JP2001511774A - 診断学的及び治療学的適用のためのウレアーゼ反応性輸送系 - Google Patents

診断学的及び治療学的適用のためのウレアーゼ反応性輸送系

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Abstract

(57)【要約】 生理学的コンパートメント、特に胃腸系におけるウレアーゼの濃度に対して感受性を有する様式にある、診断用マーカー又は治療用薬剤を放出する輸送系と、使用の方法。

Description

【発明の詳細な説明】 診断学的及び治療学的適用のためのウレアーゼ反応性輸送系 発明の背景 １．発明の分野 本発明は、生理学的コンパートメント、特に胃腸系におけるウレアーゼの濃度 を感知し得る様式にある、診断用マーカー又は治療用薬剤を放出する輸送系に関 する。 ２．従来技術の情報 ヘリコバクター・ピロリ(Helicobacter pylori：以前は、Campylobacter pylo riとして知られていた)は、胃炎、十二指腸炎、胃及び十二指腸潰瘍に関連する 原因であると見られてきた(Dooley,CP.ヘリコバクター・ピロリの背景及び歴史 的考察.Gastroenterol.Clin.North Am.1993;22:1-4)。これらの病気を有する患 者は、該微生物を排除しない限り(通常は、抗生物質を組み合わせて使用するこ とによる)、治癒は不可能である(Tytgatら、十二指腸潰瘍疾患に向かうヘリコバ クター・ピロリ感染.Gastroenterol.Clin.North Am.,1993;22;127-140)。その結 果、容易に診断され、且つ治療に対する反応性が容易に評価され得るための、シ ンプル且つ信頼性の高いヘリコバクター・ピロリ感染に対するマーカーが必要で ある。 現在、最も一般的に使用される、ヘリコバクター・ピロリの存在を検出する方 法は、ライトを具備した可撓性チューブを患者の胃に配置すること(内視鏡検査 と称される処置)と、該胃から生検用サンプルを得ることとによる。次に、該サ ンプルは培養され、並びに組織学的に検査されて、ヘリコバクター・ピロリが探 される。この方法は費用がかかり、加えて、患者を内視鏡からの合併症の危険に 曝す(Chodosら、カンピロバクター・ピロリと胃十二指腸疾患：有望な内視鏡的 研究と診断用試験．Am.J.Gastroenterol.988;83:1226-1230)。その結果、非侵襲 性試験が開発され、これらの問題のうちの幾つかは克服された。これらのうちの １つは、血清学的抗体検査であり、ヘリコバクター・ピロリに対するＩｇＧ抗体 の血中レベルを測定するものである。該抗体レベルは、ヘリコバクター・ピロリ 感染に 応じて上昇する。しかしながら、この試験の重大な限界は、該微生物が除去され た後でさえ、血中には、抗体が存続し得ることである。そのために、この試験は 、治療に対する応答を測定するためには有用ではなく、遠い過去における感染と 、進行中の感染を識別することができない(Brownら、ヘリコバクター・ピロリ感 染の診断．Gastroenterology Clinics of N.Am.1993;22:105-115)。 米国特許第4,830,010号(Marshall)は、ヘリコバクター・ピロリを診断するた めのもう１つの非侵襲性試験を論じており、それは、呼気中の二酸化炭素(CO2) を測定することによる。この試験は、該細菌がウレアーゼと呼ばれる酵素(尿素 をCO2とアンモニアに分解する)を有しているという事実に基づく。この試験を行 なうためには、13Ｃ又は14Ｃの何れかで標識された尿素が、患者により経口的に 摂取される。続いて、３０分及び６０分後に呼気サンプルが回収される。経口的 に摂取された尿素は、胃の中で該細菌によりＣＯ2とアンモニアに分解される。 ＣＯ2は、直ちに、血中に吸収され、次に、呼気を介して排出される。呼気中の このＣＯ2を測定するために使用される方法は、尿素の当初の標識に依存する。 仮に、13Ｃ−尿素(非放射能活性)を使用した場合、呼気中の13ＣＯ2の濃度を、 ガスアイソトープ分光計により測定する(Brownら、ヘリコバクター・ピロリ感染 の診断．Gastroenterology Clinics of N.Am.1993;22:105-115)。14Ｃ−尿素の 使用は、シンチレーションカウンターを使用して呼気中に測定される、放射能活 性を有する14ＣＯ2の産生を生じる。両方法は、共通の不利益を分かつ。その不 利益において、それらの方法は、該試験を実施ために特に訓練された個人、及び 専用の呼気回収装置を必要とし、且つ患者は、非実際的な指示に従わなくてはな らないかもしれない。 