液中でのペレット形態の
比率は２４−４８．５％であり、ペレットと糸状の形態
数の比が、１：１〜３の場合に細胞外多糖の産生量が多
くなるものと判断された。

【００４３】［実験例４］：流動学的特性（１）アンモニウムイオンを含有しない液体培地（ｐＨ５）で
菌株を培養し、培養液、菌糸体の懸濁液及び培養ろ液に
ついて、２４時間毎に８日間にわたってそれぞれ粘稠度
指数（Ｋ）、流動指数（ｎ）及び降伏応力値（τ_ｙ）
を、次の数式１に示したヘルシャル−バルクレー（Ｈｅ
ｒｓｃｈｅｌ−Ｂｕｌｋｌｅｙ）式を利用して線形最小
自乗により求めた。また、その結果を表６に要約して示
した。

【００４４】［数式１］τ ＝ τ_ｙ＋Ｋ^ｎ上記式において、τ：剪断応力、τ_ｙ：降伏応力、Ｋ：
粘稠度指数（Ｐａ・ｓｅｃｎ）、ｎ：流動指数（−）で
ある。

【００４５】［実験例５］：流動学的特性（２）１ｇ／Ｌのアンモニウムイオンを液体培地中に添加した
ことを除き、上記実験例４と同様の方法により、培養
液、菌糸体の懸濁液及び培養ろ液についてそれぞれ粘稠
度指数（Ｋ）、流動指数（ｎ）及び降伏応力値（τ_ｙ）
を求めた。また、その結果を表６に要約して示した。

【００４６】［実験例６］：流動学的特性（３）７ｇ／Ｌのアンモニウムイオンを液体培地地中に添加し
たことを除き、上記実験例４と同様の方法により、培養
液、菌糸体の懸濁液及び培養ろ液についてそれぞれ粘稠
度指数（Ｋ）、流動指数（ｎ）及び降伏応力値（τ_ｙ）
を求めた。また。その結果を表６に要約して示した。

【００４７】

【表６】

【００４８】上記実験例４乃至実験例６の結果から、培
養液の粘稠度指数であるＫはＮＨ_４ ^＋（−）＞ＮＨ_４ ^＋
（１ｇ／Ｌ）＞ＮＨ_４ ^＋（７ｇ／Ｌ）であり、流動指数
はＮＨ_４ ^＋（７ｇ／Ｌ）＞ＮＨ_４ ^＋（１ｇ／Ｌ）＞ＮＨ
_４ ^＋（−）の順であり、アンモニウムイオンの添加有無
と培養過程で流動学的挙動の変化が認められた。この結
果を形態の観察結果と併せて考察する。糸状形態の生育
が主体であったアンモニウムイオンを含有しない培地で
菌糸体の培養を終了した後におけるＫ値及びｎ値はそれ
ぞれ４．４０ＰａＳ^ｎ及び０．４０（−）であった。一
方、ペレットの形態の生育が主体であった高濃度のアン
モニウムイオンを含む培地では、菌糸体の培養を終了し
た後におけるＫ値及びｎ値はそれぞれ０．８１ＰａＳ^ｎ
及び０．７２（−）であり、糸状の形態に生育する場合
のＫ値が非常に大きく（約５．５倍）、ｎ値が非常に小
さい結果（約０．６倍）を示した。すなわち、同じ菌糸
体の濃度で糸状形態の菌糸の粘稠度指数であるＫ値は、
ペレット形態の菌糸のＫ値より非常に大きく、流動指数
であるｎ値は糸状形態の菌糸がペレット形態の菌糸のｎ
値に比較して低かった。

