JP2000316594A - 無細胞タンパク質合成用細胞抽出物含有製剤、及び無細胞タンパク質合成反応用キット - Google Patents
無細胞タンパク質合成用細胞抽出物含有製剤、及び無細胞タンパク質合成反応用キットInfo
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- JP2000316594A JP2000316594A JP11130393A JP13039399A JP2000316594A JP 2000316594 A JP2000316594 A JP 2000316594A JP 11130393 A JP11130393 A JP 11130393A JP 13039399 A JP13039399 A JP 13039399A JP 2000316594 A JP2000316594 A JP 2000316594A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】室温保存可能であって、該細胞抽出物の生物学
的機能を維持した状態の製剤に調製された無細胞タンパ
ク質合成用細胞抽出物含有製剤の提供することが本発明
の課題である。 【解決手段】本発明の解決手段は、生物体から、自己の
タンパク質合成反応の阻害に関与する系を排除すること
によって調製した無細胞タンパク質合成用細胞抽出物を
含む物質を凍結乾燥することからなる。
的機能を維持した状態の製剤に調製された無細胞タンパ
ク質合成用細胞抽出物含有製剤の提供することが本発明
の課題である。 【解決手段】本発明の解決手段は、生物体から、自己の
タンパク質合成反応の阻害に関与する系を排除すること
によって調製した無細胞タンパク質合成用細胞抽出物を
含む物質を凍結乾燥することからなる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、無細胞タンパク質
合成系に使用する細胞・組織からの調製した無細胞タン
パク質合成用細胞抽出物含有製剤、及びこの製剤を含む
無細胞タンパク質合成反応用キットに関するものであ
る。本発明は、無細胞タンパク質合成用細胞抽出物を安
定化し、室温保存・室温輸送を可能とした製剤及び該製
剤を含むキットに関するものである。本発明は、要時、
水の添加によって合成効率の高い鋳型依存的な無細胞タ
ンパク質合成用細胞抽出物含有製剤を含むキットの提供
に関するものである。
合成系に使用する細胞・組織からの調製した無細胞タン
パク質合成用細胞抽出物含有製剤、及びこの製剤を含む
無細胞タンパク質合成反応用キットに関するものであ
る。本発明は、無細胞タンパク質合成用細胞抽出物を安
定化し、室温保存・室温輸送を可能とした製剤及び該製
剤を含むキットに関するものである。本発明は、要時、
水の添加によって合成効率の高い鋳型依存的な無細胞タ
ンパク質合成用細胞抽出物含有製剤を含むキットの提供
に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】細胞内でおこなわれているタンパク質の
合成反応は、まず遺伝情報をもつＤＮＡからその情報が
ｍＲＮＡに転写され、そしてリボソームがそのｍＲＮＡ
の情報を翻訳して、タンパク質を合成するという工程で
進行している。現在、この細胞内におけるタンパク質合
成を試験管等の生体外で行う方法としては、例えばリボ
ソームを生物体から抽出し、これらを用いて試験管内で
無細胞タンパク質合成法の研究が盛んに行われている
（特開平６−９８７９０、特開平６−２２５７８３、特
開平７−１９４、特開平９−２９１、特開平７−１４７
９９２）。この方法には、リボソームの原料として、大
腸菌、胚芽、家兎網状赤血球などが用いられてきた。
合成反応は、まず遺伝情報をもつＤＮＡからその情報が
ｍＲＮＡに転写され、そしてリボソームがそのｍＲＮＡ
の情報を翻訳して、タンパク質を合成するという工程で
進行している。現在、この細胞内におけるタンパク質合
成を試験管等の生体外で行う方法としては、例えばリボ
ソームを生物体から抽出し、これらを用いて試験管内で