呼気試験に関する一般的な欠点に加えて、２つの呼気試験の夫々が、それ自身 で独特の問題を有している。14Ｃ−尿素の使用は、患者に放射能活性物質を投与 することを必要とする。該物質は高価であり、更にシンチレーションカウンター が分析には必要である(Brownら、ヘリコバクター・ピロリ感染の診断、Gastroen terology Clinics of N.Am 1993;22:105-115;Graham,尿素呼気試験の方法、問題 、解釈及び使用について何を知るべきか．Am.J.Gastroenterol.1991;86:1118-11 22)。13Ｃ−尿素の使用は、13ＣＯ2の検出が質量分析器(高価な機器であり、世 界中 の全地域で容易に入手できるものではない)を必要とするという不都合がある。 上記の主題の変形例は、13Ｃ−標識尿素の摂取の後に、血清中の13Ｃ−重炭酸 塩(bicarbonate)の検出を必要とする(Moulton-Barretら、胃部ヘリコバクター・ ピロリ尿素活性の評価における血清13Ｃ−重炭酸塩.Am..J.Gastroenterol．1993 ;88:369-74)。この方法は、13Ｃ−標識尿素におけるウレアーゼの活性により産 生された13ＣＯ2が、水との可逆的反応の結果として形成された重炭酸塩の形態 として血中に存在する事実に基づく： ＣＯ2＋Ｈ2Ｏ＝Ｈ+＋ＨＣＯ3- しかしながら、この方法は技術的要求が厳しく、加えて、血清中の重炭酸塩レベ ルは血中の酸−塩基バランス等の多くの変量に応じて変動し得る。 ヘリコバクター・ピロリの尿素を分解する公知の能力は、更なるもう１つの検 査（内視鏡検査で得られた生検サンプルの使用が必要である試験）の基礎である 。この検査のために、生検を患者の胃から採取し、該標本についてウレアーゼの 存在を検査した(Thillainayagamら：ヘリコバクター・ピロリ感染の血清診断の ための新規酵素ラジオイムノアッセイ．Gut 1991;32:467-469)。この方法は、迅 速な結果を得られるとはいえ、生検サンプルを得るための内視鏡検査を要求する ことが、重大な欠点である。 ヘリコバクター・ピロリのための上記検査の殆どは、主に、摂取された尿素に おけるウレアーゼの活性によるＣＯ2の産生に焦点が注がれてきた。対照的に、 同じ反応(尿素-→ＣＯ2＋２ＮＨ3)においてＣＯ2と一緒に生じるアンモニアの検 出についての報告は極僅かである。マーシャル(Marshall)は、尿素ミール(urea meal)の後に呼気中のＣＯ2又はアンモニアの何れかを測定することによりヘリコ バクター・ピロリを検出する方法の特許権を得ている(U.S.特許第4,830,010号） 。他の研究者は、15Ｎ−尿素の摂取の後で尿の15Ｎ−アンモニアを検査すること が、ヘリコバクター・ピロリの検出において有用であることを示した(Jicongら ．15NH4 +排出試験：ヘリコバクター・ピロリ感染の新しい検出方法.J.Clin.Micr obiol．1992；30：181-84)。ハミルトン(Hamilton)は、標識した尿素を摂取した 後の呼気中のアンモニアを検出する方法を記述している(USP No.4,947,861)。こ の方法は、吸収されたアンモニアの実質的な画分が、肝臓による代謝から(尿素 に)逃れるとい う前提に基づいており、それによって呼気中で測定することが可能である。この 前提は、現在の我々の一般的な生理学の理解により十分には支持はされていない という事実を全く除けば、この方法は、呼気のアンモニアを回収し分析するため の扱いにくい装置が必要であるという欠点を有している。 今までに、注目された従来の全方法は、ウレアーゼ反応のために以前から知ら れた標的のみ、主に、尿素並びにその分解産物、即ちＣＯ2(呼気で検出する)及 びアンモニア(呼気又は尿中で検出する)であった。対照的に、本発明は、血中又 は尿中に検出することが可能であり、且つ該感染のユニークな診断用マーカーと して提供できる誘導体を与える、従来知られていない他の酵素ウレアーゼの基質 を発見した。 本発明の概要 本発明は、ヒト又は他の哺乳動物における胃又は十二指腸のヘリコバクター・ ピロリの存在を診断するための新規組成物及び方法を提供する。本発明は、診断 用マーカー又は治療用化合物を輸送するためのウレアーゼ反応性系を提供する。 １つの態様において、該系は、ウレアーゼ感受性のクロスリンカーにより安定 化するミクロスフェアを具備する。該クロスリンカーがウレアーゼにより切断さ れる場合に、該ミクロスフェアは分解され、該診断用マーカー又は治療用化合物 が放出される。好ましい態様において、該ミクロスフェアはゼラチン組成物であ るが、ウレアーゼ感受性の化合物によりクロスリンクされ得る他の生物学的適応 性のヒドロゲル又は水溶解性の高分子から形成されてもよい。 