JP2001249126A

JP2001249126A - 免疫状態の確認方法

Info

Publication number: JP2001249126A
Application number: JP2000060063A
Authority: JP
Inventors: Yasushi Takamori; 靖高森; Junko Kishi; 惇子岸; Shoichi Takano; 昇一高野
Original assignee: BML Inc; Institut Pasteur de Kyoto
Current assignee: BML Inc; Institut Pasteur de Kyoto
Priority date: 2000-03-06
Filing date: 2000-03-06
Publication date: 2001-09-14

Abstract

(57)【要約】【課題】ナチュラルキラー細胞や細胞傷害性Ｔリンパ球
自体の活性を指標とする、簡便かつ確実な免疫状態を確
認する方法を提供すること。【解決手段】ナチュラルキラー細胞および／または細胞
傷害性Ｔリンパ球における殺細胞活性分子の発現レベル
を検出して、この検出結果と検体提供者の免疫状態を関
連づけて検体提供者の免疫状態を確認する免疫状態の確
認方法を提供することにより、上記の課題を解決し得る
ことを見出した。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、癌や感染症の状態
に関連する免疫状態を確認する方法に関する発明であ
る。

【０００２】

【従来の技術】癌や感染症に対する治療方針の決定のみ
ならず、治療を施した後の予後（治癒するか、慢性化・
悪性化するか）は、非常に重要な問題であり、これら
は、宿主の免疫状態、とりわけ、ナチュラルキラー細胞
（以下、ＮＫ細胞ともいう）・細胞傷害性Ｔリンパ球
（以下、ＣＴＬともいう）やヘルパーＴ細胞等の免疫細
胞の機能が正常であるか否かに大きく左右されると考え
られる。

【０００３】免疫細胞の中でも、ＮＫ細胞やＣＴＬは、
細胞内寄生病原体（ウイルス、クラミジア、結核菌等）
や腫瘍細胞を排除する生体防御機構において中心的役割
を果たしている。

【０００４】よって、これらの感染症や腫瘍に対する治
療方針の決定や予後を予測する上で、患者のＮＫ細胞な
いしＣＴＬの機能が正常範囲にあるか否かに関して正確
な情報を得ることは、特に重要である。

【０００５】現在、このＮＫ細胞ないしＣＴＬの機能に
関する試験として、「細胞傷害活性試験」が行われてい
る。細胞傷害活性試験は、主に、ＮＫ細胞やＣＴＬの標
的細胞に対する細胞傷害活性の指標となるもので、細胞
性免疫能を測定する上では重要な試験である。この細胞
傷害性試験は、例えば、⁵¹Ｃｒでラジオアイソトープ標
識した特定の標的（Ｋ５６２細胞やＭｏｌｔ−４細胞
等）とリンパ球（エフェクター）とを混合し、その結
果、傷害を受けた細胞から遊離してくる⁵¹Ｃｒに由来す
るラジオアイソトープ量を測定することにより行われて
いる。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、細胞傷
害活性試験には、問題点も少なからず認められる。すな
わち、第一に、ラジオアイソトープを用いていることが
挙げられる。つまり、細胞傷害活性試験は、ラジオアイ
ソトープ実験室での作業となり、身体および周辺への放
射能汚染といった安全性における問題と、それに伴う試
薬類の購入ないし使用の制限といった問題が認められ、
必然的にかなりの制約が伴うこととならざるを得ない。

【０００７】第二に、細胞傷害活性試験は、細胞と細胞
の混合系での試験であり、アッセイ間のバラツキが多
く、そのために、試験系を数多く設定する必要がある。
また、同一検体において、リンパ球と標的細胞の混合比
を複数種類設定する必要もある。つまり、細胞傷害性試
験においては、アッセイ数自体を多くせざるを得ないと
いう問題が認められる。

【０００８】第三に、細胞傷害性試験では、細胞に対す
る傷害の程度を指標とする試験で、ＮＫ細胞やＣＴＬ自
体の活性を指標としていないので、この試験により得ら
れる結果が、一体何を意味するのかが、あいまいであ
る。実際に、健常人より癌患者の方が、ＮＫ活性が高値
を示す例も報告されており、疾患との関連性もわかって
いない。