無細胞タンパク質合成法の研究が盛んに行われている
（特開平６−９８７９０、特開平６−２２５７８３、特
開平７−１９４、特開平９−２９１、特開平７−１４７
９９２）。この方法には、リボソームの原料として、大
腸菌、胚芽、家兎網状赤血球などが用いられてきた。
【０００３】これら無細胞タンパク質合成系に使用する
無細胞タンパク質合成用細胞抽出液や翻訳鋳型を除いた
他の合成基質やエネルギー源及び、各種イオン等、翻訳
反応に不可欠、あるいは同反応効率を高める化学物質を
含む無細胞タンパク質合成反応液は常温では不安定であ
り、−８０度摂氏以下の超低温でのみ安定な保存が可能
であった。
無細胞タンパク質合成用細胞抽出液や翻訳鋳型を除いた
他の合成基質やエネルギー源及び、各種イオン等、翻訳
反応に不可欠、あるいは同反応効率を高める化学物質を
含む無細胞タンパク質合成反応液は常温では不安定であ
り、−８０度摂氏以下の超低温でのみ安定な保存が可能
であった。
【０００４】無細胞タンパク質合成系は、ペプチド合成
反応速度と翻訳反応の正確性において生細胞に匹敵する
性能を保持し、かつ目的とするタンパク質を複雑な精製
工程を実施することなく得ることができる有用な方法で
ある。そのため、該合成系をより有用に産業上に適用す
るため、合成効率の向上に関するいくつかの発明が開示
されてきた。しかし、産業上の有用性向上のためには、
合成効率のみならず、合成系に使用する各種の物質を安
定に高品質を保持して供給することが必要である。
反応速度と翻訳反応の正確性において生細胞に匹敵する
性能を保持し、かつ目的とするタンパク質を複雑な精製
工程を実施することなく得ることができる有用な方法で
ある。そのため、該合成系をより有用に産業上に適用す
るため、合成効率の向上に関するいくつかの発明が開示
されてきた。しかし、産業上の有用性向上のためには、
合成効率のみならず、合成系に使用する各種の物質を安
定に高品質を保持して供給することが必要である。
【０００５】
【解決しようとする課題】本発明の目的の一は、無細胞
タンパク質合成系に必要な、無細胞タンパク質合成用細
胞抽出物、翻訳鋳型を除いた他の合成基質、エネルギー
源及び、各種イオン等、翻訳反応に不可欠、あるいは同
反応効率を高める化学物質を含む無細胞タンパク質合成
用細胞抽出物含有製剤を、常温下にあっても、安定であ
り、該製剤の生物学的機能を維持可能にする手段を提供
することである。また、本発明の目的の別の一は、無細
胞タンパク質合成用細胞抽出物含有製剤を含むキットを
安定に保存、供給することによって、無細胞タンパク質
合成の作業工程を簡便化する手段を提供することであ
る。
タンパク質合成系に必要な、無細胞タンパク質合成用細
胞抽出物、翻訳鋳型を除いた他の合成基質、エネルギー
源及び、各種イオン等、翻訳反応に不可欠、あるいは同
反応効率を高める化学物質を含む無細胞タンパク質合成
用細胞抽出物含有製剤を、常温下にあっても、安定であ
り、該製剤の生物学的機能を維持可能にする手段を提供
することである。また、本発明の目的の別の一は、無細
胞タンパク質合成用細胞抽出物含有製剤を含むキットを
安定に保存、供給することによって、無細胞タンパク質
合成の作業工程を簡便化する手段を提供することであ
る。
【０００６】本発明者等は、上記課題を解決すべく検討
を行なった結果、その手段の一として、調製した無細胞
タンパク質合成用細胞抽出液、または無細胞タンパク質
合成用細胞抽出物と無細胞タンパク質合成反応系に関与
する物質に対して、凍結乾燥等の処理を導入し、乾燥製
剤とすることにより、本発明を完成するに至った。
を行なった結果、その手段の一として、調製した無細胞
タンパク質合成用細胞抽出液、または無細胞タンパク質
合成用細胞抽出物と無細胞タンパク質合成反応系に関与
する物質に対して、凍結乾燥等の処理を導入し、乾燥製
剤とすることにより、本発明を完成するに至った。
【０００７】また、本発明の別の手段の一は、原料であ
る無細胞タンパク質合成用細胞の自己のタンパク質合成
反応の阻害に関与する系を排除することにより、本発明
を完成するに至った。
