JP2001078793A - 新規生理活性物質の醗酵法による製造法 - Google Patents
新規生理活性物質の醗酵法による製造法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】抗腫瘍活性あるいはＴＮＦα産生抑制作用を有
する新規化合物の製造法を提供する。 【解決手段】 【請求項１】下記式（１） 【化１】 で表れる化合物を生産する能力を有する微生物を、栄養
培地にて培養し、培養物中に該式（１）で表される化合
物を生成蓄積せしめ、これらを採取することを特徴とす
る式（１）で表される化合物の製造法。
する新規化合物の製造法を提供する。 【解決手段】 【請求項１】下記式（１） 【化１】 で表れる化合物を生産する能力を有する微生物を、栄養
培地にて培養し、培養物中に該式（１）で表される化合
物を生成蓄積せしめ、これらを採取することを特徴とす
る式（１）で表される化合物の製造法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規生理活性物質
ＮＫ３０４２４ＡＳ−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、Ｎ
Ｋ３０４２４ＢＳ−１、およびＮＫ３０４２４ＢＳ−２
の製造法に関する。本発明の化合物は、細胞増殖抑制作
用を示し、悪性腫瘍に対する化学療法剤等として使用さ
れる抗癌物質として期待される。また、本発明の化合物
は、ＴＮＦα産生抑制作用を示し、慢性関節リウマチ、
川崎病、クローン病、ベーチェット病、気管支喘息、癌
悪液質、敗血症、腎炎、肝炎、血管炎、心不全、高脂血
症、多発性硬化症、神経障害、脊髄症、痴呆症、糖尿
病、ウイルス感染症等の治療薬あるいは予防薬等として
期待できる。
ＮＫ３０４２４ＡＳ−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、Ｎ
Ｋ３０４２４ＢＳ−１、およびＮＫ３０４２４ＢＳ−２
の製造法に関する。本発明の化合物は、細胞増殖抑制作
用を示し、悪性腫瘍に対する化学療法剤等として使用さ
れる抗癌物質として期待される。また、本発明の化合物
は、ＴＮＦα産生抑制作用を示し、慢性関節リウマチ、
川崎病、クローン病、ベーチェット病、気管支喘息、癌
悪液質、敗血症、腎炎、肝炎、血管炎、心不全、高脂血
症、多発性硬化症、神経障害、脊髄症、痴呆症、糖尿
病、ウイルス感染症等の治療薬あるいは予防薬等として
期待できる。
【０００２】
【従来の技術】従来、抗腫瘍剤としては、アドリアマイ
シン、マイトマイシンＣ等が知られている。しかし、こ
れらは副作用が重篤で、治療上満足すべきものではな
く、癌の治療に適する化合物の発明が待たれている。
シン、マイトマイシンＣ等が知られている。しかし、こ
れらは副作用が重篤で、治療上満足すべきものではな
く、癌の治療に適する化合物の発明が待たれている。
【０００３】一方、ＴＮＦαは、マクロファージ、単球
のみならず、多くの細胞から産生され、多様な生物活性
を示す事が知られており、各種の疾患、例えば慢性関節
リウマチ〔Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．、第４９巻、
６６９頁（１９９０）〕、川崎病〔Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．、第５６巻、２９
頁（１９９０）〕、クローン病〔Ａｒｃｈ．Ｄｉｓ．Ｃ
ｈｉｌｄ、第６６巻、５６１頁（１９９１）〕、ベーチ
ェット病〔Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．、第１７巻、１１
０７頁（１９９０）〕、気管支喘息〔Ｊ．Ａｌｌｅｒｇ
ｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、第８９巻、９５８頁
（１９９２）〕、癌悪液質〔Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔ
ｔ．、第１１巻、１７３頁（１９８５）〕、敗血症〔Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ、第２２９巻、８６９頁（１９８６）〕等
では、ＴＮＦαの異常な産生が見られ、疾患の増悪因子
として働いていると考えられている。さらに腎炎、肝
炎、血管炎、心不全、高脂血症、多発性硬化症、神経障
害、脊髄症、痴呆症、糖尿病、ウイルス感染症等の疾患
においてもＴＮＦαの関与が示唆されている。したがっ
て、ＴＮＦαの産生を抑制する物質がこれら疾患の治療
薬あるいは予防薬として期待され、有用なＴＮＦα産生
抑制物質の発明が待たれている。
のみならず、多くの細胞から産生され、多様な生物活性
を示す事が知られており、各種の疾患、例えば慢性関節
リウマチ〔Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．、第４９巻、
６６９頁（１９９０）〕、川崎病〔Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．、第５６巻、２９
頁（１９９０）〕、クローン病〔Ａｒｃｈ．Ｄｉｓ．Ｃ
ｈｉｌｄ、第６６巻、５６１頁（１９９１）〕、ベーチ
ェット病〔Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．、第１７巻、１１
０７頁（１９９０）〕、気管支喘息〔Ｊ．Ａｌｌｅｒｇ
ｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、第８９巻、９５８頁
（１９９２）〕、癌悪液質〔Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔ
ｔ．、第１１巻、１７３頁（１９８５）〕、敗血症〔Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ、第２２９巻、８６９頁（１９８６）〕等
では、ＴＮＦαの異常な産生が見られ、疾患の増悪因子
として働いていると考えられている。さらに腎炎、肝
炎、血管炎、心不全、高脂血症、多発性硬化症、神経障
害、脊髄症、痴呆症、糖尿病、ウイルス感染症等の疾患
においてもＴＮＦαの関与が示唆されている。したがっ
て、ＴＮＦαの産生を抑制する物質がこれら疾患の治療
薬あるいは予防薬として期待され、有用なＴＮＦα産生
抑制物質の発明が待たれている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、有用
な抗腫瘍剤の製造法を提供することにある。
な抗腫瘍剤の製造法を提供することにある。
【０００５】また、本発明の目的は、ＴＮＦα産生抑制
活性をもつ生理活性物質の製造法を提供することにあ
る。
活性をもつ生理活性物質の製造法を提供することにあ
る。
【０００６】また、本発明の目的は、慢性関節リウマ
チ、川崎病、クローン病、ベーチェット病、気管支喘
息、癌悪液質、敗血症、腎炎、肝炎、血管炎、心不全、
高脂血症、多発性硬化症、神経障害、脊髄症、痴呆症、
