JP2001505180A - ゲラニルゲラニル−蛋白質トランスフェラーゼの抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 開示した化合物は、インビボでのゲラニルゲラニル化により改変しうるＣＡＡＸ型蛋白質の同族体であって、数種の蛋白質のゲラニルゲラニル化を選択的に抑制する。細胞複製にて重要な数種の蛋白質を改変するファルネシル蛋白質トランスフェラーゼに対する本化合物の活性が比較的低いため、たとえば或る種の癌および炎症疾患のようなゲラニルゲラニル化された蛋白質の機能により調節される病気を処置すべく、本発明による化合物の使用が可能になる。さらに本発明には、これらゲラニルゲラニル蛋白質トランスフェラーゼ型Ｉ抑制剤を含有する化学療法組成物およびその製造方法も含まれる。

Description

【発明の詳細な説明】 ゲラニルゲラニル−蛋白質トランスフェラーゼの抑制剤 発明の背景 イソプレノイド生合成経路の中間体による蛋白質のプレニル化は新たな種類の 翻訳後の改変を示す［Ｊ．Ａ．グロムセット、Ｍ．Ｈ．ゲルブおよびＣ．Ｃ．フ ァルンスワース（１９９０）；トレンズ・バイオケミカル・サイエンス、第１５ 巻、第１３９〜１４２頁；Ｗ．Ａ．マルテース（１９９０）、ＦＡＳＥＢジャー ナル、第４巻、第３３１９〜３３２８頁］。この改変は典型的には、これら蛋白 質の膜局在および機能につき要求される。プレニル化された蛋白質は、ＣａａＸ （Ｃ、Ｃｙｓ；ａ、一般の脂肪族アミノ酸；Ｘ、他のアミノ酸）、ＸＸＣＣもし くはＸＣＸＣを包含する特徴的なＣ−末端配列を有する。３種の翻訳後の処理工 程が、Ｃ−末端ＣａａＸ配列を有する蛋白質につき記載されている：すなわちＣ ｙｓ残基に対する１５炭素（ファルネシル）もしくは２０炭素（ゲラニルゲラニ ル）イソプレノイドの付加と、最後の３個のアミノ酸の蛋白質分解切断、および 新たなＣ−末端カルボン酸部分のメチル化［Ａ．Ｄ．コックスおよびＣ．Ｊ．デ ル（１９９２ａ）、クリチカル・レビュ ー・オンコゲネシス、第３巻、第３６５〜４００頁；Ｃ．Ｍ．Ｈ．ニューマンお よびＡ．Ｉ．マギー（１９９３）、バイオヒミカ・バイオフィジカ・アクタ、第 １１５５巻、第７９〜９６頁］。或る種の蛋白質は第４の改変をも有しうる：す なわちファルネシル化されたＣｙｓに対しＮ−末端側にある１個もしくは２個の Ｃｙｓ残基のパルミトイル化。ＸＸＣＣもしくはＸＣＸＣ型で終結する蛋白質は Ｃｙｓ残基におけるゲラニルゲラニル化により改変され、内蛋白質分解処理工程 を必要としない。ＸＣＸＣで終結する或る種の哺乳動物細胞蛋白質はカルボキシ メチル化されるが、ＸＸＣＣ型で終結する蛋白質のプレニル化に続いてカルボキ シメチル化が起こるかどうか明瞭でない［Ｓ．クラーケ（１９９２）、アニュア ル・レビュー・バイオケミストリー、第６１巻、第３５５〜３８６頁］。全ての プレニル化蛋白質にっきイソプレノイドの付加が第１工程であって、その後の工 程につき必要とされる［コックスおよびデル(１９９２ａ)；Ａ．Ｄ．コックスお よびＣ．Ｊ．デル（１９９２ｂ）、カレント・オピニオン・セル・バイオロジー 、第４巻、第１００８〜１０１６頁］。 蛋白質プレニル化を触媒する３種の酵素が記載されている： すなわちファルネシル−蛋白質トランスフェラーゼ（ＦＰＴアーゼ）、ゲラニル ゲラニル−蛋白質トランスフェラーゼ型Ｉ（ＧＧＰＴアーゼ−Ｉ）、およびゲラ ニルゲラニル−蛋白質トランスフェラーゼ型II（ＧＧＰＴアーゼ−II、ＲａｂＧ ＧＰＴアーゼとも呼ばれる）。これら酵素は酵母および哺乳動物細胞の両者に見 られる［クラーケ（１９９２）；Ｗ．Ｒ．シェファーおよびＪ．ライン（１９９ ２）、アニュアル・レビュー・ジェネチックス、第３０巻、第２０９〜２３７頁 ］。ＦＰＴアーゼおよびＧＧＰＴアーゼ−Ｉはα／βヘテロダイマー酵素であっ て、共通のαサブ単位を有する。βサブ単位は異なるが約３０％のアミノ酸類似 性を有する［Ｍ．Ｓ．ブラウンおよびＪ．Ｌ．ゴールドスタイン（１９９３）、 ネイチャー、第３６６巻、第１４〜１５頁；Ｆ．Ｌ．ツァング、Ｒ．Ｅ．ディー ル、Ｎ．Ｅ．コール、Ｊ．Ｂ．ギブス、Ｂ．ギロス、Ｐ．Ｊ．カセイおよびＣ． Ａ．オマー（１９９４）、ジャーナル・バイオロジカル・ケミストリー、第２６ ９巻、第３１７５〜３１８０頁］。ＧＧＰＴアーゼーIIは異なるαおよびβサブ 単位を有し、第３成分（ＲＥＰ、Ｒａｂエスコート蛋白質）と複合してα／β触 媒サブ単位に蛋白基質を供する。これら各酵素 はファルネシル ジホスフェートもしくはゲラニルゲラニルジホスフェートをイ ソプレノイド供与体として選択的に使用すると共に、蛋白基質を選択的に識別す る。ＦＴＰアーゼはＳｅｒ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、ＧｌｎもしくはＡｌａで終結する ＣａａＸ含有蛋白質をファルネシル化する。ＧＧＰＴアーゼ−ＩはＬｅｕもしく はＰｈｅで終結するＣａａＸ含有蛋白質をゲラニルゲラニル化する。ＦＰＴアー ゼおよびＧＧＰＴアーゼＩについては、ＣａａＸテトラペプチドが、蛋白基質と 酵素との相互作用につき必要とされる最小領域をなす。ＧＧＰＴアーゼIIはＸＸ ＣＣおよびＸＣＸＣ蛋白質を改変する。ＧＧＰＴアーゼIIとその蛋白基質との間 の相互作用は一層複雑であって、識別につきＣ−末端アミノ酸の他に蛋白質配列 を必要とする。これら３種の酵素の酵素学的特性化は、或る種のものを選択的に 抑制しうるが他のものには殆ど抑制作用を示さないことを示している［Ｓ．Ｌ． モーアズ、Ｍ．Ｄ．シェーバー、Ｓ．Ｄ．モサー、Ｅ．ランズ、Ｍ．Ｂ．オハラ 、Ｖ．Ｍ．ガルスキー、Ｍ．Ｓ．マーシャル、Ｄ．Ｌ．ポンプリアーノおよびＪ ．Ｂ．ギブス、ジャーナル・バイオロジカル・ケミストリー、第２６６巻、第１ ７４３８頁（１９９１）］。 蛋白質プレニル化の生物学および酵素学的な解析は、生理的過程を変化させう る抑制剤の開発につき新たな領域を開いた。プレニル化反応は遺伝的に各種の蛋 白質の機能につき重要であることが示されている［クラーケ（１９９２）；コッ クスおよびデル（１９９２ａ）；Ｊ．Ｂ．ギブス（１９９１）、セル、第６５巻 、第１〜４頁；ニューマンおよびマギー（１９９３）；シェファーおよびライン （１９９２）］。しばしば、この必要性はＣａａＸ Ｃｙｓアクセプタを蛋白質 がもはやプレニル化されえないよう突然変異させることにより実証される。得ら れる蛋白質はその中心的な生理活性を欠如する。これら研究は、プレニル化の抑 制剤がプレニル化蛋白質により調節される生理的反応を変化させうることを示す 遺伝的「原理の証明」を与える。 蛋白質ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ型Ｉ（ＧＧＴアーゼＩ）は、ゲラ ニルゲラニル基をプレニルドナーのゲラニルゲラニル ジホスフェートから、Ｃ −末端ＣＡＡＸ型（ここで「Ｘ」残基はロイシンもしくはフェニルアラニンであ る）を有する基質蛋白質のシステイン残基に転移させる［クラーケ（１９９２） ；ニューマンおよびマギー（１９９３）］。 ＧＧＴアーゼＩの公知の標的は脳ヘテロトライマーＧ蛋白質およびＲａｓ関連の 小ＧＴＰ結合性蛋白質（たとえばＲｈｏＡ、ＲｈｏＢ、ＲｈｏＣ、ＣＤＣ４２Ｈ ｓ、Ｒａｃ１、Ｒａｃ２、Ｒａｐ１ＡおよびＲａｐ１Ｂ）のγサブ単位を包含す る［ニューマンおよびマギー（１９９３）；コックスおよびデル（１９９２ａ） ］。蛋白質ＲｈｏＡ、ＲｈｏＢ、ＲｈｏＣ、Ｒａｃ１、Ｒａｃ２およびＣＤＣ４ ２Ｈｓは細胞形状の調節に役割を有する［Ａ．Ｊ．リドレーおよびＡ．ホール（ １９９２）、セル、第７０巻、第３８９〜３９９頁；Ａ．Ｊ．リドレー、Ｈ．Ｆ ．パターソン、Ｃ．Ｌ．ジョンストン、Ｄ．カイクマンおよびＡ．ホール（１９ ９２）、セル、第７０巻、第４０１〜４１０頁；Ｇ．Ｍ．ボコッホおよびＣ．Ｊ ．デル（１９９３）、ＦＡＳＥＢジャーナル、第７巻、第７５０〜７５９頁］。 ＲａｃおよびＲａｐ蛋白質は好中球活性化に役割を有する［ボコッホおよびデル （１９９３）］。 成長因子機能およびＲａｓ機能の活性化は腫瘍形成をもたらしうる。最近、Ｒ ｈｏおよびＲａｃ蛋白質は、成長因子およびＲａｓ蛋白質により開始される細胞 内シグナルを伝達することが示された［Ｇ．Ｃ．プレンデルガストおよびＪ．Ｂ ．ギブス （１９９３）、アドバンスト・キャンサー・リサーチ、第６２巻、第１９〜６４ 頁；リドレーおよびホール（１９９２）；リドレー等（１９９２）］。具体的に は、各実験はＲｈｏおよびＲａｃ蛋白質の機能が、細胞形質転換を示唆する生物 学的パラメータである細胞形状変化および癌化を、Ｒａｓおよび成長因子がもた らすために要求されることを示した。ＲｈｏおよびＲａｃ蛋白質が機能するには ゲラニルゲラニル化を必要とするので、ＧＧＰＴアーゼＩの抑制剤はこれら蛋白 質の機能を阻止すると共に抗癌剤として有用であろう。 好中球活性化は人体炎症反応の１部である［Ｃ．ハスレット等、カレント・オ ピニオン・イミュノロジー、第２巻、第１０〜１８頁（１９８９）］。ゲラニル ゲラニル化されたＲａｃおよびＲａｐ蛋白質がこの作用につき要求され［ボコッ ホおよびデル（１９９３）；Ａ．アボ等、ネイチャー、第３５３巻、第６６８〜 ６７０頁（１９９１）；Ｕ．Ｇ．クナウス等、サイエンス、第２５４巻、第１５ １２〜１５１５頁（１９９１）；Ｅ．Ａ．エクルンド等、ジャーナル・バイオロ ジカル．ケミストリー、第２６６巻、第１３９６４〜１３９７０頁（１９９１） ；Ｍ．Ｔ．クイン等、ネイチャー、第３４２巻、第１９８〜 ２００頁（１９８９）］、したがってＧＧＰＴアーゼＩの抑制剤は抗炎症活性を 有するであろう。図面の簡単な説明 第１図。ヒトＧＧＰＴアーゼＩ βＧＧＩサブ単位のクローン化に使用された ７３０ｂｐ ＰＣＲ産生物のヌクレオチド配列。ヒトＧＧＰＴアーゼＩ βＧＧ Ｉサブ単位は、本発明による化合物のインビトロ評価に用いられる組換ヒトＧＧ ＰＴアーゼＩを作成すべく使用される。 第２図。中間体ｐＲＤ５６６のヌクレオチド配列であって、これはヒトＧＧＰ ＴアーゼＩ βＧＧＩの完全コード化配列を含むと共に、後にヒトＦＰＴアーゼ −αサブ単位のコード化配列に翻訳結合してヒトＧＧＰＴアーゼＩの発現を可能 にする。