JP2001504505A - 血中コレステロール低下剤の製造のための活性物質混合物の使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、改良された血中コレステロール低下製剤の製造、ならびに（ａ） フィトスタノールエステル、および（ｂ） トコフェロール類を含有する混合物の使用に関する。該剤をゼラチンに封入することにより、問題なく高用量で経口投与することができる。

Description

【発明の詳細な説明】 血中コレステロール低下剤の製造のための活性物質混合物の使用 発明の分野 本発明は、温血生物の血清コレステロールレベルを低下させる製剤の製造のた めの、フィトスタノールエステルとトコフェロールとの混合物の使用に関する。 先行技術 血中コレステロール低下剤は、血中におけるコレステロールの生成を阻害また は減少させずに、温血生物の血清コレステロールレベルを低下させる薬剤である と理解される。フィトステロール、即ち植物ステロール、およびそれの脂肪酸と のエステルは、PetersonらによるJ．Nutrit．５０、１９１（１９５３）によっ て、この目的のために既に提案されている。ＵＳ ３０８９９３９、ＵＳ ３２ ０３８６２およびＤＥ−ＯＳ ２０３５０６９（Procter & Gamble）も同様の開 示を行っている。この活性物質は通例、揚げ油および食用油に添加され、従って 、食品から吸収される。しかし、使用される量は一般に、微量であり、通例、０ .５重量％未満の量で使用さる（水の添加の際に食用油が濁るかまたはステロー ルが沈殿するのを防止するため）。食品、化粧品、医薬製剤および農業分野での 使用のために、糖またはポリグリセロールエステル中のステロールエステルの貯 蔵可能なエマルジョンが、欧州特許出願ＥＰ−Ａ１ ０２８９６３６（Ashai） において提案されている。血中コレステロールレベルの低下のために、マーガリ ン、バター、マヨネーズ、クリーム状サラダドレッシング等へシトスタノールエ ステルを組み込むことが、欧州特許ＥＰ−Ｂ１ ０５９４６１２（Raision）に 提案されている。 遺憾にも、フィトスタノールエステルの不都合な点は、通例、それらは食品の 味覚および／または粘稠度に影響する場合があるので、食品に少量しか添加でき ない点である。しかし、血中コレステロールレベルに持続的な影響を与えようと する場合には、比較的多量のフィトスタノールエステルを吸収させる必要がある 。その物質が血清コレステロールを減少させる速度も向上させる必要がある。従 って、本発明の課題は、これらの欠点を矯正することであった。発明の説明 本発明は、 （ａ） フィトスタノールエステル、および （ｂ） トコフェロール類 を使用することを特徴とする、血中コレステロール低下製剤の製造のための活性 物質混合物の使用に関する。 それ自体は血中コレステロール低下特性を有さないトコフェロール類が、フィ トスタノールエステルの効果を高める剤として作用する、即ち、フィトスタノー ルエステルの存在下に血清コレステロールレベルの低下を促進させることが意外 にも見い出された。さらに、ゼラチンに封入した場合に、活性物質混合物を経口 によって容易に摂取することができる。フィトスタノールエステル フィトステノール（フィトステロールとしても既知）は、Ｃ−３位にヒドロキ シル基のみを有し、他の官能基を有さない植物ステロイドである。一般に、フィ トステロールは、２７〜３０個の炭素原子を有し、５／６位、時には、７／８位 、８／９位または他の位置に、二重結合を有する。脂肪酸を用いてエステル化し た後に成分（ａ）を成すフィトスタノールは、水素添加によってフィトステノー ルから生成される。フィトスタノール成分は、エルゴステロール、カンペステロ ール、スチグマステロール、ブラシカステロール、好ましくはシトステロール、 特にβ−シトスタノールの水素添加生成物から導き出すことができる。エステル の酸成分は、式（Ｉ）： Ｒ¹ＣＯ−ＯＨ （Ｉ） ［式中、Ｒ¹ＣＯは、２〜２２個の炭素原子、および０および／または１、２ま たは３個の二重結合を有する、直鎖または分枝状の脂肪族アシル基である。］ で示されるカルボン酸に由来し得る。