JP2001525852A - アルキル化ヘキサペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明はデスロイシルＡ８２８４６ＢのＮ¹−アルキル化誘導体に関する。これらの誘導体は、抗菌剤として、ならびにさらなる抗菌化合物を製造するための出発物質として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】 アルキル化ヘキサペプチド 本発明はグリコペプチドに関し、特に、Ａ８２８４６Ｂの「ヘキサペプチド」 と称されることもあるデスロイシルＡ８２８４６Ｂの誘導体およびそのＮ^DISACc バリエーションに関する。これらの誘導体は、ヘキサペプチドのＮ¹アミンをア ルキル化されている。これらの誘導体は抗菌剤として有用である。 発明の詳細な説明 本発明は式： ［式中、 Ｒ¹はＣ₁−Ｃ₁₁アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₁−Ｒ_1aアルキル、またはＲ^1a−（リンカ ー_{(0 または1)}−Ｒ^1a）_{0 または1}（ここに、Ｒ^1aはそれぞれ独立してフェニル、ま たはそれぞれ独立してハロ、ヒドロキシ、Ｃ₁−Ｃ₈低級アルキル、Ｃ₁−Ｃ₈低級 アルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₄低級アルキルチオまたはトリフルオロメチルである１つま たは２つの置換分によって置換されているフェニルであり、「リンカー」は−Ｏ −、−ＣＨ₂−または−Ｏ−（ＣＨ₂）_n−（ここに、ｎは１−３である）で ある）を表し； Ｒ²は水素または式：［式中、Ｒ^2a素または−ＣＨ₂−Ｒ¹（式中、Ｒ¹は上記定義のとおりであり、Ｎ¹ 位のＲ¹と同一または異なっていてよい）である］ で示されるエピバンコサミニル基（epivancosaminyl radical）を表し、；なら びに、 Ｒ³は式： ［式中、Ｒ^3aは水素であるか、あるいはＲ²がエピバンコサミニルであり、その 上のＲ^2aが−ＣＨ₂−Ｒ¹である場合、Ｒ^3aはＮ¹位のものと同一の−ＣＨ₂−Ｒ¹ でもあり得る］ で示されるエピバンコサミニル基を表す］ で示されるアルキル化Ａ８２８４６Ｂヘキサペプチドおよび製薬的に許容される その塩に関する。 一般に、本発明のアルキル化Ａ８２８４６Ｂヘキサペプチドは、式：［式中、Ｒ²は上記定義のとおりである］ で示される対応するＡ８２８４６Ｂヘキサペプチドを還元的アルキル化すること によって製造する。還元的アルキル化を行う際、Ａ８２８４６Ｂヘキサペプチド をまず、式：Ｒ¹−ＣＨＯ（式中、Ｒ¹は上記定義のとおりである）で示されるア ルデヒドと反応させる。これによりシッフの塩基が形成され、次いでこれを還元 して、所望のアルキル化Ａ８２８４６Ｂヘキサペプチドを得る。極性溶媒、例え ばＤＭＦ、メタノールまたはこれらの混合物中、２５℃から１００℃の温度、好 ましくは６０℃から７０℃の温度で両反応工程を行う。好ましい還元剤はホウ水 素化ナトリウム、とりわけシアノホウ水素化ナトリウムである。 さらなる態様では、ヘキサペプチド、アルデヒドおよび還元剤、特にシアノホ ウ水素化ナトリウムを一度にすべて混合していっしよにする。この態様は、非ベ ンジルアルデヒドとの反応に関して好ましいが、ベンジルアルデヒドとの反応に 関しても同様に用いることができる。 Ａ８２８４６Ｂヘキサペプチドの還元的アルキル化は、１つ以上の部位をアル キル化し得る。