JP2000501736A

JP2000501736A - ロサルタンの新用途

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Publication number: JP2000501736A
Application number: JP9522199A
Authority: JP
Inventors: コーエン，シーラ・エム; ウエルマン，ジエフリー・ジー
Original assignee: メルクエンドカンパニーインコーポレーテッド
Priority date: 1995-12-12
Filing date: 1996-12-09
Publication date: 2000-02-15
Also published as: WO1997021436A1; EP0868179A1; AU1416497A; AU704841B2; EP0868179A4; CA2238975A1

Abstract

(57)【要約】治療有効量のロサルタン、その活性代謝物ＥＸＰ３１７４、又はこれら化合物の医薬的に許容可能な塩を虚血発作後の心臓機能回復の向上に使用する。

Description

【発明の詳細な説明】ロサルタンの新用途発明の背景経口にて活性の非ペプチドアンギオテンシンII（AII）レセプター拮抗薬の発見［Ｗｏｎｇ，Ｐ．Ｃ．，他，「非ペプチドアンギオテンシンIIレセプター拮抗薬、IV ＥＸＰ６１５５及びＥＸＰ６８０３」，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ１９８９，Ｖｏｌ．１３，ｐｐ．４８９−９７を参照］は、虚血と続く再潅流中の心筋機能障害発生におけるレニン−アンギオテンシン系の複雑な役割解明を助ける重要な新しい手がかりを提供した。２つのＡIIレセプター亜型ＡＴ₁及びＡＴ₂ の特定と分類がこの発見の最初の成果であった［ａ）Ｂｌａｎｋｌｅｙ，Ｃ．Ｊ．，他，「新しいシリーズのＡＴ−２亜型に特異的な非ペプチドアンギオテンシンIIレセプター結合阻害剤の合成と構造−活性相関」，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９１，Ｖｏｌ．３４，ｐｐ．３２４８−６０；ｂ）Ｃｈａｎｇ，Ｒ．Ｓ．Ｌ．，他，「ラット、ウサギ及びサル組織中のアンギオテンシンレセプター亜型：相対分布と種依存性」，ＬｉｆｅＳｃｉ．，１９９１，Ｖｏｌ．４９，ｐｐ．１４８５−９０；及びｃ）Ｈｏｄｇｅｓ，Ｊ．Ｃ．，他，「アンギオテンシンIIレセプター結合阻害剤」，ＤｒｕｇＦｕｔ．，１９９２，Ｖｏｌ．１７，ｐｐ．５７５−９３を参照］。心筋梗塞（ＭＩ）後のＡII−ＡＴ₁レセプター拮抗薬ロサルタンによる治療は心臓のポンプ性能を改善し［ａ）Ｒａｙａ，Ｔ．Ｅ．，他，「心臓疾患のラットモデルにおける変換酵素阻害と比較した直接アンギオテンシンII遮断の血流動的効果」，Ａｍ．Ｊ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．，１９９１，Ｖｏｌ．４，ｐｐ．３３４Ｓ−４０Ｓ；及びｂ）Ｃａｐａｓｓｏ，Ｊ．Ｍ．，他，「ラットにおける心筋機能障害後の心臓ポンプ性能に与えるアンギオテンシン―変換酵素阻害とＡＴ₁レセプター遮断の有効性」，Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，１９９４，Ｖｏｌ．２３，ｐｐ．５８４−９３を参照］、また、ラットにおける心室リモデリングを弱める［Ｓｃｉｅｆｆｅｒ，Ｂ．，他，「ラットにおける心筋梗塞後の心臓リモデリングに与える慢性アンギオテンシン―変換酵素阻害とアンギオテンシンIIタイプＩレセプター遮断の比較的効果」，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１９９４，Ｖｏｌ．８９，ｐｐ．２２７３−２２８２を参照］と報じられてきた。ラット心臓において、ＭＩ後２日に左右心室が共にＡIIによる治療に対して感受性が高まり機械的性能低下を生じ、この負の効果はロサルタンの共投与により遮断できることも示されてきた［Ｃａｐａｓｓｏ，Ｊ．Ｍ．，他，「ラットにおける梗塞誘発心臓障害後の左右心筋のＡＮＧII応答の変化」，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ.，１９９３，Ｖｏｌ．２６４（３３）ｐｐ．Ｈ２０５６−２０６７を参照］。また、ラットにおいてＭＩ後３日で、梗塞心臓のＡII−ＡＴ₁レセプター結合密度は有意に増加することが最近示された［Ｓｕｎ，Ｙ，他，「ラットにおける心筋梗塞後のアンギオテンシンIIレセプター結合」，ＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＲｅｓｅａｒｃｈ，１９９４；Ｖｏｌ．２８．ｐｐ．１６２３−１６２８を参照］。これら最近の実験観察は、心臓疾患誘発梗塞の治療におけるロサルタンの有用性の臨床的示唆であり得る。