【０００９】本発明が解決しようとする課題は、ＮＫ細
胞やＣＴＬ自体の活性を指標とする、簡便かつ確実な免
疫状態を確認する方法を提供することにある。

【００１０】

【課題を解決するための手段】最近の知見として、ＮＫ
細胞やＣＴＬにより誘導される細胞死においては、種々
の顆粒タンパク質が標的細胞に向かって放出されること
が知られている。例えば、まず、パーフォリンが標的細
胞の膜透過性を高め、次に、グランザイムＢ等の一群の
殺細胞活性分子が標的細胞に入り、細胞死を誘導すると
考えられている。

【００１１】本発明者は、このＮＫ細胞やＣＴＬが、標
的細胞に細胞死を惹き起こすために放出する一連の物
質、すなわち、殺細胞活性分子が、ＮＫ細胞やＣＴＬの
状態を把握するための鍵となるのではないかと考え、鋭
意検討を重ねた。

【００１２】その結果、殺細胞活性分子の発現レベルを
検出して、この検出結果を指標とすることで、ＮＫ細胞
やＣＴＬ自体の活性を把握して、検体提供者の免疫状態
を確認することが可能であることを見出した。

【００１３】すなわち、本発明者は、本願において、Ｎ
Ｋ細胞および／またはＣＴＬにおける殺細胞活性分子の
発現レベルを検出して、この検出結果と検体提供者の免
疫状態を関連づけて検体提供者の免疫状態を確認する、
免疫状態の確認方法（以下、本発明確認方法ともいう）
を提供する。

【００１４】

【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態につい
て説明する。本発明において、検体提供者の免疫状態を
確認するための指標となる殺細胞活性分子は、ＮＫ細胞
やＣＴＬが、癌細胞や感染微生物等の標的細胞を攻撃す
る際に、脱顆粒を起こして放出される分子であり、具体
的には、パーフォリン、グランザイムＢ、グラニュライ
シン等を挙げることができる。

【００１５】パーフォリンは、前述したように、標的細
胞の膜透過性を高める殺細胞活性分子である。パーフォ
リンは、細胞傷害性顆粒に局在する分子量７０万のタン
パク質で、脱顆粒後、標的細胞膜にポアを形成し、その
膜透過性を向上させることが知られている(C.C.L.u, et
al.,Immunol.Today 16,194-201(1995))。パーフォリン
に対する抗体は、現在までに報告されている知見を基
に、常法により調製することが可能であり、市販もされ
ている(Ancell 社等）。

【００１６】グランザイムＢは、細胞傷害性顆粒に局在
する分子量２９万のセリンプロテアーゼで、特定のカス
パーゼを活性化し、細胞死を誘導することが知られてい
る(Darmon,A.J.et al.,Nature,377:446-448(1995))。グ
ランザイムＢに対する抗体は、現在までに報告されてい
る知見を基に、常法により調製することが可能であり、
市販もされている(PHARMACELL 社等）。

【００１７】グラニュライシンは、細胞傷害性顆粒に局
在する分子量１５万のタンパク質で、顆粒内では切断さ
れて、主に分子量９万のタンパク質として存在してい
る。グラニュライシンには、細胞傷害活性と抗菌活性が
認められている(Pena SV.,et al.,J.Immunol.,158,2680
-2688(1995))。グラニュライシンに対する抗体も、現在
までに報告されている知見を基に、常法により調製する
ことが可能である（具体的には、後述する）。

【００１８】本検出方法は、殺細胞活性分子として、単
一種類の殺細胞活性分子のみを選択して行うことも可能
であるが、複数種類の殺細胞活性分子を組み合わせて行
うことも可能である。単一種類の殺細胞活性分子を選択
する場合、グラニュライシンの発現レベルを検出するこ
とで、より的確に、検体提供者の免疫状態を把握するこ
とが可能であると考えられる。パーフォリンの発現レベ
ルが正常でも、グラニュライシンの発現レベルが低下し
ていれば、細胞死が効率的に誘導できず、パーフォリン
の発現レベルが低下している検体提供者は、グラニュラ
イシンの発現レベルも低下している割合が高いからであ
る。

【００１９】しかしながら、個々の殺細胞活性分子が異
なる役割を細胞死において演じていることを考えると、
複数の殺細胞活性分子の発現レベルについて検出するこ
とが、より的確に検体提供者の免疫状態を確認すること
ができると考えられる。特に、細胞膜の透過性を向上さ
せる役割を演じ、いわば、露払い的な役割を行うと考え
られているパーフォリンと、細胞内において細胞死を誘
導すると考えられ得るグラニュライシン等の発現レベル
を双方検出することは、本検出方法の好適な態様の一つ
である。

