JP2001514190A

JP2001514190A - 細胞傷害性ｔ細胞免疫を引き出すペプチド

Info

Publication number: JP2001514190A
Application number: JP2000507707A
Authority: JP
Inventors: ガウデルナク、グスタヴ; ジェルトセン、マリアンネ・クレンプ; エリクセン、ヨン・アムンド
Original assignee: Norsk Hydro ASA
Current assignee: Norsk Hydro ASA
Priority date: 1997-08-27
Filing date: 1998-08-26
Publication date: 2001-09-11
Also published as: GB2328689A; EP1009771A1; GB9718110D0; AU9367798A; WO1999010382A1; CA2301840A1

Abstract

(57)【要約】抗癌治療のための癌ワクチンおよび組成物中に用いるための細胞傷害性Ｔ細胞性免疫を引き出す癌遺伝子タンパク質生成物の合成ペプチド。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（発明の概要）本発明は、細胞傷害性Ｔ細胞免疫を引き出すｐ２１ｒａｓ癌遺伝子タンパク質生成物に対応する合成ペプチド、および前記ペプチドを包含する抗癌治療のた
めの癌ワクチンおよび組成物、ならびに活性化ｒａｓ遺伝子から生じる癌の治療
または予防のための方法に関する。

【０００２】本発明は、特異的細胞傷害性Ｔ細胞からの免疫応答の活性化および強化による
身体それ自体の免疫系を用いることを基礎にした、抗癌治療または予防のさらな
る開発を示す。

【０００３】（背景技術）癌の開始に関する遺伝子的背景は、癌原遺伝子および癌遺伝子である。癌原遺
伝子は、癌遺伝子になる能力を有する細胞の正常遺伝子である。癌遺伝子はすべ
て、タンパク質をコードし、そしてタンパク質を介して機能する。癌遺伝子は、
事実、点突然変異または転座（トランスロケーション）により癌原遺伝子から生
じ、それにより突然変異を保有する細胞の形質転換状態を生じる。癌は、いくつ
かの突然変異事象を包含する多段階工程および癌遺伝子により発症する。

【０００４】その最も簡単な形態では、癌原遺伝子における単一塩基置換はその結果生じる
遺伝子生成物を１個のアミノ酸のみが異なるようにし得る。細胞内「自己」タン
パク質は、正常ペプチドと単一アミノ酸が異なるペプチドからなる腫瘍拒絶抗原
を生じ得ることが示されている。腫瘍細胞の表面での主要組織適合抗原（ＭＨＣ
）分子の関係でこれらのペプチドを認識するＴ細胞は、腫瘍細胞を殺害し、した
がって宿主から腫瘍を拒絶し得る。

【０００５】その元の配座での抗原を典型的に認識するＢ細胞により産生される抗体に対比
して、Ｔ細胞は、抗原がＭＨＣ分子と結合し、それにより提示される場合のみ、
抗原を認識する。通常、この結合は、ＭＨＣ分子の溝にペプチドが適合するよう
に、タンパク質のタンパク質分解性断片化を包含する適切な抗原プロセッシング
後にのみ起こる。それによりＴ細胞は、細胞内タンパク質由来のペプチドを認識
することもできるようになる。したがって、Ｔ細胞は、理論的には、腫瘍細胞の
表面のＭＨＣ分子の関係で腫瘍細胞中のどこから得られる異所性ペプチドでも認
識し、そして実質的に異所性癌遺伝子を保有する腫瘍細胞を排除するよう活性化
され得る。

【０００６】 M. Barinaga, Science, 257, 880-881, 1992は、ＭＨＣがペプチドをどのよう
に結合するかについての短い論評を提供する。本発明に関する技術的背景のより
包括的な説明は、D. Male et al., Advanced Immunology, 1987, J. B. Lippinc
ott Company, Philadelphiaに見出し得る（これらの記載内容はすべて、参照として本明細書中に組み込まれる）。

【０００７】ヒトのＭＨＣ分子は、普通はＨＬＡ（ヒト白血球抗原）分子と呼ばれる。それ
らは、ヒト第６染色体上のＨＬＡ領域によりコードされる。

【０００８】ＨＬＡ分子は、染色体のどの領域がそれらをコードし、それらが相互に作用し
、それにより主として活性化するＴ細胞亜集団によって、２つの別個の種類のよ
うに見える。ＨＬＡクラスＩ分子はＨＬＡＡ、ＢおよびＣ亜遺伝子座によりコードされ、それらは主にＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞を活性化する。ＨＬＡクラス
ＩＩ分子はＤＰＲ、ＤＰおよびＤＱ亜遺伝子座によりコードされ、主にＣＤ４＋
Ｔ細胞を活性化する。

【０００９】普通はすべての個体が、通常では３つの亜群Ａ、ＢおよびＣの各々からの２つ
の対立遺伝子で、計６つの異なるＨＬＡクラスＩ分子を有する。しかしながら、
いくつかの場合には、異なるＨＬＡクラスＩ分子の数は、同一ＨＬＡ対立遺伝子
の２回の出現のために低減される。

【００１０】遺伝子生成物はすべて、高多型性である。したがって、異なる個体は、他の個
体とは異なる別個のＨＬＡ分子を発現する。これが、移植においてＨＬＡ適合臓
器ドナーを見つけることの難しさの根本原理である。免疫生物学におけるＨＬＡ
分子の遺伝的変異の意義は、免疫応答遺伝子としてのそれらの役割に反映される
。それらのペプチド結合能力によって、あるＨＬＡ分子の存否が特定のペプチド
エピトープに応答する個体の能力を支配する。結果として、ＨＬＡ分子は疾病に
対する耐性または感受性を確定する。Ｔ細胞は、種々のメカニズムにより癌の発症および増殖を抑制し得る。ＨＬＡ
クラスＩ制限化ＣＤ８＋およびＨＬＡクラスＩＩ制限化ＣＤ４＋の両方の細胞傷
害性Ｔ細胞は、適切な腫瘍抗原を提示する腫瘍細胞を直接殺害する。普通は、Ｃ
Ｄ４＋ヘルパーＴ細胞は細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞応答に必要とされるが、しか
し適切なペプチド抗原が提示されると、細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞は直接活性化
されて、より迅速な、より強力かつより有効な応答を生じ得る。