最近、ラット心房のドナー組織の分離（isolation ）と培養中にＡＴ₂レセプターは殆ど完全に消失するが、培養心室細胞中のＡＴ₁ レセプターの発現は培養条件により増加制御され得ることが示されたので、ＡII レセプター拮抗の研究に生理学的標本を使うことの重要性は強調されるべきであろう[Ｆｅｏｌｄｅ，Ｅ.，他，「ラット心臓におけるアンギオテンシンIIレセプター亜型と生物学的応答」，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ.，１９９３，Ｖｏｌ．２５，ｐｐ．１３５９−１３６７を参照]。他方、心臓レニン−アンギオテンシン系（ＲＡＳ）の研究に、心筋虚血のｉｎｖｉｖｏ実験モデルを使用すると、局部心臓ＲＡＳの効果を循環ＡII効果から区別するのは困難になろう［Ｇｒａｅｆｆ，Ｐ．Ａ．，他，「各種の心臓虚血症候における心臓レニン−アンギオテンシン系」：Ｌｉｎｄｐａｉｔｎｅｒ，Ｋ．ａｎｄＧａｎｔｅｎ，Ｄ．，ｅｄｓ．”ＴｈｅＣａｒｄｉａｃ−ＲｅｎｉｎＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎＳｙｓｔｅｍ”，Ａｒｍｏｎｋ，ＮＹ：ＦｕｔｕｒａＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ.，Ｉｎｃ．，１９９４，ｐｐ．２０１−２３１を参照］。本発明者らの研究において、虚血と再潅流中の心筋機能障害発生におけるＡII の役割がＡII−ＡＴ₁レセプター拮抗薬ロサルタンを使い生理学的に適切な分離された（isolated）活動ラットモデルで精査された［Ｃｏｈｅｎ，Ｓ．Ｍ．，他，「薬剤影響を受けた活動心臓モデルの同時３１−Ｐ核磁気共鳴分光分析と機械的機能」，ＤｒｕｇＤｅｖ．Ｒｅｓ．１９８９，Ｖｏｌ．１８，ｐｐ．３０５−３２５を参照］。ロサルタンによる経口的前治療の効果をプラセボ治療及びｉｎｖｉｔｒｏロサルタン治療のそれらと比較した。虚血前、中及び後の連続³¹Ｐ−ＮＭＲ測定により、心筋機能の観察を同じ分離活動ラット心臓の高エネルギー燐酸塩代謝及び細胞内ｐＨ（ｐＨ_i）測定と関係付けた。発明の概要本発明により、治療有効量のロサルタン、その活性代謝物ＥＸＰ３１７４、又はそれらの医薬的に許容可能な塩を、かかる治療の必要な患者又は患者の分離された心臓に投与する、虚血後の心臓機能回復を向上する急性治療法が提供される。図面の簡単な説明図１全実験で従った潅流プロトコル。図２ｉｎｖｉｖｏ及びｉｎｖｉｔｒｏのロサルタン治療の関数としての、（ｃ）機械仕事量、（ｂ）冠動脈流及び（ａ）全虚血２０分後の心臓拍出量の回復［仕事量単位はｍｌ／ｍｉｎ×ｍｍＨｇ］。発明の詳細な説明本発明は虚血後の心臓機能回復を向上するために、治療有効量のロサルタン、その活性代謝物ＥＸＰ３１７４、又はそれらの医薬的に許容可能な塩を、かかる治療の必要な患者又は患者の分離された心臓に投与する急性治療法に関する。本発明のこの観点の態様の１つは、虚血が心臓バイパス手術中に起こる上述の方法である。本発明の第２の観点は、移植後の患者の新しい心臓の機能回復を向上するため、治療有効量のロサルタン、その活性代謝物ＥＸＰ３１７４、又はそれらの医薬的に許容可能な塩を移植に先立つ保存期間に分離された心臓に直接投与する急性治療法である。本発明の第３の観点は、患者の部分的に虚血した心臓の冠動脈閉塞を評価又は矯正する挿入処置に先立って処置後の続く心臓の機能回復を向上する目的で、治療有効量のロサルタン、その活性代謝物ＥＸＰ３１７４、又はそれらの医薬的に許容可能な塩をかかる患者に投与する急性治療法である。第４の本発明の観点は、心筋梗塞後の機能回復を向上するため、治療有効量のロサルタン、その活性代謝物ＥＸＰ３１７４、又はそれらの医薬的に許容可能な塩をかかる治療の必要な患者に投与する急性治療法である。ロサルタンとその活性代謝物ＥＸ３１７４は、米国特許第５，１３８，０６９号に開示されクレームされており、それぞれ次の化学名を有する：２−ブチル−４−クロロ−１−［（２′−テトラゾール−５−イル）ビフェニル−４−イル］メチル−５−（ヒドロキシメチル）イミダゾール；及び２−ブチル−４−クロロ−１−［（２′−テトラゾール−５−イル）ビフェニル−４−イル］メチル―イミダゾール−５−カルボン酸ロサルタンカリウム塩は現在米国で登録商標ＣＯＺＡＡＲ^(R)で高血圧症治療用に市販されている。ＥＸＰ３１７４はロサルタンカリウムの活性代謝物として同定されている。実験動物と薬剤治療心臓ドナーは体重４００〜５００ｇの雄Ｓｐｒａｇｕｅ−ＤａｗｌｅｙラットでＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒＢｒｅｅｄｉｎｇＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）から入手した。全動物を実験動物の管理と使用の案内書，ＮＩＨ出版物Ｎｏ．８６−２３に従って管理し、全動物取扱法は本発明者らの研究所動物管理及び使用委員会により承認された。ラットは餌と水を適宜与えられ、手術に先立つ絶食は行われなかった。全４治療群を次の通り設定した。（１）ロサルタン、ｉｎｖｉｖｏ、Ｎ＝７：１ｍｇ／ｋｇ，経口，心臓切除前３．５時間。（２）プラセボ，ｉｎｖｉｖｏ，Ｎ＝８：ベヒクル，経口，心臓切除前３．５時間。