発明の要点 本発明は、インビボでのゲラニルゲラニル化により改変しうるＣＡＡＸ型の蛋 白質の同族体を含む。これらＣＡＡＸ同族体は数種の蛋白質のゲラニルゲラニル 化を抑制する。さらに、これらＣＡＡＸ同族体は、従来記載されたＣＡＡＸ同族 体［ヨーロッパ特許公開第０ ５３５ ７３１ Ａ２号］とはゲラニル ゲラニル−蛋白質トランスフェラーゼ型Ｉの抑制剤として関連酵素Ｒａｓファル ネシル蛋白質トランスフェラーゼよりも強力である点において相違する。細胞複 製にて重要な数種の蛋白質に対してはファルネシル蛋白質トランスフェラーゼに よる改変活性は比較的低いので、ゲラニルゲラニル化蛋白質の機能により調節さ れる病気を処置すべく、本発明の化合物の使用が可能になる。さらに本発明には 、これらゲラニルゲラニル トランスフェラーゼ型Ｉ抑制剤を含有する化学療法 組成物およびその製造方法も含まれる。 本発明の化合物は下式により示される。 発明の詳細な説明 本発明の化合物は、酵素ゲラニルゲラニル蛋白質トランスフェラーゼ型Ｉによ って蛋白質がゲラニルゲラニル化されるのを抑制する。本発明の第１実施形態に おいて、ゲラニルゲラニル−蛋白質トランスフェラーゼ型Ｉ抑制剤は式Ｉによっ て示され： ［式中、Ｒ¹およびＲ²は独立して： （ａ）Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル； （ｂ）Ｃ₂〜Ｃ₈アルケニル； （ｃ）Ｃ₂〜Ｃ₈アルキニル； （ｄ）置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル； （ｅ）アリール； （ｆ）置換アリール； （ｇ）ヘテロアリール； （ｈ）置換ヘテロアリール；および （ｉ）天然アミノ酸の側鎖 から選択され； Ｒ³は１〜６個の炭素原子を有し、分枝鎖もしくは直鎖であって、未置換または フェニル基により置換されたアルキル、アルケニルおよびアルキニルから選択さ れ； Ｘ−Ｙは であり； ＺはＨ₂もしくはＯである］ 或いはその医薬上許容しうる塩である。 本発明の第２実施形態は式II： ［式中、Ｒ¹およびＲ²は独立して： （ａ）Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル； （ｂ）Ｃ₂〜Ｃ₈アルケニル； （Ｃ）Ｃ₂〜Ｃ₈アルキニル； （ｄ）置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル； （ｅ）アリール； （ｆ）置換アリール； （ｇ）ヘテロアリール； （ｈ）置換ヘテロアリール；および （ｉ）天然アミノ酸の側鎖 から選択され； Ｒ³は１〜６個の原子を有し、分枝鎖もしくは直鎖であって、未置換またはフェ ニル基により置換されたアルキル、アルケニルおよびアルキニルから選択され； Ｘ−Ｙは であり； Ｒ⁴は： （ａ）Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル； （ｂ）Ｃ₃〜Ｃ₈アルケニル； （ｃ）Ｃ₃〜Ｃ₈アルキニル； （ｄ）置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル； （ｅ）アリール； （ｆ）置換アリール； （ｇ）ヘテロアリール；および （ｈ）置換ヘテロアリール から選択され； ＺはＨ₂もしくはＯである］ により示される、式Ｉの化合物のプロドラグまたはその医薬上許容しうる塩であ る。 本発明の好適化合物は次の通りである： Ｎ−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル）−バリル−イソロイシル− ロイシン； Ｎ−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル）−バリル−イソロイシル− ロイシン メチルエステル； Ｎ−［５（Ｓ）−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピルアミノ）−６（ Ｓ）−メチル−２（Ｒ）−イソプロピル−３，４（Ｅ）−ヘプテノイル］−ロイ シン； Ｎ−［５（Ｓ）−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピルアミノ）−６（ Ｓ）−メチル−２（Ｒ）−イソプロピル−３，４（Ｅ）−ヘプテノイル］−ロイ シン メチルエステル； Ｎ−［２（Ｓ）−（２（Ｓ）−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピルア ミノ）−３（Ｓ）−メチルペンチルオキシ）−３−メチルブタノイル］−ロイシ ン； Ｎ−［２（Ｓ）−（２（Ｓ）−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピルア ミノ）−３（Ｓ）−メチルペンチルオキシ）−３−メチルブタノイル］−ロイシ ン メチルエステル またはその医薬上許容しうる塩。 本発明において、開示するアミノ酸は下記する慣用の３文字および１文字の記 号により表示される。 本発明の化合物は不整中心を有することがあり、ラセミ体、ラセミ混合物およ び個々のジアステレオマーとして存在することができる。光学異性体を含むこれ ら全ての可能な異性体が本発明に包含される。さらに本発明は、２個の同じ化合 物から誘導される本発明による化合物の全てのジスルフィドをも包含する。 各成分に変動因子（たとえばアリール、複素環、Ｒ¹、Ｒ²など）が２回以上存 在する場合、それぞれに関する規定は他の存在の場合とは独立する。さらに置換 基または変動因子の組合せは、これら組合せが安定な化合物をもたらす場合のみ 許容される。 ここで用いる「アルキル」という用語は２０個までの指定数の炭素原子を有す る、環式、分枝鎖および直鎖の飽和脂肪族炭化水素基を包含する。アルキル基の 例はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−およびｔ−ブ チル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロ ペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、２−メチルシクロプロピル、シク ロプロピルメチル、オクチル、ノニル、ノルボルニル、ウンデシル、ドデシル、 トリデシル、テトラデ シル、ペンタデシル、エイコシル、３，７−ジエチル−２，２−ジメチル−４− プロピルノニル、シクロドデシル、アダマンチルなどを包含する。 「シクロアルキル」という用語は３〜７個の炭素原子を有する炭化水素環を意 味する。シクロアルキル基の例はシクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘプ チルなどである。 ここで用いる「アルケニル」という用語は分枝鎖および直鎖の両脂肪族炭化水 素基を包含し、これらは１個もしくは２個の二重結合を有すると共に２０個まで の指定数の炭素原子を有する。アルケニル基の例はビニル、アリル、３−ブテニ ル、２−ペンテニル、３−ペンテニルなどを包含する。 ここで用いる「アルキニル」という用語は分枝鎖および直鎖の両脂肪族炭化水 素基を包含し、１個の三重結合を有すると共に２０個までの指定数の炭素原子を 有する。アルキニル基の例は２−ペンチニル、ヘキシニルなどを包含する。 ここで用いる「アルコキシ」という用語は、酸素架橋を介し結合した上記個数 の炭素原子を有するアルキル基を示す。ここで用いる「ハロゲン」もしくは「ハ ロ」という用語はフルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを意味する。 ここで用いる「アリール」は各環が７員までの安定な単環式、二環式もしくは 単環式の炭素環を意味し、少なくとも１個の環は芳香族である。この種のアリー ル要素の例はフェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、ビフェ ニル、フェナンスリル、アンスリルもしくはアセナフチルを包含する。 ここで用いる「ヘテロアリール」という用語は安定な５員〜７員の単環式環ま たは安定な８員〜１１員の二環式環を示し、不飽和であると共に炭素原子とＮ、 ＯおよびＳよりなる群から選択される１〜４個の異原子とで構成される。複素環 は安定な構造を形成するように異原子もしくは炭素原子の位置で結合する。この 種の複素環式要素の例は限定はしないがベンズイミダゾリル、ベンゾチエニル、 フリル、イミダゾリル、インドリル、イソキノリニル、ピリジル、キノリニル、 チエニルなどを包含する。 アルキル、アルケニル、アリールもしくはヘテロアリールに適用される「置換 」という用語は、その成分がＣ₁〜Ｃ₆アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、置換 もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリール、−ＮＯ₂、−Ｓ ＣＦ₃、ハロゲン、−ＣＯ₂Ｈ、−ＣＯ₂−アルキル、−ＣＮもしくは−ＣＦ₃から 選択される１個もしくは２個の置換基を有するこ とを意味する。「置換アルキル」という用語は天然アミノ酸の側鎖を含まないと 理解される。 「天然アミノ酸の側鎖」という用語は天然アミノ酸のα−炭素に結合した置換 基を包含し、メチル、−ＣＨ₂ＣＯＮＨ₂、−ＣＨ₂ＣＯ₂Ｈ、−ＣＨ₂ＳＨ、−Ｃ Ｈ₂ＣＨ₂ＣＯ₂Ｈ、４−イミダゾリルメチル、イソプロピル、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＣ Ｈ₃、ベンジル、ヒドロキシメチルなどを包含する。さらに、この用語はこれら 側鎖の酸化型、たとえばメチオニンスルホキシドもしくはメチオニンスルホンの 側鎖をも包含する。 本発明による化合物の医薬上許容しうる塩は、たとえば無毒性の無機酸もしく は有機酸から生成されるような本発明による化合物の慣用の無毒性塩類を包含す る。