【００１１】ＨＬＡクラスＩＩ分子により提示されるペプチドは種々の長さ（１２〜２５ア
ミノ酸）を有する一方、ＨＬＡクラスＩ分子により提示される該ペプチドは普通
は、ＨＬＡ結合溝に適合するためにきっかり９個のアミノ酸残基でなければなら
ない。より長いペプチドは、ＨＬＡ溝で提示される前に、ＡＰＣまたは標的細胞
、例えば癌細胞により内部でプロセッシングされ得ない場合には非結合を生じる
。９個のアミノ酸というこの必要条件からの非常に限定された数だけの偏差が報
告されており、それらの場合、提示ペプチドの長さは８または１０アミノ酸残基
長のいずれかであった。

【００１２】結合に必要なペプチド長のこの差に関する説明は、ＨＬＡクラスＩおよびＩＩ
分子のペプチド結合溝の性質の中に見出される。ＨＬＡクラスＩのペプチド結合
溝は両端で閉じられているが、一方ＨＬＡクラスＩＩのペプチド結合溝は両端で
開放されており、したがって突き出るより長いペプチドの結合を可能にする。

【００１３】ＨＬＡクラスＩおよびＩＩ結合の両方に関する要件は、ペプチドは結合モチー
フを含有せねばならないということであり、これは普通は、異なるＨＬＡ群およ
び亜群（対立遺伝子）に関して異なる。結合モチーフは、ＨＬＡ結合溝のポケッ
トとの狭い適合が成し遂げられるよう、ペプチドのいくつかの位置の特定のアミ
ノ酸に対する要件を特徴とする。さらに、結合に対する立体障害を引き起こすた
めに、ペプチドのその他の位置のいくつかの特定のアミノ酸を回避する必要があ
る。この結果は、ペプチド長制限と合わせて解釈すると、ＨＬＡクラスＩ分子の
ある型とのペプチド結合が別の型とも結合することは全くありそうもないという
ことである。したがって、例えばともにクラスＩの種類に属するＨＬＡ−Ａ１お
よびＨＬＡ−Ａ２分子に関するペプチド結合モチーフがＨＬＡ−Ａ１およびＨＬ
Ａ−Ｂ１分子に関するモチーフと同じく異なるということは非常に当を得ている
。

【００１４】抗腫瘍ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞を生成するためのワクチンまたは抗癌剤とし
て癌遺伝子由来ペプチドを用いるためには、したがって、問題の癌遺伝子抗原を
検査し、そして種々の型のＨＬＡクラスＩ分子と結合し得る個々のペプチドを同
定することが必要である。個体の有効なワクチン接種は、ＡＰＣ上の少なくとも
１つのＨＬＡクラスＩ対立遺伝子がワクチンペプチドと結合し得る場合にのみ成
し遂げられる。

【００１５】したがって、これは、両末端でペプチドを延長でき、これが異なる型のＨＬＡ
クラスＩＩ分子に関するエピトープを含有するより長いペプチドの設計を可能に
させるＨＬＡクラスＩＩ分子に関する状況とは明らかに異なる。

【００１６】形質転換ｒａｓ遺伝子は、ヒト癌で最も高頻度に同定される癌遺伝子である。一
般的な癌、例えば膵臓、卵巣、結腸直腸、肺および胆道癌の多くは、このような
癌を有する患者の高パーセンテージで、ｒａｓ遺伝子の突然変異に起因する、と
いうことが確定されている。このような癌遺伝子にコードされるタンパク質はほ
ぼすべてが位置１２または１３または６１に突然変異を保有する一方、配列中の
残りのアミノ酸はｐ２１ｒａｓ癌原遺伝子タンパク質に見出されるものに対応す
る。

【００１７】結果的に、合成ｒａｓペプチドは、活性化ｒａｓ癌遺伝子から生じる癌に苦し
む患者の癌細胞に対する免疫系（Ｔ細胞）の細胞枝を誘発するための機能を有す
る抗癌治療薬またはワクチンとして用いられ得る。

【００１８】本発明の説明および特許請求の範囲では、アミノ酸は、当業界で既知のその３
文字または１文字略語で表される。

【００１９】（従来技術） Scott I. Abrams et al, Eur. J. Immunol. 1996, 26:435-443は、細胞傷害性
Ｔ細胞応答（ＣＤ８＋）を引き起こした位置１２でのＧｌｙに代わるＶａｌの置
換を有するｐ２１ｒａｓタンパク質の４〜１２断片を用いたマウスの免疫感作の
結果を発表した。これらのデータは、位置１２にＶａｌ置換を有する突然変異体
ｐ２１ｒａｓがネズミＭＨＣクラスＩ分子との特異的結合を示すペプチド配列を
含有することを実証する。

【００２０】マウス系統が免疫感作され得るという知見は、以下の理由のために本発明に当
てはまらない：異なるＨ−２ＭＨＣ型を有する系統が同一タンパク質からの異なる組のペプチ
ドを認識し［S.S.Zamvil et al., J.Exp.Med., Vol. 168, （1988）, 1181-1186
］、したがって、ある系統のマウスにおける免疫応答を引き出すペプチドは別の
密接に関連したマウス系統からのＴ細胞を刺激しない、ということはマウスにお
ける一般的観察である。さらに実験モデルでは、マウス、ラットおよびヒトから
のＴ細胞は、同一タンパク質の異なる非重複エピトープを認識することが知られ
ている。これに対する説明は、それらの抗原プロセッシング機構およびそれらの
ＭＨＣ分子のペプチド結合能力における種間の差にあると考えられる。

【００２１】ＰＣＴ／ＮＯ９２／０００３２号から、ｐ２１ｒａｓタンパク質の位置１〜２
５に亘る合成ペプチドおよび位置１２、１３または６１に突然変異を有する断片
は、ワクチン接種または癌療法計画におけるこのようなペプチドの投与を介して
前記突然変異化ｐ２１ｒａｓ癌遺伝子タンパク質を保有する癌細胞に対するＣＤ
４＋Ｔ細胞免疫を引き出すために用い得る、ということが分かっている。