Ｎ¹位が反応するのが好ましいが、この分子のＮ^DISACCおよび／ またはＮ^MONOSACC部位でもアルキル化が起こり得る。所望のＮ^DISACC基をすでに 有するＡ８２８４６Ｂヘキサペプチドから出発し、次いでＮ¹位をアルキ ル化することによって、Ｎ¹位およびＮ^DISACC位上に異なるアルキル基を都合よ く生じさせる。 出発Ａ８２８４６Ｂヘキサペプチド自体は親グリコペプチド： ［式中、Ｒ^2aは上記定義のとおりである］ から合成する。この合成は、ペプチドまたはタンパク質のＮ末端残基を開裂させ る二工程の方法である「エドマン分解」よる。本発明では、上記親グリコペプチ ドをまず、式：ＳＣＮ−Ｒ⁴で示されるイソチオシアネートと反応させ、式：［式中、Ｒ⁴はＣ₁−Ｃ₁₀アルキル、フェニル、ナフチル、またはそれぞれ独立し てハロ、Ｃ₁−Ｃ₄低級アルキル、Ｃ₁−Ｃ₄低級アルコキシ、ベンジルオキシ、ニ トロまたは （式中、Ｒ^4aはそれぞれ独立してＣ₁−Ｃ₄低級アルキルである） である１つまたは２つの置換分で置換されているフェニルを表す］ で示される中間体Ｎ^LEU−（チオカルバモイル）−Ａ８２８４６Ｂ化合物を得る 。 この反応は、ピリジンを含む水中、２５℃−３０℃の温度で、少過剰のイソチ オシアネート試薬を用いて都合よく行われる。Ｎ^LEU−（チオカルバモイル）Ａ ８２８４６Ｂ中間体を慣用の方法により分離するか、反応溶媒を除去した後、エ ドマン分解の第二工程に用いることができる。 第二工程では、非極性溶媒、例えばジクロロメタン中、Ｎ^LEU−（チオカルバ モイル）Ａ８２８４６Ｂを有機酸、好ましくはトリフルオロ酢酸と反応させる。 この反応は０℃から３５℃の温度で進行するが、０℃から２５℃の温度で行うの が好ましい。一般に反応は数時間で完了する。所望であれば、得られたヘキサペ プチド産物を常法により分離し、精製する。 エドマン分解の第二工程は、結果としてジサッカライドエピバンコサミン（di saccharide epivancosamine）を喪失させる場合がある。より長い反応時間を用 いて、Ｎ^DISACC−デス一エピバンコサミニル化合物(Ｎ^DISACC−ｄｅｓ−epivanc osaminyl compound、Ｒ²＝水素）を得ることができる。 本発明化合物は、常法により調製可能な塩を容易に形成する。 以下の実施例は本発明化合物の製造を例示する。Ｎ^LEU−（フェニルチオカルバモイル）−Ｎ^DISACC−（ｐ−（ｐ−クロロフェニ ル）ベンジル）Ａ８２８４６Ｂの製造 Ｎ^DISACC−（ｐ−（ｐ−クロロフェニル）ベンジル）Ａ８２８４６Ｂ三塩酸塩 （１００．０ｍｇ、０．０５２６mmol）をＨ₂Ｏ−ピリジン（１：１ｖ／ｖ）１ ０ｍＬに溶解させ、フェニルイソチオシアネート（０．０１０ｍＬ、０.０８３m mol）で処理した。得られた混合物を室温で１時間攪拌した。この時点でＨＰＬ Ｃ分析は出発物質が完全に消費されたことを示した。この反応混合物を減圧下で 濃縮し、粗製の生成物を調製用ＨＰＬＣによって精製し、標題化合物７６．６ｍ ｇ（７６％収率）を得た。ＦＡＢ−ＭＳ：Ｃ₉₃Ｈ₁₀₂Ｃｌ₃Ｎ₁₁Ｏ₂₆Ｓとしての計 算値１９２５．５、実測値１９２８．５（Ｍ＋３）。単離されたチオ尿素からのＮ^DISACC−（ｐ−（ｐ−クロロフェニル）ベンジル） −デスロイシル−Ａ８２８４６Ｂの製造 精製されたＮ^LEU−（フェニルチオカルバモイル）−Ｎ^DISACC−（ｐ−（ｐ− クロロフェニル）ベンジル）Ａ８２８４６Ｂ（６３．３ｍｇ、０．