JP2001516579A - Hlaクラスii分子により提示されるmage−3ペプチド - Google Patents
Hlaクラスii分子により提示されるmage−3ペプチドInfo
- Publication number
- JP2001516579A JP2001516579A JP2000511865A JP2000511865A JP2001516579A JP 2001516579 A JP2001516579 A JP 2001516579A JP 2000511865 A JP2000511865 A JP 2000511865A JP 2000511865 A JP2000511865 A JP 2000511865A JP 2001516579 A JP2001516579 A JP 2001516579A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- peptide
- seq
- mage
- hla class
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 622
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 152
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 122
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 121
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 72
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 60
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 55
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 55
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 46
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 180
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 159
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 48
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 47
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 35
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 35
- 238000012737 microarray-based gene expression Methods 0.000 claims description 34
- 238000012243 multiplex automated genomic engineering Methods 0.000 claims description 34
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 32
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 29
- 108010028930 invariant chain Proteins 0.000 claims description 26
- 108010039343 HLA-DRB1 Chains Proteins 0.000 claims description 25
- 102100040485 HLA class II histocompatibility antigen, DRB1 beta chain Human genes 0.000 claims description 24
- 101001100327 Homo sapiens RNA-binding protein 45 Proteins 0.000 claims description 24
- 102100038823 RNA-binding protein 45 Human genes 0.000 claims description 24
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 23
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 22
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 claims description 20
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 19
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 17
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 16
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 13
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 10
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 8
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 claims description 8
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 claims description 7
- -1 (cyanomethylene) amino Chemical group 0.000 claims description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 5
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 5
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 3
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 claims description 3
- IMROMDMJAWUWLK-UHFFFAOYSA-N Ethenol Chemical group OC=C IMROMDMJAWUWLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 claims description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 claims description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000006229 amino acid addition Effects 0.000 claims description 2
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 claims description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 36
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 108050008953 Melanoma-associated antigen Proteins 0.000 description 49
- 102000000440 Melanoma-associated antigen Human genes 0.000 description 48
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 46
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 27
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 27
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 27
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 25
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 25
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 24
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 20
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 18
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 17
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 17
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 17
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 17
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 15
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 description 15
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 14
- 108010064171 Lysosome-Associated Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 14
- 102000014944 Lysosome-Associated Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 14
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 13
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 13
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 13
- 101000583086 Bunodosoma granuliferum Delta-actitoxin-Bgr2b Proteins 0.000 description 12
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 12
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 12
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 12
- 230000004044 response Effects 0.000 description 12
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 11
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 11
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 10
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 10
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 10
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 9
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 9
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 9
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- PQGCYSRGXCORLN-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[2-[[2-[[1-[2-[[2-[[2-[(2-amino-3-phenylpropanoyl)amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoyl]amino]acetyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]propanoylamino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-methylbutan Chemical compound C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(C(=O)NCC(=O)N1C(CCC1)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C(C)C)C(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 PQGCYSRGXCORLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 8
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 8
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 8
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 8
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 8
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 8
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 7
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 7
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 7
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 7
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 7
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- 241000233805 Phoenix Species 0.000 description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 6
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 6
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 6
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 6
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 6
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 5
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 5
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 5
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 5
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 5
- 102100029450 M1-specific T cell receptor alpha chain Human genes 0.000 description 5
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 5
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 5
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 5
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 4
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 4
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 4
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 4
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 4
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 4
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 4
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 4
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 4
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 3
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 3
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 3
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 3
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 3
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 3
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010064548 Lymphocyte Function-Associated Antigen-1 Proteins 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 3
- 108010009254 Lysosomal-Associated Membrane Protein 1 Proteins 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 3
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 3
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 108010048367 enhanced green fluorescent protein Proteins 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N phenylalanine group Chemical group N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 3
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N (S)-chloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(N[C@@H](C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 2
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 101150048357 Lamp1 gene Proteins 0.000 description 2
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 208000035896 Twin-reversed arterial perfusion sequence Diseases 0.000 description 2
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 229960003677 chloroquine Drugs 0.000 description 2
- WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N chloroquine Natural products ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 2
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000000899 immune system response Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OBZQBTMCGHWOBR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoethylthiourea Chemical compound NCCNC(N)=S OBZQBTMCGHWOBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FVFVNNKYKYZTJU-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-1,3,5-triazine-2,4-diamine Chemical group NC1=NC(N)=NC(Cl)=N1 FVFVNNKYKYZTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102100034561 Alpha-N-acetylglucosaminidase Human genes 0.000 description 1
- 102100033830 Amphiphysin Human genes 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 101000583080 Bunodosoma granuliferum Delta-actitoxin-Bgr2a Proteins 0.000 description 1
- 102100025570 Cancer/testis antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 102100032566 Carbonic anhydrase-related protein 10 Human genes 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 101710201734 E3 protein Proteins 0.000 description 1
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 102100039717 G antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100039699 G antigen 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100039698 G antigen 5 Human genes 0.000 description 1
- 101710092267 G antigen 5 Proteins 0.000 description 1
- 102000002464 Galactosidases Human genes 0.000 description 1
- 108010093031 Galactosidases Proteins 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000007390 Glycogen Phosphorylase Human genes 0.000 description 1
- 108010046163 Glycogen Phosphorylase Proteins 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102100036738 Guanine nucleotide-binding protein subunit alpha-11 Human genes 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 102100028972 HLA class I histocompatibility antigen, A alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 1
- 108010035452 HLA-A1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010013476 HLA-A24 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000924350 Homo sapiens Alpha-N-acetylglucosaminidase Proteins 0.000 description 1