【００２０】ＮＫ細胞および／またはＣＴＬにおける殺
細胞活性分子の発現レベルの検出は、例えば、検体中の
ＮＫ細胞および／またはＣＴＬを分離して、この分離物
における殺細胞活性分子の発現レベルを検出することに
よって行うことができる。

【００２１】本発明検出方法において用いる検体は、少
なくとも、ＮＫ細胞および／またはＣＴＬが含まれてい
る検体、すなわち、血液検体である。血液検体から、常
法により、ＮＫ細胞および／またはＣＴＬを含む画分を
分離して、これを殺細胞活性分子の発現レベルの検出に
用いることができる。

【００２２】殺細胞活性分子の発現レベルの検出手段
は、特に限定されず、例えば、ＮＫ細胞および／または
ＣＴＬを直接用い得るフローサイトメトリー解析；ウエ
スタンブロット法による解析；可溶化物等を用いるＥＩ
Ａ法やＲＩＡ法によつ解析；ＰＣＲ法等の遺伝子増幅法
を用いた遺伝子解析等を例示することができる。これら
の検出手段の中でも、その簡便性と正確性故に、フロー
サイトメトリー解析を選択することが好適である。

【００２３】かかるフローサイトメトリー解析をする際
には、特定の殺細胞活性分子に対する蛍光分析を試みる
と同時に、特定の殺細胞活性分子に対するマーカーによ
り、特定の殺細胞活性分子を分別することが好ましい。

【００２４】例えば、ＮＫ細胞に対するマーカーとし
て、ＣＤ１６、ＣＤ５６等を、ＣＴＬに対するマーカー
として、ＣＤ３、ＣＤ８等を挙げることができる。フロ
ーサイトメトリー解析をはじめ、殺細胞活性分子の発現
レベルを検出する際には、対象となる殺細胞活性分子に
対する抗体を用いるべきことが多い。このような抗体の
調製は、上述したように、常法により行うことができ
る。

【００２５】典型的には、殺細胞活性分子に対するポリ
クローナル抗体は、選択した殺細胞活性分子の全部また
は一部を免疫抗原として、免疫した動物に由来する免疫
血清から製造することができる。

【００２６】殺細胞活性分子に対するモノクローナル抗
体は、上記のポリクローナル抗体と同様の方法で、免疫
した動物の免疫細胞と動物の骨髄腫細胞とのハイブリド
ーマを作出し、これにより殺細胞活性分子を認識する抗
体を産生するクローンを選択し、このクローンを培養す
ることにより製造することができる。

【００２７】また、免疫される動物も特に限定されるも
のではなく、マウス，ラット等を広く用いることができ
るが、モノクローナル抗体を製造する場合には、細胞融
合に用いる骨髄腫細胞との適合性を考慮して選択するこ
とが望ましい。

【００２８】免疫は一般的方法により、例えば上記免疫
抗原を免疫の対象とする動物に静脈内，皮内，皮下，腹
腔内注射等で投与することにより行うことができる。よ
り具体的には、上記免疫抗原を所望により通常のアジュ
バントと併用して、免疫の対象とする動物に２〜１４日
毎に上記手段により数回投与し、ポリクローナル抗体製
造のための免疫血清またはモノクローナル抗体製造のた
めの免疫細胞、例えば免疫後の脾臓細胞を得ることがで
きる。

【００２９】モノクローナル抗体を製造する場合、この
免疫細胞と細胞融合する他方の親細胞としての骨髄腫細
胞としては、既に公知のもの、例えばＳＰ２／０−Ａｇ
１４，Ｐ３−ＮＳ１−１−Ａｇ４−１，ＭＰＣ11−４
５，６．ＴＧ１．７（以上、マウス由来）；２１０．Ｒ
ＣＹ．Ａｇ１．２．３（ラット由来）；ＳＫＯ−００
７，ＧＭ１５００６ＴＧ−Ａ１２（以上、ヒト由来）等
を用いることができる。

【００３０】上記免疫細胞とこの骨髄腫細胞との細胞融
合は、通常公知の方法、例えばケーラーとミルシュタイ
ンの方法（Kohler,G. and Milstein,C.,Nature,256,495
(1975)）等に準じて行うことができる。