糖尿病、ウイルス感染症等の疾患において、その治療上
あるいは予防上有用な医薬の製造法を提供することにあ
る。
チ、川崎病、クローン病、ベーチェット病、気管支喘
息、癌悪液質、敗血症、腎炎、肝炎、血管炎、心不全、
高脂血症、多発性硬化症、神経障害、脊髄症、痴呆症、
糖尿病、ウイルス感染症等の疾患において、その治療上
あるいは予防上有用な医薬の製造法を提供することにあ
る。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、微生物の
代謝産物について種々検索した結果、放線菌に属する一
菌株が、哺乳動物の癌細胞に対する細胞増殖抑制作用お
よびＴＮＦα産生抑制作用を有する生理活性物質、ＮＫ
３０４２４ＡＳ−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３
０４２４ＢＳ−１、およびＮＫ３０４２４ＢＳ−２を産
生する事を見出し、本発明を完成した。即ち、本発明
は、 下記式（１）
代謝産物について種々検索した結果、放線菌に属する一
菌株が、哺乳動物の癌細胞に対する細胞増殖抑制作用お
よびＴＮＦα産生抑制作用を有する生理活性物質、ＮＫ
３０４２４ＡＳ−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３
０４２４ＢＳ−１、およびＮＫ３０４２４ＢＳ−２を産
生する事を見出し、本発明を完成した。即ち、本発明
は、 下記式（１）
【化２】 で表される化合物を生産する能力を有する微生物を、栄
養培地にて培養し、培養物中に該式（１）で表される化
合物を生成蓄積せしめ、これらを採取することを特徴と
する式（１）で表される化合物の製造法。 式（１）で表される化合物がＮＫ３０４２４ＡＳ−
１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−
１、またはＮＫ３０４２４ＢＳ−２である上記記載の
製造法。 微生物がストレプトミセス属に属する微生物である上
記記載の製造法。 上記記載の式（１）で表される化合物を生産する能
力を有するストレプトミセス属放線菌。 に関する。
養培地にて培養し、培養物中に該式（１）で表される化
合物を生成蓄積せしめ、これらを採取することを特徴と
する式（１）で表される化合物の製造法。 式（１）で表される化合物がＮＫ３０４２４ＡＳ−
１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−
１、またはＮＫ３０４２４ＢＳ−２である上記記載の
製造法。 微生物がストレプトミセス属に属する微生物である上
記記載の製造法。 上記記載の式（１）で表される化合物を生産する能
力を有するストレプトミセス属放線菌。 に関する。
【０００８】以下に本発明について詳細に述べる。
【０００９】
【００１０】本発明の製造法は、上記式（１）で表され
る化合物を生産する能力を有する微生物を、栄養培地に
て培養し、培養物中に該式（１）で表される化合物当該
化合物を生成蓄積せしめ、これらを採取することを特徴
とする。上記式（１）で表される化合物としては、例え
ばＮＫ３０４２４ＡＳ−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、
ＮＫ３０４２４ＢＳ−１、およびＮＫ３０４２４ＢＳ−
２があげられる。これらは、互いにジアステレオマーの
関係にある。
る化合物を生産する能力を有する微生物を、栄養培地に
て培養し、培養物中に該式（１）で表される化合物当該
化合物を生成蓄積せしめ、これらを採取することを特徴
とする。上記式（１）で表される化合物としては、例え
ばＮＫ３０４２４ＡＳ−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、
ＮＫ３０４２４ＢＳ−１、およびＮＫ３０４２４ＢＳ−
２があげられる。これらは、互いにジアステレオマーの
関係にある。
【００１１】以下にＮＫ３０４２４ＡＳ−１、ＮＫ３０
４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−１、ＮＫ３０４
２４ＢＳ−２の理化学的性質を示す。 ａ）ＮＫ３０４２４ＡＳ−１ １）外観：白色粉末 ２）分子式：Ｃ３０Ｈ４６Ｎ２Ｏ１１Ｓ（高分解能マス
スペクトル法により測定） ３）分子量：６４２（ＦＡＢ−ＭＳ法により測定した
（Ｍ＋Ｈ）＋＝６４３） ４）水素核磁気共鳴スペクトル：重水中、４００ＭＨｚ
で測定したスペクトルを第１図に示す。 ５）溶解性：水、メタノール、ジメチルスルホキシドに
可溶。ノルマルヘキサン、酢酸エチルに不溶。 ６）呈色反応：以下に陽性。ライドン−スミス、ニンヒ
ドリン（オレンジ色）、硫酸、過マンガン酸カリウム ７）薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：０．４３シリカ
ゲル（メルク社製 シリカゲル６０Ｆ２５４）薄層を用
い、展開溶媒として、１−ブタノール−酢酸−水（４：
１：１）を用いた。
４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−１、ＮＫ３０４
２４ＢＳ−２の理化学的性質を示す。 ａ）ＮＫ３０４２４ＡＳ−１ １）外観：白色粉末 ２）分子式：Ｃ３０Ｈ４６Ｎ２Ｏ１１Ｓ（高分解能マス
スペクトル法により測定） ３）分子量：６４２（ＦＡＢ−ＭＳ法により測定した
（Ｍ＋Ｈ）＋＝６４３） ４）水素核磁気共鳴スペクトル：重水中、４００ＭＨｚ
で測定したスペクトルを第１図に示す。 ５）溶解性：水、メタノール、ジメチルスルホキシドに
可溶。ノルマルヘキサン、酢酸エチルに不溶。 ６）呈色反応：以下に陽性。ライドン−スミス、ニンヒ
ドリン（オレンジ色）、硫酸、過マンガン酸カリウム ７）薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：０．４３シリカ
ゲル（メルク社製 シリカゲル６０Ｆ２５４）薄層を用
い、展開溶媒として、１−ブタノール−酢酸−水（４：
１：１）を用いた。
【００１２】ｂ）ＮＫ３０４２４ＡＳ−２ １）外観：白色粉末 ２）分子式：Ｃ３０Ｈ４６Ｎ２Ｏ１１Ｓ（高分解能マス
スペクトル法により測定） ３）分子量：６４２（ＦＡＢ−ＭＳ法により測定した
（Ｍ＋Ｈ）＋＝６４３） ４）水素核磁気共鳴スペクトル：重水中、４００ＭＨｚ
で測定したスペクトルを第２図に示す。 ５）溶解性：水、メタノール、ジメチルスルホキシドに
可溶。ノルマルヘキサン、酢酸エチルに不溶。 ６）呈色反応：以下に陽性。ライドン−スミス、ニンヒ
ドリン（オレンジ色）、硫酸、過マンガン酸カリウム ７）薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：０．４３シリカ
ゲル（メルク社製 シリカゲル６０Ｆ２５４）薄層を用
い、展開溶媒として、１−ブタノール−酢酸−水（４：
１：１）を用いた。
スペクトル法により測定） ３）分子量：６４２（ＦＡＢ−ＭＳ法により測定した
（Ｍ＋Ｈ）＋＝６４３） ４）水素核磁気共鳴スペクトル：重水中、４００ＭＨｚ