（３）ロサルタン、ｉｎｖｉｔｒｏ、Ｎ＝７：切除少なくとも２０分前に再循環潅流に４．５μＭを添加。（４）対照、ｉｎｖｉｔｒｏ、Ｎ＝７：切除少なくとも２０分前に再循環潅流にベヒクルを添加。ｉｎｖｉｖｏ（群１）で、ロサルタンは食餌管により水溶液として強制投与されたが、プラセボラットは同量の水が投与された（群２）。ｉｎｖｉｔｒｏ実験（群３）に使われたロサルタンの用量４．５μＭは、ＡＴ₁レセプター部位の飽和を確実にする一方、心臓のＡＴ₂レセプター亜型に対してはロサルタンのＫ_i以下に十分保つように選んだ［Ｃｈａｎｇ，Ｒ．Ｓ．Ｌ．，他，「ＭＫＫ− ９９６のｉｎｖｉｔｒｏ薬理学、新しい強力で選択的なアンギオテンシンII（ＡＴ₁）レセプター拮抗薬」，ＤｒｕｇＤｅｖ．Ｒｅｓ．，１９９４，Ｖｏｌ．３２，ｐｐ．１６１−１７１を参照］。この用量は、１ｍｇ／ｋｇの薬剤ｉ．ｖ．を受けるラットに対して最近報じられたロサルタン血漿濃度に匹敵し［Ｚｈｕｏ，Ｊ．，他，「ｉｎｖｉｔｒｏオートラジオグラフィにより示されたラット脳、腎臓及び副腎中のＡＴ₁アンギオテンシンIIレセプターの経静脈ロサルタンによる遮断」，ＣｌｉｎｉｃａｌａｎｄＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，１９９４，Ｖｏｌ．２１，ｐｐ．５５７ −５６７を参照］、経口摂取１０ｍｇ／ｋｇラットに対するピーク血漿濃度とほぼ等しい。経口により治療されたラット中で、ロサルタンは、親化合物より殆ど１桁量強力な力価を持つ活性代謝物ＥＸＰ３１７４に変換される［Ｍａｎｔｌｏ，Ｎ．Ｂ.，他，「強力な経口による活性のイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン系アンギオテンシンIIレセプター拮抗薬」，Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ.，１９９１，Ｖｏｌ．３４，ｐｐ．２９１９−２９２２を参照］。その結果、見かけ上ここでｉｎｖｉｔｒｏ治療に使われた高い用量は、ｉｎｖｉｖｏ用量に使われた１ｍｇ／ｋｇのロサルタンにより与えれるとの同じ治療効果を与えるために必要であった。活動心臓標本ドナーラットをエーテルで麻酔し；６００Ｕ／ｋｇへパリンナトリウムを心臓切除前約２分に抗凝結薬ｉ．ｖ．として与えた。切除した心臓は直ぐ心臓麻酔用の氷冷潅流緩衝液５０ｍｌに浸した。停止した心臓はただちにＬａｎｇｅｒｄｏｒｆｆ（逆行性）モードで潅流して冠動脈管系に十分な潅流を与え、一方、心臓は標準技術を使い肺静脈カニューレ挿入と活動心臓（ＷＨ）潅流を調製し［ａ）Ｎｅｅｌｙ，Ｊ．Ｒ．，他，「分離ラット心臓による酸素消費に与える圧力発生の影響」，Ａｍ．Ｊ．ｐｈｙｓｉｏｌ．，１９６７，Ｖｏｌ．２１２，ｐｐ．８０４−８１４；ｂ）Ｈａｒｄｍａｎ，Ｊ．Ｇ．ａｎｄＯ’Ｍａｌｌｅｙ，Ｂ．Ｗ．，ｅｄｓ．“ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，ＮｅｗＹｏｒｋ”，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，１９７５、ｐｐ．４３−６０に収載のＮｅｅｌｙ，Ｊ．Ｒ．，他，「分離ラット心臓の潅流技術」；及びｃ）Ｔａｅｇｔｍｍｅｙｅｒ，Ｈ．，他，「分離活動心臓におけるエネルギー供給基質の利用」，Ｂｌｏｃｈｅｍ．Ｊ．，１９８０，Ｖｏｌ．１８６，ｐｐ．７０１−７１１を参照］、ＮＭＲ磁石中の潅流に適合させた［Ｃｏｈｅｎ，Ｓ．Ｍ．，他，ＤｒｕｇＤｅｖ．Ｒｅｓ．，１９８９，Ｖｏｌ．１８，ｐｐ．３０５−３２５を参照］。全活動心臓標本は、既に既述されたごとく虚血前に心房充満圧力（ＡＦＰ）１０〜１１ｍｍＨｇ及び一定平均大動脈圧力（ＭＡＰ）９０ｍｍＨｇで潅流した［Ｗｅｒｒｍａｎｎ，Ｊ．Ｇ．，他，Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏ１．，１９９４，Ｖｏｌ．２４，ｐｐ．５７３−５８６を参照］。３６．２℃でＯ₂：ＣＯ₂ （９５：５）で、ｐＨ７．４の改変低燐酸塩Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ緩衝液を平衡後、唯一の基質として１５ｍＭグルコースをこれに加えて再循環潅流液に使った［Ｗｅｒｒｍａｎｎ，Ｊ．Ｇ．，他，「³¹Ｐ−ＮＭＲにより研究した虚血後活動ラット心臓の機能及び代謝回復に与えるＡＣＥ阻害効果とＡIIレセプター拮抗効果の比較」Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ.，１９９４，Ｖｏｌ．２４，ｐｐ．５７３−５８６を参照］。標本の他の詳細は記述された通りである［ａ）Ｃｏｈｅｎ，Ｓ．Ｍ．，他，ＤｒｕｇＤｅｖ．Ｒｅｓ．，１９８９，Ｖｏｌ．１８，ｐｐ．３０５−３２５；及びｂ）Ｗｅｒｒｍａｎｎ，Ｊ．Ｇ.,他，Ｊ. Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ. Ｐｈａｒｍａｃｏｌ.，１９９４，Ｖｏｌ．２４，ｐｐ．５７３−５８６を参照］。潅流プロトコルは全ての治療群で同じであり、図１に示されている。