JP2000505788A

JP2000505788A - 巨大分子送達用の親油性ペプチド

Info

Publication number: JP2000505788A
Application number: JP9525430A
Authority: JP
Inventors: スミス，ルイス・シー; スパロー，ジェームズ・ティー; ハウアー，ヨヘン; ミムス，マーサ・ピー
Original assignee: Baylor College of Medicine
Current assignee: Baylor College of Medicine
Priority date: 1996-01-08
Filing date: 1997-01-02
Publication date: 2000-05-16
Also published as: EP0877629A2; CA2242246A1; AU722700B2; US20020173456A1; AU1533897A; WO1997025070A2; WO1997025070A3; US6344436B1

Abstract

(57)【要約】核酸を細胞に送達するためのペプチド−巨大分子複合体に関する。核酸キャリヤーは、結合複合体を含む。結合複合体は、核酸に非共有結合した結合部分を含む。結合複合体は、表面リガンド、核リガンドまたは溶解剤に結合した結合部分も含むことができる。これらは、スペーサーにより結合部分と結合してよい。さらに、キャリヤーは上記結合複合体または結合部分と結合した核酸を含んでよい。

Description

【発明の詳細な説明】巨大分子送達用の親油性ペプチド発明の分野本発明は、一般的には、遺伝子およびその他の生物巨大分子を含む作用因子を細胞に送達する分野に関する。発明の背景以下の本発明の背景に関する記載は、本発明の請求の範囲の理解を助けるために提供され、本発明の請求のの範囲に従来技術を設定または記載することを許容せず、けっして本発明の請求の範囲を制限するものとして解釈されるべきではない。最近は遺伝子を細胞に送達する様々な技術があり、最近ではそのような方法を用いて得られた治療効果の程度を評価するために、数多くの医療試行が行われている。遺伝子送達の一つの方法には、組換えレトロウイルスベクターを生きた動物の細胞へ遺伝子を送達するために用いることが含まれる。Ｍｏｒｇａｎら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６２，１９１−２１７，１９９３。レトロウイルスベクターは、宿主染色体ＤＮＡ内に伝達遺伝子を恒常的に組込む。レトロウイルスに加えて、その他のウイルスも遺伝子送達用に用いられてきた。アデノウイルスも、上皮誘導組織内への遺伝子送達用手段として開発されている（Ｓｔｒａｔｆｏｒｄ−Ｐｅｒｒｉｃａｕｄｅｔら、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ．Ｔｈｅｒ．，１，２４１−２５６，１９９０；Ｇｉｌａｒｄｉら、ＦＥＢＳ，２６７，６０ −６２，１９９０；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５２，４３４１ −４３４６，１９９１；Ｍｏｒｇａｎら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６２，１９１−２１７，１９９３）。組換えアデノウイルスベクターは、非増殖細胞に形質導入する能力ならびに精製された高力価ウイルスを作り出す能力において、レトロウイルス以上の長所を持つ。ウイルスー仲介の遺伝子送達に加えて、より最近ではＤＮＡ送達とは、レセプター仲介のエンドサイトーシスをも意味する。エンドサイトーシスは、真核細胞が小エンドサイトーシスベシクルの型で原形質膜のセグメントを連続的に摂取するプロセスである（Ａｌｂｅｒｔｓら、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ，ＧａｒｌａｎｄＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９８３）。細胞外流体およびその中に溶解された物質は、ベシクル内に捕集され、細胞内に摂取される（同上）。この大量の流体相エンドサイトーシスのプロセスは、可視化でき、細胞外流体内に導入されたペルオキシダーゼ酵素のようなトレーサーを用いて定量することもできる（同上）。レセプター−仲介エンドサイトーシスを利用して、アシアログリコプロテインレセプターが、インビトロではＨｅｐＧ２細胞への、およびインビボでは肝臓細胞へのＤＮＡの標的化に用いられた（Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６２：４４２９−４４３２，１９８７；Ｗｕら、Ｂｉｏ．，２７，８８７−８９２，１９８８；Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６３，１４６２０−１４６２４，１９８８；Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６４，１６９８５−１６９８７，１９８９；Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６６，１４３３８ −１４３４２，１９９１）。これらの研究では、水溶性カルボジイミド［１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド］、または３’（２’ピリジルジチオ）プロピオン酸ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルで、ポリリジンと共有結合させたアシアロオロソムコイドが用いられた。上記の研究でのポリリジンは、イオン相互作用でＤＮＡと結合する。ＤＮＡは、エンドサイトーシスによって摂取された。その他の研究では、インビトロで細胞にＤＮＡを送達するために、トランスフェリンおよびトランスフェリンレセプターが用いられていた（Ｗａｇｎｅｒら、Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．，８７，３４１０−３４１４，１９９０）。これらの研究では、ポリリジンにトランスフェリンを共有結合することにより、トランスフェリンを修飾した（同上）。ポリリジンは、ＤＮＡとイオン相互作用した。ＤＮＡの送達は、トランスフェリンレセプターを通して細胞へ行われた。そのような分析は、インビトロで行われた（同上；Ｃｏｔｔｅｎら、Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．，８７，４０３３−４０３７，１９９０；Ｚｅｎｋら、Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．，８７，３６５５ −３６５９，１９９０）。ＤＮＡの送達（Ｇｏｔｔｓｃｈａｌｋら、ＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ，１，１８５−９１，１９９３）に加えて、その他の巨大分子も、レセプター-リガンドシステムにより送達することができる（Ｌｅａｍｏｎら、Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．，８８，５５７２−５５７６，１９９１；Ｌｅａｍｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６７，２４９６６−２４９７１，１９９２）。特に、これらの研究には、小胞により細胞内および細胞外のコートされた小窩およびサイクルから排除される、葉酸レセプター、固定化グリコシルホスファチジルタンパク質が含まれる。Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５２，４１０−４１１，１９９２。この吸収メカニズムは、ポトサイトーシス（potocytosis）と呼ばれている。同上。葉酸複合酵素は、このレセプターシステムを通して細胞内に送達され、少なくとも６時間の間、活性を保持していた（Ｌｅａｍｏｎら、Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．，８８，５５７２−５５７６，１９９１）。葉酸レセプターは、組織分配を制限し、数多くの組織から誘導された様々な悪性腫瘍細胞系内では過剰発現する（Ｗｅｉｔｍａｎら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，５２，３３９６−３４０１、１９９２；Ｗｅｉｔｍａｎら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，５２，６７０８−６７１１，１９９２；Ｃａｍｐｂｅｌｌ，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，５１，５３２９−５３３８、１９９１；Ｃｏｎｅｙ，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，５１，６１２５−６１２３，１９９１）。また、その他の研究では、ビオチン化によりタンパク質に複合させたビオチンまたは葉酸が細胞へのタンパク質送達用に用いられている（Ｌｏｗら、米国特許第５，１０８，９２１号）。「細胞内に核酸を送達するための核酸トランスポーター」（"Nucleic Acid Tr ansporters for Delivery of nucleic acids into a Cell")：Ｓｍｉｔｈら、米国特許出願番号０８／４８４，７７７、１９９５年１２月１８日出願、ここに任意の図面を含むその全体を参照として取り入れる）。低密度のリポタンパク質レセプターへの結合を仲介する交換不可能なアポリポタンパク質Ｅペプチドは、Ｍｉｍｓら、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２６９（３２），２０５３９−２０５４７，１９９４、ここに任意の図面を含むその全体を参照として採用する。発明の概要本発明は、細胞、送達される巨大分子と親油性ペプチドの間に形成された複合体、およびそのような複合体によって形質転換された細胞の内に、巨大分子（例えば核酸）を送達する親油性ペプチドの新規の用途を提供する。従って、本発明は、細胞内への（核酸を含む）巨大分子の送達を強化させる。親油性ペプチドは、送達ペプチド部分および脂質部分を持つ。いくつかの適当な送達ペプチドのアミノ酸配列は本明細書中に示されており、当業者らは、本明細害中に記載された方法を提供するその他の多くの方法を作成し使用することができるであろう。脂質部分は、送達ペプチドを親油性にし、適当な修飾の例も本明細書中に提供される。しかしながら、当業者らは、再度、異なる脂質部分を持つ親油性ペプチドを作製し使用することもできるであろう。従って、第一の態様では、本発明は、細胞内に巨大分子を送達するためのペプチド−巨大分子複合体の特徴を示す。複合体は、脂質部分と関連した送達ペプチドを持つ親油性ペプチドを含む。親油性ペプチドの送達ペプチド部分を巨大分子と複合させる。本明細書中で用いられる用語「ペプチド−巨大分子複合体」とは、細胞膜を通過して巨大分子を輸送する能力を持つ分子複合体をさす。この分子複合体は、巨大分子と非共有的に結合するのが好ましい。ペプチド−巨大分子複合体は、安定な凝縮した状態で核酸を輸送し、そして細胞内部に非共有的に結合した核酸を放出することができる。さらに、核酸キャリヤーは、エンドソーム溶解による核酸のリボソーム分解を防ぐことができる。さらに、必要ではないにもかかわらず、ペプチド−巨大分子複合体は、また、以下に議論するように、角膜を通過して核酸を効率的に輸送することもできる。本明細害中に記載したペプチド−巨大分子複合体は、限定されないが、７つの成分を含むことができる。それは、（１）興味ある遺伝情報または既知の化学組成物を含む既知の一次配列を持つ核酸またはその他の巨大分子；（２）上記の（１）内に核酸または巨大分子を安定化し凝縮する能力を持つペプチド作用因子（ agent）；（３）上記の（２）内のペプチド作用因子の親油性を増加させるＮ末端アシル化部分；（４）細胞表面から細胞の細胞質内への複合体全体の直接輸送を可能にする溶解部分；（５）細胞表面レセプターまたは抗原を認識し結合する部分、またはサイトーシスによって細胞に侵入する能力を持つ部分；（６）動く能力を持つ部分または核膜を通過する運動を開始する能力を持つ部分；および／または（７）上記の（２）、（３）、（４）、（５）および（６）部分と共有結合する能力を持つ核酸または巨大分子の結合部分：を含むか、からなるか、または本質的にからなる。