JP2001218576A - 固体培地及びその製造方法 - Google Patents
固体培地及びその製造方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 短時間での吸水量及び吸水速度に優れ、大量
の試料を塗抹することが可能で、迅速で正確な細菌数の
測定試験に最適な固体培地、及びその製造方法を提供す
る。 【解決手段】 固体培地の各成分を所定量より多い溶解
水に溶解し、固化し、のち固化した培地を乾燥し、溶解
水を除去し、溶解水の量を所定量の７０乃至２００％
（体積）に調整することを特徴とする固体培地の製造方
法、及び前記製造方法により製造される固体培地。
の試料を塗抹することが可能で、迅速で正確な細菌数の
測定試験に最適な固体培地、及びその製造方法を提供す
る。 【解決手段】 固体培地の各成分を所定量より多い溶解
水に溶解し、固化し、のち固化した培地を乾燥し、溶解
水を除去し、溶解水の量を所定量の７０乃至２００％
（体積）に調整することを特徴とする固体培地の製造方
法、及び前記製造方法により製造される固体培地。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、各種微生物の増
殖、試験等に使用する固体培地及びその製造方法に関す
る。更に詳しくは、本発明は、固体培地の各成分を所定
量より多い溶解水に溶解し、固化し、のち固化した培地
を乾燥し、溶解水を除去し、溶解水の量を所定量の７０
乃至２００％（体積。以下、特に断りのない限り同
じ。）に調整することを特徴とする固体培地の製造方
法、及びその製造方法により製造される固体培地に関す
るものである。本明細書において、固体培地とは、寒天
等のゲル化剤で固化させた平板、斜面培地等の使用時に
固体状の培地を意味する。
殖、試験等に使用する固体培地及びその製造方法に関す
る。更に詳しくは、本発明は、固体培地の各成分を所定
量より多い溶解水に溶解し、固化し、のち固化した培地
を乾燥し、溶解水を除去し、溶解水の量を所定量の７０
乃至２００％（体積。以下、特に断りのない限り同
じ。）に調整することを特徴とする固体培地の製造方
法、及びその製造方法により製造される固体培地に関す
るものである。本明細書において、固体培地とは、寒天
等のゲル化剤で固化させた平板、斜面培地等の使用時に
固体状の培地を意味する。
【０００２】
【従来の技術】従来、固体培地を乾燥させた例として、
プラスチック製のシャーレに注入して固化させたものを
凍結真空乾燥した乾燥固体培地が知られている（特公昭
６０−１９９８８号公報。以下、従来技術１と記載す
る。）。また、寒天等のゲル化剤を含み、無菌水を添加
すると容易にほぼフィルム化前の培地に復原されるフィ
ルム状の乾燥固体培地が知られている（特開平６−３１
１８８０号公報。以下、従来技術２と記載する。）。し
かしながら、これらの従来技術には、次に記載するとお
りの問題点があった。
プラスチック製のシャーレに注入して固化させたものを
凍結真空乾燥した乾燥固体培地が知られている（特公昭
６０−１９９８８号公報。以下、従来技術１と記載す
る。）。また、寒天等のゲル化剤を含み、無菌水を添加
すると容易にほぼフィルム化前の培地に復原されるフィ
ルム状の乾燥固体培地が知られている（特開平６−３１
１８８０号公報。以下、従来技術２と記載する。）。し
かしながら、これらの従来技術には、次に記載するとお
りの問題点があった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】前記従来技術１及び従
来技術２は、培地の保存性を向上させるために適用され
るもので、最終的な固体培地組成中の溶解水の量が５０
％以下となるまで、乾燥されていることから、使用時の
培地の完全な復元に約３時間にも及ぶ長い時間を必要と
するという問題点を有していた。
来技術２は、培地の保存性を向上させるために適用され
るもので、最終的な固体培地組成中の溶解水の量が５０
％以下となるまで、乾燥されていることから、使用時の
培地の完全な復元に約３時間にも及ぶ長い時間を必要と
するという問題点を有していた。
【０００４】また、前記従来技術においては、固体培地
の各成分を所定量の溶解水に溶解し、固化し、のち固化
した培地を乾燥し、溶解水を除去することにより、乾燥
固体培地を製造していた。前記従来技術により得られた
乾燥固体培地は、最終的な固体培地組成中の水分が同一
の場合には、固体培地の各成分を所定量より多い溶解水
に溶解して調製する本発明の製造方法により得られた固
体培地と比較して、１乃至１０分間という比較的短時間
での吸水量及び吸水速度が劣るという問題点を有してい
た。
の各成分を所定量の溶解水に溶解し、固化し、のち固化
した培地を乾燥し、溶解水を除去することにより、乾燥
固体培地を製造していた。前記従来技術により得られた
乾燥固体培地は、最終的な固体培地組成中の水分が同一
の場合には、固体培地の各成分を所定量より多い溶解水
に溶解して調製する本発明の製造方法により得られた固