ＮＭＲ条件ＢｒｕｋｅｒＡＭ３６０大孔径分光計を使い³¹Ｐ−ＮＭＲ分光を測定した。各スペクトルは１２ｋＨｚ窓による６０゜自由誘導減衰の８４〜１６０走査から成り、パルス間で２秒回復させた。かくして、各スペクトルは３．０〜５．６分間にわたる平均代謝物水準を測定した。³¹Ｐ−ＮＭＲピーク面積を、前に既述されているごとく定量化したＰＣｒ及びＡＴＰで定量した［Ｗｅｒｒｍａｎｎ，Ｊ．Ｇ．，他，Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９４，Ｖｏｌ．２４，ｐｐ．５７３−５８６を参照］。³¹Ｐ−ＮＭＲは本発明者らの分離心臓標本の細胞内ｐＨの直接測定結果を与えた。³¹Ｐ−ＮＭＲの応用は十分確立されており、細胞内の無機燐酸塩の化学シフトがそのｐＫ_a６．８近傍のｐＨ変化に高感度である事に基く［Ｃｏｈｅｎ，Ｓ．Ｍ.，他，ＤｒｕｇＤｅｖ．Ｒｅｓ.，１９８９，Ｖｏｌ．１８，ｐｐ．３０５−３２５を参照］。統計解析治療群間の差を一方向分散分析（ＡＮＯＶＡ）により解析し、続いてＡＮＯＶＡにより示されたＴｕｋｅｙの多重比較試験を行った［Ｚａｒ，Ｊ．Ｈ．，ＢｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌＡｎａｌｙｓｉｓ，２ｎｄｅｄ．ＥｎｇｌｅｗｏｏｄＣｌｉｆｆｓ，ＮＪ：Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−Ｈａｌｌ，Ｉｎｃ．，１９８４，ｐ．７１８を参照］。全計算と解析はＳＡＳソフトウエアシステム（ＳＡＳ，Ｃａｒｙ，ＮＣ）を使い実施した。全ての報告値は平均±ＳＥＭである。材料ロサルタン、２−ｎ−ブチル−４−クロロ−５−ヒドロキシメチル−１−［（２′−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）ビフェニル−４−イル）メチル］イミダゾールはメルク・リサーチ・ラボラトリ、Ｒａｈｗａｙ、ＮＪで合成した。他の全ての化学品は市販の最高級である。全虚血後の血液動的機能の回復心臓の機械仕事量（Ｅ_M）の近似は心臓の圧力仕事量（Ｅ_P）と動的仕事量（Ｅ_K ）の和で与えられる［Ｎｉｅｓｌｅｒ，Ｒ．Ａ．，他，「分離活動ラット心臓の熱生産、機械仕事量、及び酸素消費の測定」，ＢａｓｉｃＲｅｓ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，１９８５，Ｖｏｌ．８０，ｐｐ．５６４−５７９を参照］。ここに使われる機能回復の指数、すなわち、仕事量は圧力仕事（Ｅ_P）を勘定に入れ、心臓拍出量（ＣＯ）と平均発生圧力（ＭＡＰ−ＡＦＰ）を乗じて、仕事量＝ＣＯ×［ＭＡＰ−ＡＦＰ］で計算する。かかる心臓によりなされる仕事の比較的小さい(＜５％)成分である緊縮時に消費される動的エネルギー（Ｅ_K）［ａ）Ｎｉｅｓｌｅｒ，Ｒ．Ａ．，他，ＢａｓｉｃＲｅｓ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，１９８５，Ｖｏｌ．８０，ｐｐ．５６４ −５７９；ｂ）ＫａｎｎｅｎｇｉｅｓｓｅｒＧ．Ｊ．，他，「局部虚血心筋の再潅流後の障害心臓の仕事と酸素摂取」，Ｊ．Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＣａｒｄｉｏｌ．，１９７９，Ｖｏｌ．１１．ｐｐ．１９７−２０７を参照］は、本発明者らの機能測定からは省略した。この心臓の機械仕事量の近似はＮｅｅｌｙ，他及びＫａｎｎｅｎｇｉｅｓｓｅｒ，他が使用したものと同じであり［ａ）Ｎｅｅｌｙ，Ｊ．Ｒ．，他，「分離ラット心臓による酸素消費に与える圧力発生の影響」，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ.，１９６７，Ｖｏｌ．２１２，ｐｐ．８０４−８１４；及びｂ）ＫａｎｎｅｎｇｉｅｓｓｅｒＧ．Ｊ．，他，「局部虚血心筋の再潅流後の障害心臓の仕事と酸素摂取」，Ｊ．Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＣａｒｄｉｏｌ．，１９７９，Ｖｏｌ．１１．ｐｐ．１９７−２０７を参照］、Ｒｅｉｂｅｌ及びＲｏｖｅｔｔｏのごとく前負荷又は心房充満圧力で行われた許容を含む［Ｒｅｉｂｅｌ，Ｄ．Ｋ．，他，「酸素欠乏に続く心筋ＡＴＰ合成と機械的機能」，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１９７８，Ｖｏｌ．２３４（５），ｐｐ．Ｈ６２０−Ｈ６２４を参照］。本研究で全体的な虚血に先立って活動心臓潅流中に測定した仕事量、冠動脈流、及び心臓拍出量の基準線値は本質的に全ての研究対象治療群について等しく（図２）、前に同じ条件で測定した基準線値と比較し得た［Ｗｅｒｒｍａｎｎ，Ｊ．Ｇ．，他，Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９４，Ｖｏｌ．２４，ｐｐ．５７３−５８６を参照］。各群について測定した全虚血からの機能回復を表１に総括した。ロサルタンによるｉｎｖｉｖｏ又はｉｎｖｉｔｒｏの治療は、対応する対照群と比較して再潅流の５４分後に有意に大きな機能回復を生じた（Ｐ＜０．