JP2001245697A - 遺伝子発現定量法 - Google Patents
遺伝子発現定量法Info
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- JP2001245697A JP2001245697A JP2000064042A JP2000064042A JP2001245697A JP 2001245697 A JP2001245697 A JP 2001245697A JP 2000064042 A JP2000064042 A JP 2000064042A JP 2000064042 A JP2000064042 A JP 2000064042A JP 2001245697 A JP2001245697 A JP 2001245697A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 特定遺伝子の発現レベルをそのｍＲＮＡのコ
ピー数として高精度に定量する方法を提供する。 【解決手段】 コピー数既知の標的遺伝子ＤＮＡ断片を
含む標準サンプルの連続希釈系列をＰＣＲ増幅し、各Ｐ
ＣＲ産物量が指数関数的に増加するＰＣＲサイクル数
（ｎ）におけるＰＣＲ産物量から検量線を作成し、この
検量線から、サイクル数（ｎ）でＰＣＲ増幅した標的遺
伝子ＤＮＡの発現量をそのコピー数として定量する。
ピー数として高精度に定量する方法を提供する。 【解決手段】 コピー数既知の標的遺伝子ＤＮＡ断片を
含む標準サンプルの連続希釈系列をＰＣＲ増幅し、各Ｐ
ＣＲ産物量が指数関数的に増加するＰＣＲサイクル数
（ｎ）におけるＰＣＲ産物量から検量線を作成し、この
検量線から、サイクル数（ｎ）でＰＣＲ増幅した標的遺
伝子ＤＮＡの発現量をそのコピー数として定量する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この出願の発明は、遺伝子発
現定量方法に関するものである。さらに詳しくは、この
出願の発明は、目的とする遺伝子の発現量を、その遺伝
子ｍＲＮＡ量の絶対値として数値化することのできる方
法に関するものである。
現定量方法に関するものである。さらに詳しくは、この
出願の発明は、目的とする遺伝子の発現量を、その遺伝
子ｍＲＮＡ量の絶対値として数値化することのできる方
法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ヒトの組織や細胞で発現している特定遺
伝子の発現を定量することは、そのヒトの体質や体調、
あるいは疾患の有無や進行状態を把握するうえで有用な
手段である。
伝子の発現を定量することは、そのヒトの体質や体調、
あるいは疾患の有無や進行状態を把握するうえで有用な
手段である。
【０００３】従来、遺伝子発現の定量には、ＥＲＯＤ活
性の測定やノーザンブロッティングによる遺伝子ｍＲＮ
Ａ量の測定が用いられてきた。しかしながら、これらの
方法は発現レベルの低い遺伝子を対象とする場合には感
度が十分ではなく、また大量のサンプルやＲＮＡを必要
とするという問題点を有していた。また、ｍＲＮＡの測
定では、ｍＲＮＡの調製、電気泳動、ブロッティング、
オートラジオグラフィー等の多くの工程が必要であっ
た。
性の測定やノーザンブロッティングによる遺伝子ｍＲＮ
Ａ量の測定が用いられてきた。しかしながら、これらの
方法は発現レベルの低い遺伝子を対象とする場合には感
度が十分ではなく、また大量のサンプルやＲＮＡを必要
とするという問題点を有していた。また、ｍＲＮＡの測
定では、ｍＲＮＡの調製、電気泳動、ブロッティング、
オートラジオグラフィー等の多くの工程が必要であっ
た。
【０００４】これに対して、近年、ＰＣＲ法を用いるこ
とによって発現レベルの低い遺伝子を対象とし、しかも
少量のサンプルから遺伝子発現を定量する方法が提案さ
れている。この方法は、標的遺伝子ｍＲＮＡ量とそのＰ
ＣＲ産物量との間に比例関係が成立する指数関数的増幅
領域での速度論的解析に基づいた遺伝子発現定量法であ