体培地と比較して、１乃至１０分間という比較的短時間
での吸水量及び吸水速度が劣るという問題点を有してい
た。
【０００５】更に、前記従来技術により得られた乾燥固
体培地を１乃至１０分間という比較的短時間で復元さ
せ、細菌検査に使用した場合、後記する試験例の結果か
ら明らかなとおり、培地が十分に復元していないため、
食品の細菌検査等において重要な菌種であるスタフィロ
コッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus ）ＡＴ
ＣＣ ６５３８Ｐ、バシラス・ステアロサーモフィラス
・バル・カリドラクテイス（Bacillus stearothermophi
lus var. calidolactis ）ＮＩＺＯ Ｃ９５３等の生育
が阻害され、正確な総菌数を計測できないという問題点
を有していた。
体培地を１乃至１０分間という比較的短時間で復元さ
せ、細菌検査に使用した場合、後記する試験例の結果か
ら明らかなとおり、培地が十分に復元していないため、
食品の細菌検査等において重要な菌種であるスタフィロ
コッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus ）ＡＴ
ＣＣ ６５３８Ｐ、バシラス・ステアロサーモフィラス
・バル・カリドラクテイス（Bacillus stearothermophi
lus var. calidolactis ）ＮＩＺＯ Ｃ９５３等の生育
が阻害され、正確な総菌数を計測できないという問題点
を有していた。
【０００６】即ち、従来の乾燥固体培地は、復元のため
に長時間を要し、迅速で正確な細菌数の測定試験には適
さないという問題点を有していた。本発明者らは、前記
従来技術に鑑みて、鋭意検討した結果、乾燥固体培地と
比較して、短時間での吸水量及び吸水速度に優れ、大量
の試料を塗抹することが可能であり、迅速で正確な細菌
数の測定試験に最適な固体培地が、固体培地の各成分を
所定量より多い溶解水に溶解し、固化し、のち固化した
培地を乾燥し、溶解水を除去し、溶解水の量を所定量の
７０乃至２００％に調整することにより製造できること
を見い出し、本発明を完成した。
に長時間を要し、迅速で正確な細菌数の測定試験には適
さないという問題点を有していた。本発明者らは、前記
従来技術に鑑みて、鋭意検討した結果、乾燥固体培地と
比較して、短時間での吸水量及び吸水速度に優れ、大量
の試料を塗抹することが可能であり、迅速で正確な細菌
数の測定試験に最適な固体培地が、固体培地の各成分を
所定量より多い溶解水に溶解し、固化し、のち固化した
培地を乾燥し、溶解水を除去し、溶解水の量を所定量の
７０乃至２００％に調整することにより製造できること
を見い出し、本発明を完成した。
【０００７】本発明の目的は、短時間での吸水量及び吸
水速度に優れ、大量の試料を塗抹することが可能で、迅
速で正確な細菌数の測定試験に最適な固体培地、及びそ
の製造方法を提供することである。
水速度に優れ、大量の試料を塗抹することが可能で、迅
速で正確な細菌数の測定試験に最適な固体培地、及びそ
の製造方法を提供することである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】前記課題を解決する本発
明は、固体培地の各成分を所定量より多い溶解水に溶解
し、固化し、のち固化した培地を乾燥し、溶解水を除去
し、溶解水の量を所定量の７０乃至２００％（体積）に
調整することを特徴とする固体培地の製造方法、及び前
記方法により製造される固体培地である。
明は、固体培地の各成分を所定量より多い溶解水に溶解
し、固化し、のち固化した培地を乾燥し、溶解水を除去
し、溶解水の量を所定量の７０乃至２００％（体積）に
調整することを特徴とする固体培地の製造方法、及び前
記方法により製造される固体培地である。
【０００９】
【発明の実施の形態】次に、本発明について詳細に説明
する。本発明の固体培地とは、前記定義したとおり、寒
天等のゲル化剤で固化させた平板、斜面培地等の使用時
に固体状の培地（培養基）である。
する。本発明の固体培地とは、前記定義したとおり、寒
天等のゲル化剤で固化させた平板、斜面培地等の使用時
に固体状の培地（培養基）である。
【００１０】培地は、細菌、酵母、又はカビ等の微生物
を生育、繁殖せしめる栄養物であり、また、その生育の
場でもある。通常培地は、培地成分として、微生物の生
育に必要な成分であるグルコース、ショ糖等の糖類、ア
ミノ酸、ペプトン、硝酸塩、アンモニウム塩等の窒素
源、カリウム、リン、マグネシウム等の無機塩類、ビタ
ミン等の生育因子を含有している。また培地は、単に培
地成分を溶解水に溶解させた液体培地と液体培地にゲル
化剤を添加して固化させた固体培地に大別されている。
ゲル化剤としては、寒天、ゼラチン、ジェランガム、カ
ラギーナン等を例示することができる。
を生育、繁殖せしめる栄養物であり、また、その生育の
場でもある。通常培地は、培地成分として、微生物の生
育に必要な成分であるグルコース、ショ糖等の糖類、ア
ミノ酸、ペプトン、硝酸塩、アンモニウム塩等の窒素