０３２７mmol )をＣＨ₂Ｃｌ₂１０ｍＬに懸濁し、０℃にまで冷却し、次いでトリフルオロ酢酸 （０．１０ｍＬ）で処理した。１時間後、反応混合物を室温にまであたため、さ らに２時間攪拌した。減圧下で溶媒を除去し、粗製の生成物を調製用ＨＰＬＣで 精製し、標題化合物２５．３ｍｇ（４６％収率）を白色粉末として得た。 ＦＡＢ−ＭＳ：Ｃ₇₉Ｈ₈₄Ｃｌ₃Ｎ₉Ｏ₂₅としての計算値１６６３．５、実測値１６ ６６．４（Ｍ＋３）。チオ尿素中間体の単離を行わないＮ^DISACC−（ｐ−フェニルベンジル）デスロ イシル−Ａ８２８４６Ｂの製造 Ｎ^DISACC−（ｐ−フェニルベンジル）Ａ８２８４６Ｂ（４１．0ｍｇ、０．０ ２３３mmol）をＨ₂Ｏ−ピリジン(１：１ｖ／ｖ）４ｍＬに溶解させ、フェニルイ ソチオシアネート（０．００４０ｍＬ、０．０３３mmol）で処理した。得られた 混合物を室温で３時間攪拌した。この時点でＨＰＬＣ分析は出発物質が完全に消 費されたことを示した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、粗製のチオ尿素中間 体を白色固形物として得た。次いで、このチオ尿素誘導体をＣＨ₂Ｃｌ₂１０ｍＬ に懸濁し、０℃にまで冷却し、次いで、トリフルオロ酢酸（０．２５ｍＬ）で処 理した。３０分後、この反応混合物を室温にまであたため、さらに１時間攪拌し た。溶媒を減圧下で除去し、粗製の生成物を調製用ＨＰＬＣによって精製し、標 題化合物１４．０ｍｇ（３７％収率）を白色粉末として得た。ＦＡＢ−ＭＳ：Ｃ₇₉ Ｈ₈₅Ｃｌ₂Ｎ₉Ｏ₂₅としての計算値１６２９．５、実測値１６３２．５（Ｍ＋３ ）。 実施例１９の化合物の製造 精製されたデスロイシル−Ａ８２８４６Ｂのサンプル（１４１ｍｇ、０．０９ ６２mmol）、８−フェニルオクタナール（２８ｍｇ、０．１３７mmol）およびシ アノホウ水素化ナトリウム（３５ｍｇ、０．５５６mmol）をＤＭＦ−ＭｅＯＨ（ １：１ｖ／ｖ）２０ｍＬに溶解させた。得られた混合物を６５℃にまで加熱し、 １時間攪拌した。この時点でＨＰＬＣ分析は出発物質が完全に消費されたことを 示した。この反応混合物を室温にまで冷却し、減圧下で濃縮し、粗製の生成物を 調製用ＨＰＬＣで精製し、実施例１９の化合物２０ｍｇ（１３％収率）を得た。 実施例３の化合物の製造 精製されたデスロイシル−Ａ８２８４６Ｂのサンプル（１４０ｍｇ、０．０９ ５６mmol）および４−フェニルベンズアルデヒド（３０ｍｇ、０．１６５mmol） をＤＭＦ−ＭｅＯＨ（１：１ｖ／ｖ）２０ｍＬに溶解させた。得られた混合物を ６５℃にまで加熱し、１．５時間攪拌し、シアノホウ水素化ナトリウム（２７ｍ ｇ、０．４２９mmol）を加え、この反応物をさらに１．５時間攪拌した。この時 点でＨＰＬＣ分析は出発物質が消費されたことを示した。この反応混合物を室 温にまで冷却し、減圧下で濃縮し、粗製の生成物を調製用ＨＰＬＣによって精製 し、実施例３の化合物３８ｍｇ（２４％収率）を得た。 これらの実施例中で報告したＨＰＬＣ手順は以下のものである： 分析用：ｗａｔｅｒｓ Ｃ₁₈ μＢｏｎｄａｐａｋまたはＮｏｖａｐａｋ Ｃ₁₈ カラム（３．９×３００ｍｍ）を用い、２８０ｎｍでＵＶ検出を行う分析用ＨＰ ＬＣによって反応物をモニターした。３０分間にわたる５％ＣＨ₃ＣＮ−９５％ 緩衝液から８０％ＣＨ₃ＣＮ−２０％緩衝液の直線状濃度勾配により溶出を行っ た。用いた緩衝液は、Ｈ₃ＰＯ₄でｐＨ３に調節した０．５％トリエチルアミン水 溶液であった。 