- 101000779845 Homo sapiens Amphiphysin Proteins 0.000 description 1
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000867836 Homo sapiens Carbonic anhydrase-related protein 10 Proteins 0.000 description 1
- 101000886137 Homo sapiens G antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000886136 Homo sapiens G antigen 4 Proteins 0.000 description 1
- 101100283445 Homo sapiens GNA11 gene Proteins 0.000 description 1
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001043807 Homo sapiens Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 101001014223 Homo sapiens MAPK/MAK/MRK overlapping kinase Proteins 0.000 description 1
- 101001005716 Homo sapiens Melanoma-associated antigen 11 Proteins 0.000 description 1
- 101001036406 Homo sapiens Melanoma-associated antigen C1 Proteins 0.000 description 1
- 101000962088 Homo sapiens NBAS subunit of NRZ tethering complex Proteins 0.000 description 1
- 101000880770 Homo sapiens Protein SSX2 Proteins 0.000 description 1
- 101000835998 Homo sapiens SRA stem-loop-interacting RNA-binding protein, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 1
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 208000028018 Lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 102100035133 Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100031520 MAPK/MAK/MRK overlapping kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010010995 MART-1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 102100028389 Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100025083 Melanoma-associated antigen 11 Human genes 0.000 description 1
- 102100039447 Melanoma-associated antigen C1 Human genes 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000713869 Moloney murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108060006580 PRAME Proteins 0.000 description 1
- 102000036673 PRAME Human genes 0.000 description 1
- 102100034640 PWWP domain-containing DNA repair factor 3A Human genes 0.000 description 1
- 108050007154 PWWP domain-containing DNA repair factor 3A Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000010292 Peptide Elongation Factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010077524 Peptide Elongation Factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 101800001357 Potential peptide Proteins 0.000 description 1
- 102400000745 Potential peptide Human genes 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 102100037686 Protein SSX2 Human genes 0.000 description 1
- 101710185720 Putative ethidium bromide resistance protein Proteins 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 102100025491 SRA stem-loop-interacting RNA-binding protein, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241001222774 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Minnesota Species 0.000 description 1
- 241000219287 Saponaria Species 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 101710143177 Synaptonemal complex protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100036234 Synaptonemal complex protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 238000011953 bioanalysis Methods 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000078 claw Anatomy 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 231100000221 frame shift mutation induction Toxicity 0.000 description 1
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 102000052622 human IL7 Human genes 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 230000014828 interferon-gamma production Effects 0.000 description 1
- 230000019734 interleukin-12 production Effects 0.000 description 1
- 230000017306 interleukin-6 production Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 230000001320 lysogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- PUPNJSIFIXXJCH-UHFFFAOYSA-N n-(4-hydroxyphenyl)-2-(1,1,3-trioxo-1,2-benzothiazol-2-yl)acetamide Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1NC(=O)CN1S(=O)(=O)C2=CC=CC=C2C1=O PUPNJSIFIXXJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003739 neck Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000012053 oil suspension Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000027086 plasmid maintenance Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000004896 polypeptide structure Anatomy 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 229950008679 protamine sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000032537 response to toxin Effects 0.000 description 1
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012289 standard assay Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 1
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 description 1
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 1
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4748—Tumour specific antigens; Tumour rejection antigen precursors [TRAP], e.g. MAGE
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Abstract
Description
コードする核酸分子、ならびに関連抗体およびCD4+Tリンパ球は、とりわけ 診断および治療の分野において有用である。
る。その系の有用な局面はT細胞応答であり、それは一部、CD4またはCD8
細胞表面タンパク質のいずれかに陽性の成熟Tリンパ球からなる。T細胞はヒト
白血球抗原(「HLA」)または主要組織適合性遺伝子複合体(「MHC」)と
呼ばれるペプチドまたは分子の他の細胞上細胞表面複合体を介して他の細胞を認
識し、相互作用する。該ペプチドはより大きな分子から誘導され、該細胞により
処理加工されて、HLA/MHC分子をも提示する。メイル(Male)ら、Advanc
ed Immunology(J. P. リピンコット・カンパニー、1987)、特に第6〜1 0章参照。T細胞とHLA/ペプチド複合体の相互作用は制限されており、HL
A分子とペプチドの特異複合体に対する特異T細胞を必要とする。もし特異T細
胞が存在しなければ、パートナー複合体が存在したとしてもT細胞応答はない。
同様に、もし該特異複合体が存在しなければ、T細胞が存在しても応答は起こら
ない。上記のメカニズムは外来物質に対する免疫系の応答、自己免疫病理、また
、細胞性異常に対する応答に関与している。
球双方を包含する。CD8+細胞毒性または細胞溶解性T細胞(CTL)とは、 それが活性化されたとき、HLAクラスI分子により提示される適切な抗原を提
示する細胞を溶解するT細胞である。CD4+Tヘルパー細胞はマクロファージ と抗原産生B細胞を刺激するサイトカインを分泌するT細胞であり、該B細胞は
細胞表面のHLAクラスII分子により適切な抗原を提示する。
ラノーマを対象とする多数の細胞溶解性Tリンパ球(CTL)クローンが記載さ
れている。幾つかの事例では、これらのクローンにより認識される抗原が特徴付
けされている。デ・プラエン(De Plaen)ら、Immunogenetics 40:360〜 369(1994)には、「MAGE」ファミリー(腫瘍特異抗原をコードする
遺伝子のファミリー)が記載されている。(PCT出願、PCT/US92/0
4354、1992年11月26日公開も参照されたい)。これら遺伝子の発現
産物はペプチドに処理加工され、それが次いで細胞表面上に提示される。これが
特異CTLによる腫瘍細胞の溶解に導く。該遺伝子は「腫瘍排除抗原前駆体」ま
たは「TRAP」分子をコードすると言われており、そこから誘導されるペプチ
ドは「腫瘍排除抗原」または「TRA」と呼ばれる。この遺伝子ファミリーのさ
らなる情報についてはトラバーサリー(Traversari)ら、Immunogenetics 35 :145(1992);バン・デル・ブルッゲン(Van der Bruggen)ら、Scien
ce 254:1643(1991)を参照されたい。米国特許第5,342,7 74号も参照されたい。
分子により提示されると開示している。特定のHLA分子に対する特定ペプチド
の特異性が既知であるならば、1つのHLA分子に結合し、他のものには結合し
ない特定のペプチドが予測される。異なる個体は異なる表現型をもつので、この
ことは重要である。結果として、特定のペプチドが特異HLA分子に対するパー
トナーであることを同定することが診断および治療の一部となり得る一方、これ
らは特定のHLA表現型をもつ個体にとって唯一関連するものである。この領域
の研究がさらに必要なのは、細胞の異常性が1個の特定のHLA表現型に限定さ れず、標的とした治療法が問題の異常細胞表現型について何らかの知識を必要と
するからである。
ドがHLA−A2分子により提示されると開示している。したがって、ある1個 のTRAPは複数のTRAを産生することが可能である。
/または特徴付けにつき記載している。これらのTRAはCD8+細胞毒性Tリ
ンパ球(CTL)の活性化と増殖を誘導し、CTLがTRAをコードする腫瘍関
連遺伝子(例えば、MAGE遺伝子)を発現する腫瘍細胞を認識する。
ター機能を発揮するのみならず、免疫記憶を維持するのにも重要である(総説;
トパリアン(Topalian)、Curr. Opin. Immunol. 6:741〜745、199 4)。さらに、これらの研究は腫瘍特異免疫性が劣るのは不適切なTヘルパー細 胞の活性化によるという論点を支持している。
されるペプチドをコードし、そのペプチドがCD4+Tリンパ球を刺激することで
ある(トパリアン(Topalian)ら、1994;イー(Yee)ら、J. Immunol. 1 57:4079〜4086、1996;トパリアンら、J. Exp. Med. 183: 1965〜1971、1996)。
HLAクラスII分子を有する抗原提示細胞により提示された場合、CD4+Tリン
パ球の活性化と増殖を効率的に誘導する。 本発明につき以下の記載により詳細に述べる。
チド配列に対する1個または2以上のアミノ酸の付加、置換または欠失したもの からなる。本発明はまた、かかるペプチドをコードする単離された核酸分子、こ
れらの核酸分子を含む発現ベクター、これら核酸分子をトランスフェクトした宿
主細胞、およびこれらペプチドおよび該ペプチドとHLAクラスII抗原提示分子
との複合体に対する抗体を提供する。該ペプチドとHLAクラスII抗原提示分子
との複合体を認識するTリンパ球も提供される。前記分子を包含するキットとワ
クチン組成物もさらに提供される。これらはMAGE−3の発現を特徴とする疾
患の診断または治療に使用することができる。MAGEファミリーのポリペプチ
ドおよび核酸のメンバーは、有意な配列同一性および機能的相同性(例えば、腫
瘍抗原および前駆体として)を共有することが知られているので、本発明はMA
GE−3以外のMAGEファミリーメンバーから誘導されるHLA結合ペプチド
をも包含する。したがって、本明細書に含まれるMAGE−3 HLAクラスII 結合ペプチドについての開示、かかるペプチドを含む組成物、およびかかるペプ
チドの同定および使用法も、MAGE腫瘍関連抗原ファミリーの他のメンバーに
当てはまることが理解される。
ト、または1個または2以上のアミノ酸の付加、置換または欠失を含むその機能 的変異体からなるものが提供される。1態様における単離されたペプチドは配列
番号11のアミノ酸配列、またはその機能的変異体を含む。特定の態様において
、単離されたHLAクラスII結合ペプチドは配列番号3、配列番号4、配列番号
9、および配列番号10からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。好適な
態様において、単離されたペプチドは配列番号3、配列番号4、配列番号9、配
列番号10および配列番号11からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる
。さらに好ましくは、単離されたペプチドは配列番号3および配列番号4からな
る群より選択されるアミノ酸配列からなる。特定の態様において、単離されたペ
プチドはエンドソーム標的シグナル、好ましくはヒト不変鎖Iiのエンドソーム
標的部分を含む。本発明の他の態様において、単離されたHLAクラスII結合ペ
プチドは非水解性である。好ましい非水解性ペプチドはD−アミノ酸を含むペプ
チド、−psi[CH2NH]−還元アミドペプチド結合を含むペプチド、−p si[COCH2]−ケトメチレン・ペプチド結合を含むペプチド、−psi[ CH(CN)NH]−(シアノメチレン)アミノペプチド結合を含むペプチド、
−psi[CH2CH(OH)]−ヒドロキシエチレン・ペプチド結合を含むペ プチド、−psi[CH2O]−ペプチド結合を含むペプチド、および−psi [CH2S]−チオメチレン・ペプチド結合を含むペプチドからなる群より選択 される。
変異体からなる。好ましくは、組成物中の単離されたMAGE−3 HLAクラ スII−結合ペプチドは配列番号3、配列番号4、配列番号9、配列番号10およ
び配列番号11からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。より好ましく
は、単離されたMAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドは配列番号3およ び配列番号4からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。前記組成物の特
定態様において、単離されたMAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドはエ ンドソーム標的シグナルを含む。好ましくは、エンドソーム標的シグナルはヒト
不変鎖Iiのエンドソーム標的部分を含む。
配列番号13を含む。
ーはプロモーターに作動可能に結合させた前記単離核酸のいずれかを含む。好適
な態様において、該核酸は配列番号13を含む。他の態様において、該発現ベク
ターはさらにHLA−DRB1/13分子をコードする核酸を含む。
ェクトまたはいずれかでトランスフォームした宿主細胞が提供される。HLA−
DRB1/13分子を発現し、また上記発現ベクターのいずれかをトランスフェ
クトまたはいずれかでトランスフォームした宿主細胞が提供される。
せることからなる。特定の態様において、該剤は、MAGE−3タンパク質また
はそのHLAクラスII結合フラグメントと接触させた抗原提示細胞である。好適
な態様において、HLAクラスII分子はHLA−DRB1/13分子であり、該
MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドは配列番号3のアミノ酸配列から なるペプチド、配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号9のアミ
ノ酸配列からなるペプチド、配列番号10のアミノ酸配列からなるペプチド、お
よび配列番号11のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される。
より好ましくは、該MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドは配列番号3 のアミノ酸配列からなるペプチドおよび配列番号4のアミノ酸配列からなるペプ
チドからなる群より選択される。前記方法の特定態様において、単離されたMA
GE−3タンパク質またはそのHLAクラスII結合ペプチドはエンドソーム標的
シグナルを含む。好ましくは、エンドソーム標的シグナルはヒト不変鎖Iiのエ
ンドソーム標的部分を含む。
法が提供される。該方法は対象から単離した生物学的サンプルをMAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドに特異的な剤と接触させ、該剤とMAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドとの間の相互作用を該疾患の決定因子として同定
することからなる。特定の態様において、該ペプチドは配列番号11のアミノ酸
配列、またはその機能的変異体からなる。好適な態様において、MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドは、配列番号3のアミノ酸配列からなるペプチド
、配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号9のアミノ酸配列から
なるペプチド、配列番号10のアミノ酸配列からなるペプチド、および配列番号
11のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される。より好ましく
は、MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドは、配列番号3のアミノ酸配 列からなるペプチドおよび配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチドからなる
群より選択される。
−3 HLAクラスII−結合ペプチドの発現により特徴づけられる疾患の診断法 が提供される。該方法は対象から単離した生物学的サンプルを該複合体に結合す
る剤と接触させ、該複合体と該剤との間の結合を疾患の決定因子として同定する
ことからなる。幾つかの態様において、HLAクラスII分子はHLA−DRB1
/13分子、例えば、HLA−DRB1/1301またはHLA−DRB1/1
302などであって、MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドは配列番号 11のアミノ酸配列、またはその機能的変異体からなる。好ましくは、該MAG
E−3 HLAクラスII−結合ペプチドは、配列番号3のアミノ酸配列からなる ペプチド、配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号9のアミノ酸
配列からなるペプチド、配列番号10のアミノ酸配列からなるペプチド、および
配列番号11のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される。より
好ましくは、MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドは、配列番号3のア ミノ酸配列からなるペプチドおよび配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチド
からなる群より選択される。
本発明の他の側面において提供される。該方法は該疾患を改善するのに十分な量
のMAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドを対象に投与することからなる 。特定の態様において、該MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドは配列 番号11のアミノ酸配列、またはその機能的変異体からなる。好ましくは、該M
AGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドは、配列番号3のアミノ酸配列から なるペプチド、配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号9のアミ
ノ酸配列からなるペプチド、配列番号10のアミノ酸配列からなるペプチド、お
よび配列番号11のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される。
より好ましくは、MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドは、配列番号3 のアミノ酸配列からなるペプチドおよび配列番号4のアミノ酸配列からなるペプ
チドからなる群より選択される。特定の態様において、該MAGE−3 HLA クラスII結合ペプチドはエンドソーム標的シグナル、好ましくは、ヒト不変鎖I
iのエンドソーム標的部分からなる。
疾患を有する対象を治療する方法が提供される。該方法はMAGE−3 HLA クラスI−結合ペプチドおよび該疾患を改善するのに十分な量のMAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドを対象に投与することからなる。特定の態様にお
いて、該MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドは配列番号11のアミノ 酸配列、またはその機能的変異体からなる。好ましくは、該ペプチドは、配列番
号3のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号4のアミノ酸配列からなるペプ
チド、配列番号9のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号10のアミノ酸配
列からなるペプチド、および配列番号11のアミノ酸配列からなるペプチドから
なる群より選択される。より好ましくは、MAGE−3 HLAクラスII−結合 ペプチドは、配列番号3のアミノ酸配列からなるペプチドおよび配列番号4のア
ミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される。上記方法の特定態様に
おいて、MAGE−3 HLAクラスI−結合ペプチドおよびMAGE−3 HL