【００４９】また、図１４及び図１５は、霊芝茸を液体
培養する際に添加されるアンモニウムイオン濃度が変化
する場合に、菌糸体の形態的な変化を定量化して示した
ものである。アンモニウムイオンの添加濃度が低濃度で
ある場合、菌糸形態は主に糸状（ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕ
ｓ）形態であり、その分次元（ｆａｃｔａｌｄｉｍｅ
ｎｓｉｏｎ）は１．１〜１．２５であって、比較的高い
値を示している。一方で、高濃度にて添加した場合に
は、菌糸形態が主にペレットであり、分次元（ｆａｃｔ
ａｌｄｉｍｅｎｓｉｏｎ）は低い値を示す。図１４で
は、多種濃度のアンモニウムイオンが添加されている
が、図１５に示されるのペレットの面積頻度数（＞１ｍ
ｍ^２）においては、低濃度にて添加された場合（＜３ｇ
／Ｌ）より少ないことが確認された。上記結果による
と、アンモニウムイオンが培地中に存在する場合に菌糸
の生育が低下する原因であり、平均ペレットの大きさ
（＞１ｍｍ ^２）の頻度数が減少することが確認された。
培養時間及びアンモニウムイオン濃度とは無関係に、培
養液中に存在する大部分の菌糸体は、０．５−１．５ｍ
ｍ^２の大きさを有する。ペレットの大きさが増加した場
合には、基質制限、剪断応力及び自家凝集の増加等各種
の制限を受けることとなる。

【００５０】図１６及び図１７は、液体培養中における
アンモニウムイオン濃度による培養液及び培養ろ液、工
程の設計、調整及び実施において直接的に、また多大な
影響を及ぼす流動学的挙動を示すものである。図１６は
アンモニウムイオンが添加された場合のグラフであり、
図１７は添加されていない場合を示し、それぞれ、
（ａ）は菌糸体懸濁培養液、（ｂ）は培養ろ液について
示したものである。菌糸体懸濁培養液では特に、剪断速
度が増加するにつれて、剪断応力が非線形（ｎｏｎ−ｌ
ｉｎｅｒ）に増加し、非ニュートン流体（ｎｏｎ−Ｎｅ
ｗｔｏｎｉａｎｆｌｕｉｄ）として挙動することが確
認された。さらに、アンモニウムイオンを含有しない場
合の剪断応力は、アンモニウムイオンを含む場合の剪断
応力に比して非常に高い。これは高濃度の生育及び糸状
（ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ）形態に起因するものであ
る。また、大部分の場合には、培養の継続につれて、剪
断応力も徐々に増加するが、菌糸の生育及び菌糸の形態
変化に由来するものである。

【００５１】一方、アンモニウムイオンの添加有無に関
係なく、剪断速度の増加に従う剪断応力は菌糸体懸濁培
養液に比べて培養ろ液が低く、培養液の流動曲線は産生
された多糖の濃度より菌糸体の濃度により大きな影響を
受けることが確認された。これをアンモニウムイオン添
加の有無による菌糸の形態変化に比較すると、霊芝茸の
培養期間中の流動挙動の変化は菌糸体の濃度をはじめ、
菌糸体の形態が重要であることを示す結果といえる。従
って、図１６及び図１７の挙動はヘルシャル−バルクレ
−（Ｈｅｒｓｃｈｅｌ−Ｂｕｌｋｌｅｙ）式によく適合
していることが確認された（Ｒ^２≧０．９５）。

【００５２】図１８は、アンモニウムイオン濃度が
（ａ）：７ｇ／Ｌ、（ｂ）：１ｇ／Ｌ、（ｃ）：０ｇ／
Ｌ（無添加）の場合における、菌糸体懸濁培養液、培養
ろ液のみかけ粘度と、細胞外多糖産生濃度を示したグラ
フである。培地中アンモニウムイオン濃度が高い場合
（７ｇ／１）、菌糸体懸濁培養液及び培養ろ液の見かけ
粘度は培養時間が経過しても変化が認められなかった
が、これは、菌糸の生育及び細胞外多糖の産生が最小限
に抑えられているからである。アンモニウムイオンが添
加されない場合には、培養時間の経過に伴って培養ろ液
の見かけ粘度は継続的に増加し、培養開始から８日が経
過した後、細胞外多糖の生産は最大となり、菌糸の生育
も向上しており、培養液の見かけ粘度が増加している。
培地中のアンモニウムイオンの濃度が１ｇ／Ｌである場
合には、培養時間の経過により見かけ粘度一旦増加して
から減少している。これは、菌糸体が溶菌（ｌｙｓｉ
ｓ）されたものと判断される。アンモニウムイオンの濃
度が１ｇ／Ｌである場合には、培養ろ液の見かけ粘度の
増加につれて、細胞外多糖の産生が徐々に増加したが、
菌糸の生育は減少している。これと反対に、アンモニウ
ムイオンが高濃度である場合には、細胞外多糖の産生は
相対的に低いことが確認された。