００５）。薬剤治療群のいずれも心臓について測定した最終機能回復は同じであったが、１ｍｇ／ｋｇロサルタンで前処理したラットの心臓は、プラセボ群と比較して再潅流期間の非常に早い時間（約２４分）に有意な機能回復の改善を示し、ｉｎｖｉｔｒｏで治療した心臓は再潅流の４２分後まで機能は有意に改善しなかった（図２）。ロサルタンで経口により治療されたラットの心臓は、再潅流３０分までＣＦで持続する有意な改善を示し、再潅流期間の最後まで続いた（図２）。対照的に、ロサルタンでｉｎｖｉｔｒｏ治療した心臓は、再潅流期間終期近くの短い１区間で冠動脈流の有意な改善を示したのみであった。ロサルタンで経口治療したラットの心臓の心臓拍出量は、プラセボ群と比較して、活動心臓再潅流の早い時間（約２４分）に始まり再潅流期間の残りを通じて有意に大きかった。ロサルタンでｉｎｖｉｔｒｏ治療した心臓は、ｉｎｖｉｔｒｏの対照と比較して再潅流４２分後まで心臓拍出量の有意な改善はなかった。基準線心臓速度はいずれの治療形態にも影響されなかった。心臓速度は典型的に２３７±４ｂｐｍであった。ロサルタン治療は再潅流中の心臓速度の回復に有意な影響を与えなかった。ＡＴＰとホスホクレアチンの代謝ｉｎｖｉｖｏ又はｉｎｖｉｔｒｏのロサルタンによる治療は虚血前の心筋ＡＴＰ水準あるいは虚血中又は後に観察されるＡＴＰ水準の変化に影響を与えなかった。基準線ＡＴＰ水準は典型的に２４±１μｍｏｌ／ｇ乾重量で、前に分離活動ラット心臓の研究で測定された基準線水準と一致した［ａ）Ｗｅｒｒｍａｎｎ，Ｊ．Ｇ．，他，Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９４，Ｖｏｌ．２４，ｐｐ．５７３−５８６；ｂ）Ｎａｖｏｎ,Ｇ．，他，Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．Ｍｅｄ．，１９９４，Ｖｏｌ．３２，ｐｐ．５５６−５６４を参照］。ＡＴＰ水準は、全治療群において虚血２０分後に１−から４−μｍｏｌ／ｇ乾重量に低下し、それから全治療群において再潅流５４分後に１２−から１４−μｍｏｌ／ｇ乾重量まで回復した。ホスホクレアチン水準は基準線で２３±１から２７±１μｍｏｌ／ｇ乾重量であった；薬剤治療は、虚血中に観察されたホスホクレアチン水準の低下又は再潅流中のホスホクレアチンの回復度に有意な影響を与えなかった。細胞内ｐＨロサルタンによる経口による前処理は虚血中のアシドーシス発生を減衰するが、この差は有意ではなかった。前虚血基準線ｐＨ_iは治療に関わらず７．０４± ０．０２であった；全虚血の２０分後に治療群はｐＨ_iは６．０６±０．０５に、プラセボ群は５．９７± ０．０３に低下した。再潅流中のｐＨ_iの回復はこれらの群で同じであった。ロサルタンｉｎｖｉｔｒｏはｉｎｖｉｔｒｏ対照と比較してプロトコルのどの段階でもｐＨ_iに何の効果も与えなかった。全虚血と再潅流中の心臓ＲＡＳの心筋機能障害に対する寄与を定義する助けとして、本発明者らは、分離活動心臓標本におけるＡ II−ＡＴ₁レセプター拮抗薬ロサルタンの効果を試験した。分離潅流器官におけるＡ II−ＡＴ₁レセプター拮抗効果を研究することは、虚血中及び後の心筋機能障害への循環Ａ IIの寄与及び他組織に位置するレニン−アンギオテンシン系の寄与を効果的に消去することになる。本研究において、Ａ II−ＡＴ１レセプター拮抗により全虚血２０分後の再潅流中に心筋機能は有意に改善された。ｉｎｖｉｖｏでロサルタンにより１ｍｇ／ｋｇ用量水準で治療されたラットの心臓で７９±３％（表１）の機能回復が測定された。ｉｎｖｉｔｒｏで４．５μＭロサルタンにより治療されたラットの心臓は約７５±４％（表１）の心筋機能回復を示した。経口により治療されたラットにおけるロサルタンの結合親和性は部分的にロサルタンの活性代謝物ＥＸＰ３１７４（ロサルタンより８倍大きい結合親和性を有する）への変換に起因しているのが最も確かのようであった［Ｍａｎｔｌｏ，Ｎ．Ｂ．，他，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９１，Ｖｏｌ．３４，ｐｐ．２９１９−２９２２を参照］。このように、ｉｎｖｉｖｏ、ｉｎｖｉｔｒｏ治療条件双方について、このＡ II−ＡＴ₁拮抗薬の有効なｉｎｖｉｔｒｏ結合親和性と虚血後に生じる機能回復改善との相関は、ＡＴ₁レセプターの特異的拮抗の結果である本化合物の作用による保護効果と一致している。ａ：機能回復＝［仕事量_最終／仕事量_初期］×１００。全ての値は平均±ＳＥＭ虚血後の再潅流中に、冠動脈流と心臓拍出量はロサルタン治療により有意に改善された。Ａ II−ＡＴ₁レセプター拮抗から生じる心筋機能障害の緩和は、ＡＴＰとホスホクレアチンの水準に反映されるごとく本質的にロサルタン治療による高エネルギー燐酸塩代謝に依存していなかった。ロサルタンで観察された効果は、他の構造的に異なるＡ II−ＡＴ₁レセプター拮抗薬、７−メチル−２−プロピル−３−［２′−（５−テトラゾリル）−１，１′−ビフェニル−４−イル）メチル］−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン（以後、化合物Ａと呼ぶ）でなされた発見と一致し、このクラスの化合物の特徴であり得る［Ｗｅｒｒｍａｎｎ，Ｊ．