JP2001302697A

JP2001302697A - ポリクローナル抗体及びその製造方法

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Publication number: JP2001302697A
Application number: JP2000124071A
Authority: JP
Inventors: Koichiro Hirata; 広一郎平田; Koji Matsushige; 浩司松重; Naohiro Haniyu; 尚広羽生; Kazuo Fukushima; 和雄福島
Original assignee: Nihon University; Tokuyama Corp
Current assignee: Nihon University; Tokuyama Corp
Priority date: 2000-04-25
Filing date: 2000-04-25
Publication date: 2001-10-31

Abstract

(57)【要約】【課題】被検体液中にストレプトコッカス・ミュータ
ンスを含み、ストレプトコッカス・ソブリヌス濃度が１
０⁵〜１０⁷個／ｍｌである被検体液から、培養法等を介
さずに直接ストレプトコッカス・ソブリヌスを測定する
免疫学的測定方法を提供する。【解決手段】例えば、免疫動物にストレプトコッカス
・ソブリヌスの全菌体または該全菌体より得られる抗原
抽出物を免疫してストレプトコッカス・ソブリヌスに対
するポリクローナル抗体を得、次いで得られた該ポリク
ローナル抗体からストレプトコッカス・ミュータンスと
の交差反応性を有するポリクローナル抗体を除去して得
られる、ストレプトコッカス・ソブリヌスに対する反応
性が、ストレプトコッカス・ミュータンスに対する反応
性の１００倍以上であるポリクローナル抗体を用いて免
疫学的測定方法によりストレプトコッカス・ソブリヌス
を測定する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ストレプトコッカ
ス・ソブリヌスに対するポリクローナル抗体及び、該抗
体の製造方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来、ミュータンスレンサ球菌と呼ばれ
る一群の乳酸発酵性細菌が、齲蝕発症に深く関わってい
ることが知られている。

【０００３】これらミュータンスレンサ球菌群は、スト
レプトコッカス・クリセタス（Ｓ．ｃｒｉｃｅｔｕｓ、
血清型ａ）、ストレプトコッカス・ラッタス（Ｓ．ｒａ
ｔｔｕｓ、血清型ｂ）、ストレプトコッカス・ミュータ
ンス（Ｓ．ｍｕｔａｎｓ、血清型ｃ、ｅ、ｆ）、ストレ
プトコッカス・フェルス（Ｓ．ｆｅｒｕｓ、血清型
ｃ）、ストレプトコッカス・マカカ（Ｓ．ｍａｃａｃａ
ｅ、血清型ｃ）、ストレプトコッカス・ソブリヌス
（Ｓ．ｓｏｂｒｉｎｕｓ、血清型ｄ、ｇ）、ストレプト
コッカス・ドウネイ（Ｓ．ｄｏｗｎｅｙ、血清型ｈ）と
して、血清学的、遺伝学的に異なる７種の型に分類され
ている。なかでも、ストレプトコッカス・ミュータンス
とストレプトコッカス・ソブリヌスの２菌種は、齲蝕原
性プラークを形成するミュータンスレンサ球菌として注
目されている。

【０００４】ストレプトコッカス・ミュータンスはヒト
口腔から高頻度に分離されるのに対し、ストレプトコッ
カス・ソブリヌスは１〜３割程度のヒト口腔から分離さ
れ、両菌種の口腔内での存在比率が大きく異なること
（浜田茂幸．医学細菌学．４：２７１−３１４，１９８
４．）、ストレプトコッカス・ミュータンスは歯面のく
ぼみや割れ目に齲蝕を発生させるのに対しストレプトコ
ッカス・ソブリヌスは歯面のくぼみや割れ目とともに平
滑な面にも齲蝕を発生させること（Ｍａｄｉｓｏｎ，
Ｋ．Ｍ．Ｊ．Ｄｅｎｔ．Ｒｅｓ．７０：３８−４３，１
９９１．、Ｈｉｒｏｓｅ，Ｈ．ＣａｒｉｅｓＲｅｓ．
２７：２９２−２９７，１９９３．）が知られている。
また、ストレプトコッカス・ソブリヌスはストレプトコ
ッカス・ミュータンスと比較して歯表面への吸着能が高
いこと（ｖａｎｄｅｒＭｅｉ，ＨＣ．ｅｔａｌ．
ＣａｒｉｅｓＲｅｓ．２５：４１５−４２３，１９９
１．）、ストレプトコッカス・ソブリヌスの酸産生能は
ストレプトコッカス・ミュータンスよりも強いこと（ｄ
ｅＳｏｅｔ，Ｊ．Ｊ．，ｅｔａｌ．ＣａｒｉｅｓＲ
ｅｓ．２５：１１６−１２２，１９９１．）から、スト
レプトコッカス・ソブリヌスの齲蝕誘発能はストレプト
コッカス・ミュータンスよりも強いことが示唆されてい
る。更に、ストレプトコッカス・ミュータンスとストレ
プトコッカス・ソブリヌスの分布と齲蝕罹患の相関を調
べた疫学研究の結果、ストレプトコッカス・ミュータン
スよりもストレプトコッカス・ソブリヌスの方が齲蝕発
生に強く関わっていることが示唆されている（Ｏｋａｄ
ａ，Ｔ．，ｅｔａｌ．Ｊ．Ｄｅｎｔ．Ｒｅｓ．７４：
５０１，１９９５．、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｂ．，ｅｔａ
ｌ．ＣｏｍｍｕｎｉｔｙＤｅｎｔ．ＯｒａｌＥｐｉ
ｄｅｍｉｏｌ．１５：３３２−３３５，１９８７．、Ｈ
ｉｒｏｓｅ，Ｈ．，ｅｔａｌ．ＣａｒｉｅｓＲｅ
ｓ．２７：２９２−２９７，１９９３．）。

【０００５】従来、ミュータンスレンサ球菌の唾液中の
濃度が１０⁵〜１０⁶個／ｍｌの場合には、齲蝕の危険あ
り、１０⁶個／ｍｌ以上の場合は特に危険であるといわ
れているが、上記のようにストレプトコッカス・ソブリ
ヌスの齲蝕誘発能はストレプトコッカス・ミュータンス
よりも強いと思われることから、人の口腔内におけるス
トレプトコッカス・ソブリヌスの有無、及び多寡を知る
ことで、その人の齲蝕危険度の判定をより信頼性高く行
なうことが可能になると考えられる。そこで、口腔内か
ら採取された唾液又は歯垢からストレプトコッカス・ソ
ブリヌスを特異的に検出、定量する方法が求められてい
る。

【０００６】上記のようなミュータンスレンサ球菌の濃
度は、一般に、バシトラシンを入れた培地を用いて唾液
中のミュータンスレンサ球菌を選択的に培養してコロニ
ー数を調べることにより測定されており（そのための測
定キットも市販されている）、唾液中のストレプトコッ
カス・ソブリヌス濃度についても、同様に培養を行なっ
て得られたコロニーの中からストレプトコッカス・ソブ
リヌスのコロニーを同定し、その数を調べることにより
知ることができる。なお、同定の方法としては、糖発酵
試験等の生化学的方法、ＤＮＡプローブを用いる遺伝学
的方法、血清型特異的抗体を用いる免疫学的方法等が知
られている。

【０００７】しかしながら、上記方法は、一旦培養しコ
ロニーを分離する必要があり、検査に長時間を要するば
かりでなく、手技が煩雑である等の問題がある。また、
ストレプトコッカス・ソブリヌスの中にはバシトラシン
感受性の株も存在することが知られており、上記の選択
培地を用いる方法ではこれらを見落としてしまうという
問題もある。

【０００８】このバシトラシン感受性株の存在の問題
は、歯垢や唾液を非選択培地で培養した後のコロニーに
ついて、ストレプトコッカス・ソブリヌスに対して特異
的なモノクローナル抗体を使用して、ストレプトコッカ
ス・ソブリヌスを同定する方法（ｄｅＳｏｅｔ，Ｊ．
Ｊ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２８：２４
６７−２４７２，１９９０．）によって解決可能である
が、該方法でも一旦培養を行なわなければならないとい
う問題点は依然残ったままである。すなわち、上記モノ
クローナル抗体は、ストレプトコッカス・ソブリヌスに
対する反応性が低く、培養操作を行うことなく口腔内か
ら採取した唾液や歯垢から直接調製した被検体液（臨床
検体）を用いた場合にはストレプトコッカス・ソブリヌ
スを検出できない。

【０００９】歯垢や唾液等の臨床検体からストレプトコ
ッカス・ソブリヌスを直接検出する方法としては、スト
レプトコッカス・ソブリヌスに対するポリクローナル抗
体を使用した蛍光抗体法が知られている（Ｗａｌｔｅ
ｒ，Ｊ．，Ｊ．Ｄｅｎｔ．Ｒｅｓ．５５：Ａ８７−Ａ９
３，１９７６．、Ｂａｂａａｈｍａｄｙ，Ｋ．Ｇ．，Ｃ
ａｒｉｅｓＲｅｓ．３２：５１−５８，１９９
８．）。しかしながら、この方法は、蛍光顕微鏡で検出
される蛍光強度の強弱を目視で判定しながら、蛍光強度
の比較的高い菌体を計数するという手技の煩雑な方法で
ある。また、使用するポリクローナル抗体は、そのスト
レプトコッカス・ソブリヌスに対する反応性が他の菌に
対する反応性よりも有意に高ければ十分であり、該ポリ
クローナル抗体のストレプトコッカス・ソブリヌスに対
する反応性は他の菌との反応性との比較として正確に検
討されていないし、また他の菌体による吸収処理等も施
されていない。