り、比較ＲＴ−ＰＣＲ法と名付けられている。この比較
ＲＴ−ＰＣＲ法では、標的遺伝子が発現している組織由
来のＲＮＡを標準サンプルとし、この標準サンプルＲＮ
Ａの２〜１０倍程度までの連続希釈系列を幾つかの異な
ったサイクル数でＲＴ−ＰＣＲ増幅する。次いで、サイ
クル数に対する各希釈系列毎のＰＣＲ産物量を対数値で
プロットして増幅曲線を作成し、各希釈系列のＰＣＲ産
物量が指数関数的に増加するサイクル数（ｎ）を決定
し、このサイクル数（ｎ）におけるＰＣＲ産物量をサン
プルＲＮＡ量の相対量の対数値に対してプロットして検
量線を作成する。そして、目的とする標的遺伝子のｍＲ
ＮＡをサイクル数（ｎ）でＰＣＲ増幅し、このＰＣＲ産
物量を検量線に当てはめることによって、標的遺伝子の
ｍＲＮＡ量（発現量）の相対値を定量する。さらに、発
現量の検出には、ＰＣＲ産物に蛍光プローブを結合さ
せ、蛍光シグナル量をイメージアナライザー等によって
可視化することにより、リアルタイムで遺伝子発現を定
量する。
とによって発現レベルの低い遺伝子を対象とし、しかも
少量のサンプルから遺伝子発現を定量する方法が提案さ
れている。この方法は、標的遺伝子ｍＲＮＡ量とそのＰ
ＣＲ産物量との間に比例関係が成立する指数関数的増幅
領域での速度論的解析に基づいた遺伝子発現定量法であ
り、比較ＲＴ−ＰＣＲ法と名付けられている。この比較
ＲＴ−ＰＣＲ法では、標的遺伝子が発現している組織由
来のＲＮＡを標準サンプルとし、この標準サンプルＲＮ
Ａの２〜１０倍程度までの連続希釈系列を幾つかの異な
ったサイクル数でＲＴ−ＰＣＲ増幅する。次いで、サイ
クル数に対する各希釈系列毎のＰＣＲ産物量を対数値で
プロットして増幅曲線を作成し、各希釈系列のＰＣＲ産
物量が指数関数的に増加するサイクル数（ｎ）を決定
し、このサイクル数（ｎ）におけるＰＣＲ産物量をサン
プルＲＮＡ量の相対量の対数値に対してプロットして検
量線を作成する。そして、目的とする標的遺伝子のｍＲ
ＮＡをサイクル数（ｎ）でＰＣＲ増幅し、このＰＣＲ産
物量を検量線に当てはめることによって、標的遺伝子の
ｍＲＮＡ量（発現量）の相対値を定量する。さらに、発
現量の検出には、ＰＣＲ産物に蛍光プローブを結合さ
せ、蛍光シグナル量をイメージアナライザー等によって
可視化することにより、リアルタイムで遺伝子発現を定
量する。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、従来の
比較ＲＴ−ＰＣＲ法の場合には、各サンプル間の差を相
対値として表すため、標的遺伝子の発現量も相対値とし
て定量されていた。このため、標的遺伝子の発現をより
高精度に絶対値として定量することのできる方法が望ま
れていた。
比較ＲＴ−ＰＣＲ法の場合には、各サンプル間の差を相
対値として表すため、標的遺伝子の発現量も相対値とし
て定量されていた。このため、標的遺伝子の発現をより
高精度に絶対値として定量することのできる方法が望ま
れていた。
【０００６】この出願の発明は、以上のとおりの事情に
鑑みてなされたものであって、従来の比較ＲＴ−ＰＣＲ
法をさらに改良し、各サンプルの発現量の差を標的遺伝
子ｍＲＮＡのコピー数の差に換算することによって明確
に示し、精度の高い定量を可能とする遺伝子発現定量法
を提供することを課題としている。
鑑みてなされたものであって、従来の比較ＲＴ−ＰＣＲ
法をさらに改良し、各サンプルの発現量の差を標的遺伝
子ｍＲＮＡのコピー数の差に換算することによって明確
に示し、精度の高い定量を可能とする遺伝子発現定量法
を提供することを課題としている。
【０００７】
【課題を解決するための手段】この出願は、前記の課題
を解決する発明として、コピー数既知の標的遺伝子ＤＮ
Ａ断片を含む標準サンプルの連続希釈系列をＰＣＲ増幅
し、各ＰＣＲ産物量が指数関数的に増加するＰＣＲサイ
クル数（ｎ）におけるＰＣＲ産物量から検量線を作成
し、この検量線から、サイクル数（ｎ）でＰＣＲ増幅し
た標的遺伝子ＤＮＡの発現量をそのコピー数として定量