【００２２】従来技術はＣＤ４＋Ｔ細胞免疫を生じるｐ２１ｒａｓタンパク質断片を同定し
たが、しかし従来の研究で、ヒトにおける腫瘍特異的細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞
免疫を生じる正確な抗原または抗原部位を限定したものはない。

【００２３】（発明が解決しようとする課題）したがって、ＣＤ４＋Ｔ細胞免疫が成し遂げられ、ｐ２１ｒａｓ癌遺伝子に由
来する腫瘍の罹患患者の癌治療が目下究明されているが、腫瘍細胞を殺害し得る
細胞、即ち細胞傷害性Ｔ細胞は、十分な強度で目的を達することは困難であった
。さらに、細胞傷害性Ｔ細胞活性化は、一次ＣＤ４＋Ｔ細胞活性化により間接的
に達成される場合、むしろ遅い。これは、余命短い手術不能患者にとっては特に
重大な問題である。

【００２４】したがって、突然変異化ｐ２１ｒａｓタンパク質に由来するペプチドを基礎に
した抗癌治療または予防の活性を改良するために、迅速かつ信頼できる方法で突
然変異化ｒａｓ癌遺伝子を保有する腫瘍に対する強力な細胞傷害性Ｔ細胞応答を
確立する抗癌治療薬またはワクチン接種薬が必要である。

【００２５】（発明の定義）活性化ｒａｓ癌遺伝子を保有する腫瘍に対する細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞の直
接活性化により前記の課題を解決する一群の合成ペプチドが、本発明により個々
に見出された。これらのペプチドは８〜１０アミノ酸長を有し、このような腫瘍
に罹患したヒト患者におけるＨＬＡクラスＩ分子により提示されるような天然プ
ロセッシング化エピトープと同一であることが示された。

【００２６】したがって、本発明のペプチドは、それらが：ａ）８〜１０個のアミノ酸を含有し、ｐ２１ｒａｓ癌原遺伝子タンパク質の位置１２および／または１３、または６１を包含し、そして位置１２または１３
または６１にアミノ酸置換を有する一方、残りのアミノ酸は前記タンパク質の同
一位置に見出されるものに対応し、ならびにｂ）ペプチドが位置１２および１３を包含する場合に、それらがともにＧｌｙ
ではなく、および位置１３のアミノ酸がＧｌｙである場合には、位置１２のアミノ酸はＧｌｙ以
外の任意のアミノ酸であり得るか、またはペプチドが位置６１を包含する場合にはこの位置のアミノ酸はＧｌｎ以外の任
意のアミノ酸であり得るし、ならびにｃ）特異的細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）応答を誘導することを特徴とする。

【００２７】本発明の最も好ましいペプチドは、９個のアミノ酸からなるペプチドである。

【００２８】本発明のペプチドにより、以下の利点が達成される：より強力な抗癌療法およびワクチン接種を企画し得る、細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞の直接活性化が、腫瘍細胞を殺害するのに必要なキ
ラー細胞のより迅速な確立をもたらす、腫瘍性細胞により提示される特異的遺伝的変化に向けられるより直接的な療法
および予防が可能である。

【００２９】本発明の一態様によれば、本発明のペプチドを包含する製剤組成物が調製され
る。製剤組成物は、位置１２、１３または６１における突然変異を伴うｒａｓ癌
遺伝子を保有する癌に苦しむヒト患者を治療するために用い得る。

【００３０】本明細書中および特許請求の範囲で用いられる場合、製剤組成物という用語は
、癌患者の治療に使用可能な組成物だけでなく、予防と関連して有用な組成物、
砂ワクチン組成物をも包含すべきである。

【００３１】したがって、本発明の別の実施形態では、製剤組成物は、位置１２、１３また
は６１における突然変異を有するｒａｓ癌遺伝子から生じる癌に対する耐性を得
るためにヒトにワクチン接種するのに用い得る。

【００３２】本発明の第三の態様は、活性化ｒａｓ癌遺伝子から生じる癌の治療または予防
において細胞傷害性Ｔ細胞応答を引き出すための製剤を調製するための前記ペプ
チドの使用である。

【００３３】本発明のさらなる態様は、癌に苦しむヒト患者の治療方法であって、細胞傷害
性（ＣＤ８＋）Ｔ細胞応答を引き出すのに有効な量で少なくとも１つの本発明の
ペプチドを投与することを包含する方法である。

【００３４】本発明のさらに別の態様は、活性化ｒａｓ癌遺伝子から生じる癌に対する耐性
を得るためのヒトへのワクチン接種方法であって、細胞傷害性Ｔ細胞応答を引き
出すのに有効な量で少なくとも１つの本発明のペプチドを投与することを包含す
る方法である。

【００３５】本発明の別の態様では、本発明のペプチドは製剤組成物で、またはペプチドの
混合物として前記治療または予防のための方法で投与される。混合物は、以下の
：（ａ）ある位置、即ち位置１２または位置１３または位置６１に異なる突然変
異を有するペプチドの混合物、あるいは（ｂ）同一突然変異を有するが、しかし異なるＨＬＡ対立遺伝子に適合するの
に適したペプチドの混合物、あるいは（ｃ）両混合物（ａ）および（ｂ）の混合物、あるいは（ｄ）いくつかの混合物（ａ）の混合物、あるいは（ｅ）いくつかの混合物（ｂ）の混合物、あるいは（ｆ）いくつかの混合物（ａ）およびいくつかの混合物（ｂ）の混合物であり得る。

【００３６】あるいは、混合物中のペプチドは、互いに共有結合してより大きいポリペプチ
ドまたは環状ポリペプチドさえ形成し得る。

【００３７】前記混合物において位置１２、１３または６１での選択されたアミノ酸は、特
定の癌に最も一般的に見出される突然変異である。このような単数または複数の
混合物は、その場合、前記癌に苦しむ患者の治療に、または前記癌に関して危険
群に属するヒトの予防に適している。