る無細胞タンパク質合成用細胞の自己のタンパク質合成
反応の阻害に関与する系を排除することにより、本発明
を完成するに至った。
【０００８】本発明の一手段である、原料である無細胞
タンパク質合成用細胞の自己のタンパク質合成反応の阻
害に関与する系を排除することとは、原料細胞自身が含
有する又は保持する自己タンパク質の合成を制御する手
段を除くことを意味する。特に、本発明者が見出したこ
の関与する系を排除することとは、リボソームに作用し
てその機能を抑制する物質の排除を意味する。
タンパク質合成用細胞の自己のタンパク質合成反応の阻
害に関与する系を排除することとは、原料細胞自身が含
有する又は保持する自己タンパク質の合成を制御する手
段を除くことを意味する。特に、本発明者が見出したこ
の関与する系を排除することとは、リボソームに作用し
てその機能を抑制する物質の排除を意味する。
【０００９】原料細胞自身が含有する又は保持するタン
パク質合成機能を抑制する物質とは、例えば種子の胚乳
に大量に局在することが知られている、リボソ−ムの機
能を抑制するトリチン（Ｍａｓｓｉａｈ，Ａ．Ｊ．，
ａｎｄ Ｈａｒｔｅｌｙ，Ｍ．Ｒ．（１９９５）Ｐｌａ
ｎｔａ，１９７，６３３−６４０）、チオニンとよばれ
るシステインを多く含むタンパク質（Ｂｒｕｍｍｅｒ，
Ｊ．， Ｔｈｏｌｅ，Ｈ． ａｎｄ Ｋｌｏｐｐｓｔｅ
ｃｈ，Ｋ．（１９９４）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，
２１９，４２５−４３３）、リボヌクレアーゼ（Ｍａｔ
ｓｕｓｈｉｔａＳ．，Ｍｅｍ．Ｒｅｓ．Ｉｎｓｔ．Ｆｏ
ｏｄ Ｓｃｉ．Ｋｙｏｔｏ Ｕｎｉｖ．，Ｎｏ．１９，
１〜）等である。
パク質合成機能を抑制する物質とは、例えば種子の胚乳
に大量に局在することが知られている、リボソ−ムの機
能を抑制するトリチン（Ｍａｓｓｉａｈ，Ａ．Ｊ．，
ａｎｄ Ｈａｒｔｅｌｙ，Ｍ．Ｒ．（１９９５）Ｐｌａ
ｎｔａ，１９７，６３３−６４０）、チオニンとよばれ
るシステインを多く含むタンパク質（Ｂｒｕｍｍｅｒ，
Ｊ．， Ｔｈｏｌｅ，Ｈ． ａｎｄ Ｋｌｏｐｐｓｔｅ
ｃｈ，Ｋ．（１９９４）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，
２１９，４２５−４３３）、リボヌクレアーゼ（Ｍａｔ
ｓｕｓｈｉｔａＳ．，Ｍｅｍ．Ｒｅｓ．Ｉｎｓｔ．Ｆｏ
ｏｄ Ｓｃｉ．Ｋｙｏｔｏ Ｕｎｉｖ．，Ｎｏ．１９，
１〜）等である。
【００１０】胚芽の単離段階で混入する、胚乳局在性の
胚芽無タンパク質合成抑制（阻害）タンパク質の一群、
たとえば、トリチン、チオニン、リボヌクレアーゼ等を
完全に胚芽試料から排除することによって、タンパク質
合成活性の抑制を解除することができる。
胚芽無タンパク質合成抑制（阻害）タンパク質の一群、
たとえば、トリチン、チオニン、リボヌクレアーゼ等を
完全に胚芽試料から排除することによって、タンパク質
合成活性の抑制を解除することができる。
【００１１】つまり本発明の手段の一は、無細胞タンパ
ク質合成用の細胞・組織からの抽出液調製に際し、生体
組織や細胞の損傷時に発動する自己タンパク質合成反応
阻害機構、すなわち、生理的に備わった対病原自己防御
機構としての自己タンパク質合成反応破壊機構を除去す
る技術、破砕に伴って誘起されるタンパク質合成反応阻
害活性を中和する又は除去する技術によって、本発明の
手段の一を達成する。
ク質合成用の細胞・組織からの抽出液調製に際し、生体
組織や細胞の損傷時に発動する自己タンパク質合成反応
阻害機構、すなわち、生理的に備わった対病原自己防御
機構としての自己タンパク質合成反応破壊機構を除去す
る技術、破砕に伴って誘起されるタンパク質合成反応阻
害活性を中和する又は除去する技術によって、本発明の
手段の一を達成する。
【００１２】本発明の原料細胞は、無細胞タンパク質合
成系に汎用されている胚芽、大腸菌、および網状赤血球
やガン細胞等のほか、他の生物由来の無細胞タンパク質
合成用細胞にも基本的に適応可能である。好ましい、態
様としては、胚芽であり、コムギ・大麦・イネ・コーン
・ほうれん草等が例示される。