用語「送達」は、所望の細胞または任意の細胞への分子の輸送（transportati on）をさす。送達は、細胞表面、細胞膜、細胞エンドソーム、細胞膜内、核あるいは核内、または任意のその他の所望の細胞の領域であることができる。送達は、核酸の輸送のみを包含せず、限定されないが、タンパク質、脂質、炭水化物および様々なその他の分子を含むその他の巨大分子の輸送をも含む。用語「巨大分子」とは、生物学的包囲の内にあることのできる任意の天然および／または合成の重合体分子をさし、限定されないが、本明細書中に記載の複合体またはキャリヤーシステムを用いて送達することのできるタンパク質、オリゴヌクレオチド、デキストラン、脂質または炭水化物が含まれる。本明細書中で用いられる用語「核酸」は、ＤＮＡまたはＲＮＡをさす。これは、むき出しのＤＮＡ、核酸カセット、むき出しのＲＮＡ、またはベクターあるいはウイルスを含む核酸を含むであろう。これらは、例を示すのみであって、限定を意味するものではない。様々なタンパク質およびポリペプチドは、核酸によってコードされることができる。発現することのできるそのようなタンパク質またはポリペプチドには、ホルモン、増殖因子、酵素、血餅因子、アポリポタンパク質、レセプター、薬剤、オンコジーン、腫瘍抗原、腫瘍サプレッサー、サイトカイン、ウイルス抗原、寄生虫抗原、細菌抗原、ならびに化学合成されたポリマーおよび生合成および／または化学的、細胞的および／または酵素的プロセスによって修飾されたポリマー、が含まれる。これらの化合物の具体的例としては、プロインスリン、インスリン、成長ホルモン、アンドロゲンレセプター、インスリン−様増殖因子Ｉ、インスリン様増殖因子II、インスリン増殖因子結合タンパク質、表皮増殖因子、ＴＧＦ− α、ＴＧＦ−β、皮膚増殖因子（ＰＤＧＦ）、血管形成因子［酸性繊維芽細胞増殖因子、塩基性繊維芽細胞増殖因子、およびアンジオゲニン（Angiogenin）］、マトリックスタンパク質（コラーゲンＩＶ型、コラーゲンＶII型、ラミニン）、オンコジーン（ｒａｓ、ｆｏｓ、ｍｙｃ、ｅｒｂ、ｓｒｃ、ｓｉｓ、ｊｕｎ）、Ｅ６またはＥ７形質転換配列、ｐ５３タンパク質、サイトカインレセプター、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−２、α、βまたはγＩＦＮ、ＧＭＣＳＦ、ＧＣＳＦ、ウイルスキャプシドタンパク質、ならびにウイルス、細菌および寄生虫生物体からのタンパク質が含まれる。発現させることのできるその他の具体的タンパク質またはポリペプチドには、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ、α− １−抗トリプシン、コレステロール−７α−ヒドロキシラーゼ、先端切除型アポリポタンパク質Ｂ、リポタンパク質リパーゼ、アポリポタンパク質Ｅ、アポリポタンパク質Ａ１、ＬＤＬリーダー、それぞれの分子変異体、およびその組み合わせが含まれる。当業者らは、これらのタンパク質が、広範囲のクラスのタンパク質に属すること、およびこれらのクラスの内のその他のタンパク質も用いることができることを、容易に認識するであろう。これらは、例として示しているだけであって、いずれにせよ限定を意味するものではない。また、上記のペプチド−巨大分子複合体から細胞内に取り込まれる遺伝物質には、（１）細胞内に正常では認められない核酸；（２）細胞内に正常に認められるが生理学的に有意のレベルでは発現されない核酸；（３）細胞内に正常に認められ生理学的に所望のレベルで正常に発現される核酸；（４）細胞内での発現を修飾することのできるその他の核酸；および（５）上記の任意の組み合わせ：が含まれることも、特記しておかねばならない。本明細書中に用いられる用語「親油性ペプチド」とは、核酸あるいは分子を安定化し凝縮する能力を持つペプチド、化合物、または同一か、または実質的に類似した機能的特徴を達成することのできるタンパク質をさす。これには、制限するつもりはないが、静電気結合、疎水性結合、水素結合、インターカレーション、によって核酸を安定化および／または凝縮させることができるか、またはＤＮＡのメジャーおよび／またはマイナーなグローブ内の相互作用を含む核酸のヘリックス構造を形成することのできる、成分が含まれるであろう。用語「親油性ペプチド」も、凝縮作用因子としてここに引用することができる。親油性ペプチドは、核酸と非共有的に結合することができる。親油性ペプチドも、表面リガンド、核酸リガンド、および／または溶解作用因子と化合することができる。好ましくは、親油性ペプチドは、脂質表面のアフィニティーが解離定数Ｋｄ〜１０^-6またはそれより小さいと測定され、そのα−ヘリックス性は脂質存在下で〜５５％である、任意のペプチドをさす。非親油性ペプチドは、脂質表面の解離定数が＞Ｋｄ１０^-5と測定されるアフィニティーを持ち、α−ヘリックス性が脂質存在下で＜４０％である。本明細書中で用いられる用語「交換不可能な親油性ペプチド」は、脂質表面のアフィニティーが解離定数≦Ｋｄ１０^-9と測定され、そのα−ヘリックス性が脂質存在下で〜７８％である、任意の親油性ペプチドをさす。本明細書中に用いられる用語「α−ヘリックス性」とは、脂質存在下で誘導体化されたペプチドのＮ末端ドメインのα−ヘリックスコンフォメーションの保存をさす。一般的には、親油性ペプチドに重要なパラメーターには、以下の物が含まれる。第一に、ペプチドは、ＤＮＡとのイオン相互作用を可能にする充分なリジンまたはアルギニンを含まねばならない。第二に、ペプチドは、安定なヘリックスを形成するために充分な長さ（１１または１２残基）を持っていなければならず、ＤＮＡを小粒子に凝縮されなければならない、例えば、Ｋ₈はａｐｏＥ３より大きい粒子を形成する。第三に、ＤＮＡとの相互作用時に形成されるペプチドのヘリックスは、イオン強度への影響のより少ない凝縮作用因子を提供するロイシンジッパーの形成によって安定化することができる。最後に、凝縮ペプチドのリジンまたはアルギニン配列は、核局在化配列としてのさらなる機能として提供される。「送達ペプチド」とは、送達ペプチドが脂質部分と化合した場合に、巨大分子を体内の所望の位置に輸送する能力を持つ任意のアミノ酸配列を意味する。本発明では、最も好ましい送達ペプチド配列は、ペプチドａｐｏＥ−３^129-169の残基１４２−１５０内に見出される。このドメインのアミノ酸配列は、ＲＫＬＲＫＲＬＬＲである。もう一つの好ましい実施態様では、親油性ペプチド結合分子は、式Ｋ（Ｋ）_nＶＴＫ（式中、ｎは４、５、６、７、８であり、ｎに対するホモログは４０である（n is 4,5,6,7,8 and homologues to n is 40））を持つ任意のペプチドである。その他の好ましい実施態様では、親油性ペプチドは、式Ｋ（Ｋ）_nＸＫ（式中、ｎは４、５、６、７、８であり、ｎに対するホモログは４０であり（n is 4,5,6,7,8，and homologues to n is 40）、Ｘは任意の天然発生のアミノ酸およびそのアナログである）を持つ任意のペプチドである。好ましい実施態様では、送達ペプチドは、以下に示す配列またはその機能的フラグメント、を含むか、主にからなるか、またはからなる： STEELRVRLASHLRKLRKRLLRDADDLQKRLAVYQAGAREG, KKQLKKQLKKQLKQWK, KKSPKKSPKKSPKKSWK, KRRRRRRRRWR, KLSKLEKKWSKLEK, KLSKLEKKLSKLEKKWSKLEK, KSLKKSLKKSLKKSWK, KSTPPKKKRKVEDPKDFPSELLSA, KAKKKK-NK-(CH₂)₂-SS−(CH₂)₂-COKKKKWK, KIRRRGKNKVAARTCRQRRTDR, KXKKXKKKXKKXKWK（式中、XはAまたはSである）， KIRRRGKNKAAARTCRERRRSK, KIRRRGKNKVAAQNCRKRKLDQ, KIRRRGKNKVAAQNCRKRKLET, KRRIRREKNKMAAAKCRNRRRELT, GRPRAINKHEQEQISRLLEKGHPRQQLAIIFGIGVSTLYRYFPASSIKKRMN, KSGPRPRGTRGKGRRIRR, KDRSNLLERHTR, KRPAATKKAGQAKKKL, K(K)_nWK（式中、ｎは４、５、６、７、８でありそしてｎに対するホモログは４０である）， K(K)_nXK（式中、ｎは４、５、６、７、８であり、そしてｎに対するホモログは４０であり、Ｘは任意の天然発生のアミノ酸およびそのアナログである）， KSPLLKSMKGIKQQQHP-(SPNQQQHP)nGK（式中、ｎは１−６である）。これには、核酸安定性および凝縮特性を提供する上記の任意のサブフラグメントの使用が含まれるであろう。さらに、これには、上記ペプチドの任意の誘導体、アナログ、または修飾体が含まれるであろう。上記のペプチドは、核酸に静電気結合するリジンまたはアルギニン残基を含むことができる。これらの正に荷電したアミノ酸は、核酸を保持し続ける。その他の例としては、オルニチン、ホモリジン、ホモアルギニンおよび２，４−ジアミノ酪酸が含まれる。また、親油性ペプチドは、インビトロおよびインビボでの目的を追跡するためのペプチド濃度およびヨウ素化の測定に有用なチロシンを含むことができる。また、トリプトファンは、インターカレーションを通して核酸との相互作用安定性を増加させる。さらにＤＮＡへのペプチドの結合は、トリプトファンの蛍光を消光し、複合体形成の反応速度論および熱力学の測定を可能にする。また、親油性ペプチドは、トリプトファン、アラニン、ロイシンまたはグルタミンのようなヘリックス形成残基を含むこともできる。これらは、カチオン残基をヘリックス形態内の核酸との相互作用に最適な立体配座にできるスペーサーとして作用することができ、結果として、より安定な複合体が得られる。さらに、また、親油性ペプチドは、任意の上記のペプチドの安定化された環状バージョンをも含む。そのように環状バージョンは、ラクタムまたはジスルフィド架橋を導入することによって形成することができる。同様に、上記ペプチドの任意のダイマーも、結合部分として用いることができる。また、用語「送達ペプチド」は、ペプチド結合またはペプチド骨格が分子骨格で置き換えられ、その結果、ペプチドの機能性残基が、本来のペプチド上の活性部位と相互に作用するほぼ適正な位置に、保存され、構造的に強制された、任意の誘導体またはペプチド擬似体をも包含することができる。この置換は、制限するつもりではないが、ぺプチド骨格のＯおよびＮＨ原子または活性部位との近接相互作用をほとんど含まないその他の原子のような送達ペプチドの任意の原子を含むことができる。「ポリペプチド擬似体」は、結果として、ペプチドの適当な機能化に最もすぐれた残基の相互作用が保存されるような、任意のそのような置換を包含することができる。例えば、一つのペプチド擬似体は、非ペプチジルで建築されたスペーサーの置換の結果得られ（即ちベンゾジアゼピン−基本β−ターン擬似体）、その結果、機能的側鎖残基を置換し、その結果それらのＣ−α原子は、天然ペプチド内の位置と等価の位置を占めることができた。この例は、制限を意味するものではない。任意のそのようなペプチド擬似体またはアナログも、本明細書中に包含される。「脂質部分」とは、送達ペプチドと付着する能力を持つ任意の作用因子を意味し、付着時に親油性ペプチド全体に親油性特性を授与する。好ましくは、このことは、送達ペプチドの親油性（lipophilicity）を増加させる。親油性は、付着後の分子の解離定数（Ｋｄ）の減少によって測定される。好まし実施態様では、脂質部分は、（１）Ｎ，Ｎ−ジステアリル−グリシル−；（２）ζ−Ｎ，Ｎ−ジステアリルグリシル−；および（３）Ｎ，Ｎ−ジステアリルアミドメチル：からなる基より選択されるジステアリル誘導体である。脂質部分のその他の実施態様は、６から３０までの炭素原子鎖の長さを持つ、０、１、２から６までのいずれかの不飽和結合を含む直鎖または分枝鎖のアルキル基である。別の場合、脂質部分は、Ｎ^α，Ｎ^ε’−ジパルミトイル−、およびＮ^α，N^ε−ジパルミトイル：からなる基から選択されたジパルミトイル誘導体である。脂質部分のその他の実施態様は、６から３０までの炭素鎖長の、０、１、２から６までのいずれかの不飽和結合を含む直鎖または分枝鎖のアルキル基である。好ましくは、複合体は、単離されるか、精製されるか、または富裕化される。従って、複合体またはキャリヤーシステムは、天然では認められない状態、およびヒトの干渉なしには可能でない状態で存在する。その他の好ましい実施態様では、複合体は、細胞表面レセプターと結合し、エンドソームを溶解し、そして細胞の核を標的とすることができる。