AクラスII−結合ペプチドはポリトープポリペプチドとして結合される。さらに
他の態様において、該MAGE−3 HLAクラスII結合ペプチドはエンドソー ム標的シグナル、好ましくは、ヒト不変鎖Iiのエンドソーム標的部分からなる
。
疾患を有する対象を治療する方法が提供される。該方法は、HLAクラスII分子
とMAGE−3 HLAクラスII結合ペプチドとの複合体の存在を対象に選択的 に富化する剤を、該疾患を改善するのに十分な量、対象に投与することからなる
。好ましくは、HLAクラスII分子はHLA−DRB1/13分子、例えば、H
LA−DRB1/1301またはHLA−DRB1/1302などである。特定
の態様において、該MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドは配列番号1 1のアミノ酸配列、またはその機能的変異体からなる。好ましくは、該MAGE
−3 HLAクラスII−結合ペプチドは、配列番号3のアミノ酸配列からなるペ プチド、配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号9のアミノ酸配
列からなるペプチド、配列番号10のアミノ酸配列からなるペプチド、および配
列番号11のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される。より好
ましくは、MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドは、配列番号3のアミ ノ酸配列からなるペプチドおよび配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチドか
らなる群より選択される。特定の態様において、該剤はMAGE−3 HLAク ラスII−結合ペプチドを含む。好ましくは、該MAGE−3 HLAクラスII結 合ペプチドはエンドソーム標的シグナルを含む。好ましくは、エンドソーム標的
シグナルはヒト不変鎖Iiのエンドソーム標的部分を含む。
が本発明の他の側面において提供される。該方法は該疾患を改善するのに十分な
量の自己由来CD4+Tリンパ球を対象に投与することからなり、その場合、C D4+Tリンパ球はHLAクラスII分子とMAGE−3 HLAクラスII結合ペプ
チドからなる複合体に対し特異的である。好ましくは、HLAクラスII分子はH
LA−DRB1/13分子、例えば、HLA−DRB1/1301またはHLA
−DRB1/1302などである。特定の態様において、該MAGE−3 HL AクラスII−結合ペプチドは配列番号11のアミノ酸配列、またはその機能的変
異体からなる。好ましくは、該MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドは 、配列番号3のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号4のアミノ酸配列から
なるペプチド、配列番号9のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号10のア
ミノ酸配列からなるペプチド、および配列番号11のアミノ酸配列からなるペプ
チドからなる群より選択される。より好ましくは、MAGE−3 HLAクラスI
I−結合ペプチドは、配列番号3のアミノ酸配列からなるペプチドおよび配列番 号4のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される。
れたポリペプチドは選択的にMAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドに結 合するが、その条件として単離されたポリペプチドはHLAクラスII分子ではな
いものとする。特定の態様において、単離されたポリペプチドは抗体であり、好
ましくはモノクローナル抗体である。他の態様において、単離されたポリペプチ
ドは、Fabフラグメント、F(ab)2フラグメントまたはMAGE−3 HL
AクラスII−結合ペプチドに対し選択的なCDR3領域を含むフラグメントから
なる群より選択される抗体フラグメントである。
MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドは配列番号11のアミノ酸配列、 またはその機能的変異体からなる。好ましくは、該MAGE−3 HLAクラスI
I−結合ペプチドは、配列番号3のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号4 のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号9のアミノ酸配列からなるペプチド
、配列番号10のアミノ酸配列からなるペプチド、および配列番号11のアミノ
酸配列からなるペプチドからなる群より選択される。より好ましくは、MAGE
−3 HLAクラスII−結合ペプチドは、配列番号3のアミノ酸配列からなるペ プチドおよび配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択さ
れる。
離された抗原提示細胞はHLAクラスII分子とMAGE−3 HLAクラスII結 合ペプチドからなる複合体を含んでいる。好ましくは、HLAクラスII分子はH
LA−DRB1/13分子である。特定の態様において、該MAGE−3 HL AクラスII−結合ペプチドは配列番号11のアミノ酸配列、またはその機能的変
異体からなる。好適な態様において、該MAGE−3 HLAクラスII−結合ペ プチドは、配列番号3のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号4のアミノ酸
配列からなるペプチド、配列番号9のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号
10のアミノ酸配列からなるペプチド、および配列番号11のアミノ酸配列から
なるペプチドからなる群より選択される。より好ましくは、MAGE−3 HL AクラスII−結合ペプチドは、配列番号3のアミノ酸配列からなるペプチドおよ
び配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される。
MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドにより刺激されるT細胞が選択され
る。MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドの最初のアミノ酸残基を突然 変異に付し、変異体ペプチドを調製する。次いで、HLAクラスII結合分子への
変異体ペプチドの結合、およびT細胞の刺激作用が定量されるが、その際、HL
AクラスII結合分子への変異体ペプチドの結合およびHLAクラスII結合分子に
より提示される変異体ペプチドによるT細胞の刺激作用は、変異体ペプチドが機
能的変異体であることを示す。好適な態様において、MAGE−3 HLAクラ スII−結合ペプチドは配列番号11のアミノ酸配列を含んでなる。より好ましく
は、該ペプチドは配列番号3、配列番号4、配列番号9、配列番号10、または
配列番号11で示されるアミノ酸配列からなる。特定の態様において、該方法は
さらにMAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドによるT細胞の刺激作用と 機能的変異体によるT細胞の刺激作用を、機能的変異体によるT細胞の刺激作用
の有効性決定因子として比較する工程からなる。
を含む医薬製剤を提供する。かかる医薬製剤は医薬的に許容し得る希釈担体また
は賦形剤を含んでもよい。 本発明のこれらの目的および他の目的を本発明の詳細な説明との関連でさらに
詳細に説明する。
ある。 図3は、外来性His−MAGE−3タンパク質でパルスした自己由来EBV
−B細胞のCD4+T細胞クローンによる認識が、抗−HLA DRモノクローナ
ル抗体により阻害されることを示すグラフである。 図4は、CD4+クローンB6/34、B6/37、F3/37およびF3/ 40による認識について、MAGE−3ペプチドのスクリーニング結果を詳細に
示すグラフである。 図5は、ペプチドRKVAELVHFLLLKYRA(MAGE−3111-126、配 列番号3)またはELVHFLLLKYRAREPV(MAGE−3115-130、 配列番号4)でパルスしたCD4’クローンB6/34およびB6/37EBV
−BによるTNFとINF−γ産生刺激を描出するグラフである。 図6は、ペプチドMAGE−3111-126またはMAGE−3115-130でパルスし
た自己由来EBV−B細胞がクローンB6/34およびB6/37の増殖を誘導
したことを示すグラフである。 図7は、ペプチドMAGE−3115-130に対するCD4’クローンB6/37 の応答がHLA−DRB1/1302に制限されることを示すグラフである。 図8は、MAGE−3115-130から誘導される末端切除ペプチドでパルスした 自己由来EBV−B細胞に対するクローンB6/37の反応性を示すグラフであ
る。 図9は、CD4T細胞クローン426/B6.37(抗−MAGE−3.DR
13)による末端切除MZ2EBVの認識を示す。 図10は、CTLクローン434/1(抗−MAGE−3.A1)による末端
切除MZ2EBVの認識を示す。 図11は、CTL434/1(抗−MAGE−3.A1)による末端切除MZ
2EBVの溶解を示す。 図12Aおよび12Bは、CD4T細胞クローン426/B6.37(抗−M
AGE−3.DR13)およびCTLクローン434/1(抗−MAGE−3.
A1)による形質導入MZ2−MEL.43の認識をそれぞれ示す。 図13は、不変鎖(Ii)とLAMP−1 MAGE−3融合タンパク質のレ トロウイルス構築物の模式図である。
ドを提供するが、該ペプチドはCD4+Tリンパ球の増殖と活性化を促進する。 本明細書において、かかるペプチドは「MAGE−3 HLAクラスII結合ペプ チド」および「HLAクラスII結合ペプチド」と呼称する。したがって、本発明
の1側面は配列番号11のアミノ酸配列を含む単離されたペプチドである。
産物である。当業者がそういうものとして認識するように、翻訳産物はMAGE
−3 HLAクラスII結合ペプチドとなり、それが提示のための最終形状に処理 されるが、該産物はMAGE−3 HLAクラスII結合ペプチドを包含する長さ の鎖長または配列のものであればよい。下記例に示すように、少なくとも10個
のアミノ酸であって、かつ、MAGE−3タンパク質(配列番号2)のアミノ酸
配列と同じ大きさのペプチドまたはタンパク質が適切に処理加工されて、HLA
クラスII分子により提示され、CD4+Tリンパ球を刺激するのに有効となる。 MAGE−3 HLAクラスII結合ペプチド、例えば、配列番号11のペプチド はそのいずれかの末端または両端に付加した1、2、3、4、5、6、7、8、
9、10個、または11以上のアミノ酸を有していてもよい。かかるペプチドの
抗原性部分は生理的条件下、HLAクラスII分子による提示のために切り出され
る。さらなるMAGE−3 HLAクラスII結合ペプチド、ならびにMAGEフ ァミリーHLAクラスII結合ペプチドは、当業者が本明細書の記載に従い同定す
ることができる。
ドを同定することができる。このように、例えば、正常供血者の樹枝状細胞など
の抗原提示細胞に組換えMAGEタンパク質(またはそのフラグメント)を導入
することができるが、その処理は、該細胞をMAGEポリペプチドと接触させる
か、または該細胞に対象のMAGEタンパク質発現用の核酸分子を導入すること
により行う。次いで、該抗原提示細胞を用い、MAGE HLAクラスII結合ペ プチドを認識する特異CD4リンパ球の活性化と増殖を細胞外で誘発することが
できる。該ペプチドの配列は、次いで、実施例記載のとおりに、例えば、CD4
リンパ球の活性化と増殖を刺激するのに用いたMAGEタンパク質のペプチドフ
ラグメントで細胞を刺激することにより決定することができる。あるいは、抗原
提示細胞にMAGEタンパク質から誘導されるペプチドを導入してもよい。例え
ば、HLAクラスII分子に結合する共通アミノ酸配列に基づき、候補HLAクラ
スII結合ペプチドであるMAGEファミリータンパク質から誘導されるペプチド
配列を予測することができる。この点に関しては、例えば、国際特許出願PCT
/US96/03182およびPCT/US98/01373を参照されたい。
このように選択されるペプチドを本明細書記載のアッセイ法に使用し、特異CD
4リンパ球の誘発とペプチドの同定が可能である。HLAクラスII結合ペプチド
を選択・試験する追加的な方法は技術上既知である。
クラスII結合ペプチドの「変異体」は、HLAクラスII結合ペプチドの一次アミ
ノ酸配列に1または2以上の修飾があり、かつ、本明細書に記載したHLAクラ
スIIおよびT細胞レセプター結合性を保持するペプチドである。MAGE−3 HLAクラスII結合ペプチドの機能的変異体を創製する修飾は、例えば、1)M
AGE−3 HLAクラスII結合ペプチドの機能的変異体の性質、例えば、発現 系におけるペプチドの安定性またはHLA−ペプチド結合などのタンパク質−タ
ンパク質結合の安定性を増強すること;2)MAGE−3 HLAクラスII結合 ペプチドに対し新たな活性または性質を与えること、例えば、抗原性エピトープ
の付加または検出可能な部分を付加すること;または3)同一または同様のT細
胞刺激性を生じる異なるアミノ酸配列を与えること;により実施される。MAG
E−3(同様にMAGEファミリー)HLAクラスII結合ペプチドに対する修飾
は該ペプチドをコードする核酸に対して実施可能であり、欠失、点突然変異、末
端切除、アミノ酸置換およびアミノ酸付加を包含する。あるいは、修飾は該ポリ
ペプチドに直接実施することも可能であり、例えば、切断、リンカー分子の付加
、ビオチンなど検出可能な部分の付加、脂肪酸の付加、アミノ酸を他のアミノ酸
に置換することなどである。変異体はペプチドのライブラリーから選択すること
も可能であり、それはランダムペプチドであっても、1以上の位置に置換を有す
るMAGEペプチドの配列に基づくペプチドであってもよい。例えば、ペプチド
・ライブラリーはHLAクラスII分子に結合したMAGEペプチドの複合体との
競合アッセイに使用することができる(例えば、MAGEペプチドを導入した樹
枝状細胞)。MAGEペプチドがHLAクラスII分子に結合するのと競合するペ
プチドについて配列決定し、他のアッセイ(例えば、CD4リンパ球増殖)に用
いてMAGEペプチドの機能的変異体としての安定性を決定することができる。
ンパク質などをも包含する。本発明はこのようにMAGE−3 HLAクラスII 結合ペプチドおよびヒト不変鎖(Ii)などのエンドソーム標的シグナルを含む
融合タンパク質を包含する。下記開示のように、ヒト不変鎖のエンドソーム標的
部分をMAGE−3へ融合することにより、MAGE−3が効率的にHLAクラ
スIIペプチドの提示経路に目標を定めることとなる。ヒト不変鎖の「エンドソー
ム標的部分」または他の標的ポリペプチドとは、第二のポリペプチドに融合また
は結合したときに、第二のポリペプチドのエンドソーム局在化を増加させる分子
の当該部分である。このように、エンドソーム標的部分はヒト不変鎖Iiなどの
標的ポリペプチドの全配列または小部分のみを含むものであってもよい。当業者
は標的分子のエンドソーム標的部分を容易に決定することができる。
も、HLAクラスIIペプチドの提示経路に対するMAGE−3の標的化が有意に
増大することはなかった。したがって、本発明はMAGE−3と、LAMP−1
ではないヒト不変鎖Iiとの融合タンパク質が、HLAクラスIIペプチドの提示
経路に効率的に目標を定めるという予期せざる知見を包含する。さらなるエンド
ソーム標的シグナルは当業者が同定し得るものであり、MAGE−3またはその
MAGE−3 HLAクラスII結合部分に融合し、次いで、HLAクラスIIペプ チドの提示経路に対する標的化について、極めて通常の実験手法によりテストす
ることができる。
示されたときに安定性を保持してヘルパーT細胞を刺激し、かつ、HLA DR B1/13分子などのHLAクラスII分子に結合する性質を保持する鎖長のもの
からなる。例えば、これに関連するMAGE−3 HLAクラスII結合ペプチド は、MAGE−3 HLAクラスII結合ペプチドとそれに無関係のアミノ酸配列 を含む融合タンパク質、配列番号3、4、9、10および11に示されたアミノ
酸配列の合成ペプチド、標識ペプチド、MAGE−3発現癌の対象から単離した
ペプチド、MAGE−3を発現する培養細胞から単離したペプチド、非ペプチド
分子に結合したペプチド(例えば、ある種の薬物送達システム)および配列番号
11のアミノ酸配列を含む他の分子であってもよい。
以上のD−アミノ酸を含むペプチドまたはアミノ酸に結合する1個またはそれ以
上の非水解性ペプチド結合を含むペプチドなどである。あるいは、CD4’Tリ
ンパ球を誘発するのに最適なペプチドを選択し、かかるペプチドを必要に応じて
修飾しプロテアーゼによる水解能力を減じることが可能である。例えば、タンパ
ク質分解開裂に対する感受性を決定するために、ペプチドを標識して細胞抽出物
または精製プロテアーゼと培養し、次いで単離してどのペプチド結合がタンパク
水解に感受性であるかを、例えば、ペプチドとタンパク分解フラグメントの配列
を決定することにより決定することができる。あるいは、潜在的に感受性のペプ
チド結合は、MAGE−3 HLAクラスII結合ペプチドのアミノ酸配列を一連 のプロテアーゼの既知開裂部位特異性と比較することにより同定することができ
る。かかるアッセイの結果に基づき、タンパク分解に感受性の個々のペプチド結
合は、ペプチドの生体外合成により非水解ペプチド結合に置換えることができる
。
技術的に既知である。非水解性結合は−psi[CH2NH]−還元アミドペプ チド結合、−psi[COCH2]−ケトメチレン・ペプチド結合、−psi[ CH(CN)NH]−(シアノメチレン)アミノペプチド結合、−psi[CH 2 CH(OH)]−ヒドロキシエチレン・ペプチド結合、−psi[CH2O]−
ペプチド結合、および−psi[CH2S]−チオメチレン・ペプチド結合を包 含する。
性を減じたものも考慮される。ペプチド疑似類似体は選択したMAGE−3 H LAクラスII結合ペプチドに基づき、1個または2以上の残基を非ペプチド部分
に置換えることにより調製することができる。好ましくは、非ペプチド部分はそ
の生来のコンホメーションを保持するか、または好ましい、例えば、生物活性な
コンホメーションを安定化するペプチドを可能とする。かかるペプチドは分子ま
たは細胞ベースの結合アッセイ法で試験し、コンホメーションおよび/または活
性に対する置換基の影響を評価することができる。ペプチドから非ペプチド疑似
類似体を調製する方法の一例が、ナッハマン(Nachman)ら、Regul. Pept. 57
:359〜370(1995)に記載されている。
番号11のアミノ酸配列に変化を含むものであるなら、同類アミノ酸置換を有す
るMAGE−3 HLAクラスII結合ペプチドの機能的変異体が典型的で好まし いであろう、すなわち、置換は当初のアミノ酸の性質、例えば、電荷、疎水性、
コンホメーションなどを保持する。アミノ酸の同類置換の例としては、以下のグ
ループ内でのアミノ酸の中でなされた置換を含む:(a)M、I、L、V;(b
)F、Y、W;(c)K、R、H;(d)A、G;(e)S、T;(f)Q、N
;および(g)E、D。
ig)の公開PCT出願(PCT/US96/03182)に提供されている。こ
れらの方法はアミノ酸配列モチーフの展開に依存しており、それに対し潜在的な
エピトープを比較することができる。各モチーフはアミノ酸配列の限定されたセ
ットを描写し、そこで各(関係)位置での残基が(a)単一の残基に限定される
か、(b)制限された残基のセットの中で変わることを許されるか、または(c
)すべての可能な残基の中で変わることを許される。例えば、モチーフは、第1
位置の残基が、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、またはフェニル
アラニン残基のいずれか1つであること;第2位置の残基がヒスチジンであらね
ばならないこと;第3位置の残基がいずれのアミノ酸残基であってもよいこと;
第4位置の残基が、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルア
ラニン、チロシン、またはトリプトファン残基のいずれか1つであること;また
第5位置の残基がリジンであらねばならないことを特定する。
しくは結合ポケットおよび/または本明細書記載のMAGE−3 HLAクラスI
I結合ペプチドのT細胞レセプター(「TCR」)接点を分析することにより開 発することができる。HLAクラスII結合ポケットの形成に関与する残基の詳細
な構造分析を提供することにより、MAGEペプチドがHLAクラスIIタンパク
質のいずれかに結合する配列モチーフを予測することが可能となる。
により、特定のHLA分子に結合する、また、T細胞レセプターと相互作用して
T細胞応答を誘導する、理に適った可能性を有する一連のペプチド(例えば、M
AGE HLAクラスII結合ペプチド、特に本明細書記載のMAGE−3ペプチ ド、およびその機能的変異体)を同定することが可能となる。これらのペプチド
は合成可能であり、本明細書記載の活性について試験することができる。これら
モチーフの用途は、純正配列相同性(抗原性として同一であるが、配列が全く異
なる多くのペプチドは除く)または無制限の「同類」置換(臨界高次保存部位に
おいて異なる多くのペプチドを含む)に対立するものとして、病気の治療に潜在
的に応用可能なペプチドを当業者が評価することのできる方法を表す。
)のPCT出願およびそこに引用された文献は、そのすべてが引用により取り込
まれるが、そこにHLAクラスIIペプチドの残基と接触するHLAクラスIIおよ
びTCRの結合ポケットを開示している。HLAクラスIIおよび/またはTCR
の結合ポケットに結合する見込みのある残基を一定のものとするか、あるいは特
定の置換のみを可能とすることにより、MAGE−3 HLAクラスII結合ペプ チドの機能的変異体をHLAクラスIIおよびT細胞レセプターに持続的に結合す
るように調製することができる。
E−3 HLAクラスII結合ペプチドおよびその機能的変異体を同定する方法が 提供される。一般に、MAGEタンパク質は上述の分析に付され、ペプチド配列
が選択され、次いで上記の試験に付される。MAGE−3に関して、例えば、該
方法はMAGE−3 HLAクラスII結合ペプチド、MAGE−3 HLAクラス
II結合ペプチドに結合するHLAクラスII結合分子、およびHLAクラスII結合
分子によって提示されたMAGE−3 HLAクラスII結合ペプチドにより刺激 されるT細胞を選択することからなる。好ましい態様において、MAGE−3 HLAクラスII結合ペプチドは配列番号11のアミノ酸配列を含んでなる。より
好ましくは、該ペプチドは配列番号3、配列番号4、配列番号9、配列番号10
または配列番号11のアミノ酸配列からなる。MAGE−3 HLAクラスII結 合ペプチドの最初のアミノ酸残基を変異させ、変異体ペプチドを調製する。該ア
ミノ酸残基は、上記ストロミンガーおよびヴッヒェルプッフニヒ(Strominger a
nd Wucherpfennig)のPCT出願に記述されたHLAとT細胞レセプター接合点
の原理に従い変異させることができる。変異体ペプチドを調製する方法はいかな
る方法も採用し得るが、例えば、変異体ペプチドの合成、変異核酸分子を用い変
異体ペプチドを組換えにより産生させる方法などである。
、標準的手法に従い決定される。例えば、以下に例示するように、変異体ペプチ
ドはMAGE−3ペプチドに結合するHLAクラスII分子を含む抗原提示細胞と
接触させ、変異体ペプチドと抗原提示細胞との複合体を形成させることができる
。この複合体は次いでHLAクラスII結合分子により提示されるMAGE−3 HLAクラスII結合ペプチドを認識するT細胞と接触させることができる。T細
胞はMAGE−3の発現を特徴とする症状の対象から得ることができる。T細胞
による変異体ペプチドの認識は、TNFまたはIFNγ産生などのT細胞刺激の
指標を測定することにより決定することができる。同様の手法を他のMAGEフ
ァミリー HLAクラスII結合ペプチドの同定と特徴付けのために実施すること ができる。
子により提示される変異体ペプチドによりT細胞を刺激すると、変異体ペプチド
が機能的変異体であることが分かる。この方法はまた、MAGE−3 HLAク ラスII結合ペプチドによるT細胞の刺激と変異体ペプチドによるT細胞の刺激と
を、機能的変異体によるT細胞刺激の有効性を決定するものとして比較する工程
からなる。機能的変異体をMAGE−3 HLAクラスII結合ペプチドと比較す ることにより、T細胞刺激性の上昇したペプチドを調製し得る。
体をコードするヌクレオチド配列を推定することができる。
ストリンジェントな条件下にハイブリダイズする他の核酸配列である。本明細書
にて使用する場合、「ストリンジェントな条件」という用語は技術上周知のパラ
メーターをいう。核酸のハイブリダイゼーションパラメーターはかかる方法を集
約した、例えば、以下の文献に見出される。分子クローニング:実験室マニュア
ル;サムブルーク(J.Sambrook)ら、編纂、第2版、コールド・スプリング・ ハーバー・ラボラトリー・プレス、コールド・スプリング・ハーバー、ニューヨ
ーク、1989;または分子生物学における最新のプロトコール、オウスベル(
F.M. Ausubel)ら、編纂、ジョン・ウイリー・アンド・サンズ・インク、ニュー
ヨーク。より詳しくは、ストリンジェントな条件とは、本明細書にて使用する場
合、ハイブリダイゼーションバッファー(3.5×SSC、0.02%ファイコ
ール、0.02%ポリビニルピロリドン、0.02%ウシ血清アルブミン、25
mM NaH2PO4(pH7)、0.5%SDS、2mM EDTA)中、65℃
でハイブリダイゼーションすることをいう。SSCは0.15M塩化ナトリウム
/0.15Mクエン酸ナトリウム、pH7である;SDSはドデシル硫酸ナトリ
ウムである;また、EDTAエチレンジアミン四酢酸である。ハイブリダイゼー
ション後、DNAを転写した膜は室温にて2×SSCで洗浄し、次いで65℃で
0.1×SSC/0.1×SDSにて洗浄する。
ンシーに帰着する。当業者はかかる条件に習熟しており、それをここでは記載し
ない。しかし、理解すべきことは、当業者であれば、当該条件を操作することが
可能であって、その方法で本発明のMAGE HLAクラスII結合ペプチドをコ ードする核酸の相同染色体および対立遺伝子を明確に同定し得ることである。当
業者はまた、定法どおりに分離したかかる分子発現のための細胞とライブラリー
をスクリーニングすること、次いで関連する核酸分子を単離し、配列決定する方
法論に精通している。
コードする核酸に対し、典型的には少なくとも50%のアミノ酸同一性および/
または少なくとも40%のヌクレオチド同一性をそれぞれ共有する。ある場合に
は、相同染色体および対立遺伝子は、少なくとも50%のヌクレオチド同一性お
よび/または少なくとも65%のアミノ酸同一性を共有し、さらに他の場合には