で測定したスペクトルを第２図に示す。 ５）溶解性：水、メタノール、ジメチルスルホキシドに
可溶。ノルマルヘキサン、酢酸エチルに不溶。 ６）呈色反応：以下に陽性。ライドン−スミス、ニンヒ
ドリン（オレンジ色）、硫酸、過マンガン酸カリウム ７）薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：０．４３シリカ
ゲル（メルク社製 シリカゲル６０Ｆ２５４）薄層を用
い、展開溶媒として、１−ブタノール−酢酸−水（４：
１：１）を用いた。
【００１３】ｃ）ＮＫ３０４２４ＢＳ−１ １）外観：白色粉末 ２）分子式：Ｃ３０Ｈ４６Ｎ２Ｏ１１Ｓ（高分解能マス
スペクトル法により測定） ３）分子量：６４２（ＦＡＢ−ＭＳ法により測定した
（Ｍ＋Ｈ）＋＝６４３） ４）水素核磁気共鳴スペクトル：重水中、４００ＭＨｚ
で測定したスペクトルを第３図に示す。 ５）溶解性：水、メタノール、ジメチルスルホキシドに
可溶。ノルマルヘキサン、酢酸エチルに不溶。 ６）呈色反応：以下に陽性。ライドン−スミス、ニンヒ
ドリン（オレンジ色）、硫酸、過マンガン酸カリウム ７）薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：０．４３シリカ
ゲル（メルク社製 シリカゲル６０Ｆ２５４）薄層を用
い、展開溶媒として、１−ブタノール−酢酸−水（４：
１：１）を用いた。
スペクトル法により測定） ３）分子量：６４２（ＦＡＢ−ＭＳ法により測定した
（Ｍ＋Ｈ）＋＝６４３） ４）水素核磁気共鳴スペクトル：重水中、４００ＭＨｚ
で測定したスペクトルを第３図に示す。 ５）溶解性：水、メタノール、ジメチルスルホキシドに
可溶。ノルマルヘキサン、酢酸エチルに不溶。 ６）呈色反応：以下に陽性。ライドン−スミス、ニンヒ
ドリン（オレンジ色）、硫酸、過マンガン酸カリウム ７）薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：０．４３シリカ
ゲル（メルク社製 シリカゲル６０Ｆ２５４）薄層を用
い、展開溶媒として、１−ブタノール−酢酸−水（４：
１：１）を用いた。
【００１４】ｄ）ＮＫ３０４２４ＢＳ−２ １）外観：白色粉末 ２）分子式：Ｃ３０Ｈ４６Ｎ２Ｏ１１Ｓ（高分解能マス
スペクトル法により測定） ３）分子量：６４２（ＦＡＢ−ＭＳ法により測定した
（Ｍ＋Ｈ）＋＝６４３） ４）水素核磁気共鳴スペクトル：重水中、４００ＭＨｚ
で測定したスペクトルを第４図に示す。 ５）溶解性：水、メタノール、ジメチルスルホキシドに
可溶。ノルマルヘキサン、酢酸エチルに不溶。 ６）呈色反応：以下に陽性。ライドン−スミス、ニンヒ
ドリン（オレンジ色）、硫酸、過マンガン酸カリウム ７）薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：０．４３シリカ
ゲル（メルク社製 シリカゲル６０Ｆ２５４）薄層を用
い、展開溶媒として、１−ブタノール−酢酸−水（４：
１：１）を用いた。
スペクトル法により測定） ３）分子量：６４２（ＦＡＢ−ＭＳ法により測定した
（Ｍ＋Ｈ）＋＝６４３） ４）水素核磁気共鳴スペクトル：重水中、４００ＭＨｚ
で測定したスペクトルを第４図に示す。 ５）溶解性：水、メタノール、ジメチルスルホキシドに
可溶。ノルマルヘキサン、酢酸エチルに不溶。 ６）呈色反応：以下に陽性。ライドン−スミス、ニンヒ
ドリン（オレンジ色）、硫酸、過マンガン酸カリウム ７）薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：０．４３シリカ
ゲル（メルク社製 シリカゲル６０Ｆ２５４）薄層を用
い、展開溶媒として、１−ブタノール−酢酸−水（４：
１：１）を用いた。
【００１５】生理活性物質ＮＫ３０４２４ＡＳ−１、Ｎ
Ｋ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−１、ＮＫ
３０４２４ＢＳ−２は、例えば、ストレプトミセス属に
属するこれらの生産菌を培養し、該化合物を生成せし
め、この培養物より採取する事により得られる。
Ｋ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−１、ＮＫ
３０４２４ＢＳ−２は、例えば、ストレプトミセス属に
属するこれらの生産菌を培養し、該化合物を生成せし
め、この培養物より採取する事により得られる。
【００１６】生理活性物質ＮＫ３０４２４ＡＳ−１、Ｎ
Ｋ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−１、ＮＫ
３０４２４ＢＳ−２の生産菌の代表的なものとして、例
えば、土壌より分離したストレプトミセス・エスピー
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＮＡ ３０４２４
株が挙げられる。以下に、本菌株の菌学的性状を示す。
Ｋ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−１、ＮＫ
３０４２４ＢＳ−２の生産菌の代表的なものとして、例
えば、土壌より分離したストレプトミセス・エスピー
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＮＡ ３０４２４
株が挙げられる。以下に、本菌株の菌学的性状を示す。
【００１７】１．形態的性質 ２７℃で２週間後に観察した結果、気菌糸は単純分岐
し、その先端はらせん状で、輪生枝の形成は認められな
い。また、胞子嚢および遊走子も認められない。胞子表
面は平滑で、胞子はシリンダー型で、大きさは０．５〜
０．９×０．９〜１．３μｍである。また、１０個以上
の連鎖をなして胞子が形成される。
し、その先端はらせん状で、輪生枝の形成は認められな
い。また、胞子嚢および遊走子も認められない。胞子表
面は平滑で、胞子はシリンダー型で、大きさは０．５〜
０．９×０．９〜１．３μｍである。また、１０個以上
の連鎖をなして胞子が形成される。
【００１８】２．各種培地における生育 各種培地上、２７℃、２週間後の生育状態を下記表１に
示す。
示す。
【００１９】 表１ 培 地 生育 菌糸 基生菌糸 可溶性色素 グルコース・アスパラギン 良好 適度、茶灰〜 無色〜 なし 寒天培地 明るい茶灰 うす黄 （湿潤性） グリセリン・アスパラギン 良好 適度、茶白〜 無色〜 なし 寒天培地 (ISP 5 med.) 明るい灰茶 うす黄 （湿潤性） スターチ・無機塩寒天培地 良好 豊富、茶白〜 うす黄〜 なし (ISP 4 med.) 黒（湿潤性） うす黄茶 チロシン寒天培地 良好 豊富、茶白〜 うす黄茶 茶色味 (ISP 7 med.) 明るい茶灰 〜うす茶 （湿潤性） 栄養寒天培地 良好 適度、白〜 無色〜 わずかに 明るい茶灰 うす黄 茶色味 （湿潤性） イースト・麦芽寒天培地 良好 適度、茶灰〜 うす黄〜 わずかに (ISP 2 med.) 明るい茶灰 うす黄茶 茶色味 （湿潤性） オートミール寒天培地 良好 適度、茶灰〜 無色〜 なし (ISP 3 med.) 明るい茶灰 うす黄