源、カリウム、リン、マグネシウム等の無機塩類、ビタ
ミン等の生育因子を含有している。また培地は、単に培
地成分を溶解水に溶解させた液体培地と液体培地にゲル
化剤を添加して固化させた固体培地に大別されている。
ゲル化剤としては、寒天、ゼラチン、ジェランガム、カ
ラギーナン等を例示することができる。
【００１１】本発明の固体培地を具体的に例示するなら
ば、日本国食品衛生法、日本国薬局方等の微生物試験法
等に規定されている普通寒天培地、標準寒天培地、デオ
キシコレート寒天培地、ＥＭＢ培地、遠藤培地、ＢＣＰ
加プレートカウント寒天培地、卵黄加マンニット食塩寒
天培地、ＥＴＧＰＡ培地、ポリデキストロース寒天培地
等［日本薬学会編、「乳製品試験法・注解」、金原出版
株式会社、第１１１乃至１２５頁、平成２年４月１０
日。以下、文献１と記載する。］である。
ば、日本国食品衛生法、日本国薬局方等の微生物試験法
等に規定されている普通寒天培地、標準寒天培地、デオ
キシコレート寒天培地、ＥＭＢ培地、遠藤培地、ＢＣＰ
加プレートカウント寒天培地、卵黄加マンニット食塩寒
天培地、ＥＴＧＰＡ培地、ポリデキストロース寒天培地
等［日本薬学会編、「乳製品試験法・注解」、金原出版
株式会社、第１１１乃至１２５頁、平成２年４月１０
日。以下、文献１と記載する。］である。
【００１２】次に、本発明の固体培地の製造方法を簡単
に説明する。固体培地組成として文献等に記載されてい
る所定量の各培地成分を、所定量より多い溶解水に溶解
し、必要に応じてｐＨを調整する。前記溶解液に、ゲル
化剤を添加し、加熱溶解し、滅菌し、シャーレ等の容器
に分注し、固化し、のち固化した培地を乾燥し、溶解水
を除去し、固体培地組成として文献等に記載されている
溶解水量（以下、溶解水の所定量と記載する。）を１０
０％とした場合、最終的な固体培地組成中の溶解水の量
を溶解水の所定量の７０乃至２００％に調整する。溶解
水の量は、溶解水の所定量を１００％として、この量よ
り５乃至１５０％多く配合することが望ましい。
に説明する。固体培地組成として文献等に記載されてい
る所定量の各培地成分を、所定量より多い溶解水に溶解
し、必要に応じてｐＨを調整する。前記溶解液に、ゲル
化剤を添加し、加熱溶解し、滅菌し、シャーレ等の容器
に分注し、固化し、のち固化した培地を乾燥し、溶解水
を除去し、固体培地組成として文献等に記載されている
溶解水量（以下、溶解水の所定量と記載する。）を１０
０％とした場合、最終的な固体培地組成中の溶解水の量
を溶解水の所定量の７０乃至２００％に調整する。溶解
水の量は、溶解水の所定量を１００％として、この量よ
り５乃至１５０％多く配合することが望ましい。
【００１３】ゲル化剤として寒天を使用した場合には、
寒天の添加濃度は、溶解水の所定量を１００％として、
その１．０乃至３％（重量）が望ましい。また、加熱溶
解は、寒天を十分に溶解するので、１００℃以上が望ま
しく、１２１℃で１５分以上加熱すれば、溶解と共に滅
菌することもできる。滅菌は、常法により、高圧蒸気滅
菌法等により実施することができる。容器としてシャー
レを使用した場合には、乾燥除去後の固体培地の量が１
０乃至３０ｍｌの範囲の量を分注することが望ましい。
乾燥除去方法としては、減圧乾燥法、真空乾燥法、温風
乾燥法、赤外線乾燥法、高周波乾燥法等を例示すること
ができる。
寒天の添加濃度は、溶解水の所定量を１００％として、
その１．０乃至３％（重量）が望ましい。また、加熱溶
解は、寒天を十分に溶解するので、１００℃以上が望ま
しく、１２１℃で１５分以上加熱すれば、溶解と共に滅
菌することもできる。滅菌は、常法により、高圧蒸気滅
菌法等により実施することができる。容器としてシャー
レを使用した場合には、乾燥除去後の固体培地の量が１
０乃至３０ｍｌの範囲の量を分注することが望ましい。
乾燥除去方法としては、減圧乾燥法、真空乾燥法、温風
乾燥法、赤外線乾燥法、高周波乾燥法等を例示すること
ができる。
【００１４】尚、後記する試験例の結果からも明らかな
とおり、最終的な固体培地組成中の溶解水の量を、溶解
水の所定量を１００％として、溶解水の所定量の７０％
未満とした場合、スタフィロコッカス・アウレウス（St
aphylococcus aureus ）ＡＴＣＣ ６５３８Ｐ、バシラ
ス・ステアロサーモフィラス・バル・カリドラクテイス
（Bacillus stearothermophilus var. calidolactis ）
ＮＩＺＯ Ｃ９５３等の生育が阻害され、溶解水の所定
量の２００％を超えた場合、培地表面が著しく軟弱とな
り、試料を塗抹することが困難となるので、最終的な固
体培地組成中の溶解水の量を溶解水の所定量の７０乃至
２００％に調整することが必要である。本発明の固体培
地の製造方法の理解を一層容易とするため、前記文献１
に記載の標準寒天培地の製造方法を例として説明する。
とおり、最終的な固体培地組成中の溶解水の量を、溶解
水の所定量を１００％として、溶解水の所定量の７０％
未満とした場合、スタフィロコッカス・アウレウス（St