、少なくとも60%ヌクレオチド同一性および/または少なくとも75%のアミ
ノ酸同一性を共有する。前記核酸の相補鎖も本発明に包含される。
ーザンブロットが32Pプローブと共に前記条件を用い実施し得る。MAGE H LAクラスII結合ペプチドをコードするDNAが最終的に転写された膜を洗浄し
た後、該膜をX線フィルム上に置き、放射活性シグナルを検出することができる
。
のように、ペプチドRKVAELVHFLLLKYRA(配列番号3)はMAG
E−3 HLAクラスII結合ペプチドである。ロイシン残基(配列番号3のアミ ノ酸No.6、10、11および12)はコドンCUA、CUC、CUG、CU
U、UUAおよびUUGによりコードされる。6種のコドンはそれぞれロイシン
残基をコードする目的にとって等価である。このように、当業者に明らかなこと
は、ロイシンをコードするヌクレオチドトリプレットはいずれを採用してタンパ
ク質合成装置に指令しても、生体外または生体内でロイシン残基を組込むことが
できることである。同様に、配列番号3のMAGE−3 HLAクラスII結合ペ プチドを構成する他のアミノ酸残基をコードするヌクレオチドトリプレットは以
下のとおりである:CGA、CGC、CGG、CGT、AGAおよびAGG(ア
ルギニンコドン);AAAおよびAAG(リジンコドン);GUA、GUC、G
UGおよびGUU(バリンコドン);GAAおよびGAG(グルタミンコドン)
;CACおよびCAU(ヒスチジンコドン);UUCおよびUUU(フェニルア
ラニンコドン);およびUACおよびUAU(チロシンコドン)。他のアミノ酸
残基は同様に多様なヌクレオチド配列によりコードされてもよい。このように、
本発明は、遺伝子コードの縮重のために本来のMAGE HLAクラスII結合ペ プチド・コード核酸とはコドン配列において異なる変性核酸を包含する。
胞および細胞系へのトランスフェクトを包含することであり、これら細胞系は原
核細胞系(例えば、大腸菌)または真核細胞系(例えば、樹枝状細胞、CHO細
胞、COS細胞、酵母発現系および昆虫細胞における組換えバキュロウイルス発
現系)である。発現ベクターは、関連する配列、すなわち上記の配列がプロモー
ターに作動可能に連接していることを必要とする。ヒトHLA−DBR1/13
20分子がMAGE−3 HLAクラスII結合ペプチドを提示することが判明し ているので、発現ベクターはHLA−DBR1/13分子をコードする核酸配列
を含んでいてもよい。(他のMAGE HLAクラスII結合ペプチドについては 、異なるHLA分子を用いることができる)。ベクターが両方の配列を含んでい
る場合には、それを用いて、通常いずれか一方を発現しない細胞にトランスフェ
クトすることができる。MAGE−3 HLAクラスII結合ペプチドコーディン グ配列は、例えば、宿主細胞がすでにHLA−DBR1/13分子を発現してい
る場合、単独で使用することができる。勿論、2つのコーディング配列を含むベ
クターは要すればHLA−DBR1/13分子を発現しない宿主細胞中で使用す
ることができるので、使用し得る宿主細胞に特に制限はなく、MAGE−3 H LAクラスII結合ペプチドをコードする核酸はHLA−DBR1/13分子を発
現する抗原提示細胞中で使用することができる。本明細書にて使用する場合、「
HLA−DBR1/13分子」は以下のサブタイプを包含する:DRB1*13 01、DRB1*1302、DRB1*13031、DRB1*13032、DR B1*1304、DRB1*1305、DRB1*1306、DRB1*1307、
DRB1*1308、DRB1*1309、DRB1*1310、DRB1*131
1、DRB1*1312、DRB1*1314、DRB1*1315、DRB1*1
316、DRB1*1317、DRB1*1318、DRB1*1319、DRB 1*1320、DRB1*1321、DRB1*1322、DRB1*1323およ
びDRB1*1324。
にまたは宿主細胞での発現のために、そこに所望の配列を制限および連結反応に
より挿入し得る多くの核酸のいずれであってもよい。ベクターはRNAベクター
も利用し得るが、一般にはDNAから構成される。ベクターとしてはプラスミド
、ファージミド、およびウイルスゲノムを包含するが、これらに限定されるもの
ではない。クローニングベクターは宿主細胞中で複製可能なものであり、また、
さらに1または2以上のエンドヌクレアーゼ制限部位により特徴づけられるもの
であるが、該制限部位ではベクターが確定的な様式で切断され、そこに所望のD
NA配列を連接し、新しい組換えベクターが宿主細胞での複製能力を保持するよ
うにする。プラスミドの場合には、所望配列の複製は宿主細菌内でのプラスミド
のコピー数が増加するにつれて何度も起こるか、あるいは宿主が有糸分裂により
再生するまでは1宿主あたり1度のみ起こる。ファージの場合には、複製は溶菌
期には活発に起こり、また溶原期には消極的である。発現ベクターは、所望のD
NA配列を制限および連結反応により挿入し得るものであり、該DNA配列は調
節配列に作動可能に連結し、RNA転写物として発現し得るようにする。ベクタ
ーはさらに、細胞が該ベクターによりトランスフォームされているかいないか、
またはトランスフェクトされているかいないかの判定使用に適当な1個または2
以上のマーカーを含んでもよい。マーカーは、例えば、抗性物質または他の化合
物に対する抵抗性または感受性を増大または減少させるタンパク質をコードする
遺伝子、当該技術において既知の標準的アッセイ法によりその活性を検出し得る
酵素(例えば、β−ガラクトシダーゼまたはアルカリホスファターゼ)をコード
する遺伝子、およびトランスフォームまたはトランスフェクト細胞、宿主、コロ
ニーまたはプラーク(例えば、緑色蛍光タンパク質)の表現型に可視的に影響す
る遺伝子を包含する。好適なベクターは自己複製可能なベクター、および作動可
能に連結しているDNAセグメントに存在する構造遺伝子産物を発現し得るベク
ターである。
AGE−3)またはそこから誘導されるHLAクラスII結合ペプチドを該タンパ
ク質またはペプチド発現細胞のエンドソームに合わせた配列を含む。HLAクラ
スII分子は、HLAクラスII分子に対し他の分子への結合を妨げる不変鎖(Ii
)を含む。この不変鎖はエンドソーム内で切断され、それによってHLAクラス
II分子によるペプチドの結合を可能とする。したがって、MAGE−3 HLA クラスII結合ペプチドおよびその前駆体(例えば、MAGE−3タンパク質)は
エンドソームに合わせるのが好ましく、それによってMAGE−3 HLAクラ スII結合ペプチドがHLAクラスII分子に結合するのを増強する。分子をエンド
ソームに向かわせる標的シグナルは当該技術において既知であるが、これらのシ
グナルを好適に発現ベクターに組込ませ、エンドソーム標的シグナルを含む融合
タンパク質を産生するようにする。サンダーソン(Sanderson)ら(Proc. Nat’
l. Acad. Sci. USA、92:7217〜7221、1995)、ウー(Wu)ら
(Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA、92:11671〜11675、199 5)およびトムソン(Thomson)ら(J. Virol.、72:2246〜2252、1
998)はエンドソーム標的シグナル(不変鎖Iiおよびリソソーム会合膜タン
パク質LAMP−1を含む)およびエンドソームおよび/またはリソソーム細胞
画室に抗原を方向づけるその用法について記載している。実施例に開示するよう
に、不変鎖−MAGE−3融合タンパク質が好ましい。
ペプチドに非ペプチド結合(すなわち、非融合タンパク質)を介して結合させ、
特異的にMAGE−3を標的とすること可能な接合体を調製することができる。
共有結合の特殊例は二官能性架橋分子を使用する場合のものも包含する。架橋分
子はホモ二官能性であってもヘテロ二官能性であってもよく、その分子の性質に
応じて結合される。ホモ二官能性架橋剤は2つの同じ反応性基を有する。ヘテロ
二官能性架橋剤は連続的接合反応を可能とする2つの異なる反応性基をもつもの
として定義される。種々のタイプの市場入手可能な架橋剤は1個または2以上の
以下の基と反応し得る;一級アミン、二級アミン、スルフヒドリル、カルボキシ
ル、カルボニルおよびカルボハイドレート。当業者は、結合すべき分子の化学的
性質および1個または複数個の結合の好ましい性質に基づき、過度の実験をする
ことなしにエンドソーム標的部分に結合する好適な分子を確認することができる
。
」結合されることをいうが、その場合、コーディング配列の発現または転写が調
節配列の影響下または制御下にあるようにそれらの配列を共有結合により結合す
る。該コーディング配列を機能的タンパク質に翻訳することが必要な場合、2つ
のDNA配列を作動可能に結合するというが、その場合、もし5’調節配列にお
けるプロモーターの誘導がコーディング配列を転写に至らしめ、また、もし2つ
のDNA配列間の結合の性質が(1)フレームシフト突然変異を誘導せず、(2
)コーディング配列を転写に向けるプロモーター領域の能力を阻害せず、または
(3)タンパク質に翻訳されるべき対応RNA転写物の能力を阻害しないならば
、という条件つきである。このように、プロモーター領域が当該DNA配列の転
写を果たし、得られる転写物が所望のタンパク質またはポリペプチドに翻訳され
るという条件のもとで、プロモーター領域はコーディング配列に作動可能に結合
される。
が、一般に必要により転写と翻訳それぞれの開始に関わる5’非転写および5’
非翻訳配列、例えば、TATAボックス、キャッピング配列、CAAT配列など
を含んでいる。特に、かかる5’非転写調節配列は作動可能に結合した遺伝子の
転写制御プロモーター配列を含むプロモーター領域を含む。調節配列は要すれば
エンハンサー配列または上流活性化配列を含んでいてもよい。本発明のベクター
は5’リーダーまたはシグナル配列を任意に含んでいてもよい。適切なベクター
の選択および設計は当業者の能力と判断内のものである。
当業者既知である。例えば、サムブルーク(Sambrook)ら、分子クローニング:
実験室マニュアル、第2版、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・
プレス、1989を参照されたい。細胞は、MAGE−3 HLAクラスII結合 ペプチドをコードする非相同DNA(RNA)を細胞に導入することにより遺伝
子工学的に調製される。当該非相同DNA(RNA)は転写エレメントの作動可
能制御のもとに置き、宿主細胞中の非相同DNAの発現を可能とする。本明細書
に記載するように、かかる発現構築物はまた、エンドソーム標的シグナル、好ま
しくはヒト不変鎖またはその標的フラグメントをコードするヌクレオチド配列を
も任意に含む。
ロゲン、カールスバッド、CAから入手可能)などのものであって、選択可能な
マーカー、例えば、G418抵抗性を供与する遺伝子(安定的に移入された細胞
系の選択を容易にする)、およびヒトサイトメガロウイルス(CMV)エンハン
サー−プロモーター配列を含むものである。さらに、霊長類またはイヌ細胞系で
の発現に適しているのはpCEPベクター(インビトロゲン)であり、エプシュ
タイン・バー・ウイルス(EBV)を複製の起源として含み、多数コピー型染色
体外因子としてのプラスミドの維持を容易にする。もう一つの発現ベクターは、
ポリペプチド延長因子1αのプロモーターを含むpEF−BOSプラスミドであ
り、生体外での転写を効率的に促進する。該プラスミドはミシズマおよびナガタ
(Mishizuma and Nagata)(Nuc. Acids Res. 18:5322、1990)が記
載しており、そのトランスフェクション実験での使用については、例えば、デム
リン(Demoulin)(Mol. Cell Biol. 16:4710〜4716、1996)が開
示している。さらに他の好適な発現ベクターは、ストラットフォード−ペリコウ
デット(Stratford-Perricaudet)が記載しているアデノウイルスであり、この ものはE1およびE3タンパク質を欠いている(J. Clin. Invest. 90:62 6〜630、1992)。アデノP1A組換え体としてのアデノウイルスの使用
については、P1Aに対する免疫化のためのマウスへの皮内注射についてワーニ
アー(Warnier)らが記載している(Int. J. Cancer、67:303〜310、 1996)。
ベクターを調製することを可能とする。かかる発現キットは少なくとも2つの以
前に検討した物質の少なくとも個々に分割した部分からなる。他の成分は所望ど
おりに加えればよい。
に記載する。以下の用途はMAGE−3 HLAクラスII結合ペプチドについて 記載するが、同様に他のMAGEファミリーHLAクラスII結合ペプチドの用途
についても当てはまる。第一に、本発明はMAGE−3 HLAクラスII結合ペ プチドの発現により特徴づけられる疾患を当業者が診断するのを可能にする。こ
れらの方法は生物学的サンプル中のMAGE−3 HLAクラスII結合ペプチド またはMAGE−3 HLAクラスII結合ペプチドとHLAクラスII分子との複 合体の発現を定量することからなる。ペプチドまたはペプチドとHLAクラスII
分子との複合体の発現は、該ペプチドまたは複合体に対する結合パートナー、例
えば、抗体などで検定することにより定量し得る。
3 HLAクラスII結合ペプチドとHLAクラスII分子との複合体を対象内に富 化する剤を投与し、次いでかかる複合体に特異的なCD4−Tリンパ球を投与す
ることからなる。前記治療に有用な剤はMAGE−3 HLAクラスII結合ペプ チドおよびその機能的変異体、かかるMAGE−3ペプチドを含むエンドソーム
標的融合タンパク質、かかるタンパク質およびペプチドを発現する核酸(該核酸
を含むウイルスを包含)、かかるペプチドとHLAクラスII分子との複合体(例
えば、HLA DRB1/1302)、MAGE−3 HLAクラスII結合ペプチ
ドとHLAクラスII分子との複合体を担持する抗原提示細胞などを包含する。本
発明はMAGE−3 HLAクラスII結合ペプチドに特異的なCD4’Tリンパ 球に対するTリンパ球の母集団を選択的に富化することを当業者に可能とする。
スII結合ペプチドをコードする核酸の単離を可能とする。核酸を用い、細胞外ま
たは原核もしくは真核宿主細胞内でMAGE−3 HLAクラスII結合ペプチド を産生させることができる。当業者周知の様々な方法を利用し、単離されたMA
GE−3 HLAクラスII結合ペプチドを得ることができる。例えば、発現ベク ターを細胞内に導入し、該ペプチドの産生を誘導するこができる。他の方法では
、mRNA転写物を細胞内にマイクロインジェクションするか、あるいは他の方
法で導入し、コードされたペプチドの産生を誘導することもできる。網状赤血球
ライゼート系などの細胞不含抽出液中mRNAの翻訳系を用い、ペプチドを産生
させることができる。本発明のMAGE−3 HLAクラスII結合ペプチドを含 むペプチド類は生体外で合成してもよい。当業者は単離されたMAGE−3 H LAクラスII結合ペプチドを得るために、既知ペプチド単離法を容易に使用する
ことができる。これらの方法は、免疫クロマトグラフィー、HPLC、サイズ排
除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーおよび免疫アフィニティ
クロマトグラフィーなどであるが、これらに限定されるものではない。これら単
離されたMAGE−3 HLAクラスII結合ペプチド、または該ペプチドとHL AクラスII分子、例えば、HLA−DRB1/13分子との複合体は、アジュバ
ントなどの物質と組合わせて、MAGE−3 HLAクラスII結合ペプチドの発 現により特徴づけられる疾患の治療に有用なワクチンを製造することができる。
さらに、ワクチンは細胞の表面上にMAGE−3 HLAクラスII結合ペプチド /HLA複合体を提示している細胞、例えば、樹枝状細胞、B細胞、非増殖性移
入体などから調製することができる。細胞をワクチンとして用いるすべての場合
において、これらはCD4+リンパ球を刺激するのに必要な成分の一方または両 方に対するコーディング配列をトランスフェクトした細胞であるか、またはトラ
ンスフェクションを必要とせずに両方の分子をすでに発現している細胞である。
ワクチンはまたMAGE−3 HLAクラスII結合ペプチドまたはその前駆体を コードする裸のDNAまたはRNAを包含し、それらは生体外で生産され、そし
て注射、粒子衝撃、鼻吸引および他の方法により投与される。「裸の核酸」型ワ
クチンは裸の核酸がコードする該ペプチドに特異的なCTLの生成を含む免疫応
答を刺激することが証明されている(Science 259:1745〜1748、1
993)。ワクチンはまたウイルス、リポソーム、または他の粒子(薬物送達に
有用なポリマー粒子を含む)にパッケージ化した核酸をも包含する。
II結合ペプチドとHLAクラスII分子との複合体を用い、当該技術上周知の標準
的技法により抗体を生産することもできる。抗体生産の一般的原理について報告
している標準的参考文献は以下のとおりである:カッティ(Catty, D.)、抗体 、実際的方法、第1巻、IRLプレス、ワシントンDC(1988);クライン
(Klein, J.)、免疫学:細胞−非細胞識別の科学、ジョン・ウイリー・アンド ・サンズ、ニューヨーク(1982);ケンネット(Kennett, R.)ら、モノク ローナル抗体、ハイブリドーマ、生物分析の新次元、プレナム・プレス、ニュー
ヨーク(1980);キャンプベル(Campbell,A.)、モノクローナル抗体の技
術、実験室技法および生化学と分子生物学、第13巻(バードン(Burdon, R.)
ら、編纂)、エルスビアー・アムステルダム(1984);およびアイゼン(Ei
sen, H.N.)、微生物学、第3版、デイビス(Davis, B.I.)ら、編纂(ハーパー
・アンド・ロウ、フィラデルフィア)(1980)。
フラグメント、該タンパク質またはそのフラグメントを発現する細胞および適切
なHLAクラスII分子などを動物に投与し、ポリクローナル抗体を誘導するなど
により調製される。モノクローナル抗体の産生は当該技術において周知の技法に
従う。本明細書に詳述するように、かかる抗体を用い、例えば、タンパク質を発
現する組織を同定すること、またはタンパク質を精製することができる。また、
抗体は特定の影像用標識試薬または抗癌剤、例えば、メトトレキセート、放射性
ヨード化化合物、リシンなどの毒物、他の細胞増殖抑制性または細胞溶解性薬剤
等々に結合することもできるが、これらに限定されるものではない。また、本発
明により調製される抗体は、好ましくは、本明細書に記載の当該ペプチド/HL
A複合体に特異的である。
、メラノーマ、頭部、頚部、肺または食道の偏平上皮癌、結腸直腸癌、骨肉腫、
頭部または頚部の非偏平上皮癌、卵巣腫瘍、リンパ性白血病、膀胱癌、前立腺癌
などである。
一つはMAGE−3 HLAクラスII結合ペプチドとHLAクラスII分子との複 合体に特異的な自己由来CD4+T細胞を、組織に表現型の異常細胞をもつ対象 に投与することである。かかるCD4+T細胞を細胞外で発生分化させることは 当業者の技術範囲内のことである。一般に、対象から採取した細胞のサンプル、
例えば、血液細胞を、該複合体を提示し、CD4-Tリンパ球を刺激する細胞と 接触させ、増殖させる。標的細胞はトランスフェクタント、例えば、COS細胞
、またはHLAクラスII分子を担持する抗原提示細胞、例えば、樹枝状細胞また
はB細胞である。これらのトランスフェクタントは対象のCD4+Tリンパ球と 組合わせたときに、その表面の所望の複合体を提示し、その増幅を刺激する。C
OS細胞は他の適切な宿主細胞同様、あまねく入手し得る。CD4+Tリンパ球 の特異産生については下記のとおりである。クローンとして増殖したCD4Tリ
ンパ球を次いで対象に投与する。CD4+Tリンパ球は対象の免疫応答を刺激し 、それによって所望の治療目的を達成する。
複合体を提示していることを前提とする。これは非常に簡単に定量することがで
きるが、それはこの分野の技術者が特定のHLA分子を提示する細胞の同定法に
、同様に、関連する配列、この場合はMAGE−3配列であるが、このDNAを
発現する細胞をいかに同定するかについて精通しているからである。
D4+Tリンパ球は様々な方法で生体内刺激することができる。その方法の一つ が該複合体を発現する非増殖性細胞を使用することである。この方法に使用する
細胞は通常該複合体を発現する細胞、例えば、樹枝状細胞または該複合体の提示
に必要な遺伝子の一方または両方をトランスフェクトした細胞である。チェン(
Chen)ら(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:110〜114、1991)
は治療プログラムにHPV−E7ペプチドを発現するトランスフェクト細胞の使
用についてこの方法を例示している。多様な細胞型が用い得る。同様に、対象の
遺伝子の一方または両方を担持するベクターを使用し得る。ウイルスまたは細菌
のベクターがとりわけ好ましい。例えば、MAGE−3 HLAクラスII結合ペ プチドをコードする核酸は、特定の組織または細胞型においてMAGE−3 H LAクラスII結合ペプチドの発現を指令するプロモーターおよびエンハンサーに
作動可能に結合することができる。該核酸は発現ベクター内に組込まれる。発現
ベクターは未修飾の染色体外核酸、プラスミド、またはMAGE−3 HLAク ラスII結合ペプチドをコードする核酸などの外来性核酸を挿入し得るように構築
または修飾したウイルスゲノムなどである。MAGE−3 HLAクラスII結合 ペプチドをコードする核酸はレトロウイルスゲノムに挿入してもよく、それによ
って該核酸が標的組織または細胞型のゲノムに組込まれるのを容易にする。これ
らの系において、対象の遺伝子は微生物、例えば、ワクチニアウイルス、レトロ
ウイルスまたは細菌BCG、およびその物質の事実上の「感染」宿主細胞により
担持される。得られる細胞は対象の複合体を提示し、自己由来CD4+T細胞に より認識され、次いで増殖する。
る。もしMAGE−3 HLAクラスII結合ペプチドがHLAクラスII結合部分 より大きければ、それを要すれば処理加工してHLA分子のペプチドパートナー
を産生させることが可能である一方、TRAはさらにプロセシングする必要もな
く提示される。一般に、対象は皮内注射により有効量のMAGE−3 HLAク ラスII結合ペプチドを受ける。当該技術の標準的免疫化プロトコールに従い、最
初の投与に続きブースター投与を行う。
含有MAGE−3ポリペプチドに結合させる(例えば、融合させる、接合させる
)ことによる。特に好ましいのはヒト不変鎖Iiを含むMAGE−3融合タンパ
ク質である。
ためにMAGE HLAクラスII結合ペプチドを含むことができる。例えば、以 下に説明するように、MAGE−3タンパク質は細胞中で処理加工されてHLA
クラスIとHLAクラスII両方の応答を生じる。数種のかかるペプチドがUS特
許5,585,461および5,591,430、並びにゴウグラー(Gaugler )ら(J. Exp. Med. 179:921〜930、1994)、バン・デル・ブル ーゲン(van der Bruggen)ら(Eur. J. Immunol. 24:3038〜3043、
1994)、およびハーマン(Herman)ら(Immunogenetics 43:377〜3 83、1996)に記載されている。HLAクラスIおよびクラスII分子に結合
するMAGE−3ペプチド(またはかかるペプチドをコードする核酸)を投与す
ることにより、Tヘルパー細胞とTキラー細胞が誘発され、免疫応答性が改善さ
れることになる。
/またはクラスIIを介して免疫応答性を増大させることができる。癌細胞が1種
または2以上の腫瘍関連遺伝子を発現することは十分に立証されている。特定の
対象がさらなる腫瘍遺伝子を発現しているかどうか、そして前記のMAGE−3
組成物およびワクチンにおけるかかる遺伝子の発現産物から誘導されるHLAク
ラスIおよび/またはクラスII結合ペプチドを含んでいるかどうかを決定するこ
とは、当業者にとって通常の実験範囲内のことである。
ードする核酸である。該エピトープは連続したまたは重なり合った様式で並んで
おり(例えば、トムソン(Thomson)ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92 :5845〜5849,1995;ギルバート(Gilbert)ら、Nature Biotechn
ol. 15:1280〜1284、1997、参照)、本来のフランキング配列を
もつものまたはもたないものとあるが、要すれば無関係のリンカー配列により隔
てられていてもよい。ポリトープは処理加工され、免疫応答を生成する免疫系に
より認識される個々のエピトープを生成する。
による)と、およびMAGE−3 HLAクラスI結合ペプチド(その一部を下 記掲載する)と組合わせ、「ポリトープ」を形成することができる。免疫応答を
誘発または増強するために投与し得る代表的な腫瘍関連ペプチド抗原は腫瘍関連
遺伝子およびコードされたタンパク質から誘導される;例えば、MAGE−1、
MAGE−2、MAGE−3、MAGE−4、MAGE−5、MAGE−6、M
AGE−7、MAGE−8、MAGE−9、MAGE−10、MAGE−11、
GAGE−1、GAGE−2、GAGE−3、GAGE−4、GAGE−5、G
AGE−6、BAGE−1、RAGE−1、LB33/MUM−1、PRAME
、NAG、MAGE−Xp2、MAGE−Xp3,MAGE−Xp4、チロシナ
ーゼ、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、メラン−A、MAGE−C1、MAGE
−C2、NY−ESO−1、SSX−1、SSX−2(HOM−MEL−40)
、SSX−1、SSX−4、SSX−5、SCP−1およびCT−7などである
。例えば、腫瘍特異抗原性ペプチドは以下の表Iに掲載したものを含む。
り(例えば、クーリー(Coulie)、Stem Cells 13:393〜403、199 5、参照)、そこに記載のものと同様の方法で本発明において使用することがで
きる。当業者は分子生物学の標準的手法に従い、1種またはそれ以上のMAGE −3ペプチドおよび1種または2以上の前記腫瘍拒絶ペプチドからなるポリペプ チドまたはかかるポリペプチドをコードする核酸を調製することができる。
応答性刺激ペプチドのグループであり、種々の配列で結合し合うことができる(
例えば、鎖状に連接する、部分的に重ね合わせる)。該ポリトープ(またはポリ
トープをコードする核酸)は標準的免疫プロトコールに従い、例えば、動物に投
与し、免疫応答の促進、増強および/または刺激におけるポリトープの有効性を
試すことができる。
を形成することができる。ポリトープをワクチンとして使用することは技術上周
知である(トムソン(Thomson)ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92(1 3):5845〜5849,1995;ギルバート(Gilbert)ら、Nature Biot
echnol. 15(12):1280〜1284、1997;トムソンら、J. Immun
ol. 157(2):822〜826、1996;タム(Tam)ら、J. Exp. Med.