一般的な例は、酢酸、プロピオン酸、酪酸 、吉草酸、カプロン酸、カプリル酸、２−エチルヘキサン酸、カプリン酸、ラウ リン酸、イソトリデカン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、 ステアリン酸、イソステアリン酸、オレイン酸、エライジン酸、ペトロセリン酸 、 リノール酸、リノレン酸、エレオステリン酸、アラキン酸、ガドレイン酸、ベヘ ン酸、およびエルカ酸、ならびに、例えば、天然油脂の加圧加水分解、Roelenオ キソ合成からのアルデヒドの還元、または不飽和脂肪酸の二量化において得られ るそれらの工業混合物である。１２〜１８個の炭素原子を有する工業脂肪酸、例 えば、ヤシ油脂肪酸、パーム油脂肪酸、パーム核油脂肪酸、または獣脂脂肪酸が 好ましい。β−シトスタノールと、１２〜１８個の炭素原子を有する脂肪酸との エステルを使用するのが特に好ましい。これらのエステルは、脂肪酸によるフィ トスタノールの直接エステル化によって、または好適な触媒、例えばナトリウム エチレート、より好ましくは酵素（ＥＰ−Ａ２ ０１９５３１１（Yoshikawa） を参照）の存在における、脂肪酸低級アルキルエステルまたはトリグリセリドを 用いるエステル交換によって製造することができる。対応するフィトステノール エステルを初めに製造し、次に、カルボニルエステル基を損なわずに水素添加す ることもできる。トコフェロール類 トコフェロール類は、式（II）： ［式中、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴は相互に独立して、水素またはメチル基を表す。］ で示される、２位において４,８,１２−トリメチルトリデシル基で置換されてい るクロマン−６−オール（３,４−ジヒドロ−２−Ｈ−１−ベンゾピラン−６− オール）である。トコフェロール類は、バイオキノン類、即ち、プレニル鎖が幾 分、高度に飽和しているポリプレニル化１,４−ベンゾ−またはナフトキノン類 に属する。本発明の成分（ｂ）として使用するのに適しているトコフェロール類 の例は、ユビキノン類、ボビキノン類、Ｋ−ビタミン類、および／またはメナキ ノン類（２−メチル−１,４−ナフトキノン類）である。他のトコフェロール類 は、α−、β−、γ−、δ−およびε−トコフェロール（最後のものは元の不飽 和プレニル側鎖をなお有する）、ならびに、ピラン環系が開いているα−トコフ ェロールキノンおよびヒドロキノンを包含する。式（II）［式中、Ｒ²、Ｒ³およ びＲ⁴は、メチル基を表す。］に対応するα−トコフェロール（ビタミンＥ）、 または、例えば酢酸α−トコフェロールまたはパルミチン酸α−トコフェロール のような、α−トコフェロールと、２〜２２個の炭素原子を有するカルボン酸と のエステルを、成分（ｂ）として使用するのが好ましい。キトサン 本発明の製剤は、効果を高める剤としてキトサン（成分ｃ１）を更に含有し得 る。キトサンは、ヒドロコロイドの群に属するバイオポリマーである。これは化 学的には種々の分子量の、部分的に脱アセチル化されたキチンであって、次のよ うな（理想）モノマー単位（III）を有する： 多くのヒドロコロイドが生体ｐＨでは負に帯電するのとは対照的に、キトサン はそのような条件下にはカチオン性のバイオポリマーである。正に帯電したキト サンは、負に帯電した表面と相互作用することができ、それ故、ヘアケアおよび ボディケア化粧品中に使用し、医薬製剤中にも使用する(Ullmann's Encyclopedi a of Industrial Chemisty、第５版、第Ａ６巻、Weinheim、Verlag Chemie、１ ９８６、第２３１〜３３２頁参照）。これに関する概要は、例えば、B．Gesslei nら、ＨＡＰＰＩ ２７、５７（１９９０）、O．Skaugrud、Drug Cosm．Ind．１ １１７、６３３（１９９１）にも記載されている。キトサンは、キチンから、好 ましくは安価な原料として大量に入手し得る甲殼類の殼から製造する。Hackmann らが初めて発表した方法により、通例、キチンをまず塩基の添加によって除タン パクし、鉱酸の添加によって脱灰し、最後に強塩基の添加によって脱アセチル化 する。分子量は、広い範囲にわたる。