aphylococcus aureus ）ＡＴＣＣ ６５３８Ｐ、バシラ
ス・ステアロサーモフィラス・バル・カリドラクテイス
（Bacillus stearothermophilus var. calidolactis ）
ＮＩＺＯ Ｃ９５３等の生育が阻害され、溶解水の所定
量の２００％を超えた場合、培地表面が著しく軟弱とな
り、試料を塗抹することが困難となるので、最終的な固
体培地組成中の溶解水の量を溶解水の所定量の７０乃至
２００％に調整することが必要である。本発明の固体培
地の製造方法の理解を一層容易とするため、前記文献１
に記載の標準寒天培地の製造方法を例として説明する。
【００１５】即ち、標準寒天培地の固体培地組成は文献
１に記載されるとおり、酵母エキス２．５ｇ、ペプトン
５ｇ、グルコース１ｇ、寒天１５ｇ、精製水、いわゆる
溶解水１０００ｍｌが各成分の各所定量である。よっ
て、酵母エキス２．５ｇ、ペプトン５ｇ、及びグルコー
ス１ｇの各培地成分を、溶解水の所定量（１０００ｍ
ｌ）を１００％として、この量より５乃至１５０％（５
０乃至１５００ｍｌ）多く配合した溶解水に溶解し、約
１０５０ｍｌ乃至２５００ｍｌの溶解液を得る。前記溶
解液のｐＨを６．８乃至７．２に調整し、寒天１５ｇを
添加し、高圧蒸気滅菌法により１２１℃で１５分加熱
し、溶解と共に滅菌する。
１に記載されるとおり、酵母エキス２．５ｇ、ペプトン
５ｇ、グルコース１ｇ、寒天１５ｇ、精製水、いわゆる
溶解水１０００ｍｌが各成分の各所定量である。よっ
て、酵母エキス２．５ｇ、ペプトン５ｇ、及びグルコー
ス１ｇの各培地成分を、溶解水の所定量（１０００ｍ
ｌ）を１００％として、この量より５乃至１５０％（５
０乃至１５００ｍｌ）多く配合した溶解水に溶解し、約
１０５０ｍｌ乃至２５００ｍｌの溶解液を得る。前記溶
解液のｐＨを６．８乃至７．２に調整し、寒天１５ｇを
添加し、高圧蒸気滅菌法により１２１℃で１５分加熱
し、溶解と共に滅菌する。
【００１６】滅菌処理済みの培地を無菌的にシャーレに
１枚当たり３０ｍｌ分注し、冷却固化し、のち固化した
培地を乾燥機（LABCONCO社製）を使用して１０3Ｐａの
圧力で減圧乾燥法により乾燥し、溶解水を除去する。前
記乾燥除去により、溶解水の所定量（１０００ｍｌ）を
１００％として、最終的な固体培地組成中の溶解水の量
を溶解水の所定量の７０乃至２００％（全培地当たり７
００乃至２０００ｍｌ）に調整する。前記方法により製
造された固体培地は、短時間での吸水量及び吸水速度に
優れ、大量の試料を塗抹することが可能で、迅速で正確
な細菌数の測定試験に最適な固体培地である。
１枚当たり３０ｍｌ分注し、冷却固化し、のち固化した
培地を乾燥機（LABCONCO社製）を使用して１０3Ｐａの
圧力で減圧乾燥法により乾燥し、溶解水を除去する。前
記乾燥除去により、溶解水の所定量（１０００ｍｌ）を
１００％として、最終的な固体培地組成中の溶解水の量
を溶解水の所定量の７０乃至２００％（全培地当たり７
００乃至２０００ｍｌ）に調整する。前記方法により製
造された固体培地は、短時間での吸水量及び吸水速度に
優れ、大量の試料を塗抹することが可能で、迅速で正確
な細菌数の測定試験に最適な固体培地である。
【００１７】次に試験例を示して本発明を詳細に説明す
る。
る。
【００１８】試験例１ この試験は、細菌生育試験の結果を指標として、従来技
術と本発明を比較するために行った。
術と本発明を比較するために行った。
【００１９】（１）試料の調製 次に示す３種類の試料をそれぞれ５回反復して調製し
た。 試料１：本発明の実施例１と同一の方法により製造した
固体培地 試料２：培地の種類を標準寒天培地に変更し、培地の分
注量及び乾燥固体培地の復元水（滅菌水）の量をそれぞ
れ１５ｍｌとし、乾燥固体培地の復元時間を５分間と
し、余分な復元水（遊離水）を傾斜して放棄したことを
除き、従来技術１の実施例１と同一の方法により製造し
た固体培地 試料３：培地の種類を標準寒天培地に変更し、培地の分
注量及び乾燥固体培地の復元水（滅菌水）の量をそれぞ
れ１５ｍｌとし、乾燥固体培地の復元時間を５分間と
し、余分な復元水（遊離水）を傾斜して放棄したことを
除き、従来技術２の実施例１と同一の方法により製造し
た固体培地
た。 試料１：本発明の実施例１と同一の方法により製造した
固体培地 試料２：培地の種類を標準寒天培地に変更し、培地の分
注量及び乾燥固体培地の復元水（滅菌水）の量をそれぞ
れ１５ｍｌとし、乾燥固体培地の復元時間を５分間と
し、余分な復元水（遊離水）を傾斜して放棄したことを
除き、従来技術１の実施例１と同一の方法により製造し
た固体培地 試料３：培地の種類を標準寒天培地に変更し、培地の分
注量及び乾燥固体培地の復元水（滅菌水）の量をそれぞ
れ１５ｍｌとし、乾燥固体培地の復元時間を５分間と
し、余分な復元水（遊離水）を傾斜して放棄したことを
除き、従来技術２の実施例１と同一の方法により製造し
た固体培地
【００２０】（２）試験方法 各試料の細菌生育を、次の試験方法により試験した。試
験菌株として、微生物寄託機関であるアメリカン・タイ
プ・カルチャー・コレクションより分譲されたスタフィ
ロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus ）Ａ
ＴＣＣ ６５３８Ｐ、及びオランダ酪農研究所（ＮＩＺ
Ｏ）より分譲されたバシラス・ステアロサーモフィラス
・バル・カリドラクテイス（Bacillusstearothermophil
us var. calidolactis ）ＮＩＺＯ Ｃ９５３を使用し
た。
験菌株として、微生物寄託機関であるアメリカン・タイ
プ・カルチャー・コレクションより分譲されたスタフィ
ロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus ）Ａ
ＴＣＣ ６５３８Ｐ、及びオランダ酪農研究所（ＮＩＺ
Ｏ）より分譲されたバシラス・ステアロサーモフィラス
・バル・カリドラクテイス（Bacillusstearothermophil
us var. calidolactis ）ＮＩＺＯ Ｃ９５３を使用し
た。
【００２１】標準寒天培地の固体培地組成に記載の所定
量の溶解水を使用し、即ち、固体培地組成に記載の溶解
水量をそのまま使用し、乾燥工程を付加することなく、
従来どおり、常法で調製した標準寒天培地の１平板に
０．１ｍｌ塗抹し、３７℃で４８時間培養した場合に、
前記試験菌株の１００個の集落が得られる各試験菌株の
希釈液を調製した。
量の溶解水を使用し、即ち、固体培地組成に記載の溶解
水量をそのまま使用し、乾燥工程を付加することなく、
従来どおり、常法で調製した標準寒天培地の１平板に
０．１ｍｌ塗抹し、３７℃で４８時間培養した場合に、
前記試験菌株の１００個の集落が得られる各試験菌株の
希釈液を調製した。
【００２２】尚、標準寒天培地の固体培地組成は、酵母
エキス２．５ｇ、ペプトン５ｇ、グルコース１ｇ、寒天
１５ｇ、精製水、いわゆる溶解水１０００ｍｌである。
各試料の１平板に、前記試験菌株の希釈液を０．１ｍｌ
塗抹し、３７℃で４８時間培養し、集落数を肉眼で観察
した。尚、試験は５回行い、集落数の平均値を算出し
た。
エキス２．５ｇ、ペプトン５ｇ、グルコース１ｇ、寒天
１５ｇ、精製水、いわゆる溶解水１０００ｍｌである。
各試料の１平板に、前記試験菌株の希釈液を０．１ｍｌ
塗抹し、３７℃で４８時間培養し、集落数を肉眼で観察
した。尚、試験は５回行い、集落数の平均値を算出し
た。
【００２３】（３）試験結果 この試験の結果は、表１に示すとおりである。表１から
明らかなとおり、従来技術の試料２及び試料３に比較し
て、本発明の試料１が、食品の細菌検査等において重要
な菌であるスタフィロコッカス・アウレウス（Staphylo
coccus aureus）ＡＴＣＣ ６５３８Ｐ、及びバシラス
・ステアロサーモフィラス・バル・カリドラクテイス
（Bacillus stearothermophilus var. calidolactis ）
ＮＩＺＯＣ９５３が検出され、迅速に正確な総菌数の計
測ができる点で優れていることが判明した。
明らかなとおり、従来技術の試料２及び試料３に比較し
て、本発明の試料１が、食品の細菌検査等において重要
な菌であるスタフィロコッカス・アウレウス（Staphylo
coccus aureus）ＡＴＣＣ ６５３８Ｐ、及びバシラス
・ステアロサーモフィラス・バル・カリドラクテイス
（Bacillus stearothermophilus var. calidolactis ）
ＮＩＺＯＣ９５３が検出され、迅速に正確な総菌数の計
測ができる点で優れていることが判明した。
【００２４】以上の結果から、従来技術の乾燥固体培地
は、復元のために長時間を必要とし、迅速で正確な細菌
数の測定試験には適さないということが判明した。尚、
培地の種類、培地の分注量及び乾燥固体培地の復元水
（滅菌水）の量、並びに、乾燥固体培地の復元時間を１
乃至１０分間の範囲で適宜変更して試験したが、ほぼ同
様の結果が得られた。
は、復元のために長時間を必要とし、迅速で正確な細菌
数の測定試験には適さないということが判明した。尚、
培地の種類、培地の分注量及び乾燥固体培地の復元水
（滅菌水）の量、並びに、乾燥固体培地の復元時間を１
乃至１０分間の範囲で適宜変更して試験したが、ほぼ同
様の結果が得られた。
【００２５】
【表１】
【００２６】試験例２ この試験は、細菌生育試験の結果を指標として、最終的
な固体培地組成中の溶解水の量を調べるために行った。
な固体培地組成中の溶解水の量を調べるために行った。
【００２７】（１）試料の調製 次に示す４種類の試料をそれぞれ５回反復して調製し
た。 試料４：最終的な固体培地組成中の溶解水の量を６０％
としたことを除き、本発明の実施例１と同様の方法によ
り製造した固体培地 試料５：最終的な固体培地組成中の溶解水の量を７０％
としたことを除き、本発明の実施例１と同様の方法によ
り製造した固体培地 試料６：最終的な固体培地組成中の溶解水の量を２００
％としたことを除き、本発明の実施例１と同様の方法に
より製造した固体培地 試料７：最終的な固体培地組成中の溶解水の量を２１０