171(1):299〜306、1990)。例えば、タムは、MHCクラスI
およびクラスII結合エピトープ両方からなるポリトープは、マウスモデルにおい
て抗体と防御的免疫性を成功裏に生成したことを示した。タムはまた、エピトー
プの「ひも」からなるポリトープが処理加工されて個々のエピトープを生じ、そ
れがMHC分子により提示されて、CTLにより認識されることを証明した。こ
のように、エピトープの種々の数と組合わせを含むポリトープを調製し、CTL
による認識と免疫応答を増強させる有効性について試験することができる。
瘍に発現されるということが知られている。ポリトープは特定の対象に発現され
た腫瘍拒絶抗原のサブセットを提示するエピトープの異なる組み合わせに対応し
て調製することができる。ポリトープはまた腫瘍タイプにより発現されることの
知られている腫瘍拒絶抗原の広範囲スペクトルを反映させて調製することもでき
る。ポリトープはかかる治療を必要とする対象にポリペプチド構造として、また
は技術上既知の核酸送達システムを使用して導入することができる(例えば、オ
ールソップ(Allsopp)ら、Eur. J. Immunol. 26(8):1951〜1959
、1996)。アデノウイルス、ポックスウイルス、Ty−ウイルス様粒子、ア
デノ関連ウイルス、プラスミド、細菌、等々がかかる送達に用い得る。ポリトー
プ送達システムはマウスモデルにより試験し、該送達システムの有効性を決定す
ることができる。該システムはヒトの臨床試験でも試験することができる。
たはペプチド成分と共に投与してもよい。かかる免疫応答高揚化合物はアジュバ
ントまたはサイトカインとして分類してもよい。アジュバントは抗原の受容部分
を刺激し(細胞外またはマクロファージ内)、マクロファージを活性化し、そし
てリンパ球の特定セットを刺激することにより免疫応答を高める。多様なアジュ
バントが当該技術上周知である;特別な例としては、MPL(スミスクライン・
ビーチャム)、サルモネラ・ミネソタRe595リポ多糖の精製と酸水解により
得られる同族体、QS21(スミスクライン・ビーチャム)、キリヤ・サポナリ
ア(Quillja saponaria)から精製された精製QA−21サポニン、DQS21 (PCT出願WO96/33739に記載)(スミスクライン・ビーチャム)、
ビタミンE,および生分解性油、例えば、スクワレンおよび/またはトコフェロ
ール、から調製される種々の油中水懸濁液などである。サイトカインはリンパ球
刺激性の結果として予防接種プロトコールにも有用である。かかる目的に有用な
多くのサイトカインが当業者既知であり、例えば、ワクチンの防御効果を増強す
ることが示されているインターロイキン−12(IL−12)(Science 268
:1432〜1434、1995)、GM−CSFおよびIL−18などである
。
に使用することができる。これらはタンパク質または核酸のいずれかの形態で提
供される同時刺激性分子を包含する。かかる同時刺激性分子はB7−1およびB
7−2(それぞれ、CD80およびCD86)分子を包含し、樹状細胞(DC)
上に発現され、T細胞上に発現されたCD28分子と反応する。この相互作用は
抗原/MHC/TCR刺激(シグナル1)T細胞に対し同時刺激を与え、T細胞
増殖とエフェクター機能を増大する。B7はまたT細胞上のCTLA4(CD1
52)と相互作用するが、CTLA4とB7リガンドを含む研究結果は、B7−
CTLA4相互作用が抗腫瘍免疫性とCTL増殖作用を増強すると述べている(
ツエン(Zheng)ら、Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 95:6284〜628
9、1998)。
有効な抗原提示細胞(APC)ではない。B7発現の誘導は腫瘍細胞がより効率
的にCTL増殖とエフェクター機能を刺激することを可能とする。B7/IL−
6/IL−12の同時刺激を組合わせると、T細胞母集団中のIFN−ガンマお
よびTh1サイトカインプロフィールを誘発して、さらに高揚したT細胞活性に
至らしめることが示されている(ガジェウスキー(Gajewski)ら、J. Immunol.
154:5637〜5648、1995)。B7による腫瘍細胞トランスフェク
ションは養子移入免疫療法に対する生体外CTL増殖に関連してワング(Wang)
らにより考察されている(J. Immunother. 19:1〜8、1996)。B7分 子に対する他の送達メカニズムは核酸(裸のDNA)免疫法(キム(Kim)ら、N
ature Biotechnol. 15:7:641〜646、1997)およびアデノとポッ
クスなどの組換えウイルス(ウエンドナー(Wendtner)ら、Gene Ther. 4:7 26〜735、1997)を含む。これらのシステムはすべてB7と他の選択し
た分子、例えば、本明細書にて考察した抗原または抗原のフラグメント(ポリト
ープを含む)またはサイトカインとの同時発現用発現カセットの構築と使用を可
能にする。これらの送達システムは生体外での適切な分子の誘導に、また生体内
予防接種の局面に対し使用することができる。抗−CD28抗体を生体外または
生体内でのT細胞の直接刺激に使用することも考えられる。
発現され、T細胞上で発現されたCD2と相互作用する。この相互作用はT細胞
IL−2とIFN−ガンマの産生を誘導し、B7/CD28同時刺激相互反応を
補完するが、それに置換わるものではない(パラ(Parra)ら、J. Immunol.、1
58:637〜642、1997;フェントン(Fenton)ら、J.Immunother.、 21:95〜108、1998)。
びある種腫瘍細胞上に発現されたICAM−1と相互作用する。この相互作用は
T細胞IL−2とIFN−ガンマの産生を誘導し、B7/CD28同時刺激相互
反応を補完するが、それに置換わるものではない(フェントンら、1998)。
LFA−1はB7について上に考察した種々の方法により予防接種プロトコール
に提供し得る同時刺激分子のさらなる例である。
ガンド)分子およびDCにより発現されるCD40分子間の相互作用を介したT
h細胞の介助を必要とする(リッジ(Ridge)ら、Nature 393:474、19
98;ベンネット(Bennett)ら、Nature 393:478、1998;シェーン
ベルガー(Schoenberger)ら、Nature393:480、1998)。この同時刺
激シグナルのこのメカニズムはB7のアップレギュレーションとDC(APC)
による会合したIl−6/IL−12産生に関与しているようである。このよう
にCD40−CD40L相互作用はシグナル1(抗原/MHC−TCR)とシグ
ナル2(B7−CD28)との相互作用を補完する。
答を高めることが期待されるが、該抗原は通常炎症の環境外で遭遇するか、また
は非専門のAPC(腫瘍細胞)により提示される。この状況において、Th介助
およびB7同時刺激シグナルは提供されない。このメカニズムは、抗原パルスD
Cベース治療法の関係で、またはThエピトープが既知の腫瘍関連抗原前駆体内
に限定されていない状況において用いられる。
れる。かかる製剤は常套的に医薬的に許容し得る濃度の塩、緩衝剤、保存剤、適
合し得る担体、アジュバントおよびサイトカインなどの補助的免疫増強剤、およ
び任意に他の治療剤を含有していてもよい。
量で所望の応答を刺激する量である。癌治療の場合、所望の応答で癌の進行を阻
害する。このことは疾患の進行を一時的に減速することをも含むが、より好まし
くは疾患の進行を永久に停止させることである。免疫応答を誘導する場合、所望
の応答とは、採用したMAGE−3免疫原に特異的な抗体またはTリンパ球が増
加することである。これら所望の応答は常套の方法によりモニターするか、本明
細書で考察した本発明の診断方法に従いモニターすることができる。
抗体価の増加、細胞毒性リンパ球のクローン性増殖、または他のある種所望免疫
性応答に至る体液性抗体応答の刺激を意味する。免疫原の用量は投与形態に応じ
て、1ナノグラム/キログラムないし100ミリグラム/キログラムの範囲で有
効であると思われる。好ましい範囲は体重1キログラム当たり500ナノグラム
と500マイクログラムの間であると思われる。絶対量は投与のために選択した
物質、投与が単回か複数回か、また、対象個々人のパラメーター、例えば、年齢
、身体状態、サイズ、体重および病状を含め、様々なファクターに依存する。こ
れらのファクターは当業者既知であり、通常の実験法を超えることなく処理し得
る。
T細胞により提示される抗原性ペプチドを同定した。その戦略は正常血液提供者
の樹状細胞に組換えMAGE−3タンパク質を装入し、それら抗原提示細胞を用
いて生体外での特異CD4リンパ球の活性化と増殖を誘導することからなる。そ
のプロトコールを以下の(A、B、C)および図1で説明する。
した。末梢血単核細胞(PBMC)はリンホプレップ(ニコメッド・ファーマ、
オスロ、ノルウェー)上の遠心分離により単離した。血小板によるPBMCの汚
染を最少とするために、該製剤をまず室温、20分/1000rpmで遠沈した
。殆どの血小板を含む上層20〜25mlを除去したのち、遠沈管を室温で20
分/1500rpmで遠沈した。PBMCは2−アミノエチルイソチオウロニウ
ム(シグマ)処理ヒツジ赤血球でロゼット形成させ、T細胞から分離した。リン
パ球分離PBMCを、培養フラスコ中(ファルコン)、37℃で2時間、L−ア
スパラギン(0.24mM)、L−アルギニン(0.55mM)、L−グルタミ
ン(1.5mM)および1%自己由来血清を補填したRPMI 1640培地中 (完全培地)、2×106細胞/mlの濃度で付着させた。非付着細胞を廃棄し 、付着細胞を完全培地中、IL−4(100U/ml)およびGM−CSF(1
00ng/ml)の存在下培養した。培養物は2日目および4日目に培地5ml
を除き、IL−4(100U/ml)およびGM−CSF(100ng/ml)
を含む新たな培地を添加して培養した。5日目に、非付着細胞集団を富化樹枝状
細胞の供給源として用いた。
・バイオテック、ドイツ)に結合した抗−CD8モノクローナル抗体を用いて、
製造業者推奨のダイナル・マグネットにより選別、負の選択によりロゼット形成
T細胞から単離した。
。ヒト組換えIL−4、IL−6およびIL−12は我々の実験室で入手した。
ヒトIL−7はジェンザイム(ケンブリッジ、MA)から購入した。ヒト組換え
GM−CSFはサンド(サンド薬品(株)、バーゼル、スイス)から供与された
。ヒト組換えTNF−αはR&Dシステム(アビンドン、イギリス)から購入し
た。
ミス・クライン・コーポレーション製薬会社(リクセンザート、ベルギー)が製
造し、標準的クロマトグラフィー手法により精製した。自己由来樹枝状細胞は、
1%自己由来血清、IL−4(100U/ml)、GM−CSF(100ng/
ml)およびTNF−α(1ng/ml)補填RPMI培地中、組換えHis−
MAGE−3タンパク質(20μg/ml)の存在下、37℃、5%CO2中1 8〜20時間培養した。His−MAGE−3タンパク質−パルス樹枝状細胞を
洗浄し、1丸底マイクロウエル当たり104個ずつ、10%ヒト血清、L−アス パラギン(0.24mM)、L−アルギニン(0.55mM)およびL−グルタ
ミン(1.5mM)補填イスコブ培地200μl中、IL−6(1000U/m
l)およびIL−12(10ng/ml)の存在下、105個のCD4+Tリンパ
球に添加した。CD4-Tリンパ球はHis−MAGE−3タンパク質で新たに パルスした自己由来樹枝状細胞で弱く再刺激し、IL−2(10U/ml)およ
びIL−7(5ng/ml)補填培地中で増殖させた。
ンパク質でパルスした自己由来EBV−B細胞により刺激したときのTNFの産
生能を培養開始から35日間評価した;自己由来EBV−B細胞は、20μg/
mlのHis−MAGE−3タンパク質または陰性コントロールとしての卵アル
ブミン(シグマ)の存在下に18〜20時間培養した。本明細書でいうEBV−
B細胞とはエプシュタイン・バー・ウイルスで不死化したB細胞である。EBV
−B細胞は技術上標準的手法に従って調製した。タンパク質パルスEBV−B細
胞を洗浄し、1丸底マイクロウエル当たり5,000個ずつ、L−グルタミン、
L−アルギニン、L−アスパラギン、10%ヒト血清およびIL−2(25U/
ml)補填イスコブ培地150μl中、2,500個のCD4+Tリンパ球に添 加した。18〜20時間後、上清を採取し、以前に記載したTNF−感受性WE
HI164−13細胞に対する毒性を試験することによりTNF含量を評価した
。TNFを特異的に産生するCD4+細胞系(図2)は、刺激細胞として外来性 His−MAGE−3タンパク質でパルスした自己由来EBV−B細胞系および
支持細胞として同種異型EBV−B細胞(LG2−EBV)を用い、限界希釈に
よりクローン化した。CD4T細胞系は、His−MAGE−3タンパク質でパ
ルスした自己由来EBV−B細胞および50U/mlのIL−2補填培地中のL
G2−EBVで弱く再刺激することにより培養維持された。
た自己由来EBV−B細胞に対する特異性につき試験した;EBV−B細胞(5
00,000/ml)はMAGE−3組換えタンパク質20μg/mlの存在下
、37℃で18〜20時間培養した。タンパク質パルスEBV−B細胞を洗浄し
、1丸底マイクロウエル当たり5,000個ずつ、L−グルタミン、L−アルギ
ニン、L−アスパラギン、10%ヒト血清およびIL−2(25U/ml)補填
イスコブ培地150μl中、2,500個のCD4+Tリンパ球に添加した。1 8〜20時間後、上清を採取し、TNFおよびIFN−γの分泌につき評価した
。IFN−γの産生はメジニックス・ダイアグノスティック−バイオソース(フ
ロイラス、ベルギー)からの試薬を用い、我々の実験室で開発したELISAア
ッセイにより測定した。簡単に述べると、アッセイは標準的ELISAであり、
細胞上清と培養するに先立って、プラスティック・マイクロタイタープレートの
ウエルにIFN−γ抗体を被覆させ、産生されたIFN−γ量を定量した。他の
IFN−γ ELISAアッセイ法を用いても産生されたIFN−γを測定する ことができた。数種のMAGE−3特異クローンはB6系から入手した(図3)
。
る(図3):MAGE−3パルスEBV−B細胞は、MAGE−3特異CD4+ クローンと共に、1/20希釈で用いた保存−遊離モノクローナル抗体の連続的
存在下、8%CO2中、37℃24時間培養した。(HLA−DRに対する)モ ノクローナル抗体2B6は認識能を失ったが、一方、(HLA−A、B、Cに対
する)認識はモノクローナル抗体W6/32の存在下不変である。
に、MAGE−3タンパク質配列の一部に対応する16アミノ酸のペプチドを合
成し、自己由来EBV−B細胞に導入し、その認識を試験した(図4および5)
。合成ペプチドはDMSO(メルク)に溶解し、最終濃度500μMまたは50
μMで用いた。EBV−B細胞(1丸底マイクロウエル当たり5,000個)は
異なるペプチドの存在下8%CO2内37℃で2時間培養した。CD4’クロー ンは次いで1ウエル当たり2,500細胞ずつ添加した。アッセイ培地はL−グ
ルタミン、L−アルギニン、L−アスパラギン、10%ヒト血清およびIL−2
(25U/ml)補填イスコブ培地であった。18〜20時間後、上清を採取し
、TNF−αおよびIFN−γの分泌につき評価した。IFN−γの産生はメジ
ニックス・ダイアグノスティック−バイオソース(フロイラス、ベルギー)から
の試薬を用い、我々の実験室で開発したELISA試験法(20〜4000pg
/ml)により測定した。
た。非生理的濃度のペプチドはT細胞クローンの非特異活性化に導くことが可能
である。事実、ペプチドMAGE−3159-174(図4、ペプチド335;配列番 号6)は、500μMで用いたとき、クローンB6/34およびB6/37の活
性化を誘発したが、このペプチドは50μMで用いたときにこれらのクローンを
活性化するのに有効ではなかった(図5)。それに対し、ペプチドRKVAEL
VHFLLLKYRA(MAGE−3111-126;図4、ペプチド323;配列番 号3)およびELVHFLLLKYRAREPV(MAGE−3115-130;配列 番号4)は、生理的濃度で用いたとき、クローンB6/34およびB6/37に
よるTNF−αおよびIFN−γの産生を特異的に促進した。これら2種のペプ
チドはまたB6クローンの増殖を誘発することも可能であった(図6)。
してのこれらCD4+クローンによるサイトカイン分泌はHLA−DRに限定さ れる。クローンB6/37により利用されたHLA制限要素をさらに明らかにす
るために、さらなるEBV−B細胞系をぺプチド提示に用いた。AUMA−EB