そのような製法は、例えば、Makromol．Ch em.、１７７、３５８９（１９７６）またはフランス特許出願ＦＲ−Ａ２７０１ ２６６により知られている。本発明の好ましい態様においては、国際特許出願Ｗ Ｏ９６／１６９９１（Henkel）に記載のキチン分解生成物、または過酸化水素に よるその分解生成物を使用する。硫酸フィトステロール 本発明の製剤は、効果を高める剤として硫酸フィトステロール（成分ｃ２）を 更に含有し得る。硫酸フィトステロールは、例えば、ベンゼン中における三酸化 硫黄とピリジンとの複合体を使用するフィトステロールの硫酸化によって得るこ とができる既知の物質である（J．Am．Chem．Soc．６３、１２５９（１９４１） を参照）。その例は、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロー ルおよびシトステロールのスルフェートである。硫酸フィトステロールは、アル カリ金属および／またはアルカリ土類金属塩、アンモニウム、アルキルアンモニ ウム、アルカノールアンモニウムおよび／またはグルカンモニウム塩の形態で使 用することができる。それらは一般に、ナトリウム塩の形態で使用される。（デオキシ）リボ核酸 最後に、本発明の製剤は、効果を高める剤として（デオキシ）リボ核酸（成分 ｃ３）を更に含有し得る。（デオキシ）リボ核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ）は、当量の 核酸塩基とペントース（２−デオキシ−Ｄ−リボフラノースまたはＤ−リボフラ ノース）から生成する２'−デオキシ−β−Ｄ−リボヌクレオシドまたはＤ−リ ボヌクレオシドから誘導される高分子量フィラメント状ポリヌクレオチドである と理解される。ＤＮＡまたはＲＮＡは、プリン誘導体アデニンおよびグアニン、 ならびに、ピリミジン誘導体シトシンおよびチミンまたはウラシルを、核酸塩基 として含有し得る。核酸において、核酸塩基がＮ−グリコシド結合によって、リ ボースの炭素原子１に結合し、それによって、アデノシン、グアノシン、シチジ ンおよびチミジンが個々の場合において形成されている。核酸において、ホスホ ジエステル橋によって、ホスフェート基が、ヌクレオシドの５’−ヒドロキシ基 を、後続のヌクレオシドの３’−ＯＨ基に結合させて、一本鎖ＤＮＡまたはＲＮ Ａを形成する。長さ対直径の比が大きいことに鑑みて、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子 は、例えば抽出の問の機械的応力下においてさえ、鎖切断に向かう傾向を示す。 このような理由により、核酸の分子量が、１０³〜１０⁹ダルトンにわたり得る。 液晶挙動を特徴とする濃厚ＤＮＡまたはＲＮＡ溶液が、本発明の目的に使用され る。海洋源から得られ（例えば魚の精子の抽出による）、４０,０００〜１,００ ０,０００ダルトンの分子量を有する（デオキシ）リボ核酸を使用するのが好ま しい。 工業的適用 本発明の活性物質混合物は、フィトスタノールエステルおよびトコフェロール 類を、９９：１〜１：９９、好ましくは９０：１０〜１０：９０、より好ましく は、７０：２５〜２５：７５、最も好ましくは６０：４０〜４０：６０の重量比 で含有することができ、唯一の重要な条件は、血中コレステロールレベルを低下 させるのに充分な量の成分（ａ）が本発明による使用によって取り込まれるよう にすることである。本発明の１つの特定の態様においては、活性物質混合物が既 知の方法によってゼラチンに封入され、成分（ａ）および（ｂ）がそれぞれ、ゼ ラチンカプセルの重量に対して、０.１〜５０重量％、好ましくは１〜３０重量 ％、より好ましくは５〜２５重量％、最も好ましくは１０〜１５重量％の量で使 用される。フィトスタノールエステルのゼラチンへの封入（単独で、または効果 を高める剤との混合において）は、活性物質の経口投与に好都合な態様である。 他の効果を高める剤（成分ｃ）の含有量は、活性物質混合物に対して１〜１０重 量％であり得る。 活性物質混合物の投与の他の形態は、直腸または膣に挿入される坐薬であり、 坐薬基剤として、やはりゼラチンを、随意にグリセロール、または合成脂肪もし くは蝋、ポリエチレングリコールあるいは天然成分（例えばカカオ脂）と組み合 わせて含有し得る。