％としたことを除き、本発明の実施例１と同様の方法に
より製造した固体培地
た。 試料４：最終的な固体培地組成中の溶解水の量を６０％
としたことを除き、本発明の実施例１と同様の方法によ
り製造した固体培地 試料５：最終的な固体培地組成中の溶解水の量を７０％
としたことを除き、本発明の実施例１と同様の方法によ
り製造した固体培地 試料６：最終的な固体培地組成中の溶解水の量を２００
％としたことを除き、本発明の実施例１と同様の方法に
より製造した固体培地 試料７：最終的な固体培地組成中の溶解水の量を２１０
％としたことを除き、本発明の実施例１と同様の方法に
より製造した固体培地
【００２８】（２）試験方法 各試料の細菌生育を、前記試験例１の試験方法と同一の
方法により試験した。
方法により試験した。
【００２９】（３）試験結果 この試験の結果は、表２に示すとおりである。表２から
明らかなとおり、最終的な固体培地組成中の溶解水の量
を、溶解水の所定量を１００％として、溶解水の所定量
の７０％未満とした場合、スタフィロコッカス・アウレ
ウス（Staphylococcus aureus ）ＡＴＣＣ ６５３８
Ｐ、バシラス・ステアロサーモフィラス・バル・カリド
ラクテイス（Bacillus stearothermophilus var. calid
olactis ）ＮＩＺＯ Ｃ９５３等の生育が阻害され、溶
解水の所定量の２００％を超えた場合、培地表面が著し
く軟弱となり、試料を塗抹することが困難となることか
ら、細菌数が測定不可能となり、正確な総菌数の計測の
ためには、最終的な固体培地組成中の溶解水の量を溶解
水の所定量の７０乃至２００％に調整することが必要で
あることが判明した。
明らかなとおり、最終的な固体培地組成中の溶解水の量
を、溶解水の所定量を１００％として、溶解水の所定量
の７０％未満とした場合、スタフィロコッカス・アウレ
ウス（Staphylococcus aureus ）ＡＴＣＣ ６５３８
Ｐ、バシラス・ステアロサーモフィラス・バル・カリド
ラクテイス（Bacillus stearothermophilus var. calid
olactis ）ＮＩＺＯ Ｃ９５３等の生育が阻害され、溶
解水の所定量の２００％を超えた場合、培地表面が著し
く軟弱となり、試料を塗抹することが困難となることか
ら、細菌数が測定不可能となり、正確な総菌数の計測の
ためには、最終的な固体培地組成中の溶解水の量を溶解
水の所定量の７０乃至２００％に調整することが必要で
あることが判明した。
【００３０】尚、培地の種類を適宜変更し、及び溶解水
の所定量を１００％として、この量より溶解水の量を５
乃至１５０％の範囲で多く配合して試験したが、ほぼ同
様の結果が得られた。
の所定量を１００％として、この量より溶解水の量を５
乃至１５０％の範囲で多く配合して試験したが、ほぼ同
様の結果が得られた。
【００３１】
【表２】
【００３２】次に実施例を示して本発明を更に詳細に説
明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものでは
ない。
明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものでは
ない。
【００３３】
【実施例】実施例１ 酵母エキス（オリエンタル酵母社製）２．５ｇ、ペプト
ン（ディフコ社製）５ｇ、及びグルコース（和光純薬社
製）１ｇを、固体培地組成に記載の溶解水（精製水）の
所定量（１０００ｍｌ）を１００％として、この量より
溶解水（精製水）の量を１００％（１０００ｍｌ）多く
配合した溶解水２０００ｍｌに溶解し、約２０００ｍｌ
の溶解液を得る。前記溶解液のｐＨを、０．１ｍｏｌ／
ｌ水酸化ナトリウム溶液を使用して、７．２に調整し、
寒天（伊那食品工業社製）１５ｇを添加し、オートクレ
ーブ（岩楯医療器械製作所社製）を使用して１２１℃で
１５分加熱し、溶解と共に滅菌する。滅菌処理済みの固
体培地を無菌室内で直径９ｃｍのプラスチック製シャー
レ（栄研器材社製）に１枚当たり３０ｍｌ分注し、冷却
固化し、のち固化した培地を乾燥機（LABCONCO社製）を
使用して１０3Ｐａの圧力で減圧乾燥法により乾燥し、
溶解水１５ｍｌを除去する。
ン（ディフコ社製）５ｇ、及びグルコース（和光純薬社
製）１ｇを、固体培地組成に記載の溶解水（精製水）の
所定量（１０００ｍｌ）を１００％として、この量より
溶解水（精製水）の量を１００％（１０００ｍｌ）多く
配合した溶解水２０００ｍｌに溶解し、約２０００ｍｌ
の溶解液を得る。前記溶解液のｐＨを、０．１ｍｏｌ／
ｌ水酸化ナトリウム溶液を使用して、７．２に調整し、
寒天（伊那食品工業社製）１５ｇを添加し、オートクレ
ーブ（岩楯医療器械製作所社製）を使用して１２１℃で
１５分加熱し、溶解と共に滅菌する。滅菌処理済みの固
体培地を無菌室内で直径９ｃｍのプラスチック製シャー
レ（栄研器材社製）に１枚当たり３０ｍｌ分注し、冷却
固化し、のち固化した培地を乾燥機（LABCONCO社製）を
使用して１０3Ｐａの圧力で減圧乾燥法により乾燥し、
溶解水１５ｍｌを除去する。