【００５３】このような結果から、液体培養に際して、
培地中に適切な濃度のアンモニウムイオンが添加される
ことにより、菌糸体の安定性や多糖体生産性の向上のた
めの醗酵工程の制御が可能であることが確かめられた。

【００５４】一方、ｐＨが維持調整される場合には、培
養の末期に、菌糸の生育及び細胞外多糖類の産生が低下
することが確認されている。このような結果は、ｐＨ３
に調整された場合には観察されていない。ｐＨを６に調
整した場合には、菌糸の生育及び細胞外多糖の産生にお
いて、長期間にわたって培養する場合、または、大型の
醗酵槽による工程を行う場合などにおいて、菌糸の生育
に対して却って逆効果（ｎｅｇａｔｉｖｅｅｆｆｅｃ
ｔ）を誘発するものと判断される。これは、ｐＨを一定
に維持させるために添加された水酸化ナトリウム（Ｎａ
ＯＨ）の量が多くなり、菌糸体が溶菌（ｌｙｓｉｓ）さ
れるものと考えられ、溶菌（ｌｙｓｉｓ）による菌糸体
の減少は、さらに細胞外多糖の産生量低下の原因と判断
される。

【００５５】図１９及び図２０は、培養及び大量生産す
るような場合に臨界要因として作用する菌糸体の大きさ
と形態の変化を、ｐＨ調整による培養の経時変化を通じ
て示したグラフである。

【００５６】図１９に示されるとおり、ｐＨ３に維持調
整される（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ）場合には、他のｐＨ
の場合に比べて相対的にペレットの大きさが小さく、分
次元（ｆｒａｃｔａｌｄｉｍｅｎｓｉｏｎ）は高いこ
とが確認された。このような菌糸の形態は、菌糸の生育
を維持するために適切な形態であると考えられる。ま
た、上記の結果は、ｐＨ３に調整して培養する場合に菌
体の最大密度を示したことを意味する。これと対照的
に、２段階によりｐＨを調整する場合には、菌体の生育
には効果がなかったが、細胞外多糖類の産生には優れた
効果が認められた。小さい大きさのペレット形態は、非
調整（ｕｎｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ）及び維持調整される
（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ）ｐＨの工程において認めら
れ、大きなペレット形態は２段階によりｐＨを調整した
場合によく出現している。アンモニウムイオンは菌体の
生育をばじめ、細胞外多糖類の産生にも影響を及ぼして
いる。