活性物質混合物を、一般的な食品、例えば、サラダ油、ドレ ッシング、マヨネーズ、マーガリン、バター、揚げ油、ココア製品、ソーセージ 等に、溶解させるか、または分散させることもできる。 実施例 実施例１〜４、比較例Ｃ１〜Ｃ４ β−シトスタノールエステルまたはβ−シトステノールエステル、および場合 によりトコフェロール、および０.５重量％の放射能標識コレステロールを含有 するゼラチンカプセル（重量約１.５ｇ）を製造した。血中コレステロール低下 効果を検査するために、雄ラット（各々体重約２００ｇ）を一晩絶食させた。翌 日、寸法を小さくしたゼラチンカプセルを、胃プローブによって、少量の塩を含 有する水と一緒に各試験動物に与えた。３、６、１２、２４および４８時間後に 、動物から採血し、放射性コレステロールの含有量を測定した。結果（１０匹の 試験動物の測定値の平均値で表す）を、下記表１に示す。放射能の減少に関する データは、２０重量％のビタミンＥおよび対応する量の放射能標識コレステロー ルを含有するゼラチンカプセルを投与された対照試験動物群の測定値に対するも のである。混合物１〜４は本発明の混合物に相当し、一方、混合物Ｃ１〜Ｃ４は 比較のためのものである。表１ 血中コレステロール低下効果（量は、ゼラチンカプセルに対する重量％で示され る） 結果の検討 ・ トコフェロール自体は血中コレステロール低下活性を有さない（比較例Ｃ１ ）。 ・ ９重量％シトスタノールエステルと１重量％トコフェロールとの混合物は、 １０重量％のシトスタノールエステルを使用した場合と同様の効果を有する（実 施例４および比較例Ｃ２）。 ・ ５重量％シトスタノールエステルと５重量％トコフェロールとの混合物は、 ５重量％シトスタノールエステル単独より、かなり高活性である（実施例２およ び比較例Ｃ３）。その混合物は、１０重量％シトスタノールエステル単独（比較 例Ｃ２）と同等に活性である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＢＲ，ＣＡ，Ｃ Ｎ，ＣＺ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＲ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ ，ＲＵ，ＳＩ，ＳＫ，ＵＳ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．（ａ） フィトスタノールエステル、および （ｂ） トコフェロール類 を使用することを特徴とする、血中コレステロール低下製剤の製造のための活性 物質混合物の使用。 ２．成分（ａ）として、β−シトスタノールエステルを使用する請求項１記載 の使用。 ３．成分（ａ）として、β−シトスタノールと、式（Ｉ）： Ｒ¹ＣＯ−ＯＨ （Ｉ） ［式中、Ｒ¹ＣＯは、２〜２２個の炭素原子、および０および／または１、２ま たは３個の二重結合を有する、直鎖または分枝状の脂肪族アシル基である。］ で示されるカルボン酸とのエステルを使用する請求項１または２記載の使用。 ４．成分（ａ）として、β−シトスタノールと、１２〜１８個の炭素原子を有 する脂肪酸とのエステルを使用する請求項１〜３のいずれかに記載の使用。 ５．成分（ｂ）として、式（II）： ［式中、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴は相互に独立して、水素またはメチル基を表す。］ で示されるトコフェロール類を使用する請求項１〜４のいずれかに記載の使用。 ６．成分（ｂ）として、α−トコフェロール（ビタミンＥ）を使用する請求項 １〜４のいずれかに記載の使用。 ７．効果を高める剤としてキトサン、硫酸フィトステロールおよび／または（ デオキシ）リボ核酸を更に使用する請求項１〜６のいずれかに記載の使用。 ８．成分（ａ）および（ｂ）を、９９：１〜１：９９の重量比で使用する請求 項１〜７のいずれかに記載の使用。 ９．成分（ａ）および（ｂ）をゼラチンに封入する請求項１〜８のいずれかに 記載の使用。 １０．成分（ａ）および（ｂ）を、それぞれゼラチンカプセルの重量に対して ０.１〜５０重量％の量で使用する請求項９記載の使用。