成系に汎用されている胚芽、大腸菌、および網状赤血球
やガン細胞等のほか、他の生物由来の無細胞タンパク質
合成用細胞にも基本的に適応可能である。好ましい、態
様としては、胚芽であり、コムギ・大麦・イネ・コーン
・ほうれん草等が例示される。
【００１３】これら原料細胞から、無細胞タンパク質合
成用細胞抽出物の調製は、既に既知の各種方法（Ｊｏｈ
ｎｓｔｏｎ，Ｆ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．（１９５７）Ｎａｔ
ｕｒｅ，１７９，１６０−１６１）と組合せておこなう
ことができる。本発明の手段の一である、自己タンパク
質の合成を制御する手段を除くための有用な手段は、界
面活性剤特に非イオン性の界面活性剤をもちいて原料細
胞を処理することである。非イオン性の界面活性剤であ
るかぎりは、広く利用ができるが、好適なものとして
は、ポリオキシエチレン誘導体である、ブリッジ（Ｂｒ
ｉｊ）、トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）、ノニデット（Ｎｏ
ｎｉｄｅｔ）Ｐ４０、ツイ−ン（Ｔｗｅｅｎ）等が例示
される。なかでも、ノニデット（Ｎｏｎｉｄｅｔ）Ｐ４
０が最適である。これらの非イオン性界面活性剤は、た
とえば０．５％の濃度で使用される。
成用細胞抽出物の調製は、既に既知の各種方法（Ｊｏｈ
ｎｓｔｏｎ，Ｆ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．（１９５７）Ｎａｔ
ｕｒｅ，１７９，１６０−１６１）と組合せておこなう
ことができる。本発明の手段の一である、自己タンパク
質の合成を制御する手段を除くための有用な手段は、界
面活性剤特に非イオン性の界面活性剤をもちいて原料細
胞を処理することである。非イオン性の界面活性剤であ
るかぎりは、広く利用ができるが、好適なものとして
は、ポリオキシエチレン誘導体である、ブリッジ（Ｂｒ
ｉｊ）、トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）、ノニデット（Ｎｏ
ｎｉｄｅｔ）Ｐ４０、ツイ−ン（Ｔｗｅｅｎ）等が例示
される。なかでも、ノニデット（Ｎｏｎｉｄｅｔ）Ｐ４
０が最適である。これらの非イオン性界面活性剤は、た
とえば０．５％の濃度で使用される。
【００１４】処理は、原料細胞を、例えばコムギ胚芽を
使った場合、既知の手段でミル・浮選・篩の工程によっ
て、胚芽抽出物を回収する。この胚芽抽出物に対して、
界面活性剤による洗浄を数回おこない、洗浄液が白濁し
なくなるまで、洗浄を行う。この処理は、超音波処理と
の組合せでおこなうことがより好ましく、より完全な効
果をうることができる。
使った場合、既知の手段でミル・浮選・篩の工程によっ
て、胚芽抽出物を回収する。この胚芽抽出物に対して、
界面活性剤による洗浄を数回おこない、洗浄液が白濁し
なくなるまで、洗浄を行う。この処理は、超音波処理と
の組合せでおこなうことがより好ましく、より完全な効
果をうることができる。
【００１５】本発明の別の手段は、このようにして調製
した無細胞タンパク質合成用細胞抽出物の製剤的安定化
手段を導入することである。従来、無細胞タンパク質合
成用細胞抽出物の保存方法は、前記のように−８０〜−
１９６度摂氏近辺であったことから、本発明製剤が室温
保存可能な技術を達成したことは驚くべきことである。
した無細胞タンパク質合成用細胞抽出物の製剤的安定化
手段を導入することである。従来、無細胞タンパク質合
成用細胞抽出物の保存方法は、前記のように−８０〜−
１９６度摂氏近辺であったことから、本発明製剤が室温
保存可能な技術を達成したことは驚くべきことである。
【００１６】無細胞タンパク質合成用細胞抽出物の安定
化の手段は、製剤を乾燥製剤特に凍結乾燥の手段により
製剤化をすることである。凍結乾燥は、自体公知の方法
を利用できるが、例えば液体窒素により急速に無細胞タ
ンパク質合成用細胞抽出物を凍結させる。乾燥は、例え
ば通来の凍結乾燥機を利用し３時間乾燥する。除水が完
成し、得られた粉末状製剤は、真空又は窒素ガス雰囲気