【００２０】 ３．生理学的性質 生育至適温度 ： ２７〜３７℃ 硝酸塩の還元 ： 陽性 スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地）： 陽性 脱脂牛乳のペプトン化 ： 陰性 ゼラチンの液化 ： 陽性 メラニン様色素の生成 ： 陽性 ４．炭素源の利用性（プリドハム・ゴドリーブ寒天培地上） Ｌ−アラビノース ＋ Ｄ−キシロース ＋ Ｄ−グルコース ＋ Ｄ−フラクトース ＋ シュクロース ＋ イノシトール ＋ Ｌ−ラムノース ＋ ラフィノース − Ｄ−マンニトール ＋
【００２１】５．細胞壁中のジアミノピメリン酸 ＬＬ−ジアミノピメリン酸である。以上を要約すると、
本菌株は細胞壁がＬＬ−ジアミノピメリン酸であり、ま
た、メナキノンの種類は、主にＭＫ−９（Ｈ８）、ＭＫ
−９（Ｈ６）である。インターナショナル・ストレプト
ミセス属・プロジェクト（略称ＩＳＰ）の方法によれ
ば、胞子形成菌糸の形態は、Ｓｅｃｔｉｏｎ Ｓｐｉｒ
ａｌｅｓに属し胞子表面は平滑で、成熟した菌糸の色は
灰色系統（Ｇｒａｙ ｃｏｌｏｒ−ｓｅｒｉｅｓ）で黒
色の湿潤性（ハイグロスコピック）を呈する。メラニン
様色素を生産し、培地中に茶色味の可溶性色素を呈す
る。また、基生菌糸の色はうす黄からうす黄茶を呈す
る。炭素源としてはＬ−アラビノース、Ｄ−キシロー
ス、Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース、シュクロー
ス、イノシトール、Ｌ−ラムノース、Ｄ−マンニトール
を利用し、ラフィノースは、利用しない。
本菌株は細胞壁がＬＬ−ジアミノピメリン酸であり、ま
た、メナキノンの種類は、主にＭＫ−９（Ｈ８）、ＭＫ
−９（Ｈ６）である。インターナショナル・ストレプト
ミセス属・プロジェクト（略称ＩＳＰ）の方法によれ
ば、胞子形成菌糸の形態は、Ｓｅｃｔｉｏｎ Ｓｐｉｒ
ａｌｅｓに属し胞子表面は平滑で、成熟した菌糸の色は
灰色系統（Ｇｒａｙ ｃｏｌｏｒ−ｓｅｒｉｅｓ）で黒
色の湿潤性（ハイグロスコピック）を呈する。メラニン
様色素を生産し、培地中に茶色味の可溶性色素を呈す
る。また、基生菌糸の色はうす黄からうす黄茶を呈す
る。炭素源としてはＬ−アラビノース、Ｄ−キシロー
ス、Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース、シュクロー
ス、イノシトール、Ｌ−ラムノース、Ｄ−マンニトール
を利用し、ラフィノースは、利用しない。
【００２２】以上の性質をもとにアール・イー・ブッフ
ァナン・アンド・エヌ・イー・ギボンズ編、バージーズ
・マニュアル・オブ・デタミネーティブ・バクテリオロ
ジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔ
ｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第
８版、１９７４年に従って検索を行った結果、上記ＮＡ
３０４２４株はストレプトミセス属に属することが判
明した。よって、本菌をストレプトミセス・エスピー
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＮＡ ３０４２
４と命名した。該菌株は、工業技術院生命工学工業技術
研究所に、ＦＥＲＭ Ｐ−１６４２２として寄託されて
いる。
ァナン・アンド・エヌ・イー・ギボンズ編、バージーズ
・マニュアル・オブ・デタミネーティブ・バクテリオロ
ジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔ
ｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第
８版、１９７４年に従って検索を行った結果、上記ＮＡ
３０４２４株はストレプトミセス属に属することが判
明した。よって、本菌をストレプトミセス・エスピー
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＮＡ ３０４２
４と命名した。該菌株は、工業技術院生命工学工業技術
研究所に、ＦＥＲＭ Ｐ−１６４２２として寄託されて
いる。
【００２３】本発明に用いるストレプトミセス属に属す
る菌株は他のストレプトミセス属の菌株と同様、その性
状が変化しやすい。例えば、紫外線、エックス線および
薬品等を用いる人工的な変異手段で容易に変異しうるも
のである。このように得られたどの様な変異株であって
も、本発明の対象とする生理活性物質ＮＫ３０４２４Ａ
Ｓ−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ
−１、またはＮＫ３０４２４ＢＳ−２の生産能を有する
ものは、全て本発明に使用する事ができる。
る菌株は他のストレプトミセス属の菌株と同様、その性
状が変化しやすい。例えば、紫外線、エックス線および
薬品等を用いる人工的な変異手段で容易に変異しうるも
のである。このように得られたどの様な変異株であって
も、本発明の対象とする生理活性物質ＮＫ３０４２４Ａ
Ｓ−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ
−１、またはＮＫ３０４２４ＢＳ−２の生産能を有する
ものは、全て本発明に使用する事ができる。
【００２４】本発明により生理活性物質ＮＫ３０４２４
ＡＳ−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４Ｂ
Ｓ−１、またはＮＫ３０４２４ＢＳ−２を製造するに
は、まず前記菌株を放線菌が利用し得る栄養物を含有す
る培地で好気的に培養する。栄養源としては、従来から
放線菌の培養に利用されている公知のものが使用でき、
例えば炭素源としては、グルコース、グリセリン、ガラ
クトース、水飴、デキストリン、シュクロース、でんぷ
ん、糖蜜、動・植物油等を使用できる。また、窒素源と
しては、大豆粉、小麦、小麦胚芽、コーンスティープ・
リカー、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、硫酸アンモ
ニウム、硝酸ソーダ、尿素等を単独かまたは組み合わせ
て用いることができる。その他、必要に応じ、ナトリウ
ム、コバルト、塩素、硫酸、燐酸、およびその他のイオ
ンを生成することのできる無機塩類を添加することは有
効である。また、菌の生育を助け、生理活性物質ＮＫ３
０４２４ＡＳ−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０
４２４ＢＳ−１、またはＮＫ３０４２４ＢＳ−２の生産
を促進するような有機および無機物を適当に添加するこ
とができる。
ＡＳ−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４Ｂ
Ｓ−１、またはＮＫ３０４２４ＢＳ−２を製造するに
は、まず前記菌株を放線菌が利用し得る栄養物を含有す
る培地で好気的に培養する。栄養源としては、従来から
放線菌の培養に利用されている公知のものが使用でき、
例えば炭素源としては、グルコース、グリセリン、ガラ