これらの機能を達成するために、親油性ペプチドおよび／または親油性部分は、溶解作用因子、表面リガンドまたは核リガンドと結びつけることができる。本明細書中で用いられる用語「結びつける（associated with）」とは、共有結合手段または非共有結合手段を通して、分子を、結合、付着、接続または連結することをさす。「結びつける」は、限定するつもりはないが、表面リガンド、核リガンドおよび／または溶解作用因子と化合する親油性ペプチドを含む。加えて、上記の成分とスペーサー（以下に検討する）との化合をも含む。本明細書中に用いられる用語「溶解作用因子」とは、エンドソーム膜を崩壊させ、細胞の細胞質内に含有物を解放する能力を持つ、分子、化合物、タンパク質またはペプチドをさす。溶解作用因子は、（１）膜融合機構、即ち融台性(fusog enic)であり、それにより溶解作用因子は、細胞膜と関連または溶解し、エンドソーム含有物を細胞質内に漏出させる；（２）膜不安定化メカニズム、それによって溶解作用因子は、細胞膜の構造組織を崩壊させ、エンドソームを通しての細胞質内への漏出の原因となる；または、（３）エンドソーム溶解の原因となる、その他の既知または未知のメカニズム：によって働くことができる。この用語には、限定するつもりはないが、ＪＴＳ−１ペプチド、ウイルス、溶解ペプチド、またはその誘導体のような合成化合物が含まれる。用語「溶解ペプチド」は、膜の構造組織および膜の保全を失うような膜を貫通する化学群をさす。溶解作用因子の存在の結果として、膜は、溶解、融解またはその両方を受ける。本発明に於いて、好ましい溶解作用因子は、ＪＴＳ−１ペプチドまたはその誘導体である。ＪＴＳ−１溶解ペプチドのアミノ酸配列は、ＧＬＦＥＡＬＬＥＬＬＥＳＬＷＥＬＬＬＥＡである。当業者は、そのような命名法がアミノ酸を命名するこの技術分野で受け入れられた標準表示法であることを、容易に認識し理解するであろう。ＪＴＳ−１溶解ペプチドおよび誘導体は、側鎖が分配されて疎水性および親水性側鎖を持つペプチドが得られるようなアミノ酸配列を含む、α−ヘリックスとして設計される。そのようなα−ヘリックスは、両親媒性（amphipat hicまたはamphiphilic）と呼ばれる。疎水性側鎖は、中性および非中性の両方の、無極性の高いアミノ酸側鎖を含む。親水性側鎖は、多数のグルタミン酸を含むが、また、アスパラギン酸ならびに極性または塩基性アミノ酸をも含むことができた。ＪＴＳ−１ペプチドは、任意の誘導体またはその骨格の修飾を含むであろう。溶解ペプチドは、酸性ｐＨで二次構造変化を受け、その結果、選択的溶解性を持つ重合体凝集を形成する。一般的に、両親媒性ペプチド溶解活性に重要なパラメーターには、以下の物が含まれる。第一は、疎水性（hydrophobicity）；ペプチドは、リン脂質−コレステロール膜と作用しこれを通す充分に高い疎水性を持つ疎水性表面を持たなければならない、即ち、それ自体の脂質結合性は十分ではない。赤血球溶血素アッセイは、ペプチドが有用な活性を持つであろうよりよい指標を与える。第二は、ペプチドの凝集：凝集する能力は、溶解およびトランスフェクションに重要な投割を演ずる。第三は、ｐＨ感受性：両親媒性ペプチドは、ｐＨ感受性であるはずである。溶解活性は、ＪＴＳ−１の親水性表面への、リジン、アルギニンおよびヒスチジン残基の導入によって調節することができる。第四は、脂質膜相互作用：ペプチドは、脂質膜との相互作用を可能にする疎水性カルボキシ末端を持つはずである、例えば、トリプトファンのチロシン置換は活性を大きく減少させる。最後は、ペプチド鎖長：長さは、安定なヘリックス形成および脂質膜への浸透およびその破裂を得るために、１２残基より大きくなければならない。溶解ペプチド、類似体および誘導体エンドソーム溶解作用因子としてのアデノウイルスの使用を除去するために、エンドソームから細胞への核酸の送達速度を増加させ、エンドサイトーシスされたより高濃度の核酸のエンドソーム内への放出および非分解を確立するであろう、融合性または膜崩壊性ペプチドを設計した。ホスファチジルスクシニルグリセロールおよびホスファチジルエタノールアミンからなるｐＨ感受性リポソーム（Ｌｉｕ＆Ｈａｕｎｇ，１９９０，ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＡｃｔａ，１０２２、３４８−５４）に加えて、ＧＬＦＥＡＬＬＥＬＬＥＳＬＷＥＬＬＬＥＡ（ＪＴＳ−１）の親油性誘導体およびその他の溶解ペプチドが用いられた。水庖性口内炎ウイルスの糖タンパク質のアミノ末端配列および合成された両親媒性ペプチドＧＡＬＡを含む、数多くの融合性／溶解性ペプチドが以前から記載されている（Ｏｊｃｕｉｓら、ＴＩＢＳ，１６，２２５−２２９，１９９１；Ｄｏｍｓら、ＭｅｍｂｒａｎｅＦｕｓｉｏｎ，３１３−３３５、ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．１９９１；Ｓｕｂｂａｒａｏら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２６，２９６４−２９７２，１９８７）。インフルエンザの赤血球凝集素ＨＡ₂サブユニットからの短い合成ペプチドが、人工の脂質膜で研究されている（Ｗｈａｒｔｏｎら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，６９，１８４７−１８５７，１９８８）。これらのペプチドは、膜を溶解し、さらに赤血球凝集素分子全体によく似たリポソーム含有物を漏出させる。しかしながら、その速度は、極めて遅い。インフルエンザペプチドによる低いエンドソーム溶解効率を高めるために、新たなペプチドを創作した。このようなエンドソーム溶解用新規ペプチドの創作には、以下の４つの要素を考慮した：（１）膜内へのペプチド挿入後のそれらのオリゴマーへの組織的結びつきを指示する、α−ヘリックスに沿った親水性および疎水性アミノ酸残基の含有量および間隔；（２）結合分子へのペプチドの共有結合による付着ならびにオリゴマー形成および避けがたい凝集の防止；（３）溶解を達成するために必要な様々なオリゴマー化構造の充分な凝集；および（４）ｐＨ感受性エンドソームプロセシングを作りだす親水性のカルボキシおよびアミノ側鎖ならびに末端基の存在。ペプチド鎖に沿ったアミノ酸側鎖の配置は、タンパク質の二次および三次構造を決定する。膜化合タンパク質については、疎水性および親水性残基によって創り出される両親媒性プロフィールは、タンパク質の機能の主な決定因子である。ウイルス外皮と細胞の細胞質膜との融合の原因となるインフルエンザ赤血球凝集素領域の分析によって、タンパク質がα−ヘリックスを形成する場合に大きな疎水性表面が形成されることが示される。本発明では、数多くの溶解ペプチドが設計され、エンドソーム溶解活性について試験されている。これらのペプチドが機能性を持つために、それらは以下のパラメーターを持たねばならない。これらのペプチドは、両親媒性膜化合ペプチドである。これらの両親媒性ペプチドは、側鎖が配置されてその結果ペプチドが疎水性側鎖および親水性側鎖を持つ様なアミノ酸配列を含む、α−ヘリックスとして設計された。疎水性側鎖は無極性の高いアミノ酸側鎖を含むが、親水性側鎖は、非常に多数のグルタミン酸を含む。一般的に、両親媒性膜化合ペプチドは、通常、２１のアミノ酸か、またはそれより少ないアミノ酸を含む。設計の基準は、アミノ酸が両親媒性種を形成する高い確率を持つことが、要求される。このことは、膜化合ペプチドの二次構造：即ち、ヘリックス、ターン、ベンド(bend)、ループ、β−シート、およびそれらの重合体凝集物および文献に記載されているその他の超二次構造、例えば、ヘリックス−ターン−ヘリックス：に提示することができる。さらに、アミノ酸は、α −ヘリックス内に認められる高い確率およびβ−シートまたはターン構造を形成する低い確率を持つべきである。ロイシン、リジンおよびグルタメートは、そのような特徴に適当なアミノ酸である。例えば、α−ヘリックスの側方表面上に位置するリジンおよびロイシンの反対側のグルタメート残基は、脂質相互作用のために最適な電荷の配置を提供する。その上、潜在するヘリックス安定化を利用するために、リジンおよびグルタメートを配置することができる。ヘリックス双極子の安定化は、ＮＨ₂およびＣＯＯＨ−末端の電荷を取り除くことによって最適化され、それ故、ＮＨ₂末端およびＣＯＯＨ−末端のアミドは有用である。そのような可能性は、二次構造による予想または二次構造の設計を最適化する類似法から、測定することができる。ペプチド内にヘリックス構造を誘導する傾向について記載されている非天然アミノ酸も、用いられる。疎水性または親油性表面は、脂質−ペプチドの相互作用に大きな影響を持つ。このように、親油性表面は、脂質と相互作用することが知られているペプチド後のモデルである。親油性表面上に置換される場合、疎水性および脂質相互作用性残基（Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ、Ｐｒｏ）は、単独または集団のいずれかで、類似の膜化合効率を促進する。同様に、酸性基および／または親水性基（Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ａｒｇ）を親水性表面上に配置して、目的を達成することもできる。親油性および親水性表面も、脂質相互作用を促進する、および／または、酸性ｐＨでエンドソーム溶解を誘導する、残基を含むことができる。親水性表面に位置するグリシンおよびセリンは以下の実施例で示すような好ましい影響活性を示すので、そのような相互作用は、α−ヘリックスを促進する残基に限定されるわけではない。特に、その一つであるＪＴＳ−１ペプチド、ＧＬＦＥＡＬＬＥＬＬＥＳＬＷＥＬＬＥＡは、強い無極性アミノ酸のみを含む疎水性表面を持つが、これに対して、親水性表面は生理的ｐＨ値で負電荷を持つグルタミン酸残基によって支配される。アミノ末端に、ＪＳＴ−１ペプチドは、溶解性または膜破壊配列として、アミノ酸位置１−２−３にそれぞれＧｌｙ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ配列を用いている。ｐＨ感受性を増加させるために、アミノ酸位置４にＧｌｕを加える。さらに、位置１２−１５に、Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕを脂質結合部位として用いる。残りの配列をアレンジすると、ａｐｏＥ−３の疎水性および親水性の表面が提供される。アミノ酸１６、９、２、１３、６、１７、１０、３、１４、７および１８は、疎水性表面を形成する。アミノ酸５、１２、１、８、１５、４および１１は、親水性表面を形成する。以下のＪＴＳペプチド：ａｐｏＥ−３ＧＬＦＥＡＬＬＥＬＬＥＳＬＷＥＬＬＬＥＡ：は、溶解活性を特徴とする。上記に加えて、溶解性または膜破壊活性を持つｎ−アシルテトラペプチドを構築することができる。これらの構造は、Ｓｍｉｔｈら、米国特許出願番号０８／４８４，７７７、１９９５年１２月１８日出願、に示されており、全ての図面を含むその全体を参照としてここに採用する。上記の適当なアミノ酸で置換された場合、テトラペプチド配列は、二重層の脂質と相互作用する、およびそれによって不安定化される可能性を持つ。アシル鎖は、構造的／機能的要求に基づいて、長くすることも、または短くすることもできる。さらに、より短いα−ヘリックスペプチドも、上記の溶解特性を残す考えに基づいて、上記の設計モチーフで合成された。さらに、ＣＯＯＨ末端アミドを用いると、ヘリックス−双極子の最適化が提供される。α−らせん構造になったとき、疎水性表面は位置４、７、３および１０に現れる。上記のα−ヘリックスペプチドにＧｌｙ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅの溶解性または膜崩壊活性を提供するために、ペプチドを１１−マーまで伸ばした。以下のペプチド：Ｓｕｃ−ＧＬＦＫＬＬＥＥＷＬＥ：を形成するためにさらなるアミノ酸に加えることは、３つのグルタミン酸活性の存続を可能にする。さらに、ペプチドのアミノ末端をスクシニル化し、ヘリックスを安定化するために設計されたリジンとの塩架橋をｉからｉ＋４にすることができる。その他の溶解作用因子のさらなる詳細な記述は、Ｓｍｉｔｈら、米国特許出願０８／４８４，７７７、１９９５年１２月１８日出願、に提供されており、ここに全ての図面を含むその全体と参照として採用する。本明細書中で用いられる用語「表面リガンド」は、細胞の表面レセプターに結合するであろう化学化合物または構造をさす。本明細書中で用いられる用語「表面レセプター」は、リガンドが付着できる細胞表面上の特異的化学団をさす。