【００３１】より具体的には、この細胞融合は、通常公
知の融合促進剤、例えばポリエチレングリコール（ＰＥ
Ｇ），センダイウイルス（ＨＶＪ）等の存在下におい
て、融合効率を向上させるためにジメチルスルホキシド
等の補助剤を必要に応じて添加した通常の培養培地中で
行い、ハイブリドーマを調製する。

【００３２】所望のハイブリドーマの分離は、通常の選
別用培地、例えばＨＡＴ（ヒポキサンチン，アミノプテ
リンおよびチミジン）培地で培養することにより行うこ
とができる。すなわち、この選別用培地において目的と
するハイブリドーマ以外の細胞が死滅するのに十分な時
間をかけて培養することによりハイブリドーマの分離を
行うことができる。このようにして得られるハイブリド
ーマは、通常の限界希釈法により目的とするモノクロー
ナル抗体の検索および単一クローン化に供することがで
きる。

【００３３】目的とするモノクローナル抗体産生株の検
索は、例えばＥＬＩＳＡ法，プラーク法，スポット法，
凝集反応法，オクタロニー法，ＲＩＡ法等の一般的な検
索法に従い行うことができる。

【００３４】このようにして得られる殺細胞活性分子を
認識するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ
は、通常の培地で継代培養することが可能であり、さら
に液体窒素中で長時間保存することもできる。

【００３５】ハイブリドーマからのモノクローナル抗体
の採取は、ハイブリドーマを常法に従って培養して、そ
の培養上清として得る方法や、ハイブリドーマをこのハ
イブリドーマに適合性が認められる動物に投与して増殖
させ、その腹水として得る方法等を用いることができ
る。

【００３６】上述のようにして得られるポリクローナル
抗体およびモノクローナル抗体は、更に塩析，ゲル濾過
法，アフィニティクロマトグラフィー等の通常の手段に
より精製することができる。

【００３７】このようにして得られるポリクローナル抗
体ないしモノクローナル抗体は、選択した殺細胞活性分
子に特異反応性を有する抗体である。また、かかる殺細
胞活性分子に対するポリクローナル抗体ないしモノクロ
ーナル抗体に、必要に応じて標識処理、すなわち、酵素
標識処理、蛍光標識処理、アイソトープ標識処理等を、
常法に従い行うことができる。

【００３８】

【実施例】以下、本発明を実施例により説明するが、こ
の実施例により、本発明の技術的範囲は限定されない。〔参考例〕グラニュライシンに対するポリクローナル
抗体の作製グラニュライシンの部分アミノ酸配列（２９アミノ酸）
（J.Immunol.,158:2680-2688(1997)）：Arg Thr Gly Ar
g Ser Arg Trp Arg Asp Val Cys Arg Asn PheMet Arg A
rg Tyr Gln Ser Arg Val Thr Gln Gly Leu Val Ala Gly
（Ｎ５−１：配列番号１）の傘貝ヘモシアニンとの結
合体を、ウサギに常法に従って免疫し、抗血清を得た。
得られた抗血清について、硫安沈澱およびプロテインＧ
カラムによる精製を行い、さらに上記の合成ペプチド
（Ｎ５−１）を結合したカラムによるアフィニティーク
ロマトグラフィーによる精製を行い、グラニュライシン
に対するポリクローナル抗体（抗Ｎ５−１抗体）を得
た。

【００３９】〔試験例〕フローサイトメトリー法によ
る免疫状態の確認健常者８名、癌患者８名から、新鮮末梢血を３mLずつ採
取し、そのリンパ球を、リューコセップカラム（グライ
ナー社製）およびセパレートＬ（ムトウ化学社製）を用
いて分離し、リンパ球の表面抗原であるＣＤ３とＣＤ１
６を、それぞれ、Peridinin chlorophyll protein(PerC
P)標識ＣＤ３モノクローナル抗体とFITC標識ＣＤ１６モ
ノクローナル抗体（両モノクローナル抗体共、ファーミ
ンジエン社製）で染色した。