【００５７】また、図２１における流動学的変数は、３
種の異なるｐＨ調整条件の工程下における培養期間中の
粘稠度指数Ｋ、流動変数ｎ、降伏応力を一般的なモデル
によりプロット（ｐｌｏｔｔｉｎｇ）して示した。粘稠
度指数Ｋは、ｐＨ３とｐＨ６の２段階調整による工程
（ｃ）の場合、４日培養時まで上昇した後に減少してい
る。また、流動指数はｐＨ６に維持調整する場合
（ｂ）、他のｐＨ条件に比して最も増大している。初期
ｐＨ６にて非調整（ｕｎｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ）ｐＨの
条件下で培養する場合（ａ）、粘稠度指数Ｋは培養時間
の経過に伴って徐々に増加して高い値となることが確か
められた。一定維持調整（ｃｏｎｓｔａｎｔｃｏｎｔ
ｒｏｌ）或いは２段階によるｐＨ調整の条件下で培養
し、菌糸の形態をペレット形態に生育される場合は、培
養液の粘度は低下することが確認された。培養液中の菌
糸の形態がペレット形態である場合には、糸状（ｆｉｌ
ａｍｅｎｔ）形態より低い見かけ粘度を示し、培養液の
低い粘度は細胞外多糖の産生量の増加と酸素伝達速度の
増加を伴う。また、ＫｏｎｉｇとＳｃｈｕｇｅｒによる
と、塔ループ醗酵槽（ｔｏｗｅｒ−ｌｏｏｐｆｅｒｍ
ｅｎｔｏｒ）によるペニシリン醗酵の際に、物質移動容
量係数（ｖｏｌｕｍｅｔｒｉｃｍａｓｓｔｒａｎｓ
ｆｅｒｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ；Ｋｌａ）は、糸状
（ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ）培養液よりペレット懸濁
（ｐｅｌｌｅｔｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ）において４〜
５倍ほど高いと報告している。本研究においても、非調
整（ｕｎｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ）ｐＨの工程にてＤＯ水
準は、飽和度が１００％から５％まで急激に減少し、培
養開始から３日までこの水準を維持した。これは、非調
整（ｕｎｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ）ｐＨの条件下で培養す
る場合に、酸素移動の制限が発生したことを意味し、３
日後には６０％を維持した（データーは省略）。一方、
降伏応力は、全ての工程における全ての培養期間にて殆
ど一定である。このうち、比較的高値の降伏応力はｐＨ
６に維持調整され培養する場合に認められ、比較的低値
の降伏応力は、２段階によるｐＨ調整の条件下で培養す
る場合に認められている。２段階によるｐＨ調整の条件
下で培養する場合における低値の降伏応力は、培養液中
の菌糸の形態がｐＨ６に維持調整され培養する場合と比
較して柔軟な形態に変化されることで粘度が低下したも
のと判断される。

【００５８】

【発明の効果】上述のように、本発明は、菌糸体の培養
工程と細胞外多糖体の産生工程において、それぞれの工
程に用いる液体培地のｐＨを異なる２段階によってｐＨ
調整を行うことによって、菌糸の形態をはじめ、液体培
地の流動学的特性を最適化してより効率的に、またより
安定的に細胞外多糖体を産生させることができる効果が
ある。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１における菌糸体乾燥重量（ＭＤＷ）を
示したグラフである。