細胞表面レセプターは、特定の細胞に特異的であることができる、即ち、もう一つの細胞型よりむしろ一つの細胞型に優勢に認められる（例えば、ＬＤＬおよびアシアログリコプロテインレセプターは、肝細胞に特異的である）。レセプターは、リガンドと付着した分子とのインターナリゼーション(internalization)を容易にする。細胞表面レセプターには、これらに限定するつもりはないが、葉酸レセプター、ビオチンレセプター、リポ酸レセプター、低密度リポタンパク質レセプター、アシアロ糖タンパク質レセプター、インスリン様増殖因子ＩＩ型／カチオン−非依存性マンノース−６−リン酸レセプター、カルシトニン遺伝子−関連ペプチドレセプター、インスリン様増殖因子Ｉレセプター、ニコチンアセチルコリンレセプター、肝細胞増殖因子レセプター、内皮レセプター、胆汁酸レセプター、骨格形態形成タンパク質レセプター、軟骨誘導因子レセプターまたはグリコシル−ホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）−固定化タンパク質（例えば、β −アンドレナルジック（andrenargic）レセプター、Ｔ−細胞活性化タンパク質、Ｔｈｙ−１タンパク質、ＧＰＩ−固定化５’ヌクレオチダーゼ）が含まれる。これらの例は、限定例ではない。レセプターは、リガンドが特異的に、および比較的高いアフィニティーで結合する分子である。通常、それはタンパク質または糖タンパク質であるが、糖脂質、脂質多糖、グリコサミノグリカンまたはグリコカリックスであっても良い。本発明の目的としては、抗体またはそのフラグメントが結合するエピトープも、抗原：抗体複合体がエンドサイトーシスを受けるため、レセプターと解釈される。さらに、表面リガンドには、サイトーシス（例えば、エンドサイトーシス、ポトサイトーシス、ピノサイトーシス）で細胞に侵入する能力を持つ任意の物も含まれる。本明細書中で用いられる用語「リガンド」は、レセプターと結合するであろう化学化合物または構造をさす。これには、限定ではないが、アシアロオロソムコイド、アシアロ糖タンパク質、葉酸塩、リポ酸、ビオチンならびにＰＣＴ出願ＷＯ９３／１８７５９（ここに全ての図面、スケッチまたは図表を含む参照として採用する）に列挙したそのような化合物のようなリガンドが含まれる。当業者は、選ばれるリガンドが、結合されるレセプターに依存するであろうことを、容易に認識するであろう。異なる型の細胞は異なるレセプターを持つため、このことは、用いられる細胞表面リガンドに依存して、具体的な細胞型に核酸を標的化する方法を提供する。従って、好ましい細胞表面リガンドは、標的とされる細胞の型に依存するであろう。本明細書中で用いられる用語「核リガンド」は、核レセプターと結合するであろうリガンドをさす。本明細書中に用いられる用語「核レセプター」は、特異的リガンドと結合し、核膜を通過するリガンドの輸送を助けるであろう核膜上の化学団をさす。核レセプターは、制限するつもりはないが、核配置配列と結合するそれらのレセプターであることができる。核リガンドの例としては、ＰＣＴ出願ＷＯ９３／１８７５９（ここに、全ての図面、スケッチ、図表、および例示を含む参照として採用される）に開示されたそれらが含まれるが、限定例ではない。上記のように、表面リガンド、核リガンドおよび／または溶解作用因子は、親油性ペプチド結合分子と直接化合することができるか、またはスペーサーを介して親油性ペプチド結合分子と化合することができる。Ｓｍｉｔｈら、上記のそれらも、ここに採用された。上記の巨大分子は、ＤＮＡまたはＲＮＡのような核酸であっても良い。脂質部分を、前記送達ペプチドのＮ−末端と連結させ、送達ペプチドを前記巨大分子と非共有的に結合させることができる。巨大分子を一つより多くの親油性ペプチド、例えば、２、３、４または５の親油性ペプチドと複合させることができる。上記の機能的特性（即ち、凝縮、溶解、核標的化等）は、異なるペプチド−巨大分子の複合体から別々に創り出すことができる。送達ペプチドは、Ｍｉｍｓら、Ｊｏｕｒ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６９，２０５３９−２０５４７、に記載の、（１）ａｐｏＥ−３^129-169；（２）ａｐｏ−Ｅ３^139-169；および（３）ａｐｏＥ−３^129-169Q142：からなる群から選択された化合物を含むことができる。もう一つの態様では、本発明は、前記巨大分子を細胞に送達するための上記の複合体を使用する方法であって、前記複合体の前記細胞への取り込みを可能にするに充分な時間、前記細胞を前記複合体と接触させ、その中で前記巨大分子の生理学的に充分な量を送達する段階を含む、前記の方法の特徴を示す。好ましい実施態様では、また、方法は、前記巨大分子を溶解および／または網の目に絡ませる（enmesh）ことのできる生物の界面活性体と前記複合体を接触させることも含む。本明細書中で用いられる用語「網の目に絡ませる」は、核酸巨大分子で送達ペプチドを被覆、複合または化合し、その結果、ペプチド−巨大分子複合体に縮合することをさす。界面活性体は、ＣＨＡＰＳ（Ｎ，Ｎ−ジメチル −Ｎ−（３−スルホプロピル）−３−［（３α，５β，７α，１２α）−３，７，１２−トリヒドロキシ−２４−オキソコラン−２４−イル］アミノ−１−プロパナミニウムヒドロキシド内部塩）、１−Ｏ−オクチル−Ｄ−グルコシド、ならびに、コール酸ナトリウムを除くその他の両性イオンおよび中性の界面活性体：からなる群より選択することができる。好ましくは、界面活性体は、界面活性体の臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）以下の最終濃度で存在する。用語「臨界ミセル濃度」は、ミセル構造の形成が促進されるより下の界面活性体のその濃度をさす。さらに、好ましくは、界面活性体は、前記界面活性体の濃度をその臨界ミセル濃度以下に減少させるに充分な前記の巨大分子での希釈率を持つ。もう一つの態様では、本発明は、上記の複合体で形質転換された細胞の特徴を示す。本明細書中で用いられる「形質転換」または「形質転換される」は、細胞または生物体による核酸の取り込みを含む遺伝子運搬のメカニズムである。それは、細胞の（表現型を発現する）特徴に一過性または永続的変化を導入するプロセスまたはメカニズムである。そのような変化は、ＤＮＡまたはＲＮＡが、特異的遺伝子生成物を発現するか、または外因性遺伝子生成物の発現あるいは影響を変える形で、細胞内に導入されることによる、遺伝子の運搬のメカニズムによるものである。細胞内への侵入に続いて、形質転換する核酸は、宿主の核酸と再結合することができる。そのような形質転換は、細胞に遺伝物質の永続的成分を組み込んでできる、標的化細胞の染色体内へ遺伝子を導入すると言う点で、安定な形質転換であると考えられる。安定な形質転換後の遺伝子発現は、安定な形質転換に導かれる細胞の特徴を、永続的に変えることができる。さらに、形質転換する核酸は、プラスミドあるいは鋳型ファージとして、またはエピソームによって、独立的に存在することができる。エピソームによる形質転換は、導入された遺伝子が宿主細胞染色体に組み込まれないが、染色体外エレメントとして転写される活性状態で残っている、安定な形質転換変異体である。形質転換は、以下に記載のインビボの技術によって、または核酸を含み、また選択可能マーカーをも含むペプチド−巨大分子複合体で細胞を同時トランスフェクトするエクスビボの技術によって、成し遂げることができる。この選択可能マーカーを用いると、形質転換されたそのような細胞が選択される。形質転換の研究に用いられる選択可能マーカーの型は、当業者らに周知である。形質転換された細胞は、ホルモン、増殖因子、酵素、クロッティング因子、アポリタンパク質、レセプター、薬剤、腫瘍抗原、ウイルス抗原、寄生虫抗原、および細菌抗原を含む、タンパク質、ポリペプチドまたはＲＮＡから選択される様々な化合物を生成することができる。その他の例は、上記の核酸についての検討の内に見い出すことができる。形質転換された細胞によって発現される生成物は、用いられた核酸に依存する。上記は、単なる例であり、制限を意味するものではない。これらの使用方法は、細胞を形質転換するに充分な時間、上記のようなペプチド−巨大分子複合体と細胞を接触させる段階を含むであろう。興味ある細胞の型は、限定するつもりはないが、肝臓、筋肉、肺、内皮、骨格、血液、関節および皮膚が含まれる。本発明のその他の特徴および長所は、添付図面および請求の範囲と共に、以下の本発明の詳細な説明から明らかになるであろう。図面の簡単な説明図１は、本発明の様々な特徴を説明する概略図である。図２は、誘導体化した親油性ペプチド、ジステアリル−グリシル−ａｐｏＥ− ３^129-169を示しており、親油性アンカーおよび両親媒性表面を示している。図３は、突然変異し誘導体化した親油性ペプチド、ジステアリル−グリシル− ａｐｏＥ−３^{129-169(Q142)}を示しており、残基１４２のアミノ酸の置換（ａｒｇからｇｌｎ）を示している。図４は、誘導体化された親油性ペプチド、ジステアリル−グリシル−ａｐｏＥ −３^129-169と複合させた場合に、サイトーシスされ次に分解される、標識されたＬＤＬの能力を示している。突然変異し誘導体化した親油性ペプチド、ジステアリル−グリシル−ａｐｏＥ−３^{129-169(Q142)}は、サイトーシスおよび分解を有意に少なくする（Ｍｉｍｓら、を参照のこと）。図５は、界面活性体ＣＨＡＰＳでの親油性ペプチドの溶解性を示している。図６は、凝縮されたペプチド−巨大分子複合体の大きさへの、様々なＣＨＡＰＳの濃度の影響について、示している。５ｍＭの臨界ミセル濃度以下でＣＨＡＰＳと混合されたペプチド−巨大分子複合体は、ＣＨＡＰＳの濃度が≧５ｍＭであるそのような複合体と比較して、（複合体の直径で測定した）サイズの有意の減少を示している。図７は、ＣＨＡＰＳ濃度が細胞にトランスフェクトされるペプチド−巨大分子複合体の能力に有意の影響を持たないことを示している。発現したタンパク質から発散された比光単位（relative light units）によって測定した場合、ペプチド−巨大分子複合体単独および界面活性体と複合したそれらは両方とも、細胞内にトランスフェクトされた外来タンパク質を発現した。図８は、ペプチド−巨大分子複合体を製造する方法を示している。ＣＨＡＰＳ濃度をその臨界ミセル濃度である５ｍＭ以下に希釈すると、結果として可溶化した親油性ペプチドと核酸の予期しない驚くべき網の目の絡みおよび凝縮が起こり、直径の小さくなったペプチド−巨大分子複合体が作り出される。図９は、様々なペプチド複合体の大きさの比較を示している。誘導体化された親油性ペプチド、ジステアリル−グリシル−ａｐｏＥ−３^129-169（カラム４；１．からｒ．）は、凝縮後、最も大きい直径の減少を示した。図１０は、様々なペプチド−巨大分子複合体のトランスフェクションの能力を示している。誘導体化された親油性ペプチド、ジステアリル−グリシル−ａｐｏＥ−３^129-169と、ガラクトシアリル化−溶解親油性ペプチドＫ８：ＪＴＳ−１の間に、有意のトランスフェクションの差は存在しなかった。しかしながら、突然変異し誘導体化された親油性ペプチド、ジステアリル−グリシル−ａｐｏＥ− ３^{129-169(Q142)}は、有意に少ないトランスフェクションを示す。おそらく、レセプターを受ける突然変異したペプチドが、エンドサイトーシス、およびそれに続く送達核酸の発現を仲介する能力がないためであろう。図面は、必ずしも一定の割合で表しているわけではない。本発明のある特徴は、スケールを誇張しているか、または明快にし簡潔にするために図式的な形で示しているであろう。さらに、ＰＣＴ出願ＷＯ９３／１８７５９の図面も、ここに参照として採用する。発明の詳細な説明以下に、核酸およびその他の巨大分子を細胞に送達するために親油性ペプチドと共にペプチド−巨大分子を用いる、本発明の好ましい実施態様の具体的例について、示している。これらの例は、例証として提供されたものであって、いかなる様式でも本発明を制限するつもりのものではない。これらの例は、具体的な親油性ペプチドが細胞送達用核酸を如何に安定化し凝縮するかを示している。さらに、これらの例は、表面および核リガンドを如何に細胞内部および／または細胞核内へ核酸を標的化するための送達ペプチドと共に用いることができるかについて示している。そのような標的化送達は、溶解作用因子および親油性ペプチドの使用によって強化される。これらの例には、インビボおよびインビトロ技術、様々な細胞または動物モデル、および如何に核酸を細胞内に挿入することができるかが含まれる。そのようなペプチド−巨大分子複合体の用途がここに示され、さらに、ＰＣＴ出願ＷＯ９３／１８７５９、Ｗｏｏら、「ＤＮＡキャリヤーシステムおよびその使用方法」（"A DNA Carrier System and Method of Use"）中に詳述されておりここに参照として採用される。