たとえば、この種の慣用の無毒性塩類は塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファ ミン酸、燐酸、硝酸などの無機酸から誘導される塩類、並びに酢酸、プロピオン 酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン 酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢 酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安 息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エ タンジスルホン酸、蓚酸、イセチオン酸、トリフルオロ酢酸などの有機酸から作 成される塩類を包含する。 本発明による化合物の医薬上許容しうる塩は、塩基性部分を有する本発明の化 合物から慣用の化学法により合成することができる。一般に塩類は、遊離塩基を 化学量論量または過剰量の所望の塩形成性無機酸もしくは有機酸と適する溶剤中 または各種の溶剤の組合せ中で反応させることにより作成される。 本発明の化合物は慣用のペプチド合成技術および下記する他の方法により、構 成アミノ酸から合成することができる。ペプチド合成の代表的方法はたとえば次 の刊行物に開示されている：シュレーダー等、「ザ・ペプチド」、第Ｉ巻、アカ デミック・プレス（１９６５）またはボダンスキー等、「ペプチド・シンセシス 」、インターサイエンス・パブリッシャース（１９６６）またはマッコミー（編 ）、「有機化学における保護基」、プレナム・プレス（１９７３）、またはバラ ニー等、「ザ・ペプチド：アナリシス、シンセシス、バイオロジー」、第２巻、 第１章、アカデミック・プレス（１９８０）、またはスチュワート等、「固相ペ プチド合成」、第２版、ピアス・ケミカル・カンパニー（１９８４）。これら刊 行物の教示を参考のためここに 引用する。下記する化学の説明および実施例で用いる記号は次の通りである： Ａｃ₂Ｏ 無水酢酸； Ｂｏｃ ｔ−ブトキシカルボニル； ＤＢＵ １，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン； ＤＭＡＰ ４−ジメチルアミノピリジン； ＤＭＥ １，２−ジメトキシエタン； ＤＭＦ ジメチルホルムアミド； ＥＤＣ １−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチル−カルボジ イミド塩酸塩； ＨＯＢＴ １−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物； Ｅｔ₃Ｎ トリエチルアミン； ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル； ＦＡＢ 急速原子衝突； ＨＯＯＢＴ ３−ヒドロキシ−１，２，３−ベンゾトリアジン−４（３Ｈ） −オン； ＨＰＬＣ 高性能液体クロマトグラフィー； ＭＣＰＢＡ ｍ−クロルペルオキシ安息香酸； ＭｓＣｌ 塩化メタンスルホニル： ＮａＨＭＤＳ ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド； Ｐｙ ピリジン； ＴＨＦ トリフルオロ酢酸； ＴＨＦ テトラヒドロフラン。 本発明の化合物は、たとえばエステル加水分解、保護基の切除など文献公知ま たは実験部分で例示しうる他の標準的操作に加え下記する反応図式Ａ〜Ｄに示さ れる各反応を用いて作成される。重要な結合形成反応およびペプチド改変反応は 次の通りである：反応Ａ ．標準的な溶液法もしくは固相法を用いる、アミド結合形成および保護基 切除。反応Ｂ ．シアノ硼水素化ナトリウムまたは他の還元剤を用いる、アルデヒドによ るアミンの還元アルキル化による還元ペプチドサブ単位の作成。 これら反応を順次に用いて本発明の化合物を得ることができ、或いはこれらを 用いて各断片を合成し、その断片を次いで反応図式に記載されたアルキル化反応 により結合させることもできる。反応図式Ａ 反応Ａ ．アミド結合を形成する残基のカップリング 反応図式Ｂ 反応Ｂ ．還元アルキル化による還元ペプチド サブ単位の作成 ［式中、Ｒ^AおよびＲ^Bは、先に定義したＲ¹、Ｒ²もしくはＲ³であって、示した 反応条件に適合しうるその保護型、たとえばシステインのトリフェニルメチル（ トリチル）保護側鎖を包含する。 Ｘ−Ｙがエテニレン単位である本発明の或る種の化合物は、反応図式Ｃに示し た反応順序を用いて作成される。反応図式Ｃはたとえばワインレブ型アミド形成 、グリニヤール反応、アセチル化、オゾン分解、ウィチッヒ反応、エステル加水 分解、ペプチドカップリング反応、メシル化、ペプチド保護基の切除、還元アル キル化など標準操作を用いるアルケン同配体の作成を要約し、これら標準操作は 文献公知であるか或いは実験部分で 例示する。重要な反応は次の通りである：Ｂｏｃ−アミノ−エノンから対応のｓ ｙｎアミノ−アルコールへの立体選択性還元（図式Ｃ、工程Ｂ、部１）、および 三弗化硼素もしくは塩化亜鉛活性化有機−マグネシオ、有機−リチオもしくは有 機−亜鉛シアン化銅（Ｉ）ＳＮ２’立体特異性置換反応（図式Ｃ、工程Ｇ）。光 学的に純粋なＮ−Ｂｏｃアミノ酸を出発物質として使用すると共にこれら２種の 重要な反応を用いることにより、最終生成物の立体化学は良好に規定される。図 式Ｃの工程Ｈにおいては、保護システナールおよび還元剤を用いてシステイン誘 導断片を付加する。最後にメチルエステルを鹸化し、保護基を切除する。これら 最終工程の順序は臨界的でないが、塩基加水分解を最後に行う場合は化合物が対 称ジスルフィドを実質的に形成することのみを付言する。反応図式Ｃ 反応図式Ｃ続き 本発明のオキサ同配体化合物は、図式Ｄに要約した経路により作成される。ア ミノアルコール１をトリアルキルアミンの存在下にα−クロルアセチルクロライ ドでアセチル化してアミド２を得る。その後にアミド２をたとえばＴＨＦのよう なエーテル溶剤中で脱プロトン試薬（たとえば水素化ナトリウムもしくはカリウ ムｔ−ブトキシド）と反応させるとモルホリノン３を得る。次いで、塩化メチレ ン中における無水ＢＯＣおよびＤＭＡＰ（４−ジメチルアミノピリジン）での化 合物３の処理によってＮ−Ｂｏｃ誘導体４を得る。Ｒ²Ｘ^L（ここでＸ^Lはたとえ ばＢｒ^-、Ｉ^-もしくはＣｌ^-のような離脱基である）によるＴＨＦ／ＤＭＥ（１ ，２−ジメトキシエタン）における適する塩基、好ましくはＮａＨＭＤＳ［ナト リウムビス（トリメチルシリル）アミド］の存在下での化合物４のアルキル化は 化合物５を与え、これをＮａＨＭＤＳで再処理し、次いでプロトン化して化合物６ を得る。或いは、化合物６ａはアルドール縮合法により化合物４から作成する こともできる。すなわち、ＮａＨＭＤＳによる化合物４の脱プロトンに続くカル ボニル化合物Ｒ⁵Ｒ⁶ＣＯの付加はアダクト７を与える。化合物７の脱水を、メシ ル化およびその後のＤＢＵ（１，８−ジアザビシク ロ［５．４．０］ウンデク−７−エン）により触媒される除去、またはピリジン 中でのオキシ塩化燐による化合物７の直接的処理により行って、オレフィン８を 得ることができる。次いで、化合物８の接触水素化は化合物６ａを与える。水性 ＴＨＦにおける過酸化水素リチウムによる化合物６の直接的加水分解は酸９ｂを 生成する。場合によっては、この変換を２段階法、すなわち塩酸中で化合物６を 加水分解して化合物９ａを得、次いでこれをＢＯＣ−ＯＮもしくは無水ＢＯＣで 誘導化して化合物９ｂを得ることが一層効率的である。酸９ｂとアミノ酸のエス テルとの間のアミド結合形成を上記引例に例示された条件下で行って、誘導体１ ０ を得る。気体塩化水素による化合物１０の処理および保護システイン誘導アル デヒド１１および還元剤（たとえばシアノ硼水素化ナトリウム）での還元アルキ ル化は、化合物１２を与える。保護基の切除により化合物１３を得ると共に対応 する酸１４への加水分解を、たとえばアルコールもしくは水性ミリウ（ｍｉｌｉ ｅｕｘ）におけるＮａＯＨでの処理に続く希塩酸での慎重な酸性化のような標準 法により行う。アミノ−末端保護基の除去前にエステルを鹸化することもできる 。図式Ｄ 図式Ｄ（続き） 本発明の化合物は、数種の蛋白質の翻訳後処理の際の第１工程を触媒するゲラ ニルゲラニル蛋白質トランスフェラーゼを抑制する。これら化合物は哺乳動物（ 特にヒト）のための医薬作用物質として有用である。これら化合物は、異常な細 胞増殖疾患および癌の処置に使用すべく患者に投与することができる。この種の 癌は限定はしないが成長因子刺激性の癌、たとえばｅｒｂ Ｂ２などにより活性 化される乳癌、さらにＲａｓ調整性の癌、たとえば結腸癌、膵臓癌などを包含す る。本発明の化合物はさらにＮＡＰＤＨオキシダーゼにより調整される炎症病、 すなわち組織損傷が食細胞（好中球、大食球、好酸球）により媒介されるような 病気の処置に使用すべく患者に投与することもできる。この種の炎症病はリュー マチ性関節炎、炎症性腸病、間質性肺水腫、心筋梗塞、嚢胞性線維腫などを包含 する。 本発明の化合物は哺乳動物（好ましくはヒト）に単独で、或いはより好ましく は医薬上許容しうるキャリヤもしくは希釈剤と組合せて、必要に応じたとえばア ラムのような公知のアジュバントと共に医薬組成物として標準医薬慣例にしたが い投与することができる。これら化合物は静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、肛門 内および局部経路の投与を含め経口的または非経口的 に投与することができる。 本発明による化学療法化合物を経口使用するには、選択された化合物をたとえ ば錠剤もしくはカプセルの形態で、或いは水溶液もしくは懸濁液として投与する ことができる。経口使用する錠剤の場合、一般的に使用されるキャリヤは乳糖お よびコーンスターチを包含し、たとえばステアリン酸マグネシウムのような滑剤 が一般に添加される。カプセル型で経口投与するには、有用な希釈剤は乳糖およ び乾燥コーンスターチを包含する。経口使用するのに水性懸濁液が必要とされる 場合は、活性成分を乳化剤および懸濁剤と組合せる。所望ならば、甘味料および ／または香味料を添加することもできる。