【００４０】次に、各検体提供者のリンパ球を、４％パ
ラフォルムアルデヒド／ＰＢＳ（−）で固定後、０．５
％Ｔｗｅｅｎ２０／ＰＢＳ（−）で膜透過性を高めた
後、グラニュライシンに対しては、上記の抗Ｎ５−１抗
体を１０μg/mLで反応させ（コントロールとしてノーマ
ルラビットIgG を１０μg/mLで反応させた）、次いで、
抗Ｎ５−１抗体が結合したグラニュライシンに、Phycoe
rythrin(ＰＥ) 標識抗ラビット抗体を結合させた。そし
て、その蛍光を、フローサイトメトリーによって、グラ
ニュライシンとして検出した。

【００４１】パーフォリンに対しては、ＰＥ標識抗パー
フォリンモノクローナル抗体（Ancell社製）を反応させ
た（コントロールとしてＰＥ標識ノーマルマウスIgG を
反応させた）。そして、そのＰＥによる蛍光を、フロー
サイトメトリーによって、パーフォリンとして検出し
た。

【００４２】結果を、第１図〜第４図に示す。結果の検討１パーフォリンのみに着目すると、健常人８名には、パー
フォリンの発現レベルの低下は認められなかったが、癌
患者８名中２名に、パーフォリンの発現レベルの低下が
認められた。

【００４３】第１図は、このパーフォリンの発現レベル
の低下が認められた癌患者２名のフローサイトメトリー
の結果を示している〔癌患者１，癌患者２〕。また、比
較のために、健常人２名の結果をピックアップして示し
ている〔健常人１，健常人２〕。

【００４４】第１図では、横軸にＮＫマーカーであるＣ
Ｄ１６についての蛍光強度（ＦＩＴＣによる蛍光）を示
し、縦軸にパーフォリンについての蛍光強度（ＰＥによ
る蛍光）を示した、フローサイトメトリーの結果を示し
ている。

【００４５】健常者１および健常者２では、ＮＫ細胞
（ＦＩＴＣによる蛍光が認められた図中の縦線よりも右
側の群）において、パーフォリンの発現レベルを示すＰ
Ｅの蛍光強度が一定レベルであった。これに対して、癌
患者では、ＮＫ細胞におけるパーフォリンの発現レベル
が低下しており、特に、癌患者２では、この発現レベル
が低下していることが判明した。

【００４６】結果の検討２癌患者８名中、上記の癌患者１・２を除く６名では、パ
ーフォリンの発現レベルの低下が殆ど認められなかっ
た。

【００４７】しかしながら、これらのパーフォリンの発
現レベルの低下が認められなかった癌患者６名につい
て、グラニュライシンの発現レベルの低下を検討したと
ころ、これら６名全員のグラニュライシンの発現レベル
が低下していることがわかった。

【００４８】第２図は、横軸にＮＫマーカーであるＣＤ
１６についての蛍光強度（ＦＩＴＣによる蛍光）を示
し、縦軸にパーフォリン（左側）およびグラニュライシ
ン（右側）についての蛍光強度（共にＰＥによる蛍光）
を示した、フローサイトメトリーの結果を示している。

【００４９】健常者３（健常人８名のうち、健常人１・
２を除く６名から無作為に抽出した）では、ＮＫ細胞
（ＦＩＴＣによる蛍光が認められた図中の縦線よりも右
側の群）においても、ＣＴＬ（前記縦線よりも左側の
群）においても、パーフォリン（上段）およびグラニュ
ライシン（下段）の発現レベルを示すＰＥの蛍光強度が
一定レベルであった。これに対して、癌患者３（癌患者
８名のうち、癌患者１・２を除く６名から無作為に抽出
した）では、パーフォリンの発現レベルは、健常人３と
ほどんど変わらないレベルであったが、グラニュライシ
ンの発現レベルは、明らかに低下していることが明らか
になった。

【００５０】第３図と第４図は、健常人８名のうち、健
常人１・２を除く６名と、癌患者８名のうち、癌患者１
・２を除く６名全員の、パーフォリンの発現レベルとグ
ラニュライシンの発現レベルを図示したものである（第
４図は、第３図の結果を健常人と癌患者についの平均を
求めた結果を示している）。第３図、第４図共、左側の
淡色のグラフ棒がパーフォリンの発現レベルを示し、右
側の白抜きのグラフ棒がグラニュライシンの発現レベル
を示している。また、第３図、第４図共、縦軸は、ＣＤ
１６に対して陽性であるリンパ球（ＮＫ細胞に該当す
る）において、パーフォリンまたはグラニュライシンが
陽性であるものの割合（％）である。