以下に、ペプチド−巨大分子複合体内の結びついた核酸にある機能を提供するために、そのような化合核酸を含む形質転換された細胞または動物内で用いることのできるペプチド−巨大分子複合体の具体例を提供する。当業者らは、ペプチド−巨大分子複合体の具体的部分が、ペプチド−巨大分子複合体の望ましい性質を提供する機能的領域を含むそれとして同定できることを、認識しているであろう。そのような領域は、日常的に行われている欠失、突然変異または修飾技術またはそれらと等価な技術を用いて容易に最小化することができる。本発明の複合体またはキャリヤーシステムは、好ましくは、合成の溶解物質および核酸親油性ペプチド結合分子を用いることによって、細胞内への核酸の送達を強化する。特に、具体的溶解作用因子は、エンドソームを崩壊させ、それによって、核酸のリソソーム破壊を防ぐに有効である。具体的な親油性ペプチド結合分子は、安定化され凝縮された核酸を細胞に送達するに有用である。さらに、これらの具体的な親油性ペプチドは、安定化され凝縮された核酸を細胞の核内に送達するに有利である。これらのキャリヤーは、適当に標的化された細胞への具体的核酸の送達を強化することによって、疾病を治療するために用いることができる。また、これらのキャリヤーを用いて、動物モデルでヒトの疾病を評価するための、形質転換された細胞ならびにトランスジェニック動物を作り出すこともできる。また、本発明は、ＤＮＡ安定性および細胞へのＤＮＡ送達を増加させるために、ＤＮＡ親油性ペプチドを利用する。特に、本発明は、核酸を凝縮する能力を持つペプチドと非共有的に結合した核酸と共に核酸キャリヤーを用いる特徴がある。これらの親油性ペプチドは、より小さくまたは凝縮されたより安定な核酸粒子を送達用に提供し、そうすることによって細胞内および核内への核酸のトランスフェクション率を高める。溶解作用因子および親油性ペプチドの両方の特徴を利用することによって、本発明は、核酸キャリヤーシステムによる核酸送達を高める。これらの成分は、単独で、一緒に、または以下に記載の、およびＰＣＴ出願ＷＯ９３／１８７５９、Ｗｏら、「ＤＮＡキャリヤーシステムおよびその使用方法」（"A DNA Carrier S ystem and Method of Use"）（図面を含むその全体をここに参照として採用する）中に開示された、核酸キャリヤーのその他の成分と共に用いることができる。溶解物および親油性ペプチドと共に、キャリヤーシステムは、エンドソームから細胞内部への安定な凝縮された核酸の放出を強化することによって、特異的細胞への核酸の送達を高める。核酸、親油性ペプチドおよび溶解作用因子を含む核酸結合複合体に加え、本発明は、表面リガンドおよび核リガンド等を含む様々な核酸結合複合体の特徴をもまた示している。表面リガンドは、細胞表面レセプターと結合し、サイトーシス（例えば、エンドサイトーシス、ポトサイトーシス、ピノサイトーシス）を通して細胞に侵入する能力を持つ。ある種の細胞に特異的な表面リガンドを用いることによって、核酸は、所望する組織に直接に、ペプチド−巨大分子複合体を用いて送達することができる。核リガンドは、核膜と通して細胞の核に核酸を認識させ輸送する能力を持つ。そのような核リガンドは、核に対して核酸を標的化する親油性ペプチドの能力の強化を助ける。さらに、本発明は、パルミチン酸かあるいはグリシンのＮ，Ｎ−ジステアリル誘導体のいずれかでのアシル化を通してＮ末端を修飾することによって誘導体化されたペプチドの特徴を示す。そのような修飾を行うと、脂質と化合した場合の新規化合物のＫｄ値が増加することによって、処理ペプチドが親油性になる；このように、誘導体化は、本来結合している脂質表面へのペプチドのアフィニティを効果的に増加させ、結合親油性ペプチドが無差別的に他の脂質表面に移る傾向を減少させる。それ故、いったん、誘導体化されたペプチドは、核酸輸送複合体内に複合され、パルミチン酸またはＮ，Ｎ−ジステアリル修飾物は、ペプチドをつなぎ止め、インビボで循環中に接触することのできる標的でない他の脂質表面へのその転移を防ぐであろう。それ故、本発明のさらなる長所は、親油性ペプチド結合部分がその特異的標的に到達するまでの、長い伝達時間の間中、インビボでの循環性を保つ親油性ペプチド結合部分の能力である。このことは、体中を循環する間に接触することのできる赤血球、血管細胞表面、または脂質関連血漿タンパク質への非特異的吸収を通しての関連標的リガンドまたは核酸のいずれかの不本意な損失を防ぐために、可能である。本発明のこの改良された特徴は、標的細胞のトランスフェクション効率を著しく上昇させ、投与中の投与量を減少させ、結果として、可能性のある有害な副作用を少なくする。より短い生きた複合体が所望されるならば、１２炭素のアンカー部分を用いることができた。これは、ただ単に説明例であって、制限例ではない。Ｋｄは、親油性基、例えば、アルキルまたは脂肪酸残基、の疎水性によって熱力学的に定量される。本発明の更に好都合な特徴は、パルミチン酸またはＮ，Ｎ，−ジステアリル修飾が、脂質の存在下において処理されたペプチドのαヘリックス性を増加させることである。これは、そのペプチドのＮ末端ドメインが、第四ヘリックスバンドル（bundle）によってペプチドのその標的リセプターに対する結合を媒介することを示したので更に有益な特徴である。ペプチドのこのヘリックスドメインは、ペプチド修飾が除去されたかまたは脱脂された場合にその標的リセプターの結合能の５００倍の低下を示す。したがって、修飾されたペプチドのαヘリックス性に対する脂質修飾の作用は、αヘリックスの破壊を伴うことなくその展開を引き起こし、それによって、リセプター活性コンホメーションおよび標的細胞に対する適切な結合をもたらす。特定の細胞およびその核に対して核酸を供給する上記キャリヤーの能力はまた、トランスジェニック動物モデルを、分子性発癌および疾患の詳細な分析、潜在的な化学的および物理的発癌物質および腫瘍プロモーターの評価、モデル治療手段の検討、更には、畜産目的に用いることを可能にする。更に、上記ペプチド− 巨大分子複合体の利点は、種々の疾患の投与および治療の方法を可能にする。更に、上記ペプチド−巨大分子複合体は、特定のタンパク質、ポリペプチドおよび／またはＲＮＡを生じるように細胞を形質転換するのに用いることができる。同様に、上記ペプチド−巨大分子複合体は、組織培養細胞と一緒にインビトロで用いることができる。インビトロでの使用は、特異的に標的にされた組織培養細胞中へ特異的発現を集中させることによって、種々の核酸の投割を研究することを可能にする。本発明は、上で論及されたペプチド−巨大分子複合体によって供給される核酸が細胞に含有されているトランスジェニック動物をも包含する。これら細胞には、生殖細胞または体細胞が含まれる。トランスジェニック動物モデルは、分子性発癌および疾患の詳細な分析、潜在的な化学的および物理的発癌物質および腫瘍プロモーターの評価、モデル治療手段の検討、および畜産目的に用いることができる。その使用方法には、ヒトを治療する方法も含まれ、これは、本発明のもう一つの態様である。その治療方法は、細胞または組織による核酸の発現のために、その細胞または組織に対して所望の核酸を供給するように上記の核酸キャリヤーを投与する工程を含む。目的の細胞または組織の種類には、制限されるわけではないが、肝、筋肉、肺、内皮、関節、皮膚、骨および血液が含まれうる。治療または使用の方法には、肝細胞を上で論及された核酸キャリヤーと接触させることによってその肝細胞中に核酸を供給する方法が含まれる。核酸キャリヤーと一緒に用いられる表面リガンドは、肝細胞リセプターによる認識に特異的なものである。特に、アシアロオロソムコイドタンパク質は、細胞表面リガンド、ａｐｏＥ−３または親油性ペプチド結合性分子のような誘導体として用いられ、そしてＪＴＳ−１または誘導体は溶解作用因子として用いられる。更に、これら使用方法には、ａｐｏＥ−３を含み且つ表面または核リガンドを含まないキャリヤーを用いる核酸の供給も含まれる。本明細書中で用いられる「肝細胞」という用語は、肝臓の細胞を意味する。治療または使用の方法の一つの態様には、筋細胞を上で論及されたペプチド− 巨大分子複合体の一つと接触させることによって筋細胞に対して核酸を供給する方法が含まれる。用いられる表面リガンドは、筋細胞上に含有されたリセプターに特異的である。特に、表面リガンドは、インスリン様成長因子Ｉでありうる。更に、親油性ペプチド結合性分子はａｐｏＥ−３または誘導体でありうるし、そして溶解作用因子はＪＴＳ−１または誘導体でありうる。更に、血漿、全血中に存在し、そして限定されるわけではないが、胸膜気道、腹膜腔、腫瘍および組織の間隙などの身体の特定の部分と独特に結合した交換可能な脂質は、ペプチド− 巨大分子複合体の更に別の成分として含まれうるので、そのペプチド−巨大分子複合体は、身体のどの部分にそれらが集中するかによって定性的にも定量的にも異なることがありうる。更に、これらの治療または使用の方法には、ａｐｏＥ− ３を含み且つ表面または核リガンドを含まないキャリヤーを用いる核酸の供給も含まれる。本明細書中で用いられる「筋細胞」という用語は、横紋筋、平滑筋または心筋に関連した細胞を意味する。治療または使用の方法のもう一つの態様には、骨形成細胞を上で論及されたペプチド−巨大分子複合体と接触させることによって骨形成細胞に対して核酸を供給する方法が含まれる。ペプチド−巨大分子複合体と一緒に用いられる表面リガンドは、骨形成細胞に関連したリセプターに特異的である。特に、表面リガンドには、制限されるわけではないが、骨形成タンパク質または軟骨誘導因子が含まれうる。更に、核酸キャリヤーの親油性ペプチド結合性分子はａｐｏＥ−３または誘導体でありうるし、そして溶解作用因子はＪＴＳ−１またはその誘導体でありうる。更に、これらの治療または使用の方法には、ａｐｏＥ−３を含み且つ表面または核リガンドを含まないキャリヤーを用いる核酸の供給も含まれる。本明細書中で用いられる「骨形成細胞」という用語は、骨成長を促進する細胞を意味する。非制限例には、骨芽細胞、ストローマ細胞、誘導前骨芽細胞、確定前骨芽細胞、軟骨細胞、更には、骨形成を助けることができる他の細胞が含まれる。治療または使用の方法のもう一つの関連態様には、上で論及されたペプチド− 巨大分子複合体を用いて細胞に対して核酸を供給する方法が含まれる。ペプチド −巨大分子複合体は、葉酸塩をリガンドとして用いる。更に、核酸キャリヤーは、ＪＴＳ−１または誘導体を溶解作用因子としておよびａｐｏＥ−３またはその誘導体を親油性ペプチド結合性分子として用いることができる。この方法は、制限されるわけではないが、肝細胞を含めた葉酸塩リセプターを含有する細胞を標的とする。治療または使用の方法の更に別の関連態様には、上で論及されたペプチド−巨大分子複合体を用いて滑膜細胞またはマクロファージに対して核酸を供給する方法が含まれる。ペプチド−巨大分子複合体は、滑膜細胞および／またはマクロファージによって認識されたリガンドを用いる。更に、核酸キャリヤーは、ＪＴＳ −１または誘導体を溶解作用因子としておよびａｐｏＥ−３またはその誘導体を親油性ペプチド結合性分子として用いることができる。更に、この使用方法には、ａｐｏＥ−３を含み且つ表面または核リガンドを含まないキャリヤーを用いる核酸の供給も含まれる。「滑膜細胞」という用語は、関節または関節の体液腔に関連した細胞を意味する。上の方法に加えて、使用方法には、核リガンド結合性複合体も用いる供給も含まれる。このような核キャリヤーは、細胞の核に対して核酸を向けるのに投だつであろう。更に、上の使用方法には、親油性ペプチド結合性分子および溶解作用因子を含む核酸キャリヤーまたはそれらの多数が含まれる。上の方法の核酸キャリヤーは、様々な経路によって投与されうる。「投与」または「投与する」という用語は、身体中への核酸キャリヤーまたはそのキャリヤーのキャリヤーの導入経路を意味する。投与は、静脈内、筋肉内、局所、嗅覚器官または経口であってよい。投与は、標的組織に対して直接的でありうるしまたは全身供給によりうる。特に、投与は、細胞に対する直接注射によってよい。もう一つの実施態様において、投与は、静脈内、皮下スプレーまたは非晶質粉末ＰＶＰの使用によってよい。投与経路には、筋肉内、エーロゾル、経口、局所、全身、嗅覚器官、眼、腹腔内および／または気管内が含まれる。細胞形質転換本発明の一つの実施態様には、上記のペプチド−巨大分子複合体に関連した核酸で形質転換された細胞が含まれる。細胞がいったん形質転換されると、その細胞は、その核酸によってコードされたタンパク質、ポリペプチドまたはＲＮＡを発現するであろう。