【図２】実施例１における細胞外多糖体（ＥＰＳ）の産
生量を示したグラフである。

【図３】実施例２における乾燥菌体重量（ＭＤＷ）及び
細胞外多糖体（ＥＰＳ）の産生量を示したグラフであ
る。

【図４】実施例３における菌糸体乾燥重量（ＭＤＷ）及
び細胞外多糖体（ＥＰＳ）の産生量を示したグラフであ
る。

【図５】（ａ）は、実施例４における菌糸体乾燥重量
（ＭＤＷ）を示すグラフである。（ｂ）は、実施例４に
おける細胞外多糖体（ＥＰＳ）の産生量を示すグラフで
ある。

【図６】（ａ）は、実施例５における菌糸体乾燥重量
（ＭＤＷ）を示すグラフである。（ｂ）は、実施例５に
おける細胞外多糖体（ＥＰＳ）の産生量を示すグラフで
ある。

【図７】（ａ）は、実施例６における菌糸体乾燥重量
（ＭＤＷ）を示すグラフである。（ｂ）は、実施例６に
おける細胞外多糖体（ＥＰＳ）の産生量を示すグラフで
ある。

【図８】（ａ）は、実施例７における菌糸体乾燥重量
（ＭＤＷ）を示すグラフである。（ｂ）は、実施例７に
おける細胞外多糖体（ＥＰＳ）の産生量を示すグラフで
ある。

【図９】実験例１における菌糸体の外部形態の経時変化
を示した観察図である。

【図１０】実験例２における菌糸体の外部形態の経時変
化を示した観察図である。

【図１１】実験例１及び２におけるペレットの大きさを
経時的に示すグラフである。

【図１２】実験例３における全菌糸体数の内、ペレット
形態の数の比率について経時変化を示すグラフである。

【図１３】実験例３において、菌糸体の形態的変化を示
すグラフである。

【図１４】実験例４乃至６における菌糸体の形態につい
て分次元（ｆｒａｃｔａｌｄｉｍｅｎｓｉｏｎ）の変
化として示したグラフである。

【図１５】実験例４乃至６における菌糸体の形態につい
てペレットの面積に対する頻度数との関係で示したグラ
フである。

【図１６】実験例４乃至６における菌糸体懸濁培養液及
び培養ろ液の流動学的挙動を示すグラフである。

【図１７】実験例４乃至６における菌糸体懸濁培養液及
び培養ろ液の流動学的挙動を示すグラフである。

【図１８】実験例４乃至６における菌糸体懸濁培養液及
び培養ろ液の流動学的挙動を示すグラフである。

【図１９】実験例４乃至６における菌糸体の形態につい
て分次元（ｆｒａｃｔａｌｄｉｍｅｎｓｉｏｎ）の経
時変化として示したグラフである。

【図２０】実験例４乃至６における菌糸体の形態につい
てペレットの大きさとして経時的に示すグラフである。

【図２１】（ａ）は、実験例４乃至６において初期ｐＨ
６にて以後ｐＨ調整なしで培養する場合の流動学的変数
の経時変化を示したグラフである。（ｂ）は、実験例４
乃至６においてｐＨ６に維持調整して培養する場合の流
動学的変数の経時変化を示したグラフである。（ｃ）
は、実験例４乃至６において初期ｐＨ３、２段階目はｐ
Ｈ６に再調整して培養する場合の流動学的変数の経時変
化を示したグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考） //(Ｃ１２Ｐ 19/04 (Ｃ１２Ｐ 19/04 ＢＣ１２Ｒ 1:645）Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｎ 1/14 (Ｃ１２Ｎ 1/14 ＦＣ１２Ｒ 1:645）Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｎ 1/14 (Ｃ１２Ｎ 1/14 ＧＣ１２Ｒ 1:645）Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｎ 1/14 (Ｃ１２Ｎ 1/14 ＨＣ１２Ｒ 1:645）Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者李神榮大韓民国江原道春川市温議洞保倍アパート 102洞 707号 (72)発明者李奎旻大韓民国ソウル九老區梧柳１洞３ −34番地Ｆターム(参考） 2B011 AA07 BA19 GA04 GA12 4B064 AF11 CA07 CC07 CD01 DA01 DA10 4B065 AA71X AC14 BB02 BC02 CA22 CA41 CA44

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】アンモニウムイオンを添加したｐＨ２〜
６の液体培地にて菌糸体を培養する菌糸体培養工程と、
この菌糸体培養工程により得られた菌糸体をｐＨ３〜７
の液体培地にて培養して細胞外多糖体を産生させる多糖
体生産工程を備えることを特徴とする茸細胞外多糖体の
製造方法。
【請求項２】前記茸は霊芝茸であり、多孔菌科不老草
属（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ）に属する担子菌であることを
特徴とする請求項１に記載の茸細胞外多糖体の製造方
法。
【請求項３】前記菌糸体培養工程に用いる液体培地の
ｐＨが３〜４であることを特徴とする請求項１又は２に
記載の茸細胞外多糖体の製造方法。
【請求項４】前記菌糸体培養工程に用いる液体培地
は、０．０１〜５重量％のアンモニウムイオンを含むこ
とを特徴とする請求項１乃至３のいずれかに記載の茸細
胞外多糖体の製造方法。
【請求項５】前記多糖体生産工程に用いる液体培地の
ｐＨが５〜６であることを特徴とする請求項１乃至４の
いずれかに記載の茸細胞外多糖体の製造方法。
【請求項６】前記菌糸体培養工程に用いる液体培地及
び多糖体生産工程に用いる液体培地は、各工程における
培養過程で一定範囲のｐＨに維持することを特徴とする
請求項１乃至５のいずれかに記載の茸細胞外多糖体の製
造方法。