【００１０】また、歯垢や唾液等の臨床検体から、直接
ストレプトコッカス・ソブリヌスを検出する試みとし
て、ストレプトコッカス・ソブリヌスに対するポリクロ
ーナル抗体を利用し、ガラススライド上でのラテックス
凝集法を用いた方法が報告されている（武井勉．阪大医
学雑誌．３５：９３−１０９，１９９０．、Ｔａｋｅ
ｉ，Ｔ．Ａｒｃｈｓ．ｏｒａｌ．Ｂｉｏｌ．３７：９９
−１０４，１９９２．、特開平１−２５００６７．）。
しかしながら、該方法に於いては、１×１０⁶個／ｍｌ
以上の濃度の菌体試料溶液に於いてしか陽性反応が得ら
れておらず、十分な感度が達成されていない。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】このように唾液又は歯
垢から直接調製した臨床検体中のストレプトコッカス・
ソブリヌスの測定に関しては、感度の点に問題があり、
ストレプトコッカス・ソブリヌス濃度が１０⁵〜１０⁷個
／ｍｌレベルの被検体液についてストレプトコッカス・
ソブリヌスを迅速且つ簡便に検出、定量する方法は知ら
れておらず、このような被検体液中のストレプトコッカ
ス・ソブリヌスを迅速且つ簡便に測定する方法が望まれ
ている。

【００１２】本発明は、口腔内から採取された唾液や歯
垢から直接調製された被検体液中のストレプトコッカス
・ソブリヌスを、培養操作等の煩雑な操作を行なうこと
なく、高感度で測定する方法を提供することを目的とす
る。

【００１３】

【課題を解決するための手段】抗原抗体反応を利用した
免疫学的測定法は、夾雑物が存在する被検体液中の抗原
を迅速・簡便に測定することの出来る方法であり、動物
に抗原として細菌を免疫することによって得られるポリ
クローナル抗体を用いて被検体液中の抗原細菌を測定す
る場合には、細菌の抗原性は一般に強いことから、その
測定感度は一般に高く、例えば１０⁵個／ｍｌ程度の細
菌濃度を有する被検体液中の細菌を検出することは比較
的容易であると考えられる。

【００１４】ところが、前記したように、このようなポ
リクローナル抗体を用いても口腔内から採取した歯垢や
唾液から直接調製した臨床検体について測定を行なった
場合には、十分な感度で測定を行なうことはできない。

【００１５】本発明者らは、検出感度があがらない原因
の一つに被検体液中に存在する夾雑物の影響があると考
え、共存するミュータンスレンサ球菌、特にストレプト
コッカス・ミュータンスに着目し、その影響について検
討を行なった。具体的には、ストレプトコッカス・ソブ
リヌスに対する反応性とストレプトコッカス・ミュータ
ンスに対する反応性との比が異なる抗体を作製し、該反
応性の比と検出感度について種々検討を行なった。

【００１６】その結果、ストレプトコッカス・ソブリヌ
スに対する反応性がストレプトコッカス・ミュータンス
に対する反応性の１００倍以上である抗体を用いた場合
には、被検体液中に存在するストレプトコッカス・ソブ
リヌスの濃度が１０⁵個／ｍｌ程度でもストレプトコッ
カス・ソブリヌスを検出、定量することが可能であるこ
とを見出し、本発明を完成するに至った。

【００１７】即ち、本発明は、ストレプトコッカス・ソ
ブリヌスに対する反応性がストレプトコッカス・ミュー
タンスに対する反応性の１００倍以上であることを特徴
とするポリクローナル抗体である。

【００１８】上記本発明のポリクローナル抗体を用いて
ストレプトコッカス・ソブリヌスの測定を行なった場合
には、後述する実施例で示されるように、免疫学的測定
方法により唾液や歯垢中のストレプトコッカス・ソブリ
ヌスを培養無しに直接、しかも高感度に測定することが
可能となる。このような測定が可能となったのは、本発
明者等によって高感度測定に要求される抗体の特性が明
らかにされ、該特性を満足する新規な上記本発明のポリ
クローナル抗体が見出されたことによる。

【００１９】今回見出された本発明のポリクローナル抗
体は、例えば、免疫動物にストレプトコッカス・ソブリ
ヌスの全菌体または該全菌体より得られる抗原抽出物を
免疫してストレプトコッカス・ソブリヌスに対するポリ
クローナル抗体を得、次いで得られた該ポリクローナル
抗体からストレプトコッカス・ミュータンスとの交差反
応性を有するポリクローナル抗体を除去することにより
得ることができる。

【００２０】これまで、ストレプトコッカス・ソブリヌ
スに対するポリクローナル抗体を処理して他のミュータ
ンスレンサ球菌との交差反応性を低減した抗体（処理ポ
リクローナル抗体）は幾つか知られているが、ストレプ
トコッカス・ミュータンスとの交差反応性がストレプト
コッカス・ソブリヌスに対する反応性の１／１００以下
であるものは知られておらず、また、上記処理ポリクロ
ーナル抗体を用いてストレプトコッカス・ソブリヌス濃
度が１０⁵〜１０⁷個／ｍｌで且つストレプトコッカス・
ミュータンスを含む被検体液からストレプトコッカス・
ソブリヌスを検出した例も知られていない。

【００２１】例えば、Ｂｒａｔｔｈａｌｌは、ストレプ
トコッカス・ソブリヌス血清型ｄの標準菌を動物に免疫
して得られた抗体に、血清型ａの菌による吸収処理を施
して、血清型ｄ及びｇ特異的な抗体を取得しているが
（Ｂｒａｔｔｈａｌｌ，Ｄ．，Ｏｄｏｎｔ．Ｒｅｖｙ．
２３：４０１−４１０，１９７２．）、得られた抗体の
反応性は、蛍光抗体法により定性的に評価されているに
過ぎず、酵素免疫測定法や放射免疫測定法といった定量
的な方法によりストレプトコッカス・ソブリヌス及びス
トレプトコッカス・ミュータンスに対する反応性の正確
な評価はなされていない。また、Ｏｔａは、ストレプト
コッカス・ソブリヌス血清型ｄ及びｇに特異的な抗体を
それぞれ取得し、放射免疫測定法により他のミュータン
スレンサ球菌に対する反応性を調べている（Ｏｔａ，
Ｆ．，Ｚｂｌ．Ｂａｋｔ．Ｈｙｇ．Ａ２６５：３３０−
３３９，１９８７．）。しかしながら、これらの抗体
は、唾液や歯垢から培養法により分離された単一の菌に
ついて、その血清型を同定する目的に用いられているも
のであり、口腔内から採取した唾液や歯垢から直接調製
した被検体液中のストレプトコッカス・ソブリヌスを検
出する場合の抗体の反応性と検出感度の詳細な検討はさ
れていない。なお、この血清型を同定する目的において
は、ストレプトコッカス・ソブリヌスに対する反応性が
他のミュータンスレンサ球菌よりも有意に（１０倍程
度）高ければ十分なものである。

【００２２】また、他の本発明は、免疫動物にストレプ
トコッカス・ソブリヌスの全菌体または該全菌体より得
られる抗原抽出物を免疫してストレプトコッカス・ソブ
リヌスに対するポリクローナル抗体を得、次いで得られ
た該ポリクローナル抗体からストレプトコッカス・ミュ
ータンスとの交差反応性を有するポリクローナル抗体を
除去することを特徴とする前記本発明のポリクローナル
抗体の製造方法である。

【００２３】該方法によれば、本発明のポリクローナル
抗体を容易に製造することができる。

【００２４】更に、他の本発明は、前記本発明のポリク
ローナル抗体を含んでなることを特徴とする免疫学的測
定試薬である。

【００２５】

【発明の実施の形態】本発明のポリクローナル抗体は、
そのストレプトコッカス・ソブリヌスに対する反応性と
ストレプトコッカス・ミュータンスに対する反応性の比
率（以下、「Ｓ／Ｍ反応性倍率」ともいう。）が１００
以上のポリクローナル抗体である。

【００２６】ここで、ストレプトコッカス・ソブリヌス
とは、ミュータンスレンサ球菌群の内で、菌体表層多糖
抗原の構造により血清型がｄ型及びｇ型に分類される菌
体を意味する。血清型がｄ型の標準菌株としては、Ｂ１
３、ＯＭＺ１７６等の菌株が、血清型がｇ型の標準菌株
としては、６７１５、ＯＭＺ６５等の菌株が例示され
る。

【００２７】また、ストレプトコッカス・ミュータンス
とは、ミュータンスレンサ球菌群の内で血清型がｃ、
ｅ、及びｆ型に分類される菌体を意味する。血清型がｃ
型の標準菌株としてＩｎｇｂｒｉｔｔ、ＭＴ６Ｒ等の菌
株が、血清型がｅ型の標準菌株としてＬＭ７、Ｐ４等の
菌株が、血清型がｆ型の標準菌株としてＳＥ１１、ＯＭ
Ｚ１７５等の菌株がそれぞれ例示される。

【００２８】ここで、ポリクローナル抗体（以下、単に
「抗体」ともいう。）とは、抗血清中に含まれる抗体画
分のことであり、抗体のグロブリンクラスは限定され
ず、現在知られているどのようなグロブリンクラスのも
のも含まれる。また、通常の抗体分子のみならず、該抗
体の部分分解物（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’２等）、
及び該抗体の活性フラグメント（抗体の抗原認識部位）
が存在する部分構造等も含まれる。

【００２９】また、抗体のＳ／Ｍ反応性倍率が１００以
上であるとは、酵素免疫測定法（以下、「ＥＬＩＳＡ
法」と略すこともある）、放射免疫測定法等の従来公知
の免疫学的測定方法により、ストレプトコッカス・ソブ
リヌスとストレプトコッカス・ミュータンスを抗原と
し、抗原抗体反応の検出を行った際に、ストレプトコッ
カス・ソブリヌスを抗原として使用した場合に検出され
る反応が、ストレプトコッカス・ミュータンスを抗原と
して使用した場合に検出される反応の１００倍以上ある
ことを指す。