細胞には、制限されるわけではないが、肝、筋および皮膚が含まれた。本記載は、いずれにせよ、制限するためのものではない。目的の遺伝物質を含有する核酸は、形質転換された細胞中においてその核酸がＲＮＡに転写され、そして必要な場合にはタンパク質またはポリペプチドに翻訳されうるように、宿主またはベクター内で適所におよび逐次的に配向される。種々のタンパク質またはポリペプチドは、形質転換された細胞中の核酸カセット中の配列によって発現されうる。これら生産物は、細胞内または細胞外の構造要素、リガンド、ホルモン、神経伝達物質、成長調節因子、アポリポタンパク質、酵素、血清タンパク質、リセプター、小分子量化合物用のキャリヤー、薬物、免疫調節物質、癌遺伝子、腫瘍サプレッサー、毒素、腫瘍抗原、抗原、アンチセンス阻害剤、三本鎖形成阻害剤、リボザイムとして、またはそれらの活性を調節するための細胞構造上の特異的構造決定因子を認識するリガンドとして機能しうる。形質転換は、インビボかまたはエクスビボ技術によって行うことができる。当業者は、このような形質転換技術を熟知しているであろう。エクスビボ技術による形質転換には、選択可能なマーカーを含有するＤＮＡで細胞を同時トランスフェクションすることが含まれる。この選択可能マーカーは、形質転換された状態になった細胞を選択するのに用いられる。選択可能マーカーは、当業者に周知である。例えば、肝臓病のための核酸供給に対する一つのアプローチは、罹患した個体から肝細胞を取出し、それらをインビトロで遺伝的に変化させ、そしてそれらを受容遺伝子座中に再度挿入することである。エクスビボアプローチは、肝細胞を採取し、その肝細胞を培養し、その肝細胞を形質導入しまたはトランスフェクションし、そしてそのトランスフェクションされた肝細胞を罹患した個体中に導入する工程を含む。肝細胞は、様々な方法で入手できる。それらは、形質転換された肝細胞を後で注射される個体から採取されてよいし、またはそれらを他の源から集め、形質転換した後に、目的の個体に注射することができる。エクスビボ肝細胞をいったん集め、それを、核酸キャリヤーを含有する培地と接触させ、そしてその培養された肝細胞をその培地中において肝細胞の取込みおよび形質転換に充分な時間および適当な条件下で維持することによってその肝細胞を形質転換させることができる。次に、それら肝細胞を、組織中への細胞懸濁液の注射によって正常位置（肝体または門脈血管系）または異所位置に導入できる。当業者は、その細胞懸濁液が、細胞の成育能力を維持するための塩類、緩衝剤または栄養素；細胞安定性を確保するためのタンパク質；並びに血管形成および植込まれた細胞の成長を促進する因子を含有しうることを理解するであろう。代わりの方法では、採取された肝細胞を、形質導入後に外科的に正常または異所位置に植込むことができるプラスチック、繊維またはゼラチン状材料から成る基質上においてエクスビボで成長させることができる。この基質は、血管形成および植込まれた細胞の成長を促進する因子と一緒に埋込むことができる。次に、細胞を再度植込むことができる。上記のことは単なる例であり、制限するものではない。投与本明細書中で用いられる投与は、身体中への核酸キャリヤーの導入経路を意味する。投与には、静脈内、筋肉内、全身、皮下、真皮下、局所または経口の供給法が含まれる。投与は、標的組織に対して直接的であることもできるし、または全身供給によることもできる。特に、本発明は、細胞中における特異的核酸配列の発現のために核酸を投与するのに用いることができる。投与経路には、筋肉内、エーロゾル、嗅覚器官、経口、局所、全身、眼、腹腔内および／または気管内が含まれる。核酸キャリヤーを投与する好ましい方法は、静脈内供給による。もう一つの好ましい投与方法は、細胞中への直接注射による。遺伝子の直接的転移は極めて有効であった。実験は、関節および甲状腺組織中へのＤＮＡの直接注射による投与が、注射区域での遺伝子の発現を引き起こすことを示している。関節腔中へのＩＬ−１含有プラスミドの注射は、遺伝子の発現を長期間引き起こす。注射されたＤＮＡは、組込まれない染色体外状態で存続すると考えられる。この転移手段は、好ましい実施態様の一つである。更に、本発明の核酸キャリヤーを投与するもう一つの手段は、乾燥粉末の形を吸入用に用いることによる。用いることができる一つの化合物は、非晶質粉末であるポリビニルピロリドン（“ＰＶＰ”）である。ＰＶＰは、広範囲の物質と一緒に複合体を形成するポリアミドであり、しかも化学的におよび生理学的に不活ーで霧状になるエーロゾル組成物または液体によってもよく、それによって吸入されうる。いずれかの選択されたベクター構築物の特別な供給経路は、核酸キャリヤーと結合した核酸の具体的な使用に依るであろう。概して、用いられるそれぞれの核酸キャリヤーに特異な供給プログラムは、特定の標的組織に関する取込みに続いて、有効性の実証に集中するであろう。取込み実験には、核酸の細胞取込みおよび選択された特異的核酸の発現を評価する取込み検定が含まれるであろう。このような検定は、取込み後の標的核酸の局在性も示し、そして発現されたタンパク質の定常状態濃度の維持のための必要条件を決定するであろう。次に、有効性および細胞障害性を調べる。毒性には、細胞成育能力が含まれるのみならず、細胞機能も含まれるであろう。本明細書中で記載のようにエンドサイトーシスを行うキャリヤー中に包含されたＤＮＡは、細胞外空隙から異種遺伝子を取込む細胞種類の範囲を増加させる。選択された供給方法は、細胞質蓄積および最適投薬をもたらすはずである。投薬量は、疾患および投与経路に依るであろうが、０．１〜１０００ｍｇ／ｋｇ（体重）／日であるべきである。この量は、標準法によって容易に決定できる。それは、最適投薬に応じてより多いかまたはより少なくありうる。治療期間は、疾患症状の経過によっておそらくは継続して延長するであろう。投与回数は、疾患供給ビヒクルおよび臨床試験からの有効性データに依るであろう。細胞内のＤＮＡの治療的レベルの決定は、取込みおよび分解の経路に依る。分解の程度の低下は、ＤＮＡの細胞内半減期を延長するであろう。肝臓への直接供給本発明の核酸キャリヤーは、肝臓癌などの肝臓に関与した疾患の進行を逆行させるかまたは阻止する場合にも用いることができる。一つの実施態様は、肝疾患を治療するのに必要な分子をコードしている核酸を供給するための静脈内投与法の使用を伴う。必要なタンパク質またはＲＮＡを発現する核酸キャリヤーは、肝臓に対して直接的に進むように肝臓または血液供給中へ直接的に注射できる。最後に、上で論及されたＰＶＰなどの乾燥粉末の形は、肝疾患を治療するのに用いることができる。乾燥粉末の形は、吸入によって供給される。これらの処置は、選択された核酸によってコードされた特定のタンパク質の発現によって肝臓癌または他の肝疾患を制御するまたは抑制するのに用いることができる。当業者は、本発明が目的を達成し、そして挙げられた結果および利点、更には、それに固有のものを得るのに充分に適合することを容易に理解するであろう。ペプチド−巨大分子複合体は、本明細書中に記載の方法、手順、処置、分子、特異的化合物と共に、現在のところ好ましい実施態様を代表するものであり、典型的であり、そして本発明の範囲を制限するためのものではない。そこでの変化および他の用途は当業者によって考えられるであろうが、それらは本発明の精神の範囲内に包含され、請求の範囲によって定義される。本明細書中で開示された発明に対する種々の置換および変更が、本発明の範囲および精神から逸脱することなく行われうることは、当業者に容易に理解されるであろう。筋肉への直接ＤＮＡ供給筋ジストロフィーは、多数の異なった理由のために異常な筋発生を引き起こす一群の疾患である。これら疾患は、正常な遺伝子産物の生産をもたらす本発明の核酸キャリヤーを用いる遺伝子の直接供給を用いることによって治療することができる。本発明を用いる筋肉に対する供給は、ウイルスおよび寄生生物両方の起原の多数の感染に対するワクチン用に種々の抗原を生産する遺伝子を与えるように行われる。老化によって引き起こされる有害な作用もまた、本明細書中で記載の核酸供給システムを用いて処置することができる。成長ホルモンタンパク質の注射は、筋組織の成長および増殖を促進するので、成長ホルモン遺伝子を筋肉に対して供給して、老化過程の後期中に低下する筋成長および発育をもたらすことができる。インスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）などの他の成長関連因子を発現する遺伝子を供給することができる。更に、かなり多数の異なった遺伝子を、この方法によって筋組織に対して供給できる。ＩＧＦ−１は、リセプター媒介エンドサイトーシスによって細胞中に取込まれるので、ＤＮＡを筋肉に対して供給するのにそれを用いることができる。このポリペプチドは、７０アミノ酸長さであり且つ構造的にインスリンに関連した成長促進ポリペプチドのメンバーである。そのポリペプチドは多数の種類の組織上にリセプターを有するので、それは、広範囲の細胞種類の増殖および代謝活性に影響を与える組織成長および細胞分化の調節に関与している。結果として、本発明の核酸キャリヤー供給システムは、筋肉に対する組織特異的核酸供給のためのリガンドとしてＩＧＦ−１を用いる。ＩＧＦ−１／核酸供給システムの利点は、リセプター媒介エンドサイトーシスによる取込みでリガンド／核酸複合体と接触するようになる極めて多数の細胞のために、その供給の特異性および効率が大きく増加することである。本発明の供給システムにおいて筋細胞に対する核酸の供給に特異的なリガンドの使用と共に上記の核酸を用いることは、筋組織に影響を与える疾患および異常の治療法を提供する。上記のことに加えて、第IX因子もまた、筋細胞に対して供給することができる。第IX因子をコードしているＤＮＡは、本発明の核酸キャリヤーを用いて供給できる。結果として、本発明の核酸キャリヤー供給システムは、第IX因子をコードしているＤＮＡを用いて、第IX因子欠乏であり且つこのような欠乏による疾患および異常に対して感受性である細胞を治療することができる。第IX因子をコードしているＤＮＡは、上記のようなＫ₈およびａｐｏＥ−３とカップリングするかまたは結合することができる。次に、その複合体を、発現のために筋細胞に対して直接的に供給できる。ＤＮＡ対Ｋ₈対ａｐｏＥ−３の好ましい比率は１：３：１である。上の複合体の直接注射が好ましい。第IX因子を発現する核酸を筋細胞に対して供給するための本発明の上の核酸供給システムの使用は、筋組織に影響を与える疾患および異常の治療法を提供する。骨形成細胞への直接ＤＮＡ供給老化過程中に起こる問題は他にも多数あるが、一つの主要な問題は骨粗鬆症であり、これは、全骨質量および強度の減少である。本発明の直接核酸キャリヤー供給システムを用いて、骨成長を促進する細胞に対して遺伝子を供給することができる。骨芽細胞は、体内の主な骨形成細胞であるが、骨形成を助けることができる細胞は他にも存在する。骨髄のストローマ細胞は、骨芽細胞のための幹細胞源である。そのストローマ細胞は、誘導前骨芽細胞（ＩＯＰＣ）として知られる細胞集団に分化し、これらは次に、成長因子の誘導下において確定前骨芽細胞（ＤＯＰＣ）に分化する。成熟して直接的に骨生産細胞になるのはこの細胞集団である。ＩＯＰＣは、筋組織および軟結合組織でも見出される。骨形成過程に関与するもう一つの細胞は、軟骨細胞として知られる軟骨生産細胞である。ＩＯＰＣを剌激して分化させるのに関与することが確認された因子は、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）として知られる。この１９，０００ＭＷタンパク質は、無機質脱落骨から最初に識別された。ＢＭＰに類似したもう一つの因子は、軟骨誘導因子（ＣＩＦ）であり、これは、ＩＯＰＣを刺激して分化させるように機能し、そして更に、軟骨形成、軟骨石灰化、血管浸潤、石灰化軟骨の吸収、および最後の新規骨形成の誘導の経路を開始する。軟骨誘導因子は、形質転換成長因子β と同族であると確認された。骨芽細胞は骨生産に関与しているので、骨芽細胞活性を増大させる遺伝子は、これら細胞に対して直接的に供給できる。遺伝子は、ＩＯＰＣおよび軟骨細胞に対しても供給でき、これらは骨芽細胞に分化して、骨形成をもたらす。ＢＭＰおよびＣＩＦは、これら細胞に対して遺伝子を供給するのに用いることができるリガンドである。これら細胞に対して供給された遺伝子は、骨形成または骨芽細胞の増殖を促進する。ポリペプチドＩＧＦ−１は、下垂体切除されたラットの成長を刺激するが、これは、骨芽細胞によるポリペプチドの特異的取込みによるかまたはポリペプチドと軟骨細胞との相互作用によることがあり、これが骨芽細胞の形成をもたらす。他の特異的骨細胞および成長因子は、骨形成に関与する種々の細胞との相互作用によって骨形成を促進するのに用いることができる。