筋肉内、腹腔内、皮下および静脈内使 用については、一般に活性成分の無菌溶液を作成して溶液のｐＨを調整すると共 に緩衝するのが適している。静脈内使用については、溶解質の全濃度を調節して 製剤を等張性にすべきである。 さらに本発明は、治療上有効量の本発明による化合物を医薬上許容しうるキャ リヤもしくは希釈剤と共に或いはそれなしに投与することからなる或る種の癌お よび炎症疾患の処置に有用な医薬組成物をも包含する。本発明の適する組成物は 、本発明 の化合物と薬理学上許容しうるキャリヤ（たとえば７．４のｐＨレベルにおける 塩水）とからなる水溶液を包含する。これら溶液は、局部的ボルス注射により患 者の筋肉内血流に導入することができる。 本発明による化合物をヒト患者に投与する場合、一般に１日投与量は担当医に より決定され、投与量は一般に個々の患者の年齢、体重および感受性、並びに患 者の病状の程度に応じて変化する。 １例として、次の適する量の化合物を癌の処置を受ける哺乳動物に投与する。 投与は１日当たり約０．１〜約２０ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは１日当たり０． ５〜約１０ｍｇ／体重ｋｇの量にて行われる。 他の例においては、次の適する量の化合物を炎症疾患の処置を受ける哺乳動物 に投与する。勿論、式Ｉの化合物の予防もしくは治療投与量の程度は、処置すべ き症状の性質もしくは程度および式Ｉの特定化合物とその投与ルートに応じて変 化する。一般に抗炎症に使用するには、投与は１日当たり約０．１〜約１００ｍ ｇ／体重ｋｇ、好ましくは１日当たり０．５〜約１０ｍｇ／体重ｋｇの量にて行 われる。他方、或る場合はこれら範 囲外の投与量を使用することも必要である。 実施例 さらに本発明の理解を助けるため、実施例につき説明する。 用いた特定物質、種類および条件は単に本発明の例示に過ぎず、本発明の範囲を 限定するものでない。 実施例にて示す標準的な後処理とは、溶剤抽出および１０％クエン酸と１０％ 重炭酸ナトリウムと必要に応じブラインとによる有機溶液の洗浄を意味する。各 溶液は硫酸ナトリウムで脱水し、回転蒸発器で減圧蒸発させた。 実施例１ Ｎ−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル）−バリル−イソロイシル−ロイシン メチルエステルの作成 工程Ａ Ｎ−（２（Ｒ）−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−トリフ ェニルメチルメルカプトプロピル）−バリル−イソロイシル−ロイシン メチルエステルの作成 慣用の溶液相ペプチド合成方法を用いて、トリペプチドエステルであるバリル −イソロイシル−ロイシン メチルエステルを合成した。このトリペプチドのト リフルオロ酢酸塩（３６０ ｍｇ、０．７７ミリモル）を１４７ｍｇ（１．５ミリモル）の酢酸カリウムと共 に５ｍｌのメタノールに溶解させ、６７０ｍｇ（１．５ミリモル）のＮ−Ｂｏｃ −Ｓ−トリチルシステナール［Ｎ−Ｂｏｃ−ロイシナールを作成するためのゴエ ル、クロールス、スチールおよびケステン、オーガニック・シンセシス、第６７ 巻、第６９〜７４頁（１９８８）の方法を用いて作成］を添加した。シアノ硼水 素化ナトリウム（４７ｍｇ、０．７５ミリモル）を添加し、混合物を１晩撹拌し た。この混合物をエーテルで希釈し、水と５％水酸化アンモニウムとブラインと で洗浄した。溶液を脱水し（硫酸ナトリウム）、次いで蒸発させて白色フォーム を得、これをクロマトグラフィー（塩化メチレン中の１→１５％アセトン）によ り精製した。標記化合物を油状物質として得た。工程Ｂ Ｎ−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル）−バリル−イソロイシル−ロイシン メチルエステルの作成 工程Ａに記載したように作成した保護プソイドペプチドの試料（７２８ｍｇ、 ０．９２ミリモル）を１００ｍＬの塩化メチレンに溶解し、５０ｍＬのＴＦＡを 添加し、得られた黄色溶 液を直ちに０．８０ｍＬ（５ミリモル）のトリエチルシランで処理した。４５分 後、溶剤を蒸発させ、残留物をヘキサンと０．１％水性ＴＦＡとの間に分配させ た。水溶液を凍結乾燥させた。この物質をさらに逆相ＨＰＬＣ（５→９５％アセ トニトリル／０．１％ＴＦＡ／水）により精製して標記化合物を得た。 ＦＡＢ質量スペクトル ｍ／ｚ＝447（Ｍ＋１）。 分析：Ｃ₂₁Ｈ₄₂Ｎ₄Ｏ₄Ｓ・1.8ＴＦＡの計算値：Ｃ45.24，Ｈ6.75，Ｎ8.56。 実測値：Ｃ45.26，Ｈ6.77，Ｎ8.50。 実施例２ Ｎ−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル）−バリル−イソロイシル−ロイシン： 工程Ａ Ｎ−（２（Ｒ）−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−トリフ ェニルメチルメルカプトプロピル）−バリル−イソロイシル−ロイシンの作成 実施例１、工程Ａの生成物（６０ｍｇ、０．０７６ミリモル）を１ｍＬのメタ ノールに溶解させ、１５０μＬの１Ｎ ＮａＯＨを添加した。１晩撹拌した後、 溶液を１５０μＬの１０％クエン酸で酸性化させ、生成物をエーテルで抽出した 。このエーテル溶液を水とブラインとで洗浄し、次いで脱水した（硫酸ナトリウ ム）。蒸発により標記化合物を固体として得た。工程Ｂ Ｎ−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル）−バリル−イソロイシル−ロイシンの作成 実施例１、工程Ｂの方法を用い、保護基をＴＦＡおよびトリエチルシランで除 去して標記化合物を得た。ＦＡＢ質量スペクトル、ｍ／ｚ＝４３３（Ｍ＋１）。 分析：Ｃ₂₀Ｈ₄₀Ｎ₄Ｏ₄Ｓ・２ＴＦＡの計算値：Ｃ43.63，Ｈ6.41，Ｎ8.48。 実測値：Ｃ43.26，Ｈ6.60，Ｎ8.49。実施例３ Ｎ−［５（Ｓ）−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピ ルアミノ）−６（Ｓ）−メチル−２（Ｒ）−イソプロピル−３，４（Ｅ）−ヘプテノニル］−ロイシン メチルエステルの作成 工程Ａ ３（Ｓ）−Ｎ−ｔ−（ブチルオキシ）カルボニルアミノ−２，６−ジメチル−５，６−ヘプテン−４−オンの作成 酢酸エチル（１８０ｍＬ）におけるＮ−ｔ−（ブトキシ）カルボニル−Ｌ−バ リン（１２ｇ、５５．２ミリモル）の低温（０℃）溶液に、Ｎ−メチルモルホリ ン（６．１ｍＬ、５５．２ミリモル）とクロル蟻酸イソブチル（７．１６ｍＬ、 ５５．２ミリモル）とを順次に添加した。得られた白色懸濁物を０℃にて１５分 間撹拌し、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（５．３９ｇ、５５．２ ミリモル）とＮ−メチルモルホリン（６．１ｍＬ、５５．２ミリモル）とで処理 し、次いで室温にて１晩撹拌した。得られた混合物を水と１０％クエン酸水溶液 とブラインとで順次に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、次いで 濃縮した。得られた油状物をヘキサン中の２０％酢酸エチルで溶出させるシリカ ゲルにてクロマト グラフにかけた。適するフラクションの回収および濃縮により１１．０７ｇ（７ ３％）の対応アミドを得る。 １Ｌの３首丸底フラスコにマグネシウム切屑（４４ｇ、１．８モル）を入れ、 絶えず乾燥アルゴンを流しながら火焔乾燥させた。切屑をアルゴン雰囲気下でさ らに３〜４時間にわたり室温にて撹拌乾燥することにより活性化させた。新たに ナトリウムベンゾフェノンケチルから蒸留したテトラヒドロフラン（４５０ｍＬ ）と臭化２−メチルプロペニル（５０ｇ、０．３７モル）と沃素の結晶とを添加 した。この混合物を、僅かな還流が生ずるまで加熱器で緩和に加温した。加熱器 を外さずに加熱を中断し、混合物をアルゴン雰囲気下で１晩撹拌した。 テトラヒドロフラン（３００ｍＬ）におけるＮ−ｔ−（ブトキシ）カルボニル バリン−Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミド（１１ｇ、４２ミリモル）の低温 （−５０℃）溶液にグリニヤール試薬を、−４０℃未満の温度を維持しながら２ ０分間かけて添加した。この混合物をゆっくり室温まで加温した。溶液をジエチ ルエーテルで希釈し、１０％クエン酸水溶液で処理し、ブラインで洗浄し、硫酸 マグネシウムで脱水し、濾過し、次いで減圧濃縮した。残留油をヘキサン中の１ ５％酢酸エチルで溶 出させるシリカゲル上でのクロマトグラフにかけた。適するフラクションの回収 および濃縮により標記化合物を得た。工程Ｂ ３（Ｓ）−Ｎ−ｔ−（ブチルオキシ）カルボニルアミノ−４ （Ｒ）−アセトキシ−２，７−ジメチル−５，６−ヘプテンの作成 メタノール（１５０ｍＬ）における３（Ｓ）−Ｎ−ｔ−（ブチルオキシ）カル ボニルアミノ−２，６−ジメチル−５，６−ヘプテン−４−オン（７．９ｇ、３ ０．９ミリモル）の低温（０℃）溶液に硼水素化ナトリウムを、ヘキサン中の２ ０％酢酸エチルで溶出させるシリカゲル上でのｔｌｃにより監視して反応が完結 するまで少しずつ添加した。得られた混合物を減圧濃縮した。残留物をジエチル エーテルに懸濁させ、順次に１Ｍ塩酸水溶液とブラインとで洗浄し、硫酸マグネ シウムで脱水し、濾過し、次いで減圧濃縮した対応のアルコールを得た。 さらに精製することなく、粗製アルコールと４−Ｎ，Ｎ−ジメチル−アミノピ リジン（９５ｍｇ）とピリジン（１５ｍＬ）とをジクロルメタン（４０ｍＬ）に 溶解させ、０℃まで冷却し、次いで無水酢酸（１５ｍＬ）で処理した。得られた 混合物を室 温にて２時間にわたり撹拌し、次いで減圧濃縮した。残留油をヘキサン中の２０ ％酢酸エチルで溶出させるシリカゲル上でのクロマトグラフにかけた。適するフ ラクションの回収および濃縮により酢酸塩を白色固体として得た。工程Ｃ ５（Ｓ）−Ｎ−ｔ−（ブチルオキシ）カルボニルアミノ−４ （Ｒ）−アセトキシ−６−メチル−２，３−Ｅ−ヘプテン酸メチルの作成 ジクロルメタン（１４０ｍＬ）における３（Ｓ）−Ｎ−ｔ−（ブチルオキシ） カルボニルアミノ−４（Ｒ）−アセトキシ−２，７−ジメチル−５，６−ヘプテ ン（９．