調製用：Ｗａｔｅｒｓ Ｃ₁₈ Ｎｏｖａ−Ｐａｋカラム（４０×３００ｍｍ）を 用い、２８０ｎｍでＵＶ検出を行う調製用ＨＰＬＣによって粗製の反応混合物を 精製した。３０分間にわたる５％ ＣＨ₃ＣＮ−９５％緩衝液から８０％ ＣＨ₃Ｃ Ｎ−２０％緩衝液の直線状濃度勾配で溶出を行った。用いた緩衝液は、Ｈ₃ＰＯ₄ でｐＨ３に調節した０．５％トリエチルアミン水溶液であった。その後、Ｗａｔ ｅｒｓ Ｃ₁₈ Ｓｅｐ−Ｐａｋ（３５ｃｃ）を用いて所望のフラクションを脱塩 し、次いで凍結乾燥した。 化合物を以下のように脱塩した。Ｗａｔｅｒｓ Ｓｅｐ−Ｐａｋカートリッジ をメタノール（２−３カラム容量）で前もって湿らせた後、水（２−３カラム容 量）で調節した。最小容量の水に溶解させたサンプルをＳｅｐ−Ｐａｋカラムに 載せ、次いでこれを水（２−３カラム容量）で洗浄し、望ましくない塩を除去し た。次いでこの生成物を適当な溶媒系、代表的には１：１ ＣＨ₃ＣＮ／Ｈ₂Ｏ、 ＣＨ₃ＣＮおよび／またはメタノールを用いて溶出させた。減圧下で有機溶媒成 分を除去し、得られた水溶液を凍結乾燥し、最終産物を得た。 本発明の代表的化合物を以下の表に列挙する： 本発明の化合物は、細菌感染の処置に有用である。したがって、別の態様にお いて、本発明は、宿主動物、典型的には、温血動物における細菌感染を抑制する 方法に関し、この方法は、その宿主動物に本発明の化合物の有効な抗菌量を投与 することを含んでなる。この態様では、その化合物を使用して、様々な細菌、と りわけグラム陽性菌による感染を抑制して処置することができる。好ましい態様 では、その化合物を使用して、実在する抗菌物質に耐性のある細菌による感染を 抑制して処置する。例えば、ある細菌は、メチシリンに耐性であるが、他の細菌 は、バンコマイシンおよび／またはテイコプラニンに耐性である。本発明の化合 物は、そのような耐性菌種による感染を抑制して処置する技術を提供する。 本発明のこの態様を行う際には、経口経路ならびに静脈内および筋肉内のよう な非経口経路を含め、任意の慣用技術により、本発明の化合物を投与することが できる。使用すべき化合物の量は重要ではなく、使用する個々の化合物、投与経 路、感染の重篤度、服用間隔、および当業者に知られている他の要因により変わ るであろう。一般に、約０.５から約１００mg／kgまでの用量が有効であろう； そして多くの状況では、約０.５から約５０mg／kgまでのより少ない用量が有効 であろう。本発明の化合物を単回用量で投与することができるが、抗菌療法の既 知の方法では、典型的には、約数日または約数週間といったような一定期間にわ たって、本発明の化合物を繰り返し投与し、細菌感染の抑制を確実なものとする 。 また既知の抗菌療法にしたがい、典型的には、必要な用量の便利なデリバリー のために本発明の化合物を製剤化する。従って、別の態様において、本発明は、 製薬的に許容され得る担体と組み合わせて、本発明の化合物を含んでなる医薬製 剤に関する。そのような担体は、経口経路および非経口経路の両方のデリバリー に関してよく知られている。一般に、ある製剤は、本発明の化合物を約０.１か ら約９０重量％まで、しばしば、約１.０〜約３％の濃度で含んでなるであろう 。 本発明の化合物の抗菌効力を表にＩＩに例示する。