Ｇ．，他，「³¹Ｐ−ＮＭＲにより研究した虚血後活動ラット心臓の機能及び代謝回復に与えるＡＣＥ阻害効果とＡ IIレセプター拮抗効果の比較」Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９４，Ｖｏｌ．２４，ｐｐ．５７３−５８６を参照］。これらＡ II拮抗薬の一つに特異な唯一の有意な効果は虚血中のアシドーシスの発生と関係付けられる。化合物Ａの経口による前治療はプラセボ治療と比較して虚血中に心筋のアシドーシス発生に有意な減衰を生じたが、ロサルタンによる経口による前治療はプラセボ治療と比較して虚血中に心筋のアシドーシス発生に穏やかで非有意な効果しか与えなかった。虚血中のｐＨ_iに与えるＡ II拮抗の効果は化合物Ａに特異的でありＡ II 拮抗治療全般で観察されるものではなく、ロサルタンがアシドーシス発生を有意に減衰しないことは、化合物Ａと比較して心筋機能に与える保護効果を低下させるものではない。ロサルタンｉｎｖｉｔｒｏ群と比較してロサルタンｉｎｖｉｖｏ群により示された血液動的機能の迅速な回復（図２）は、虚血前にｉｎｖｉｔｒｏ群が受けた薬剤への２０分曝露期間と比較して、経口的に前処理された群の薬剤に対するより長い期間の心筋の曝露期間に因るものであるかも知れない。経口による前投与群により示された迅速な回復は、本研究で使われた短期間虚血後の心筋障害発生の緩和と一致する；しかし、この効果に対応する正確な機構は明確ではない。ｉｎｖｉｖｏ治療で考慮すべき因子の１つはロサルタンのより強力で活性のある代謝物ＥＸＰ３１７４への代謝である。ｉｎｖｉｔｒｏロサルタンの有益な影響の遅れは、多分この条件下でＥＸＰ３１７４が存在しないことに関係している。ロサルタンによる経口による前治療された群はロサルタンでｉｎｖｉｔｒｏ治療された群より迅速に血流動的機能を回復したが、それぞれの薬剤治療された群が再潅流期間５４分後終期に受けた最終的回復は、本質的に同じであったことは強調されるべきである。従って使われた治療モード間の機能回復の差はただ虚血からの回復速度に関係し、得られた全回復には関係しない。ロサルタンについての本観察はまたＡＣＥ阻害剤、リシノプリルｉｎｖｉｖｏによる治療が分離潅流心臓の虚血後の心筋障害を緩和するという本発明者らの最初の研究結果とも一致する［Ｗｅｒｒｍａｎｎ，Ｊ．Ｇ．，他，Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９４，Ｖｏｌ．２４，ｐｐ．５７３−５８６を参照］。他研究者はそれぞれの分離潅流心臓モデルのＡＣＥ阻害剤治療による同じ保護効果を報じてきた［ａ）Ｃｏｈｅｎ，Ｓ．Ｍ．，他，ＤｒｕｇＤｅｖ．Ｒｅｓ．，１９８９，Ｖｏｌ．１８，ｐｐ．３０５−３２５；ｂ）Ｌｉｎｚ，Ｗ．，他，「虚血ラット心臓における変換酵素阻害剤、ラマプリルの有益な効果」，Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９８６，Ｖｏｌ．８（Ｓｕｐｐｌ．１０），ｐｐ．Ｓ９１−Ｓ９９；ｃ）Ｌｉ，Ｋ．，他，「ラットの心筋虚血及び再潅流障害に与えるカプトプリル及びエナラプリルの保護効果」，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ.，１９８７，Ｖｏｌ．１９，ｐｐ．９０９−９１５；ｄ）Ｌｉｎｚ，Ｗ．，他，「虚血心臓におけるブラジキニン分解の局部阻害」，Ｊ．Ｃａｒｕｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９０，Ｖｏｌ．１５（Ｓｕｐｐｌ．６），ｐｐ．Ｓ９９−Ｓ１０９；Ｌｉｕ，Ｘ．，他，「スルフヒドリル−含有アンギオテンシン変換酵素阻害剤による心筋再潅流障害の減衰」，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．ＤｒｕｇｓＴｈｅｒ．，１９９２，Ｖｏｌ．，ｐｐ．４３７−４４３を参照］。いずれかのＡ I I−ＡＴ₁レセプター拮抗薬ｉｎｖｉｔｒｏで治療した心臓の再潅流期間に測定された心筋機能の有意な改善とは対照的に、リシノプリルｉｎｖｉｔｒｏ治療は心筋障害を緩和しなかった［Ｗｅｒｒｍａｎｎ，Ｊ．Ｇ．，他，Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９４，Ｖｏｌ．２４，ｐｐ．５７３−５８６を参照］。組織Ａ II水準は測定されていないが、本発明者らの分離心臓モデルにおけるＡＣＥ阻害剤ｉｎｖｉｔｒｏ治療の急性効果がないことは、虚血衝撃に先立つＡＣＥ阻害による内因性組織Ａ IIの不完全な洗浄によると推測される。Ａ II−ＡＴ₁レセプター拮抗薬は、直接レセプター水準に作用しＡ IIの効果を遮断する迅速な機構を提供するので、心筋梗塞の急性治療において有用であることを証することが可能である。本発見は、減少したＡ II水準に付随するＡＴ₁−Ａ IIレセプター刺激の減少がＡＣＥ阻害剤の主な心臓保護機構であり得るという示唆と一致する。