【００５１】第３図と第４図から、健常人は、パーフォ
リン、グラニュライシンの発現レベルは、共に低下が認
められなかったが、癌患者においては、パーフォリンの
発現レベルの低下が認められなくても、グラニュライシ
ンの有意な発現レベルの低下が認められたことがわかる
〔癌患者１・２のグラニュライシンの発現レベルも有意
に低下していた（図示せず）〕。

【００５２】一般に、細胞死には、パーフォリンが働く
ことが不可欠ではある(Science,vol286,1957-1959(199
9))が、パーフォリンだけでは効率良く誘導されず、他
の殺細胞活性分子が働いてはじめて完全に誘導される。
事実、免疫療法等により、ＮＫ細胞やＣＴＬの細胞傷害
のレベルは、細胞傷害活性試験によって良好であると判
断されているにもかかわらず、予後が良好でない癌患者
も少なからず認められるのは、前述した通りである。こ
れは、まさに、細胞傷害試験が、パーフォリンによる細
胞傷害レベルのみを反映していることに起因しているも
のとも考えられる。本検出方法では、ＮＫ細胞やＣＴＬ
におけるパーフォリンの発現レベルのみならず、グラニ
ュライシン等の他の殺細胞活性分子の発現レベルをも、
簡便に確認することができるので、検体提供者の真の免
疫状態を把握し、本検出方法を行った後の治療計画を的
確に立案することが可能となる。

【００５３】すなわち、これらの結果より、本検出方法
により、検体提供者の免疫状態を、簡便かつ的確に確認
することが可能であることが示された。

【００５４】

【発明の効果】本発明により、検体提供者の免疫状態
を、簡便かつ的確に確認することが可能な手段が提供さ
れる。

【００５５】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> BML, INC. <120> Method of Confirming Immune State <130> pbm46 <140> <141> <160> 1 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 29 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Arg Thr Gly Arg Ser Arg Trp Arg Asp Val Cys Arg Asn Phe Met Arg 1 5 10 15 Arg Tyr Gln Ser Arg Val Thr Gln Gly Leu Val Ala Gly 20 25

【図面の簡単な説明】

【図１】横軸にＮＫマーカーであるＣＤ１６についての
蛍光強度を示し、縦軸にパーフォリンについての蛍光強
度を示した、フローサイトメトリーの結果を示す図面で
ある。

【図２】横軸にＮＫマーカーであるＣＤ１６についての
蛍光強度を示し、縦軸にパーフォリンまたはグラニュラ
イシンについての蛍光強度を示した、フローサイトメト
リーの結果を示す図面である。

【図３】健常人とパーフォリンの発現レベルの低下が認
められなかった癌患者に対して、グラニュライシンの発
現レベルについての検討を行った結果を、検体提供者個
々に対して図示した図面である。

【図４】健常人とパーフォリンの発現レベルの低下が認
められなかった癌患者に対して、グラニュライシンの発
現レベルについての検討を行った結果を、検体提供者全
員の結果を総合して検討した図面である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者岸惇子京都府京都市左京区田中門前町103−５財団法人ルイ・パストゥール医学研究センター内 (72)発明者高野昇一埼玉県川越市的場1361番地１株式会社ビー・エム・エル総合研究所内Ｆターム(参考） 2G045 AA02 AA25 AA26 AA40 CA01 CA18 DA36 DA77 DA78 FA37 FB03

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ナチュラルキラー細胞および／または細
胞傷害性Ｔリンパ球における殺細胞活性分子の発現レベ
ルを検出して、この検出結果と検体提供者の免疫状態を
関連づけて検体提供者の免疫状態を確認する、免疫状態
の確認方法。
【請求項２】殺細胞活性分子が、グラニュライシン、
パーフォリンおよびグランザイムＢからなる群から選ば
れる１種または２種以上である、請求項１記載の免疫状
態の確認方法。
【請求項３】殺細胞活性分子が、グラニュライシンで
ある、請求項１記載の免疫状態の確認方法。
【請求項４】ナチュラルキラー細胞および／または細
胞傷害性Ｔリンパ球における殺細胞活性分子の発現レベ
ルを、フローサイトメトリー解析により検出して、この
検出結果と検体提供者の免疫状態を関連づけて検体提供
者の免疫状態を確認する、請求項１〜３のいずれかの請
求項記載の免疫状態の確認方法。