JP2000513564A

JP2000513564A - イヌｏｂタンパク質組成物及び方法

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Publication number: JP2000513564A
Application number: JP09531175A
Authority: JP
Inventors: ハーンデイ，ナターシヤ
Original assignee: アムジエン・インコーポレーテツド
Priority date: 1996-03-01
Filing date: 1997-02-28
Publication date: 2000-10-17
Also published as: AU2317397A; CA2247503A1; EP0912739A2; US20020142456A1; WO1997032022A3; HUP0000280A2; CN1217023A; KR19990087392A; WO1997032022A2; IL125933A0; HUP0000280A3

Abstract

(57)【要約】イヌＯＢタンパク質並びに関連組成物及び方法を提供する。イヌＯＢアミノ酸配列、関連核酸配列、ベクター、宿主細胞、組換え産生法、関連抗体及び／又は診断組成物、医薬組成物並びにトランスジェニック動物を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】イヌＯＢタンパク質組成物及び方法発明の分野本発明は、イヌＯＢタンパク質及び関連核酸、ベクター、宿主細胞、産生法、選択的結合分子、誘導体、医薬組成物並びに診断、治療及び美容法に関する。発明の背景分子基盤での肥満症は殆ど未解明であるが、「ＯＢ遺伝子」及びコードされるタンパク質（「ＯＢタンパク質」）の同定により、身体の体脂肪蓄積調節機構がいくらか解明された。Ｚｈａｎｇら，Ｎａｔｕｒｅ３７２：４２５−４３２（１９９４）；並びに、ｔｈｅＣｏｒｒｅｃｔｉｏｎａｔＮａｔｕｒｅ３７４：３７９（１９９５）を参照されたい。ＯＢタンパク質は、ｏｂ／ｏｂ突然変異マウス（該マウスはＯＢ遺伝子産物の産生に欠陥を有しているための肥満する）においても正常な野生型マウスにおいてもｉｎｖｉｖｏで活性である。生物学的活性は、なかでも体重の減少に徴候が表れる。概説としては、Ｂａｒｉｎａｇａ，“Ｏｂｅｓｅ”ＰｒｏｔｅｉｎＳｌｉｍｓＭｉｃｅ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２６９：４７５−４７６（１９９５）を参照されたい。例えば、ｏｂ／ｏｂ突然変異マウスにおいては、ＯＢタンパク質を投与すると、血清インシュリンレベル及び血清グルコースレベルが低下することは公知である。また、ＯＢタンパク質を投与すると、体脂肪が減少することも公知である。これは、ｏｂ／ｏｂ突然変異マウスにも肥満していない正常なマウスにも認められた。Ｐｅｌｌｅｙｍｏｕｎｔｅｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ２６９：５４０−５４３（１９９５）；Ｈａｌａａｓら，Ｓｃｉｅｎｃｅ２６９：５４３−５４６（１９９５）、さらにＣａｍｐｆｉｅｌｄら，Ｓｃｉｅｎｃｅ２６９：５４６− ５４９（１９９５）（μｇレベルのＯＢタンパク質を末梢及び中枢投与すると、ｏｂ／ｏｂマウス及び食餌誘発肥満マウスでは食物の摂取量と体重が減少したが、ｄｂ／ｄｂ肥満マウスでは減少しなかった）を参照されたい。これらの論文のいずれにおいても、最高用量を用いても毒性は認められていない。肥満動物、特に肥満ペットの治療法はまだ見つかっていない。肥満症は、高脂血レベル、動脈小斑、高コレステロール及び高血圧に随伴する心血管問題を引き起こし得る。また、II型糖尿病には肥満症が関与している。これらの状態は全て、イヌ、特に不適切なタンパク質又は脂肪レベルを有する食餌を与えられたイヌに存在し得る。さらに、特にショードッグ（show dog）の場合には、所望量の脂肪を有するイヌを繁殖させるのが望ましいか又は有益であると考えられる。従って、体重の減少、脂肪の減少、高若しくは異常脂血症又は糖尿病の治療を要するイヌに投与するのに安全且つ有効な治療又は美容組成物を有することが望ましい。発明の要旨本発明は、イヌＯＢタンパク質及び関連核酸、ベクター、宿主細胞、産生法、関連組成物並びにその製造法及び使用法を提供する。図面の簡単な説明図１：本発明のイヌＯＢタンパク質（リーダー配列の存在に関連してプレタンパク質と称される上部配列）と天然ヒトＯＢタンパク質（Ｚｈａｎｇら，前掲）（これもプレタンパク質と称される下部配列）との整列を示す。ＰｒｏｇｒａｍＭａｎｕａｌｆｏｒｔｈｅＷｉｓｃｏｎｓｉｎＰａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ８，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ１９９４，ＧｅｎｅｔｉｃｓＣｏｍｐｕｔｅｒＧｒｏｕｐ，５７５ＳｃｉｅｎｃｅＤｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，ＵＳＡを用いると、相似率は９０．４７６である。厳密にアミノ酸同定すると、同一率は８０．９５２である。図２：本発明のイヌＯＢタンパク質（これもプレタンパク質と称される上部配列）と天然ネズミＯＢタンパク質（Ｚｈａｎｇら，前掲）（これもプレタンパク質と称される下部配列）との整列を表す。上記図１におけるものと同じ分析を用いると、相似率は８６．９０５である。厳密にアミノ酸同定すると、同一率は７８．５７１である。図３：イヌ、ヒト、ネズミのＯＢタンパク質アミノ酸配列及び共通アミノ酸配列を示す。リストされている共通配列は保存されたアミノ酸領域に基づく。種間で異なる位置のアミノ酸は、最も優勢なアミノ酸を基準とする特定のアミノ酸に分類される。発明の詳細な説明本発明は、イヌＯＢタンパク質及び関連核酸、ベクター、宿主細胞、産生法、関連組成物並びにその製造法及び使用法を提供する。タンパク質組成物（下記の）全長のイヌＯＢタンパク質が配列番号１に示されている。リーダー配列は、（配列番号１のナンバリングに関して）−２１〜−１である。