クトース、水飴、デキストリン、シュクロース、でんぷ
ん、糖蜜、動・植物油等を使用できる。また、窒素源と
しては、大豆粉、小麦、小麦胚芽、コーンスティープ・
リカー、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、硫酸アンモ
ニウム、硝酸ソーダ、尿素等を単独かまたは組み合わせ
て用いることができる。その他、必要に応じ、ナトリウ
ム、コバルト、塩素、硫酸、燐酸、およびその他のイオ
ンを生成することのできる無機塩類を添加することは有
効である。また、菌の生育を助け、生理活性物質ＮＫ３
０４２４ＡＳ−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０
４２４ＢＳ−１、またはＮＫ３０４２４ＢＳ−２の生産
を促進するような有機および無機物を適当に添加するこ
とができる。
【００２５】培養法としては、液体培養法、特に深部攪
拌培養法が適している。培養に適当な温度は１５〜３７
℃であるが、多くの場合、２６〜３０℃付近で培養す
る。生理活性物質ＮＫ３０４２４ＡＳ−１、ＮＫ３０４
２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−１、またはＮＫ３
０４２４ＢＳ−２の生産は、培地や培養条件により異な
るが、振盪培養、タンク培養とも通常１〜１０日の間で
その蓄積が最高に達する。培養物中に当該化合物の蓄積
量が最高になった時に、培養を停止し、培養液から目的
物質を単離する。
拌培養法が適している。培養に適当な温度は１５〜３７
℃であるが、多くの場合、２６〜３０℃付近で培養す
る。生理活性物質ＮＫ３０４２４ＡＳ−１、ＮＫ３０４
２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−１、またはＮＫ３
０４２４ＢＳ−２の生産は、培地や培養条件により異な
るが、振盪培養、タンク培養とも通常１〜１０日の間で
その蓄積が最高に達する。培養物中に当該化合物の蓄積
量が最高になった時に、培養を停止し、培養液から目的
物質を単離する。
【００２６】生理活性物質ＮＫ３０４２４ＡＳ−１、Ｎ
Ｋ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−１、また
は、ＮＫ３０４２４ＢＳ−２の培養液からの採取にあた
っては、その性状を利用した通常の分離手段を適宜組み
合わせて精製することができる。即ち、培養液を遠心分
離あるいはろ過によりろ液と菌体部に分離し、得られた
ろ液をダイアイオンＨＰ−２０（商品名：三菱化成製）
等に吸着させ、低級アルコールやアセトン等により溶出
するか、あるいは１−ブタノール等の有機溶媒で抽出す
ることによりＮＫ３０４２４ＡＳ−１、ＮＫ３０４２４
ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−１、またはＮＫ３０４
２４ＢＳ−２の画分を得ることができる。
Ｋ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−１、また
は、ＮＫ３０４２４ＢＳ−２の培養液からの採取にあた
っては、その性状を利用した通常の分離手段を適宜組み
合わせて精製することができる。即ち、培養液を遠心分
離あるいはろ過によりろ液と菌体部に分離し、得られた
ろ液をダイアイオンＨＰ−２０（商品名：三菱化成製）
等に吸着させ、低級アルコールやアセトン等により溶出
するか、あるいは１−ブタノール等の有機溶媒で抽出す
ることによりＮＫ３０４２４ＡＳ−１、ＮＫ３０４２４
ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−１、またはＮＫ３０４
２４ＢＳ−２の画分を得ることができる。
【００２７】上述の方法に加え、物質の採取に用いられ
る公知の方法、たとえば吸着・分配クロマトグラフィ
ー、ゲル濾過クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフ
ィーよりのかき取り、高速液体クロマトグラフィー等を
適宜組み合わせ、あるいは繰り返すことによってＮＫ３
０４２４ＡＳ−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０
４２４ＢＳ−１、またはＮＫ３０４２４ＢＳ−２を純粋
に単離することができる。
る公知の方法、たとえば吸着・分配クロマトグラフィ
ー、ゲル濾過クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフ
ィーよりのかき取り、高速液体クロマトグラフィー等を
適宜組み合わせ、あるいは繰り返すことによってＮＫ３
０４２４ＡＳ−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０
４２４ＢＳ−１、またはＮＫ３０４２４ＢＳ−２を純粋
に単離することができる。
【００２８】本発明のＮＫ３０４２４ＡＳ−１、ＮＫ３
０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−１、またはＮ
Ｋ３０４２４ＢＳ−２は後記のごとく、哺乳動物の癌細
胞に対する細胞増殖抑制作用およびＴＮＦα産生抑制活
性をもつ生理活性物質である。
０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−１、またはＮ
Ｋ３０４２４ＢＳ−２は後記のごとく、哺乳動物の癌細
胞に対する細胞増殖抑制作用およびＴＮＦα産生抑制活
性をもつ生理活性物質である。
【００２９】以下に試験例を挙げてＮＫ３０４２４ＡＳ
−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−
１、またはＮＫ３０４２４ＢＳ−２が、癌細胞に対する
細胞増殖抑制作用およびＴＮＦα産生抑制作用をもつこ
とを示す。
−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−
１、またはＮＫ３０４２４ＢＳ−２が、癌細胞に対する
細胞増殖抑制作用およびＴＮＦα産生抑制作用をもつこ
とを示す。
【００３０】試験例１ 細胞増殖抑制作用 ５％牛胎児血清を添加したＲＰＭＩ１６４０培地を用い
て、マウス白血病由来癌細胞Ｊ７７４．１を、３７℃、
５％ＣＯ2 下で培養した。この細胞を、９６穴プレート
へ播種し、１日間培養した後、ＮＫ３０４２４ＡＳ−
１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−
１、およびＮＫ３０４２４ＢＳ−２をそれぞれ添加し
た。薬剤処理は、３日間行い、増殖度は、ＭＴＴ法によ
り評価した。結果は、用量−反応曲線からＩＣ５０値を
求め、その値を表２に示した。
て、マウス白血病由来癌細胞Ｊ７７４．１を、３７℃、
５％ＣＯ2 下で培養した。この細胞を、９６穴プレート
へ播種し、１日間培養した後、ＮＫ３０４２４ＡＳ−
１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−