V、LB1555−EBV、GERL−EBVのHLA血清型が明らかにしたこ
とは、3種の細胞型すべてが共有するクラスII分子はHLA−DRB1/130
2に制限されたことである。さらに、ADET−EBVはMAGE−3115-130 ペプチドを有効に提示することが判明し、また、これら細胞のHLA血清型はH
LA−DRB1/1301であることが判明した。MAGE−3115-130でパル スしたときに、上記のように他の数種のEBV−B細胞系がクローンB6/34
およびB6/37を刺激する能力についてスクリーニングし、HLA−DRB1
/1301およびHLA−DRB1/1302両方が該ペプチドを提示し得るこ
とを確認し、あるいは他のHLA−DRB1/13提示分子を明らかにする。
著に変わり、そのアミノ末端およびカルボキシ末端双方で伸長を可能とする。我
々はペプチドMAGE−3111-126およびMAGE−3115-130の双方が、クロー
ンB6/34およびB6/37を特異的に刺激し、一方、ペプチドMAGE−3 107-122 およびMAGE−3119-134はこれらのクローンを活性化し得ないことを
証明した。したがって、MAGE−3115-126ペプチド(ELVHFLLLKY RA;配列番号9)がB6/34およびB6/37クローンの活性化にとって必
要な最少12アミノ酸モチーフである。期待どおりに、ペプチドMAGE−311 5-126 はクローンB6/37によるIFN−γの有意な産生を誘導する(図8) 。1個またはそれ以上の残基を欠失させ短くしたペプチドも作製した。短縮ペプ
チドの幾つか、例えば、MAGE−3116-126(配列番号10)およびMAGE −3117-126(配列番号11)もクローンB6/37によるIFN−γの産生を 誘導した(図8)が、減量したMAGE−3118-126(配列番号12)はIFN −γ有意量の産生を誘導しなかった。
パク質(LAMP−1)との融合タンパク質としてEBV B細胞系M22EB V(HLA A1 DR13)で発現させ、HLAクラスII分子におけるMAGE
−3誘導ペプチドの提示を標的とした。Ii MAGE−3を形質導入すると、 HLAクラスIIにおいてペプチドを提示したが、これはMAGE−3 DR13 エピトープと反応するCD4T細胞クローンLB1555CD4 426/B6 .37による認識により測定される。さらに、EBV B細胞でのIi MAGE
−3の発現はHLAクラスIにおけるペプチド提示に至ったが、これはMAGE
−3.A1特異CTLクローンLB705 434/1の活性化により定量され た。これに対し、MAGE−3−LAMP−1融合タンパク質の発現はHLA分
子においてMAGE−3ペプチドの提示を僅かに増強しただけであった。したが
って、IiをMAGE−3に結合してワクチンとして使用し、ILAクラスIお
よびクラスII両方においてMAGE−3誘導ペプチドの提示を誘導することがで
きる。
されたプラスミドはピーターズ博士(J. Pieters)からの恵与による(バーゼル
免疫学研究所、バーゼル、スイス、J. Cell Science 106:831〜846、
1993)。 LAMP1:プラスミドpCMV−sig E7−LAMP1はウー博士(T.
Wu)からの恵与による(ジョーン・ホプキンス大学、ボルチモア、MD、米国;
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:11671〜11675、1995)。 pMFG:プラスミドpMFGはダノス博士(O. Danos)からの恵与による(
ソマティックス・テラピー・コーポレーション、アラメダ、CA、米国)。
’部位に、BgIII部位を3’部位にPCRにより導入した;その際、プライマ
ーとしてNcoI−センス:5’−TTTCCATGGCTCTTGAGCAG
AGGAGTCAGC−3’(配列番号14)およびBgIII−アンチセンス:
5’−CCCAGATCTTCACTCTTCCCCCTCTCTC−3’(配
列番号15)〔下線はNcoIとBgIIIに対する認識部位〕を使用した。PC
R産物をpCR2.1にクローン化し、標準法に従い配列決定した。NcoI−
BgIII増幅産物を酵素NcoIとBamHIで開裂したpMFGにクローン化
した。
尾部およびトランスメンブラン領域)は、lipSV51Lを鋳型として用いる
PCRにより増幅した。以下のプライマーを用いた:hu−Iiセンス:5’−
TTTCCATGGATGACCAGCGCGAC−3’(配列番号16)およ
びhu−Iiアンチセンス:5’−TTTGGATCCGGAAGCTTCAT
GCGCAGGTTC−3’(配列番号17)〔下線はNcoIとBamHIに
対する認識部位〕。PCR産物をpCR2.1にクローン化し、標準法に従い配
列決定した。NcoI−BamHI増幅産物を酵素NcoIとBamHIで開裂
したpMFGにクローン化し、pMFG−Iiとした。
HI部位をもつBgIII認識部位をMAGE−3 cDNAの5’−末端にPC Rにより導入した。その際、プライマーとして、BgIII−センス:5’−TT
TAGATCTTGAGCAGAGGAGTCAGC−3’(配列番号18)お
よびBgIII−アンチセンス(配列番号15)〔下線はBgIIIに対する認識部 位〕を用いた。PCR産物(BgIII.MAGE−3.BgIII)をpCR2.1
にクローン化し、標準法に従い配列決定した。
DNAを含む組換えプラスミドを制限フラグメント分析により同定した。
ンブラン・ドメインと細胞質尾部をコードするcDNAは、pCMV−sigE
7−LAMP1を鋳型として用いるPCRにより増幅した。LAMP−1のシグ
ナルペプチド用に設定されたプライマーは以下のとおりであった:Sigセンス
:5’−CCCCCATGGCGGCCCCCGGC−3’(配列番号19)お
よびSigアンチセンス:5’−GGGGGATCCTCAAAGAGTGCT
GA−3’(配列番号20)〔下線はNcoIとBamHIに対する認識部位〕
。このcDNA3’末端でのBamHI部位はBgIII.MAGE−3.BgIII
フラグメントの5’末端にBgIII部位をもつ枠内にある。増幅産物をpMFG にクローン化し、pMFG−Sigを調製した。
れたプライマーは以下のとおりであった:LAMP−1センス:5’−GGGG GATCC TAACAACATGTTGATCCCC−3’(配列番号21)お
よびLAMP−1アンチセンス:5’−GGGAGATCTCTAGATGGT
CTGGGTCTGATAGCCGGC−3’(配列番号22)〔下線はBam
HIとBgIIIに対する認識部位〕。増幅産物は標準法に従い配列決定し、pM FG−Sigにクローン化し、シグナルペプチドとトランスメンブラン配列の結
合位置でユニークBamHI部位をもつプラスミドpMFG−Sig.LAMP
−1を得た。プラスミドpMFG−Sig.MAGE−3.LAMP−1を生成
させるために、BgIII.MAGE−3.BgIII cDNAから単離したBgIII
−BamHIフラグメントをBamHIで開裂したpMFG−Sig.LAMP
−1にクローン化した。このクローニング工程にて、アミノ酸240〜314を
コードするMAGE−3の3’末端が切除された。
、RSVプロモーターとpPGKヒグロ選択可能なマーカーとをもつモロニーG
agPol−IRES−Lyt2構築物で293T細胞を安定にトランスフェク
ションすることにより生成されたものである。これらの細胞には、次いで、CM
Vプロモーターにより駆動、ジフテリアトキシン抵抗遺伝子(pHED−7)で
同時選択したモロニー両種性エンベロープ遺伝子を安定的に移入した。この産生
性細胞系はヘルパーウイルス不含である。
ト、ベルギー)に継代した。
に、LG2−EBV B細胞系は非癌対象LG2(HLA A24 A32 DR7
DR14)から生成させた。MZ2−MEL.43は対象MZ2からのメラノ ーマ細胞系である。EBV形質転換B細胞系およびMZ2−MEL.43は、1
0%仔ウシ血清(FCS)、0.24mM L−アスパラギン、0.55mM L
−アルギニンおよび1.5mM L−グルタミン(AAG)補填イスコブ改変ダ ルベッコ(ID)培地中で培養した。
ピトープに向け、CD8+T細胞の初代培養で非癌対象LB705(HLA A1
A2)およびMAGE−3.A1ペプチドでパルスした照射自己由来PBL( 末梢血リンパ球)から生成させた。CD4T細胞クローンLB1555CD4 426/B6.37はMAGE−3.DR13エピトープを認識し、対象LB1
555DESA(HLA DR3 DR1302)のT細胞および精製MAGE−
3タンパク質と前培養した自己由来単球誘導樹枝状細胞の初代培養により同定し
た。T細胞クローンは、10%熱不活化ヒト血清(HS)、AAGおよび50U
/ml組換えヒトIL−2(rh IL−2)補填ID中、放射支持細胞(LG 2−EBV、プールしたヒトPBL)および特異的刺激細胞(CTL434/1
に対するMZ2−MEL−43、またはCD4T細胞クローン426/B6.3
7に対するMAGE−3タンパク質と前培養したDESA−EBV)の存在下に
培養した。
MAGE−3、MFG−Ii.MAGE−3、MFG−Sig.MAGE−3.
LAMPおよびMGF−EGFP(増強グリーン蛍光タンパク質レポーターをコ
ード)をフェニックスAMPHOパッケイジング細胞にトランスフェクションに
より導入した。MGFレトロウイルス・ベクターはモロニー・マウス白血病ウイ
ルスから誘導され、薬物抵抗マーカーを欠いているか、挿入されたcDNA以外
の他の潜在的抗原性タンパク質を発現しない(リビエール(Riviere)、Proc. N
atl. Acad. Sci. USA 92:6733〜6737、1995)。トランスフ ェクション手法はグラハムおよびバン・デル・エブ(Graham and van der Eb) (
Virology 54:536〜539)のリン酸カルシウム−介在トランスフェクシ ョン・プロトコールの改良法である。
ラスコ底部に均等に分散させた。細胞を37℃、5%CO2下で培養した。トラ ンスフェクション時、細胞が70〜80%の集密度に達したとき、培地を除き、
25mMクロロキン含有フェニックスAMPHO細胞増殖培地の新たなもの14
mlに置き換えた(シグマ・ケミカル(株)、セントルイス、MO、米国)。ト ランスフェクション・カクテルは50ml試験管内で、40μgのレトロウイル
ス・ベクタープラスミドDNAを水に加え、最終容量1575μlに希釈して調
製した。このDNA溶液に2M CaCl2(シグマ)225μlを加えた。次い
で、1800μlの2xHeBS(蒸留水に溶解した50mM HEPES、1 0mM KCl、12mMデキストロース、280mM NaClおよび1.5m
M Na2HPO4;0.2μフィルターで濾過し、−20℃で保存)を該DNA /CaCl2溶液に滴下し、自動ピペットで15秒間激しく泡立てた。DNA/ CaCl2/HeBS混合物を細胞上に直ちに滴下し、フラスコをゆるやかに渦 巻き状に回してDNA/CaPO4粒子の均一な混合を確実にした。細胞を37 ℃/5%CO2で7ないし9時間培養し、クロロキン含有培地を新鮮なフェニッ クスAMPHO細胞増殖培地と取り替えた。レトロウイルス上清収得の約24時
間前に、フェニックスAMPHO培地を除き、2.5%FCSのみを含有するE
BV細胞増殖培地(イスコブ培地)9mlにゆるやかに置き換えた。トランスフ
ェクションの48時間後、レトロウイルス上清を取得するために、細胞から培地
を除き、0.45μフィルターで濾過して細胞片を除去した。取得・濾過後、ウ
イルス含有培地を氷上に保ち、適当な容量に分割して15mlポリプロピレン管
に入れ、−80℃で保存した。MFG−EGFP移入したフェニックスAMPH
O細胞はトランスフェクションの有効性につきFACS分析により検定した。
とにより感染させた。標的細胞を60nm組織培養プレート(ファルコン)にて
1.0×106細胞の密度で感染カクテル4ml中再懸濁した。該プレートはI EC遠心機ロータータイプ228にて、32℃、1200rcfで2時間遠心し
た。形質導入すべき各プレートに対し、注入カクテル4mlは、EBV細胞増殖
培地にてウイルス上清を1:2に希釈し、プロタミン硫酸塩(レオ)を最終濃度
6μg/mlとなるように添加し調製した。湿潤インキュベーター中37℃でさ
らに2時間培養した後、遠心し、細胞を標的細胞増殖培地4mlに移した。この
形質導入サイクルは細胞の塗布後直ちに実施し、24時間および48時間目で繰
り返した。感染EBV細胞は、3回目の感染サイクルの24時間後および48時
間後にFACS分析により、EGFPレポーター遺伝子の発現に対して検定した
。
ート中、10%HS、AAGおよび50U/mlのrhIL−2含有ID培地1
00μl中にて、5000個のレトロウイルス形質導入MZ2−EBVのEBV
B細胞、またはLG2−EBV B細胞の存在下に一夜培養した。同時培養はす
べて3回繰り返し実施した。培養上清50μlをIFN−γの存在につきELI
SA(IFN−γELISA、バイオソース)により検定した。要約して述べる
と、抗ヒトIFN−γAbで予め被覆したELISAプレートを洗浄し、培養上
清50μlおよびビオチニル化抗ヒトIFN−γAb(ID中1:1250、1
0%HS、AAG)と共に室温(RT)で2時間培養した。3回洗浄した後、プ
レートを1ウエル当たり50μlの西洋わさびペルオキシダーゼ接合ストレプト
アビジン(PBS/0.5BSA中1:3000)とRT、30分培養し、TM
B基質により検出し、H2SO4で反応を停止した。光学濃度を450nmで読み
取った。4000pg/mlのIFN−γを含むサンプルを1:2に希釈し、標
準として用いた。
0分間標識した。細胞を洗浄し、1×104個/mlに再懸濁した。コントロー ルアッセイにおいては、MAGE−3.A1ペプチドを1μMの濃度で細胞懸濁
液に加えた。LB705CTL434/1 T細胞を、V型96穴プレート中1 ウエル当たり1000個の標識標的細胞と、標的細胞に対するエフェクター比を
30ないし1および10倍希釈として培養した。4時間後、クロム放出(ER)
を1部100μl上清にて測定した。培地のみ、または1%トリトン中にて培養
した標的細胞を、それぞれ、最少(SR)および最大(MR)51Cr放出とみな
した。サンプル中の実験的51Cr放出百分比を (ER−SR/MR−SR)×100% として計算した。
−3 LAMP)、MFG MAGE−3(MZ2 EBV−MAGE−3)また はMFG EGFP(MA2 EBV−EGFP)にて形質導入した。形質導入し
た細胞はMAGE−3.A1エピトープと反応するCD4T細胞クローンLB1
555CD4 426/B6.37の存在下に一夜培養した。該T細胞クローン はMZ2−EBV−Ii MAGE−3を認識し、ELISAで測定した培養上 清中のIFN−γ放出により定量された(図9)。それに対し、MZ2EBV−
SigMAGE−3 LAMPはIFN−γの弱い産生を誘導しただけであった 。コントロール・トランスフェクション体、MZ2 EBV−MAGE−3およ びMZ2 EBV−EGFP、およびLG2EBV(未開示)はCD4T細胞に より認識されなかった。これらの結果はIi MAGE−3がHLAクラスIIに よる提示のために処理加工される一方、MAGE−3タンパク質のみではHLA
クラスII抗原提示経路に達しないことを示している。
LAMPの両方が、一夜同時培養の後、MAGE−3.A1特異CTLクローン
LB705 CTL434/1により同程度に認識された(図10)。培養上清 中でのIFN−γ放出はELISAにより測定した。MZ2EBV−Ii MA GE−3はCTLのみによる高度のIFN−γ産生を引き出したが、このことは
Iiに融合したMAGE−3タンパク質の発現がHLAクラスI経路においてな
おプロセシングに導き得ることを示している。
4/1による溶解につき、4時間の51Cr放出アッセイにおいて、種々のエフェ
クター対標的細胞(E/T)比にて試験した。並行して、MAGE−3.A1ペ
プチドをT細胞活性化のための陽性コントロールとして加えた。MZ2EBV−
Ii MAGE−3およびMZ2EBV−SigMAGE−3 LAMPは共にM
Z2EBV−MAGE−3同様に、LB705CTL434/1により溶解され
た。溶解の百分比はMAGE−3.A1ペプチド存在下での標的細胞溶解に等し
かった(図11)。
をさらに確認するために、メラノーマ細胞系MZ2−MEL.43にMFG I i MAGE−3(MZ2−MEL.43−IiMAGE−3)またはMFG E
GFP(MZ2−MEL.43−EGFP)を形質導入した。MZ2−MEL.