【００３０】抗体のＳ／Ｍ反応性倍率は、同一菌体量の
ストレプトコッカス・ソブリヌス及びストレプトコッカ
ス・ミュータンスを抗原とし、抗原抗体反応を行った場
合に、ストレプトコッカス・ソブリヌスを抗原として使
用した場合に検出される反応値をストレプトコッカス・
ミュータンスを抗原として使用した場合に検出される反
応値で除することにより求めることが出来る。或いは、
ストレプトコッカス・ソブリヌス及びストレプトコッカ
ス・ミュータンスを抗原として使用した場合に、同一の
反応値が検出される抗原量（菌体量）を比較して求める
ことも可能である。

【００３１】抗体の各菌体に対する反応性は、標準菌株
のリン酸生理食塩緩衝液（ｐＨ７．４）（以下、「ＰＢ
Ｓ」と略すこともある）懸濁液を「被検体液として」使
用したＥＬＩＳＡ法により好適に測定することができ
る。このとき標準菌株としては、ストレプトコッカス・
ソブリヌスの血清型ｄ及びｇの菌として、それぞれ例え
ばＢ１３及び６７１５が、また、ストレプトコッカス・
ミュータンスの血清型ｃ、ｅ、及びｆの菌として、それ
ぞれ例えばＩｎｇｂｒｉｔｔ、Ｐ４、及びＯＭＺ１７５
が使用可能である。具体的手順としては、まず、特定濃
度の標準菌株のＰＢＳ懸濁液を９６穴イムノプレートの
各ウェルに添加し吸着した後、ブロッキングを行い、次
いで、イムノプレートにストレプトコッカス・ソブリヌ
スに対する抗体を添加後、例えば酵素標識した二次抗体
添加し、酵素活性を測定することにより抗体の反応性を
評価することが出来る。

【００３２】また、競合ＥＬＩＳＡ法を用いて反応性を
評価する場合には、それぞれ同一濃度のストレプトコッ
カス・ソブリヌス標準菌株のＰＢＳ懸濁液を９６穴イム
ノプレートの各ウェルに添加し吸着した後、ブロッキン
グを行い、次いで、イムノプレートにストレプトコッカ
ス・ソブリヌスに対する抗体と、それぞれ一定量のスト
レプトコッカス・ソブリヌス或いはストレプトコッカス
・ミュータンスの標準菌株を混合して添加後、例えば酵
素標識した二次抗体溶液を添加し、酵素活性を測定する
ことで、抗体の反応性を評価することが出来る。

【００３３】なお、標準菌株の懸濁液中のストレプトコ
ッカス・ソブリヌス及びストレプトコッカス・ミュータ
ンス濃度（濃度の単位：個／ｍｌ）は、培養法等の従来
公知の細菌学的手法に従い、菌数を計数することによっ
て測定出来る。例えば、培養法により濃度測定をする場
合には、標準菌株の懸濁液を適宜希釈し超音波処理等の
菌体の分散処理を施した後、ブレインハートインフュー
ジョン（以下、「ＢＨＩ」と表記することもある）培地
プレート上に塗布し生じる菌体のコロニー数を計数し、
希釈倍率を乗じることにより、標準菌株の懸濁液中の菌
濃度（濃度の単位：個／ｍｌ）を測定することが出来
る。

【００３４】本発明の抗体を用いた場合には、ストレプ
トコッカス・ソブリヌスを高感度に測定可能である。例
えば、本発明の抗体を用いることにより、ストレプトコ
ッカス・ソブリヌス及びストレプトコッカス・ミュータ
ンスを含む被検体液であって、該被検体液に含まれるス
トレプトコッカス・ソブリヌス濃度が１０⁵〜１０⁷個／
ｍｌである被検体液中のストレプトコッカス・ソブリヌ
スを測定する方法（以下、「本測定方法」ともいう。）
が可能となる。

【００３５】ここで被検体液中のストレプトコッカス・
ソブリヌス濃度は、上記標準菌株の懸濁液と同様に培養
法等の従来公知の細菌学的手法に従い菌数を計数するこ
とにより測定出来る。但し、被検体液が唾液や歯垢を含
む被検体液である場合には、該被検体液中にはストレプ
トコッカス・ソブリヌス以外にもストレプトコッカス・
ミュータンス、或いは他の口腔内細菌が含まれるので、
培地プレート上に生じたコロニーはストレプトコッカス
・ソブリヌスのコロニーとストレプトコッカス・ソブリ
ヌス以外のコロニーに精確に分類し、ストレプトコッカ
ス・ソブリヌスだけを正確に計数する必要がある。コロ
ニーの分類は、培地プレート上に生じたコロニーについ
て、糖発酵試験等の生化学的手法、特異的抗体を利用し
た免疫学的手法、ＤＮＡプローブを利用した遺伝学的手
法により行なうことができる。

【００３６】１０⁵〜１０⁷個／ｍｌというストレプトコ
ッカス・ソブリヌス濃度は、口腔内から採取した唾液を
そのまま、又は歯垢を適度に懸濁して調製される被検体
液中に存在するストレプトコッカス・ソブリヌス濃度と
ほぼ一致しており、このことから、本発明の抗体を用い
ることにより、培養等の煩雑な操作を行なうことなく簡
単に齲蝕リスクを判定することが可能となる。

【００３７】本測定方法のような高感度測定を行なうた
めには、本発明の抗体のようにそのＳ／Ｍ反応倍率が１
００以上の抗体を用いる必要がある。Ｓ／Ｍ反応性倍率
が１００未満のポリクローナル抗体を用いた場合には、
上記本測定方法のような高感度な測定ができない。スト
レプトコッカス・ソブリヌスの測定感度の点からＳ／Ｍ
反応性倍率は５００以上、特に１０００以上であるのが
好適である。

【００３８】また、上記本測定方法において、唾液や歯
垢を含む被検体液中のストレプトコッカス・ソブリヌス
の有無、或いは多寡を正確に測定するためには、用いる
本発明の抗体の、「ストレプトコッカス・ソブリヌスの
血清型ｄに対する反応性」と「ストレプトコッカス・ソ
ブリヌスの血清型ｇに対する反応性」とは同等であるこ
とが好ましい。ここで、ストレプトコッカス・ソブリヌ
スの血清型ｄ、及びｇとの反応性が同等であるとは、従
来公知の免疫学的測定方法により、同一菌体量の血清型
ｄ、及びｇのストレプトコッカス・ソブリヌスを抗原と
し、抗原抗体反応の検出を行った際に、両者から検出さ
れる反応が２倍以内、好ましくは１．５倍以内であるこ
とを指す。

【００３９】さらに、本測定方法に用いる場合、本発明
の抗体のストレプトコッカス・ソブリヌスに対する反応
性は特に限定されないが、測定感度の観点から、ストレ
プトコッカス・ソブリヌスのみを含む被検体液の各５０
μｌを試料とし、９６穴イムノプレートの各ウェルに菌
体を固定化後、１０ｎｇ〜５００ｎｇ／ウェルの抗体を
用いて直接ＥＬＩＳＡ法により測定を行なったときの検
出下限の菌体濃度が１０⁶個／ｍｌ以上（５×１０⁴個／
ウェル）、好ましくは２×１０⁵個／ｍｌ以上（１０⁴個
／ウェル）である抗体であるのが好適である。

【００４０】本測定方法に用いる場合における、本発明
の抗体としては、Ｓ／Ｍ反応性倍率が１０００以上であ
り、ストレプトコッカス・ソブリヌスの血清型ｄとｇと
に対する反応性比が２倍以内、特に１．５倍以内であ
り、上記検出下限の菌体濃度で表したストレプトコッカ
ス・ソブリヌスに対する反応性が１０⁶個／ｍｌ以上、
特に２×１０⁵個／ｍｌ以上であるポリクローナル抗体
であることが特に好適である。

【００４１】なお、本発明の抗体の用途は上記のような
被検体液中のストレプトコッカス・ソブリヌスの測定に
限られるものではなく、その濃度に関らず、ストレプト
コッカス・ソブリヌスだけ、或いはストレプトコッカス
・ソブリヌスとストレプトコッカス・ミュータンスを含
む懸濁液からなる被検体液中のストレプトコッカス・ソ
ブリヌスを免疫学的に測定する方法、その他ストレプト
コッカス・ソブリヌスに対する抗体が使用可能な用途に
も勿論使用可能である。

【００４２】次に、本発明の抗体の製造方法について詳
細に説明する。本発明の抗体は、免疫動物にストレプト
コッカス・ソブリヌスの全菌体または該全菌体より得ら
れる抗原抽出物を免疫してストレプトコッカス・ソブリ
ヌスに対するポリクローナル抗体を得、次いで得られた
該ポリクローナル抗体からストレプトコッカス・ミュー
タンスとの交差反応性を有するポリクローナル抗体を除
去することにより好適に得る事ができる。

【００４３】本発明の抗体を取得する場合の免疫用の抗
原としては、ストレプトコッカス・ソブリヌスの血清型
ｄ、或いは血清型ｇの全菌体、これら全菌体からの抗原
抽出物、又はこれらの混合物等が使用出来る。