もう１つの態様において、該系は、その表面に診断用マーカー又は治療用化合 物が、ウレアーゼ感受性結合により共有結合している担体を具備する。その担体 は、該診断用マーカー又は治療用化合物に対してウレアーゼ感受性結合により共 有結合し得る化学的組成物である限りは、ミクロスフェア、又は高分子化合物若 しくはその他の材料の薄いフィルムの形態にあってもよい。該担体は、薬物輸送 のために使用される、ゼラチン又はウシ血清アルブミンミクロスフェア等の高分 子で構成されてもよい。また、該担体は、胆汁酸吸収のために臨床的に使用され るイオン交換樹脂で作られてもよい。 ここで使用される「ミクロスフェア」の語は、１から２０００ミクロンまでの サイズ範囲の球状粒子を意味することを意図し、且つ典型的に臨床的に使用され ろ高分子で構成される。 更なるもう１つの態様において、該系は、尿素結合によりそれらのアミノ基を 介して結合したジペプチドの対を含む。ここで使用される「ジペプチド」の語は 、体内に存在する２０の天然のアミノ酸、並びに何れの非毒性アミノ酸の何れの 組み合わせからなるジアミノ酸を意味することを意図し、例えば、ｇｌｙ−ｇｌ ｙ、ｇｌｙ−ｌｅｕ、ｌｅｕ−ｔｙｒ等を含む。ウレアーゼが存在すると、該二 量体は分解され、遊離ジペプチドを生ずる。対にあるジペプチドは、必ずしも等 しくはない。好ましくは、該ジペプチドの２つのアミノ酸の１つが、グリシンで ある。 ここで使用される「診断用マーカー」の語は、臨床的化学研究室において一般 的に使用される何れかの化合物、又は市販用診断キットのマーカーとして使用さ れる化合物を意味することを意図する。本発明に従って使用されるべき診断用マ ーカーは、例えば、ｐ−アミノ安息香酸等を含む。 ここで使用される「治療用化合物」は、胃腸疾患に対して治療効果を有する薬 物を意味することを意図する。本発明に従って使用することが可能な治療用化合 物は、例えば、抗生物質、サイトキニン及び抗炎症剤等を含む。 また、本発明の方法は、抗生物質を、ウレアーゼ感受性結合を介して、酵素ウ レアーゼの存在する場合にのみの胃の中で該抗生物質を放出することか可能な不 活性担体に対して結合するために使用され得る。これは、ヘリコバクター・ピロ リ感染が存在する場合にのみに活性抗生物質の放出を引き起こすであろうし、且 つ、有害な影響を発生を最小限にできるであろう。この目的のために使用され得 る担体は、ゼラチンミクロスフェア、ゼラチン／硫酸コンドロイチンミクロスフ ェア、及びキトサン／アルギナートミクロスフェアを含むが、これに限られるも のではない。本組成物及び方法に使用され得る薬物は、クラリスロマイシン(cla rithromycin)、オメプラゾール、アモキシシリン、テトラサイクリン及びメトロ ニダゾールを含むが、これらに限られるものではない。 要するに、本発明の目的は、診断用マーカー及び治療用化合物の輸送のための 組成物であって、前記組成物がウレアーゼ感受性結合を含む化合物を含む、組成 物を提供することである。 好ましい態様において、該組成物は、ウレアーゼ感受性クロスリンカーにより 安定化されたミクロスフェアである。このミクロスフェアは、例えば、ゼラチン 等を含んでもよい。 もう１つの好ましい態様において、該組成物は、その表面にウレアーゼ感受性 結合を介して前記診断用マーカー又は治療用化合物を結合している担体である。 そのような担体は、ミクロスフェアの形態にあってもよい。特に好ましい態様に おいて、該ミクロスフェアは、ポリ(アクリル酸6-アミノヘキシルアミド)ビーズ を含み、該診断用マーカーはｐ−アミノ安息香酸を含む。有用な治療用化合物は 、オメプラゾール、アモキシシリン、テトラサイクリン又はメトロニダゾールを 含む。 更なるもう１つの態様において、該組成物は、それらのアミノ基を介してウレ アーゼ感受性結合により結合しているジペプチドの対を含む。特に好ましい態様 において、該ジペプチドの対は、以下の構造により表される： ［ここで、Ｒ1及びＲ2は、等しくても又は異なってもよく、水素を含む、 タンパクにおいて見られる２０の天然に存在するアミノ酸のうちの何れか の２を含むジペプチドを完成するために必要な基を表す。また、本発明は 、従来の公知の他の非毒性アミノ酸からなるそのようなジペプチドを含む と見なされる］。 また、本発明の目的は、ヘリコバクター・ピロリ感染を検出するための方法で あって、本発明の組成物を対象に投与することと、該対象からの生物学的サンプ ルを診断用マーカーの存在について検査することを具備する方法を提供すること である。この生物学的サンプルは、例えば、血液サンプル又は尿サンプル等であ ってもよい。 更に、本発明の目的は、本発明の組成物を、ヘリコバクター・ピロリに感染す ろ対象の胃腸系に投与することを具備する、治療用化合物の輸送方法を提供する ことである。 