することを特徴とする遺伝子発現定量法を提供する。
を解決する発明として、コピー数既知の標的遺伝子ＤＮ
Ａ断片を含む標準サンプルの連続希釈系列をＰＣＲ増幅
し、各ＰＣＲ産物量が指数関数的に増加するＰＣＲサイ
クル数（ｎ）におけるＰＣＲ産物量から検量線を作成
し、この検量線から、サイクル数（ｎ）でＰＣＲ増幅し
た標的遺伝子ＤＮＡの発現量をそのコピー数として定量
することを特徴とする遺伝子発現定量法を提供する。
【０００８】また、この方法では、ＰＣＲ産物に蛍光プ
ローブ（例えば、TaqManプローブ：PE Applied Biosyst
em社製）を結合させ、ＰＣＲ量を蛍光シグナルの強度と
してリアルタイムに定量することも可能である。
ローブ（例えば、TaqManプローブ：PE Applied Biosyst
em社製）を結合させ、ＰＣＲ量を蛍光シグナルの強度と
してリアルタイムに定量することも可能である。
【０００９】さらに、ＲＮＡ調製時に生じるＲＮＡ加水
分解等によるＲＮＡと純度と完全さのＲＮＡサンプル間
の差、あるいは逆転写効率の差などの変動要因を標準化
するため、発現の変動が理論上ないハウスキーピング遺
伝子（例えば、β−アクチン、ヒポキサンチン−グアニ
ンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、グ
リセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ
（ＧＡＰＤＨ）など）を内部標準として用いて測定値を
補正することもできる。
分解等によるＲＮＡと純度と完全さのＲＮＡサンプル間
の差、あるいは逆転写効率の差などの変動要因を標準化
するため、発現の変動が理論上ないハウスキーピング遺
伝子（例えば、β−アクチン、ヒポキサンチン−グアニ
ンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、グ
リセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ
（ＧＡＰＤＨ）など）を内部標準として用いて測定値を
補正することもできる。
【００１０】以下、具体的測定例を示した、この出願の
発明の実施形態を詳しく説明する。
発明の実施形態を詳しく説明する。
【００１１】
【発明の実施の形態】ダイオキシン類は、シトクロムP4
50-1A1（ＣＹＰ１Ａ１）、P450-1A2（ＣＹＰ１Ａ２）お
よびP450-1B1（ＣＹＰ１Ｂ１）遺伝子の発現を誘導する
ことが知られている。そこで、ダイオキシン（Tetrachl
orodibenzo-p-dioxin：ＴＣＤＤ）で処理した培養細胞
およびヒト血液中のこれらシトクロム遺伝子の発現を、
この発明の方法により定量した。 １．試料 ヒト乳ガン細胞株ＭＣＦ−７（ATCCより購入）を培養デ
ィッシュで80-90％コンフルエントまで培養し、ＴＣＤ
Ｄ（0.1% ＤＭＳＯ溶液）で処理した。0.1% ＤＭＳＯで
処理した細胞をコントロールとした。処理後２４時間の
細胞をシトクロム遺伝子発現の定量に用いた。
50-1A1（ＣＹＰ１Ａ１）、P450-1A2（ＣＹＰ１Ａ２）お
よびP450-1B1（ＣＹＰ１Ｂ１）遺伝子の発現を誘導する
ことが知られている。そこで、ダイオキシン（Tetrachl
orodibenzo-p-dioxin：ＴＣＤＤ）で処理した培養細胞
およびヒト血液中のこれらシトクロム遺伝子の発現を、
この発明の方法により定量した。 １．試料 ヒト乳ガン細胞株ＭＣＦ−７（ATCCより購入）を培養デ
ィッシュで80-90％コンフルエントまで培養し、ＴＣＤ
Ｄ（0.1% ＤＭＳＯ溶液）で処理した。0.1% ＤＭＳＯで
処理した細胞をコントロールとした。処理後２４時間の
細胞をシトクロム遺伝子発現の定量に用いた。
【００１２】また、Ａ群として４６人の焼却場作業者
（男性：２２−５５歳）の血液を採取し、Ｂ群として焼
却場から遠距離にある地域の住人（男性７人、女性４
人：２４−５１歳）の血液を採取した。血液は-80℃で