【００４４】全菌体としては生菌の他、ホルマリン処
理、或いは加熱処理等された死菌、凍結保存された菌体
が使用可能である。

【００４５】全菌体からの抗原の抽出は、抗原が多糖抗
原である場合は、菌体懸濁液を加熱処理する方法（Ｒａ
ｎｔｓ，Ｌ．Ａ．，Ｓｔａｎｆｏｒｄ．Ｍｅｄ．Ｂｕｌ
ｌ．１３：２９０−２９１，１９５５．）、亜硝酸によ
り抽出する方法（武井勉．阪大医学雑誌．３５：９３−
１０９，１９９０．）等の従来公知の方法により行なう
ことができる。抽出された多糖抗原は、そのままで抗原
として使用することも可能であるし、更に精製して使用
することも出来る。また、抗原がタンパク抗原である場
合には、アルカリ、塩、キレート剤、カオトロピックイ
オン、界面活性剤を使用して抽出する（武井勉．阪大医
学雑誌．３５：９３−１０９，１９９０．）、或いは菌
体由来のタンパク質中に存在するする特定のタンパク質
を精製する（Ｏｋａｈａｓｉ，Ｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：３５−４７，１９８６．、
Ｈａｍａｄａ，Ｓ．Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．
１３５：３３５−３４４，１９８９．）ことにより得る
ことができる。また、菌体の特定のタンパク質をコード
する遺伝子の全部または一部を導入した組換え体を培養
して調製された組換えタンパク質、特定のタンパク質の
アミノ酸配列を基に合成された合成ペプチド等も抗原と
して使用できる。

【００４６】これらの抗原抽出物等は、抗原としてその
まま使用することも可能であるし、免疫用担体と結合さ
せて使用することも可能である。担体としては、スカシ
ガイのヘモシアニン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ニワトリ
血清アルブミン、ポリ−Ｌ−リジン、ポリアラニルリジ
ン、ジパルミチルリジン、破傷風トキソイド又は多糖類
等の従来公知の担体が好適に使用可能である。

【００４７】本発明で使用するポリクローナル抗体を作
製するために用いる抗原としては、操作性の簡便さか
ら、全菌体を直接、或いは多糖抗原の抽出物をそのまま
使用するのが好適であり、更に、得られる抗体の力価が
高いことから、ストレプトコッカス・ソブリヌスの全菌
体を直接免疫するのが特に好適である。

【００４８】上記のような抗原を免疫する動物として
は、抗体取得のために一般的に使用される動物が使用可
能であるが、マウス、ヤギ、ウサギ、モルモット等の哺
乳動物を用いるのが好適である。これら動物に抗原を免
疫する方法としては、従来公知の方法が制限なく採用で
き、全菌体または抗原抽出物を直接免疫してもよいし、
アジュバントを添加混合して免疫してもよい。例えば、
全菌体を直接免疫する場合には、ストレプトコッカス・
ソブリヌスをＢＨＩ液体培地等で培養後に得られる菌体
の懸濁液をそのまま使用することも可能である。また、
アジュバントとしては、フロイントの完全アジュバン
ト、フロイントの不完全アジュバント、水酸化アルミニ
ウムアジュバント又は百日咳菌アジュバント等の従来公
知のアジュバントが好適に使用可能である。

【００４９】これら動物に抗原を免疫後、採血し血清を
調製することで、ストレプトコッカス・ソブリヌスに対
するポリクローナル抗体を含む液体（以下、該液体を
「抗血清」と表記する場合もある）が得られる。

【００５０】得られた抗血清中にはストレプトコッカス
・ソブリヌスに特異的な抗体以外に他の抗体、及びアル
ブミン等の抗体以外のタンパク質が含まれているため、
得られた抗血清を塩析法、ゲル濾過法、イオン交換クロ
マトグラフィー法、アフィニティークロマトグラフィー
法、電気泳動法等の方法により処理することでポリクロ
ーナル抗体画分を分取することが好ましい。例えば抗原
としてストレプトコッカス・ソブリヌスの全菌体をウサ
ギに免疫すると、約４週間後以降に抗血清が得られ、例
えばプロテインＡを用いたアフィニティークロマトグラ
フィー法によりポリクローナル抗体画分（ＩｇＧ画分）
が得られる。この様にして本発明の抗体が得られる場合
もあるが、通常上記ポリクローナル抗体のＳ／Ｍ反応性
倍率は１００未満であり、本発明の抗体とはなり得な
い。そこで、得られたポリクローナル抗体（以下、「原
料抗体」ともいう。）からストレプトコッカス・ミュー
タンスとの交差反応性を有するポリクローナル抗体（以
下、「交差反応性抗体」ともいう。）を除去する必要が
ある。一般に、ポリクローナル抗体は多種の抗体の混合
物であり、前記のようにして取得したポリクローナル抗
体の中には、ストレプトコッカス・ミュータンスにも反
応する抗体が同時に存在し、そのため全体としてのＳ／
Ｍ反応性倍率が低下していると考えられる。したがっ
て、全体としてのＳ／Ｍ反応性倍率が１００以上となる
まで原料抗体から交差反応性抗体を選択的に分離除去す
ればよい。

【００５１】原料抗体から交差反応性抗体を除去する方
法は、特に限定されないが、アフィニティー精製法を採
用するのが一般的である。アフィニティー精製法により
交差反応性抗体を分離する場合には、不溶性担体に固定
化されたストレプトコッカス・ミュータンスの菌体また
は菌体由来の菌体表面抗原と、原料抗体とを接触させ、
該不溶性担体（「Ｍ抗原固定化担体」ともいう。）に交
差反応性抗体を吸着させて該不溶性担体と共に分離すれ
ばよい。あるいは、ストレプトコッカス・ミュータンス
の菌体を、不溶性担体を使用せずそのまま使用し原料抗
体と接触させ、菌体に交差反応性抗体を吸着させて該菌
体と共に分離することもできる。これらの方法により、
ストレプトコッカス・ミュータンスに対する反応性が低
い或いは反応性を有さない抗体は、Ｍ抗原固定化担体あ
るいはストレプトコッカス・ミュータンスの菌体に吸着
されないので、該担体あるいは該菌体と接触後、これと
分離された抗体のＳ／Ｍ反応性倍率は高くなる。

【００５２】不溶性担体を使用する場合の不溶性担体と
しては、アガロース、デキストラン、セルロース、ポリ
アクリルアミド、ポリスチレン、塩化ビニル、ガラス、
シリコーンラバー、又は多孔性シリカビーズ等の従来公
知の担体が何ら制限無く使用可能である。また、これら
担体にストレプトコッカス・ミュータンスの菌体あるい
は菌体由来の菌体表面抗原を固定化する方法としては、
臭化シアン活性化法等の化学的結合法や、物理化学的吸
着性を利用した方法が何ら制限無く使用可能である。

【００５３】ストレプトコッカス・ミュータンスの菌体
をそのまま使用する方法は、操作が簡便であり、またス
トレプトコッカス・ミュータンスの菌体表面に存在する
複数種の抗原と反応する複数種の抗体を同時に除去する
ことが可能であるということから、より好適である。こ
の時、使用する菌体は、例えばストレプトコッカス・ミ
ュータンスの標準菌株をＢＨＩ液体培地で培養すること
により容易に調製できる。菌体としては生菌をそのまま
使用することも出来るし、加熱処理、ホルマリン処理等
により調製した死菌も同様に使用可能である。また、ス
トレプトコッカス・ミュータンスの標準菌株としては、
血清型ｃ、ｅ、ｆのいずれも使用可能であり、これらの
混合物も使用可能である。

【００５４】アフィニティー精製法における前記Ｍ抗原
固定化担体と原料抗体の接触および分離法としては所謂
バッチ法およびクロマトグラフィー法の何れの方法も使
用可能である。また、両方法を組み合わせて実施するこ
とも可能である。

【００５５】クロマトグラフィー法では、Ｍ抗原固定化
担体をカラムに充填後、原料抗体をカラムに添加し、保
持されず溶出する画分を分取すればよい。また、バッチ
法においては、Ｍ抗原固定化担体を懸濁した液と原料抗
体を混合し、抗原抗体反応を十分行わせた後に、例えば
遠心処理により上清を回収することで実施できる。

【００５６】ストレプトコッカス・ミュータンスの菌体
をそのまま使用する場合の原料抗体との接触および分離
法は、上記バッチ法と同様であり、すなわち、菌体懸濁
液と原料抗体を混合し、抗原抗体反応を十分行わせた後
に、例えば遠心処理により上清を回収することで実施で
きる。

【００５７】本発明者らはこの様な方法により、Ｓ／Ｍ
反応性倍率が１００以上のポリクローナル抗体として、
ウサギ由来のポリクローナル抗体であるα６７１５、α
Ｂ１３、及びα６７１５−Ｂ１３を取得した。

【００５８】交差反応性抗体を除去した後のポリクロー
ナル抗体中には、菌体由来の成分が混入している場合が
あるため、抗体画分に精製することが好ましい。精製方
法としては塩析法、ゲル濾過法、イオン交換クロマトグ
ラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、電気泳
動法等の公知の方法が制限なく使用できるが、操作の簡
便性およびＩｇＧ画分を特異的に回収出来ることからプ
ロテインＡを用いたアフィニティークロマトグラフィー
法を採用するのが特に好適である。

【００５９】上記のようにして取得した各種抗体は、そ
れぞれ単独で使用することもできるが、性質の異なる抗
体を混合して使用する事もできる。例えば、ストレプト
コッカス・ソブリヌスの血清型ｄに対する反応性が血清
型ｇに対する反応性の２倍以上の抗体と、血清型ｇに対
する反応性が血清型ｄに対する反応性の２倍以上の抗体
を適宜混合して、血清型ｄ及びｇに対する反応性を同等
として用いることも可能である。