これらの細胞種に対して供給することができる次の成長因子を発現する遺伝子の非制限例は、インスリン、インスリン様成長因子−１、インスリン様成長因子 −２、表皮成長因子、形質転換成長因子−α、形質転換成長因子−β、血小板由来成長因子、酸性線維芽細胞成長因子、塩基性線維芽細胞成長因子、骨由来成長因子、骨形成タンパク質、軟骨誘導因子、エストラジオールおよび成長ホルモンである。これら因子は全て、骨芽細胞、関連幹細胞および軟骨細胞の増殖に対して正の作用を有する。結果として、ＢＭＰまたはＣＩＦは、これら成長因子を発現する遺伝子を、本発明の核酸／タンパク質複合体の静脈内注射によって標的細胞に対して供給するための結合体として用いることができる。本発明の供給システムにおいて、骨細胞に対する核酸の供給に特異的なリガンドの使用と共に上記の核酸を用いることは、骨組織に影響を与える疾患および異常の治療法を提供する。滑膜細胞への直接ＤＮＡ供給動物モデルおよびヒト疾患における関節に対する炎症刺激は、部分的には、局所災症反応を剌激するＩＬ−１およびＩＬ−６などのサイトカインの分泌によって媒介されうる。炎症反応は、これらリガンドのリセプターの可溶性フラグメントの局所分泌によって変化しうる。リガンドと可溶性リセプターとの複合体は、通常は細胞の表面上にあるリセプターに対してリガンドが結合するのを妨げ、それによって炎症作用の刺激を妨げる。療法は、関節の構造において高レベル発現を誘導できるプロモーターと一緒に、適当なサイトカイン（例えば、ＩＬ−１）のリセプターの可溶性型を含有するベクターおよびこのベクターの有効な取込みを可能にする構成体の構築から成る。次に、このＤＮＡを本発明のＤＮＡキャリヤーと一緒に用いる。このＤＮＡを冒された関節中に注射し、そこで、可溶性ＩＬ−１リセプターまたは天然ＩＬ−１阻害剤などのＩＬ−１の阻害剤の分泌が局所炎症反応および結果としての関節炎を変化させる。この方法は、多数の「自己免疫」疾患または「膠原血管」病を特徴付ける関節炎のエピソードを治療する場合に有用である。この方法は、炎症性関節炎による大関節の不具となる損傷も妨げることができる。上記のことに加えて、本発明は、次の方法と一緒に用いることもできる。重傷の関節炎のための現行療法は、炎症反応を低下させるためのステロイドを含めた薬剤の投与を伴う。ステロイドは、全身的にまたは関節腔中への直接注射によって局所に投与できる。ステロイドは、通常、細胞の細胞質内リセプターに対して結合することによって機能する。ステロイド−リセプター複合体の形成は、リセプターの構造を変化させるので、それは、核に対して輸送でき且つ細胞のゲノム中の特異的配列に対して結合でき、そして特異的遺伝子の発現を変更できるようになる。ステロイドリセプターの遺伝的修飾を行って、このリセプターが、天然に存在するステロイドをより高い親和性で結合できるまたはＲＵ４８６などの非天然の合成ステロイドを結合できるようにすることができる。他の修飾は、天然のステロイドリセプターが天然または合成ステロイドでの処置後に遺伝子発現を調節するのと同様に、ＤＮＡに対して結合でき且つステロイドの不存在下で遺伝子発現を調節できるということを意味する「構成的に活性」であるステロイドリセプターを生じるように行うことができる。特に重要なのは、関節炎の治療に利用可能な最も重要な薬物であるコルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾンまたはデキサメタゾンなどのグルココルチコイドステロイドの作用である。関節炎を治療する一つのアプローチは、核酸カセットが遺伝的に修飾されたステロイドリセプター、例えば、グルココルチコイドの作用によく似ているが、その作用のためにグルココルチコイドの存在を必要としない遺伝的に修飾されたステロイドリセプターを発現するベクターを関節の細胞中に導入することである。これは、グルココルチコイド模倣リセプターと称される。これは、グルココルチコイドリセプターのＤＮＡ結合ドメインを含有する関節の細胞中の構成的に活性なステロイドリセプターの発現によって得られる。これは、これら薬物の全身毒性を伴うことなくステロイドの治療的作用を誘導する。或いは、天然またはＲＵ４８６などの合成グルココルチコイドに対してより高い親和性を有するステロイドリセプターは、関節中に導入できる。これらリセプターは、無毒性濃度のステロイドまたは更に低用量の薬理学的に投与されたステロイドによって刺激された場合、増加した抗炎症作用を示す。或いは、新規の通常不活性なステロイドによって活性化されるステロイドリセプターの構成は、このリセプターを取込む細胞にのみ影響を与えると考えられる薬物の使用を可能にする。これらの作戦は、これら薬物に関係した強い全身性の合併症を伴うことなく、関節炎に対するステロイドによる治療的作用を得る。特に重要なのは、これら遺伝子を特定の細胞種（例えば、滑膜細胞対リンパ球）に対して、これら細胞の活性に影響を与えるために特異的に集中させる能力である。両方とも本明細書に援用される（図面を含む）ベジト（Vegeto）らの“Proges terone Receptor Having C Terminal Hormone Binding Domain Truncations”と題する米国特許第5,364,791号およびベジトらの1992年９月２日出願の“Mutated Steroid Hormone Receptors,Methods for Their Use and Molecular Switch fo r Gene Therapy”と題する米国特許出願第07/939,246号で記載のように、グルココルチコイド模倣リセプターなどの遺伝的に修飾されたリセプターは、グルココルチコイド模倣活性を有するものを含めた新規ステロイドリセプターを生じるのに用いることができる。遺伝子調節タンパク質のステロイドリセプターファミリーは、このような分子の理想的なセットである。これらタンパク質は、リガンド活性転写因子であり、そのリガンドは、ストロイドからレチノイド、脂肪酸、ビタミン、甲状腺ホルモンおよび他の現在未確認の小分子までありうる。これら化合物は、リセプターに対して結合し、そして転写をアップレギュレーションするかまたはダウンレギュレーションする。本発明の好ましいリセプターは、グルココルチコイドリセプターの変形、即ち、グルココルチコイド模倣リセプターである。これらリセプターは、天然に存在するリガンドとは構造が異なる種々のリガンド、例えば、ＲＵ４８６をそれらが結合するように修飾されうる。例えば、アミノ酸配列の切断を含めた小さなＣ末端変更は、リガンドの親和性を変化させ且つ機能を変化させる。リセプター突然変異体をスクリーニングすることにより、リセプターは、宿主細胞自体のリセプターを活性化させないリガンドに応答するように受注製造することができる。しかしながら、当業者は、様々な突然変異、例えば、カルボキシ末端アミノ酸のより短い欠失が、ある種のステロイドホルモンリセプタータンパク質の有用な突然変異体を生じるのに必要であることを理解するであろう。突然変異しうるステロイドホルモンリセプターは、エストロゲン、プロゲステロン、グルココルチコイド−α、グルココルチコイド−β、鉱質コルチコイド、アンドロゲン、甲状腺ホルモン、レチン酸およびビタミンＢ３のリセプターを含めたリセプターなどのステロイドホルモンリセプタースーパーファミリーを含むリセプターのいずれかである。更に、トランス抑制（transrepression）のみまたはトランス活性化（transactivation）のみができるものなどの他の突然変異ステロイドをコードしているＤＮＡもまた、上の実施態様の範囲内である。このようなステロイドは、トランス抑制を活性化させるために、ＲＵ４８６に対して応答できると考えられる。上記のことに加えて、本発明は、次の方法と一緒に用いることもできる。酵素プロスタグランジンシンターゼを阻害する薬物は、関節炎の治療において重要な薬剤である。これは、部分的には、局所免疫応答を剌激する場合のある種のプロスタグランジンの重要な投割のためである。サリチル酸塩は広く用いられる薬物であるが、重傷状態の関節炎には、しばしば不適当である制限用量で投与されうる。本発明を用いる遺伝子転移は、プロスタグランジンシンターゼのアンチセンスＲＮＡの発現によって、冒された関節において特異的にプロスタグランジンシンターゼの作用を阻害するのに用いられる。プロスタグランジンシンターゼのアンチセンスＲＮＡとｍＲＮＡとの間に形成された複合体は、このｍＲＮＡの適当なプロセッシングおよび翻訳を妨げ、そして処置された細胞中のこの酵素レベルを低下させる。或いは、ＲＮＡ分子は、プロスタグランジン合成に必要な酵素を発現する遺伝子の調節部分で三重らせんを形成するのに用いられる。或いは、プロスタグランジン合成に必要な酵素の活性部位を結合し且つこの活性を阻害するＲＮＡ分子が識別される。或いは、プロスタグランジン代謝を変化させる酵素をコードしている遺伝子を、関節中に転移させることができる。これらは、炎症性プロスタグランジンの化学組成または濃度を変化させることによって重要な抗炎症作用を有する。同様に、本発明は、関節の修復および再生を促進するのに有用である。関節の再生能は、軟骨細胞が、腱および軟骨などの軟骨組織を再造形できないし且つ修復できないという事実によって制限される。更に、損傷に対する応答で生じるコラーゲンは、通常のコラーゲンの引っ張り強度を欠いた異なった種類のものである。更に、その損傷コラーゲンは、入手可能なコラゲナーゼによってほとんど再造形されない。更に、ある種のメタロプロテイナーゼの不適当な発現は、関節の破壊における一成分である。軟骨細胞に対して特異的なプロモーター（すなわち、コラーゲンプロモーター）を用いる遺伝子転移は、関節の機能の修復を改善するための別のコラーゲンまたは適当なコラゲナーゼを発現させ且つ瘢痕形成を妨げるのに用いられる。これらの目的の遺伝子転移は、関節腔中へのＤＮＡの直接導入によって行われ、そこでそれが軟骨細胞および滑膜細胞と接触する。更に、遺伝子は、関節の環境中に透過し、そこでそれらは線維芽細胞、筋芽細胞および他の関節周囲成分によって取込まれる。肺への直接供給本発明の核酸キャリヤーは、肺癌などの肺に関与した疾患の進行を逆行させるかまたは阻止する場合にも用いることができる。一つの実施態様は、肺疾患を治療するのに必要な分子をコードしている核酸を供給するための静脈内投与法の使用を伴う。必要なタンパク質またはＲＮＡを発現する核酸キャリヤーは、肺に対して直接的に進むように肺または血液供給中へ直接的に注射できる。更に、ネブライザーで霧状のエーロゾルまたは液体の使用も、肺に対して所望の核酸を投与するのに用いることができる。最後に、上で論及されたＰＶＰなどの乾燥粉末の形は、肺疾患を治療するのに用いることができる。乾燥粉末の形は、吸入によって供給される。これらの処置は、選択された核酸によってコードされた特定のタンパク質の発現によって肺癌または他の肺疾患を制御するまたは抑制するのに用いることができる。当業者は、本発明が目的を達成し、そして挙げられた結果および利点、更には、それに固有のものを得るのに充分に適合することを容易に理解するであろう。核酸キャリヤーシステムは、本明細書中に記載の方法、手順、処置、分子、特異的化合物と共に、現在のところ好ましい実施態様を代表するものであり、典型的であり、そして本発明の範囲を制限するためのものではない。そこでの変化および他の用途は当業者によって考えられるであろうが、それらは本発明の精神の範囲内に包含され且つ請求の範囲によって定義される。本明細書中で挙げられた分子の投与のための更に別の器官、組織、腔、１個または複数の細胞、間隙は、本明細書中に図面を全て含めてそのまま援用される“ Nucleic Acid Transporters for Delivery of Nucleic Acids into a Cell”；スミス（Smith）ら，1995年12月18日出願の米国特許出願第08/484,777号で見出されうる。実施例次の実施例は、リポペプチドの合成および誘導体化、核酸のコーティングおよび網の目への絡ませ（enmeshment）、網の目への絡ませおよび凝縮後のペプチド −巨大分子複合体の分粒された粒子、ペプチド−巨大分子複合体を用いる上皮細胞形質転換を示し、そして本発明は請求の範囲によってのみ制限される。実施例１）リポペプチドの合成および誘導体化ペプチド合成−ａｐｏＥペプチド１４８〜１６９、１４４〜１６９、１３９〜１６９および１２９〜１６９を、アプライド・バイオシステムズ（Applied Bios ystems）４３０Ａペプチド合成機と共に与えられたプログラムを用いて固相法によって合成した。