本発明は、胃又は十二指腸のヘリコバクター・ピロリ感染の有無を診断する従 来技術を越えた以下のような主要な幾つかの利点を有している： １．胃のサンプルについて生検を実施する内視鏡検査方法の使用に比べ、非侵入 性であり、且つ費用がかからない。 ２．進行性の感染を検出でき、且つ治療に対する反応を測定することか可能であ るため、血清学的抗体検査を越えた利点を有する（抗体を基にした検査は、遠い 過去の感染と、進行している感染を高い信頼性で認識することができない）。 ３．扱いにくい装置、技術者の特殊な訓練、又は患者が従うべき非実際的な指示 が不必要であるため、呼気検査を越えた利点を有する。本発明では、シンプルな 血液又は尿サンプルが回収される。 ４．血液又は尿は、患者の都合で採取でき(尿サンプルの場合は、自宅でもよい) 、後の分析のために貯蔵してもよい。 ５．該マーカーの幾つかは、現在、利用できる呼気検査のための質量分析法やシ ンチグラフィーとは対照的に、シンプルで、安価で、且つ何れの医学研究室にお いても容易に入手可能な標準的生化学方法により検出すること可能である。 発明の詳細な説明 ３つの戦略が、該ウレアーゼ反応性輸送系を作るために採用される：１）診断 用マーカー又は治療用化合物を含有するミクロスフェアを、ウレアーゼ感受性ク ロスリンカーにより安定化する。該クロスリンカーはウレアーゼにより切断され 、次に、該ミクロスフェアの分解、及び該診断用マーカー又は治療用化合物の放 出が導かれる；２）ジペプチドはそれらのアミノ基を介して尿素結合により結合 される。ウレアーゼが存在する場合、該二量体は分解され、ジペプチドを生じる ；３）診断用マーカー又は治療用化合物はミクロスフェアの表面に、ウレアーゼ 感受性結合を介して共有結合される。該化合物の放出は、ウレアーゼに対して反 応性である。化学的スキームを以下の説明において記載する。１．ウレアーゼ感受性クロスリンカーにより安定化されたミクロスフェアからの 放出 １．Ａ．ウレアーゼ感受性クロスリンカーの製造 スキーム１化合物：３の合成 ：12.46g(42mmol)のトリホスゲン、33.50g(240mmol)のグリシ ンエチル塩酸塩及び200mLのジクロロメタンを、平底フラスコに添加した。50g(4 95mmol)のトリエチルアミンと100mLのジクロロメタンとの混合物を、２時間以上 、氷塩浴(ice-salt bath)中で攪拌された反応系に添加した。氷塩浴を取り除く と同時に更なる５分間の攪拌した後、該反応混合物を室温で１０分間攪拌した。 淡黄色がかった溶液を得て、乾燥するまで蒸発した。該固体を300mLの冷水によ り洗浄することにより、トリエチルアミン塩酸塩を除去した。粗生成物を、クロ ロホルム又は酢酸エチルから再結晶し、21.50gの精製生成物(収量77.23％)を得 た。該化合物 の化学的純度は、プロトンＦＴ−ＮＭＲにより検査した。化合物４の合成 ：500mL平底フラスコに、21.50g(92.67mmol)の化合物３と50mLの 水添加し、氷浴中に沈めた。５分後、200mlの1Nの水酸化ナトリムを添加した。 該反応混合物を1.5時間攪拌し、次に、5Nの塩酸でｐＨ2-3まで酸性化した。その 固体を濾過により単離し、10mLずつの氷水で２回洗浄し、凍結乾燥し、12.52gの 白色固体(収率76.76％)を得た。化学的識別はプロトンＦＴ−ＮＭＲにより確認 した。化合物５の合成 ：2.06gのＤＣＣ(N,N'-ジクロロヘキシルジイミド)(10mmol)を、 0.75gの化合物4(4.25mmol)、1.15gのN-ヒドロキシスクシンイミド(10mmol)及び1 0mLのジメチルホルミドを添加した氷浴に浸漬した50mLの平底フラスコに、１度 に添加した。2.5時間の攪拌の後、該反応混合物を、一晩、４℃で貯蔵した。ジ シクロヘキシル尿素を濾過により除去し、少量のDMF(10mL)で洗浄した。次に、 該生成物を、約400mLのジエチルエーテルの添加により溶液から沈澱させ、濾過 により除去し、アセトニトリル又はアセトンから再結晶し、0.35gの生成物を得 た(収率22.14％)。該生成物の構造は、プロトンＦＴ−ＮＭＲにより特徴を決定 した。 １．Ｂ．ウレアーゼ感受性クロスリンカー（化合物５)により安定化したゼラチ ンミクロスフェアの合成及び酵素分解。 スキーム２ 10mLの４％ゼラチンＰＢＳ緩衝溶液(pH8.50)(100bloomのゼラチンを0.1Mのリ ン酸緩衝液に溶解した)を液体窒素浴に噴霧した。凍結したミクロスフェアを-40 ℃に冷却し、且つ0.1gのウレアーゼ感受性クロスリンカー(化合物５)を含有する 60mLのジメチルホルムアミド(DMF)に浸漬した。