【００６０】本発明の抗体の製造方法は、免疫動物にス
トレプトコッカス・ソブリヌスの全菌体または該全菌体
より得られる抗原抽出物を免疫してストレプトコッカス
・ソブリヌスに対するポリクローナル抗体を得、次いで
得られた該ポリクローナル抗体からストレプトコッカス
・ミュータンスとの交差反応性を有するポリクローナル
抗体を除去する方法であれば特に限定されないが、操作
が簡便であり本発明の抗体が再現性良く得られることか
ら、免疫動物にストレプトコッカス・ソブリヌスの全菌
体を免疫してストレプトコッカス・ソブリヌスに対する
ポリクローナル抗体（原料抗体）を得、ストレプトコッ
カス・ミュータンスの全菌体と原料抗体とを接触させ、
菌体に交差反応性抗体を吸着させて該菌体と共に分離す
る方法が特に好適である。該接触及び分離法としては、
上記バッチ法が操作の簡便性から特に好適であり、例え
ばストレプトコッカス・ミュータンスの全菌体を懸濁し
た液と原料抗体を混合し、抗原抗体反応を十分行わせた
後に、例えば遠心処理により上清を回収することで実施
できる。

【００６１】このように、上記の方法により、本発明の
抗体、即ちＳ／Ｍ反応性倍率が１００以上のポリクロー
ナル抗体が安定的に製造可能である。

【００６２】前記したように、このようにして得られた
本発明の抗体を用いて免疫学的測定方法により被検体液
中のストレプトコッカス・ソブリヌスを測定することが
出来る。以下、本発明の抗体の応用例として、この様な
免疫学的測定方法について説明する。

【００６３】免疫学的測定方法としては、抗原抗体反応
により抗原を測定する方法として知られている下記免疫
凝集法、下記光学免疫測定法、下記標識免疫測定法、お
よびこれらの組合わせ等の従来公知の免疫学的測定方法
が使用出来る。なお、これら測定方法は、いずれも本発
明の抗体を含むストレプトコッカス・ソブリヌス測定試
薬（「本測定試薬」ともいう。）を用いることによって
実施される。ここで、本測定試薬とは、本発明の抗体を
含む免疫学的測定試薬であればその形態は特に限定され
ず、本発明の抗体を含む溶液；本発明の抗体を粒子やメ
ンブレン等の不溶性担体に固定化したもの或いはこれら
の懸濁液；本発明の抗体に放射性物質、酵素、各種色素
類、コロイド類、各種粒子等の各種標識物質を結合させ
たもの、或いはその懸濁液；又はこの様な標識された本
発明の抗体を粒子やメンブレン等の不溶性担体に固定化
したもの等、様々な形態をとり得る。

【００６４】〔免疫凝集法〕該方法は、抗原抗体反応に
基づく不溶性担体の凝集反応を利用して、被検体液中の
ストレプトコッカス・ソブリヌスを検出、定量する方法
である。半定量的方法としてはラテックス凝集法、マイ
クロタイター法等が、定量的測定法としてはラテックス
定量法等がある。

【００６５】例えばラテックス凝集法を利用して被検体
液中のストレプトコッカス・ソブリヌスを免疫学的に測
定する場合には、ラテックスビーズに本発明の抗体を固
定化した抗体感作粒子からなる本測定試薬を作製後、該
測定試薬と被検体液を混合し、抗原抗体反応後における
感作粒子の凝集の度合を、目視、或いは光学的測定法等
により検出することで測定することが出来る。

【００６６】〔光学免疫測定法〕該方法は、本発明の抗
体を含む溶液からなる本測定試薬と被検体液とを接触さ
せて抗原抗体反応を行った場合に、抗原抗体反応の結果
生じる凝集物の濁度の変化を検出する方法、本発明の抗
体を透明な支持体上に固定化した本測定試薬に被検体液
を接触させ、抗原抗体反応の結果粒子状の菌体が透明支
持体上に結合することによる透過度の変化を検出する方
法、又は本発明の抗体を固定化した薄層（以下、「抗体
層」ともいう。）からなる本測定試薬に被検体液を接触
させ、抗原抗体反応の結果生じる抗体層の屈折率の変化
を透過光や表面プラズモン波等の変化として検出する方
法等、抗原抗体反応の有無を光学的に検出する方法のこ
とである。

【００６７】〔標識免疫測定法〕該方法は、本発明の抗
体に放射性物質、酵素、各種色素類、コロイド類、各種
粒子等の各種標識物質を結合させて得た標識抗体を含む
本測定試薬と、被検体液とを接触させて抗原抗体反応を
行った後に、被検体液中のストレプトコッカス・ソブリ
ヌスに結合した標識物質の量、すなわち標識物質に由来
する放射活性、酵素活性、蛍光強度、着色等を測定する
ことによって、被検体液中のストレプトコッカス・ソブ
リヌスを検出、定量する方法である。あるいは、本発明
の抗体を固定化した不溶性担体（粒子、メンブレン等）
からなる本測定試薬と被検体液とを接触させて抗原抗体
反応を行った後に、本発明の抗体を標識物質で標識した
標識抗体を含む別の本測定試薬を接触させて更に抗原抗
体反応を行った後に、標識物質の量を測定することによ
って、被検体液中のストレプトコッカス・ソブリヌスを
検出、定量する方法である。あるいは、被検体液と標識
物質で標識したストレプトコッカス・ソブリヌスの菌体
または菌体表面抗原とを混合し、本発明の抗体を固定化
した不溶性担体からなる本測定試薬に接触させて抗原抗
体反応を行った後に、本発明の抗体に結合した標識物質
の量を測定することによって、被検体液中のストレプト
コッカス・ソブリヌスを検出、定量する方法である。

【００６８】放射性物質を使用する放射免疫測定法、酵
素を使用する酵素免疫測定法、色素として特に蛍光色素
を利用する蛍光免疫測定法、酵素の基質として化学発光
物質を利用する化学発光免疫測定法等は、定量性の高い
測定方法として好適に使用可能である。

【００６９】放射免疫測定法において使用する放射性物
質としては、放射性ヨード、放射性炭素等が挙げられ
る。酵素免疫測定法において使用する酵素としてはペル
オキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ガラクトシダ
ーゼ等が使用できる。

【００７０】酵素標識を行う場合は、チオール基とマレ
イミド基、アミノ基とアルデヒド基等の共有結合により
直接標識する、或いはビオチン−アビジン複合体を介し
標識する等の方法が使用可能である。

【００７１】各種色素類を使用した免疫学的測定方法で
は、フルオレセインイソチオシアネート、テトラメチル
ローダミン等の蛍光色素類を使用した蛍光免疫測定法
が、感度が高く好適に採用される。

【００７２】化学発光免疫測定法に於いては、標識酵素
としてアルカリホスファターゼを使用した場合にはジオ
キセタン誘導体等が、標識酵素としてパーオキシダーゼ
を使用した場合はルミノール誘導体等が酵素の基質とし
て使用出来る。

【００７３】コロイドとしては金コロイド、炭素コロイ
ド等が、また各種粒子としては着色ラテックス粒子等が
使用出来る。コロイド、或いは各種粒子を利用した、特
に操作が迅速、簡便な免疫学的測定方法として、フロー
スルー免疫測定法、免疫クロマト法、或いは免疫濾過法
を例示することが出来る。

【００７４】これら各種標識免疫測定法における操作、
手順等は一般に採用されているそれらと特に異ならず、
公知の非競合法や競合法、サンドイッチ法等に準じるこ
とが出来る。また、本発明の抗体と共に、上記の各標識
物質で標識した二次抗体、プロテインＡ等の本発明の抗
体に結合可能な物質を使用してストレプトコッカス・ソ
ブリヌスの検出・定量に用いることもできる。

【００７５】また、必要に応じて複数の抗体を組み合わ
せてストレプトコッカス・ソブリヌスの検出、定量に用
いることも出来る。例えば、サンドイッチ法の原理に基
づく免疫学的測定方法に於いて、固相に固定化する抗体
としてストレプトコッカス・ソブリヌスに対するモノク
ローナル抗体を使用し、標識抗体として本発明の抗体を
使用することもできる。

【００７６】上記の各種免疫学的測定方法のなかでも、
ラテックス定量法や酵素免疫測定法は、自動分析装置を
用いて多数の被検体液を処理することが可能であるの
で、集団検診等に好適に実施可能である。

【００７７】また、免疫クロマト法、フロースルー免疫
測定法、およびラテックス凝集法は、操作が簡便で特別
な知識や装置を必要とすることなく迅速な測定が可能で
あり、歯科医院や家庭においても実施可能であるという
点で、特に好適である。

【００７８】例えばフロースルー免疫測定法を利用して
被検体液中のストレプトコッカス・ソブリヌスを測定す
る場合には、本発明の抗体をストレプトコッカス・ソブ
リヌス捕捉用抗体として多孔性膜上に固定化して本測定
試薬を得、次いで、該多孔性膜膜表面に被検体液を接触
させた後、多孔性膜表面に垂直方向に被検体液を通過さ
せ、被検体液中のストレプトコッカス・ソブリヌスを多
孔性膜に抗原抗体反応により捕捉し、更に、標識した本
発明の抗体を含む溶液からなる別の本測定試薬を多孔性
膜表面に接触させた後、多孔性膜表面に垂直方向に通過
させ、多孔性膜上の標識抗体の有無または多寡を測定す
ることで、被検体液中のストレプトコッカス・ソブリヌ
スを迅速、簡便に測定することが出来る。

【００７９】また、免疫クロマト法を利用して被検体液
中のストレプトコッカス・ソブリヌスを測定する場合に
は、通常、免疫クロマト法ストリップ（単に、「ストリ
ップ」とも言う。）と呼ばれる本測定試薬を用いて行な
うことができる。