４７ｇ、３１．６ミリモル）の低温（−７８℃）溶液に、絶えずオゾン の流れを青色が持続するまでバブリングさせた。この混合物をさらに５分間にわ たり撹拌し、アルゴンでパージして過剰のオゾンを除去した。次いで硫化ジメチ ル（２３ｍＬ）を添加し、反応混合物を室温まで加温した。得られた混合物を− ７８℃まで冷却し、次いで（カルボメトキシメチレン）−トリフェニルホスホラ ン（２３．３ｇ、６９．６ミリモル）を添加した。この混合物を室温にて１晩撹 拌し、シリカゲル（２０ｇ）上で濃縮 した。得られた固体をヘキサン中の２０％酢酸エチルで飽和されたシリカゲルの カラムに充填し、カラムを同じ溶剤混液で溶出させた。適するフラクションの回 収および濃縮によりヘプテン酸エステルを得た。工程Ｄ ５（Ｓ）−Ｎ−ｔ−（ブチルオキシ）カルボニルアミノ−４ （Ｒ）−ヒドロキシ−６−メチル−２，３−Ｅ−ヘプテン酸の作成 テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）における５（Ｓ）−Ｎ−ｔ−（ブチルオキシ ）カルボニルアミノ−４（Ｒ）−アセトキシ−６−メチル−２，３−Ｅ−ヘプテ ン酸メチル（９．６２ｇ、２９．２４ミリモル）の溶液に、メタノール：水（３ ：１ｖ／ｖ）における水酸化リチウム（５ｇ）の飽和溶液を添加した。次いで混 合物を最少量のメタノール：水（３：１ ｖ／ｖ混液）の添加により均質となし 、２日間にわたり室温で撹拌した。得られた溶液を塩酸水溶液によりｐＨ５まで 酸性化させ、減圧濃縮した。残留物をクロロホルム中の２０％メタノールで溶出 させるシリカゲルの小プラグに通過させた。適するフラクションの回収および濃 縮により対応のヒドロキシ酸を得た。工程Ｅ ５（Ｓ）−Ｎ−ｔ−（ブチルオキシ）カルボニルアミノ−４ （Ｒ）−ヒドロキシ−６−メチル−２，３−Ｅ−ヘプテノイル−ロイシン メチルエステルの作成 ジメチルホルムアミド（６ｍＬ）における５（Ｓ）−Ｎ−ｔ−（ブチルオキシ ）カルボニルアミノ−４（Ｒ）−ヒドロキシ−６（Ｓ）−メチル−２，３−Ｅ− ヘプテン酸（０．４０ｇ、１．３９ミリモル）の溶液に、１−（３−ジメチルア ミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（０．４０ｇ、２．０９ミリ モル）と１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（０．２８ｇ、２．０９ミリ モル）とＬ−ロイシン メチルエステル塩酸塩（０．７６ｇ、４．１８ミリモル ）とジイソプロピルエチルアミン（０．６８ｍＬ、３．９ミリモル）とを添加し た。得られた混合物を室温にて１晩撹拌し、減圧濃縮した。残留物を酢酸エチル で希釈し、有機溶液を順次に水と１０％クエン酸水溶液とブラインとで洗浄し、 硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、次いで濃縮した。次いで残留物をクロロホ ルム中の５％メタノールで溶出させるシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィ ーにかけた。適するフラクションの回収および濃縮 により結合生成物を得た。工程Ｆ ５（Ｓ）−Ｎ−ｔ−（ブチルオキシ）カルボニルアミノ−４ （Ｒ）−（メチルスルホニル）オキシ−６−メチル−２，３−Ｅ−ヘプテノイル−ロイシン メチルエステルの作成 ジクロルメタン（２ｍＬ）とピリジン（１ｍＬ）との混液における５（Ｓ）− Ｎ−ｔ−（ブチルオキシ）カルボニルアミノ−４（Ｒ）−ヒドロキシ−６−メチ ル−２，３−Ｅ−ヘプテノイル−ロイシン メチルエステル（０．３９ｇ）０． ９８ミリモル）の低温（−２０℃）溶液に、塩化メタンスルホニル（０．５ｍＬ ）を添加した。得られた混合物を０℃に１晩保ち、次いで減圧濃縮した。残留物 をジクロルメタンで希釈し、順次に飽和重炭酸ナトリウムとブラインとで洗浄し た。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を酢酸エチ ルとヘキサンとの混液（８：２ ｖ／ｖ）で溶出させるシリカゲル上でのカラム クロマトグラフィーにかけた。適するフラクションの回収および濃縮によりメシ レートを得、これは−１０℃での貯蔵につき安定であった。工程Ｇ ５（Ｓ）−Ｎ−ｔ−（ブチルオキシ）カルボニルアミノ−６− メチル−２（Ｒ）−ｉ−プロピル−３，４−Ｅ−ヘプテノイル−ロイシン メチルエステルの作成 テトラヒドロフラン（２０ｍＬ、ナトリウムベンゾフェノンケチルから新たに 蒸留）におけるシアン化銅（Ｉ）（０．１７ｇ、１．９ミリモル）の低温（−７ ８℃）懸濁物に、テトラヒドロフランにおける塩化ｉ−プロピルマグネシウム（ ０．９４ｍＬ、２．０Ｍ、１．９ミリモル）の溶液を添加した。この混合物を均 質溶液が形成されるまで０℃にて撹拌した。溶液が形成した後、これを−７８℃ まで冷却し、三弗化硼素エーテル化物（０．２４ｍＬ、１．９ミリモル）を添加 し、得られた混合物を−７８℃にて７分間撹拌した。テトラヒドロフラン（１５ ｍＬ）における５（Ｓ）−Ｎ−ｔ−（ブチルオキシ）カルボニルアミノ−４（Ｒ ）−（メチルスルホニル）オキシ−６−メチル−２，３−Ｅ−ヘプテノイル ロ イシン メチルエステル（０．１５ｇ、０．３１ミリモル）の溶液を上記混合物 に滴下した。得られた溶液を−７８℃にて３時間撹拌し、飽和塩化アンモニウム 水溶液（ｐＨ８）で反応停止させ、ジエチルエーテ ルで希釈した。有機溶液をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過 し、次いで濃縮した。残留物をヘキサン中の６０％酢酸エチルで溶出させるシリ カゲル上でのクロマトグラフにかけた。適するフラクションの回収および濃縮に より３，４−Ｅ−ヘプテノイル ロイシン メチルエステルを得た。工程Ｈ ５（Ｓ）−［２（Ｒ）−Ｎ−ｔ−（ブチルオキシ）カルボニル アミノ−３（Ｓ）−トリフェニルメチルメルカプトプロピルア ミノ］−６−メチル−２（Ｒ）−ｉ−プロピル−３，４−Ｅ−ヘプテノイル−ロイシン メチルエステル 酢酸エチル（１０ｍＬ）とジクロルメタン（１０ｍＬ）との混液における５（ Ｓ）−Ｎ−ｔ−（ブチルオキシ）−カルボニルアミノ−６−メチル−２（Ｒ）− ｉ−プロピル−３，４−Ｅ−ヘプテノイル−ロイシン メチルエステル（８２ｍ ｇ、０．１９ミリモル）の低温（０℃）溶液に、絶えず無水塩化水素の流れを１ ０分間にわたりバブリングさせた。混合物をキャップし、０℃にてさらに４０分 間にわたり撹拌した。得られた溶液を次いでアルゴンの流れでバージし、減圧濃 縮して対応の塩酸塩を得た。 上記アミノ−ヘプテノイルアミド塩酸塩とＮ−ｔ−（ブチルオキシ）カルボニ ル−Ｓ−トリフェニルメチル−Ｌ−システイン アルデヒド（２２３ｍｇ、０． ５ミリモル）とモレキュラシーブ（３Ａ、粉末）とをメタノール（６ｍＬ）中で 合した。ｐＨを室温にて酢酸の添加により５に調整し、シアノ硼水素化ナトリウ ム（１９ｍｇ、０．３ミリモル）を添加し、混合物を室温にて１晩撹拌した。得 られたスラリーを濾過して濃縮した。残留物を酢酸エチルで希釈し、ブラインで 洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、次いで減圧濃縮した。残留物をヘ キサン中の１０％酢酸エチルで溶出させるシリカゲル上でのクロマトグラフにか けて結合生成物を得た。工程Ｉ ５（Ｓ）−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピルアミ ノ］−６−メチル−２（Ｒ）−ｉ−プロピル−３，４−Ｅ−ヘプテノイル−ロイシン メチルエステルの作成 ジクロルメタン（１．４ｍＬ）とトリフルオロ酢酸（０．７ｍＬ）との混液に おける５（Ｓ）−［２（Ｒ）−Ｎ−ｔ−（ブチルオキシ）カルボニルアミノ−３ （Ｓ）−トリフェニルメチルメルカプトプロピルアミノ］−６−メチル−２（Ｒ ）−ｉ− プロピル−３，４−Ｅ−ヘプテノイル−ロイシン メチルエステル（４０ｍｇ、 ５４μモル）の溶液に、室温にてトリエチルシラン（３４μＬ、２１μモル）を 添加した。得られた溶液を室温にて１時間撹拌し、次いで減圧濃縮した。残留物 を０．１％トリフルオロ酢酸水溶液（５ｍＬ）とヘキサン（２ｍＬ）との混液に 溶解させた。水層をヘキサンでさらに４回洗浄し、減圧下で撹拌して残留ヘキサ ンを除去し、次いで１晩にわたり凍結乾燥して所望の生成物をトリフルオロ酢酸 塩として得た。 分析Ｃ₂₀Ｈ₄₁Ｏ₃Ｎ₃Ｓ・2.3ＣＦ₃ＣＯＯＨの計算値：Ｃ45.36，Ｈ6.44，Ｎ6.20 。実測値：Ｃ45.22，Ｈ6.50,Ｎ6.49。 実施例４ ５（Ｓ）−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピルアミ ノ］−６−メチル−２（Ｒ）−ｉ−プロピル−３，４−Ｅ−ヘプテノイル−ロイシンの作成 メタノール（５０μＬ）における５（Ｓ）−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカ プトプロピルアミノ］−６−メチル−２（Ｒ）−ｉ−プロピル−３，４−Ｅ−ヘ プテノイル−ロイシン メチルエステル（実施例３の生成物、２．６２ｍｇ）３ ．８６μモ ル）の溶液に、水酸化ナトリウムの水溶液（１５．５μＬ、１．００Ｍ）を添加 した。室温にて１時間にわたり静置した後、溶液をメタノールにより１０ｍＭま で希釈した。ＨＰＬＣ分析は、メチルエステルから対応する酸への完全変換を確 認した。 実施例５ Ｎ−［２（Ｓ）−（２（Ｓ）−（２（Ｒ）−アミノ−３−メル カプトプロピルアミノ）−３（Ｓ）−メチルペンチルオキシ）−３−メチルブタノイル］−ロイシン メチルエステルの作成 工程Ａ Ｎ−（α−クロルアセチル）−Ｌ−イソロイシノールの作成 −７８℃のＣＨ₂Ｃｌ₂（５００ｍＬ）におけるＬ−イソロイシノール（２０ｇ 、０．１７モル）とトリエチルアミン（２８．５６ｍＬ、０．２０４モル）との 撹拌溶液に、塩化クロルアセチル（１６．３ｍＬ、０．２０４モル）を５分間か けて添加した。冷却浴を外し、溶液を−２０℃まで加温した。