【００３４】即ち、前記溶解水の除去は、前記所定量よ
り多く配合した溶解水の量（１０００ｍｌ）の全量に相
当する溶解水を乾燥し、除去したことを示す。よって、
前記溶解水の除去により、固体培地組成に記載の溶解水
の所定量（１０００ｍｌ）を１００％として、最終的な
固体培地組成中の溶解水の量は、溶解水の所定量の１０
０％（全培地当たり１０００ｍｌ）に調整される。前記
方法により製造された固体培地（標準寒天培地）は、短
時間での吸水量及び吸水速度に優れ、大量の試料を塗抹
することが可能で、迅速で正確な細菌数の測定試験に最
適な固体培地である。
り多く配合した溶解水の量（１０００ｍｌ）の全量に相
当する溶解水を乾燥し、除去したことを示す。よって、
前記溶解水の除去により、固体培地組成に記載の溶解水
の所定量（１０００ｍｌ）を１００％として、最終的な
固体培地組成中の溶解水の量は、溶解水の所定量の１０
０％（全培地当たり１０００ｍｌ）に調整される。前記
方法により製造された固体培地（標準寒天培地）は、短
時間での吸水量及び吸水速度に優れ、大量の試料を塗抹
することが可能で、迅速で正確な細菌数の測定試験に最
適な固体培地である。
【００３５】実施例２ ペプトン（ディフコ社製）１０ｇ、肉エキス（メルク社
製）５ｇ、及び塩化ナトリウム（和光純薬社製）５ｇ
を、固体培地組成に記載の溶解水（精製水）の所定量
（１０００ｍｌ）を１００％として、この量より溶解水
（精製水）の量を２０％（２００ｍｌ）多く配合した溶
解水１２００ｍｌに溶解し、約１２００ｍｌの溶解液を
得る。前記溶解液のｐＨを、０．１ｍｏｌ／ｌ水酸化ナ
トリウム溶液を使用して、７．０に調整し、寒天（伊那
食品工業社製）１５ｇを添加し、オートクレーブ（岩楯
医療器械製作所社製）を使用して１２１℃で１５分加熱
し、溶解と共に滅菌する。滅菌処理済みの固体培地を無
菌室内で直径９ｃｍのプラスチック製シャーレ（栄研器
材社製）に１枚当たり２０ｍｌ分注し、冷却固化し、の
ち固化した培地を乾燥機（LABCONCO社製）を使用して１
０3Ｐａの圧力で減圧乾燥法により乾燥し、溶解水５ｍ
ｌを除去する。
製）５ｇ、及び塩化ナトリウム（和光純薬社製）５ｇ
を、固体培地組成に記載の溶解水（精製水）の所定量
（１０００ｍｌ）を１００％として、この量より溶解水
（精製水）の量を２０％（２００ｍｌ）多く配合した溶
解水１２００ｍｌに溶解し、約１２００ｍｌの溶解液を
得る。前記溶解液のｐＨを、０．１ｍｏｌ／ｌ水酸化ナ
トリウム溶液を使用して、７．０に調整し、寒天（伊那
食品工業社製）１５ｇを添加し、オートクレーブ（岩楯
医療器械製作所社製）を使用して１２１℃で１５分加熱
し、溶解と共に滅菌する。滅菌処理済みの固体培地を無
菌室内で直径９ｃｍのプラスチック製シャーレ（栄研器
材社製）に１枚当たり２０ｍｌ分注し、冷却固化し、の
ち固化した培地を乾燥機（LABCONCO社製）を使用して１
０3Ｐａの圧力で減圧乾燥法により乾燥し、溶解水５ｍ
ｌを除去する。
【００３６】即ち、前記溶解水の除去は、前記所定量よ
り多く配合した溶解水の量（２００ｍｌ）を１００％と
して、この値の１５０％に相当する溶解水（３００ｍ
ｌ）を乾燥し、除去したことを示す。よって、前記溶解
水の除去により、固体培地組成に記載の溶解水の所定量
（１０００ｍｌ）を１００％として、最終的な固体培地
組成中の溶解水の量は、溶解水の所定量の９０％（全培
地当たり９００ｍｌ）に調整される。前記方法により製
造された固体培地（普通寒天培地）は、短時間での吸水
量及び吸水速度に優れ、大量の試料を塗抹することが可
能で、迅速で正確な細菌数の測定試験に最適な固体培地
である。
り多く配合した溶解水の量（２００ｍｌ）を１００％と
して、この値の１５０％に相当する溶解水（３００ｍ
ｌ）を乾燥し、除去したことを示す。よって、前記溶解
水の除去により、固体培地組成に記載の溶解水の所定量
（１０００ｍｌ）を１００％として、最終的な固体培地
組成中の溶解水の量は、溶解水の所定量の９０％（全培
地当たり９００ｍｌ）に調整される。前記方法により製
造された固体培地（普通寒天培地）は、短時間での吸水
量及び吸水速度に優れ、大量の試料を塗抹することが可
能で、迅速で正確な細菌数の測定試験に最適な固体培地
である。
【００３７】
【発明の効果】以上詳記したとおり、本発明は、固体培
地の各成分を所定量より多い溶解水に溶解し、固化し、
のち固化した培地を乾燥し、溶解水を除去し、溶解水の
量を所定量の７０乃至２００％に調整することを特徴と
する固体培地の製造方法、及びその製造方法により製造
される固体培地に関するものであり、本発明により奏せ
られる効果は次のとおりである。 １）本発明の製造方法により製造される本発明の固体培
地は、短時間での吸水量及び吸水速度に優れている。 ２）本発明の製造方法により製造される本発明の固体培
地は、吸水量に優れていることから、大量の試料を塗抹
することができる。 ３）本発明の製造方法により製造される本発明の固体培
地は、大量の試料を塗抹することができることから、微
生物の検出精度が高い。 ４）本発明の製造方法により迅速で正確な細菌数の測定