下で、封管され、製剤化がなされる。
化の手段は、製剤を乾燥製剤特に凍結乾燥の手段により
製剤化をすることである。凍結乾燥は、自体公知の方法
を利用できるが、例えば液体窒素により急速に無細胞タ
ンパク質合成用細胞抽出物を凍結させる。乾燥は、例え
ば通来の凍結乾燥機を利用し３時間乾燥する。除水が完
成し、得られた粉末状製剤は、真空又は窒素ガス雰囲気
下で、封管され、製剤化がなされる。
【００１７】前記製剤は、無論、前記本発明の手段が施
された無細胞タンパク質合成用細胞抽出物単独で製剤化
されてもよいが、所望により、無細胞タンパク質合成系
に不可欠な物質、例えば合成基質、アミノ酸、エネルギ
ー源等を選択して、添加後製剤化してもよい。
された無細胞タンパク質合成用細胞抽出物単独で製剤化
されてもよいが、所望により、無細胞タンパク質合成系
に不可欠な物質、例えば合成基質、アミノ酸、エネルギ
ー源等を選択して、添加後製剤化してもよい。
【００１８】製剤は、さらに所望により、無細胞タンパ
ク質合成系の反応効率を高める物質、例えば各種イオン
化合物、好ましくはカリウムイオン化合物、マグネシウ
ムイオン化合物等を添加することができる。
ク質合成系の反応効率を高める物質、例えば各種イオン
化合物、好ましくはカリウムイオン化合物、マグネシウ
ムイオン化合物等を添加することができる。
【００１９】製剤は、さらに、溶解性を高める物質例え
ば界面活性剤、前記リボソームの脱アデニン化を防御す
る物質等を、所望により添加することができる。
ば界面活性剤、前記リボソームの脱アデニン化を防御す
る物質等を、所望により添加することができる。
【００２０】製剤は、より好ましくは、無細胞タンパク
質合成にあたって、単に水を添加することのみによっ
て、反応の至適化が達成できる組成に調整されているこ
とであるが、これは例えば製品をキット化することによ
って、要時混合して用いてもよい。無論、キット化にあ
たっては、無細胞タンパク質合成用細胞抽出物単独、無
細胞タンパク質合成系に不可欠な物質、無細胞タンパク
質合成系の反応効率を高める物質、さらに反応の至適化
に適当な水溶液等を、選択してセット化できる。
質合成にあたって、単に水を添加することのみによっ
て、反応の至適化が達成できる組成に調整されているこ
とであるが、これは例えば製品をキット化することによ
って、要時混合して用いてもよい。無論、キット化にあ
たっては、無細胞タンパク質合成用細胞抽出物単独、無
細胞タンパク質合成系に不可欠な物質、無細胞タンパク
質合成系の反応効率を高める物質、さらに反応の至適化
に適当な水溶液等を、選択してセット化できる。
【００２１】以下、本発明をコムギ胚芽を使用した無細
胞タンパク質合成用細胞抽出製剤についての実施例によ
りさらに具体的に説明するが、下記の実施例は本発明に
ついての具体的認識を得る一助とみなすべきものであ
り、本発明の範囲は下記の実施例により何ら限定される
ものではない。
胞タンパク質合成用細胞抽出製剤についての実施例によ
りさらに具体的に説明するが、下記の実施例は本発明に
ついての具体的認識を得る一助とみなすべきものであ
り、本発明の範囲は下記の実施例により何ら限定される
ものではない。
【００２２】
【実施例１】コムギ胚芽抽出液の調製 ミル、浮選、篩いを用いる種子から無傷（発芽能を有す
る）の単離方法はＪｏｈｎｓｔｏｎらの方法（Ｊｏｈｎ
ｓｔｏｎ，Ｆ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．（１９５７）Ｎａｔｕ
ｒｅ，１７９，１６０−１６１）を改良して用いた。北
海道産のチホクコムギ種子（未消毒）を１分間に１００
ｇの割合でミル（Ｆｒｉｔｓｃｈ社製Ｒｏｔｏｒ Ｓｐ
ｅｅｄ Ｍｉｌｌ ｐｕｌｖｅｒｉｓｅｔｔｅ １４
型）に添加し、回転数８、０００ｒｐｍで種子を温和に
破砕した。これを再度６、０００ｒｐｍで破砕し、篩い
で粗胚芽画分（メッシュサイズ０．７１ｍｍ−１．００
ｍｍ）を得た後、四塩化炭素とシクロヘキサン混液（四
塩化炭素：シクロヘキサン＝２．５：１）を用いた浮選
によって、発芽能を有する胚芽を浮上画分から回収し、