該反応を25分間続けた後に、該 ミクロスフェアを濾過により回収し、40mLの予冷したエタノールに移し、次に４ ℃で一晩維持した。次に、該ミクロスフェアを濾過により単離し、更に冷エタノ ールで洗浄した。次に、該ミクロスフェアを５mLの1U/mLのウレアーゼPBS緩衝液 (pH7.0)中に配置した。光学顕微鏡下での観察しながら、24時間の期間をかけて 、該ミクロスフェアを分解した。対照的に、安定化したミクロスフェアは、ウレ アーゼの存在しないPBS溶液中で、数週間、安定したままであった。このユニー クな化合物は、中央に尿素結合を、且つ２つの末端で、クロスリンキング反応の ために非常に反応性に富む２つの官能基を有する。２．クロスリンカー５によるアミノ酸の二量体化と、ウレアーゼによる該二量体 の分解(タイプIII、Jack beans) このスキームにおいて、Ｒは、例えば、何れかの天然に存在するアミノ酸を完 成する基を表す。この点において、該二量体の両半分は等しい必要はない。該ジ ペプチドは、GI系から吸収され、実際に非毒性であり、並びに血中及び好ましく は尿中で安定、且つ検出可能である化合物であるべきである。化合物１の合成 ：10mLの蒸留水に溶解した0.50gのグリシン溶液(2mmol)をpH8.50 に、1Nの水酸化ナトリウムを用いて調整し、氷浴中に浸漬した。0.37gのクロス リンカー5(1mmol)を添加した。化合物5がすっかり溶解するまで、その反応溶液 のpHを8.0-9.0で維持した。更に5分間攪拌した後、反応混合物を５NのHClを使用 してpH1.0に酸性化し、次に、１時間、冷蔵庫内(t=4℃)で貯蔵した。0.15gの固 体を、濾過により得た。その生成物の化学構造は、プロトンＦＴ−ＮＭＲにより 確認した。ウレアーゼによる化合物１の分解(タイプIII、Jack beans)： 10mgの化合物１を5mLの1U/mLのウレアーゼPBS緩衝液(pH7.0)溶液に溶解した。 その混合物を20時間室温で保存した。該尿素の切断は、ニンヒドリン試験により 確認し、それによると、同じ濃度のウレアーゼの混合物と、コントロールとして ニンヒドリン溶液との混合物の使用により、約570nmで強い吸収が見られた(図１ )。３．ウレアーゼ感受性結合を介した診断薬のミクロスフェア担体表面への結合 スキーム３３．Ａ．化合物１の合成 ：13.70g(100mmol)のパラ−アミノ安息香酸を100mLの無 水エタノールの100mLに懸濁し、氷浴に浸漬した。カップリング剤である塩化チ オニルを滴下により、添加用漏斗を介して添加した。次に、該溶液を２時間、室 温で攪拌し、約４時間還流した(t=80℃)。過剰のエタノールを真空での蒸留によ り除去した。粗生成物をエタノールから再結晶化し、18.50gの白色固体を得た( 収率92.0％)。化学構造は、プロトンＦＴ−ＮＭＲにより検査した。３．Ｂ．化合物４の合成 ：氷塩浴に浸漬した50mLのジクロロメタンに溶解した2. 08gのトリホスゲン溶液に、100mLのジクロロメタン中の4.0g(20mmol)の化合物１ と5.2g(40mmol)のジイソプロピルエチルアミン(DIPEA)の混合物を、1.5-2.5時間 の期間を掛けて滴下により添加した。更になる0.5時間の攪拌の後、20mL中のジ クロ ロメタン中の2.58g(20mmol)のDIPEAと1.70g(10mmol)の1-アミノヘキシルアミド ゲル(ビーズ)との混合物を添加した。攪拌を一晩継続した。該反応混合物を濃縮 して乾燥し、氷浴中に浸漬し、次に、100mLの1Nの水酸化ナトリウムを添加した 。攪拌を3時間継続した後に、5Nの塩酸を添加して、pHを2-3に調整した。ビーズ を濾過により回収し、多量の蒸留水で多数回洗浄し、続いて、凍結乾燥により乾 燥し、1.72gのビーズを得た。３．Ｃ．ウレアーゼの存在下におけるパラ−アミノ安息香酸(PABA)の放出 ：0.2g のビーズ４、0.00323g(100U)のウレアーゼ(タイプIII、Jack bean)及び10mLの0. 1M PBS緩衝液(pH7.0)を、15mLの遠沈管に添加した。該混合物を、室温で一晩、 立てて放置した。該分解産物を、24時間の大量透析により該酵素及び該高分子ビ ーズから分離した。該透析物は、濃縮し、乾燥した。その残渣を、UV分光測光分 析用に、10mL中のPBS緩衝液(pH7.0)に溶解した。約275nmでの吸収は、酵素によ る分解産物がPABAであることを示した。 