【００８０】上記ストリップの構造は特に限定されない
が、図１及び図２に示されるように、ストリップ１は、
それぞれ目的に応じた多孔性支持体からなる各部材、す
なわち被検体液を一時的に吸収、保持するためのサンプ
ルパッド２、標識抗体を一時的に保持するためのコンジ
ュゲートパッド３、検出用抗体が固定化される展開メン
ブレン４、およびサンプルパッド２より展開された被検
体液を吸収するための吸収パッド５がこの順番で接合さ
れた構造であるのが一般的である。なお、図１及び図２
中に示される各寸法（長さ）は、単に大きさの目安を示
すものであり、ストリップ１の大きさが示される値に限
定されるものではない。

【００８１】上記コンジュゲートパッド３には、被検体
液中のストレプトコッカス・ソブリヌスを標識するため
の抗体として、例えば金コロイド等の標識物質で標識し
た本発明の抗体（標識抗体）が塗布・乾燥することによ
り保持されており、また、上記展開メンブレン４上の検
出ライン６には、被検体液中のストレプトコッカス・ソ
ブリヌスを捕捉するための検出用抗体として本発明の抗
体が固定化されている。

【００８２】そして、前記コンジュゲートパッド３の近
傍に位置するサンプルパッド２に被検体液を添加し、室
温で１〜３０分間放置することにより被検体液とともに
標識抗体を検出ライン６まで展開し、サンドイッチ法の
原理に基づいて、展開液中の標識抗体と結合したストレ
プトコッカス・ソブリヌスを検出用抗体で検出ライン６
上に捕捉し、捕捉されたストレプトコッカス・ソブリヌ
スに結合した標識抗体を検出することにより、被検体中
のストレプトコッカス・ソブリヌスの有無またはその多
寡を測定することが出来る。このときに標識抗体が被検
体液と共に正常に展開されていることは、上記検出ライ
ン６の上流のコントロール判定ライン７に標識抗体と反
応する抗体を固定化しておき、この位置で標識抗体が検
出されることにより確認することができる。

【００８３】なお、図１に示される展開メンブレン４上
の検出ライン６及びコントロール判定ライン７の位置、
順、形状、数等は一例であり特に限定されるものではな
い。

【００８４】上記各部材を構成する多孔性支持体に用い
る材料は特に限定されず、各部材の目的に応じて吸湿性
材料、多孔質材料、繊維質材料等から適宜選択される。
例えば、サンプルパッド２としては、濾紙、吸取紙等を
用いるのが好適であり、コンジュゲートパッド３として
はガラス繊維布、ポリプロピレン不織布、ガラスフィル
ター等を用いるのが好適である。また展開メンブレン４
としてはニトロセルロース、或いは酢酸セルロースを含
むニトロセルロース等を用いるのが好適であり、吸収パ
ッド５としては濾紙、吸取紙等を用いるのが好適であ
る。

【００８５】なお、検出用抗体及びコントロール抗体の
展開メンブレン４への固定化方法は特に限定されず、従
来公知の物理的吸着法や共有結合法が何ら制限無く使用
出来るし、他のタンパク質等と混合して固定化すること
も出来る。また、展開メンブレンへの被検体液成分の非
特異的吸着を抑制する、或いは展開メンブレンへの被検
体液の湿潤性を向上するため抗体固定化後の展開メンブ
レンを公知の方法によりタンパク質、脂質、高分子化合
物等によりブロッキング処理することも出来る。このブ
ロッキング処理に用いるタンパク質等は特に限定される
ものではないが、一般的な免疫学的測定法において、非
特異的反応を抑制する目的で使用されているＢＳＡ、ス
キムミルク等が好適である。また、被検体液が展開メン
ブレンを均一に展開するように、展開メンブレンの吸水
性を調整するために、展開メンブレンの表面に親水性重
合体や界面活性剤を被覆または含浸させることも出来
る。

【００８６】なお、コンジュゲートパッド３について
は、被検体液を添加したときに、ストレプトコッカス・
ソブリヌスと標識抗体との複合体が、この部分から容易
に脱離するように、水溶性重合体、またはサッカロース
等の糖類で予めブロッキングした後標識抗体を添加して
から乾燥させる、或いは標識抗体を予め水溶性重合体、
またはサッカロース等の糖類と混合してからコンジュゲ
ートパッドに塗布し乾燥させるのが好ましい。上記水溶
性重合体としては、ポリビニルピロリドン、ポリビニル
アルコール、ポリエチレングリコール、セルロースエー
テル（メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキ
シメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース、オ
キシエチルセルロース、シアンエチルセルロース等）、
ゼラチン等が使用できる。

【００８７】また、標識抗体を調製するための標識物質
としては、金コロイド、炭素コロイド、着色ラテックス
等の目視によって確認できる標識物が使用出来る他、放
射性物質や蛍光物質も使用可能である。また、標識物質
として酵素を利用し、抗原抗体反応の後に基質を添加し
て、酵素反応により生じる化合物を検出することも出来
る。本測定試薬における標識抗体を調製するための標識
物質としては特に限定されないが、迅速簡便に測定でき
るという点で、金コロイド、炭素コロイド、着色ラテッ
クス等が好適であり、安定な標識抗体が再現性良く得ら
れることから、金コロイドが特に好適である。抗体の標
識化は特に限定されず、従来一般的に採用されている方
法により行なうことができる。

【００８８】本測定試薬としては、上記で説明した標識
抗体を予め塗布して乾燥させたストリップが、測定時の
操作が簡便であることから好適であるが、標識抗体を予
め被検体液と混合し抗原抗体反応を行わせた後に、該混
合液を検出用抗体が固定化された多孔性支持体の一端に
添加するという方法でも測定可能である。

【００８９】本測定試薬は、本発明のポリクローナル抗
体を含んでなる免疫学的測定試薬であれば特に限定され
ないが、測定が迅速簡便であるという点で、免疫クロマ
ト法ストリップが好適であり、本発明のポリクローナル
抗体を金コロイドで標識した標識抗体を予め塗布乾燥さ
せた免疫クロマト法ストリップが特に好適である。

【００９０】免疫クロマト法ストリップを用いた場合に
は、以下のような手順で迅速簡便に被験者の口腔内に存
在するストレプトコッカス・ソブリヌスの量を知ること
ができ、齲蝕リスクを診断、判定することができる。

【００９１】即ち、まず、口腔内より歯垢或いは唾液
を採取（スパチュラ、又は綿棒で歯垢を採取、或いはス
ポイトで唾液を採取）し、採取物が唾液である場合に
はそのまま、或いは検体希釈液に懸濁させ、また、採取
物が歯垢である場合には検体希釈液に懸濁させた後必要
に応じて超音波を当てる等の歯垢の分散処理を施して被
検体液を調製し、被検体液（例えば１００〜２００μ
ｌ）を分取し、前記ストリップのサンプルパッドに添加
し、所定時間（例えば１〜３０分）静置した後、該スト
リップの検出ライン６及びコントロールライン判定ライ
ン７の着色の有無あるいはその状態により判定すること
によりストレプトコッカス・ソブリヌスが存在するか否
か、或いはその量を知ることができる。

【００９２】例えば、金コロイドを標識物質として用い
た場合には、被検体液中のストレプトコッカス・ソブリ
ヌスの濃度により検出ライン６は、金コロイドによる着
色の程度は表１に示す様に変化するので、表２の基準に
従い齲蝕リスクを診断判定することができる。

【００９３】

【表１】

【００９４】

【表２】

【００９５】

【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
るが、本発明は以下の実施例により限定されるものでは
ない。

【００９６】実施例１〔ポリクローナル抗体の作製、抗
体の反応性評価〕（１）〔菌体試料懸濁液の調製〕ＢＨＩ（ＤＩＦＣＯ社）３．７ｇを１００ｍｌの超純水
に溶解後、オートクレーブ処理し、ＢＨＩ液体培地を調
製した。ＢＨＩ液体培地２ｍｌ中で６７１５（ストレプ
トコッカス・ソブリヌス、血清型ｇ）を３７℃、５時
間、嫌気条件下（Ｎ₂：Ｈ₂：ＣＯ₂＝８０：１０：１
０）で培養した。培養液を４０００ｇ、５分遠心処理
し、上清の培地成分を除去し菌体沈殿を回収した。沈殿
を懸濁し、同様の遠心分離をする操作で５ｍｌのＰＢＳ
にて３回洗浄した。菌体沈殿をＰＢＳに懸濁し、Ａ₆₀₀
＝１．０に調整し菌体試料懸濁液とした。該菌体試料懸
濁液の菌体濃度は約２×１０⁹個／ｍｌであった。菌体
濃度の測定は、菌体試料懸濁液を超音波処理後、適宜希
釈した後にＢＨＩ培地プレート上に添加し、生じたコロ
ニー数を計数し菌体試料懸濁液の希釈倍率を乗じること
で求めた。

【００９７】同様の操作により、Ｂ１３（ストレプトコ
ッカス・ソブリヌス、血清型ｄ）、Ｉｎｇｂｒｉｔｔ
（ストレプトコッカス・ミュータンス、血清型ｃ）、Ｐ
４（ストレプトコッカス・ミュータンス、血清型ｅ）、
ＯＭＺ１７５（ストレプトコッカス・ミュータンス、血
清型ｆ）、ＡＴＣＣ１０５５６（ストレプトコッカス・
サンギス）、ＩＦＯ１４２５２（ストレプトコッカス・
サリバリウス）、ＡＴＣＣ４９４５６（ストレプトコッ
カス・ミティス）、ＡＴＣＣ３５０３７（ストレプトコ
ッカス・オラリス）の菌体試料懸濁液を調製した。な
お、ここで６７１５、Ｂ１３、Ｉｎｇｂｒｉｔｔ等は標
準菌株の菌株名を、ＡＴＣＣ１０５５６、ＩＦＯ１４２
５２等は標準菌株の寄託番号を示す。