室温乾燥によって有機溶媒を除去した。この胚芽画分に
混在する種皮等の不純物をポリエチレン板などの静電気
帯電体を用いて吸着除去した。さらに胚芽粒子を篩と静
電気帯電体を用いて、小粒（０．７１ｍｍ〜０．８５ｍ
ｍ）、中粒（０．８５ｍｍ〜１ｍｍ）、軽粒（０．８５
ｍｍ〜１ｍｍで且つ軽量）の３画分に分別した。小粒画
分が最も高いタンパク質合成活性を示した。軽粒は、種
子破砕時に胚芽に生じた小傷胚芽が浮選操作中に破壊が
進行したものであると推察される。次に、この試料から
コムギ胚乳成分を完全に除去するため、非イオン性界面
活性剤であるＮＰ４０の０．５％溶液に懸濁し、超音波
洗浄器を用いて、洗浄液が白濁しなくなるまで洗浄を繰
り返した。蒸留水の存在下に再度１回の超音波洗浄を行
い、コムギ胚芽を純化した。
る）の単離方法はＪｏｈｎｓｔｏｎらの方法（Ｊｏｈｎ
ｓｔｏｎ，Ｆ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．（１９５７）Ｎａｔｕ
ｒｅ，１７９，１６０−１６１）を改良して用いた。北
海道産のチホクコムギ種子（未消毒）を１分間に１００
ｇの割合でミル（Ｆｒｉｔｓｃｈ社製Ｒｏｔｏｒ Ｓｐ
ｅｅｄ Ｍｉｌｌ ｐｕｌｖｅｒｉｓｅｔｔｅ １４
型）に添加し、回転数８、０００ｒｐｍで種子を温和に
破砕した。これを再度６、０００ｒｐｍで破砕し、篩い
で粗胚芽画分（メッシュサイズ０．７１ｍｍ−１．００
ｍｍ）を得た後、四塩化炭素とシクロヘキサン混液（四
塩化炭素：シクロヘキサン＝２．５：１）を用いた浮選
によって、発芽能を有する胚芽を浮上画分から回収し、
室温乾燥によって有機溶媒を除去した。この胚芽画分に
混在する種皮等の不純物をポリエチレン板などの静電気
帯電体を用いて吸着除去した。さらに胚芽粒子を篩と静
電気帯電体を用いて、小粒（０．７１ｍｍ〜０．８５ｍ
ｍ）、中粒（０．８５ｍｍ〜１ｍｍ）、軽粒（０．８５
ｍｍ〜１ｍｍで且つ軽量）の３画分に分別した。小粒画
分が最も高いタンパク質合成活性を示した。軽粒は、種
子破砕時に胚芽に生じた小傷胚芽が浮選操作中に破壊が
進行したものであると推察される。次に、この試料から
コムギ胚乳成分を完全に除去するため、非イオン性界面
活性剤であるＮＰ４０の０．５％溶液に懸濁し、超音波
洗浄器を用いて、洗浄液が白濁しなくなるまで洗浄を繰
り返した。蒸留水の存在下に再度１回の超音波洗浄を行
い、コムギ胚芽を純化した。
【００２３】コムギ胚芽抽出液の調製は常法（Ｅｒｉｃ
ｋｓｏｎ，Ａ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｍｅｔ
ｈ． ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，９６，３８−５０）
に準じた。以下の操作は４度摂氏で行う。液体窒素で凍
結した純化コムギ胚芽を乳鉢中で粉砕し、得た粉体１ｇ
当たり、１ｍｌのＰａｔｔｅｒｓｏｎらの方法を一部改
変した抽出溶液（８０ｍＭ ＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ，ｐＨ
７．８、２００ｍＭ 酢酸カリウム、２ｍＭ 酢酸マグ
ネシウム、４ｍＭ 塩化カルシウム、８ｍＭ ジチオス
レイトール、各０．６ｍＭ Ｌ型アミノ酸２０種類、各
１μＭのタンパク質分解酵素阻害剤であるＦＵＴ、Ｅ−
６４、ＰＭＳＦを含む）を加えて、泡が発生しないよう
に注意しながら攪拌した。３０、０００ｇ、１５分間の
遠心によって得られる上清を胚芽抽出液として回収し、
あらかじめ溶液（４０ｍＭ ＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ，ｐＨ
７．８、１００ｍＭ 酢酸カリウム、５ｍＭ 酢酸マグ
ネシウム、４ｍＭ ジチオスレイトール）で平衡化して
おいたセファデックスＧ−２５カラム（Ｃｏａｒｓｅ）
でゲル濾過を行った。試料の濃度を、１７０〜２５０Ａ
２６０ｎｍ（Ａ２６０／Ａ２８０＝１．５）に調製し
た。
ｋｓｏｎ，Ａ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｍｅｔ
ｈ． ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，９６，３８−５０）
に準じた。以下の操作は４度摂氏で行う。液体窒素で凍
結した純化コムギ胚芽を乳鉢中で粉砕し、得た粉体１ｇ
当たり、１ｍｌのＰａｔｔｅｒｓｏｎらの方法を一部改
変した抽出溶液（８０ｍＭ ＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ，ｐＨ
７．８、２００ｍＭ 酢酸カリウム、２ｍＭ 酢酸マグ
ネシウム、４ｍＭ 塩化カルシウム、８ｍＭ ジチオス
レイトール、各０．６ｍＭ Ｌ型アミノ酸２０種類、各
１μＭのタンパク質分解酵素阻害剤であるＦＵＴ、Ｅ−
６４、ＰＭＳＦを含む）を加えて、泡が発生しないよう
に注意しながら攪拌した。３０、０００ｇ、１５分間の
遠心によって得られる上清を胚芽抽出液として回収し、
あらかじめ溶液（４０ｍＭ ＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ，ｐＨ
７．８、１００ｍＭ 酢酸カリウム、５ｍＭ 酢酸マグ
ネシウム、４ｍＭ ジチオスレイトール）で平衡化して
おいたセファデックスＧ−２５カラム（Ｃｏａｒｓｅ）
でゲル濾過を行った。試料の濃度を、１７０〜２５０Ａ
２６０ｎｍ（Ａ２６０／Ａ２８０＝１．５）に調製し
た。
【００２４】
【実施例２】コムギ胚芽抽出物の製剤化 実施例１に記載した方法で得たコムギ胚芽抽出液を液体
窒素で凍結後、通常の凍結乾燥機（Ｌａｂｃｏｎｃ Ｆ
ｒｅｅｚｅ Ｄｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ Ｆｒｅｅｚｏｎｅ
４．５）を用いて３時間の運転で除水した。調製した
粉末状の試料は、その成分が化学変化しないように２種
の方法、真空及び窒素ガス充填下に封管して保存した。
窒素で凍結後、通常の凍結乾燥機（Ｌａｂｃｏｎｃ Ｆ
ｒｅｅｚｅ Ｄｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ Ｆｒｅｅｚｏｎｅ
４．５）を用いて３時間の運転で除水した。調製した
粉末状の試料は、その成分が化学変化しないように２種
の方法、真空及び窒素ガス充填下に封管して保存した。
【００２５】
【実施例３】タンパク質合成効果の確認 上記の方法で凍結乾燥し製剤化した本発明からなるコム
ギ胚芽抽出物含有製剤を−８０度摂氏で２ヶ月間保存し
たものと、凍結乾燥していないコムギ胚芽抽出液を液体
窒素中（−１９６度摂氏）で２ヶ月間保存したものと
の、タンパク質合成活性の比較を行った。
ギ胚芽抽出物含有製剤を−８０度摂氏で２ヶ月間保存し
たものと、凍結乾燥していないコムギ胚芽抽出液を液体
窒素中（−１９６度摂氏）で２ヶ月間保存したものと
の、タンパク質合成活性の比較を行った。
【００２６】各コムギ胚芽抽出物に、Ｅｒｉｃｋｓｏｎ
らの方法に準じた成分組成である、３０ｍＭ ＨＥＰＥ
Ｓ−ＫＯＨ，ｐＨ７．６、９５ｍＭ 酢酸カリウム、
２．６５ｍＭ 酢酸マグネシウム、２．８５ｍＭ ジチ
オスレイトール、０．５ｍｇ／ｍｌ クレアチンキナー
ゼ、１．２ｍＭ アデノシン−三−リン酸（ＡＴＰ）、
０．２５ｍＭ グアノシン−三−リン酸（ＧＴＰ）、
１６ｍＭ クレアチンリン酸、０．３８０ｍＭ スペル
ミジン、２０種類のＬ型アミノ酸（各０．３ｍＭ）を加
えた。さらに、１、０００ｕｎｉｔｓ／ｍｌ リボヌク
レアーゼ阻害剤（ＲＮａｓｉｎ）とＮＰ−４０（終濃度
０．０５％）を添加した後、既に発明者が文献報告した
方法（Ｅｎｄｏ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｊ．
Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２５，２２１−２３０）で調製した
ＣＡＰ付きジヒドロ葉酸還元酵素（ｄｉｈｙｄｒｏｆｏ
ｌａｔｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ） ｍＲＮＡ（８０μｇ