スキーム４ ここで引用された参照文献は、ここに引用されることにより組み込まれる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 38/00 Ａ６１Ｐ 31/04 Ａ６１Ｐ 31/04 Ｃ０７Ｋ 5/06 Ｃ０７Ｋ 5/06 Ｃ１２Ｑ 1/04 Ｃ１２Ｑ 1/04 Ｇ０１Ｎ 33/569 Ｂ Ｇ０１Ｎ 33/569 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，Ｍ Ｗ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ， ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，Ｅ Ｓ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ， ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，Ｍ Ｇ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ， ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，Ｙ Ｕ，ＺＷ (72)発明者 パスリチャ、ピー・ジャイ アメリカ合衆国、テキサス州 77555― 0764、ガルベストン、ユニバーシティー・ ブールバード 301、ユニバーシティー・ オブ・テキサス・メディカル・ブランチ ４．106、マックロウ・ビルディング (72)発明者 レオン、カム・ダブリュ アメリカ合衆国、メリーランド州 21205、 ボルチモア、ロス・ビルディング 731、 デパートメント・オブ・バイオメディカ ル・エンジニアリング、ジョン・ホプキン ス・ユニバーシティー

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １．診断用マーカー又は治療用化合物を輸送するための組成物であって、前記組 成物がウレアーゼ感受性結合を含む化合物を含有する組成物。 ２．請求項１に記載の組成物であって、ウレアーゼ感受性クロスリンカーにより 安定化されたミクロスフェアである組成物。 ３．請求項１に記載の組成物であって、ウレアーゼ感受性結合を介してその表面 に前記診断用マーカー又は治療用化合物が結合している担体である組成物。 ４．請求項３に記載の組成物であって、前記担体がミクロスフェアである組成物 。 ５．請求項１に記載の組成物であって、前記組成物が、それらのアミノ基を介し てウレアーゼ感受性結合により結合したジペプチドの対を含む組成物。 ６．請求項２に記載の組成物であって、前記ミクロスフェアがゼラチンを含む組 成物。 ７．請求項４に記載の組成物であって、前記ミクロスフェアが、ポリ(アクリル 酸6-アミノヘキシルアミド)ビーズを含有し、且つ前記診断用マーカーがｐ−ア ミノ安息香酸を含む組成物。 ８．以下の式により表される請求項５に記載の組成物： ［ここで、Ｒ1及びＲ2は等しくてもよく又は異なってもよく、何れかの天 然に存在するアミノ酸を完成するために必要な基を表す］。 ９．請求項８に記載の組成物であって、ＲがＨである組成物。 １０．請求項３に記載の組成物であって、前記治療用化合物がオメプラゾール、 アモキシシリン、テトラサイクリン又はメトロニダゾールである組成物。 １１．請求項１から８の何れか１項に記載の組成物を対象に投与することと、前 記対象からの生物学的サンプルについて診断用マーカーの存在を検査することと を具備するヘリコバクター・ピロリ感染を検出する方法。 １２．請求項１１に記載の方法であって、前記生物学的サンプルが血液サンプル 又は尿サンプルである方法。 １３．請求項１から６又は１０の何れか１項に記載の組成物を、ヘリコバクター ・ピロリに感染する対象の胃腸系に投与することを具備する、治療用化合物を輸 送するための方法。
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Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX9703918A (es) 1997-05-28 1998-11-30 J Marshall M D Barry Procedimiento para preparar un producto farmaceutico reactivo para deteccion de desorden gastrointestinal causado por bacteria en el tracto gastrointestinal superior.
US6303787B1 (en) * 1998-05-27 2001-10-16 Natco Pharma Limited Intermediates and an improved process for the preparation of Omeprazole employing the said intermediates