保存した。 ２．方法 ２−１．標準サンプルの調製 全量50 μlの100 ng ヒト・コントロールＲＮＡ（PE Ap
plied Biosystem、50ng/μl）からヒト・コントロール
ｃＤＮＡを合成した。また、コントロールＲＮＡとＴａ
ｑＭａｎ ＰＣＲプライマーを用いたＲＴ−ＰＣＲによ
り標的遺伝子（ＣＹＰ１Ａ１, ＣＹＰ１Ａ２およびＣＹ
Ｐ１Ｂ１）のＤＮＡ断片を増幅し、ＴＯＰＯ ＴＡクロ
ーニングキットを用いてプラスミドに増幅ＤＮＡ断片を
クローニングした。プラスミドを抽出し、塩基配列の解
析によって標的遺伝子の断片をインサートにもつプラス
ミドを、4.6×106コピー／μlとなるようにヒト・コン
トロールｃＤＮＡに加えた。これをＳＴＮＤ１とした。
ＳＴＮＤ１を101倍希釈したものをＳＴＮＤ２とし、順
次１０倍の希釈率で107倍まで希釈し、ＳＴＮＤ１〜Ｓ
ＴＮＤ８までの連続希釈系列を調製した。 ２−２．被験サンプルの調製 ＭＣＦ−７細胞およびヒト血液からＩＳＯＧＥＮ-ＬＳ
（日本ジーン）およびＳＶ Total ＲＮＡ Isolation Sy
stem（Promega）を用いてtotal ＲＮＡを抽出し、吸光
度を測定して、ＲＮＡ濃度が約10〜20 ng/μlとなるよ
うにＴＥで希釈した。このtotal ＲＮＡ0.5μlに、以下
の組成からなるＲＴ master mixを4.5μl加え、ｃＤＮ
Ａ合成を行った。
（男性：２２−５５歳）の血液を採取し、Ｂ群として焼
却場から遠距離にある地域の住人（男性７人、女性４
人：２４−５１歳）の血液を採取した。血液は-80℃で
保存した。 ２．方法 ２−１．標準サンプルの調製 全量50 μlの100 ng ヒト・コントロールＲＮＡ（PE Ap
plied Biosystem、50ng/μl）からヒト・コントロール
ｃＤＮＡを合成した。また、コントロールＲＮＡとＴａ
ｑＭａｎ ＰＣＲプライマーを用いたＲＴ−ＰＣＲによ
り標的遺伝子（ＣＹＰ１Ａ１, ＣＹＰ１Ａ２およびＣＹ
Ｐ１Ｂ１）のＤＮＡ断片を増幅し、ＴＯＰＯ ＴＡクロ
ーニングキットを用いてプラスミドに増幅ＤＮＡ断片を
クローニングした。プラスミドを抽出し、塩基配列の解
析によって標的遺伝子の断片をインサートにもつプラス
ミドを、4.6×106コピー／μlとなるようにヒト・コン
トロールｃＤＮＡに加えた。これをＳＴＮＤ１とした。
ＳＴＮＤ１を101倍希釈したものをＳＴＮＤ２とし、順
次１０倍の希釈率で107倍まで希釈し、ＳＴＮＤ１〜Ｓ
ＴＮＤ８までの連続希釈系列を調製した。 ２−２．被験サンプルの調製 ＭＣＦ−７細胞およびヒト血液からＩＳＯＧＥＮ-ＬＳ
（日本ジーン）およびＳＶ Total ＲＮＡ Isolation Sy
stem（Promega）を用いてtotal ＲＮＡを抽出し、吸光
度を測定して、ＲＮＡ濃度が約10〜20 ng/μlとなるよ
うにＴＥで希釈した。このtotal ＲＮＡ0.5μlに、以下
の組成からなるＲＴ master mixを4.5μl加え、ｃＤＮ
Ａ合成を行った。
【００１３】ＲＴ master mix： １×ＴaqＭan ＲＴ buffer 5.5 mM MgCl2 500 μＭ dＮＴＰ mix 2.5 μＭ oligo(dT)16 0.4Ｕ／μl RNase Inhibitor 1.25Ｕ／μl MultiScribe Revers Transcriptase(50U/
μl) ２−３．ＰＣＲ反応 各5 μlの標準サンプルＳＴＮＤ１〜ＳＴＮＤ８、およ
び被験サンプルｃＤＮＡに以下の組成からなるＴaqＭan
ＰＣＲ mixを混合し、ＰＣＲ反応を行った。
μl) ２−３．ＰＣＲ反応 各5 μlの標準サンプルＳＴＮＤ１〜ＳＴＮＤ８、およ
び被験サンプルｃＤＮＡに以下の組成からなるＴaqＭan
ＰＣＲ mixを混合し、ＰＣＲ反応を行った。
【００１４】ＴaqＭan ＰＣＲ mix： １×ＴaqＭan ＲＴ buffer 5.5 mM MgCl2 200 μＭ dＮＴＰ 200 nＭ Forward Primer 200 nＭ Reverse Primer 100 nＭ TaqMan Probe 0.025Ｕ／μl AmpliTaq Gold DNA Polymerase ＰＣＲ反応の条件は以下のとおりとした。