【００９８】（２）〔ストレプトコッカス・ソブリヌス
に対する抗血清の作製〕オートクレーブ処理したＢＨＩ液体培地１００ｍｌ中で
６７１５（ストレプトコッカス・ソブリヌス、血清型
ｇ）を３７℃、５時間、嫌気条件下（Ｎ₂：Ｈ₂：ＣＯ₂
＝８０：１０：１０）で培養した。培養液を４０００
ｇ、５分遠心処理し、上清の培地成分を除去し菌体沈殿
を回収した。沈殿を懸濁し、同様の遠心分離をする操作
で１００ｍｌのＰＢＳにて３回洗浄した。菌体沈殿を回
収、秤量し、１０ｍｇ湿菌／ｍｌの６７１５の菌体懸濁
液を調製した。

【００９９】該菌体懸濁液を、５ｍｇ湿菌／ｍｌとなる
よう０．５％ホルマリン−ＰＢＳで倍希釈し菌体抗原懸
濁液とし、懸濁状態で４℃にて保存した。該菌体抗原懸
濁液それぞれ各１ｍｌを、１週間の内に１日於きに３回
ウサギに対し耳介静脈注射した。同様の免疫操作を第２
週、第３週と、計６回行った。更に菌体抗原懸濁液０．
５ｍｌを等量のアジュバンドと混合し、ウサギの皮下に
２回注射した。力価の上昇をスライドグラスを利用した
菌体の凝集反応の程度により確認後、最終免疫より１週
間後に、定法に従い採血しストレプトコッカス・ソブリ
ヌスに対する抗血清を得た。

【０１００】（３）〔ストレプトコッカス・ソブリヌス
に対するポリクローナル抗体の精製〕（１）の方法に従い、Ｉｎｇｂｒｉｔｔ（ストレプトコ
ッカス・ミュータンス、血清型ｃ）、Ｐ４（ストレプト
コッカス・ミュータンス、血清型ｅ）、及びＯＭＺ１７
５（ストレプトコッカス・ミュータンス、血清型ｆ）を
それぞれ約２×１０¹⁰個／ｍｌ含む菌体懸濁液１０ｍｌ
を調製した。該菌体懸濁液と、（２）で得られた抗血清
０．５ｍｌを混合し４℃、６０分反応した。混合液を４
０００ｇ、５分遠心処理後上清を分取し、０．２２μｍ
フィルターで濾過した。あらかじめＰＢＳで平衡化した
１ｍｌのプロテインＡ−セファロース（ファルマシア
社）を充填したカラムに上清試料を添加し、５ｍｌのＰ
ＢＳでカラムを洗浄後、５ｍｌの０．１Ｍグリシン−塩
酸緩衝液（ｐＨ３．０）にて溶出し、直ちに１００ｍＭ
トリス−塩酸（ｐＨ９．０）を添加しｐＨ７．４に調整
した。ＩｇＧの溶出画分は、Ａ₂₈₀を測定することで確
認した。０．５ｍｌの抗血清より、約４ｍｇのＩｇＧを
回収した。

【０１０１】（４）〔直接ＥＬＩＳＡ法によるストレプ
トコッカス・ソブリヌスに対するポリクローナル抗体の
評価〕上記（３）で精製したストレプトコッカス・ソブリヌス
に対するポリクローナル抗体（以下「α６７１５」と表
記することもある）と、各菌体との反応性評価は、以下
の直接ＥＬＩＳＡ法により行った。

【０１０２】まず、上記（１）の方法で得られた菌体試
料懸濁液を、０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ９．０）にて１
×１０⁴〜１０⁹個／ｍｌとなるよう希釈したものを、９
６穴イムノプレート（Ｎｕｎｃ社、Ｍａｘｉｓｏｒｐ）
の各ウェルに５０μｌずつ添加し、４℃、１２時間放置
し固定した。イムノプレートから菌体懸濁液を除去し、
３００μｌのＰＢＳで３回洗浄した。イムノプレートの
各ウェルに、２％ＢＳＡ−０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ
９．０）を３００μｌ添加し、３７℃、２時間放置し、
その後、イムノプレートから２％ＢＳＡ−炭酸緩衝液
（ｐＨ９．０）を除去し、３００μｌの０．０５％Ｔｗ
ｅｅｎ２０−ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で３回洗浄した。

【０１０３】次いで、α６７１５を、１％ＢＳＡ−０．
０５％Ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳ（ｐＨ７．４）にて０．
４μｇ／ｍｌとなるよう希釈し、イムノプレートの各ウ
ェルに５０μｌ添加し、３７℃、１時間放置した。その
後、イムノプレートから溶液を除去し、３００μｌの
０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で３
回洗浄した。

【０１０４】次いで、アルカリホスファターゼ標識抗ウ
サギＩｇＧ（Ｆｃ）ポリクローナル抗体（ヤギ）（カッ
ペル社）を、１％ＢＳＡ−０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０−
ＰＢＳ（ｐＨ７．４）にて１０μｇ／ｍｌとなるよう希
釈し、イムノプレートの各ウェルに５０μｌ添加し、３
７℃、１時間放置した。イムノプレートから溶液を除去
し、３００μｌの０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳ
（ｐＨ７．４）で３回洗浄した。

【０１０５】次いで、発色基質溶液として、ｐ−ニトロ
フェニルリン酸の２−エタノールアミン水溶液（ＢＩＯ
ＲＡＤ社）を各ウェルに５０μｌずつ添加し、室温下３
０分反応した。反応後、０．４ＭのＮａＯＨを各ウェル
に５０μｌずつ添加し反応を停止し、４０５ｎｍの吸光
度を測定した。結果を表３に示す。

【０１０６】

【表３】

【０１０７】（５）〔競合ＥＬＩＳＡ法によるストレプ
トコッカス・ソブリヌスに対するポリクローナル抗体の
評価〕 α６７１５と、各菌体との反応性は、以下の競合ＥＬＩ
ＳＡ法によっても評価した。

【０１０８】すなわち、先ず、上記（４）と同様にし
て、菌体を固定化し、ＢＳＡでブロッキングしたイムノ
プレートを作製した。告いで、イムノプレートの各ウェ
ルに、α６７１５を０．４μｇ／ｍｌ含み、更にストレ
プトコッカス・ミュータンス、或いはストレプトコッカ
ス・ソブリヌスの菌体を１０⁵〜１０⁹個／ｍｌ含む１％
ＢＳＡ−０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳ（ｐＨ７．
４）溶液５０μｌを添加し、３７℃、１時間放置した
後、イムノプレートから溶液を除去し、３００μｌの
０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０−ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で３
回洗浄した。

【０１０９】次いで、上記（４）と同様にして、アルカ
リホスファターゼ標識した抗ウサギＩｇＧ抗体を添加し
た後、発色基質溶液を添加し、４０５ｎｍの吸光度を測
定した。結果を表４に示す。

【０１１０】

【表４】

【０１１１】表３より、５×１０⁵個／ウェルから５×
１０⁷個／ウェルの範囲において、同一菌体量のストレ
プトコッカス・ソブリヌスとストレプトコッカス・ミュ
ータンスを抗原とし、抗原抗体反応の検出を行った際
に、ストレプトコッカス・ソブリヌスを抗原として使用
した場合に検出される反応が、ストレプトコッカス・ミ
ュータンスを抗原として使用した場合に検出される反応
の１００倍以上であることが分かる。さらに、５×１０
⁷個／ウェルのストレプトコッカス・ミュータンスを抗
原として使用した場合に検出される反応と同一の反応が
検出されるストレプトコッカス・ソブリヌスの抗原量は
５×１０⁴個／ウェル以下であることから、α６７１５
のストレプトコッカス・ソブリヌスに対する反応性は、
ストレプトコッカス・ミュータンスに対する反応性の１
０００倍以上であることが分かる。

【０１１２】また、表４より、５×１０⁷個／ウェルの
ストレプトコッカス・ミュータンスを添加した場合に検
出される阻害反応は、５×１０⁵個／ウェル以下のスト
レプトコッカス・ソブリヌスを添加した場合に検出され
る阻害反応と同等であり、ストレプトコッカス・ソブリ
ヌスに対する反応性が、ストレプトコッカス・ミュータ
ンスに対する反応性の１００倍以上であることが分か
る。

【０１１３】実施例２〔免疫クロマト法ストリップの作
製、評価〕（１）〔金コロイド標識されたストレプトコッカス・ソ
ブリヌスに対するポリクローナル抗体の調製〕コロイド粒径が４０ｎｍの市販金コロイド溶液（ＥＹ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）１０ｍｌに１００ｍＭＫ₂ＣＯ₃
を８８μｌ添加し、ｐＨを９．０に調製後、０．２２μ
ｍフィルター処理した。金コロイド溶液の５２０ｎｍの
吸光度を測定したところ、Ａ₅₂₀＝１．０であった。
０．１ｍｇ／ｍｌに調整したα６７１５の２ｍＭホウ酸
緩衝溶液（ｐＨ９．０）８００μｌを、金コロイド溶液
に撹拌しながら添加し、室温下５分放置した。次いで、
１０％ＢＳＡ−２ｍＭホウ酸緩衝液（ｐＨ９．０）を２
０９．８μｌ撹拌しながら添加し（ＢＳＡ終濃度１
％）、室温下３０分放置した。

【０１１４】次いで、反応溶液を１０℃、１００００
ｇ、３０分遠心処理し、上清を除去後、２ｍｌの０．０
５％ＢＳＡ−２ｍＭＰＢＳ（ｐＨ７．４）を添加し、下
層の金コロイド画分を再懸濁した。該再懸濁した画分の
５２０ｎｍの吸光度を測定したところ、Ａ₅₂₀＝４．５
であった。得られた金コロイド画分（以下、「金コロイ
ド標識α６７１５」と表記することもある）は、４℃に
て保存した。