試験に最適な固体培地を製造することができる。
地の各成分を所定量より多い溶解水に溶解し、固化し、
のち固化した培地を乾燥し、溶解水を除去し、溶解水の
量を所定量の７０乃至２００％に調整することを特徴と
する固体培地の製造方法、及びその製造方法により製造
される固体培地に関するものであり、本発明により奏せ
られる効果は次のとおりである。 １）本発明の製造方法により製造される本発明の固体培
地は、短時間での吸水量及び吸水速度に優れている。 ２）本発明の製造方法により製造される本発明の固体培
地は、吸水量に優れていることから、大量の試料を塗抹
することができる。 ３）本発明の製造方法により製造される本発明の固体培
地は、大量の試料を塗抹することができることから、微
生物の検出精度が高い。 ４）本発明の製造方法により迅速で正確な細菌数の測定
試験に最適な固体培地を製造することができる。
フロントページの続き (72)発明者 福渡 康夫 神奈川県座間市東原五丁目１番83号 森永 乳業株式会社分析センター内 (72)発明者 宮崎 裕介 神奈川県座間市東原五丁目１番83号 森永 乳業株式会社食品総合研究所内 (72)発明者 長尾 英二 神奈川県座間市東原五丁目１番83号 森永 乳業株式会社分析センター内 (72)発明者 清瀧 兼司 神奈川県座間市東原五丁目１番83号 森永 乳業株式会社食品総合研究所内 (72)発明者 中川 稔 神奈川県座間市東原五丁目１番83号 森永 乳業株式会社分析センター内 (72)発明者 狩野 健一郎 神奈川県座間市東原五丁目１番83号 森永 乳業株式会社食品総合研究所内 (72)発明者 副島 隆志 神奈川県座間市東原五丁目１番83号 森永 乳業株式会社分析センター内 Ｆターム(参考） 4B029 AA08 BB02 CC02 CC07 GA01 4B063 QA01 QQ06 QR69 QS01 4B065 AA15X AA53X BB01 BB31 BB40 BC10 BD10 CA46
Claims (2)
- 【請求項１】 固体培地の各成分を所定量より多い溶解
水に溶解し、固化し、のち固化した培地を乾燥し、溶解
水を除去し、溶解水の量を所定量の７０乃至２００％
（体積）に調整することを特徴とする固体培地の製造方
法。 - 【請求項２】 請求項１に記載の方法により製造される
固体培地。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000032118A JP2001218576A (ja) | 2000-02-09 | 2000-02-09 | 固体培地及びその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000032118A JP2001218576A (ja) | 2000-02-09 | 2000-02-09 | 固体培地及びその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001218576A true JP2001218576A (ja) | 2001-08-14 |
Family
ID=18556772
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000032118A Pending JP2001218576A (ja) | 2000-02-09 | 2000-02-09 | 固体培地及びその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2001218576A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012520664A (ja) * | 2009-03-20 | 2012-09-10 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 潜在的な発癌性について物質を試験するための方法と装置 |
-
2000
- 2000-02-09 JP JP2000032118A patent/JP2001218576A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012520664A (ja) * | 2009-03-20 | 2012-09-10 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 潜在的な発癌性について物質を試験するための方法と装置 |
| US9778277B2 (en) | 2009-03-20 | 2017-10-03 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Process and apparatus for testing substances for potential carcinogenicity |
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