【００３８】いかなる特定の危険群にも属さないが、しかし依然として突然変異化ｒａｓ癌
遺伝子を保有する癌から病気になる危険がある人の予防的治療では、概要（ｆ）
に記載されたような混合物の投与は有用であると考えられる。

【００３９】このように、前記の異なる態様に本発明を適応することができる。

【００４０】本発明のペプチドを用いてｉｎｖｉｖｏ、ｅｘｖｉｖｏまたはｉｎｖｉｔｒｏでＴ細胞免疫を誘導することにより、突然変異化ｒａｓ癌遺伝子を保有する
癌に対する癌療法またはワクチンを作り出すことが本発明の一目的である。

【００４１】本発明の別の目的は、少なくとも１つの本発明のペプチドを投与することを包
含する、このような治療または予防が必要な場合にヒト個体に特に適応される抗
癌治療または予防法を企画することである。投与は、必要とされる細胞傷害性Ｔ
細胞免疫を確立および／または保持するのに適するよう、１回または数回行われ
得る。

【００４２】前記ＰＣＴ／ＮＯ９２／０００３２出願に開示されたような抗癌ワクチンまた
はペプチド薬の力は、本発明のペプチドが含まれた場合には増強され得る、とも
予想される。これは、特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞）および特異的
ＣＤ４＋Ｔ細胞応答がともに同時に誘発される場合、それは等しくより強力なＴ
細胞免疫をもたらすという仮定に基づいている。したがって、本発明の別の実施
形態では、本発明のペプチドはＰＣＴ／ＮＯ９２／０００３２に開示されたペプ
チドと、同時にまたは任意の順序で、一緒に投与される。

【００４３】（実施形態）本発明の最も好ましいペプチドは、突然変異化ｒａｓ癌遺伝子から生じるヒト
癌で最も一般的に見出されるアミノ酸置換を保有するものである。ｐ２１ｒａｓ
タンパク質の位置１２において、最も一般的に見出される突然変異はＡｓｐ、Ｖ
ａｌ、Ａｒｇ、Ｃｙｓ、ＡｌａおよびＳｅｒである。位置１３では、最も一般的
に見出される突然変異はＡｓｐおよびＶａｌである。位置６１では、最も一般的
に見出される突然変異はＡｒｇ、Ｈｉｓ、ＬｙｓおよびＬｅｕである。

【００４４】本発明の好ましいペプチドの一群は、以下のペプチドであって、この場合、Ｘ ₁ はｐ２１ｒａｓタンパク質における位置１２を表し、Ｇｌｙ以外の任意のアミノ酸であり得る：

【００４５】

【化４】

【００４６】前記群の最も好ましいペプチドは、Ｘ₁がＡｓｐ、Ｖａｌ、Ａｒｇ、Ａｌａ、ＣｙｓまたはＳｅｒであるものである。

【００４７】本発明のペプチドのさらなる群は以下のペプチドであって、この場合、Ｘ₁はｐ２１ｒａｓタンパク質の位置１２を表し、Ｇｌｙ以外の任意のアミノ酸であり
得る：

【００４８】

【化５】

【００４９】前記群の最も好ましいペプチドは、Ｘ₁がＡｓｐ、Ｖａｌ、Ａｒｇ、Ａｌａ、ＣｙｓまたはＳｅｒであるものである。

【００５０】本発明のペプチドのさらなる群は以下のペプチドであって、この場合、Ｘ₁はｐ２１ｒａｓタンパク質の位置１２を表し、Ｇｌｙ以外の任意のアミノ酸であり
得る：

【００５１】

【化６】

【００５２】前記群の最も好ましいペプチドは、Ｘ₁がＡｓｐ、Ｖａｌ、Ａｒｇ、Ａｌａ、ＣｙｓまたはＳｅｒであるものである。

【００５３】本発明の特に好ましいペプチドの第二の群は以下のペプチドであって、この場
合、Ｘ₂はｐ２１ｒａｓタンパク質の位置１３を表し、Ｇｌｙ以外の任意のアミノ酸であり得る：

【００５４】

【化７】

【００５５】前記群の最も好ましいペプチドは、Ｘ₂がＡｓｐまたはＶａｌであるものである。

【００５６】本発明のペプチドのさらなる群は以下のペプチドであって、この場合、Ｘ₂はｐ２１ｒａｓタンパク質の位置１３を表し、Ｇｌｙ以外の任意のアミノ酸であり
得る：

【００５７】

【化８】

【００５８】前記群の最も好ましいペプチドは、Ｘ₂がＡｓｐまたはＶａｌであるものである。

【００５９】本発明のペプチドのさらなる群は以下のペプチドであって、この場合、Ｘ₂はｐ２１ｒａｓタンパク質の位置１３を表し、Ｇｌｙ以外の任意のアミノ酸であり
得る：

【００６０】

【化９】

【００６１】前記群の最も好ましいペプチドは、Ｘ₂がＡｓｐまたはＶａｌであるものである。

【００６２】本発明の好ましいペプチドの第三の群は以下のペプチドであって、この場合、
Ｘ₃はｐ２１ｒａｓタンパク質の位置６１を表し、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸であり得る：

【００６３】

【化１０】

【００６４】前記群の最も好ましいペプチドは、Ｘ₃がＡｒｇ、Ｌｙｓ、ＨｉｓまたはＬｅｕであるものである。

【００６５】本発明のペプチドのさらなる群は以下のペプチドであって、この場合、Ｘ₃はｐ２１ｒａｓタンパク質の位置６１を表し、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸であり
得る：

【００６６】

【化１１】

【００６７】前記群の最も好ましいペプチドは、Ｘ₃がＡｒｇ、Ｌｙｓ、ＨｉｓまたはＬｅｕであるものである。

【００６８】本発明のペプチドのさらなる群は以下のペプチドであって、この場合、Ｘ₃はｐ２１ｒａｓタンパク質の位置６１を表し、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸であり
得る：

【００６９】

【化１２】

【００７０】前記群の最も好ましいペプチドは、Ｘ₃がＡｒｇ、Ｌｙｓ、ＨｉｓまたはＬｅｕであるものである。

【００７１】前記ペプチドの一覧から明らかなように、本発明のペプチドは、突然変異が癌
遺伝子タンパク質に見出される位置の各々の周囲で対称的または非対称的であり
得る。