ロサルタンによるＡＴ₁レセプター拮抗が本発明者らの条件下で虚血及び再潅流中の心筋機能疾患を緩和し得る他の可能な機構は、虚血及び再潅流中に起こる細胞内ナトリウムと続くカルシウムの増加（Ｎａ／Ｃａ交換を通じて）を減衰することにある。本発明者らは既に示した通り［Ｎａｖｏｎ，Ｇ．，他，「細胞内ナトリウムと活動及び虚血心臓のｐＨに与えるＮａ⁺／Ｈ⁺交換の効果に関する³¹ Ｐ−ＮＭＲ及び三重量子濾過²³Ｎａ−ＮＭＲ研究」Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．Ｍｅｄ．，１９９４，Ｖｏｌ．３２，ｐｐ．５５６−５６４を参照］、これらの同じ実験条件下で細胞内ナトリウム水準［Ｎａ_i］は虚血中と再潅流の初期段階に実質的に増加し、この［Ｎａ_i］の増加はＮａ⁺／Ｈ⁺対輸送担体阻害剤ＥＰＩＡ（Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピル）アミロリドにより有意に減衰される。Ｎａ⁺／Ｈ⁺交換の阻害は、ＥＰＩＡ被治療心臓の虚血及び再潅流に続く機械的機能を、対照心臓と比較して有意に改善した。ウサギ心室心筋におけるアンギオテンシンIIによるＮａ⁺／Ｈ⁺交換の刺激が最近報じられている［Ｍａｔｓｕｉ，Ｈ．，他，「アンギオテンシンIIは成熟ウサギ心室筋細胞におけるナトリウム−水素交換を刺激する」，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．，１９９５，Ｖｏｌ．２９，ｐｐ．２１５−２２１を参照］。アンギオテンシンIIによるＮａ⁺／Ｈ⁺交換の促進はＯＫＰ細胞、コモリネズミ腎臓細胞株で示され［Ｃａｎｏ，Ａ．，他，「ＯＫＰ細胞においてはＮａ−Ｈ対向輸送担体活性のアンギオテンシンII刺激はｃＡＭＰに無関係である」，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１９９４，ｖｏｌ．２６（ＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌ３５），ｐｐ．Ｃ１６０３−Ｃ１６０８を参照］、ここでも、更にロサルタンを使用してこの効果がＡＴ₁レセプター結合機構により媒介されたことが示された。本研究は、分離潅流心臓の全虚血２０分後の再潅流中の心筋機能障害の有意な緩和の最初の観察を、ロサルタンによる急性ＡII−ＡＴ₁レセプター拮抗の結果として報じる。治療された心臓の心筋機能障害の緩和は、共に高度に有意（Ｐ＜０．００５）で高エネルギー燐酸塩代謝とは無関係なＣＦ及びＣＯの回復の改善により特徴づけられた。ロサルタン治療は虚血中のアシドーシスの発生または再潅流時の細胞内ｐＨの回復に有意な効果を与えない。全体的に、本分離活動心臓研究の結果は、更に虚血及び再潅流中の心筋機能障害発生における心臓ＲＡＳの統合的役割を示す。分離潅流心臓の研究における強力な特異的Ａ IIレセプター拮抗薬の使用は、心筋虚血における局部心臓ＲＡＳの生理学的意味を強調する広範な手法を提供する。医薬的に適切な塩は、金属（無機）塩及び有機塩を含み、そのリストはＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，１７版，１４１８頁（１９８５）に収載されている。当業界の熟練者には適切な塩の形態が物理的及び化学的安定性、流動性、吸湿性、及び溶解度に基いて選ばれることはよく知られている。本発明の好ましい塩は、限定されることなく、ロサルタンとその活性代謝物ＥＸＰ３１７４のカリウム、ナトリウム、カルシウム及びアンモニウム塩を含む。本発明の範囲に含まれるのは、ロサルタン、その活性代謝物ＥＸＰ３１７４またはそれらの医薬的に許容可能な塩と適切な医薬的担体を含む医薬的組成物を使う上記の治療法である。投与形態本発明の医薬組成物は、活性成分化合物と作用部位を接触させる任意の手段によって本発明の治療方法として投与することが可能である。例えば、投与は非経口的、即ち、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、又は腹膜内投与の形で行うことが可能である。又は、同時に、場合に応じて経口的投与を行うことが可能である。本発明の医薬組成物を、医薬品と組合せて慣用の手段により投与することが可能である。医薬組成物は単独に投与することができるが、一般的には、選んだ投与経路と標準的調剤慣行に基いて選択された医薬担体と共に投与される。本発明の開示目的に関して、患者とは哺乳動物、好ましくはヒトである。投与用量は投与対象者の年齢、健康状態、体重、疾病の程度、同時治療の種類、更に必要に応じて、治療頻度及び期待効果の性質により決定されるであろう。通常、活性成分化合物の日用量は１日当たり薬剤１から５００ミリグラムであろう。普通は一日当り１０から１００ミリグラムを１回または複数回に行うのが期待の成果を得るために有効であろう。活性成分は経口的には固体投与形態（例えばカプセル、錠剤及び粉末）、又は液体投与形態（例えばエリキシルシロップ、及び懸濁剤）で投与することが可能である。或いは非経口的に無菌液体投与形態で投与することも可能である。