混合物をＥｔ０Ａ ｃで希釈し、順次に１Ｍ ＨＣｌとブラインとで洗浄し、脱水した（Ｎａ₂ＳＯ₄ ）。減圧蒸発させて標記アミド化合物を得た。 Ｒ_f＝0.3，ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ（９５：５）； 工程Ｂ ５（Ｓ）−［１（Ｓ）−メチル］プロピル−２，３，５，６−テトラヒドロ−４Ｈ−１，４−オキサジン−３−オンの作成 ＴＨＦ（１２５ｍＬ）におけるＮ−（α−クロルアセチル）−Ｌ−イソロイシ ノール（７．４ｇ、０．０３８モル）の撹拌溶液に、０℃にてアルゴン下に水素 化ナトリウム（鉱油における６０％分散物２．２ｇ、０．０５５モル）をガス発 生を伴いながらゆっくり添加した。添加を完了した後、混合物を室温まで加温し 、１６時間撹拌した。水（２．８ｍＬ）を添加し、溶剤を減圧蒸発させた。残留 物をＣＨＣｌ₃（７０ｍＬ）に溶解させ、水と飽和ＮａＣｌ溶液とで洗浄した。 有機層を脱水し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、減圧蒸発させた。残留物をＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯ Ｈ（９６：４）で溶出させるシリカゲルを用いるクロマトグラフにかけて、標記 ラクタム化合物を白色固体として得た。 Ｒ_f＝0.35，ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ（95：５）； 工程Ｃ Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−５（Ｓ）一［１（Ｓ）−メ チル］−プロピル−２，３，５，６−テトラヒドロ−４Ｈ−１，４−オキサジン−３−オンの作成 ５（Ｓ）−［１（Ｓ）−メチル］プロピル−２，３，５，６−テトラヒドロ− ４Ｈ−１，４−オキサジン−３−オン（１２．２ｇ、０．０７７６モル）とＤＭ ＡＰ（１８．９ｇ、０．１５５モル）とを塩化メチレン（１２０ｍＬ）に室温に てアルゴン下で溶解させた。無水Ｂｏｃ（３３．９ｇ、０．１５５モル）を撹拌 溶液にガス発生を伴いながら１度に添加し、混合物を室温にて１６時間撹拌した 。溶剤を減圧蒸発させ、残留物を酢酸エチルに溶解し、順次に１０％クエン酸と ５％ＮａＨＣＯ₃と最後にブラインとで洗浄した。有機抽出物を脱水し（Ｎａ₂Ｓ Ｏ₄）、減圧蒸発させた。ヘキサン中の２０％ＥｔＯＡｃで溶出させるシリカゲ ル上での残留物のクロマトグラフィーは標記化合物を白色固体として与えた。 Ｒ_f＝0.75，ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（20：80）；ｍｐ59-60℃ 分析：Ｃ₁₃Ｈ₂₃Ｏ₄Ｎの計算値：Ｃ60.68，Ｈ9.01，Ｎ5.44。 実測値：Ｃ60.75，Ｈ9.01，Ｎ5.58。 工程Ｄ Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−２（Ｒ）−（１−ヒドロキ シ−１−メチル）エチル−５（Ｓ）−［１（Ｓ）−メチル］プ ロピル−２，３，５，６−テトラヒドロ−４Ｈ−１，４−オキサジン−３−オンの作成 ＤＭＥ（６ｍＬ）におけるＮ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−５（Ｓ）−［１ （Ｓ）−メチル］プロピル−２，３，５，６−テトラヒドロ−４Ｈ−１，４−オ キサジン−３−オン（０．５ｇ、１．９４ミリモル）の溶液を−６０℃まで冷却 し、Ｎａ ＨＭＤＳ（ＴＨＦ中１．０Ｍ、２．１４ｍＬ、２．１４ミリモル）の溶液を含有 するフラスコにカニューレを介しアルゴン下で−７８℃にて移した。得られた混 合物を５分間撹拌し、アセトン（０．１６ｍｌ、２．１４ミリモル）を添加し、 −７８℃にて４時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液（２． １４ｍＬ）とブライン（４ｍＬ）と水（１ｍＬ）とで処理した。次いで、これを エーテル（２１０ｍＬ）で抽出した。抽出物を合して脱水し、濾過し、次いで蒸 発させて残留物を得た。フラッシュクロマトグラフィーによる残留物の精製は標 記化合物を油状物として与えた。 工程Ｅ Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル−２−イソプロピリデニル−５ （Ｓ）−［１（Ｓ）−メチル］−プロピル−２，３，５，６−テトラヒドロ−４Ｈ−１，４−オキサジン−３−オンの作成 ピリジン（２０ｍＬ）におけるＮ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−２（Ｒ）− （１−ヒドロキシ−１−メチル）エチル−５ （Ｓ）−［１（Ｓ）−メチル］プロピル−２，３，５，６−テトラヒドロ−４Ｈ −１，４−オキサジン−３−オン（０．５９７ｇ、１．２６ミリモル）の溶液を ０℃まで冷却し、オキシ塩化燐（１．２３ｍＬ）で処理し、次いで得られた混合 物を室温まで加温し、１晩撹拌した。この反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶 液（５０ｍＬ）で処理し、塩化メチレンで３回抽出した。抽出物を合してブライ ン（１５ｍＬ）で洗浄し、脱水し、濾過し、次いで蒸発させて残留物を得、これ をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して標記化合物を得た。 工程Ｆ Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル−２（Ｓ）−イソプロピル−５ （Ｓ）−［１（Ｓ）−メチル］プロピル−２，３，５，６−テトラヒドロ−４Ｈ−１，４−オキサジン−３−オンの作成 酢酸エチル（２０ｍＬ）におけるＮ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−２−イソ プロピリデニル−５（Ｓ）−［１（Ｓ）−メ チル］−プロピル−２，３，５，６−４Ｈ−１，４−オキサジン−３−オン（０ ．１９ｇ、０．６３ミリモル）とＰｔＯ₂（２０ｍｇ）との混合物を、パール振 とう器にて５４ｐｓｉで５時間にわたり水素化した。反応混合物をセライトのパ ッドで濾過し、濾液を蒸発させて標記化合物を油状物として得た。 工程Ｇ Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−２（Ｓ）−［２（Ｓ）−ア ミノ−３（Ｓ）−メチル］ペンチルオキシ−３−メチル酪酸の作成 氷酢酸におけるＮ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−２（Ｓ）−イソプロピル− ５（Ｓ）−［１（Ｓ）−メチル］−プロピル−２，３，５，６−テトラヒドロ− ４Ｈ−１，４−オキサジン−３−オン（２．４ｇ、７．２ミリモル）の溶液を濃 塩酸で処理し、１晩にわたり加熱還流させた。溶剤を減圧蒸発させ、残留物をト ルエン（５０ｍＬ）およびアセトニトリル（５０ｍＬ） で共沸脱水した。室温にて減圧下で１時間脱水した後、残留物を１００ｍＬの５ ０％アセトン水溶液に溶解し、３．１５ｇのＢｏｃ₂Ｏを添加し、次いでｐＨを １Ｎ ＮａＯＨにより約１０に調整した。反応が完結した後、溶液をクエン酸で 酸性化させ、生成物を酢酸エチル中に抽出した。抽出生成物をＣＨ₂Ｃｌ₂中の５ →１０％ＭｅＯＨで溶出させるシリカゲル上でのクロマトグラフィーにより精製 して標記化合物を得た。工程Ｈ Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−２（Ｓ）−［２（Ｓ）−ア ミノ−３（Ｓ）−メチル］−ペンチルオキシ−３−メチルブチリル−ロイシン メチルエステルの作成 ＤＭＦ（３ｍＬ）におけるＮ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−２（Ｓ）−［２ （Ｓ）−アミノ−３（Ｓ）−メチル］−ペンチルオキシ−３−メチル酪酸（０． ２００ｇ、０．６３ミリモル）とＥＤＣ（０．１９１ｇ）１．０ミリモル）との 撹拌溶液に、室温にてＨＯＯＢＴ（１６３ｍｇ、１．０ミリモル）とロイシン メチルエステル塩酸塩（０．１８２ｇ、１．０ミリモル）とを添加した。トリエ チルアミン（０．２８ｍＬ、２ミリモル）を添加し、室温にて１６時間にわたり 撹拌した後、反応 物をＥｔＯＡｃで希釈し、水とブラインとで洗浄し、次いで脱水した（Ｎａ₂Ｓ Ｏ₄）。減圧下での蒸発およびＥｔＯＡｃ／塩化メチレン（０→２０％）で溶出 させるシリカゲル上でのクロマトグラフィーにより標記化合物を得た。工程Ｉ Ｎ−［２（Ｓ）−（２（Ｓ）−（２（Ｒ）−アミノ−３−メル カプトプロピルアミノ）−３（Ｓ）−メチルペンチルオキシ）−３−メチルブタノイル］−ロイシン メチルエステルの作成 工程Ｈの生成物におけるｔ−ブトキシカルボニル保護基を、この化合物の 溶液を酢酸エチル中で塩化水素により処理して除去した。実施例１の方法を用い 、得られた塩酸塩を標記化合物まで変換させた。 分析 ：Ｃ₂₁Ｈ₄₃Ｎ₃Ｏ₄Ｓ・2.1ＴＦＡの計算値： Ｃ44.94，Ｈ6.75，Ｎ6.24。 実測値：Ｃ45.00，Ｈ6.64，Ｎ6.34。 実施例６ Ｎ−［２（Ｓ）−（２（Ｓ）−（２（Ｒ）−アミノ−３−メル カプトプロピルアミノ）−３（Ｓ）−メチルペンチルオキシ）−３−メチルブタノイル］−ロイシン； 実施例５からの適する中間体および実施例２の方法を用いて標記化合物を作成 した。 分析 ：Ｃ₂₀Ｈ₄₁Ｎ₃Ｏ₄Ｓ・2,0ＴＦＡの計算値： Ｃ44.30，Ｈ6.64，Ｎ6.43。 実測値：Ｃ44.28，Ｈ6.60，Ｎ6.45。 実施例７ ゲラニルゲラニル蛋白質トランスフェラーゼ型Ｉのインビトロ抑制 イソプレニル−蛋白質トランスフェラーゼの精製。全精製工程を４℃にて行っ た。牛脳からの脳葉を、５０ｍＭのトリス−Ｃｌ（ｐＨ８．０）と１ｍＭのＥＧ ＴＡと１ｍＭのＭｇＣｌ₂と５ｍＭのジチオスレイトールと１０μｇ／ｍＬのア プロチニンと０．