【００７２】ペプチドは、当業界で知られているような免疫応答を強化するために、サイト
カインおよび／または増殖因子のような化合物、即ちインターロイキン−２（Ｉ
Ｌ−２）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）、顆粒球マクロファージコロ
ニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）等と一緒に、同時にまたは別々に、投与され得る
。

【００７３】本発明のペプチドは、単独で、またはその他の物質と組合せて、例えば、当業
界で知られているように、高親和性細胞傷害性Ｔ細胞を誘導し得るリポペプチド
接合体の形態で（K. Deres, Nature, Vol. 342, （nov. 1989））、ワクチンまたは治療的組成物中に用い得る。

【００７４】本発明のペプチドは、合成ペプチドまたは組換え体断片ベースのワクチン中に
含入するために有用であり得る。

【００７５】本発明のペプチドは、細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞免疫を安全に引き出し得るワ
クチンに用いるのに特に適している：（１）ペプチドは合成的に生成され、したがって、形質転換癌遺伝子、あるい
は有害作用を生じ得るその他の部位または物質を含まず、（２）ペプチドは単独で用いられて細胞傷害性Ｔ細胞免疫を誘導し得るし、そ
して（３）ペプチドは細胞傷害性Ｔ細胞応答に関して標的化され得て、その他の望
ましくない応答の副作用を伴わない。

【００７６】本発明のペプチドは、単独で、または当業界で既知の通常の製薬上許容可能な
添加剤、アジュバント、希釈剤、安定剤、担体等と一緒に、製剤組成物中に含ま
れ得る。

【００７７】本発明のペプチドは、１ｍｇ〜１ｇの範囲の量で、ワクチン接種される平均的
ヒト患者または個体に投与され得る。各投与に関して１ｍｇ〜１０ｍｇの範囲の
より少ない用量を用いるのはさらに好ましい。

【００７８】当業者は、本発明のペプチドの使用についてのその他の考え得る様式を見出す
であろうし、これらは本発明の特許請求の範囲に包含されるものとする。本発明
の癌療法は、患者が苦しめられている癌の種類に関与する癌遺伝子の遺伝子生成
物に対して特異的細胞傷害性Ｔ細胞株またはクローンを生じさせることを主目標
として、ｉｎｖｉｖｏ、ｅｘｖｉｖｏまたはｉｎｖｉｔｒｏで投与され得る。

【００７９】本発明のペプチドは、当業界で既知の従来の方法により産生され得るし、これ
は以下の合成の説明で明らかにされる。

【００８０】本発明は、特許請求の範囲にさらに詳細に説明される。

【００８１】生物実験癌ワクチンおよび有効であるべき特異的Ｔ細胞免疫を基礎にした特異的癌療法
のための方法のためには、以下の３つの条件が満たされねばならない：１．用いられるペプチドは、癌細胞上または専門的抗原提示細胞上にＨＬＡク
ラスＩ分子により提示されるようなプロセッシング化ｐ２１ｒａｓ癌遺伝子タン
パク質断片に対応せねばならず２．用いられるペプチドは免疫原形態でＨＬＡクラスＩ分子に結合されねばな
らず、および３．ＨＬＡクラスＩ／ペプチド複合体を認識しそれに応答し得る細胞傷害性Ｔ
細胞（ＣＤ８＋）がヒトの循環中に存在しなければならない。

【００８２】これらの条件はすべて、本発明のペプチドに関して満たされねばならない、と
いうことが確立されている。本発明のペプチドは、ｉｎｖｉｔｒｏで特異的細胞傷害性Ｔ細胞免疫応答を起こす。ペプチドを結合し得るＨＬＡクラスＩ分子が
確定された。本発明の合成ペプチドはプロセッシング化癌遺伝子タンパク質断片
に対応する、ということが確立されている。これは、位置１２に突然変異を有す
る合成ｐ２１ｒａｓペプチド断片を用いて例示される。ｒａｓペプチドワクチン
接種によりｉｎｖｉｖｏで誘発される細胞傷害性Ｔ細胞の特異性は、本発明のペプチドを用いて確定された。これは、癌患者のＴ細胞がｉｎｖｉｖｏで同一ペプチド断片により活性化されたことを明らかに示す。

【００８３】合成連続流動固相ペプチド合成（9050 PepSynthesizer, MilliGenまたはNovasyn C
rystal peptide synthesiser, Novabiochem）を用いて、ペプチドを合成した。適切な側鎖保護を有するＮ−ａ−Ｆｍｏｃ−アミノ酸（Ｓｅｒ（ｔＢｕ）、Ｔｈ
ｒ（ｔＢｕ）、Ｔｙｒ（ｔＢｕ）、Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）、Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）、Ａｒ
ｇ（Ｐｍｃ）、Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）、Ａｓｐ（Ｏ−ｔＢｕ）、Ｇｌｕ（Ｏ−ｔＢｕ
））を用いた。カップリング前にＴＢＴＵによりＦｍｏｃ−アミノ酸を活性化し
た。各カップリング後にＦｍｏｃの選択的除去のために、ＤＭＦ中の２０％ピペ
リジンを用いた。９５％ＴＦＡ（水溶液）により、樹脂からの分離および側鎖保
護の最終的除去を実施した。逆相（Ｃ１８）ＨＰＬＣ（Shimadzu LC8A）によりペプチドを精製し、分析した。エレクトロスプレー質量分光分析法（Finnigan m
at SSQ710）を用いて、ペプチドの同一性を確証した。