ゼラチンカプセルは、活性成分と粉末担体（例えば、ラクトース、デンプン、セルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸など）を含む。同様の希釈剤を圧縮錠剤を作るために使用することが可能である。錠剤とカプセルは共に一定期間に亘る薬剤の連続放出を生じさせる持続放出型製品として製造することも可能である。不快な味を覆い且つ雰囲気から錠剤を保護するために圧縮錠剤を糖もしくはフィルムで被覆するか、又は、胃腸管内で選択的崩壊を受けるために腸溶被覆を施すことも可能である。経口投与のための液体投与形態は患者が摂取し易くするための着色剤と着香料を含むことができる。一般的に、水、適切な油、塩類液、水性デキストロース（グルコース）と関連の糖溶液、及びグリコール（例えば、プロピレングリコール、又はポリエチレングリコール）が、非経口投与用の溶液に適した担体である。非経口投与用の溶液は、好ましくは上記活性成分の水溶性塩、適切な安定化剤、及び、必要に応じて緩衝剤物質を含む。酸化防止剤（例えば、単独の、又は組合せた亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、又はアスコルビン酸）が、適切な安定化剤である。更に、クエン酸とその塩、及びナトリウムＥＤＴＡも使用される。加えて、非経口投与用溶液は、保存剤（例えば、塩化ベンズアルコニウム、メチルパラベン又はプロピルパラベン、及びクロロブタノール）を含むことが可能である。適切な医薬担体は当業界における標準参考文献であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ａ．Ｏｓｏｌに記載されている。本発明のロサルタン又はＥＸＰ３１７４投与のための使用可能な医薬投与形態は次のように示すことが可能である：カプセル標準的なツーピースハードゼラチンカプセルに、各カプセル毎に製剤的に適切なミリグラム量の粉末活性成分、ラクトース１５０ミリグラム、セルロース５０ミリグラム、及びステアリン酸マグネシウム６ミリグラムを充填して多数の単位カプセルを調製する。ソフトゼラチンカプセル消化可能な油（例えば、大豆油、綿実油、又はオリーブ油）中に活性成分を含む混合物を調製し、製剤的に適切なミリグラム量の活性成分を含むソフトゼラチンカプセルを形成するようにゼラチン内にポジティブ置換ポンプによって注入する。カプセルを洗浄し乾燥させる。錠剤用量単位が製剤的に適切なミリグラム量の活性成分、コロイド質二酸化ケイ素０．２ミリグラム、ステアリン酸マグネシウム５ミリグラム、微晶質セルロース２７５ミリグラム、デンプン１１ミリグラム、及びラクトース９８．８ミリグラムとなるように、従来通りの手順で多数の錠剤を調製する。味を良くするために、又は吸収を遅らせるために適切な被覆を行うことが可能である。注射液注射に適した非経口投与組成物を、プロピレングリコール１０容積％中で製剤的に適切なミリグラム量の活性成分を攪拌することによって調製する。この溶液に水を加えて注射用規定量にし、殺菌する。懸濁液懸濁液５ミリリットル当たり製剤的に適切なミリグラム量の微粉砕活性成分、カルボキシメチルセルロースナトリウム１００ミリグラム、安息香酸ナトリウム５ミリグラム、ソルビトール溶液（米国薬局方）１．０グラム、バニリン０．０２５ミリリットルを含むように、経口投与用の水性懸濁液を調製する。上記の投与形態と経路は治療法に依存するであろう。もし治療法が移植中または心臓がバイパス中の分離心臓の機能回復を向上するためであれば、投与経路は移植処理中に典型的に使われる保存溶液への直接添加、またはバイパス中の心臓への添加であろう。加えるに、治療法は、以上概観した伝統的な経路の一つによる患者へのロサルタン又はＥＸＰ３１７４の投与が必要であろう。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ウエルマン，ジエフリー・ジーアメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07065、ローウエイ、イースト・リンカーン・アベニユー・126

Claims

【特許請求の範囲】１．虚血後の心臓機能回復を向上するために治療有効量のロサルタン、ＥＸＰ３１７４、又はそれらの医薬的に許容可能な塩を、かかる治療の必要な患者又は患者の分離された心臓に投与する急性治療法。２．虚血が心臓バイパス手術中に生じる請求項１に記載した方法。３．移植後の患者の新しい心臓の機能回復を向上するため、治療有効量のロサルタン、その活性代謝物ＥＸＰ３１７４、又はそれらの医薬的に許容可能な塩を移植に先立つ保存期間に分離された心臓に直接投与する急性治療法４．患者の部分的に虚血した心臓の冠動脈閉塞を評価又は矯正する挿入処置に先立って処置後の続く心臓の機能回復を向上する目的で、治療有効量のロサルタン、ＥＸＰ３１７４、又はそれらの医薬的に許容可能な塩をかかる患者に投与する急性治療法。５．心筋梗塞後の機能回復を向上するため、治療有効量のロサルタン、ＥＸＰ３１７４、又はそれらの医薬的に許容可能な塩をかかる治療の必要な患者に投与する急性治療法。