５ｍＭの弗化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）と２μｇ ／ｍＬのアンチペインと２μｇ／ｍＬのロイペプチンとを含有する分解緩衝液に てホモゲナイズした［Ｍ．Ｄ．シェバー等、ジャーナル・バイオロジカル・ケミ ストリー、第２６５巻、第１４７０１頁（１９９０）］。細胞残骸と膜とを遠心 分離（１０ ０００ｇで２０分間に続く１００ ０００ｇにて３０分間）により 除去した。上澄液を、予め分解緩衝液と平衡 化させたＤＥＡＥ−セファセルのカラム（３０ｃｍ×２０ｃｍ²）に直接充填し た。このカラムを同じ緩衝液で洗浄し、蛋白質を同じ緩衝液におけるＮａＣｌの 線状濃度勾配（０→５００ｍＭ、１Ｌ＋１Ｌ）で溶出させた。各フラクション（ ２０ｍＬ）を集め、種々異なるトランスフェラーゼ活性を有するものを別々に保 存した。この手順により、ＦＴアーゼおよびＧＧＰＴアーゼIIをＧＧＰＴアーゼ Ｉから分割した。次いで各保存物をω−アミノオクチルアガロース カラム（３ ０ｃｍ×４．９ｃｍ²）に施し、分解緩衝液におけるＮａＣｌの線状濃度勾配（ ０→５００ｍＭ、５００ｍＬ＋５００ｍＬ）で溶出させた。ＦＴアーゼとＧＧＰ Ｔアーゼ−IIとの両者を含有するフラクションを保存した。このようにして得ら れたＧＧＰＴアーゼ−Ｉ（「ｂＧＧＰＴアーゼ−Ｉ」と称する）を下記の分析に 用いた。 ヒトＧＧＰＴアーゼ−Ｉ β_GG1サブ単位ｃＤＮＡのクローン化 Ｊ．Ｆ．ムーマウおよびＰ．Ｊ．キャセイ（１９９２）、ジャーナル・バイオ ロジカル・ケミストリー、第２６７巻、第１７４３８〜１７４４３頁に記載され たようにして牛脳から精 製された約１ｎモルのＧＧＰＴアーゼ−IIを１１％ＳＤＳ−ポリアクリルアミド ゲルにおける電気泳動にかけ、ニトロセルロース紙に移した。次いでニトロセル ロース紙をポンソーＳで染色して、サブ単位ポリペプチドの位置を決定した。４ ８ｋＤａおよび４３ｋＤａのバンドをニトロセルロース紙から切除し、ハーバー ド・マイクロケム社（ケンブリッジ、ＭＡ）に送って処理した。５種のβ_GGIサ ブ単位ペプチドの高信頼性の配列が得られた。これらペプチドの配列を下記に示 す： ２種の縮重オリゴヌクレオチド プライマ［ＧＣＴＣ−ＧＧＡＴＣＣ−Ｃ−（ Ａ／Ｇ）ＡＡ−（Ａ／Ｇ）ＴＴ−ＮＧＴ−（Ａ／Ｇ）ＴＡ−（Ｔ／Ｃ）ＴＧ−（ Ａ／Ｇ）Ａ（配列番号：６）およびＧＴＣＧ−ＧＡＡＴＴＣ−ＡＣＮ−ＡＴ（Ａ ／Ｃ／Ｔ）−ＧＣＮ−ＴＴ（Ｃ／Ｔ）−ＴＴ（Ｃ／Ｔ）−ＧＣ（配列番号：７） ］を２種のβ_GGIサブ単位ペプチド配列［それぞれＩＦＱＹＴＮＦＥＫ（配列番 号：３）（アンチセンスオリゴ）およびＴＩＡＦＦＡＬＳＧＬＤＭＬＤ（配列番 号：１）］の部分に基づいて合成した。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）［Ｒ． Ｋ．サイキ、Ｄ．Ｈ．ゲルファンド、Ｓ．ストッフェル、Ｓ．Ｊ．シャーフ、Ｒ ．ヒグチ、Ｇ．Ｔ．ホーン、Ｋ．Ｂ．ムリスおよびＨ．Ａ．エルリッヒ（１９８ ８）、サイエンス、第２３９巻、第４３７〜４６３頁］を、鋳型として牛脳ｃＤ ＮＡライブラリーから得られたＤＮＡを用いて行った［Ｕ．Ｓ．ホーゲル、Ｒ． Ａ．Ｆ．ディクソン、Ｍ．Ｄ．シェバー、Ｒ．Ｅ．ディール、Ｍ．Ｓ．マーシャ ル、Ｅ．Ｍ．スコルニック、Ｉ．Ｓ．シガルおよびＪ．Ｂ．ギブス（１９８８） 、ネイチャー、第３３５巻、第９０〜９３頁］。７３０ｂｐのＰＣＲ生成物を分 離し、これはペプチドＧＳＳＹＬＧＩＰＦＮＰＳＫの１部をコー ドする縮重オリゴヌクレオチド［ＧＴＡＣ−ＴＣＴＡＧＡ−ＧＧＮ−ＡＴ（Ａ／ Ｃ／Ｔ）−ＣＣＮ−ＴＴ（Ｔ／Ｃ）−ＡＡ（Ｔ／Ｃ）−ＣＣ（配列番号：８）］ にハイブリダイズした。このＰＣＲ生成物を第１図に示す（配列番号：９）。こ のＰＣＲ断片をＰＣＲオリゴに存在するＥｃｏＲＩおよびＢａｍＨＩ部位を利用 して切断し、ｐＵＣ１８にクローン化してｐＲＤ５４８を形成した。 β_GGIサブ単位をコードするヒトｃＤＮＡを分離するため、ｐＲＤ５４８にお けるコード化配列のＮ−末端部分を含む３００ｂｐのＥｃｏＲＩ−ＨｉｎｄIII 断片を［³²Ｐ」−標識し、これを用いてλｇｔ１１（クロネテク社）におけるヒ ト胎盤ｃＤＮＡライブラリーおよびλｍａｘ１（クロンテク社）におけるヒト腎 臓ｃＤＮＡライブラリーの両者から、それぞれ約１０⁶プラークをスクリーニン グした［Ｎ．Ｅ．コール、Ｒ．Ｅ．ディール、Ｍ．Ｓ．シェバー、Ｅ．ランズ、 Ｄ．Ｄ．ソダーマン、Ｂ．ヒー、Ｓ．Ｌ．ムーアス、Ｄ．Ｌ．ポンプリアーノ、 Ｓ．フェロ・ノビック、Ｓ．パワース、Ｋ．Ａ．トーマスおよびＪ．Ｌ．ギブス （１９９１）、ジャーナル・バイオロジカル・ケミストリー、第２６６巻、第１ ８８８４〜１８８８８ 頁］。６種のｃＤＮＡクローンをヒト胎盤ｃＤＮＡライブラリーから、７種をヒ ト腎臓ｃＤＮＡライブラリーからそれぞれ分離した。λｇｔ１１ライブラリーか らのファージを分離し、ｃＤＮＡ挿入物をｐＵＣ１８中にＥｃｏＲＩ断片として サブクローン化させた。λｍａｘ１ライブラリーからのクローンより得られたｃ ＤＮＡ挿入物をファージミドとして切除した。ヒト胎盤ｃＤＮＡライブラリーか らのクローン３から得られた１．５５ｋｂのｃＤＮＡを含有するプラスミドをｐ ＲＤ５５０と命名した。ｐＲＤ５５０における挿入物は、Ｎ−末端３６コドンを 除きβ_GGIの全コドンを含有する。ヒト腎臓ｃＤＮＡライブラリーからのクロー ン２７より得られた０．７ｋｂのｃＤＮＡを含有するファージミドをｐＲＤ５５ ８と命名した。ｐＲＤ５５８における挿入物はβ_GGIのＮ−末端１２３アミノ酸 をコードする。完全ヒトβ_GGIコード化配列を有するプラスミドを作成するため 次の手順を行った。ＰＣＲを、β_GGI出発コドンよりも上流にあるＢａｍＨＩお よびＳｃａ１部位を用いてｐＲＤ５５８にっき行った。このＤＮＡをＢａｍＨＩ およびＸｈｏ１で切断し、これはβ_GGIコード化配列をその内部で切断して０． １３ｋｂの断片１を形成する。断片２はｐＲＤ５５０からの１．５２ｋｂのＸｈ ｏ１−ＥｃｏＲＩ断片であっ て、Ｘｈｏ１部位の下流にコード化配列を有した。断片１および断片２をＢａｍ ＨＩおよびＥｃｏＲＩ切断ｐＵＣ１８にクローン化させてｐＲＤ５６６を形成さ せ、これはヒトβ_GGIの完全コード化配列と３’−非翻訳配列とを有する。この 配列を第２図に示す（配列番号：１０）。 大腸菌におけるヒトＧＧＰＴアーゼ−Ｉ（ｈＧＧＰＴアーゼ−Ｉ）の発現。大 腸菌にてヒトＧＧＰＴアーゼ−Ｉを発現させるため、クローン化ヒトβ_GGIサブ 単位ｃＤＮＡと予めクローン化したヒトＦＴアーゼ−αサブ単位ｃＤＮＡ［Ｃ． Ａ．オマー、Ａ．Ｍ．クラール、Ｒ．Ｅ．ディール、Ｇ．Ｃ．プレンダーガスト 、Ｓ．パワース、Ｃ．Ｍ．アレン、Ｊ．Ｂ．ギブスおよびＮ．Ｅ．コール（１９ ９３）、バイオケミストリー、第３２巻、第５１６７〜５１７６頁］とを翻訳結 合オペロンで同時発現させた。大腸菌にて、プラスミドｐＴ５Ｔ−ｈＦＰＴアー ゼ−αはバクテリオファージＴ７プロモータからのＣ−末端Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｐ ｈｅエピトープタグを有するヒトα−サブ単位蛋白質を発現する。ヒトβ_GGI蛋 白質のコード化配列をｐＴ５Ｔ−ｈＦＰＴアーゼ−αにおけるα−サブ単位コー ド化配列の下流に次のようにクローン化させた。αのＣ−末端と β_GGIサブ単位コード化配列のＮ−末端との間に配列ＣＴを有する断片１（すな わち０．５ｋｂのＳｐｅＩ−ＸｈｏＩ断片）を、ｐＴ５Ｔ−ｈＦＰＴアーゼαお よびｐＲＤ５６６を鋳型として用いる組換ＰＣＲにより作成した［Ｒ．ヒグチ（ １９９０）、ＰＣＲプロトコール：ガイド・ツー・メソッズ・アンド・アプリケ ーションス、Ｍ．Ａ．イニス、Ｄ．Ｈ．ゲルファンド、Ｊ．Ｊ．スニンスキーお よびＴ．Ｊ．ホワイト編、第１７７〜１８３頁、アカデミック・プレス、サンジ エゴ］。ｐＲＤ５６６からの断片２（すなわち１．５２ｋｂのＸｈｏＩ−Ｅｃｏ ＲＩ断片）は、断片１に欠けていたβ_GGIコード化配列の部分を含有した。断片 ３はｐＴ５Ｔ−ｈＦＰＴアーゼ−αからの６．２ｋbのＳｐｅＩ（部分消化）− ＥｃｏＲＩ断片であって、断片１にないαコード化配列の部分とｐＴ５Ｔ−ｈＦ ＰＴアーゼ−αからのベクターおよびプロモータ配列とを有した。断片１、２お よび３を互いに結合させて、次の構造を有するｐＲＤ５７７を作成した：ＲＢＳ ［内部塩基配列：（配列番号：１１）］。ヒトβ_GGIサブ単位のコード化配列を 、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅエピトープ タグ内にβ_GGIを発現するためのリボソ ーム結合部位（ＲＢＳ）を有するαサブ単位コード化配列に翻訳結合させた。 ヒトＧＧＰＴアーゼ−Ｉを発現させるため、ｐＲＤ５７７を大腸菌ＢＬ２１（ ＤＥ３）内で形質転換させて菌株ＲＤ５７８を形成させ、増殖させ、次いで０． ５ｍＭのイソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトシドで誘発させた［Ｃ．Ａ．オマ ー、Ａ．Ｍ．クラール、Ｒ．Ｅ．ディール、Ｇ．Ｃ．プレンダーガスト、Ｓ．パ ワース、Ｃ．Ｍ．アレン、Ｊ．Ｂ．ギブスおよびＮ．Ｅ．コール（１９９３）、 バイオケミストリー、第３２巻、第５１６７〜５１７６頁に記載］。組換体、す なわちヒトＧＧＰＴアーゼ−Ｉ（「ｈＧＧＰＴアーゼ−Ｉ」と称する）を、ヒト ＦＴアーゼにつき実質的に記載したようにαサブ単位にＧｌｕ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ エピトープ タグを結合するＹＬ１／２抗体カラムおよび必要に応じモノＱ Ｈ Ｒ５／５カラムを用いて細胞から精製した［Ｃ．Ａ．オマー等（１９９３）］。 ｈＧＧＰＴアーゼ−ＩがモノＱカラムから約０．２５ＭＮａＣｌにて溶出した。 分子生物学操作。Ｃ−末端ＣＡＡＸボックス突然変異体を作成するため、ｐＵ Ｃ−［Ｌ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ．）を制限酵素ＨｉｎｃIIおよびＮａｒＩで 切断して、新たなＣ−末端配列を有するオリゴヌクレオチドを結合させうるベク ターを形成した。