標準的なブロスミクロ希釈 アッセイ（broth micro-dilution assay）を使用して、最小阻止濃度(ＭＩＣｓ) を測定した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ， ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，Ｔ Ｄ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ， ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＵ， ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，Ｃ Ｕ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ， ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，Ｍ Ｋ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ， ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．式： ［式中、Ｒ¹はＣ₁−Ｃ₁₁アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₁−Ｒ^1aアルキルまたはＲ^1a−（リ ンカー_{(0 または1)}−Ｒ^1a）_{0 または1}（ここに、Ｒ^1aはそれぞれ独立してフェニル 、またはそれぞれ独立してハロ、ヒドロキシ、Ｃ₁−Ｃ₈低級アルキル、Ｃ₁−Ｃ₈ 低級アルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₄低級アルキルチオまたはトリフルオロメチルである１ つまたは２つの置換分によって置換されているフェニルであり、「リンカー」は −Ｏ−、−ＣＨ₂−または−Ｏ−（ＣＨ₂）_n−（ここに、ｎは１−３である）で ある）を表し； Ｒ²は水素または式： ［式中、Ｒ^2aは水素または−ＣＨ₂−Ｒ¹（式中、Ｒ¹は上記定義のとおりであり 、Ｎ¹位のＲ¹と同一または異なっていてよい）である］ で示されるエピバンコサミニル基を表し、；ならびに、 Ｒ³は式： ［式中、Ｒ^3aは水素であるか、あるいはＲ²がエピバンコサミニルであり、その 上のＲ^2aが−ＣＨ₂−Ｒ¹である場合、Ｒ^3aはＮ¹位のものと同一の−ＣＨ₂−Ｒ¹ でもあり得る］ で示されるエピバンコサミニル基を表す］ で示される化合物または製薬的に許容されるその塩。 ２．Ｒ¹が上記定義のＲ^1a−（リンカー_{(0 または1)}−Ｒ^1a）_{0 または1}である請 求項１に記載の化合物。 ３．Ｒ²が、Ｒ^2aが−ＣＨ₂−Ｒ¹であるエピバンコサミニル基である請求項１ に記載の化合物。 ４．Ｒ^2aがｐ−フェニルベンジルである請求項３に記載の化合物。 ５．Ｒ^2aがｐ−（ｐ−クロロフェニル）ベンジルである請求項３に記載の化合 物。 ６．請求項１に記載の化合物を、製薬的に許容される希釈剤または担体と組み 合わせて含む医薬製剤。 ７．宿主内の細菌感染を処置する方法であって、請求項６に記載の製剤の有効 量を該宿主に投与する工程を含む方法。 ８．細菌感染がバンコマイシン耐性エンテロコッカスに起因する請求項７に記 載の方法。 ９．式：Ｒ¹ＣＨＯ（式中、Ｒ¹は請求項１で定義したとおりである）で示され るアルデヒドを用いて、式：［式中、Ｒ²は請求項１で定義したとおりである］ で示される親グリコペプチドを還元的アルキル化し、所望であれば、その後製薬 的に許容される塩を形成させることを含む請求項１に記載の化合物の製造方法。