１、およびＮＫ３０４２４ＢＳ−２をそれぞれ添加し
た。薬剤処理は、３日間行い、増殖度は、ＭＴＴ法によ
り評価した。結果は、用量−反応曲線からＩＣ５０値を
求め、その値を表２に示した。
【００３１】表２ ＮＫ３０４２４ＡＳ−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、Ｎ
Ｋ３０４２４ＢＳ−１、およびＮＫ３０４２４ＢＳ−２
の細胞増殖抑制作用 化合物 ＩＣ５０（μＭ） ＮＫ３０４２４ＡＳ−１ ０．０７ ＮＫ３０４２４ＡＳ−２ ０．０７ ＮＫ３０４２４ＢＳ−１ ０．０６ ＮＫ３０４２４ＢＳ−２ ０．０６
Ｋ３０４２４ＢＳ−１、およびＮＫ３０４２４ＢＳ−２
の細胞増殖抑制作用 化合物 ＩＣ５０（μＭ） ＮＫ３０４２４ＡＳ−１ ０．０７ ＮＫ３０４２４ＡＳ−２ ０．０７ ＮＫ３０４２４ＢＳ−１ ０．０６ ＮＫ３０４２４ＢＳ−２ ０．０６
【００３２】試験例２ ＴＮＦα産生抑制作用 チオグリコレートにより誘導したマウス腹腔マクロファ
ージを用いて、ＮＫ３０４２４ＡＳ−１、ＮＫ３０４２
４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−１、およびＮＫ３０
４２４ＢＳ−２のＴＮＦα産生抑制活性を測定した。上
記細胞の培養液（細胞数５０万個／ウェル）中に被験薬
を添加し、その後ＴＮＦαの誘導物質としてリポポリサ
ッカライドを最終濃度１００ｎｇ／ｍｌとなるよう加
え、さらに２０時間培養した。この培養液中のＴＮＦα
濃度をバイオアッセイにて定量した。バイオアッセイは
Ｌ−９２９（マウス結合組織由来細胞）に対する細胞障
害性試験（Ｋｉｅｎｅｒ，Ｐ．Ａ．らの方法、Ｊ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．、第１４１巻、８７０頁、（１９８８）を
一部改変）により行った。結果は、容量−反応曲線から
ＩＣ５０値を求め、その値を表３に示した。
ージを用いて、ＮＫ３０４２４ＡＳ−１、ＮＫ３０４２
４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−１、およびＮＫ３０
４２４ＢＳ−２のＴＮＦα産生抑制活性を測定した。上
記細胞の培養液（細胞数５０万個／ウェル）中に被験薬
を添加し、その後ＴＮＦαの誘導物質としてリポポリサ
ッカライドを最終濃度１００ｎｇ／ｍｌとなるよう加
え、さらに２０時間培養した。この培養液中のＴＮＦα
濃度をバイオアッセイにて定量した。バイオアッセイは
Ｌ−９２９（マウス結合組織由来細胞）に対する細胞障
害性試験（Ｋｉｅｎｅｒ，Ｐ．Ａ．らの方法、Ｊ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．、第１４１巻、８７０頁、（１９８８）を
一部改変）により行った。結果は、容量−反応曲線から
ＩＣ５０値を求め、その値を表３に示した。
【００３３】表３ ＮＫ３０４２４ＡＳ−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、Ｎ
Ｋ３０４２４ＢＳ−１、およびＮＫ３０４２４ＢＳ−２
のＴＮＦα産生抑制活性 化合物 ＩＣ５０（μＭ） ＮＫ３０４２４ＡＳ−１ ０．７ ＮＫ３０４２４ＡＳ−２ ０．７ ＮＫ３０４２４ＢＳ−１ ０．０４ ＮＫ３０４２４ＢＳ−２ ０．０３
Ｋ３０４２４ＢＳ−１、およびＮＫ３０４２４ＢＳ−２
のＴＮＦα産生抑制活性 化合物 ＩＣ５０（μＭ） ＮＫ３０４２４ＡＳ−１ ０．７ ＮＫ３０４２４ＡＳ−２ ０．７ ＮＫ３０４２４ＢＳ−１ ０．０４ ＮＫ３０４２４ＢＳ−２ ０．０３
【００３４】試験例から明らかな様に、本発明のＮＫ３
０４２４ＡＳ−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０
４２４ＢＳ−１、またはＮＫ３０４２４ＢＳ−２は、哺
乳動物の癌細胞に対する細胞増殖抑制作用およびＴＮＦ
α産生抑制作用を示す。
０４２４ＡＳ−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０
４２４ＢＳ−１、またはＮＫ３０４２４ＢＳ−２は、哺
乳動物の癌細胞に対する細胞増殖抑制作用およびＴＮＦ
α産生抑制作用を示す。
【００３５】
【実施例】以下に本発明の実施例を示すが、これは単な
る一例示であって何等、本発明を限定するものではな
く、種々の変法が可能である。
る一例示であって何等、本発明を限定するものではな
く、種々の変法が可能である。
【００３６】実施例１ ＮＫ３０４２４ＡＳ−１、ＮＫ
３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−１、ＮＫ３
０２４ＢＳ−２の生産 （１）醗酵 凍結菌および種母作成用の培地として、グリセリン２．
０％、グルコース１．０％、アジプロンＥ３（味の素
製）０．５％、ペプトン（極東社製）０．５％、酵母エ
キス０．５％、燐酸水素二カリウム０．０５％、硫酸マ
グネシウム０．０５％、炭酸カルシウム０．２％から成
る培地を用いた。
３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４ＢＳ−１、ＮＫ３
０２４ＢＳ−２の生産 （１）醗酵 凍結菌および種母作成用の培地として、グリセリン２．
０％、グルコース１．０％、アジプロンＥ３（味の素
製）０．５％、ペプトン（極東社製）０．５％、酵母エ
キス０．５％、燐酸水素二カリウム０．０５％、硫酸マ
グネシウム０．０５％、炭酸カルシウム０．２％から成
る培地を用いた。
【００３７】５００ｍｌ容三角フラスコに上記培地を１
００ｍｌずつ分注し、１２０℃で２０分間滅菌し、これ
にストレプトミセス・エスピーＮＡ ３０４２４株（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１６４２２）の斜面培養の１〜２白金耳を
接種し、２７℃、２００回転／分の回転式振盪機にて２
日間培養した。得られた培養物に同容量の３０％グリセ
リン水溶液を加え、攪拌後５ｍｌずつ分注して−８０℃
にて凍結したものを凍結菌とした。
００ｍｌずつ分注し、１２０℃で２０分間滅菌し、これ
にストレプトミセス・エスピーＮＡ ３０４２４株（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１６４２２）の斜面培養の１〜２白金耳を
接種し、２７℃、２００回転／分の回転式振盪機にて２
日間培養した。得られた培養物に同容量の３０％グリセ
リン水溶液を加え、攪拌後５ｍｌずつ分注して−８０℃
にて凍結したものを凍結菌とした。
【００３８】こうして得た凍結菌を、同様の培地１００
ｍｌを含む２本の５００ｍｌ容三角フラスコに、接種量
が１％となるように、解凍直後に接種し、同一条件下で
２日間培養を行い、これを種母とした。
ｍｌを含む２本の５００ｍｌ容三角フラスコに、接種量
が１％となるように、解凍直後に接種し、同一条件下で
２日間培養を行い、これを種母とした。
【００３９】生産培地としては、水飴８．０％、アジプ
ロンＥ３（味の素製）３．０％、燐酸水素二カリウム