43はMAGE−3タンパク質を内因性として発現するが、HLAクラスIIにお
いてMAGE−3誘導ペプチドを提示しない。しかし、MZ2−MEL.43を
MFG−Ii MAGE−3で形質導入すると、それが一夜同時培養後にはCD 4T細胞クローンLB1555CD4 426/B6.37により認識される( 図12A)。培養上清中のIFN−γ放出はELISAにより測定した。その結
果は、内因性に発現されたMAGE−3とは反対に、IiMAGE−3がHLA
クラスIIでの提示のために処理加工され得ることを示している。親および形質導
入したMZ2−MEL.43は共にCTLクローンLB705CTL434/1
を活性化した(図12B)が、これはHLAクラスI経路におけるMAGE−3
融合の提示を示すものである。
書に引用した文献はそれぞれその全文を引用により取り込む。 採用した用語および表現は説明の用語として使用したものであって、制限のた
めではなく、開示、記載された態様の均等物またはその部分を排除するような用
語および表現として用いる意図はない。種々の改変が本発明の範囲内で可能であ
ることが認められるべきである。
のCD4+T細胞クローンによる認識が、抗−HLA DRモノクローナル抗体に
より阻害されることを示すグラフである。
フである。
るTNFとINF−γ産生刺激を描出するグラフである。
来EBV−B細胞がクローンB6/34およびB6/37の増殖を誘導したこと
を示すグラフである。
よる末端切除MZ2EBVの認識を示す。
EBVの認識を示す。
溶解を示す。
認識を示す。
−MEL.43の認識を示す。
あって、対象から単離された生物学的サンプルを配列番号2のアミノ酸配列フラ
グメントを含むMAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドに特異的な剤と接 触させ、該剤とMAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドとの間の相互作用 を該疾患の決定因子として同定することを含む、前記方法。
Claims (75)
- 【請求項1】 HLAクラスII分子に結合する配列番号2のアミノ酸配列の
フラグメント、または1個または2以上のアミノ酸の付加、置換または欠失を含 むその機能的変異体を含む、単離されたMAGE−3 HLAクラスII結合ペプ チド。 - 【請求項2】 単離されたペプチドが、配列番号11のアミノ酸配列、また
はその機能的変異体を含む、請求項1に記載の単離されたHLAクラスII結合ペ
プチド。 - 【請求項3】 単離されたペプチドが、配列番号3、配列番号4、配列番号
9、および配列番号10からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項
2に記載の単離されたHLAクラスII結合ペプチド。 - 【請求項4】 単離されたペプチドが、配列番号3、配列番号4、配列番号
9、配列番号10および配列番号11からなる群より選択されるアミノ酸配列か
らなる、請求項2に記載の単離されたHLAクラスII結合ペプチド。 - 【請求項5】 単離されたペプチドが、配列番号3および配列番号4からな
る群より選択されるアミノ酸配列からなる、請求項2に記載の単離されたHLA
クラスII結合ペプチド。 - 【請求項6】 単離されたペプチドが、エンドソーム標的シグナルを含む、
請求項1に記載の単離されたHLAクラスII結合ペプチド。 - 【請求項7】 エンドソーム標的シグナルが、ヒト不変鎖Iiのエンドソー
ム標的部分を含む、請求項6に記載の単離されたHLAクラスII結合ペプチド。 - 【請求項8】 単離されたペプチドが、非水解性である、請求項1に記載の
単離されたHLAクラスII結合ペプチド。 - 【請求項9】 単離されたペプチドがD−アミノ酸を含むペプチド、−ps
i[CH2NH]−還元アミドペプチド結合を含むペプチド、−psi[COC H2]−ケトメチレン・ペプチド結合を含むペプチド、−psi[CH(CN) NH]−(シアノメチレン)アミノペプチド結合を含むペプチド、−psi[C
H2CH(OH)]−ヒドロキシエチレン・ペプチド結合を含むペプチド、−p si[CH2O]−ペプチド結合を含むペプチド、および−psi[CH2S]−
チオメチレン・ペプチド結合を含むペプチドからなる群より選択される、請求項
8記載の単離されたHLAクラスII結合ペプチド。 - 【請求項10】 単離されたMAGE−3 HLAクラスI−結合ペプチド と単離されたMAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドを含む、組成物。
- 【請求項11】 MAGE−3 HLAクラスI−結合ペプチドとMAGE −3 HLAクラスII−結合ペプチドが、ポリトープポリペプチドとして結合さ れる、請求項10に記載の組成物。
- 【請求項12】 単離されたMAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチド が、配列番号11のアミノ酸配列またはその機能的変異体を含む、請求項10に
記載の組成物。 - 【請求項13】 単離されたMAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチド が、配列番号3、配列番号4、配列番号9、配列番号10および配列番号11か
らなる群より選択されるアミノ酸配列からなる、請求項12に記載の組成物。 - 【請求項14】 単離されたMAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチド が、配列番号3および配列番号4からなる群より選択されるアミノ酸配列からな
る、求項12に記載の組成物。 - 【請求項15】 単離されたMAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチド が、エンドソーム標的シグナルを含む、請求項13に記載の組成物。
- 【請求項16】 エンドソーム標的シグナルがヒト不変鎖Iiのエンドソー
ム標的部分を含む、請求項15に記載の組成物。 - 【請求項17】 請求項1に記載のペプチド、請求項2に記載のペプチド、
請求項3に記載のペプチド、請求項4に記載のペプチド、および請求項6に記載
のペプチドからなる群より選択されるペプチドをコードする、単離された核酸。 - 【請求項18】 核酸が、配列番号13を含む、請求項17に記載の単離さ
れた核酸。 - 【請求項19】 プロモーターに作動可能に結合させた請求項17に記載の
単離された核酸を含む、発現ベクター。 - 【請求項20】 核酸が配列番号13を含む、請求項19に記載の発現ベク
ター。 - 【請求項21】 HLA−DRB1/13分子をコードする核酸をさらに含
む、請求項19または20に記載の発現ベクター。 - 【請求項22】 請求項19に記載の発現ベクター、請求項20に記載の発
現ベクター、および請求項21に記載の発現ベクターからなる群より選択される
発現ベクターでトランスフェクトまたはトランスフォームされた、宿主細胞。 - 【請求項23】 請求項19に記載の発現ベクターおよび請求項20に記載
の発現ベクターの群より選択される発現ベクターでトランスフェクトまたはトラ
ンスフォームされた宿主細胞であって、該宿主細胞がHLA−DRB1/13分
子を発現する、宿主細胞。 - 【請求項24】 MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドに特異的な CD4+Tリンパ球でTリンパ球母集団を選択的に富化する方法であって、単離 したTリンパ球母集団を、該CD4+Tリンパ球で単離されたTリンパ球母集団 を選択的に富化するのに十分な量の、MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプ チドとHLAクラスII分子との複合体を提示する剤と接触させることを含む、前
記方法。 - 【請求項25】 剤が、MAGE−3タンパク質またはそのHLAクラスII
結合フラグメントと接触させた抗原提示細胞である、請求項24に記載の方法。 - 【請求項26】 HLAクラスII分子がHLA−DRB1/13分子であり
、MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドが配列番号3のアミノ酸配列か らなるペプチド、配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号9のア
ミノ酸配列からなるペプチド、配列番号10のアミノ酸配列からなるペプチド、
および配列番号11のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される
、請求項24または25に記載の方法。 - 【請求項27】 HLAクラスII分子がHLA−DRB1/13分子であり
、MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドが配列番号3のアミノ酸配列か らなるペプチド、および配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群
より選択される、請求項24または25に記載の方法。 - 【請求項28】 MAGE−3タンパク質またはそのHLAクラスII−結合
ペプチドが、ヒト不変鎖Iiのエンドソーム標的部分を含む、請求項25に記載
の方法。 - 【請求項29】 MAGE−3の発現により特徴づけられるる疾患の診断法
であって、対象から単離された生物学的サンプルをMAGE−3 HLAクラスI
I−結合ペプチドに特異的な剤と接触させ、剤とMAGE−3 HLAクラスII−
結合ペプチドとの間の相互作用を、該疾患の決定因子として、同定することを含
む、前記診断法。 - 【請求項30】 ペプチドが、配列番号11のアミノ酸配列、またはその機
能的変異体を含む、請求項29の方法。 - 【請求項31】 ペプチドが、配列番号3のアミノ酸配列からなるペプチド
、配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号9のアミノ酸配列から
なるペプチド、配列番号10のアミノ酸配列からなるペプチド、および配列番号
11のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される、請求項30に
記載の方法。 - 【請求項32】 ペプチドが配列番号3のアミノ酸配列からなるペプチドお
よび配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される、請
求項30に記載の方法。 - 【請求項33】 HLAクラスII分子と複合体を形成するMAGE−3 H LAクラスII−結合ペプチドの発現により特徴づけられる疾患の診断法であって
、対象から単離された生物学的サンプルを該複合体に結合する剤と接触させ、該
複合体と該剤との間の結合を、疾患の決定因子として同定することを含む、前記
診断法。 - 【請求項34】 HLAクラスII分子がHLA−DRB1/13分子であっ
て、MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドが配列番号11のアミノ酸配 列、またはその機能的変異体である、請求項33に記載の方法。 - 【請求項35】 MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドが配列番号 3のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチ
ド、配列番号9のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号10のアミノ酸配列
からなるペプチド、および配列番号11のアミノ酸配列からなるペプチドからな
る群より選択される、請求項34に記載の方法。 - 【請求項36】 MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドが配列番号 3のアミノ酸配列からなるペプチドおよび配列番号4のアミノ酸配列からなるペ
プチドからなる群より選択される、請求項34に記載の方法。 - 【請求項37】 MAGE−3の発現により特徴づけられる疾患を有する対
象を治療する方法であって、該疾患を改善するのに十分な量のMAGE−3 H LAクラスII−結合ペプチドを対象に投与することを含む、前記方法。 - 【請求項38】 MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドがエンドソ ーム標的シグナルを含む、請求項37に記載の方法。
- 【請求項39】 エンドソーム標的シグナルがヒト不変鎖Iiのエンドソー
ム標的部分を含む、請求項38に記載の方法。 - 【請求項40】 MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドが配列番号 11のアミノ酸配列、またはその機能的変異体を含む、請求項38の方法。
- 【請求項41】 ペプチドが、配列番号3のアミノ酸配列からなるペプチド
、配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号9のアミノ酸配列から
なるペプチド、配列番号10のアミノ酸配列からなるペプチド、および配列番号
11のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される、請求項40に
記載の方法。 - 【請求項42】 ペプチドが、配列番号3のアミノ酸配列からなるペプチド
および配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される、
請求項40に記載の方法。 - 【請求項43】 MAGE−3の発現により特徴づけられる疾患を有する対
象を治療する方法であって、MAGE−3 HLAクラスI−結合ペプチドおよ び該疾患を改善するのに十分な量のMAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチ ドを対象に投与することを含む、前記方法。 - 【請求項44】 MAGE−3 HLAクラスI−結合ペプチドおよびMA GE−3 HLAクラスII−結合ペプチドがポリトープポリペプチドとして結合 される、請求項43に記載の方法。
- 【請求項45】 MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドがエンドソ ーム標的シグナルを含む、請求項43に記載の方法。
- 【請求項46】 エンドソーム標的シグナルがヒト不変鎖Iiのエンドソー
ム標的部分を含む、請求項45に記載の方法。 - 【請求項47】 MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドが配列番号 11のアミノ酸配列、またはその機能的変異体を含む、請求項43に記載の方法
。 - 【請求項48】 ペプチドが配列番号3のアミノ酸配列からなるペプチド、
配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号9のアミノ酸配列からな
るペプチド、配列番号10のアミノ酸配列からなるペプチド、および配列番号1
1のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される、請求項47に記
載の方法。 - 【請求項49】 ペプチドが配列番号3のアミノ酸配列からなるペプチドお
よび配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される、請
求項47に記載の方法。 - 【請求項50】 MAGE−3の発現により特徴づけられる疾患を有する対
象を治療する方法であって、HLAクラスII分子とMAGE−3 HLAクラスI
I結合ペプチドとの複合体の存在を対象に選択的に富化する剤を、該疾患を改善 するのに十分な量を対象に投与することを含む、前記方法。 - 【請求項51】 HLAクラスII分子がHLA−DRB1/13分子であり
、MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドが配列番号11のアミノ酸配列 、またはその機能的変異体を含む、請求項50に記載の方法。 - 【請求項52】 ペプチドが配列番号3のアミノ酸配列からなるペプチド、
配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号9のアミノ酸配列からな
るペプチド、配列番号10のアミノ酸配列からなるペプチド、および配列番号1
1のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される、請求項51に記
載の方法。 - 【請求項53】 ペプチドが配列番号3のアミノ酸配列からなるペプチドお
よび配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される、請
求項51に記載の方法。 - 【請求項54】 剤がMAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドを含む 、請求項50に記載の方法。
- 【請求項55】 MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドがエンドソ ーム標的シグナルを含む、請求項54に記載の方法。
- 【請求項56】 該エンドソーム標的シグナルが、ヒト不変鎖Iiのエンド
ソーム標的部分を含む、請求項55に記載の方法。 - 【請求項57】 MAGE−3の発現により特徴づけられる疾患を有する対
象を治療する方法であって、該疾患を改善するのに十分な量の自己由来CD4+ Tリンパ球を対象に投与することからなり、ここで該CD4+Tリンパ球がHL AクラスII分子とMAGE−3 HLAクラスII結合ペプチドの複合体に対し特 異的である、前記方法。 - 【請求項58】 HLAクラスII分子がHLA−DRB1/13分子であり
、該MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドが配列番号11のアミノ酸配 列、またはその機能的変異体を含む、請求項57に記載の方法。 - 【請求項59】 ペプチドが、配列番号3のアミノ酸配列からなるペプチド
、配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号9のアミノ酸配列から
なるペプチド、配列番号10のアミノ酸配列からなるペプチド、および配列番号
11のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される、請求項58に
記載の方法。 - 【請求項60】 ペプチドが、配列番号3のアミノ酸配列からなるペプチド
および配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される、
請求項58に記載の方法。 - 【請求項61】 MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドの機能的変 異体を同定する方法であって、 MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチド、MAGE−3 HLAクラスII−
結合ペプチドに結合するHLAクラスII結合分子、およびHLAクラスII結合分
子により提示されるMAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドにより刺激さ れるT細胞を選択し、MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドの最初のアミ
ノ酸残基を変異して変異体ペプチドを調製し、 HLAクラスII結合分子への変異体ペプチドの結合、およびT細胞の刺激作用を
定量することを含み、ここでHLAクラスII結合分子への変異体ペプチドの結合
およびHLAクラスII結合分子により提示される変異体ペプチドによるT細胞の
刺激作用が、変異体ペプチドが機能的変異体であることを示すものである、前記
方法。 - 【請求項62】 MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドが配列番号 11のアミノ酸配列を含む、請求項61に記載の方法。
- 【請求項63】 さらにMAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドによ るT細胞の刺激作用と機能的変異体によるT細胞の刺激作用を、機能的変異体に
よるT細胞の刺激作用の有効性決定因子として比較する工程を含む、請求項61
に記載の方法。 - 【請求項64】 請求項1、2、3または4のいずれかに記載のポリペプチ
ドに選択的に結合する単離されたポリペプチドであって、該単離されたポリペプ
チドがHLAクラスII分子ではないことを条件とする、単離されたポリペプチド
。 - 【請求項65】 単離されたポリペプチドが抗体である、請求項64に記載
の単離されたポリペプチド。 - 【請求項66】 抗体がモノクローナル抗体である、請求項65に記載の抗
体。 - 【請求項67】 単離されたポリペプチドが、Fabフラグメント、F(a
b)2フラグメントまたはMAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドに対し選
択的なCDR3領域を含むフラグメントからなる群より選択される抗体フラグメ
ントである、請求項64に記載の単離されたポリペプチド。 - 【請求項68】 HLAクラスII分子とMAGE−3 HLAクラスII結合 ペプチドの複合体を選択的に結合する、単離されたCD4+Tリンパ球。
- 【請求項69】 HLAクラスII分子がHLA−DRB1/13分子であり
、MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドが配列番号11のアミノ酸配列 、またはその機能的変異体を含む、請求項68に記載の単離されたCD4+Tリ ンパ球。 - 【請求項70】 MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドが、配列番 号3のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号4のアミノ酸配列からなるペプ
チド、配列番号9のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号10のアミノ酸配
列からなるペプチド、および配列番号11のアミノ酸配列からなるペプチドから
なる群より選択される、請求項69に記載の単離されたCD4+Tリンパ球。 - 【請求項71】 MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドが、配列番 号3のアミノ酸配列からなるペプチドおよび配列番号4のアミノ酸配列からなる
ペプチドからなる群より選択される、請求項69に記載の単離されたCD4+T リンパ球。 - 【請求項72】 HLAクラスII分子とMAGE−3 HLAクラスII結合 ペプチドの複合体を含む、単離された抗原提示細胞。
- 【請求項73】 HLAクラスII分子がHLA−DRB1/13分子であり
、MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドが配列番号11のアミノ酸配列 を含む、請求項72に記載の単離された抗原提示細胞。 - 【請求項74】 MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドが、配列番 号3のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号4のアミノ酸配列からなるペプ
チド、配列番号9のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号10のアミノ酸配
列からなるペプチド、および配列番号11のアミノ酸配列からなるペプチドから
なる群より選択される、請求項73に記載の単離された抗原提示細胞。 - 【請求項75】 MAGE−3 HLAクラスII−結合ペプチドが、配列番 号3のアミノ酸配列からなるペプチドおよび配列番号4のアミノ酸配列からなる
ペプチドからなる群より選択される、請求項73に記載の単離された抗原提示細
胞。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US08/928,615 US5965535A (en) | 1997-09-12 | 1997-09-12 | Mage-3 peptides presented by HLA class II molecules |
US08/928,615 | 1997-09-12 | ||
PCT/US1998/018601 WO1999014326A1 (en) | 1997-09-12 | 1998-09-04 | Mage-3 peptides presented by hla class ii molecules |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2001516579A true JP2001516579A (ja) | 2001-10-02 |
JP4106179B2 JP4106179B2 (ja) | 2008-06-25 |
Family
ID=25456537
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2000511865A Expired - Fee Related JP4106179B2 (ja) | 1997-09-12 | 1998-09-04 | Hlaクラスii分子により提示されるmage−3ペプチド |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US5965535A (ja) |
EP (1) | EP1012283B1 (ja) |
JP (1) | JP4106179B2 (ja) |
AT (1) | ATE432983T1 (ja) |
AU (1) | AU757368B2 (ja) |
CA (1) | CA2303063C (ja) |
DE (1) | DE69840868D1 (ja) |
WO (1) | WO1999014326A1 (ja) |
ZA (1) | ZA988124B (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016523891A (ja) * | 2013-06-28 | 2016-08-12 | オークランド ユニサービシーズ リミティド | アミノ酸及びペプチド接合体及び接合方法 |