【００８４】本方法により合成されたペプチドは、配列ＩＤ一覧に列挙されている。

【００８５】

【表１】

【００８６】

【表２】

【００８７】

【表３】

【００８８】

【表４】

【００８９】

【表５】

【００９０】

【表６】

【００９１】

【表７】

【００９２】

【表８】

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】１２Ｖａｌ突然変異体ｒａｓペプチドワクチン接種後の膵臓癌患者からの末梢
血から得られたＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞クローン（ＣＴＬ６９−３０）が、１
２Ｖａｌ突然変異化ｐ２１ｒａｓを発現する異なる腫瘍細胞株を認識し、殺害し
得ることを示す。細胞傷害性Ｔ細胞クローンは、１２Ｖａｌ突然変異体ｒａｓペ
プチドワクチン接種後の膵臓癌患者からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中に存在
するＴ細胞芽細胞のクローニング後に得られた。ペプチドワクチン接種プロトコ
ールには、大量のペプチド負荷自系専門抗原提示細胞（ＡＰＣ）の数回の注入が
含まれた。Ｔｅｒａｓａｋｉプレート上に５芽細胞／ウエルで応答Ｔ細胞芽細胞
をプレート化することにより、Ｔ細胞のクローニングを実施した。各ウエルは２
ｘ１０⁴の自系放射線照射（３０Ｇｙ）ＰＢＭＣをフィーダー細胞として含有し、細胞を、総容量２０ｍＬ中の２５ｍＭでの１２Ｖａｌペプチドおよび５Ｕ／ｍ
ｌの組換え体インターロイキン−２（ｒＩＬ−２）（Amersham, Aylesbury, UK ）を用いて増殖させた。９日後、ウエル当たり１ｍｇ／ｍｌのフィトヘマアグル
チニン（ＰＨＡ、Wellcome, Dartford, UK）、５Ｕ／ｍｌのｒＩＬ−２および同
種放射線照射（３０Ｇｙ）ＰＢＭＣ（２ｘ１０⁵）をフィーダー細胞として含有する平底９６ウエルプレート（Costar, Cambridge, MA）上にＴ細胞クローンを移した。増殖中のクローンを、ＰＨＡ／ｒＩＬ−２および１ｘ１０⁶の同種放射線照射ＰＢＭＣをフィーダー細胞として含有する２４ウエルプレート中でさらに
広げ、４〜７日後にペプチド特異性に関してスクリーニングした。Ｔ細胞クロー
ン６９−３０を、さらなる特性化のために選択した。それは、細胞表面表現型Ｃ
Ｄ３、ＣＤ８およびＴｃＲａｂを発現することが判明した。異なるエフェクター対標的比で試験した場合、ＣＴＬ６９−３０は自系腫瘍細胞標的の溶解を示す
ことが判明したが、このことは、それが腫瘍由来抗原、例えば突然変異体ｒａｓ
に対して向けられることを示す。認識される抗原が突然変異体ｒａｓに関連することを立証し、そして細胞傷害
性Ｔ細胞クローンに対して推定上の突然変異体ｒａｓペプチドを提示するＨＬＡ
クラスＩ分子を同定するために、患者のものと共通の１つ又はそれ以上のＨＬＡ
クラスＩ分子を保有する異なる１２Ｖａｌｐ２１ｒａｓ発現腫瘍細胞系を、細
胞傷害性検定における標的細胞として用いた。標的細胞を³Ｈ−チミジン（９．２５ｘ１０⁴Ｂｑ／ｍＬ）で一晩標識し、１回洗浄して、９６ウエルプレート中に５０００細胞／ウエルをプレート化した。Ｔ細胞を異なるエフェクター対標的
比で付加し、プレートを３７℃で４時間インキュベートした後、収穫して、液体
シンチレーション計数器（Packard Topcount）で計数した。データは、異なるエ
フェクター／標的比での４時間検定における³Ｈ−チミジン標識化標的細胞の特異的溶解パーセントを示す。値は、３回培養の平均±ＳＤとして表される。Ｔ細
胞クローン６９−３０は、膀胱癌細胞株Ｔ２４（１２Ｖａｌ⁺、ＨＬＡ−Ａｌ⁺、
Ｂ３５⁺）および黒色腫細胞株ＦＭＥＸ（１２Ｖａｌ⁺、ＨＬＡ−Ａ２⁺、Ｂ３５⁺ ）の溶解を実証したが、しかし結腸癌細胞株ＳＷ４８０（１２Ｖａｌ⁺、ＨＬＡ
−Ａ２⁺、Ｂ８⁺）の溶解は示さなかった。自系ＥＢＶ−Ｂ細胞（１２Ｖａｌ^-、ＨＬＡ−Ａｌ⁺、Ａ２⁺、Ｂ８⁺、Ｂ３５⁺）および対照として用いた天然キラー標
的Ｋ５６２は溶解されなかった。これらの結果は、Ｔ細胞クローン６９−３０が
ＨＬＡ−Ｂ３５の関係において内生的プロセッシング化１２Ｖａｌエピトープを
認識することを示唆する。

【図２】遮断実験によりＴ細胞クローン６９−３０のＨＬＡクラスＩ制限をさらに実証
する。結果は、自系膵臓癌細胞（ＣＰＥ）に及ぼすＴ細胞クローン６９−３０の
細胞傷害性作用は膵臓ＨＬＡクラスＩｍＡｂ（Ｗ６／３２）により遮断され得る
が、しかしＨＬＡクラスＩＩＤＲ、ＤＱおよびＤＰ抗原に対して向けられるモノ
クローナル抗体の存在下では変わらないままであったことを示す。異なる１２Ｖ
ａｌ発現腫瘍細胞株を用いて得られた結果と合わせて考えると、これらのデータ
はＨＬＡクラスＩ制限を実証し、そしてＨＬＡ−Ｂ３５がＴ細胞クローン６９−
３０の制限分子であることを示す。ＣＰＥ−標的の特異的溶解は、ＨＬＡクラス
Ｉ（Ｗ６／３２）およびクラスＩＩ（Ｂ８／１１、ＳＰＶ−Ｌ３およびＢ７／２
１）抗原に対して向けられるモノクローナル抗体を包含する実験により実証され
たように、ＨＬＡクラスＩ制限された。最終濃度１０ｍｇ／ｍｌでＨＬＡクラス
ＩおよびクラスＩＩ分子に対して向けられるモノクローナル抗体を用いて、自系
腫瘍細胞株に対する細胞傷害性Ｔ細胞クローン活性を評価した。検定は９６ウエ
ルプレート中で３回おこなって、標的細胞を３７℃で３０分間予備インキュベー
トした後、Ｔ細胞を付加した。１０／１のエフェクター／標的比を用いて得られ
た結果を示す。データは、４時間検定における³Ｈ−チミジン標識化ＣＰＥ標的および種々のｍＡｂに対する特異的溶解パーセントを示し、活性は３回培養の平
均±ＳＤとして表される。