０．０５％、硫酸マグネシウム０．０５％、炭酸カルシ
ウム０．２％、から成る培地を用いた。なお、滅菌前の
培地はｐＨ６．８に調整して使用した。
ロンＥ３（味の素製）３．０％、燐酸水素二カリウム
０．０５％、硫酸マグネシウム０．０５％、炭酸カルシ
ウム０．２％、から成る培地を用いた。なお、滅菌前の
培地はｐＨ６．８に調整して使用した。
【００４０】生産培地１０リットルを５００ｍｌ容三角
フラスコ１００本に分注し、１２０℃で２０分間滅菌
後、上記の種母１ｍｌずつを移植し、２７℃、２００回
転／分の回転式振盪機にて４日間培養した。培養終了
後、培養液９リットルを６Ｎ塩酸にてｐＨ５．５とした
後、濾過し培養濾液６．５リットルを得た。
フラスコ１００本に分注し、１２０℃で２０分間滅菌
後、上記の種母１ｍｌずつを移植し、２７℃、２００回
転／分の回転式振盪機にて４日間培養した。培養終了
後、培養液９リットルを６Ｎ塩酸にてｐＨ５．５とした
後、濾過し培養濾液６．５リットルを得た。
【００４１】（２）精製 この濾液を７００ｍｌ（φ４６×４２０ｍｍ）のダイア
イオンＨＰ−２０（三菱化成製）のカラムに吸着させ、
７００ｍｌの水と２．１リットルの３５％メタノール水
溶液にて洗浄した後、２．１リットルの５０％メタノー
ル水溶液と同容量の８０％メタノール水溶液にて溶出
し、さらに溶出液を３８５ｍｌに濃縮した。この濃縮液
を希塩酸にてｐＨ５．６とし、脂溶性の不純物を等量の
酢酸エチルで２回抽出して除去した。得られた水層を濃
縮して９０ｍｌとし、水酸化ナトリウム水溶液を加えて
ｐＨ７．０とした後、５０ｍＭ燐酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ７．０）にて平衡化したＤＥＡＥ−セファデック
スＡ−２５（ファルマシア製）の３００ｍｌ（φ４０×
２４０ｍｍ）のカラムに通液し、さらに上記緩衝液を通
液し、未吸着の画分２０４ｍｌを得た。これを再び希塩
酸にてｐＨ５．５とし、メタノールを加え２５％メタノ
ール水溶液とし、これを２５０ｍｌ（φ３０×１１５ｍ
ｍ）のダイアイオンＨＰ−２０ＳＳ（１００−２００メ
ッシュ、三菱化成製）に吸着させ、２００ｍｌの２５％
メタノール水溶液で洗浄後、４０％、５０％、６０％メ
タノール水溶液それぞれ５００ｍｌにて段階的に溶出、
分画した。５０％および６０％メタノール水溶液で溶出
した分画のうち、目的物質を多く含む画分を集め、凍結
乾燥し、１７０ｍｇを得た。
イオンＨＰ−２０（三菱化成製）のカラムに吸着させ、
７００ｍｌの水と２．１リットルの３５％メタノール水
溶液にて洗浄した後、２．１リットルの５０％メタノー
ル水溶液と同容量の８０％メタノール水溶液にて溶出
し、さらに溶出液を３８５ｍｌに濃縮した。この濃縮液
を希塩酸にてｐＨ５．６とし、脂溶性の不純物を等量の
酢酸エチルで２回抽出して除去した。得られた水層を濃
縮して９０ｍｌとし、水酸化ナトリウム水溶液を加えて
ｐＨ７．０とした後、５０ｍＭ燐酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ７．０）にて平衡化したＤＥＡＥ−セファデック
スＡ−２５（ファルマシア製）の３００ｍｌ（φ４０×
２４０ｍｍ）のカラムに通液し、さらに上記緩衝液を通
液し、未吸着の画分２０４ｍｌを得た。これを再び希塩
酸にてｐＨ５．５とし、メタノールを加え２５％メタノ
ール水溶液とし、これを２５０ｍｌ（φ３０×１１５ｍ
ｍ）のダイアイオンＨＰ−２０ＳＳ（１００−２００メ
ッシュ、三菱化成製）に吸着させ、２００ｍｌの２５％
メタノール水溶液で洗浄後、４０％、５０％、６０％メ
タノール水溶液それぞれ５００ｍｌにて段階的に溶出、
分画した。５０％および６０％メタノール水溶液で溶出
した分画のうち、目的物質を多く含む画分を集め、凍結
乾燥し、１７０ｍｇを得た。
【００４２】次いでこの画分を逆相高速液体クロマトグ
ラフィーに付して精製した。即ち、逆相カラムのＰＥＧ
ＡＳＩＬ ＯＤＳ（１０φ×２５０ｍｍ、センシュー科
学製）に上記画分の１５．６ｍｇに相当する５０％メタ
ノール水溶液を注入し、１７％のアセトニトリルを混合
した１０ｍＭ燐酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ７）を用い
て流速２．５ｍｌ／分で展開溶出した。ＮＫ３０４２４
ＡＳ−１は注入後２７．８分に、ＮＫ３０４２４ＢＳー
１は注入後２９．７分に、また、ＮＫ３０４２４ＡＳ−
２とＮＫ３０４２４ＢＳ−２は注入後３１〜３４分に溶
出された。同様の操作をさらに一度繰り返し、ＮＫ３０
４２４ＡＳ−１およびＮＫ３０４２４ＢＳ−１の溶出部
を集め、ダイアイオンＨＰ−２０ＳＳのカラムを用いて
脱塩した後、凍結乾燥し、１．３ｍｇのＮＫ３０４２４
ＡＳ−１と１．１ｍｇのＮＫ３０４２４ＢＳ−１を得
た。
ラフィーに付して精製した。即ち、逆相カラムのＰＥＧ
ＡＳＩＬ ＯＤＳ（１０φ×２５０ｍｍ、センシュー科
学製）に上記画分の１５．６ｍｇに相当する５０％メタ
ノール水溶液を注入し、１７％のアセトニトリルを混合
した１０ｍＭ燐酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ７）を用い
て流速２．５ｍｌ／分で展開溶出した。ＮＫ３０４２４
ＡＳ−１は注入後２７．８分に、ＮＫ３０４２４ＢＳー
１は注入後２９．７分に、また、ＮＫ３０４２４ＡＳ−
２とＮＫ３０４２４ＢＳ−２は注入後３１〜３４分に溶
出された。同様の操作をさらに一度繰り返し、ＮＫ３０
４２４ＡＳ−１およびＮＫ３０４２４ＢＳ−１の溶出部
を集め、ダイアイオンＨＰ−２０ＳＳのカラムを用いて
脱塩した後、凍結乾燥し、１．３ｍｇのＮＫ３０４２４
ＡＳ−１と１．１ｍｇのＮＫ３０４２４ＢＳ−１を得
た。
【００４３】
【発明の効果】本発明では、癌細胞増殖抑制作用および
ＴＮＦα産生抑制作用示す生理活性物質ＮＫ３０４２４
ＡＳ−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４Ｂ
Ｓ−１、およびＮＫ３０４２４ＢＳ−２の製造法が提供
された。これらは、悪性腫瘍に対する化学療法剤等とし
て、あるいは、慢性関節リウマチ、川崎病、クローン
病、ベーチェット病、気管支喘息、癌悪液質、敗血症、
腎炎、肝炎、血管炎、心不全、高脂血症、多発性硬化
症、神経障害、脊髄症、痴呆症、糖尿病、ウイルス感染
症等の疾患における、その治療薬あるいは予防薬として
利用できる。
ＴＮＦα産生抑制作用示す生理活性物質ＮＫ３０４２４
ＡＳ−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４Ｂ
Ｓ−１、およびＮＫ３０４２４ＢＳ−２の製造法が提供
された。これらは、悪性腫瘍に対する化学療法剤等とし
て、あるいは、慢性関節リウマチ、川崎病、クローン
病、ベーチェット病、気管支喘息、癌悪液質、敗血症、
腎炎、肝炎、血管炎、心不全、高脂血症、多発性硬化
症、神経障害、脊髄症、痴呆症、糖尿病、ウイルス感染
症等の疾患における、その治療薬あるいは予防薬として
利用できる。
【図１】ＮＫ３０４２４ＡＳ−１の重水中で測定した４
００ＭＨｚ水素核磁気共鳴スペクトルを示す。
００ＭＨｚ水素核磁気共鳴スペクトルを示す。
【図２】ＮＫ３０４２４ＡＳ−２の重水中で測定した４
００ＭＨｚ水素核磁気共鳴スペクトルを示す。
００ＭＨｚ水素核磁気共鳴スペクトルを示す。
【図３】ＮＫ３０４２４ＢＳ−１の重水中で測定した４
００ＭＨｚ水素核磁気共鳴スペクトルを示す。
００ＭＨｚ水素核磁気共鳴スペクトルを示す。
【図４】ＮＫ３０４２４ＢＳ−２の重水中で測定した４
００ＭＨｚ水素核磁気共鳴スペクトルを示す。
００ＭＨｚ水素核磁気共鳴スペクトルを示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 3/06 Ａ６１Ｐ 3/06 3/10 3/10 7/00 7/00 9/00 9/00 11/06 11/06 13/12 13/12 25/28 25/28 29/00 29/00 １０１ １０１ 31/12 31/12 35/00 35/00 Ｃ０７Ｄ 405/06 Ｃ０７Ｄ 405/06 (Ｃ１２Ｐ 17/16 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 原田 隆 東京都大田区羽田３−15−11 Ｆターム(参考） 4B064 AE54 CA04 CD01 CD09 CD13 CE10 CE11 DA05 4B065 AA50X AC12 AC14 AC15 BA22 BB03 BB14 BB19 BC01 BC02 BC03 BC09 BC26 BD14 CA18 CA34 CA44 4C063 AA01 BB05 CC80 DD10 EE01 4C086 AA02 AA04 BA10 BC22 GA02 GA07 GA16 GA17 MA01 MA04 NA14 ZA02 ZA36 ZA59 ZA62 ZA68 ZB02 ZB11 ZB15 ZB33 ZB35 ZC33 ZC35
Claims (4)
- 【請求項１】下記式（１） 【化１】 で表される化合物を生産する能力を有する微生物を、栄
養培地にて培養し、培養物中に該式（１）で表される化
合物を生成蓄積せしめ、これらを採取することを特徴と
する式（１）で表される化合物の製造法。 - 【請求項２】式（１）で表される化合物がＮＫ３０４２
４ＡＳ−１、ＮＫ３０４２４ＡＳ−２、ＮＫ３０４２４
ＢＳ−１、またはＮＫ３０４２４ＢＳ−２である請求項
１記載の製造法。 - 【請求項３】微生物がストレプトミセス属に属する微生
物である請求項１記載の製造法。 - 【請求項４】請求項１記載の式（１）で表される化合物
を生産する能力を有するストレプトミセス属放線菌。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25723299A JP2001078793A (ja) | 1999-09-10 | 1999-09-10 | 新規生理活性物質の醗酵法による製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25723299A JP2001078793A (ja) | 1999-09-10 | 1999-09-10 | 新規生理活性物質の醗酵法による製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001078793A true JP2001078793A (ja) | 2001-03-27 |
Family
ID=17303524
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25723299A Pending JP2001078793A (ja) | 1999-09-10 | 1999-09-10 | 新規生理活性物質の醗酵法による製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2001078793A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006034478A3 (en) * | 2004-09-23 | 2006-11-30 | Sloan Kettering Inst Cancer | Isomigrastatin analogs in the treatment of cancer |
| US7943800B2 (en) | 2003-03-28 | 2011-05-17 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Migrastatin analogs and uses thereof |
| US8957056B2 (en) | 2004-05-25 | 2015-02-17 | Sloan-Kettering Instiute For Cancer Research | Migrastatin analogs in the treatment of cancer |
-
1999
- 1999-09-10 JP JP25723299A patent/JP2001078793A/ja active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7943800B2 (en) | 2003-03-28 | 2011-05-17 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Migrastatin analogs and uses thereof |
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| US8835693B2 (en) | 2003-03-28 | 2014-09-16 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Migrastatin analogs and uses thereof |
| US8957056B2 (en) | 2004-05-25 | 2015-02-17 | Sloan-Kettering Instiute For Cancer Research | Migrastatin analogs in the treatment of cancer |
| WO2006034478A3 (en) * | 2004-09-23 | 2006-11-30 | Sloan Kettering Inst Cancer | Isomigrastatin analogs in the treatment of cancer |
| US8188141B2 (en) | 2004-09-23 | 2012-05-29 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Isomigrastatin analogs in the treatment of cancer |
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