特記しない限り、ＣＡＡＸ配列に先立つアミノ酸はＳＬＫであ る。命名を単純化するため、［Ｌ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ．）ＳＬＫＣＶＬＳ ［Ｊ．Ｂ．ギブス等、プロシーディング・ナショナル・アカデミー・サイエンス 、ＵＳＡ、第８６巻、第６６３０頁（１９８９）］をＲａｓ−ＣＶＬＳと称し、 この慣例を他の全ての突然変異体に使用する。ＦＴアーゼの基質はＲａｓ−ＣＶ ＬＳとした。ＧＧＰＴアーゼ−Ｉの基質はＲａｓ−ＣＡＩＬとした。 トランスフェラーゼ分析。イソプレニル−蛋白質トランスフェラーゼ活性分析 を特記しない限り３０℃で行った。典型的な反応物は次のものを含有した（５０ μＬの最終容積にて）：［³Ｈ］ファルネシルジホスフェートもしくは［³Ｈ］ゲ ラニルゲラニルジホスフェート、Ｒａｓ蛋白質、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７ ．５）、５ｍＭのＭｇＣｌ₂、５ｍＭのジチオスレイトールおよびイソプレニル −蛋白質トランスフェラ ーゼ。この分析に用いたＦＰＴアーゼはオマー等、（１９９３）に記載されたよ うに組換発現により作成した。酵素の不存在下で分析混合物を予め熱平衡化させ た後、イソプレニル−蛋白質トランスフェラーゼの添加により反応を開始させる と共に、所定時間間隔（典型的には１５分間）にてエタノールにおける１Ｍ Ｈ Ｃｌ（１ｍＬ）の添加により停止させた。停止した反応物を１５分間静置させた （沈澱過程を完結するため）。２ｍＬの１００％エタノールを添加した後、反応 物をワットマンＧＦ／Ｃフィルターで減圧濾過し、フィルターを２ｍＬずつの１ ００％エタノールで４回洗浄し、シンチレーション液（１０ｍＬ）と混合し、次 いでベックマンＬＳ３８０１型シンチレーションカウンタで計数した。 抑制試験のため上記と同様に分析を行ったが、ただし抑制剤は１００％ジメチ ルスルホキシドにおける濃厚溶液として作成し、次いで酵素分析混合物に２０倍 希釈した。ＩＣ₅₀値をＫ_M濃度の近くで両トランスフェラーゼ基質を用いて決定 した。抑制剤ＩＣ₅₀測定の不飽和基質条件は次の通りとした：ＦＴアーゼ、６５ ０ｎＭ Ｒａｓ−ＣＶＬＳ、１００ｎＭファルネシルジホスフェート；ＧＧＰＴ アーゼ−Ｉ、５００ｎＭ Ｒａｓ−ＣＡＩＬ、１００ｎＭゲラニルゲラニルジホ スフェート。第１表 本発明の化合物による蛋白質ゲラニルゲラニル化および蛋白質ファルネシル化の 抑制^* 化合物 ＩＣ₅₀（ｎＭ）＊ bGGPT hGGPT FPT アーゼＩ アーゼＩ アーゼ Ｎ−（２（Ｒ）−アミノ 1.9 23 800 −３−メルカプトプロピル） −バリル−イソロイシル −ロイシン； Ｎ−［５（Ｓ）−（２ 21 70 （Ｒ）−アミノ−３− メルカプトプロピル アミノ）−６（Ｓ）− メチル−２（Ｒ）− イソプロピル−３，４（Ｅ） −ヘプテノイル］−ロイシン； Ｎ−［２（Ｓ）−（２ 37 450 （Ｓ）−（２（Ｒ）− アミノ−３−メルカプト プロピルアミノ)- ３（Ｓ）−メチルペンチル オキシ）−３−メチル ブタノイル］−ロイシン； 註＊：ＩＣ₅₀は記載した分析条件下にてＦＴアーゼもしくはＧＧＰＴアーゼ −Ｉの５０％抑制を示す試験化合物の濃度である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ Ｃ０７Ｋ 5/08 Ｃ０７Ｋ 5/08 5/083 5/083 Ａ６１Ｋ 37/02 // Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ)，ＡＭ， ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，Ｅ Ｅ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ， ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，Ｕ Ａ，ＵＳ，ＵＺ (72)発明者 グラハム，サミユエル・エル アメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07065、ローウエイ、イースト・リンカー ン・アベニユー・126

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 式Ｉ： ［式中、Ｒ¹およびＲ²は独立して： （ａ）Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル； （ｂ）Ｃ₂〜Ｃ₈アルケニル； （ｃ）Ｃ₂〜Ｃ₈アルキニル； （ｄ）置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル； （ｅ）アリール； （ｆ）置換アリール； （ｇ）ヘテロアリール； （ｈ）置換ヘテロアリール；および （ｉ）天然アミノ酸の側鎖 から選択され； Ｒ³は１〜６個の炭素原子を有し、分枝鎖もしくは直鎖であって、未置換または フェニル基により置換されたアルキル、アルケニルおよびアルキニルから選択さ れ； Ｘ−Ｙはであり； ＺはＨ₂もしくはＯである］ を有するゲラニルゲラニル蛋白質トランスフェラーゼ型Ｉを抑制する化合物また はその医薬上許容しうる塩。 ２． 式II： ［式中、Ｒ¹およびＲ²は独立して： （ａ）Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル； （ｂ）Ｃ₂〜Ｃ₈アルケニル； （ｃ）Ｃ₂〜Ｃ₈アルキニル； （ｄ）置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル； （ｅ）アリール； （ｆ）置換アリール； （ｇ）ヘテロアリール； （ｈ）置換ヘテロアリール；および （ｉ）天然アミノ酸の側鎖 から選択され； Ｒ³は１〜６個の原子を有し、分枝鎖もしくは直鎖であって、未置換またはフェ ニル基により置換されたアルキル、アルケニ ルおよびアルキニルから選択され； Ｘ−Ｙは であり； Ｒ⁴は： （ａ）Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル； （ｂ）Ｃ₃〜Ｃ₈アルケニル； （Ｃ）Ｃ₃〜Ｃ₈アルキニル； （ｄ）置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル； （ｅ）アリール； （ｆ）置換アリール； （ｇ）ヘテロアリール；および （ｈ）置換ヘテロアリール から選択され； ＺはＨ₂もしくはＯである］ を有する請求の範囲第１項に記載の化合物のプロドラグもしくはその医薬上許容 しうる塩。 ３． Ｎ−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル）−バリル−イソロイ シル−ロイシン； Ｎ−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル）−バリル−イソロイシル− ロイシン メチルエステル； Ｎ−［５（Ｓ）−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピルアミノ）−６（ Ｓ）−メチル−２（Ｒ）−イソプロピル−３，４（Ｅ）−ヘプテノイル］−ロイ シン； Ｎ−［５（Ｓ）−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピルアミノ）−６（ Ｓ）−メチル−２（Ｒ）−イソプロピル−３，４（Ｅ）−ヘプテノイル］−ロイ シン メチルエステル； Ｎ−［２（Ｓ）−（２（Ｓ）−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピルア ミノ）−３（Ｓ）−メチルペンチルオキシ）−３−メチルブタノイル］−ロイシ ン； Ｎ−［２（Ｓ）−（２（Ｓ）−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピルア ミノ）−３（Ｓ）−メチルペンチルオキシ） −３−メチルブタノイル］−ロイシン メチルエステル であるゲラニルゲラニル−蛋白質トランスフェラーゼ型Ｉを抑制する化合物また はその医薬上許容しうる塩。 ４． Ｎ−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル）−バリル−イソロイ シル−ロイシン； である請求の範囲第１項に記載の化合物またはその医薬上許容しうる塩。 ５． Ｎ−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル）−バリル−イソロイ シル−ロイシン メチルエステル； である請求の範囲第２項に記載のゲラニルゲラニル−蛋白質トランスフェラーゼ 型Ｉを抑制する化合物のプロドラグもしくはその医薬上許容しうる塩。 ６． 治療上有効量の請求の範囲第１項に記載の化合物と医薬上許容しうるキャ リヤとからなる医薬組成物。 ７． 治療上有効量の請求の範囲第２項に記載の化合物と医薬上許容しうるキャ リヤとからなる医薬組成物。 ８． ゲラニルゲラニル化の抑制を必要とする非ヒト患者にてゲラニルゲラニル 蛋白質トランスフェラーゼ型Ｉにより蛋白質のゲラニルゲラニル化を抑制するに 際し、患者に医薬上有効量の請求の範囲第６項に記載の組成物を投与することを 特徴とするゲラニルゲラニル化の抑制方法。 ９． 癌の処置を必要とする非ヒト患者にて癌を処置するに際し、患者に医薬上 有効量の請求の範囲第６項に記載の組成物を投与することを特徴とする癌の処置 方法。 １０． 癌の処置を必要とする非ヒト患者にて癌を処置するに際し、患者に医薬 上有効量の請求の範囲第７項に記載の組成物を投与することを特徴とする癌の処 置方法。 １１． 炎症疾患の処置を必要とする非ヒト患者にて炎症疾患 を処置するに際し、患者に医薬上有効量の請求の範囲第６項に記載の組成物を投 与することを特徴とする炎症疾患の処置方法。 １２． 炎症疾患の処置を必要とする非ヒト患者にて炎症疾患を処置するに際し 、患者に医薬上有効量の請求の範囲第７項に記載の組成物を投与することを特徴 とする炎症疾患の処置方法。