【０１１５】（２）〔免疫クロマト法ストリップの作
製〕ニトロセルロースメンブレン（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ社、
Ｈｉ−ＦｌｏｗＭｅｍｂｒａｎｅ、ＳＮ、２５ｍｍ×
６ｍｍ）からなる展開メンブレン４上の検出ライン６及
びコントロール判定ライン７上に、それぞれ１ｍｇ／ｍ
ｌのα６７１５及び抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ポリクロ
ーナル抗体１μｌをスポットし、インキュベーター内で
３７℃、６０分乾燥し抗体を固定化した。該抗体固定化
メンブレンを１％スキムミルク−０．１％Ｔｒｉｔｏｎ
Ｘ１００水溶液中で室温下、５分振とうした。次いで、
該メンブレンを１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中
で室温下、１０分振とう後取り出し、真空ポンプで吸引
しながら６０分間デシケーター中で乾燥した。

【０１１６】また、コンジュゲートパッド３（ＭＩＬＬ
ＩＰＯＲＥ社、７．５ｍｍ×６ｍｍ）を０．５％ＰＶＡ
−０．５％ショ糖水溶液中で１分間振とう後取り出し、
真空ポンプで吸引しながら６０分間デシケーター中で乾
燥した。該コンジュゲートパッド３にＡ₅₂₀＝１．０に
調整した金コロイド標識α６７１５を２５μｌ添加し、
真空ポンプで吸引しながら６０分間デシケーター中で乾
燥した。

【０１１７】更に、サンプルパッド２（ＭＩＬＬＩＰＯ
ＲＥ社、１７ｍｍ×６ｍｍ）を１％Ｔｗｅｅｎ２０−Ｐ
ＢＳ水溶液中で１分間振とう後取り出し、真空ポンプで
吸引しながら６０分間デシケーター中で乾燥した。尚、
吸収パッド５（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ社、２０ｍｍ×６ｍ
ｍ）は未処理のまま用いた。

【０１１８】このように調製した、図１に示す免疫クロ
マト法ストリップの各構成部分をプラスチックの支持台
上に配置し、図２に示す免疫クロマト法ストリップを組
み立てた。

【０１１９】（３）〔免疫クロマト法ストリップの特異
性、感度評価〕免疫クロマト法ストリップのサンプルパッド２上に、標
準菌体のＰＢＳ懸濁液１００μｌを添加し、１０分後に
スポットの有無を判定した。固定化抗体スポット上に捕
捉された金コロイドの程度を４段階（＋＋＋：強い陽
性、＋＋：陽性、＋：弱い陽性、−：陰性）に目視で識
別し、感度及び定量性を評価した。結果を表５に示す。

【０１２０】

【表５】

【０１２１】比較例１〔ストレプトコッカス・ミュータ
ンスによる吸収処理をしない、ストレプトコッカス・ソ
ブリヌスに対するポリクローナルの評価〕実施例１の
（２）で得られたストレプトコッカス・ソブリヌスに対
する抗血清を、ストレプトコッカス・ミュータンスの菌
体による吸収処理をしないで、実施例１（３）の操作手
順に従い、プロテインＡカラム処理のみ行い、ＩｇＧ画
分を調製した（以下、「未精製ポリクローナル抗体」と
表記することもある）。実施例１（４）の操作手順に従
い、未精製ポリクローナル抗体と菌体との反応性を直接
ＥＬＩＳＡ法により評価した。結果を表６に示す。ま
た、実施例２の操作手順に従い金コロイド標識抗体を調
製後、免疫クロマト法ストリップを作製し、菌体との反
応性を評価した。結果を表７に示す。

【０１２２】

【表６】

【０１２３】

【表７】

【０１２４】表６から、未精製ポリクローナル抗体のス
トレプトコッカス・ソブリヌスに対する反応性は、スト
レプトコッカス・ミュータンスに対する反応性の１０倍
以下であることが分かる。表７から、未精製ポリクロー
ナル抗体を用いた免疫クロマト法ストリップを用いた場
合には、ストレプトコッカス・ミュータンスに対する反
応が検出され、ストレプトコッカス・ソブリヌスを特異
的に検出することは出来なかった。

【０１２５】実施例３〔免疫クロマト法ストリップによ
る歯垢からのストレプトコッカス・ソブリヌスの検出〕（１）〔歯垢を含む被検体液の調製〕１２０人より、口腔内を水で洗浄し唾液成分を除去後、
スパチュラを用いて歯垢を採取した。歯垢を秤量後、１
ｍｇ湿重量／ｍｌとなるようＰＢＳに懸濁し、２０秒
間、６０Ｗで超音波処理することで歯垢を含む被検体液
を得た。

【０１２６】（２）〔培養法による歯垢試料溶液中のス
トレプトコッカス・ソブリヌスの定量〕上記（１）の方法に従い得られた歯垢を含む被検体液を
適宜希釈して、１００μｌをミチス・サリバリウス・バ
シトラシン（以下、「ＭＳＢ」と表記することもあ
る。）固体培地上およびＢＨＩ固体培地上に添加し、３
７℃、嫌気条件下、２４時間培養した。ＭＳＢおよびＢ
ＨＩ固体培地上に生じるコロニー数を計数し、被検体液
の希釈率から、ミュータンスレンサ球菌濃度を個／ｍｌ
として算出した。ＭＳＢおよびＢＨＩ培地上のストレプ
トコッカス・ソブリヌス及びストレプトコッカス・ミュ
ータンスの識別は、コロニーの形態学的分類、及び形態
学的に識別不可能なコロニーに関しては、該コロニーを
純粋培養後、ミュータンスレンサ球菌の血清型特異的な
抗体を利用した免疫学的測定方法及び、糖発酵試験等の
生化学的方法によりストレプトコッカス・ソブリヌス及
びストレプトコッカス・ミュータンスの同定を行った。

【０１２７】（３）〔免疫クロマト法ストリップによる
歯垢を含む被検体液中のストレプトコッカス・ソブリヌ
スの測定〕上記（２）の検討により、ストレプトコッカス・ソブリ
ヌスが検出された８検体、及びストレプトコッカス・ソ
ブリヌスが検出されず、ストレプトコッカス・ミュータ
ンスが検出された５検体、及び両者とも検出されない１
検体の被検体液２００μｌについて、実施例２の（２）
と同様の方法で作製した免疫クロマト法ストリップを用
いストレプトコッカス・ソブリヌスの測定を実施した。
免疫クロマト法ストリップに於ける１０分後のスポット
発色強度を４段階（＋＋＋：強い陽性、＋＋：陽性、
＋：弱い陽性、−：陰性）に識別した結果と、（２）の
培養法により得られたストレプトコッカス・ソブリヌス
菌数とを比較した。結果を表８に示す。

【０１２８】

【表８】

【０１２９】表８より、培養法により得られたストレプ
トコッカス・ソブリヌスの濃度と相関し、ストレプトコ
ッカス・ミュータンスの濃度とは相関しないスポット発
色強度が得られた。本発明の免疫クロマト法ストリップ
により、ストレプトコッカス・ソブリヌスを１０⁵個／
ｍｌ以上の濃度で含む被検体液から、ストレプトコッカ
ス・ソブリヌスをその濃度依存的に、特異的に検出可能
であった。

【０１３０】

【発明の効果】本発明の抗体を用いることにより、スト
レプトコッカス・ミュータンスが混在する唾液又は歯垢
を含む被検体液から培養法等を介さずに、直接ストレプ
トコッカス・ソブリヌスを高感度に測定することが可能
となる。

【０１３１】また、本発明の抗体を用いた免疫クロマト
法ストリップのような測定試薬を使用することにより、
齲蝕の有力な原因菌であるストレプトコッカス・ソブリ
ヌスの精確な測定を歯科医院内や家庭で簡単に行なうこ
とも可能となる。

【０１３２】さらに、本発明の製造方法によれば、本発
明の抗体を容易に製造することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本図は、実施例２で用いたストリップの各部材
の形状を示す図面である。

【図２】本図は、実施例２で用いたストリップの側面図
である。

【符号の説明】

１・・・ストリップ２・・・サンプルパッド３・・・コンジュゲートパッド４・・・展開メンブレン５・・・吸収パッド６・・・検出ライン７・・・コントロール判定ライン

フロントページの続き (72)発明者羽生尚広山口県徳山市御影町１番１号株式会社トクヤマ内 (72)発明者福島和雄千葉県松戸市栄町西２−870−１日本大学松戸歯学部内Ｆターム(参考） 4H045 AA11 CA11 CA40 DA75 DA86 EA50 FA71 GA15 GA26

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ストレプトコッカス・ソブリヌスに対す
る反応性がストレプトコッカス・ミュータンスに対する
反応性の１００倍以上であることを特徴とするポリクロ
ーナル抗体。
【請求項２】免疫動物にストレプトコッカス・ソブリ
ヌスの全菌体または該全菌体より得られる抗原抽出物を
免疫してストレプトコッカス・ソブリヌスに対するポリ
クローナル抗体を得、次いで得られた該ポリクローナル
抗体からストレプトコッカス・ミュータンスとの交差反
応性を有するポリクローナル抗体を除去して得たポリク
ローナル抗体である請求項１に記載のポリクローナル抗
体。
【請求項３】免疫動物にストレプトコッカス・ソブリ
ヌスの全菌体または該全菌体より得られる抗原抽出物を
免疫してストレプトコッカス・ソブリヌスに対するポリ
クローナル抗体を得、次いで得られた該ポリクローナル
抗体からストレプトコッカス・ミュータンスとの交差反
応性を有するポリクローナル抗体を除去することを特徴
とする請求項１に記載のポリクローナル抗体の製造方
法。
【請求項４】請求項１又は請求項２に記載のポリクロ
ーナル抗体を含んでなることを特徴とする免疫学的測定
試薬。