成熟タンパク質は、主として（配列番号１のナンバリングに関して）１〜１４６からなる。また、本発明のイヌＯＢタンパク質は、（配列番号１の成熟タンパク質のナンバリングに関して）＋２８位に存在するグルタミン（「Ｑ」）が存在するか又は不在であり得る。細菌での発現に付随するＮ末端メチオニン残基を加えて成熟タンパク質を発現させる方法を選択してもよい。あるいは、発現を容易にするために他のリーダー配列を付加する方法を選択してもよい。従って、本発明のイヌＯＢタンパク質は、以下のアミノ酸配列（配列番号１に関して）：（ａ） −２１〜１４６；（ｂ）＋１〜１４６；（ｃ）Ｎ末端メチオニンを含む＋１〜１４６（本明細書では「＋１〜１４６ｍｅｔ−１」と称される場合もある）；及び（ｄ）２８位のグルタミン残基が欠失した、上記サブパート（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）のいずれかのアミノ酸配列から選択し得る。以下により詳細に説明するように、本発明のイヌＯＢタンパク質は場合によって医薬上許容し得る稀釈剤、アジュバント又は担体と共に配合し得る。核酸組成物及び方法イヌＯＢタンパク質をコードする核酸が（下記の）配列番号２に示されている。本発明の新規な核酸配列は、以下のアミノ酸配列（配列番号１に関して）：（ａ） −２１〜１４６；（ｂ）＋１〜１４６；（ｃ）Ｎ末端メチオニンを含む＋１〜１４６；及び（ｄ）（配列番号１に関して）２８位のグルタミン残基をコードするコドンが欠失した、上記サブパート（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）のいずれかのアミノ酸配列から選択されるイヌＯＢタンパク質の真核生物又は原核生物宿主細胞中での発現を確実にするのに有用な配列を含む。核酸は、所望のコード領域が本発明のポリペプチドの産生、又は以下により詳細に説明する診断目的に有用であるように精製・分離し得る。本発明のＤＮＡ配列は、特に：（ａ）（下記の）配列番号２のＤＮＡ配列；（ｂ）（下記の）配列番号２のＤＮＡ配列の１〜１４６アミノ酸をコードする部分を含む。また、２８位のグルタミンが欠失したアミノ酸配列をコードする形態のもの及びイヌＯＢタンパク質をコードする合成されたＤＮＡ配列などの対立遺伝子変異形態のＯＢタンパク質をコードするＤＮＡ配列も含まれる。そのような合成配列は、Ａｌｔｏｎら，ＰＣＴ特許出願公開ＷＯ８３／０４０５３号の方法に従って容易に構築し得る。本発明のイヌＯＢタンパク質をコードするゲノムＤＮＡは、追加の非コード塩基、即ちイントロンを含み得、そのようなゲノムＤＮＡは、配列番号２で示されているｃＤＮＡの全て又は一部を、イヌゲノムＤＮＡライブラリーなどのゲノムＤＮＡ源にハイブリダイズさせることにより得ることができる。そのようなゲノムＤＮＡは機能性イヌＯＢタンパク質をコードする。しかし、ｃＤＮＡの使用は、コード領域のみしか関与しないために組換え操作が容易であるという点でより実用的であり得る。本発明の核酸配列は、選択された非哺乳動物宿主による発現に「好ましい」コドンの組み込み；制限エンドヌクレアーゼ酵素による切断部位の組込み；及び発現し易いベクターの構築を容易にする追加の初めの、末端又は中間ＤＮＡ配列の組込みを含み得る。また、本発明のＤＮＡに対するアンチセンス核酸も作製し得る。そのようなアンチセンス核酸は、ｉｎｖｉｖｏでのＯＢタンパク質の作用の調節に有用であり得る。例えば、細胞のイヌＯＢタンパク質産生能を効果的に不能にするアンチセンス核酸を作製し得る。本発明のＤＮＡ配列は、上記のようなイヌＯＢタンパク質及び関連タンパク質並びに他の哺乳動物種のｃＤＮＡ及びゲノムＤＮＡ配列をコードするヒトゲノムＤＮＡを分離する際に標識プローブとして用いるのにも適当な物質である。ＤＮＡ配列は、（例えば昆虫細胞における）種々の代替タンパク質合成法又は遺伝子療法においても有用であり得る。本発明のＤＮＡ配列は、産物を大量生産するための真核生物「宿主」としての役割を果たし得るトランスジェニック哺乳動物種の作出に有用であると期待される。概説としては、Ｐａｌｍｉｔｅｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ２２２：８０９−８１４（１９８３）を参照されたい。ベクター及び宿主細胞本発明の別の態様によれば、本明細書に記載のイヌＯＢタンパク質をコードするＤＮＡ配列は、該配列が、これまで利用し得なかった哺乳動物タンパク質のアミノ酸配列に関して提供する情報に関して価値を有する。言い換えれば、本発明により提供されるＤＮＡ配列は、新規且つ有用なウイルス性及び環状プラスミドＤＮＡベクター、（培養中で増殖させた細菌及び酵母細胞並びに哺乳動物細胞を含めた）新規且つ有用な形質転換及びトランスフェクトされた原核生物及び真核生物宿主細胞の作製、及びイヌＯＢタンパク質を発現し得るそのような宿主細胞の新規且つ有用な培養増殖法において有用である。本発明により提供されるＤＮＡ（又は対応ＲＮＡ）は、例えば、肥満症などのＯＢタンパク質の発現不良を特徴とする状態を治療するための遺伝子療法にも用い得る。現在、例えば肺に送出するために、（遺伝子療法用に且つ純度及び医薬許容性が改変されたレトロウイルス又はアデノウイルスベクターなどの）遺伝子療法に適したベクターを投与し得る。そのようなベクターには、所望の位置で発現させるために本発明のポリペプチドをコードする核酸を組込み得る。遺伝子療法は、所望タンパク質を得るために１種以上の遺伝子を含むベクターを用い得る。あるいは、宿主中での比較的安定な存在を容易にするように、ベクターを用いなくてもよい。例えば、同種組換えは宿主ゲノムへの組み込むを容易にし得る。（これは、例えば、米国特許第５，２７２，０７１号及びＷＯ９１／０９９５５号におけるように、産生目的で実施し得る。）細胞の取り込みを容易にするために、核酸を、脂質溶液キャリヤー（例えば、電荷脂質）、リポソーム又はポリペプチドキャリヤー（例えば、ポリリシン）などの医薬上許容し得るキャリヤー内に挿入してもよい。遺伝子療法に関する概説諭文は、Ｖｅｒｍａ，ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＡｍｅｒｉｃａｎ，１９９０年１１月，６８−８４ページ（該文献は本明細書に参照として組み込むものとする）である。