次の側鎖保護基、すなわち、ＳｅｒおよびＴｈｒのためのベンジルエーテル、ＡｓｐおよびＧｌｕのためのベンジルエステル、Ｔｙｒのためのジクロロベンジルエーテル、Ｌｙｓのためのクロロベンジルオキシカルボニル、およびＡｒｇおよびＨｉｓのためのトシルを用いた。ペプチドのＮ末端のアシル化は、ペプチジル樹脂のパルミチン酸無水物を用いるＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンで触媒されたアシル化によって行われた。Ｎ，Ｎ−ジステアリルグリシンの付加は、ジイソプロピルエチルアミンの存在下のテトラヒドロフラン／Ｎ，Ｎ −ジメチルホルムアミド（１：１）中におけるＮ，Ｎ−ジステアリルグリシンのヒドロキシスクシンイミドエステルとペプチジル樹脂との一晩中の反応によって行われた。合成が完了した後、その樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよび塩化メチレンで洗浄し、そして真空デシケーター中で乾燥させた。そのペプチドを脱保護し、そして１０％アニソールおよび１％エタンジチオールを含有する無水ＨＦを用いる−２０℃で３時間の処理によって樹脂から切断した。ＨＦを真空下において−２０℃で蒸発させ、そしてペプチドを冷エーテルで沈澱させた。その沈澱および樹脂をエーテルで洗浄し、そしてペプチドをトリフルオロ酢酸中に溶解させた。そのトリフルオロ酢酸をロータリーエバポレーターで蒸発させ、そしてペプチドをエーテルで沈澱させ且つ遠心分離によって集めた。沈澱したペプチドを１Ｍトリス、６Ｍ塩化グアニジニウム中に溶解させた。そのｐＨを酢酸で３に調整し、そしてペプチドを、５％酢酸で平衡されたバイオゲル（Bio-Gel）Ｐ−２カラム（５ｘ５０ｃｍ）上で脱塩した。ペプチド含有画分を凍結乾燥させ、そしてそのペプチドを０．１Ｍリン酸二水素アンモニウム、６Ｍ塩化グアニジニウム，ｐＨ３．０中に溶解させた。ペプチド合成および誘導体化の追加の情報は、両方とも本明細書中に図面または図を全て含めてそのまま援用されるミムス（Mims）ら，Jour.Biol.Chem269,20 539-47および“Nucleic Acid Transporters for Delivery of Nucleic Acids in to a Cell”；スミスら，1995年12月18日出願の米国特許出願第08/484,777号で見出されうる。実施例２）核酸のコーティングおよび網の目への絡ませ予想外の且つ驚くべき結果は、ペプチド洗浄剤ミセルを核酸と混合し、急速撹拌し、そして約２００倍（洗浄剤のｃｍｃ未満，約１ｍＭ）に希釈した場合に示された。引続き、核酸は親油性ペプチドでコーティングされ且つ網の目に絡まった状態になり、凝縮核酸＼親油性ペプチド複合体を形成し、同時に、CHAPS洗浄剤モノマーは得られた混合物から透析されうる（図８）。実施例３）網の目に絡ませそして凝縮後のペプチド−巨大分子複合体の分粒された粒子実施例２の処置で与えられた核酸の凝縮の程度を、図９として示す。ジステアリル−グリシル−ａｐｏＥ−３^129-169を、予めＫ８と凝縮したＤＮＡに対して加えた場合、粒度は約２０％だけ増加した。ＪＴＳ−１の添加は、粒度を更に４０％増加させた。対照的に、凝縮性ペプチドの不存在下でのＤＮＡに対するジステアリルーグリシル−ａｐｏＥ−３^129-169の添加は、約６０ｎｍのより小さい粒子を与えた。突然変異ペプチドであるジステアリル−グリシル−ａｐｏＥ−３^129-169Q142 を用いる凝縮および網の目への絡ませはまた、小さい６０ｎｍの単分散粒子集団を与えた。１０ｍＭ CHAPS中のジステアリル−グリシル−ａｐｏＥ −３^129-169を、ＤＮＡを存在させることなく希釈した場合、得られた小胞は直径約４５０ｎｍであった。ショ糖密度勾配遠心分離を施されたジステアリル−グリシル−ａｐｏＥ−３¹² ^9-169 ：ＤＮＡ複合体の分析は、カプセル封入後に遊離ＤＮＡが存在しないことを示した。対照における遊離ＤＮＡは勾配の上部に残ったが、網の目に絡まされて凝縮した複合体は、遠心管の底部で見出された。実施例４）ペプチド−巨大分子複合体を用いる上皮細胞形質転換細胞をトランスフェクションする実施例３の製剤の能力を、ＬＤＬリセプターをアップレギュレーションするように１μｇｍＬ^-1ロバスタチン中において一晩中増殖させた２９３個の上皮細胞で調べた。ガルトスレート（galtoselated）Ｋ８もＪＴＳ−１も、有効な遺伝子転移には不必要であった（図１０ｃ）。ＬＤＬリセプターに対する突然変異ペプチドの減少した結合から予想されるように、突然変異ペプチド複合体による発現は、野生型ａｐｏＥペプチド複合体で見られる場合の約５％であった。本発明者は、ジアシルペプチドが凝縮作用因子、カプセル封入作用因子、標的集中作用因子および溶解作用因子として機能すると結論している。充分に定義されたリセプターリガンドドメインは別として、他の機能を有する配列部分はなお解明されるべきである。ジステアリル−グリシル−ａｐｏＥ−３^129-169の残基１４１〜１５０間の陽イオン配列は、その親油性ペプチドを、肺に対する遺伝子供給にうまく用いられてきた陽イオン脂質に匹敵させる。本発明者は、遺伝子供給の機序が、両方の陽イオン試薬で同様であると考えている。陽イオンアミノ酸クラスターによるエンドソーム膜の脱安定化は、エンドソーム膜を破壊する過程である、電荷不均衡を相殺する陰電荷リン脂質のフリップフロップを誘導する。陰イオンリン脂質と陽イオン親油性ペプチドとの相互作用は、ＤＮＡとペプチトとの相互作用よりも強い。したがって、ＤＮＡは、核に対する細胞タンパク質による輸送のために細胞質中に放出される。本発明者は、一つの機能的配列だけを含有する短い親油性ペプチドを組合わせることができると予想しているので、インビトロおよびインビボでの遺伝子供給は、別々の親油性ペプチドの組合せによって達成されうる。更に、ＤＯＰＥ（ジオレイルホスファチジルエタノールアミンなどの商業的に入手可能な陽イオン脂質並びにコレステロール、アポリポタンパク質、脂肪酸、リゾリン脂質、陰イオン、中性および陽イオンのリン脂質、および糖脂質を含めた他の脂質は両方とも、ペプチド−巨大分子複合体中の追加の成分として包含されうる。この実施例は例示するものであり、制限するためのものではない。明細書中で挙げられた特許および刊行物は全て、本発明が関係する当業者のレベルを示すものである。特許および刊行物は全て、それぞれ個々の刊行物が援用されることが具体的に且つ個々に示されたかのような程度に本明細書中に援用される。本明細書中で例示的に記載された発明は、適当に、本明細書中で具体的に開示されていない一つまたは複数の要素、一つまたは複数の制限のいずれの不存在下でも実施できる。用いられた用語および表現は、説明の用語として用いられ、制限としてではなく、そして示されかつ記載された特徴のいずれの同等物も除外するこのような用語および表現の使用には目的がないが、請求の範囲に記載された発明の範囲内で様々な変更が可能であることは理解される。したがって、本発明は好ましい実施態様および任意の特徴によって具体的に開示されたが、本明細書中で開示された概念の変更および変化が当業者によって修復されうることおよびこのような変更および変化が、請求の範囲で定義の本発明の範囲内であると考えられることは理解されるべきである。特許および非特許両方の参考文献を含めた本明細書中に予め援用されていない参考文献は、全ての目的のためにそのまま援用される。他の実施態様は、次の請求の範囲の範囲内である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ハウアー，ヨヘンアメリカ合衆国テキサス州77025，ヒューストン，ベルフォンティン 2825，アパートメント 150エイ (72)発明者ミムス，マーサ・ピーアメリカ合衆国テキサス州77035，ヒューストン，ファイアーストーン 4419

Claims

【特許請求の範囲】１．脂質部分に結合した送達ペプチドを含む交換不可能な親油性ペプチドからなる複合体であって、親油性ペプチドの送達ペプチド部分が巨大分子と複合体形成している、巨大分子を細胞に送達するためのペプチド−巨大分子複合体。２．送達ペプチドが、以下の群： STEELRVRLASHLRKLRKRLLRDADDLQKRLAVYQAGAREG, KKQLKKQLKKQLKQWK, KKSPKKSPKKSPKKSWK，および KRRRRRRRRWR から選択されるアミノ酸配列からなる、請求項１記載の複合体。３．送達ペプチドが、以下の群： KLSKLEKKWSKLEK, KLSKLEKKLSKLEKKWSKLEK, KSLKKSLKKSLKKSWK，および KSTPPKKKRKVEDPKDFPSELLSA から選択されるアミノ酸配列からなる、請求項１記載の複合体。４．送達ペプチドが、以下の群： KAKKKK-NK-(CH₂)₂-SS-(CH₂)₂-COKKKKWK, KIRRRGKNKVAARTCRQRRTDR, KXKKXKKKXKKXKWK（式中、XはAまたはS）， KIRRRGKNKAAARTCRERRRSK，および KIRRRGKNKVAAQNCRKRKLDQ から選択されるアミノ酸配列からなる、請求項１記載の複合体。５．送達ペプチドが、以下の群： KIRRRGKNKVAAQNCRKRKLET, KRRIRREKNKMAAAKCRNRRRELT, GRPRAINKHEQEQISRLLEKGHPRQQLAIIFGIGVSTLYRYFPASSIKKRMN，および KSGPRPRGTRGKGRRIRR から選択されるアミノ酸配列からなる、請求項１記載の複合体。６．送達ペプチドが、以下の群： KDRSNLLERHTR, KRPAATKKAGQAKKKL, K(K)nWK（式中、ｎは４，５，６，７，８であり、そしてｎに対するホモログは４０である）， K(K)nXK（式中、ｎは４，５，６，７，８であり、そしてｎに対するホモログは４０である、但しXは天然アミノ酸およびそのアナログ），および KSPLLKSMKGIKQQQHP-(SPNQQQHP)nGK（式中、ｎは１から６）から選択されるアミノ酸配列からなる、請求項１記載の複合体。７．脂質部分が、（１）Ｎ，Ｎ−ジステアリル−グリシル−；（２）ε−Ｎ，Ｎ−ジステアリルグリシル−；および（３）Ｎ，Ｎ−ジステアリルアミノメチルからなる群から選択されるジステリル誘導体である、請求項１記載の複合体。８．脂質部分が、Ｎ^α，Ｎ^ε−ジパルミトイル−、およびＮ^α，Ｎ^ε−ジパイミトイルからなる群から選択されるジパルミチル誘導体である、請求項１記載の複合体。９．細胞表面リセプターと結合でき、エンドソームを溶解でき、そして細胞の仁を標的とすることができる、請求項１記載の複合体。 10．親油性ペプチドが表面リガンドに結合している、請求項１記載の複合体。 11．親油性ペプチドが核リガンドに結合している、請求項１記載の複合体。 12．巨大分子が核酸である、請求項１記載の複合体。 13．巨大分子がＤＮＡである、請求項１記載の複合体。 14．巨大分子がＲＮＡである、請求項１記載の複合体。 15．脂質部分が送達ペプチドのＮ末端に結合している、請求項１記載の複合体。 16．送達ペプチドが巨大分子に非共有結合している、請求項１記載の複合体。 17．巨大分子がひとつ以上の親油性ペプチドと複合体形成している、請求項１記載の複合体。 18．巨大分子が２、３、４、または５の親油性ペプチドと複合体形成している、請求項１記載の複合体。 19．送達ペプチドが（１）ａｐｏＥ−３^129-169；（２）ａｐｏＥ−３^139-169 ；および（３）ａｐｏＥ−３^129-169Q142から選択されるアミノ酸配列からなる、請求項１記載の複合体。 20．複合体が細胞に取り込まれるのに十分な時間、細胞に複合体を接触させる工程からなる、巨大分子を細胞へ送達するために請求項１ないし19のいずれか１項記載の複合体を用いる方法であって、但し、巨大分子を生理学上十分な量で送達する方法。 21．巨大分子を可溶化および／または巻き込むことができる生物学上の界面活性剤に複合体を接触させることをさらに含む、請求項20記載の方法。 22．界面活性剤がＣＨＡＰＳおよびＯ−オクチル−グルコースからなる群から選択される、請求項21記載の方法。 23．界面活性剤が界面活性剤の臨界ミセル濃度以下の最終濃度で存在する、請求項21記載の方法。 24．界面活性剤が巨大分子との間で希釈比を有することにより、界面活性剤の最終濃度が臨界ミセル濃度以下になる、請求項21記載の方法。 25．請求項１ないし19のいずれか１項記載の複合体で形質転換された細胞。 26．送達ペプチドがカチオン性である、請求項１記載の複合体。 27．送達ペプチドが中性である、請求項１記載の複合体。 28．送達ペプチドが糖脂質である、請求項１記載の複合体。