【図３】ペプチドパルス実験におけるＴ細胞クローン６９−３０の見事な特異性を示す
。Ｔ細胞クローン６９−３０に実際に認識されている突然変異体ｒａｓペプチド
を同定するために、九量体ペプチド：即ち、位置１２でのＶａｌ置換を含有する
ｐ２１ｒａｓの位置４〜２０に亘るペプチド１０−１８のパネルを試験した。こ
れらの実験では、ペプチド１５だけがＴ細胞クローン６９−３０活性を刺激する
ことができた。³Ｈ−チミジン標識化弱酸溶離自系ＥＢＶ−Ｂ細胞を９６ウエルプレート中で２５００細胞／ウエルでプレート化して、３７℃で５％ＣＯ₂インキュベーター中でｂ２−ミクログロブリン（２．５ｍｇ／ｍＬ）とともに１ｍＭ
の濃度でペプチドを用いてパルス処理した後、Ｔ細胞を付加した。検定は９６ウ
エルプレート中で３回実施し、５対１のエフェクター対標的比で４時間インキュ
ベートした。適切な突然変異対ペプチドに関する細胞傷害性Ｔ細胞クローン認識
の特異性は、正常ｒａｓ配列を発現するペプチドを用いて観察される溶解の非存
在により例証された。対照は単独で培養されたＴ細胞クローンを含み、ペプチド
の非存在下でＡＰＣを有し、あるいは無関係な黒色腫関連ペプチドＭＡＲＴ−１
／Ｍｅｌａｎ−Ａを有した。データは、３回培養の平均として示される。

【図４】ペプチド１５に対するＴ細胞クローン６９−３０の感受性を示す。データは、
抗ｒａｓ細胞傷害性Ｔ細胞活性がいくつかの対数単位の範囲に亘って検出可能で
あり、１ｘ１０^-6Ｍのペプチド濃度で最大溶解が、そして１ｘ１０^-9Ｍのペプチ
ド濃度で半最大応答が認められたことを示す。これは、標的細胞としてペプチド
感作ＥＢＶ−Ｂ細胞を用いた用量−応答実験で検査された。図３に記載したよう
に標的細胞をペプチド１５でパルス処理したが、但しペプチドは、Ｔ細胞の付加
前に、異なる濃度で付加された。対照は標的細胞単独、および無関係な黒色腫関
連ペプチドＭｅｌａｎ−Ａ／Ｍａｒｔ−１でパルス処理した標的細胞を含んだ。
データは３回培養の平均±ＳＤとして表される。

【図５】ペプチドパルス実験におけるＴ細胞クローン４２−３３の見事な特異性を示す
。Ｔ細胞クローン４２−３３もワクチン接種患者から得られた。九量体ペプチド
：ペプチド１０−１８のパネルのうち、ペプチド１８だけがＴ細胞クローン４２
−３３を刺激することができた。実験では、ＴＡＰ欠損Ｔ２細胞株を抗原提示細
胞として用いた。この細胞株は、少量のＨＬＡ−Ａ２抗原のみを発現するが、し
かし細胞表面でのＨＬＡクラスＩ抗原のレベル増大は、ｂ２−ミクログロブリン
の付加により誘発され得る。³Ｈ−標識化標的細胞を、３７℃で１時間、ｂ２− ミクログロブリン（２．５ｍｇ／ｍＬ）とともに１ｍＭの濃度で異なる試験ペプ
チドおよび対照ペプチドを用いてインキュベートした。ペプチドパルス処理後、
標的細胞を大規模に洗浄して、計数し、９６ウエル中に２５００細胞／ウエルで
プレート化した後、Ｔ細胞を付加した。プレートを５％ＣＯ₂中で３７℃で４時間インキュベート後に、収穫した。対照は単独で培養されたＴ細胞クローンを含
み、またはペプチドの非存在下で標的細胞を有した。検定は２０対１のエフェク
ター対標的比で９６ウエルプレート中で３回実施した。

【図６】ペプチド（配列認識番号）２３および２４でパルス処理された自系ＥＢＶ細胞
を認識し、殺害する１２−Ｃｙｓ−ｐ２１ｒａｓ特異的ＣＤ８＋ＣＴＬＥＧ２
．４の特異性を示す。ＣＴＬは、突然変異体ｒａｓペプチドワクチン接種後の膵
臓癌患者からのＰＢＭＣ中に存在するＴ細胞芽細胞のクローニング後に得られた
。ペプチドワクチン接種プロトコールは、顆粒球−マクロファージコロニー刺激
因子（ＧＭ−ＣＳＦ）と組合せた突然変異体ｒａｓペプチドの混合物の６回皮内
注入で構成された。Ｔ細胞のクローニングは以下のように実施した：５１Ｃｒ⁺ 標識化標的細胞を９６ウエルプレート（Costar）中でプレート化して、合成ペプ
チドおよびｂ２−ミクログロブリンとともに１時間インキュベートした。次に、
細胞を洗浄した後、Ｔ細胞を付加した。プレートを５％ＣＯ₂中で３７℃で４時間インキュベート後、収穫した。ペプチド２３および２４はＴＬＣ−ＥＧ２．４
を刺激できたが、一方その他の九量体は刺激できなかった。検定は２５対１のエ
フェクター対標的比で、３回実施した。

【図７】１２−Ｃｙｓｐ２１ｒａｓ特異的ＣＤ８＋ＣＴＬＥＧ２．８の特異性を示す
。このＣＴＬは、ペプチド（配列認識番号）２３および２４でパルス処理された
自系ＥＢＶ細胞を認識し、殺害する。ＣＴＬの生成は、前記と同様に実施した。