本発明は、イヌＯＢタンパク質を産生させる方法も提供する。そのような産生法は、適当な条件下に、イヌＯＢタンパク質をコードするＤＮＡを含む宿主細胞を培養するステップを含む。本発明は、そのような宿主細胞のｉｎｖｉｔｒｏ集団を提供する。該宿主細胞は、真核生物細胞であっても原核生物細胞であってもよく、本発明により提供されるようなイヌＯＢタンパク質をコードするＤＮＡを含むベクターを包含し得る。あるいは、そのようなイヌＯＢタンパク質ＤＮＡ含有宿主細胞は、同種組換え（例えば、前掲の米国特許第５，２７２，０７１号及びＷＯ９１／０９９５５号を参照されたい）又はイヌＯＢタンパク質の発現を変えるための他の方法により修飾されていてもよい。次いで、回収して所望のイヌＯＢタンパク質を得る。場合によって、該イヌＯＢタンパク質をさらに精製又は処理して、所望の製剤を製造し得る。トランスジェニック動物イヌＯＢレベルが改変されたイヌを作出することが望ましい場合がある。これは、トランスジェニックイヌを作出することにより達成し得る。トランスジェニックイヌを作出する１つの方法は、典型的にはプロモーター及び所望のＤＮＡを含む「トランスジーン」を用いてイヌの胚を遺伝子操作する方法である。この場合、所望のＤＮＡは上記に列挙したものから選択し得る。プロモーターは肝臓特異的発現などの組織特異的発現用であってよい。次いで、このトランスジーンをイヌの胚に挿入する。これは、マイクロインジェクション又は他の手段により実施し得る。次いで、１個以上のそのような胚を擬妊娠育ての母イヌ中に移植する。胚が生長し、イヌが産まれる。当業者には、トランスジェニック動物の作出には他の手段があることが認識されよう。そのような動物は、イヌＯＢタンパク質の発現が増大し、それによって脂肪の少ない細身の動物になるように遺伝子挿入されるか、又は例えばトランスジーンとして欠陥イヌＯＢＤＮＡを用いることにより、イヌＯＢ発現を「ノックアウト」するように遺伝子挿入された動物であってもよい。そのような動物は一度に１匹以上作出し得（例えば、多胚移植及び多産）、そのような動物をさらに繁殖させることができる。従って、本発明は、イヌＯＢタンパク質の発現が改変されたトランスジェニックイヌを提供する。そのような改変は、イヌＯＢタンパク質発現の量（即ち、増加又は減少）に関するものも、位置（即ち、組織特異的発現）に関するものもあり得る。本発明はさらに、そのようなトランスジェニック動物の後代も提供する。そのような動物は、ペット用であっても、ショードッグであっても、繁殖目的のものであっても、ｉｎｖｉｖｏバイオアッセイを提供するためのものであってもよい。誘導体、医薬組成物本発明のタンパク質は、タンパク質成分に１種以上の化学成分を付加することにより誘導体化することもできる。化学修飾誘導体は、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、静脈内、経口、経鼻、肺、局所的又は他の投与経路用にさらに製剤し得る。生物学的に活性なタンパク質の化学修飾は、特定の環境下に、治療用タンパク質の安定性及び循環時間の増大や免疫原性の低下などのさらなる利点を提供することが知見されている。１９７９年１２月１８日に発行されたＤａｖｉｓらの米国特許第４，１７９，３３７号を参照されたい。概説としては、Ａｂｕｃｈｏｗｓｋｉら，ＥｎｚｙｍｅｓａｓＤｒｕｇｓ〔Ｊ．Ｓ．Ｈｏｌｃｅｒｂｅｒｇ及びＪ．Ｒｏｂｅｒｔｓ編，３６７−３８３ページ（１９８１）〕を参照されたい。タンパク質の修飾及び融合タンパク質を記載している概説論文は、Ｆｒａｎｃｉｓ，ＦｏｃｕｓｏｎＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒｓ３：４−１０（１９９２年５月）（Ｍｅｄｉｓｃｒｉｐｔ，ＭｏｕｎｔｖｉｅｗＣｏｕｒｔ，ＦｒｉｅｒｎＢａｒｎｅｔＬａｎｅ，ＬｏｎｄｏｎＮ２０，ＯＬＤ，ＵＫから出版）である。誘導体化用化学成分誘導体化に適した化学成分は、種々の水溶性ポリマーから選択し得る。選択されるポリマーは、付着するタンパク質が生理的環境などの水性環境で沈降しないように水溶性でなければならない。最終生成物製剤を治療用に用いる場合、ポリマーは医薬上許容し得るものであるのが好ましい。当業者は、ポリマー／タンパク質複合体を治療用に用いるかどうかを考慮し、また治療用に用いる場合には、所望の投薬量、循環時間、タンパク質加水分解に対する耐性及び他の要件を考慮して所望のポリマーを選択し得るであろう。本発明のタンパク質の場合、誘導体化の有効性は、所望の形態で（即ち、浸透ポンプによるか、より好ましくは、注射若しくは点滴によるか、又は、例えば、経口、肺若しくは経鼻送出するためにさらに製剤することにより）タンパク質又は誘導体を投与すること、及び本明細書に記載のように生物学的作用を観察することにより確実になり得る。水溶性ポリマーは、例えば、ポリエチレングリコール、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダム若しくは非ランダムコポリマー）、並びにデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール、ポリスチレンマレエート及びポリビニルアルコールからなる群から選択し得る。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、その水中での安定性の故に製造の際に有利であり得る。ポリマーの所望の分子量は、所望の特性及びポリマーの分岐度に基づいて経験的に決定し得る。融合タンパク質は、ＯＢタンパク質成分にポリアミノ酸を付着させることにより生産し得る。例えば、ポリアミノ酸は、タンパク質の循環半減期を増大させる役を果たす担体タンパク質であってよい。本発明の治療又は美容組成物の場合、そのようなポリアミノ酸は、中和抗原応答又は他の有害な応答を生起しないものでなければならない。そのようなポリアミノ酸は、血清アルブミン（例えば、イヌ血清アルブミン）、抗体若しくはその部分（例えば、「Ｆｃ」と称される場合もある抗体不変領域）又は他のポリアミノ酸からなる群から選択し得る。以下に示すように、ポリアミノ酸の付着位置は、ＯＢタンパク質成分のＮ末端又は他の位置であってよく、また、ポリアミノ酸リンカーなどの化学「リンカー」成分を介してＯＢタンパク質に結合させてもよい。そのように付着するポリマー分子の数は変化し得、当業者は機能に及ぼす作用を確認し得るであろう。同一又は異なる化学成分（例えば、種々の重量のポリエチレングリコールなどのポリマー）を用い、単誘導体化してもよいし、二、三、四誘導体化又はいくつか組み合わせて誘導体化してもよい。ポリマー分子とタンパク質（又はペプチド）との比率は、反応混合物中のそれそれの濃度に応じて変化する。一般に、（過剰な未反応タンパク質又はポリマーが存在しないという反応効率の点で）最適な比率は、所望の誘導体化度（例えば、単、二、三など）、選択されるポリマーの分子量、ポリマーが分岐しているか分岐していないか、及び反応条件などの要素に従って決定する。化学成分は、タンパク質の機能性又は抗原性ドメインに及ぼす作用を考慮してタンパク質に付着させなければならない。当業者が利用し得る多くの付着法が存在する。例えば、本明細書に参照として組み込むものとする（ＰＥＧをＧ−ＣＳＦに結合させる）ＥＰ０４０１３８４号や、〔トレシルクロリド（tresyl chlorido）を用いたＧＭ−ＣＳＦのペジル化（pegylation）を記載している〕Ｍａｌｉｋら，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２０：１０２８−１０３５（１９９２）を参照されたい。例えば、遊離アミノ基又はカルボキシル基などの反応性基を用いてもよい。遊離アミノ基を有するアミノ酸残基には、リシン残基やＮ末端アミノ酸残基が包含され得る。遊離カルボキシル基を有するものには、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基やＣ末端アミノ酸残基が包含され得る。反応性基としてスルフヒドリル基を用いてもよい。受容体結合に重要な残基での付着は、受容体結合が望ましい場合には避けなければならない。Ｎ末端で化学的に修飾されたタンパク質が特に望ましいと考えられる。選択的Ｎ末端化学修飾は、特定のタンパク質における誘導体化に利用し得る種々のタイプの一次アミノ基の異なる反応性（リシン対Ｎ末端）を利用する還元的アルキル化により実施し得る。適切な反応条件下に、カルボニル基含有ポリマーを用いてＮ末端のタンパク質を実質的に選択的誘導体化する。例えば、リシン残基のｅ− アミノ基とタンパク質のＮ末端残基のａ−アミノ基とのｐＫａ差を利用し得るｐＨで反応を行ってタンパク質を選択的にＮ末端ペジル化し得る。そのような選択的誘導体化により、タンパク質に対する水溶性ポリマーの付着を調節する：ポリマーとの結合は、主としてタンパク質のＮ末端で生起し、リシン側鎖アミノ基などの他の反応性基には有意な修飾が生じない。還元的アルキル化を用いる場合、水溶性ポリマーは上記タイプのものであってよいが、タンパク質に結合させるためには単一の反応性アルデヒドを有している必要がある。治療薬の製造を容易にするためには、Ｎ末端が単ペジル化された誘導体が好ましい。Ｎ末端ペジル化により、生成物の特性決定が二、三ペジル化又は他の多ペジル化生成物より簡易化されるので均質生成物が確実に生成する。大量生産を容易にするためには、Ｎ末端生成物の製造に上記還元的アルキル化法を用いるのが好ましい。医薬組成物本発明のさらに別の態様において、タンパク質及び誘導体の医薬組成物の使用法を提供する。そのような医薬組成物は、注射による投与、又は経口、肺、経鼻、経皮又は他の投与形態により投与するためのものであってよい。一般に、本発明には、医薬上許容し得る稀釈剤、保存剤、可溶化剤、乳化剤、アジュバント及び／又は担体と共に、有効量の本発明のタンパク質又は誘導体生成物を含む医薬組成物が包含される。そのような組成物は、種々の緩衝液含有量、ｐＨ及びイオン強度を有する稀釈剤（例えば、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、アセテート、ホスフェート）；洗剤及び可溶化剤などの添加剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ８０）、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム）、保存剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール）及び賦形物質（例えば、ラクトース、マンニトール）を含み、該物質を、ポリ酪酸、ポリグリコール酸などの高分子化合物の粒状製剤又はリポソーム中に組み込む。ヒラウロン酸（hyla uronic aicd）を用いてもよく、これは、循環において持続期間を促進させる作用を有し得る。そのような組成物は、本発明のタンパク質及び誘導体の物理的状態、安定性、ｉｎｖｉｖｏ放出速度及びｉｎｖｉｖｏクリアランス速度に影響を与え得る。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版（１９９０，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ１８０４２），１４３５−１７１２ページ（該文献は本明細書に参照として組み込むものとする）を参照されたい。該組成物は、液体形態で製造してもよいし、凍結乾燥形態などの乾燥粉末状であってもよい。経皮組成物のような移植可能な持効性組成物も企図される。本発明に用いるためには、概説がＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版，１９９０（ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．，ＥａｓｔｏｎＰＡ１８０４２）の第８９章（該文献は本明細書に参照として組み込むものとする）に記載されている経口固体剤形が考慮される。固体剤形には、錠剤、カプセル剤、丸剤、トローチ剤又は薬用ドロップ剤、カシェ剤又はペレット剤が含まれる。また、（例えば、米国特許第４，９２５，６７３号に記載のプロテイノイドミクロスフェアのような）リポソーム又はプロテイノイドカプセル封入を用いて本発明の組成物を製剤してもよい。リポソームカプセル封入を用いてもよく、リポソームは、種々のポリマーを用いて誘導体化し得る（例えば、米国特許第５，０１３，５５６号参照）。治療薬の可能な固体剤形については、Ｋ．Ｍａｒｓｈａｌｌ：ＭｏｄｅｒｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｌｃｓ，Ｇ．Ｓ．Ｂａｎｋｅｒ及びＣ．Ｔ．Ｒｈｏｄｅｓ編，第１０章，１９７９（該文献は本明細書に参照として組み込むものとする）に記載されている。一般に、組成物には、タンパク質（又は類似体若しくは誘導体）及び胃環境に対して保護し、腸内に生物学的に活性な物質を放出し得る不活性成分が含まれる。また、特に上記誘導体化タンパク質の経口剤形も企図される。タンパク質は、誘導体の経口送出が初期の効果を生じるように化学修飾し得る。一般に、企図される化学修飾は、少なくとも１種の成分をタンパク質（又はペプチド）分子自体に付着させるものであり、それによって、（ａ）タンパク質加水分解の阻止及び（ｂ）胃又は腸から血流中への取り込みが可能になる。また、体内でタンパク質の全体的な安定性及び循環時間を増大させることが望ましい。そのような成分の例としては、ポリエチレングリコール、エチレングリコールとプロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン及びポリプロリンが挙げられる。Ａｂｕｃｈｏｗｓｋｉ及びＤａｖｉｓ，ＳｏｌｕｂｌｅＰｏｌｙｍｅｒ−ＥｎｚｙｍｅＡｄｄｕｃｔｓ，“ＥｎｚｙｍｅｓａｓＤｒｕｇｓ”，Ｈｏｃｅｎｂｅｒｇ及びＲｏｂｅｒｔｓ編，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹ，（１９８１），３６７−３８３ページ；Ｎｅｗｍａｒｋら，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４：１８５−１８９（１９８２）。使用し得る他のポリマーは、ポリ−１，３−ジオキソラン及びポリ−１，３，６−チオキソカンである。タンパク質（又は誘導体）の放出位置は、胃、小腸（十二指腸、空腸又は回腸）又は大腸であってよい。当業者は、胃では溶解しないが、十二指腸又は腸内の他の位置で物質を放出する組成物を利用する。放出は、タンパク質（又は誘導体）を保護するか、又は腸内のような胃環境を越えたところで生物学的に活性な物質を放出させることにより、胃環境の有害な作用を回避するのが好ましい。完全な胃耐性を確実にするためには、５．０以上のｐＨに対して不透過性のコーティングが必須である。腸溶コーティングとして用いられるより一般的な不活性成分は、酢酸トリメリット酸セルロース（ＣＡＴ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、ＨＰＭＣＰ５０、ＨＰＭＣＰ５５、ポリ酢酸ビニルフタレート（ＰＶＡＰ）、ＥｕｄｒａｇｉｔＬ３０Ｄ、Ａｑｕａｔｅｒｉｃ、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）、ＥｕｄｒａｇｉｔＬ、ＥｕｄｒａｇｉｔＳ、及びセラックである。これらのコーティングは混合皮膜として用い得る。胃に対する保護を目的とするものではないコーティング又はコーティング混合物は錠剤にも用い得る。該コーティングには、糖衣又は錠剤を飲み込む易くするコーティングが含まれる。カプセル剤は、乾燥治療薬、即ち散剤を送出するための（ゼラチンなどの）硬質シェルから構成し得る。軟質形態の場合には、軟質ゼラチンシェルを用い得る。カシェ剤のシェル材料は、濃縮スターチ又は他の食用紙であってよい。丸剤、薬用ドロップ剤、成形錠剤又は粉砕錠の場合、湿式集塊法（moist massing technique）を用い得る。治療薬は、粒径約１ｍｍの顆粒又はペレットの形態のマルチ微粒子として製剤中に含まれ得る。カプセル投与するための材料の製剤は、散剤や軽く圧縮したプラグでもよいし錠剤であってもよい。治療薬は圧縮製造し得る。着色剤及び矯味・矯臭剤は全て含まれ得る。例えば、タンパク質（又は誘導体）は（例えば、リポソーム又はミクロスフェアカプセル封入により）製剤し、次いで、該製剤をさらに食品又は飲料などの食用製品中に含有させ得る。不活性物質を加えて治療薬の量を稀釈又は増加し得る。これらの稀釈剤には、炭水化物、特に、マンニトール、α−ラクトース、無水ラクトース、セルロース、スクロース、改質デキストラン及びスターチが含まれ得る。三リン酸カルシウム、炭酸マグネシウム及び塩化ナトリウムを含めた特定の無機塩を増量剤として用いてもよい。市販の稀釈剤には、Ｆａｓｔ−Ｆｌｏ、Ｅｍｄｅｘ、ＳＴＡ−Ｒｘ１５００、Ｅｍｃｏｍｐｒｅｓｓ及びＡｖｉｃｅｌｌがある。固体剤形中に治療薬を配合する際に崩壊剤を含めてもよい。崩壊剤として用いられる物質には、市販のスターチベース崩壊剤、Ｅｘｐｌｏｔａｂを含めたスターチが含まれるが、それには限定されない。ナトリウムスターチグリコレート、アンバーライト、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ウルトラミロペクチン（ultramylopectin）、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、オレンジピール、酸カルボキシメチルセルロース、天然海綿及びベントナイトは全て使用し得る。別の形態の崩壊剤は、不溶性カチオン交換樹脂である。崩壊剤及び結合剤として粉末ゴムを用いてもよく、該ゴムには、寒天、カラヤ又はトラガカントなどの粉末ゴムが含まれ得る。アルギン酸及びそのナトリウム塩も崩壊剤として有用である。治療薬を結合して硬質錠剤を形成するために結合剤を用い得る。結合剤には、アカシア、トラガカント、スターチ及びゼラチンなどの天然生成物由来の物質が含まれる。他の結合剤には、メチルセルロース（ＭＣ）、エチルセルロース（ＥＣ）及びカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）がある。ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）及びヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）はどちらも、アルコール溶液中で用いて治療薬を顆粒化し得る。配合プロセス中の粘着を予防するために治療薬組成物中に減摩剤を含めてもよい。治療薬とダイ壁との間の層として滑沢剤を用いることが可能である。滑沢剤には、ステアリン酸とそのマグネシウム塩及びカルシウム塩、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、液体パラフィン、植物油及びろうが含まれ得るがそれらには限定されない。ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム、種々の分子量のポリエチレングリコール、Ｃａｒｂｏｗａｘ４０００及び６０００などの可溶性滑沢剤を用いてもよい。配合時の薬剤の流動性を改善し且つ圧縮時の転位を支援し得る滑剤（glidant ）を添加してもよい。滑剤には、スターチ、タルク、発熱性シリカ及び水和シリコアルミネートが含まれ得る。治療薬の水性環境への溶解を支援するために、湿潤剤として界面活性剤を添加し得る。界面活性剤には、ラウリル硫酸ナトリウム、スルホコハク酸ジオクチルナトリウム及びスルホン酸ジオクチルナトリウムなどのアニオン洗剤が含まれ得る。カチオン洗剤を用いてもよく、カチオン洗剤には、塩化ベンズアルコニウム又は塩化ベンズエトミウムが含まれる得る。界面活性剤として組成物中に含まれ得る非イオン洗剤のリストは、ラウロマクロゴール４００、ポリオキシル４０ステアレート、ポリオキシエチレン水素化ひまし油１０、５０及び６０、グリセロールモノステアラート、ポリソルベート４０、６０、６５及び８０、スクロース脂肪酸エステル、メチルセルロース及びカルボキシメチルセルロースである。これらの界面活性剤は、タンパク質又は誘導体の組成物中に単独で又は種々の比率の混合物として存在し得る。タンパク質（又は誘導体）の取り込みを促進し得る添加剤は、例えば、脂肪酸、オレイン酸、リノール酸及びリノレン酸である。制御放出組成物が望ましい。薬剤は、拡散又は浸出機構により放出を可能にする不活性マトリックス、即ちゴム中に混和し得る。徐々に縮退するマトリックスを組成物中に混和してもよい。この治療薬の別の制御放出形態は、Ｏｒｏｓ治療システム（ＡｌｚａＣｏｒｐ．）をベースとする方法、即ち、浸透作用により水は入れるが薬剤を単一の小開口を介して押し出し得る半不透性膜に薬剤を封入する方法による。腸溶コーティングのなかには、遅延放出作用を有するものもある。製剤には他のコーティングを用いてもよい。該コーティングには、コーティングパン中で適用され得る種々の糖が含まれる。治療物質はフィルムコーティング錠とすることも可能であり、フィルムコーティング錠に用いられる材料は２つの群に分けられる。第１群は非腸溶物質であり、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、プロビドン及びポリエチレングリコールが含まれる。第２群は、一般的にはフタル酸のエステルである腸溶物質からなる。最適なフィルムコーティングを得るために混合物質を用いてもよい。フィルムコーティングはパンコーター若しくは流動床中で、又は圧縮コーティングにより実施し得る。本発明においては、本発明のタンパク質又はその誘導体の肺送出も企図されている。タンパク質（又は誘導体）は哺乳動物の肺に吸入中に送出され、肺の内皮膜を通って血流に入る。上記についての他の論文には、Ａｄｊｅｉら，ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＲｅｓｅｒａｃｈ７：５６５−５６９（１９９０）；Ａｄｊｅｉら，ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ６３：１３５−１４４（１９９０）（酢酸ループロリド）；Ｂｒａｑｕｅｔら，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ１３（付録５）：ｓ．１４３−１４６（１９８９）（エンドセリン−１）；Ｈｕｂｂａｒｄら，ＡｎｎａｌｓｏｆＩｎｔｅｒｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ３：２０６−２１２（１９８９）（α１−抗トリプシン）；Ｓｍｉｔｈら，Ｊ．Ｃ１ｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８４：１１４５−１１４６（１９８９）（ α−１−プロテイナーゼ）；Ｏｓｗｅｉｎら，“ＡｅｒｏｓｏｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓ”，ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆＳｙｍｐｏｓｉｕｍｏｎＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙ II，Ｋｅｙｓｔｏｎｅ，Ｃｏｌｏｒａｄｏ，１９９０年３月（組換えヒト成長ホルモン）；Ｄｅｂｓら，ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１４０：３４８２−３４８８（１９８８）（インターフェロン−ｇ及び腫瘍壊死因子α ）及びＰｌａｔｚら，米国特許第５，２８４，６５６号（顆粒球コロニー刺激因子）が含まれる。タンパク質（又は誘導体）の経鼻送出も企図される。他の粘膜軽油送出も企図される。当業者は、投与して、所望の治療効果を観察することにより、有効な投薬量を確認することができよう。分子の配合は、体重１ｋｇ当たり１日に約０．１０μ ｇ〜１ｇの範囲で所望の治療効果が得られるようなものが好ましい。有効投薬量は、診断ツールを用いて経時的に決定し得る。例えば、先ず、血液（又は血漿若しくは血清）中のＯＢタンパク質の量を測定する診断ツールを用いてＯＢタンパク質の内在レベルを定量する。そのような診断ツールは、抗体サンドイッチアッセイなどの抗体アッセイの形態であってよい。先ず、内在ＯＢタンパク質の量を定量し、基準量を決定する。治療薬の投薬量は、内在及び外来ＯＢタンパク質（即ち、体内で認められる自己産生されるか又は投与されたタンパク質、類似体又は誘導体）の定量が療法コース全体にわたって継続されるときに決定される。従って、投薬量は、療法コース全体にわたって変化し得、先ず、治療効果が認められるまで比較的高い投薬量を用い、治療効果の維持にはそれより低い投薬量を用いる。選択的結合分子本発明の別の実施態様はイヌＯＢタンパク質に選択的に結合するモノクローナル抗体などの選択的結合分子である。多くの特異抗原に対して高レベルのモノクローナル抗体を分泌するハイブリッド細胞系を産生させるためには、初期にＫｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６，５１１−５１９（１９７６）により記載されたハイブリドーマ法が広く用いられてきた。組換え抗体〔Ｈｕｓｅら，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４６：１２７５（１９８９）〕を産生させてもよい。そのような組換え抗体を、例えば、相補性決定領域を修飾して親和性を増強若しくは変性させるか、又は不変領域をそのような抗体のイヌ不変領域と類似させるように変えることによりさらに修飾してもよい。組換え抗体は、例えば、診断用のキットに組み込むこともできる。診断キットを用いて個体のイヌＯＢタンパク質の位置及び／又は量を定量し得る。「サンドイッチ」タイプのアッセイのような診断キットを用いて、個体がイヌＯＢタンパク質に結合する受容体、又は種々の程度に、結合容量又は能力が低下している受容体を有するかどうかを決定することもできる。以下に述べるように、組換え抗体は、イヌＯＢタンパク質の免疫原性部分、特にイヌＯＢタンパク質に独特な免疫原性部分を用いて産生させ得る。使用法治療薬治療薬の用途には、体重の減少、糖尿病の治療又は予防、血中脂質の低下（及び関連状態の治療）、除脂肪体重の増加及びインシュリン感受性の増強が含まれる。さらに、本発明の組成物は、上記状態を治療又は改善するための１種以上の薬剤の製造にも用い得る。体重の減少本発明の組成物及び方法は体重の減少に用い得る。ネズミモデル（前掲参照）で示されたように、本発明のＯＢタンパク質を投与すると体重が減少する。体重の減少は主として脂肪組織又は脂肪の減少からなる。そのような体重の減少は、以下に記載のもののような随伴性状態の治療に関与し得、従って、治療薬の１つの用途である。さらに、本発明においては、体重の減少がショードッグや繁殖用のイヌなどの外観の改善のみを目的とする場合には美容上での使用も提供される。糖尿病の治療本発明の組成物及び方法は、II型糖尿病の治療又は予防に用い得る。II型糖尿病は、肥満症と相互関係を有し得るので、本発明を用いて体重を減少させることにより、糖尿病の進行を軽減又は予防し得る。さらに、本発明の組成物は、体重を減少させるのに十分な用量でなくても、糖尿病の予防又は軽減に用い得る。血中脂質レベルの低下本発明の組成物及び方法は、血中脂質レベルの調節に用い得る。血中脂質レベルの低下だけが望ましい状況、又は血中脂質レベルの低下の維持が望ましい状況では、投薬量は体重を減少させるのには不十分である程度が理想的である。従って、肥満動物の初期療法コースにおいては、体重の減少及び随伴する血中脂質レベルの低下が達成される投薬量を投与し得る。十分な体重の減少が達成されたら、再び体重が増えるのを阻止するに十分であり、しかも所望の血中脂質レベルの維持に十分な投薬量を投与し得る。ＯＢタンパク質の作用は可逆性なので、これらの投薬量は経験的に決定し得る。例えば、Ｃａｍｐｆｉｅ１ｄら，Ｓｃｉｅｎｃｅ２６９：５４６−５４９（１９９５），５４７ページを参照されたい。従って、体重の減少を欲していないときにある投薬量を用いて体重の減少が認められたら、所望の血中脂質レベルを達成し且つ所望の体重を維持するために、より低い投薬量を投与する。除脂肪体重又はインシュリン感受性の増加除脂肪体重の増加だけが望ましい状況では、投薬量は体重の減少には不十分な量が理想的であろう。従って、肥満したヒトの初期療法コースにおいては、体重の減少及び随伴する脂肪組織の減少／除脂肪体重の増加が達成される投薬量を投与する。十分な体重の減少が達成されたら、体重が再び増えるのを阻止し且つ所望の除脂肪体重の増加（又は除脂肪体重枯渇の予防）の維持に十分な投薬量を投与し得る。ＯＢタンパク質の作用は可逆性なので、これらの投薬量は経験的に決定し得る。例えば、Ｃａｍｐｆｉｅｌｄら，Ｓｃｉｅｎｃｅ２６９：５４６−５４９（１９９５），５４７ページを参照されたい。従って、体重の減少が望ましくないときにある投薬量の投与により体重の減少が認められた場合には、所望の無脂肪組織成分の増加を達成し且つ所望の体重を維持するために、より低い投薬量を投与する。個体のインシュリン感受性を高めるためにも、投薬量について同様の配慮を行い得る。糖尿病の治療のためには、個体に、インシュリン（又は潜在的にアミリン若しくは他の潜在的な糖尿病治療薬）の量を減少させるに十分な無脂肪組織成分の増加を体重の減少を伴わなずに達成し得る投薬量を投与する。全般的な体力を増強させる場合、投薬量について同様な配慮を行い得る。全般的な体力の増強を伴う除脂肪体重の増加は、体重の減少には不十分な程度の投薬量で達成し得る。赤血球の増加（及び血液中の酸素付加）や骨吸収又は骨粗営症の低減などの他の利点も、体重の減少を伴わずに達成し得る。併用療法本発明の組成物及び方法は、食事の変更及び運動などの他の療法と組み合わせて用い得る。糖尿病の治療に有用なものなどの他の薬剤（例えば、インシュリン及び恐らくアミリン）、コレステロール及び降圧剤（例えば、血中脂質レベルを低下させるもの又は他の心血管薬）、活性増強薬（例えば、アンフェタミン）及び食欲抑制剤を同時に投与してもよいし、該薬剤がｉｎｓｅｒｉａｔｉｍに存在してもよい。さらに、本発明の方法は、身体の全体的な外観を変えるための美容外科（例えば、体型を細くするための脂肪吸引若しくはレーザー術、又は体型の外観を豊かにするためのインプラント外科）などの外科手順と組み合わせて用い得る。脂肪の蓄積による血管の閉塞に起因する動脈小斑などの有害な状態を軽減するためのバイパス術又は他の外科などの心臓外科の健康上の利点は、本発明の組成物及び方法と組み合わせて用いることにより増大し得る。超音波又はレーザー法などの胆石を除去する方法を、本発明の治療法コースの前、間又は後に用い得る。さらに、本発明の方法は、骨折、筋肉損傷に対する外科若しくは療法、又は無脂肪組織成分の増加により改善される他の療法に対する付加療法として用い得る。診断法本発明のイヌＯＢタンパク質又は核酸は、診断用に用い得る。例えば、個体のイヌＯＢＤＮＡ遺伝子又は遺伝子産物の特性決定又は欠陥の検出にＲＮＡ又はＤＮＡを用い得る。例えば、肥満個体は、イヌＯＢタンパク質が欠失している可能性がある。本発明のＤＮＡは、個体由来の核酸とハイブリダイズさせて、ＰＣＲ法などによるそのような欠失の検出に用い得る。イヌＯＢタンパク質は、個体のＯＢタンパク質をそのＯＢ受容体結合能又は他の生物学的活性について特性決定する際に用い得る。例えば、ＯＢ受容体を発現する脂質含有細胞集団を形成し、ＯＢタンパク質とそのような細胞集団とを接触させることによりＯＢタンパク質の脂質代謝改変能アッセイを作製し得る。脂質含有量の調節、脂質特性又は他の特性をモニターし得る。診断に用いるために、本発明のタンパク質又は核酸を、放射性同位元素、フルオレセント若しくは化学発光化学物質などの検出可能な標識物質又は当業者が利用し得る他の標識と結合させ得る。そのような核酸は、（例えば、種々の組織タイプにおけるイヌＯＢｍＲＮＡ転写産物の分布を検出するための）組織分布アッセイや、ＯＢ受容休の位置を決定するための他のアッセイに用い得る。アミノ酸及びＤＮＡ配列以下は、本発明のイヌＯＢタンパク質及び関連ＤＮＡの配列リストである。アミノ酸配列（配列番号１）の場合、成熟タンパク質の第１アミノ酸は＋１位に存在するバリン（「Ｖ」）であり、太字で示されている。細菌系での発現を容易にするために、リーダー配列を除去したメチオニン残基を−１位に付加し得る。あるいは、Ｎ末端メチオニン残基が無くてもタンパク質の産生が容易になるように、アミノ酸を切断する物質の認識部位などの他のＮ末端改変を行ってもよい。例えば、産生を容易にするためにＮ末端に酵素認識部位（「１−１４６ｍｅｔ−１」と略記される）を含めてもよい。さらに、２８位のグルタミンが欠失したバーションを作製してもよい。上述のように、ＤＮＡは改変する（配列番号２）が、コードされるアミノ酸配列は改変しなくてもよい。そのような改変は、例えば、複製若しくはベタターの挿入を容易にするために制限部位を含めること、又は細菌での発現若しくは真核生物での発現などの特定の系における発現に好ましいコドンを含めることであり得る。本発明を好ましい実施態様に関して説明したが、当業者には変更及び修正が考えられるものと理解されたい。従って、以下の請求の範囲はクレームされている範囲内に含まれるそのような均等な変更を全て包含するものとする。

【手続補正書】【提出日】平成１０年１０月１４日（１９９８．１０．１４）【補正内容】（１）明細書中、第３９頁〜４８頁の配列表を別紙の配列表に補正する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 3/06 Ａ６１Ｐ 3/10 3/10 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ０７Ｋ 14/47 16/18 16/18 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 1/19 1/21 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/53 ＤＣ１２Ｐ 21/02 33/577 ＢＧ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｐ 21/08 33/577 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．場合によって医薬上許容し得る稀釈剤、アジュバント又は担体中の、以下のアミノ酸（配列番号１のナンバリングによる）（ａ） −２１〜１４６；（ｂ）＋１〜１４６；（ｃ）＋１〜１４６ｍｅｔ−１；及び（ｄ）２８位のグルタミン残基が欠失した、上記サブパート（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）のいずれかのイヌＯＢタンパク質から選択されるイヌＯＢタンパク質。２．以下のアミノ酸（配列番号１のナンバリングによる）：（ａ） −２１〜１４６；（ｂ）＋１〜１４６；（ｃ）＋１〜１４６ｍｅｔ−１；及び（ｄ）２８位のグルタミン残基が欠失した、上記サブパート（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）のいずれかのイヌＯＢタンパク質から選択されるイヌＯＢタンパク質をコードする精製・分離されたＤＮＡ。３．ｃＤＮＡである、請求項２に記載のＤＮＡ。４．ゲノムＤＮＡである、請求項２に記載のＤＮＡ。５．（配列番号２の）以下の配列、（ａ）（配列番号１の）イヌＯＢタンパク質−２２〜＋１４６をコードする配列番号２の部分；（ｂ）（配列番号１の）イヌＯＢタンパク質＋１〜＋１４６をコードする配列番号２の部分；（ｃ）さらに−１位のメチオニン残基をもコードするサブパート（ｂ）のＤＮＡ；及び（ｄ）配列番号１に関して２８位のグルタミンをコードするコドンが欠失した上記サブパート（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）のいずれかのＤＮＡから選択される、請求項２に記載のＤＮＡ。６．請求項２、３、４又は５のいずれか一項に記載のＤＮＡを含むベクター。７．請求項２、３、４若しくは５のいずれか一項に記載のＤＮＡを含むか；又は請求項２、３、４若しくは５のいずれか一項に記載のＤＮＡを含むベクターを含む真核生物又は原核生物宿主細胞。８．イヌＯＢタンパク質を産生させる方法であって、適当な条件下に、請求項２、３、４のいずれか一項に記載のＤＮＡを含むか又は請求項２、３、４若しくは５のいずれか一項に記載のＤＮＡを含むベクターを含む原核生物又は真核生物宿主細胞を培養するステップ、及び産生されたイヌＯＢタンパク質産物を得るステップからなる方法。９．選択的にイヌＯＢタンパク質に結合する選択的結合分子。１０．選択的にイヌＯＢタンパク質に結合するモノクローナル抗体。１１．選択的にイヌＯＢタンパク質に結合する選択的結合分子を含むキット。１２．治療上有効量の請求項１に記載のイヌＯＢタンパク質を投与することからなるイヌの治療法。１３．前記イヌを、肥満症、II型糖尿病、高脂血症に対して又は除脂肪体重を増加させるべく治療する、請求項１２に記載の方法。１４．イヌＯＢタンパク質の発現が改変されたトランスジェニックイヌ。