CA2430816C (en) * 2000-12-07 2012-05-15 Altana Pharma Ag Pharmaceutical preparation in the form of a paste comprising an acid-labile active ingredient
US7008777B2 (en) * 2001-10-15 2006-03-07 Barry J. Marshall System for the detection of urease and method for using same
US6998250B2 (en) 2001-10-15 2006-02-14 Donald J. McMichael Method for detecting Helicobacter pylori
USD484988S1 (en) 2001-12-17 2004-01-06 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Diagnostic test kit with specimen-handling tool
US6783976B2 (en) 2001-12-21 2004-08-31 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Carrier and specimen-handling tool for use in diagnostic testing
CN101870729A (zh) 2003-09-09 2010-10-27 诺和诺德医疗保健公司 凝固因子ⅶ多肽
DK1742616T3 (en) * 2004-04-30 2015-01-12 Abraxis Bioscience Llc The microsphere-discharge-system for the prolonged delivery and methods of making and using the same
US8021355B2 (en) 2005-08-12 2011-09-20 Board Of Regents The University Of Texas System System, kit, and method of transgastric removal of visceral fat and other related methods
WO2015179751A1 (en) 2012-03-14 2015-11-26 Anastasia Rigas Breath analyzer and breath test methods
US20120237968A1 (en) 2011-03-14 2012-09-20 Anastasia Rigas Detector and Method for Detection of H. Pylori
WO2013040190A1 (en) 2011-09-16 2013-03-21 The Research Foundation Of State University Of New York Low concentration ammonia nanosensor

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4947861A (en) * 1989-05-01 1990-08-14 Hamilton Lyle H Noninvasive diagnosis of gastritis and duodenitis
US5439801A (en) * 1994-02-14 1995-08-08 Chek-Med Systems, Inc. Test composition for the rapid detection of helicobacter pylori in gastric biopsy tissue
US5542419A (en) * 1994-02-28 1996-08-06 Boston University Noninvasive method to detect gastric Helicobacter pylori
US5686113A (en) * 1995-03-21 1997-11-11 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Microcapsules of predetermined peptide(s) specificity (ies), their preparation and uses

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