【００１５】ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＧＡＰＤ
Ｈ： 95℃／５分；（95℃／15秒；60℃／１分）×５０ ＣＹＰ１Ａ１： 95℃／５分；（95℃／15秒；58℃／１分30秒；72℃／15
秒）×５０ また、各サイクル間のＲＮＡの純度を補正するための内
部標準として、ヒトＧＡＰＤＨ遺伝子特異的なプライマ
ーと両末端に蛍光ラベルしたプローブ（ＴaqＭan prob
e）を用いてＧＡＰＤＨ遺伝子の定量解析を行い、標的
遺伝子の定量結果を補正した。 ２−４．標的遺伝子の定量 各濃度の標準サンプルのＰＣＲ産物量から増幅曲線（図
１上）を作成した。そして、この増幅曲線において各Ｐ
ＣＲ産物量が指数関数的に増加するサイクル数における
ＰＣＲ産物から検量線（図１下）を作成し、この検量線
を用いて標的遺伝子の発現量を内挿法で定量した。な
お、各標的遺伝子間のＲＮＡ純度を補正する内部標準と
して、ヒトＧＡＰＤＨ遺伝子特異的なプライマーとＴaq
Ｍan probeを持ちてＰＣＲを行い、ＧＡＰＤＨ遺伝子の
定量解析を行い、標的遺伝子の定量結果を補正した。 ３．結果 ３−１．ＴＣＤＤ処理ＭＣＦ−７細胞におけるシトクロ
ム遺伝子の発現 図３に示したとおり、ＣＹＰ１Ａ１（図２上）、ＣＹＰ
１Ａ２（図２中）およびＣＹＰ１Ｂ１（図２下）の発現
レベル（ｍＲＮＡコピー数）はＴＣＤＤ濃度に依存して
増加した。 ３−２．ヒト血液のシトクロム遺伝子の発現 ４６人の焼却場作業者（Ａ群）および１１人の対象グル
ープ（Ｂ群）のそれぞれの血液おける各シトクロム遺伝
子の発現レベルは、図３および表１に示したとおりであ
る。表１から明らかなように、焼却場作業者のシトクロ
ム遺伝子発現レベル（ｍＲＮＡコピー数）がコントロー
ル群に比べて有意に増加していることが確認された。
Ｈ： 95℃／５分；（95℃／15秒；60℃／１分）×５０ ＣＹＰ１Ａ１： 95℃／５分；（95℃／15秒；58℃／１分30秒；72℃／15
秒）×５０ また、各サイクル間のＲＮＡの純度を補正するための内
部標準として、ヒトＧＡＰＤＨ遺伝子特異的なプライマ
ーと両末端に蛍光ラベルしたプローブ（ＴaqＭan prob
e）を用いてＧＡＰＤＨ遺伝子の定量解析を行い、標的
遺伝子の定量結果を補正した。 ２−４．標的遺伝子の定量 各濃度の標準サンプルのＰＣＲ産物量から増幅曲線（図
１上）を作成した。そして、この増幅曲線において各Ｐ
ＣＲ産物量が指数関数的に増加するサイクル数における
ＰＣＲ産物から検量線（図１下）を作成し、この検量線
を用いて標的遺伝子の発現量を内挿法で定量した。な
お、各標的遺伝子間のＲＮＡ純度を補正する内部標準と
して、ヒトＧＡＰＤＨ遺伝子特異的なプライマーとＴaq
Ｍan probeを持ちてＰＣＲを行い、ＧＡＰＤＨ遺伝子の
定量解析を行い、標的遺伝子の定量結果を補正した。 ３．結果 ３−１．ＴＣＤＤ処理ＭＣＦ−７細胞におけるシトクロ
ム遺伝子の発現 図３に示したとおり、ＣＹＰ１Ａ１（図２上）、ＣＹＰ
１Ａ２（図２中）およびＣＹＰ１Ｂ１（図２下）の発現
レベル（ｍＲＮＡコピー数）はＴＣＤＤ濃度に依存して
増加した。 ３−２．ヒト血液のシトクロム遺伝子の発現 ４６人の焼却場作業者（Ａ群）および１１人の対象グル
ープ（Ｂ群）のそれぞれの血液おける各シトクロム遺伝
子の発現レベルは、図３および表１に示したとおりであ
る。表１から明らかなように、焼却場作業者のシトクロ
ム遺伝子発現レベル（ｍＲＮＡコピー数）がコントロー
ル群に比べて有意に増加していることが確認された。
【００１６】
【表１】
【００１７】
【発明の効果】以上詳しく説明したとおり、この出願の
発明によって、特定遺伝子の発現レベルをそのｍＲＮＡ
のコピー数として高精度に定量することが可能となる。