JP2017517260A (ja) * | 2014-05-30 | 2017-06-29 | アカデミア シニカAcademia Sinica | Mage−a3ペプチド標的アプタマー及びその使用 |
JP7371185B2 (ja) | 2018-03-16 | 2023-10-30 | バークシャー バイオメディカル コーポレイション | 再充填可能な薬剤分配装置を備えたコンピュータ化経口処方薬投与及び関連するシステム並びに方法 |
Families Citing this family (38)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0668350B2 (en) * | 1994-02-16 | 2008-12-03 | The Government of the United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services | Melanoma associated antigenic polypeptide, epitopes thereof and vaccines against melanoma |
US20040156861A1 (en) * | 1996-07-11 | 2004-08-12 | Figdor Carl Gustav | Melanoma associated peptide analogues and vaccines against melanoma |
US6716809B1 (en) | 1997-09-12 | 2004-04-06 | Ludwig Institute For Cancer Research | Mage-A3 peptides presented by HLA class molecules |
US6291430B1 (en) * | 1997-09-12 | 2001-09-18 | Ludwig Institute For Cancer Research | Mage-3 peptides presented by HLA class II molecules |
CZ298364B6 (cs) | 1998-02-05 | 2007-09-05 | Smithkline Beecham Biologicals S. A. | Deriváty antigenu asociovaných s nádory z MAGE rodiny a sekvence nukleových kyselin kodující tyto deriváty, jejich použití pro prípravu fúzních proteinu a prostredku pro vakcinaci |
US6407063B1 (en) | 1998-10-02 | 2002-06-18 | Ludwig Institute For Cancer Research | Tumor antigens and CTL clones isolated by a novel procedure |
WO2000020445A2 (en) * | 1998-10-02 | 2000-04-13 | Ludwig Institute For Cancer Research | Tumor antigens and ctl clones isolated by a novel procedure |
US6800730B1 (en) * | 1998-10-02 | 2004-10-05 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated peptides which bind to MHC class II molecules, and uses thereof |
IT1309584B1 (it) * | 1999-02-26 | 2002-01-24 | San Raffaele Centro Fond | Peptidi immunogenici derivati da mage-3 presentati da mhc di classeii e loro uso. |
IT1312568B1 (it) * | 1999-05-21 | 2002-04-22 | Genera Spa | Peptidi immunogenici e loro uso. |
US7157091B1 (en) * | 1999-06-18 | 2007-01-02 | Ludwig Institute For Cancer Research | MAGE-A1 peptides presented by HLA class II molecules |
US7429639B2 (en) * | 1999-09-29 | 2008-09-30 | Ludwig Institute For Cancer Research | SSX-2 peptides presented by HLA class II molecules |
US6897288B1 (en) | 1999-10-19 | 2005-05-24 | Ludwig Institute For Cancer Research | Mage-A12 antigenic peptides and uses thereof |
KR20020047249A (ko) * | 1999-10-19 | 2002-06-21 | 에드워드 에이. 맥더모트, 주니어 | Mage-a12 항원성 펩티드 및 그의 용도 |
US6605711B1 (en) * | 1999-11-15 | 2003-08-12 | Ludwig Institute For Cancer Research | NY-ESO-1 peptide derivatives, and uses thereof |
CA2393339A1 (en) * | 1999-12-10 | 2001-06-14 | Epimmune Inc. | Inducing cellular immune responses to mage2/3 using peptide and nucleic acid compositions |
AU5810201A (en) * | 2000-05-10 | 2001-11-20 | Aventis Pasteur | Immunogenic polypeptides encoded by mage minigenes and uses thereof |
US6794501B2 (en) * | 2001-05-04 | 2004-09-21 | Ludwig Institute For Cancer Research | Colon cancer antigen panel |
US7803382B2 (en) | 2001-05-04 | 2010-09-28 | Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. | Method for inducing immune response to NY-CO-58 |
US20060222656A1 (en) * | 2005-04-01 | 2006-10-05 | University Of Maryland, Baltimore | MAGE-A3/HPV 16 peptide vaccines for head and neck cancer |
US7049413B2 (en) * | 2001-05-18 | 2006-05-23 | Ludwig Institute For Cancer Research | MAGE-A3 peptides presented by HLA class II molecules |
AU2002322009A1 (en) * | 2001-05-18 | 2002-12-03 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Chimeric antigen-specific t cell-activating polypeptides |
JP4828795B2 (ja) | 2002-03-11 | 2011-11-30 | モメンタ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | 硫酸化多糖類の分析 |
EP1496939B1 (en) | 2002-04-09 | 2007-08-15 | Sanofi Pasteur Limited | Modified cea nucleic acid and expression vectors |
AU2004280608B2 (en) * | 2002-04-09 | 2012-04-05 | Sanofi Pasteur, Inc. | Modified CEA/B7 vector |
US20040223949A1 (en) * | 2002-10-22 | 2004-11-11 | Sunnybrook And Women's College Health Sciences Center Aventis Pasteur, Ltd. | Vaccines using high-dose cytokines |
CA2505403A1 (en) * | 2002-11-07 | 2004-05-27 | Lung-Ji Chang | Modified dendritic cells |
US20070154889A1 (en) * | 2004-06-25 | 2007-07-05 | Veridex, Llc | Methods and reagents for the detection of melanoma |
US7858743B2 (en) * | 2004-09-09 | 2010-12-28 | Ludwig Institute For Cancer Research | SSX-4 peptides presented by HLA class II molecules |
WO2006045750A2 (en) * | 2004-10-20 | 2006-05-04 | Friedrich-Alexander- Universität Erlangen- Nürnberg | T-cell stimulatory peptides from the melanoma-associated chondroitin sulfate proteoglycan and their use |
WO2008053573A1 (fr) * | 2006-10-30 | 2008-05-08 | National University Corporation Hokkaido University | Remède pour néoplasme malin |
US9139876B1 (en) | 2007-05-03 | 2015-09-22 | Momenta Pharmacueticals, Inc. | Method of analyzing a preparation of a low molecular weight heparin |
AU2010329551B2 (en) | 2009-12-10 | 2016-02-11 | Turnstone Limited Partnership | Oncolytic rhabdovirus |
EP2526122B1 (en) | 2010-01-19 | 2020-06-10 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Evaluating heparin preparations |
US9068957B2 (en) | 2011-02-21 | 2015-06-30 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Evaluating heparin preparations |
RU2684211C2 (ru) | 2013-02-21 | 2019-04-04 | Тёрнстоун Лимитед Партнершип | Композиция вакцины |
KR20170094449A (ko) | 2014-12-23 | 2017-08-17 | 마가렛 앤 브림블 | 아미노산 및 펩타이드 접합체 및 이들의 용도 |
CA3014515A1 (en) | 2016-02-26 | 2017-08-31 | Auckland Uniservices Limited | Amino acid and peptide conjugates and conjugation process |
Family Cites Families (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB9019409D0 (en) * | 1990-09-05 | 1990-10-17 | Pfizer Ltd | Therapeutic agents |
US5139325A (en) * | 1991-01-25 | 1992-08-18 | Oksman Henry C | Wide depth of focus power add to intraocular and contact lenses |
US5342774A (en) | 1991-05-23 | 1994-08-30 | Ludwig Institute For Cancer Research | Nucleotide sequence encoding the tumor rejection antigen precursor, MAGE-1 |
US6235525B1 (en) | 1991-05-23 | 2001-05-22 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated nucleic acid molecules coding for tumor rejection antigen precursor MAGE-3 and uses thereof |
US5348578A (en) * | 1991-10-23 | 1994-09-20 | Ppg Industries (France) S.A. | Products obtained from the reaction of amine-diol and a polyfunctional substance and application of such products to electroapplicable cationic paint compositions |
US5662907A (en) * | 1992-08-07 | 1997-09-02 | Cytel Corporation | Induction of anti-tumor cytotoxic T lymphocytes in humans using synthetic peptide epitopes |
US5405940A (en) * | 1992-08-31 | 1995-04-11 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated nonapeptides derived from MAGE genes and uses thereof |
EP0658113B1 (en) * | 1992-08-31 | 2004-10-20 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated nonapeptide derived from mage-3 gene and presented by hla-a1, and uses thereof |
US5364838A (en) | 1993-01-29 | 1994-11-15 | Miris Medical Corporation | Method of administration of insulin |
US5414610A (en) * | 1993-06-21 | 1995-05-09 | Ast Research, Inc. | Universal power converter with single, shared power transformation circuit |
WO1995003657A1 (fr) * | 1993-07-21 | 1995-02-02 | Fujitsu Limited | Central mta |
US5851523A (en) | 1994-03-24 | 1998-12-22 | Ludwig Institute For Cancer Research. | Isolated, peptides derived from MAGE tumor rejection antigen precursors which complex with HLA-A2 molecules and uses thereof |
US5585461A (en) * | 1994-03-24 | 1996-12-17 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated, MAGE-3 derived peptides which complex with HLA-A2 molecules and uses thereof |
EP0801192B1 (en) * | 1994-11-11 | 2005-01-26 | Kabushiki Kaisha Tokai Rika Denki Seisakusho | Method of registering identification code |
DE4441903C1 (de) * | 1994-11-24 | 1996-03-21 | Siemens Ag | Drucksensor |
US6951917B1 (en) | 1995-09-26 | 2005-10-04 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | MHC-class II restricted melanoma antigens and their use in therapeutic methods |
AU7440196A (en) * | 1995-10-12 | 1997-04-30 | Chiron Corporation | Baboon mage-3 homologs, dna encoding the homologs, and a process for their use |
EP2724617A1 (en) | 2012-10-25 | 2014-04-30 | Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives | Compounds for alleviating phosphate starvation symptoms in plants |
US9603182B2 (en) | 2013-03-14 | 2017-03-21 | Qualcomm Incorporated | Establishing reliable always-on packet data network connections |
-
1997
- 1997-09-12 US US08/928,615 patent/US5965535A/en not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-09-04 ZA ZA988124A patent/ZA988124B/xx unknown
- 1998-09-04 AT AT98945923T patent/ATE432983T1/de active
- 1998-09-04 DE DE69840868T patent/DE69840868D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-04 WO PCT/US1998/018601 patent/WO1999014326A1/en active IP Right Grant
- 1998-09-04 EP EP98945923A patent/EP1012283B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-04 JP JP2000511865A patent/JP4106179B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-04 AU AU93061/98A patent/AU757368B2/en not_active Ceased
- 1998-09-04 CA CA002303063A patent/CA2303063C/en not_active Expired - Fee Related
-
1999
- 1999-07-07 US US09/348,933 patent/US6369211B1/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016523891A (ja) * | 2013-06-28 | 2016-08-12 | オークランド ユニサービシーズ リミティド | アミノ酸及びペプチド接合体及び接合方法 |
JP2017517260A (ja) * | 2014-05-30 | 2017-06-29 | アカデミア シニカAcademia Sinica | Mage−a3ペプチド標的アプタマー及びその使用 |
JP7371185B2 (ja) | 2018-03-16 | 2023-10-30 | バークシャー バイオメディカル コーポレイション | 再充填可能な薬剤分配装置を備えたコンピュータ化経口処方薬投与及び関連するシステム並びに方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US5965535A (en) | 1999-10-12 |
ZA988124B (en) | 1999-03-05 |
EP1012283B1 (en) | 2009-06-03 |
CA2303063C (en) | 2009-11-24 |
DE69840868D1 (de) | 2009-07-16 |
AU757368B2 (en) | 2003-02-20 |
AU9306198A (en) | 1999-04-05 |
JP4106179B2 (ja) | 2008-06-25 |
US6369211B1 (en) | 2002-04-09 |
WO1999014326A1 (en) | 1999-03-25 |
EP1012283A1 (en) | 2000-06-28 |
ATE432983T1 (de) | 2009-06-15 |
CA2303063A1 (en) | 1999-03-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4106179B2 (ja) | Hlaクラスii分子により提示されるmage−3ペプチド | |
JP4102027B2 (ja) | Hlaクラスii分子により提示されるmage−a3ペプチド | |
JP4652390B2 (ja) | Hlaクラスii分子により提示されるmage−a1ペプチド | |
US7371845B2 (en) | MAGE-A3 peptides presented by HLA class II molecules | |
US7311914B2 (en) | MAGE-A4 antigenic peptides and uses thereof | |
JP2003512057A (ja) | Mage−a12抗原ペプチド及びその利用 | |
US6716809B1 (en) | Mage-A3 peptides presented by HLA class molecules | |
JP2002536996A (ja) | チロシンキナーゼ受容体EphA3抗原ペプチド | |
AU2002339748A1 (en) | MAGE-A3 peptides presented by HLA class II molecules |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20050329 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20050629 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20050706 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20050928 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20070731 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20071029 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20071105 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20080129 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20080304 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20080331 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110404 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120404 Year of fee payment: 4 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130404 Year of fee payment: 5 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140404 Year of fee payment: 6 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |