JP2000514066A

JP2000514066A - 抗ウイルス性抗腫瘍剤としてのインターロイキン―８

Info

Publication number: JP2000514066A
Application number: JP10504609A
Authority: JP
Inventors: ゴッセリン，ジーン; ボーギート，ピエール; ダマイ，バッサム
Original assignee: ヴァイアロセル・インコーポレーテッド
Priority date: 1996-07-05
Filing date: 1997-07-04
Publication date: 2000-10-24
Also published as: BR9710206A; DE69718911D1; NZ333605A; EP0909178A1; AU3331497A; KR20000023562A; CA2258697A1; ES2191842T3; DE69718911T2; US5900235A; ATE232108T1; WO1998001150A1; AU713675B2; EP0909178B1

Abstract

(57)【要約】本発明は、ヒト及び動物のウイルスによって引き起こされるウイルス感染症とオンコウイルスによって引き起こされる癌との治療のためのインターロイキン８（ＩＬ−８）剤の使用に関する。インターロイキン−８剤はインターロイキン−８タンパク質又は、インターロイキン−８の生物学的活性を有するインターロイキン−８の類似体であることができる。ウイルス感染症はパルボウイルス科、パポバウイルス科、アデノウイルス科、ヘルペスウイルス科、ポックスウイルス科及びヘパドナウイルス科から成る群から選択されたＤＮＡウイルスの感染症、又はレトロウイルス科（ＨＩＶ−１とＨＩＶ−２を除外する）、ピコナウイルス科、トガウイルス科、オルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、コロナウイルス科、レオウイルス科、オンコルナウイルス科及びフィロウイルス科から成る群から選択されたＲＮＡウイルスの感染症であることができる。

Description

【発明の詳細な説明】抗ウイルス性抗腫瘍剤としてのインターロイキン−８発明の背景（ａ）発明の分野本発明は、インターロイキン−８（ＩＬ−８）の抗ウイルス活性及び抗癌活性と、ヒト及び動物のウイルスによって引き起こされるウイルス感染症及びオンコウイルスによって引き起こされる癌における治療剤としてのインターロイキン− ８の使用とに関する。（ｂ）先行技術の説明人類を苦しめる多くの重大な感染症はウイルスによって引き起こされ、そのうちの幾つかはしばしば致命的であり、このような疾患のなかには、例えば、狂犬病、天然痘、ポリオ、肝炎、黄熱病、免疫欠乏及び種々な脳症性疾患が存在する。他の疾患は、それらが非常に接触伝染性であり、例えばインフルエンザのような急性不快感、麻疹、おたふくかぜ及び水痘、並びに呼吸−胃腸障害をもたらす点で重要である。例えば風疹ウイルス及びサイトメガロウイルスのような、他のウイルスは先天性奇形を引き起こす可能性があり；最後には、ヒト及び動物において腫瘍及び癌を引き起こしうるオンコウイルスとして知られるウイルスが存在する。ウイルスのなかで、ヘルペスウイルス科は非常に重要である。ヘルペスウイルスは性質において高度に播種性であり、ヒトに対して高度に病原性である。例えば、Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルス（ＥＢＶ）は小児期後半又は青年期又は若い成人において感染性単核細胞増加症を引き起こすことが知られている。急性感染性単核細胞増加症の特徴は咽喉痛、発熱、頭痛、リンパ腺症、扁桃腺肥大、及び末梢血液中の非定型分割性リンパ球(atypical,dividing lymphocyte)である。他の発現はしばしば軽度な肝炎、巨脾腫及び脳炎を包含する。ＥＢＶは２形態の癌：Ｂｕｒｋｉｔｔリンパ腫（ＢＬ）と鼻咽頭癌（ＮＰＣ）にも関連する。赤道アフリカの特有の地域では、ＢＬは最も一般的な小児期悪性腫瘍であり、小児における癌の約８０％を占めている。ＮＰＣは北アメリカのコーカソイド人種（Ca ucasian）では僅かに観察されるが、ＮＰＣは南中国では２５〜５５歳の年齢罹患を示す、最も一般的な癌である。サイトメガロウイルスと同様に、ＥＢＶも固体器官又は骨髄移植後の慢性的免疫抑制の可能な致命的併発症である、移植後のリンパ増殖性(lymphoproliferative)疾患に関係する。他のヘルペスウイルス、即ち、単純ヘルペスウイルス、タイプ１（ＨＳＶ−１）は、歯肉口内炎の病因(etiologic agent)として関与する。特徴は発熱、咽喉痛、口腔中の潰瘍性及び嚢胞性病巣である。ＨＳＶによって引き起こされる最も重度な臨床状態は一次性器ヘルペス性感染症である。ＨＳＶ−１は性器ヘルペス性感染症を引き起こしうるが、ＨＳＶ−２はこの疾患に関連する主要なウイルスである。このＨＳＶ感染症は、性器部分に病変を引き起こす、小胞、膿疱及び潰瘍を付随する。尿停滞症候群も経験される可能性がある。人々の８０％より多くがＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２に関して血清陽性であり、研究は再発又はウイルス再活性化の頻度が６０％程度に高いことを実証している。皮膚及び眼の感染症、例えば、脈絡網膜炎又は角結膜炎を含めた、他の感染症もＨＳＶに関係する。アメリカ合衆国では１年間に約３００，０００症例の眼のＨＳＶ感染症が診断されている。ヒトヘルペスウイルス−６（ＨＨＶ−６）は免疫系の細胞に対し明白な向性(t ropism)を有しているので、ＨＨＶ−６感染症は免疫反応の変化を生ずる可能性がある。ＨＨＶ−６が小児における主要な感染症としての突発性発疹の原因であることは、現在明瞭である。最近の研究は、移植前に血清陽性である器官移植レシピエントのかなりの割合が、免疫抑制後に再活性化する血清学的徴候を示すことを実証している。異種親和−陰性(heterophil-negative)の単核細胞症様の疾患と、非Ａ・非Ｂ型肝炎も活性ＨＨＶ−６感染症に関連づけられている。ＨＨＶ −６は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ−１）感染症を有する患者からしばしば単離されている。ＨＩＶとＨＨＶ−６とが同じ標的細胞中に存在しうるという事実は、ＨＨＶ−６感染症がＨＩＶ−血清陽性患者の症候性ＡＩＤＳへの進行に補因子として作用しうるという推論を生じている。最近の研究はまた、ヒトヘルペスウイルスがＨＩＶ疾患に密接に関係することも示唆している。実際に、Ｋａｐｏｓｉ肉腫（ＫＳ）、ＨＩＶ感染者に主として発症する腫瘍(neoplasm)が感染性病因を有することが判明している。このウイルスはＫＳ関連ヘルペスウイルスと名付けられているが、その形式的分類はＨＨＶ−８であるように思われる。全ての感染性疾患において、治療法の効力は宿主の免疫応答にしばしば依存する。このことは特にヘルペスウイルスに該当する；実際に、潜在性感染症を確立させる、全てのヘルペスウイルスの能力は、免疫反応が充分に発揮しえない(imm unocompromised)患者における再活性化感染症の極めて高い発生率をもたらす。腎臓移植レシピエントでは、４０％〜７０％が潜在性ＨＳＶ感染症を再活性化させ、８０％〜１００％がＣＭＶ感染症を再活性化させる。このようなウイルス再活性化はＨＩＶ陽性患者（ＡＩＤＳ）においても観察されている。現在、ウイルス感染症の治療に利用可能な治療剤の数は比較的限定された状態である。例えば、４種類の主要な化合物：イドクスウリジン、ビダラビン、アシクロビル及びガンシクロビルがヘルペスウイルス感染症の治療に主として用いられる。これらの効力は限定されており、これらは多くの副作用を引き起こす。眼のＨＳＶ感染症の治療のみに用いられるイドクスウリジンによって治療された患者の３５％において、アレルギー効果が報告されている。ビダラビンの最も一般的な副作用は胃腸障害である（患者の１５％）。アシクロビルの主要な副作用は腎機能の変化である；また、アシクロビルはウイルスと宿主細胞の両方のＤＮＡに組み込まれることができるヌクレオシド類似体であるので、宿主細胞の正常な分割が影響される可能性がある。ガンシクロビルに関しては、最も重要な副作用は、ＡＩＤＳ患者の約４０％において発症する好中球減少症と栓球減少症である。したがって、ウイルス感染症を治療するための効果的な治療法の開発に対する緊急の必要性がある。罹病組織中の白血球の蓄積は炎症性過程の特徴として認められている。炎症部位における白血球の補充は走化性(chemotactic)サイトカイン類の局所産生によって誘発される。このような性質を示すタンパク質は、１つのアミノ酸によって分離されているか（ＣＸＣタンパク質）又は隣接している（ＣＣタンパク質）、最初の２つのシステインの位置によって２つのサブファミリーに分類されている。これら２つのサブファミリーのメンバーは、それらの標的細胞選択性とそれらの遺伝子の染色体位置とにおいて異なる（Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ等、Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５５：９７，１９９４によって概観）。走化性サイトカイン類のなかで、ＣＸＣファミリーに属するインターロイキン−８（ＩＬ−８）は、刺激されたヒト血液単球の培養上澄み液中で最初に同定された。ＩＬ−８は９９アミノ酸の先駆体として合成され、２０残基の配列の切断後に分泌される非グリコシル化タンパク質である。形成された成熟分子は７９残基を有し、Ｎ−末端においてタンパク質分解的にさらにプロセシングされて、幾つかの生物学的に活性なＮ− 末端類似体を生じ；２つの主要な形態は７２アミノ酸形と７７アミノ酸形である。ＩＬ−８の構造、配列及び生物学的性質はＢａｇｇｉｏ１ｉｎｉＭ．等によって概観されている（Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５５：９７，１９９４）。ＩＬ−８は例えば、若干を挙げれば、角質細胞、上皮細胞、滑液細胞(synovio cyte)及び肝細胞のような、多くの細胞によって産生される。末梢血白血球のなかでは、リンパ球ではなく単球と好中球がＩＬ−８の主要な細胞ソース(cellula r source)であることが判明した。ＩＬ−８はｉｎｖｉｔｒｏ及びｉｎｖｉｖｏにおいて多くの生物学的活性を及ぼす。ＩＬ−８はその走化性活性と、ヒト好中球を分解させるその能力とのために周知である。ＩＬ−８で処理された好中球では、形状変化、運動系(motil e system)及び細胞質ゾルの遊離Ｃａ²⁺の増加が迅速に検出される。特定顆粒からのビタミンＢ₁₂結合タンパク質の放出も観察された。ＩＬ−８はまた、アズール好性顆粒を分解させて、エラスターゼ及び他の加水分解酵素を放出させる。このような分解は細胞膜における多様な接着分子のアップレギュレーションを付随する。分解はまた、補体受容体タイプＩ（ＣＲ１）とＩＩＩ（ＣＲ３）の強化された発現を生じる。ＩＬ−８は好酸球と、ヒトリンパ球（特に、Ｔ細胞）とに対する走化性因子でもある。ＩＬ−８の生物学的作用は７つの膜貫通ドメイン、Ｇタンパク質共役受容体によって仲介される。２種類のＩＬ−８受容体が述べられており、Ａ型及びＢ型として定義されている。ＩＬ−８受容体Ａ型はＩＬ−８に対する高いアフィニティと、Ｇｒｏα（黒色腫増殖刺激活性）に対する低いアフィニティとを有するが、Ｂ型は両方のサイトカインに対して高いアフィニティを有する。末梢血白血球のなかでは、好中球が両方の型のＩＬ−８受容体を強度に発現するが、単球とＣＤ８⁺Ｔリンパ球とはＩＬ−８受容体を低レベルに発現した。Ｂ細胞とＣＤ４⁺Ｔリンパ球では、検出可能なレベルのＩＬ−８受容体は存在しなかった。ＩＬ−８が多くの病変(pathologies)の炎症性過程に重要な役割を果たすことを支持する累積した証拠が存在する；実際に、ＩＬ−８は、例えば乾癬の板状鱗屑抽出物、慢性関節リウマチ若しくは通風を有する患者からの滑液、気腫患者からの胸膜液、呼吸困難症候群を有する患者からの気管支肺胞洗浄液(bronchoalve olar lavages)のような、炎症性組織又は滲出液中に検出されている。さらに、抗ウイルス活性は最近、Ｃ−Ｃケモカインサブファミリーに属する、ケモカインＲＡＮＴＥＳ及びＭＩＰ−１αとβによると認められており、これらがｉｎｖｉｔｒｏにおいてＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２及びＳＩＶウイルスのタンパク質合成の阻害を誘導することが発見されている。その上、ＩＬ−８が抗ウイルス効果を有することが最近、報告されている（ＭａｃｋｅｗｉｃｚとＬｅｖｙ，１９９２ＡＩＤＳＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＨｕｍａｎＲｅｔｒｏｖｉｒｕｓ８：１０３９〜１０５０）。ＩＬ−８が特定条件下でＣＤ４＋リンパ球におけるＨＩＶ複製を阻害しうることが判明している。実際に、ＩＬ−８が自然感染(naturally infected)ＣＤ４＋細胞のウイルス複製に影響することが発見されたが、ＩＬ−８は急性感染(acutelyinfected) 細胞には影響を及ぼさなかった。抗ウイルス活性については幾つかの想定される機構が存在する；一部の機構は、特定ウイルスがその標的細胞に付着するのを遮断するべきであるので高度に選択的であると考えられる。ヘルペスウイルス感染症の治療に特異的に用いられる、イドクスウリジン、ビダラビン、アシクロビル及びガンシクロビルは例えばＨＩＶのような他のウイルスに影響を及ぼさないので、選択的な抗ウイルス活性を有する薬物の例を成す。したがって、ＨＩＶに対するＩＬ−８の抗ウイルス効果に関するＭａｃｋｏｗｉｃｚとＬｅｖｙによって提示されたデータから、ＩＬ−８があらゆるウイルスに対して抗ウイルス活性を示しうると予測することは決してできない。ウイルス感染症の治療に現在用いられている大抵の薬物が特定のウイルスに対して選択的であることが、この陳述を強く支持する。現在まで、ＩＬ−８の抗ウイルス活性についての他の実証された報告は存在しない。最後に、公開番号ＷＯ９６／０９０６２で１９９６年３月２８日に公開されたＴＡＬＭＡＤＧＥのＰＣＴ出願は、ＩＬ−８のポリペプチド類似体類を述べ、これらの類似体が、特に、例えばウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症、酵母感染症、寄生虫感染症のような病的状態の治療のために、用いることができると主張している。しかし、ＴＡＬＭＡＤＧＥは、ポリペプチドがこのようにするという推定又は単なる希望を実証するためのデータを全く提示していない。より大きい効力を有し、既知抗ウイルス剤の好ましくない副作用を示さない抗ウイルス剤を提供することが、非常に望ましいと考えられる。発明の概要本発明は、ウイルス感染症と、オンコウイルスによって引き起こされる癌とを予防又は治療する方法を提供する。これらの方法によると、薬剤学的又は生理学的に受容される治療有効量のインターロイキン−８剤を、このような治療を必要とするヒト又は動物に投与する。本発明の１つの目的は、ウイルス感染症の予防と治療のためにより高度に有効であり、既知抗ウイルス剤の好ましくない副作用を示さない、抗ウイルス剤と方法を提供することである。本発明の他の目的は、例えばレトロウイルス（ＨＩＶ−１とＨＩＶ−２を除く）、乳頭腫ウイルス、アデノウイルス及びヘルペスウイルスのようなオンコウイルスによって誘発される癌を予防又は治療する抗ウイルス剤と方法を提供することである。本発明の他の目的は、免疫抑制された患者と動物におけるウイルス感染症を予防又は治療するための抗ウイルス剤と方法を提供することである。本発明によると、ＥＢＶ、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、ＣＭＶ、ＶＺＶ、ＨＨＶ −６、ＨＨＶ−７及びＨＨＶ−８を含む（但し、これらに限定されない）群から選択されるヘルペスウイルスに対する抗ウイルス剤としてのＩＬ−８剤の使用；及びこのようなヘルペスウイルスによって引き起こされる感染症を予防又は治療する方法にＩＬ−８剤を用いることを提供する。本発明によると、ピコルナウイルス科に属するブタのエンテロウイルス、又はトガウイルス科に属するウシ下痢性ウイルス、又はパラミクソウイルス科に属するウシＲＳウイルス(respiratory syncytial virus)を含めた（但し、これらに限定されない）、他のヒトウイルス及び動物ウイルスに対する抗ウイルス剤としてのＩＬ−８剤の使用をも提供する。本発明によると、インターフェロン−α、−β、−γ、腫瘍壊死因子α、ガンシクロビル（ganciclovir）、アシクロビル（acyclovir）、ビダラビン（vidara bine）、イドクスウリジン（idoxuridine）、及びプロスタグランジン（prostag landins）又はプロスタグランジン類似体（prostaglandin analogs）を含めた（但し、これらに限定されない）、他の抗ウイルス剤と組み合わせた、ヒト及び動物におけるウイルス感染症の治療における抗ウイルス剤としてのＩＬ−８の使用をも提供する。本発明によると、例えばレトロウイルス（ＨＩＶ−１とＨＩＶ−２を除く）、乳頭腫ウイルス、アデノウイルス及びヘルペスウイルスのような、オンコウイルスによって誘発される癌の予防及び治療のための抗ウイルス剤としてのＩＬ−８剤の使用も提供する。本発明によると、アドリアマイシン、シクロホスファミド及びメトトレキセートを含めた（但し、これらに限定されない）、他の抗癌剤と組み合わせた、オンコウイルスによって誘発される癌に対する抗ウイルス剤としてのＩＬ−８剤の使用をも提供する。本発明によると、免疫抑制された患者及び動物におけるウイルス感染症の予防及び治療のための抗ウイルス剤としてのＩＬ−８剤の使用をも提供する。免疫抑制された患者とは、器官又は組織移植を受けて、アザチオプリン、コルチコステロイド類、アドリアマイシン、シクロホスファミド及びメトトレキセートを包含する（但し、これらに限定されない）免疫抑制剤によって治療される患者を含む。免疫抑制された患者はまた、アドリアマイシン、シクロホスファミド及びメトトレキセートを含めた（但し、これらに限定されない）抗癌性化学療法剤によって治療された又は治療されない、任意の形態の癌又は腫瘍疾患を有する患者を含む。免疫抑制された患者はさらに、コルチコステロイド、メトトレキセート、アザチオプリン及びシクロホスファミドを含めた（但し、これらに限定されない）、抗炎症剤によって治療された炎症性疾患を有する患者を含む。免疫抑制された患者はさらに、熱傷損傷を含めた（但し、これに限定されない）、ショック若しくは重度な外傷を有する患者、又は慢性血液透析（chronic hemodialys is）を受ける患者を包含する。本発明によると、他の抗ウイルス剤と組み合わせた、免疫抑制された患者及び動物におけるウイルス感染症に対する抗ウイルス剤としてのＩＬ−８剤の使用をも提供する。本発明によると、薬理学的に受容される治療有効量のインターロイキン−８剤を薬剤学的に受容されるキャリヤーと共に含む抗ウイルス性薬剤製剤（antivira l pharmaceutical formulation）をも提供する。本発明によると、ヒト及び動物におけるウイルス感染症を予防又は治療する方法であって、このような治療を必要とするヒト又は動物に、薬理学的に受容される治療有効量のインターロイキン−８剤を投与することを含む上記方法をも提供する。図面の簡単な説明図１Ａ〜１Ｆは、ＳＣＩＤマウスにおけるＥＢＶ誘導腫瘍増殖と巨脾腫（sple nomegaly）に対するＩＬ−８の阻害効果を説明する。図２Ａ、２Ｂ及び２Ｃは、ヒト好中球におけるＥＢＶ誘導Ｃａ²⁺動員（mobili zation）に対するＩＬ−８とＧｒｏαとの効果を説明する。図３Ａと３Ｂは、ヒト好中球におけるＥＢＶ誘導Ｃａ²⁺動員（Ａ）とＲＮＡ合成（Ｂ）とに対する百日咳毒素の効果を説明する。図面に関連する、好ましい実施態様の説明（ｉ）ＩＬ−８剤本発明のＩＬ−８剤は、７２アミノ酸形のＩＬ−８［ＳｅｒＩＬ−８］₇₂、又は７７アミノ酸形のＩＬ−８［ＡｌａＩＬ−８］₇₇、又は［ＳｅｒＩＬ− ８］₇₂若しくは［ＡｌａＩＬ−８］₇₇の誘導体若しくは類似体（analogs）である。ＩＬ−８に対するアミノ酸の軽度な添加又は欠失がＩＬ−８の活性をやや変化させる、即ち、強化又は低下させることは、当該技術分野において公知である。したがって、ＩＬ−８の誘導体又は類似体は、種々な生物学的系においてＩＬ−８の生物学的活性に類似した重要な生物学的活性を示す修飾ペプチドをも包含する。本発明に関連した重要な生物学的活性は、非限定的に、ＩＬ−８の抗ウイルス活性に類似した抗ウイルス活性を包含する。ＩＬ−８剤なる用語は、［ＳｅｒＩＬ−８］₇₂若しくは［ＡｌａＩＬ−８］₇₇のような、生物学的活性な変異体(variant)を包含する。タンパク質修飾［ＳｅｒＩＬ−８］₇₂又は［ＡｌａＩＬ−８］₇₇の類似体又は誘導体（変異体）は、ネイティブな［ＳｅｒＩＬ−８］₇₂又は［ＡｌａＩＬ−８］₇₇のアミノ酸配列又は他の特徴が共有結合的に又は非共有結合的に修飾されている分子として定義される。したがって、変異体（variants）は約１０ｋＤの分子量（例えばβ−メルカプトエタノール又はジチオトレイトールのような還元剤の不存在下でおこなわれるＳＤＳ−ＰＡＧＥによって測定）を有することも有さないこともできる。アミノ酸配列変異体は［ＳｅｒＩＬ−８］₇₂又は［ＡｌａＩＬ −８］₇₇の対立遺伝子相対物(allelic relatives)を包含するのみでなく、それらの予定された突然変異体をも包含する。一般に、アミノ酸配列変異体はネイティブの［ＳｅｒＩＬ−８］₇₂又は［ＡｌａＩＬ−８］₇₇のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％相同性、より典型的には、少なくとも約９０％相同性を有するアミノ酸配列を有する。今後は、ＩＬ−８剤なる用語は、他に指定しないかぎり、ネイティブ配列又は変異形のいずれかを意味するものとする。したがって、ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５５：９７，１９９４）に記載されるようなヒト［ＡｌａＩＬ−８］₇₇アミノ酸配列を有する［ＡｌａＩＬ−８］₇₇、例えばウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、イヌ、ネズミ、ネコ［ＡｌａＩＬ−８］₇₇等のような、他の種からの類似した［ＡｌａＩＬ−８］₇₇タンパク質並びに、その生物学的活性を示す［ＡｌａＩＬ−８］₇₇ タンパク質の対立遺伝子及びｉｎｖｉｔｒｏ発生共有結合誘導体を含めた、これらの［ＡｌａＩＬ−８］₇₇分子の生物学的に活性なアミノ酸配列変異体が本発明の範囲内に包含される。ＩＬ−８剤の誘導体とアミノ酸配列変異体とが、本明細書の他の箇所に記載するように、治療的有用性を意味する、それらの生物学的活性に関して有用である。共有結合修飾ｉｎｖｉｔｒｏ合成によって都合よく製造される、ＩＬ−８剤の共有結合修飾は、本発明の範囲内に包含される。このような修飾は、精製タンパク質又は粗タンパク質の標的アミノ酸残基を、選択された側鎖又は末端残基と反応することができる有機誘導体形成剤(organic derivatizing agent)と反応させることによって分子中に導入することができる。得られた共有結合誘導体は変化した生物学的活性及び／又は生体内利用可能性(bioavailability)を有する可能性がある。したがって、共有結合修飾されたＩＬ−８剤は、ｉｎｖｉｖｏ投与時に徐々に形質転換してより活性な分子（非誘導体化ＩＬ−８剤）になる、低い生物学的活性を有するプロドラッグでありうる。変異体は、化合物の遅延した処理(retarde ddisposition)（代謝及び／又は除去の減少）を生じる意味で変化したＩＬ−８剤の代謝的により安定で、生物学的に活性な類似体であることもできる。配列修飾［ＳｅｒＩＬ−８］₇₂又は［ＡｌａＩＬ−８］₇₇のアミノ酸配列変異体も製造することができる。このような変異体は、例えば、ネイティブ［ＳｅｒＩＬ−８］₇₂又は［ＡｌａＩＬ−８］₇₇のアミノ酸配列内の残基からの欠失、又は残基の挿入若しくは置換を包含する。欠失、挿入及び置換の任意の組合せをおこなって、所望の活性を有する変異体を製造することができる。遺伝的なレベルでは、これらの変異体は通常、［ＡｌａＩＬ−８］₇₇をコードするＤＮＡにおけるヌクレオチドの部位特異的突然変異誘発と、それによる変異体をコードするＤＮＡの作製と、その後の組換え細胞培養物中のこのＤＮＡの発現とによって製造される。これらの変異体は典型的に、天然生成類似体と同じ質的な生物学的活性を示す。［ＡｌａＩＬ−８］₇₇は凝集してダイマーになることができるので、一方又は両方のサブユニットが変異体である、ヘテロダイマー及びホモダイマーを提供することが本発明の範囲内である。両方のサブユニットが変異体である場合には、アミノ酸配列の変化は各サブユニット鎖に関して同じでも異なってもよい。ヘテロダイマーは、両方のサブユニットをコードするＤＮＡによって宿主細胞を同時形質転換し、必要に応じて、所望のヘテロダイマーを精製することによって、又はサブユニットを別々に合成し、サブユニットを解離し、解離されたサブユニットを混合し、サブユニットを再会合させることによって容易に製造される。ＩＬ−８剤なる用語は、ＩＬ−８受容体に対する抗体、又はＩＬ−８、若しくは例えば抗ウイルス性効果のような、ＩＬ−８様生物学的応答を誘発する、ＩＬ −８の上記類似体若しくは変異体の１つに対して生じた抗体に対する抗イディオタイプ抗体をも包含する。ＩＬ−８剤なる用語はさらに、ＩＬ−８受容体（Ａ型若しくはＢ型）、又はＩＬ−８を結合する他の受容体、又はこれらの受容体の選択された領域に対応するペプチド、又はＩＬ−８受容体若しくは、ＩＬ−８と結合する他の受容体に対するウイルス粒子の結合を防止する、ウイルスエンベロープのタンパク質（又は糖タンパク質若しくはリンタンパク質）若しくはこれらのタンパク質の選択された領域に対応するペプチドをも包含する。ＩＬ−８剤なる用語はさらに、ＩＬ−８受容体（又はＩＬ−８と結合する他の受容体）の類似体若しくは変異体；これらの受容体の選択された領域に対応するペプチドの類似体若しくは変異体；ウイルスエンベロープのタンパク質（又は糖タンパク質若しくはリンタンパク質）の、若しくはこれらのタンパク質の選択された領域に対応するペプチドの類似体若しくは変異体をも包含する。しかし、ＩＬ−８剤なる用語は、下記式を有する約１７アミノ酸のペプチドを包含しない：Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｘａａ₁−ＣｙｓＸａａ₂−Ｘａａ₃−Ｘａａ₄−Ｘａａ₅−Ｘａａ₆−Ｘａａ₇−Ｘａａ₈−Ｘａａ₉−Ｘａａ₁₀−Ｘａａ_ll− Ｘａａ₁₂ 式中、Ｘａａ₁はＧｌｎ、Ｍｅｔ又はＶａｌであり；Ｘａａ₂はＩｌｅ又はＶａｌであり；Ｘａａ₃はＬｙｓ、Ｇｌｎ又はＳｅｒであり；Ｘａａ₄はＴｈｒ又はＩｌｅであり；Ｘａａ₅はＴｙｒ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、ＨｉＳ、Ｖａｌ又はＴｈｔであり；Ｘａａ₆はＳｅｒ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ又はＡｌａであり；Ｘａａ₇はＬｙｓ、Ａｒｇ又はＨｉｓであり；Ｘａａ₈は不存在であるか、又はＰｒｏ、Ｐｈｅ若しくはＧｌｙであり；Ｘａａ₉は不存在であるか、又はＰｈｅ、Ｉｌｅ若しくはＶａｌであり；Ｘａａ₁₀は不存在であるか、又はＨｉｓ、Ｌｙｓ若しくはＡｒｇであり；Ｘａａ₁₁は不存在であるか、又はＰｒｏ、Ｌｅｕ若しくはＰｈｅであり；Ｘａａ₁₂は不存在であるか、又はＬｙｓ、Ｈｉｓ若しくはＡｒｇである。（ｉｉ）ウイルス感染症本発明によってＩＬ−８剤によって治療することができるウイルス感染症は、ヒト及び動物のウイルスによって引き起こされる感染症である。 “ヒト及び動物のウイルス”なる表現は、非限定的に、一般にＤＮＡ及びＲＮＡウイルスと、ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２以外のレトロウイルス科を包含するように意図される。ＤＮＡウイルスは、非限定的に、パルボウイルス科、パポバウイルス科、アデノウイルス科、ヘルペスウイルス科、ポックスウイルス科及びヘパドナウイルス科(hepadnaviridae)を包含する。ＲＮＡウイルスは、非限定的に、レトロウイルス科、ピコナウイルス科、トガウイルス科、オルトミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、コロナウイルス科、レオウイルス科、オンコナウイルス科(oncornaviridae)及びフィロウイルス科を包含する。Ｅｏｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルス（ＥＢＶ）に対するＩＬ−８の抗ウイルス活性はｉｎｖｉｖｏにおいて研究されている。Ｂリンパ球及びＴリンパ球の不存在を特徴とするＳＣＩＤマウスがしばしば、ＥＢＶ感染ドナーからの末梢血リンパ球によって再構成されたときに、Ｂリンパ腫を発症することは周知である。この感染症は巨脾腫、腹腔の拡大及び下痢を付随する。したがって、ＳＣＩＤマウスはウイルス病原体に関係するヒトリンパ腫発生の重要なｉｎｖｉｖｏモデルである。ＩＬ−８の抗ウイルス活性を評価するために、ＥＢＶ形質転換Ｂ細胞（Ｂ９５−８細胞系統）をＳＣＩＤマウスに腹腔内注入し；次に、以下の表１による種々なスケジュールに従ってＩＬ−８を腹腔内投与した。表１ＥＢＶ感染ＳＣＩＤマウスに対するＩＬ−８の効果についてのｉｎｖｉｖｏ試験のプロトコールＥＢＶ感染Ｂ９５−８細胞（６０ｘ１０⁶）をＳＣＩＤマウスに腹腔内（ＩＰ）注入した。指定時点において、マウスを組換えＩＬ−８によって処置した。４９日間後に、マウスを殺して、剖検した。各グループは３匹のマウスから構成された。ＩＬ−８は常に、０．１％ＢＳＡを含有する０．９％ＮａＣｌ中の溶液である２５μｇボラス（ＩＰ）／マウスとして投与した。感染後４週間目に、Ｂ９５−８細胞のみで処置されたマウスは腹部腫脹の発生によって評価される腹腔の顕著な炎症を示し、このモデルにおける腫瘍増殖の特徴である下痢を有した。これとは対照的に、１週間の間隔をおいて２５μｇのＩＬ−８によって５回処置されたマウス（グループ６）では、このような症状は観察されなかった。２５μｇのＩＬ−８によって連続６日間処置されたマウス（グループ５）では、感染後４週間目に下痢が観察されたが、この下痢は感染した非処置動物（グループ３）におけるよりも重度ではなかった。２５μｇのＩＬ−８によって１回のみ処置されたマウス（グループ２）では、感染後の４週間目に観察された腹腔内炎症と下痢とが、グループ３の感染した非処置動物におけると同程度に重度であった。４週間目に、グループ１、２及び６の動物は正常に見え、上記症状を示さなかった。グループ３の動物は感染後第５週と第６週の経過中に死亡し；剖検は脾臓と肝臓のレベルにおける大量の出血を明らかにした。感染後７週間目に、全てのグループの生存動物を殺して、剖検した。ＩＬ−８によって１回のみ処置された感染動物（グループ４）は明白な巨脾腫を示し、図１Ｂに示すように、約０．７ｃｍ直径の腫瘍が各マウスに発見された。感染していない非処置動物（グループ１）では、脾臓は正常であり、図１Ａから明らかであるように、腫瘍は存在しなかった。２５μｇのＩＬ−８によって連続６日間処置された動物（グループ５）では、巨脾腫と腫瘍とが観察されたが、これらはグループ４の動物に比べると軽度であった。１週間の間隔を置いて２５ μｇのＩＬ−８によって４回処置された動物（グループ６）では、腫瘍が検出されず、脾臓（及び他の器官）は非感染動物（グループ１と２）の脾臓から形態学的に区別されなかった。ｉｎｖｉｖｏにおけるＥＢＶに対するＩＬ−８の抗ウイルス活性をさらに、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣｓ）によって再構成され、以下の表２に従ってＩＬ−８によって処置された又はされないＳＣＩＤマウスのモデルにおいても研究した。表２ＰＢＭＣＳ−ＨＵ−ＳＣＩＤマウスのＥＢＶ感染に対するＩＬ−８の効果についてのｉｎｖｉｖｏ試験のプロトコール全ての動物は４０ｘ１０⁶ヒトＰＢＭＣｓ（０．５ｍｌのＰＢＳ中、ｉ．ｐ．注入）を受けた。５日間後に、グループ３と４の動物をＥＢＶ（０．５ｘ１０⁶ ＴＦＵ／マウス、ｉ．ｐ．注入）によって感染させ、全ての動物を０、６、１３、２０及び２７日目に生理食塩水又はＩＬ−８によって処置した。ＩＬ−８は常に、ＮａＣｌ：グルコース＋０．１％ＢＳＡ中の溶液である２５μｇボラス（ｉ．ｐ．）として投与した。処置の３１日間後に、マウスを殺した。結果は以下の表３に示す。感染後２２〜２３日目に、グループ３の若干の動物は感染症の症状を示し、２４〜２５日目に致死が観察された。１週間の間隔を置いて２５μｇ（ｉ．ｐ．）のＩＬ−８によって５回処置されたＥＢＶ感染動物（グループ４）では、症状の出現は２６〜２７日目まで遅延した；このグループでは、致死も遅延し、最初の動物死亡は２８日目に見られた。３１日目までに、グループ４の５匹中の２匹に対して、グループ３の８匹のうち６匹が死亡した。生存動物を殺し（３１日目）、剖検した；両グループの生存動物の間で腫瘍のサイズと数並びに脾臓サイズに明白な差はなかった。グループ１と２の動物は症状を全く示さなかった。表３ＰＢＭＣｓ−ＨＵ−ＳＣＩＤマウスのＥＢＶ感染症状（及び致死）に対するＩＬ−８の効果についてのｉｎｖｉｖｏ試験のプロトコール（１）観察された感染症関連症状は腫瘍増殖による腹部腫脹、痩せ及び活動低下（無気力）であった。（２）このグループは最初に１０匹を含有したが；ヒトＰＢＭＣ移植（血清中のＩｇＧと抗ウイルス抗体との存在によって評価）が２匹において不成功であったので、８匹のみを検討した。ＮａＣｌ：グルコース＋０．１％ＢＳＡによって又はＩＬ−８のみによって処置されたマウス（グループ１とグループ２）では異常（３１日目まで）が検出されなかった。ＥＢＶがｉｎｖｉｔｒｏでヒト好中球と相互作用して、ＲＮＡ及びタンパク質合成を調節することが最近、判明している。ＩＬ−８がヒト好中球において形状変化と、細胞内遊離Ｃａ²⁺濃度（［Ｃａ²⁺］ｉ）の一時的上昇とを誘発することが知られている。ＥＢＶが単離されたヒト好中球中の［Ｃａ²⁺］ｉに対して類似するが同じではない（Ｃａ²⁺蓄積の動力学が異なる）効果を誘発することが観察された。したがって、本発明者等は、好中球における［Ｃａ²⁺］ｉのＥＢＶ誘発上昇に対するＩＬ−８の効果を研究した。蛍光プローブＦＵＲＡ−２／ＡＭを負荷され、ＥＢＶへの暴露の前又は後にＩＬ−８又はＧｒｏαによって処理されたヒト好中球におけるＣａ²⁺動員をモニターした。ＥＢＶによって誘発された［Ｃａ²⁺］ｉの上昇は、好中球をＩＬ−８によって前処理した場合には、強度に抑制された。他方では、好中球のＥＢＶ前処理はＩＬ−８又はＧｒｏαの効果を抑制しなかった（図２Ａ、２Ｂ、２Ｃ）。ＩＬ−８受容体はＧタンパク質共役型受容体であるので、本発明者等は次にＥＢＶ誘発Ｃａ²⁺動員とＲＮＡ合成とにおけるＧタンパク質の可能な関与を、グアニンヌクレオチド結合調節タンパク質（Ｇタンパク質）の既知阻害剤である百日咳毒素によって好中球を前処理することによって試験した。得られた結果は、百日咳毒素がＥＢＶによって誘発される、Ｃａ²⁺動員とＲＮＡ合成とを顕著に阻害することを示し、これらのＥＢＶ誘発イベントがＧタンパク質によって仲介されることを示唆した。ＩＬ−８の抗ウイルス及び／又は抗腫瘍効果に関与する機構は不明であるが、ＩＬ−８が腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）又はインターフェロンの産生のような、自然抗ウイルス機構を誘発又は増強することを仮定することができる。或いは、単離好中球に対するＥＢＶ誘発生物学的効果に対するＩＬ−８の観察された効果を想定するならば（図２と３）、ＥＢＶとその標的細胞との相互作用がＩＬ−８受容体（又はＩＬ−８を認識しうる結合部位）を関係させることも可能であり、この場合には、ＩＬ−８は結合部位に関する競合（立体障害）、又は受容体内在化(receptor internalization)の誘発のいずれかによってウイルス−標的細胞相互作用を妨害することができる。或いは、標的細胞のＩＬ−８に対する暴露が受容体機能と、付着、内在化、複製及び、自然細胞抗ウイルス機構の阻害を包含するウイルス感染の過程に関与するシグナル伝達とをダウンレギュレートすることが考えられる。このような仮説は、ケモカイン受容体関連タンパク質が種々なウイルスによってコードされ、感染細胞の形質膜上に発現されるという最近の報告によって支持される。ＥＢＶ系では、ウイルスが形質転換細胞におけるＢＬＲ− １（恐らく、ＥＢＩ−２に等しい）及びＢＬＲ−２（ＥＢＩ−１に等しい）受容体を誘導することが知られており、これらの受容体はＩＬ−８受容体に高度に相同なＧタンパク質共役型受容体である。ＥＢＶ感染細胞上にＩＬ−８受容体に相同な、これらのサイトカイン受容体が発現することは、ＩＬ−８受容体を有さないＢ細胞であるこれらの感染細胞をＩＬ−８の推定される抗ウイルス活性を受けやすいものにすることができる。これらの仮説はＩＬ−８の抗ウイルス活性の推定される機構をある程度理解するために与えるが、本発明の範囲を限定するものではない。これらの結果は、ＩＬ−８が癌ウイルスによって引き起こされる、ウイルス感染症及び癌の治療に有用でありうることを実証する。（ｉｉｉ）投与量範囲インターロイキン−８剤の治療投与量の大きさは、治療されるべき状態の性質と重症度、特定のＩＬ−８剤、他の活性化合物の随伴使用とその投与経路によって変化し、臨床的判定に基づいて決定される。インターロイキン−８剤の治療投与量の大きさは、個々の患者の年齢、体重及び応答によっても変化する。したがって、ＩＬ−８剤の有効投与量は臨床医によって患者のために最良の判定の全ての基準と使用を検討した後に薬物動態的研究によって決定されることができる。一般に、有効投与量は血液中約１〜１００ｎＭである。したがって、臨床医は血液中でこのような濃度を生じるような用量を投与する。（ｉｖ）薬剤組成物哺乳動物、特にヒトに本発明のＩＬ−８剤の有効量を投与するために、任意の投与経路を用いることができる。例えば、投与量を経口的に、非経口的に、局所的に、動脈内に、腹腔内に、静脈内に、胸膜腔内に、眼内に、注射によって、皮下等に投与することができる。注射は灌流及び連続注入をも含むと理解される。投与形は錠剤、カプセル剤、粉末、溶液、分散系、懸濁液、クリーム、軟膏及びエアゾールを包含する。本発明の薬剤組成物は有効成分としてのＩＬ−８剤と、薬剤学的に受容されるキャリヤーと、任意の他の治療的成分とを含む。該組成物は経口投与又は非経口投与に適した組成物を包含する。これらの組成物を単位投与形で提示し、製薬技術分野で周知の任意の方法によって製造することが便利である。単位投与形は徐放性の単位投与形であることができる。実際の使用では、ＩＬ−８剤を有効成分として、慣用的な薬剤配合方法に従って、薬剤キャリヤーと組み合わせて、密接な混合剤を形成することができる。キャリヤーは投与のために望ましい製剤形態に依存して、非常に多様な形態をとることができる。経口投与形のための組成物の製造では、例えば懸濁液、エリキシル剤及び溶液のような経口液体製剤の場合には、例えば水、グリコール、油、アルコール、フレーバー剤、防腐剤、着色剤等のような、通常の薬剤媒質のいずれかを用いることができる、；又は例えば粉末、カプセル剤及び錠剤のような経口固体製剤の場合には、例えば澱粉、砂糖、微結晶質セルロース、希釈剤、顆粒化剤(granulating agent)、滑沢剤、結合剤、崩壊剤等のようなキャリヤーを用いることができる。錠剤とカプセル剤は、それらの投与が容易であるために、最も有利な経口投与単位形であり、これらの場合には固体薬剤キャリヤーが用いられる。必要な場合には、標準的な水性又は非水性方法によって錠剤を被覆することができる。経口投与に適した、本発明の薬剤組成物は、それぞれ予め定められた量のＩＬ −８剤を含有する、例えばカプセル剤、カシェ剤若しくは錠剤のような個別の単位として、又は粉末若しくは顆粒として、又は水性液体中、非水性液体中、水中油エマルジョン中若しくは油中水エマルジョン中の、溶液若しくは懸濁液として提示されることができる。このような組成物は任意の製薬方法によって製造することができ、このような方法は１種類以上の必要成分を包含するキャリヤーと、ＩＬ−８剤を結合させる工程を含む。一般に、これらの組成物はＩＬ−８剤を液体キャリヤー又は微粉状固体キャリヤー又は両方と均一にかつ密接に混合し、次に、必要な場合には、生成物を所望の状態に成形することによって製造される。例えば、錠剤は、任意に１種類以上の補助的な成分と共に圧縮又は成形することによって製造することができる。圧縮錠剤は適当な装置内で任意に結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、界面活性剤又は分散剤と混合した、例えば粉末又は顆粒のような、自由流動形の有効成分を圧縮することによって製造することができる。成形錠剤は適当な装置内で、不活性液体希釈剤によって湿らせた粉状コンパウンドの混合物を成形することによって製造することができる。ＩＬ−８剤は、患者に対して有害でない量、又は個々の患者における有害な副作用よりも利益が勝るような量と理解すべきである薬理学的又は生理的に受容される量で投与されるべきであることは理解されるであろう。同様に、ＩＬ−８剤は、予定の治療目標を満たし、インターロイキン−８剤の投与から得られる利益を与える量であると理解すべきである治療有効量で投与されるべきである。実施例ｉｎｖｉｖｏ試験実施例１ｉｎｖｉｖｏでＥＢＶ形質転換細胞に感染したＳＣＩＤマウスに対するＩＬ− ８の抗ウイルス効果生後８週間の雌のＳＣＩＤ−ＣＢ１７マウス（ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒ，Ｓｔ．Ｃｏｎｓｔａｎｔ，カナダ）をこの試験に用いた。それぞれ３匹のマウスの６グループを形成し、ＥＢＶ形質転換細胞によって感染させ、上記表１に要約するようにＩＬ−８によって処置した又は処置しなかった（グループ３〜６）。０日目に、Ｂ９５−８細胞（６０ｘ１０⁶）をＳＣＩＤマウスに腹腔内（ＩＰ）注入した。マウスは、指定された場合には、さらにＩＬ−８の１回以上の注入（ＩＰ）も受けた（グループ２、４〜６）（２５μｇ／マウス／注入）（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社、ＲｏｃｋｙＨｉｄ、ＮＪ）。用いたＩＬ−８は７２アミノ酸形であり、０．１％ＢＳＡを含有するＮａＣｌ０．９％中の溶液として用いた。処置の７週間後に、マウスを頚部脱臼によって殺し、剖検した。腫瘍と他の重要な組織とを写真撮影し（図１Ａ〜１Ｆ）、切断して、免疫蛍光試験とウイルスＤＮＡ分析とのために凍結保存した。図１Ａは非感染非処置マウス（グループ１）を説明する。図１Ｂと１ＣはＢ９５−８細胞による感染後３０分間目にＩＬ−８の１回注入によって処置されたＥＢＶ感染マウスを説明する（グループ４）。図１Ｂと１Ｃは同じ動物の腹腔を示し、図１Ｃはクローズアップ写真である（グループ４）。図１ＤとＩＥはＢ９５−８細胞による感染後３０分間目に開始して連続４週間にわたって週１回、ＩＬ−８によって処置されたＥＢＶ感染マウスを説明する（グループ６）。図１Ｆは、ＩＬ−８によって１回処置された（左）、ＩＬ−８によって４回処置された（中央）、及び処置されなかった（右）ＥＢＶ感染マウスの腹腔を示す。実施例２ヒト末梢血単核細胞によって再構成されたＳＣＩＤマウス（ＰＢＭＣｓ−ｈｕ− ＳＣＩＤ）のＥＢＶ感染に対するＩＬ−８の抗ウイルス効果健全なヒト被験者に対してリンホフェレシス(lymphopheresis)をおこなった。細胞を１時間にわたって回収し、Ｆｉｃｏｌｌ勾配上で７５０ｘｇにおいて２５分間精製した。ＰＢＭＣｓを次にＰＢＳ中で洗浄し、Ｃ．Ｂ．−１７／ＳＣＩＤマウス（生後４〜５週間）に腹腔内（ｉ．ｐ．）注入した（４０ｘ１０⁶細胞／０．５ｍｌＰＢＳ／マウス）。５日間後に、マウスを４グループに分けて、これらの動物をＥＢＶの腹腔内注入（５０μｌの１０⁷ＴＦＵ／ｍｌ／マウス）によって感染させ、表２に指定するように、ＩＬ−８によって処置した又は処置しなかった。ＩＬ−８は０．１％ＢＳＡを含むＮａＣｌ：グルコース中の溶液として用いた。処置の４週間後に、マウスを頚部脱臼によって殺し、剖検した。重要な組織を取り出し、分子分析のために凍結保存した。ｉｎｖｉｔｒｏ試験実施例３単離ヒト好中球中のＥＢＶによって誘導されたカルシウム動員に対するＩＬ−８（及びＧｒｏα）の阻害効果好中球懸濁液（１０ｘ１０⁶細胞／ｍｌ）を蛍光プローブＦｕｒａ−２／アセトキシメチルエステル（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｅ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）と共にインキュベートした（１μＭ、３０分間、３７℃）。次に、細胞を細胞外プローブを除去するように洗浄して、１．６ｍＭカルシウムを含有し、１０ｍＭＨＥＰＥＳを補充されたハンクスの平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）中に懸濁させた。Ｆｕｒａ−２負荷細胞の懸濁液をＥＢＶ（１０⁶形質転換単位［ＴＦＵ］／ｍｌ）と、ＩＬ−８又はＧｒｏα（１００ｎＭ）とによって異なる順序で処置した。蛍光（図２Ａ、２Ｂ、２Ｃ）をＡｍｉｎｃｏ−Ｂｏｗｍａｎ、シリーズ２Ａｐｐａｒａｔｕｓ（ＳＬＭ−ＡｍｉｎｃｏＮＲｏｃｈｅｓｔｅｒ）ＮＹ）を用いてモニターした（励起波長と発光波長、それぞれ、３４０ｎｍと５１０ｎｍ）。ＥＢＶ菌株Ｂ９５−８のウイルス製剤を既述したように作製した。簡単に説明すると、マイコプラズマを含まないと試験された(mycoplasma-free tested)Ｂ９５−８を、１０％熱不活性化ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ１６４０培地中で増殖させた。細胞の生存率が２０％未満であると判明したときに、細胞を含まない培養上澄み液を回収し、０．４５ｍｍ孔度フィルターに通して濾過して、ウイルス粒子を超遠心分離によってさらに精製した。ウイルス粒子を５ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．５）中に懸濁させ、１０〜３０％（重量／容積）デキストラン勾配での遠心分離によって精製した。濃縮されたウイルス製剤をＲＰＭＩ１６４０中に再懸濁させ、等分化して(aliquoted)、使用するまで−８０℃において貯蔵した。ウイルス力価は１ｘ１０⁷形質転換単位（ＴＦＵ）／ｍｌであることが判明した。図２Ａ、２Ｂ、２Ｃに示す結果をさらに下記で説明する：図２Ａ：ａ：Ｇｒｏα（１００ｎＭ）；ｂ：ＥＢＶ；ｃ：ＩＬ−８（１００ｎＭ）図２Ｂ：ａ：Ｇｒｏα（１００ｎＭ）；ｂ：ＩＬ−８（１００ｎＭ）；ｃ：ＥＢＶ図２Ｃ：ａ：ＥＢＶＩ／１０希釈、１０⁵ＴＦＵ／ｍｌ；ｂ：ＥＢＶ；ｃ：Ｇｒｏα（１００ｎＭ）；ｄ：ＩＬ−８（１００ｎＭ）実施例４ヒト好中球中のＥＢＶによる誘導される、Ｃａ²⁺動員と新規ＲＮＡ合成とに対する百日咳毒素の効果ヒト好中球（１０ｘ１０⁶細胞／ｍｌ）を０．５ｍｇ／ｍｌの百日咳毒素（Ｇタンパク質のＡＤＰリボシル化を触媒し、Ｇタンパク質仲介イベントを阻害する）の存在下でＥＢＶ（１０⁶ＴＦＵ／ｍｌ）又はＩＬ−８（１００ｎＭ）の刺激前の２時間にわたって３７℃において２時間プレインキュベートした。カルシウム動員を実施例２に述べるように測定した。結果は図３Ａに示す、図３Ａにおいて：ａ：ＩＬ−８による刺激ｂ：ＥＢＶによる刺激ｃ：百日咳毒素による前処置とＩＬ−８による刺激ｄ：百日咳毒素による前処置とＥＢＶによる刺激総ＲＮＡ中への［５−³Ｈ］ウリジンの組込みの測定によって、ＥＢＶ誘導ＲＮＡ合成を研究した。百日咳毒素（０．５ｍｇ／ｍｌ）によって前処理した又はしない好中球（５ｘ１０⁶細胞／ｍｌ）を１％熱不活性化（１時間、５６℃）自己血漿(autogenous plasma)を補充したＨＢＳＳ緩衝剤中に懸濁させた。この細胞懸濁液の１００ｍｌアリコートを９６穴マイクロタイタープレート中で１ｍＣｉの［５−³Ｈ］ウリジン［サンプルにつき］の存在下でインキュベートし、３ｎＭのＧＭ−ＣＳＦ（陽性対照）又は感染性ＥＢＶ（１０⁶ＴＦＵ／ｍｌ）によって処理した。プレートを５％ＣＯ₂を含有する湿った雰囲気中で３７℃において５時間にわたってインキュベートした。このインキュベーション期間歩に、細胞をガラス繊維ディスクに通しての濾過によって回収して、液体シンチレーションカウンターにおいて放射能を測定した。百日咳毒素はＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から入手し、０．０１％ＢＳＡを含有するＮａＣｌ０．９中の溶液として用いた。ＧｒｏαはＰｅｐｒｏｔｅｃｈから入手して、百日咳毒素に関して上述したように用いた。図３Ｂに説明した結果は６種類の異なる結果を表す（ＧＭ−ＣＳＦ、顆粒球− マクロファージコロニー刺激因子）。本発明をその特定の実施態様に関連して説明してきたが、本発明がさらに改変されうるものであり、本出願が一般に本発明の原理に従う、本発明の如何なる変化、用途、又は適用を包括するように意図され、本発明が属する技術分野内の公知の又は慣用的な実施に入り、本明細書に前述した及び以下の添付請求の範囲における本質的な特徴に適用されるような、本発明の開示からの離脱を含むことは理解されるであろう。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】平成１０年５月５日（１９９８．５．５）【補正内容】請求の範囲１．ヒト又は動物におけるウイルス感染症の治療に用いるためのインターロイキン−８剤の使用であって、前記ウイルス感染症がＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２以外のウイルスの感染症であり、前記インターロイキン−８剤が下記式：Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｘａａ₁−ＣｙｓＸａａ₂−Ｘａａ₃−Ｘａａ₄−Ｘａａ₅−Ｘａａ₆−Ｘａａ₇−Ｘａａ₈−Ｘａａ₉−Ｘａａ₁₀−Ｘａａ₁₁−Ｘａａ₁₂ ［式中、Ｘａａ₁はＧｌｎ、Ｍｅｔ又はＶａｌであり；Ｘａａ₂はＩｌｅ又はＶａｌであり；Ｘａａ₃はＬｙｓ、Ｇｌｎ又はＳｅｒであり；Ｘａａ₄はＴｈｒ又はＩｌｅであり；Ｘａａ₅はＴｙｒ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ又はＴｈｒであり；Ｘａａ₆はＳｅｒ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ又はＡｌａであり；Ｘａａ₇はＬｙｓ、Ａｒｇ又はＨｉｓであり；Ｘａａ₈は不存在であるか、又はＰｒｏ、Ｐｈｅ若しくはＧｌｙであり；Ｘａａ₉は不存在であるか、又はＰｈｅ、Ｉｌｅ若しくはＶａｌであり；Ｘａａ₁₀は不存在であるか、又はＨｉｓ、Ｌｙｓ若しくはＡｒｇであり；Ｘａａ₁₁は不存在であるか、又はＰｒｏ、Ｌｅｕ若しくはＰｈｅであり；Ｘａａ₁₂は不存在であるか、又はＬｙｓ、Ｈｉｓ若しくはＡｒｇである］を有する約１７アミノ酸のペプチドとは異なるものである上記使用。２．前記インターロイキン−８剤がインターロイキン−８タンパク質又は、インターロイキン−８の生物学的活性を有するインターロイキン−８の類似体である、請求項１記載の使用。３．ウイルス感染症がＤＮＡウイルス感染症又はＲＮＡウイルス感染症である、請求項１又は２に記載の使用。４．前記ウイルス感染症がパルボウイルス科、パポバウイルス科、アデノウイルス科、ヘルペスウイルス科、ポックスウイルス科及びヘパドナウイルス科から成る群から選択されたＤＮＡウイルスの感染症である、請求項３記載の使用。５．前記ウイルス感染症がレトロウイルス科、ピコナウイルス科、トガウイルス科、オルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、コロナウイルス科、レオウイルス科、オンコルナウイルス科及びフィロウイルス科から成る群から選択されたＲＮＡウイルスの感染症である、請求項３記載の使用。６．前記インターロイキン−８剤が７７アミノ酸のインターロイキン−８タンパク質である、請求項１記載の使用。７．前記インターロイキン−８剤が７２アミノ酸のインターロイキン−８タンパク質である、請求項１記載の使用。８．前記ウイルス感染症が、ＥＢＶ、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、ＣＭＶ、ＶＺＶ、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７及びＨＨＶ−８から成る群から選択される、ヘルペスウイルス科のウイルスの感染症である、請求項４記載の使用。９．前記ウイルス感染症が、ウシ下痢性ウイルスであるトガウイルス科の感染症である、請求項５記載の使用。１０．前記ウイルス感染症が、ブタエンテロウイルスであるピコナウイルス科の感染症である、請求項５記載の使用。１１．前記ウイルス感染症が、パラミクソウイルス科ウイルス又はウシＲＳウイルスの感染症である、請求項５記載の使用。１２．前記インターロイキン−８剤がインターフェロン−α、−β、−γ、腫瘍壊死因子−α、ガンシクロビル、アシクロビル、ビダラビン、イドクスウリジン、ファムシクロビル、プロスタグランジン類及びプロスタグランジン類似体類から成る群から選択される抗ウイルス剤と共に投与される、請求項１記載の使用。１３．前記ヒト又は動物が免疫抑制されたヒト若しくは動物、又はウイルス感染症の発症を高めることが知られている薬物によって治療されたヒト若しくは動物である、請求項１記載の使用。１４．前記薬物がアザチオプリン、コルチコステロイド類、アドリアマイシン及びメトトレキセートから成る群から選択される、請求項１３記載の使用。１５．ヒト又は動物においてオンコウイルスによって引き起こされる癌を治療するためのインターロイキン８剤の使用であって、前記インターロイキン−８剤が下記式：Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｘａａ₁−ＣｙｓＸａａ₂−Ｘａａ₃−Ｘａａ₄−Ｘａａ₅−Ｘａａ₆−Ｘａａ₇−Ｘａａ₈−Ｘａａ₉−Ｘａａ₁₀−Ｘａａ₁₁−Ｘａａ₁₂ ［式中、Ｘａａ₁はＧｌｎ、Ｍｅｔ又はＶａｌであり；Ｘａａ₂はＩｌｅ又はＶａｌであり；Ｘａａ₃はＬｙｓ、Ｇｌｎ又はＳｅｒであり；Ｘａａ₄はＴｈｒ又はＩｌｅであり；Ｘａａ₅はＴｙｒ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ又はＴｈｒであり；Ｘａａ₆はＳｅｒ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ又はＡｌａであり；Ｘａａ₇はＬｙｓ、Ａｒｇ又はＨｉｓであり；Ｘａａ₈は不存在であるか、又はＰｒｏ、Ｐｈｅ若しくはＧｌｙであり；Ｘａａ₉は不存在であるか、又はＰｈｅ、Ｉｌｅ若しくはＶａｌであり；Ｘａａ₁₀は不存在であるか、又はＨｉｓ、Ｌｙｓ若しくはＡｒｇであり；Ｘａａ₁₁は不存在であるか、又はＰｒｏ、Ｌｅｕ若しくはＰｈｅであり；Ｘａａ₁₂は不存在であるか、又はＬｙｓ、Ｈｉｓ若しくはＡｒｇである］を有する約１７アミノ酸のペプチドとは異なるものである上記使用。１６．前記インターロイキン８剤がアドリアマイシン、シクロホスファミド及びメトトレキセートから成る群から選択される抗癌剤と共に用いられる、請求項１５記載の使用。１７．薬理学的に受容される治療有効量のインターロイキン−８剤を、製薬的に受容されるキャリヤーと組み合わせて含む、ヒト又は動物におけるウイルス感染症を治療するための抗ウイルス性薬剤製剤であって、前記ウイルス感染症がＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２以外のウイルスの感染症であり、前記インターロイキン−８剤が下記式：Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｘａａ₁−ＣｙｓＸａａ₂−Ｘａａ₃−Ｘａａ₄−Ｘａａ₅−Ｘａａ₆−Ｘａａ₇−Ｘａａ₈−Ｘａａ₉−Ｘａａ₁₀−Ｘａａ₁₁−Ｘａａ₁₂ ［式中、Ｘａａ₁はＧｌｎ、Ｍｅｔ又はＶａｌであり；Ｘａａ₂はＩｌｅ又はＶａｌであり；Ｘａａ₃はＬｙｓ、Ｇｌｎ又はＳｅｒであり；Ｘａａ₄はＴｈｒ又はＩｌｅであり；Ｘａａ₅はＴｙｒ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ又はＴｈｒであり；Ｘａａ₆はＳｅｒ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ又はＡｌａであり：Ｘａａ₇はＬｙｓ、Ａｒｇ又はＨｉｓであり；Ｘａａ₈は不存在であるか、又はＰｒｏ、Ｐｈｅ若しくはＧｌｙであり；Ｘａａ₉は不存在であるか、又はＰｈｅ、Ｉｌｅ若しくはＶａ１であり；Ｘａａ₁₀は不存在であるか、又はＨｉｓ、Ｌｙｓ若しくはＡｒｇであり；Ｘａａ₁₁は不存在であるか、又はＰｒｏ、Ｌｅｕ若しくはＰｈｅであり；Ｘａａ₁₂は不存在であるか、又はＬｙｓ、Ｈｉｓ若しくはＡｒｇである］を有する約１７アミノ酸のペプチドとは異なるものである上記抗ウイルス性薬剤製剤。１８．ヒト又は動物におけるウイルス感染症を治療するための薬剤の製造へのインターロイキン８剤の使用であって、前記ウイルス感染症がＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２以外のウイルスの感染症であり、前記インターロイキン−８剤が下記式：Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｘａａ₁−ＣｙｓＸａａ₂−Ｘａａ₃−Ｘａａ₄−Ｘａａ₅−Ｘａａ₆−Ｘａａ₇−Ｘａａ₈−Ｘａａ₉−Ｘａａ₁₀−Ｘａａ₁₁−Ｘａａ₁₂ ［式中、Ｘａａ₁はＧｌｎ、Ｍｅｔ又はＶａｌであり；Ｘａａ₂はＩｌｅ又はＶａｌであり；Ｘａａ₃はＬｙｓ、Ｇｌｎ又はＳｅｒであり；Ｘａａ₄はＴｈｒ又はＩｌｅであり；Ｘａａ₅はＴｙｒ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ又はＴｈｒであり；Ｘａａ₆はＳｅｒ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ又はＡｌａであり；Ｘａａ₇はＬｙｓ、Ａｒｇ又はＨｉｓであり；Ｘａａ₈は不存在であるか、又はＰｒｏ、Ｐｈｅ若しくはＧｌｙであり；Ｘａａ₉は不存在であるか、又はＰｈｅ、Ｉｌｅ若しくはＶａｌであり；Ｘａａ₁₀は不存在であるか、又はＨｉｓ、Ｌｙｓ若しくはＡｒｇであり；Ｘａａ₁₁は不存在であるか、又はＰｒｏ、Ｌｅｕ若しくはＰｈｅであり；Ｘａａ₁₂は不存在であるか、又はＬｙｓ、Ｈｉｓ若しくはＡｒｇである］を有する約１７アミノ酸のペプチドとは異なるものである上記使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 37/02 Ａ６１Ｐ 37/02 43/00 １２１ 43/00 １２１ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者ダマイ，バッサムアメリカ合衆国ニュージャージー州08648, ローレンスヴィル，タウン・センター・ノース 4121

Claims

【特許請求の範囲】１．ヒト又は動物におけるウイルス感染症の治療のためのインターロイキン −８剤の使用。２．前記インターロイキン−８剤がインターロイキン−８タンパク質又は、インターロイキン−８の生物学的活性を有するインターロイキン−８の類似体である、請求項１記載の使用。３．ウイルス感染症がＤＮＡウイルス感染症又はＲＮＡウイルス感染症である、請求項１又は２に記載の使用。４．前記ウイルス感染症がパルボウイルス科、パポバウイルス科、アデノウイルス科、ヘルペスウイルス科、ポックスウイルス科及びヘパドナウイルス科から成る群から選択されたＤＮＡウイルスの感染症である、請求項３記載の使用。５．前記ウイルス感染症がレトロウイルス科、ピコナウイルス科、トガウイルス科、オルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、コロナウイルス科、レオウイルス科、オンコルナウイルス科及びフィロウイルス科から成る群から選択されたＲＮＡウイルスの感染症である、請求項３記載の使用。６．前記インターロイキン−８剤が７７アミノ酸のインターロイキン−８タンパク質である、請求項１記載の使用。７．前記インターロイキン−８剤が７２アミノ酸のインターロイキン−８タンパク質である、請求項１記載の使用。８．前記ウイルス感染症が、ＥＢＶ、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、ＣＭＶ、ＶＺＶ、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７及びＨＨＶ−８から成る群から選択される、ヘルペスウイルス科のウイルスの感染症である、請求項４記載の使用。９．前記ウイルス感染症が、ウシ下痢ウイルスであるトガウイルス科の感染症である、請求項５記載の使用。１０．前記ウイルス感染症が、ブタエンテロウイルスであるピコナウイルス科の感染症である、請求項５記載の使用。１１．前記ウイルス感染症が、パラミクソウイルス科ウイルス又はウシＲＳウイルスの感染症である、請求項５記載の使用。１２．前記インターロイキン−８剤がインターフェロン−α、−β、−γ、腫瘍壊死因子−α、ガンシクロビル、アシクロビル、ビダラビン、イドクスウリジン、ファムシクロビル、プロスタグランジン類及びプロスタグランジン類似体類から成る群から選択される抗ウイルス剤と共に投与される、請求項１記載の使用。１３．前記ヒト又は動物が免疫抑制されたヒト若しくは動物、又はウイルス感染症の発症を高めることが知られている薬物によって治療されたヒト若しくは動物である、請求項１記載の使用。１４．前記薬物がアザチオプリン、コルチコステロイド類、アドリアマイシン及びメトトレキセートから成る群から選択される、請求項１３記載の使用。１５．ヒト又は動物においてオンコウイルスによって引き起こされる癌を治療するためのインターロイキン８剤の使用。１６．前記インターロイキン８剤がアドリアマイシン、シクロホスファミド及びメトトレキセートから成る群から選択される抗癌剤と共に用いられる、請求項１５記載の使用。１７．薬理学的に受容される治療有効量のインターロイキン−８剤を、製薬的に受容されるキャリヤーと組み合わせて含む、抗ウイルス性薬剤製剤。