発明によって、特定遺伝子の発現レベルをそのｍＲＮＡ
のコピー数として高精度に定量することが可能となる。
【図１】上グラフは標準サンプルのＰＣＲ産物量をプロ
ットした増幅曲線である。下グラフは増幅曲線における
指数関数的増加領域のＰＣＲ産物量をプロットした検量
線である。
ットした増幅曲線である。下グラフは増幅曲線における
指数関数的増加領域のＰＣＲ産物量をプロットした検量
線である。
【図２】ＴＣＤＤ処理ＭＣＦ−７細胞における各シトク
ロム遺伝子の発現レベルを示したグラフである。
ロム遺伝子の発現レベルを示したグラフである。
【図３】各被験者の血液中のシトクロム遺伝子発現レベ
ルを示したグラフである。
ルを示したグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 4B024 AA11 CA04 CA12 DA03 EA04 HA11 4B063 QA01 QA18 QA19 QQ42 QQ52 QR56 QR62 QS25 QX02
Claims (1)
- 【請求項１】 コピー数既知の標的遺伝子ＤＮＡ断片を
含む標準サンプルの連続希釈系列をＰＣＲ増幅し、各Ｐ
ＣＲ産物量が指数関数的に増加するＰＣＲサイクル数
（ｎ）におけるＰＣＲ産物量から検量線を作成し、この
検量線から、サイクル数（ｎ）でＰＣＲ増幅した標的遺
伝子ＤＮＡの発現量をそのコピー数として定量すること
を特徴とする遺伝子発現定量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000064042A JP2001245697A (ja) | 2000-03-08 | 2000-03-08 | 遺伝子発現定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000064042A JP2001245697A (ja) | 2000-03-08 | 2000-03-08 | 遺伝子発現定量法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001245697A true JP2001245697A (ja) | 2001-09-11 |
Family
ID=18583810
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000064042A Pending JP2001245697A (ja) | 2000-03-08 | 2000-03-08 | 遺伝子発現定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2001245697A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| US7698069B2 (en) | 2004-09-01 | 2010-04-13 | Hitachi Software Engineering Co., Ltd. | Method for designing primer for realtime PCR |
| JP2015035977A (ja) * | 2013-08-13 | 2015-02-23 | 株式会社日清製粉グループ本社 | 核酸の損傷の程度の評価方法、食品の加工の程度の評価方法、及び核酸の定量方法 |
| KR101515861B1 (ko) * | 2013-10-18 | 2015-05-04 | 경희대학교 산학협력단 | 배추 속 식물의 외래 유전자 도입 수 확인을 위한 중합효소 연쇄반응 분석 방법 |
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-
2000
- 2000-03-08 JP JP2000064042A patent/JP2001245697A/ja active Pending
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