【図８】外生的ペプチドに対するＴＬＣＥＧ２．４の感受性を示す。これは、５１Ｃｒ⁺標識化ペプチド感作ＥＢＶ−Ｂ細胞を標的細胞として用いた用量−応答実験で検査した。標的細胞を、図６に記載したように別々にペプチド２３および２４
でパルス処理したが、但しペプチドは、Ｔ細胞の付加前に、異なる濃度で付加さ
れた。抗ｒａｓＣＴＬ活性は、ペプチド２３に関するいくつかの対数範囲に亘っ
て検出可能であって、１ｘ１０^-5Ｍのペプチド濃度で最大溶解が、そして１ｘ１
０^-7Ｍのペプチド濃度で半最大応答が認められたが、一方ペプチド２４は匹敵す
るペプチド濃度ではＣＴＬを刺激し得なかった。検定は１０対１のエフェクター
対標的比で、３回実施した。データは、３回培養の平均として表される。

【図９】外生的ペプチドに対するＴＬＣＥＧ２．８の感受性を示す。これは、図８に示したようにして、検査した。抗ｒａｓＣＴＬ活性はペプチド２３に関してはい
くつかの対数はにに亘って実証可能であったが、しかしペプチド２４に関しては
匹敵するペプチド濃度では検出可能でなかった。検定は１０対１のエフェクター
対標的比で、３回培養で実施した。データは、図８で表されたのと同様に示され
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (71)出願人 0240 ＯＳＬＯ，ＮＯＲＷＡＹ (72)発明者エリクセン、ヨン・アムンドノルウェー国、3900 ポルスグルン、ブヨルントヴェドガータン 37 Ｆターム(参考） 4C084 AA02 AA03 AA07 BA01 BA17 DC50 ZB092 ZB262 4H045 AA10 AA30 BA15 EA28

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ａ）８〜１０個のアミノ酸を含有し、ｐ２１ｒａｓ癌原遺伝子（プロトオンコジーン）タンパク質の位置１２および／または１３、または
６１を包含し、位置１２または１３または６１にアミノ酸置換を有する一方、残
りのアミノ酸は前記タンパク質の同一位置に見出されるものに対応し、ならびに
ｂ）ペプチドが位置１２および１３を包含する場合に、それらがともにＧｌｙ
ではなく、そして位置１３のアミノ酸がＧｌｙである場合には、位置１２のアミノ酸はＧｌｙ以
外の任意のアミノ酸であり得るか、またはペプチドが位置６１を包含する場合にはこの位置のアミノ酸はＧｌｎ以外の任
意のアミノ酸であり得、ならびにｃ）特異的細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）応答を誘導することを特徴とするペプチド。
【請求項２】前記ペプチドは９個のアミノ酸からなることを特徴とする請
求項１記載のペプチド。
【請求項３】前記ペプチドは以下の群から選択されることを特徴とする請
求項２記載のペプチド：【化１】（ここで、Ｘ₁はＧｌｙ以外の任意のアミノ酸であり得るが、しかしＸ₁はＡｓｐ
、Ｖａｌ、Ａｒｇ、Ａｌａ、ＣｙｓまたはＳｅｒが最も好ましい）。
【請求項４】前記ペプチドは以下の群から選択されることを特徴とする請
求項２記載のペプチド：【化２】（ここで、Ｘ₂はＧｌｙ以外の任意のアミノ酸であり得るが、しかしＸ₂はＡｓｐ
またはＶａｌが最も好ましい）。
【請求項５】前記ペプチドは以下の群から選択されることを特徴とする請
求項２記載のペプチド：【化３】（ここで、Ｘ₃はＧｌｙ以外の任意のアミノ酸であり得るが、しかしＸ₃はＡｒｇ
、Ｌｙｓ、ＨｉｓまたはＬｅｕが最も好ましい）。
【請求項６】請求項１〜５のいずれか１項記載のペプチドを少なくとも１
つ包含する製剤組成物および製薬上許容可能な担体または希釈剤。
【請求項７】前記ペプチドは活性化ｒａｓ癌遺伝子に関連した癌に苦しむ
ヒト患者の治療のための請求項６記載の製剤組成物。
【請求項８】以下の：膵臓癌、結腸−直腸癌、肺癌、悪性黒色腫、卵巣癌
および胆道癌のいずれかに苦しむ患者の治療のための請求項７記載の製剤組成物
。
【請求項９】活性化ｒａｓ癌遺伝子に関連した癌に対する耐性を得るため
のヒトの予防的治療のための請求項６記載の製剤組成物。
【請求項１０】膵臓癌、結腸−直腸癌、肺癌、悪性黒色腫、卵巣癌および
胆道癌に対する耐性を得るためのヒトの予防的治療のための請求項９記載の製剤
組成物。
【請求項１１】請求項１〜５記載の少なくとも１つのペプチドとＰＣＴ／
ＮＯ９２／０００３２号の少なくとも１つのペプチドとの組合せを包含する製剤
組成物。
【請求項１２】請求項１〜５記載のペプチドの混合物を包含する製剤組成
物。
【請求項１３】活性化ｒａｓ癌遺伝子に関連した癌の治療または予防にお
ける特異的細胞傷害性（ＣＤ８＋）Ｔ細胞応答を引き出すための製剤組成物の調
製のための請求項１〜５のいずれか１項記載のペプチドの使用。
【請求項１４】請求項１〜５記載のペプチドを用いたｉｎｖｉｖｏ、ｅｘｖｉｖｏまたはｉｎｖｉｔｒｏでの刺激により特異的細胞傷害性（ＣＤ８＋
）Ｔ細胞応答を引き出すことによるｐ２１ｒａｓ癌遺伝子に関連した癌に苦しむ
患者の治療方法。
【請求項１５】請求項１〜５記載のペプチドを用いたｉｎｖｉｖｏ、ｅｘ
ｖｉｖｏまたはｉｎｖｉｔｒｏでの刺激により特異的細胞傷害性（ＣＤ８＋）Ｔ細胞応答を引き出すことによるｐ２１ｒａｓ癌遺伝子に関連した癌に対する耐
性を得るためのヒトのワクチン接種方法。