／ｍｌ反応容量）と５０μＣｉ（ｍｌ反応容量当たり）
の［Ｕ−１４Ｃ］−ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ）（１６
６ｍＣｉ／ｍｍｏｌ）を添加し、タンパク質合成活性を
［Ｕ−１４Ｃ］−ロイシンのタンパク質への取込を指標
に測定した。反応は摂氏２０〜３０度で行った。
らの方法に準じた成分組成である、３０ｍＭ ＨＥＰＥ
Ｓ−ＫＯＨ，ｐＨ７．６、９５ｍＭ 酢酸カリウム、
２．６５ｍＭ 酢酸マグネシウム、２．８５ｍＭ ジチ
オスレイトール、０．５ｍｇ／ｍｌ クレアチンキナー
ゼ、１．２ｍＭ アデノシン−三−リン酸（ＡＴＰ）、
０．２５ｍＭ グアノシン−三−リン酸（ＧＴＰ）、
１６ｍＭ クレアチンリン酸、０．３８０ｍＭ スペル
ミジン、２０種類のＬ型アミノ酸（各０．３ｍＭ）を加
えた。さらに、１、０００ｕｎｉｔｓ／ｍｌ リボヌク
レアーゼ阻害剤（ＲＮａｓｉｎ）とＮＰ−４０（終濃度
０．０５％）を添加した後、既に発明者が文献報告した
方法（Ｅｎｄｏ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｊ．
Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２５，２２１−２３０）で調製した
ＣＡＰ付きジヒドロ葉酸還元酵素（ｄｉｈｙｄｒｏｆｏ
ｌａｔｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ） ｍＲＮＡ（８０μｇ
／ｍｌ反応容量）と５０μＣｉ（ｍｌ反応容量当たり）
の［Ｕ−１４Ｃ］−ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ）（１６
６ｍＣｉ／ｍｍｏｌ）を添加し、タンパク質合成活性を
［Ｕ−１４Ｃ］−ロイシンのタンパク質への取込を指標
に測定した。反応は摂氏２０〜３０度で行った。
【００２７】図１に示したように、凍結乾燥したコムギ
抽出物含有製剤（■−−■）を室温−８０度摂氏で２ヶ
月間保存した後においても、従来の液体窒素保存（□−
−□）と同等なタンパク質合成活性を保持していた。ま
た、凍結乾燥後における保存温度について検討したとこ
ろ、保存期間１ヶ月後におけるタンパク質合成活性で比
較した場合、−８０度摂氏（●−−●）が最も安定であ
ったが、４度摂氏（■−−■）または室温（□−−□）
での保存でも、タンパク質合成活性は十分に保持されて
いた（図２）。
抽出物含有製剤（■−−■）を室温−８０度摂氏で２ヶ
月間保存した後においても、従来の液体窒素保存（□−
−□）と同等なタンパク質合成活性を保持していた。ま
た、凍結乾燥後における保存温度について検討したとこ
ろ、保存期間１ヶ月後におけるタンパク質合成活性で比
較した場合、−８０度摂氏（●−−●）が最も安定であ
ったが、４度摂氏（■−−■）または室温（□−−□）
での保存でも、タンパク質合成活性は十分に保持されて
いた（図２）。
【００２８】すなわち、本発明の手段を適用して、無細
胞タンパク質合成用細胞抽出物を、従来の保存温度より
高い温度である−８０度摂氏〜室温で、高品質を維持し
ながら保存および供給することが可能である。
胞タンパク質合成用細胞抽出物を、従来の保存温度より
高い温度である−８０度摂氏〜室温で、高品質を維持し
ながら保存および供給することが可能である。
【００２９】
【実施例４】無細胞タンパク質合成コムギ胚芽抽出物含
有製剤の調製 反応液は、容量の２０〜６０％の、参考例１に記載の方
法で調製したコムギ胚芽抽出液を含み、上記Ｅｒｉｃｋ
ｓｏｎらの方法に準じた以下の成分組成である、３０ｍ
Ｍ ＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ，ｐＨ７．６、９５ｍＭ 酢酸
カリウム、２．６５ｍＭ 酢酸マグネシウム、２．８５
ｍＭ ジチオスレイトール、０．５ｍｇ／ｍｌ クレア
チンキナーゼ、１．２ｍＭ ＡＴＰ、 ０．２５ｍＭ
ＧＴＰ、１６ｍＭ クレアチンリン酸、０．３８０ｍＭ
スペルミジン、２０種類のＬ型アミノ酸（各０．３ｍ
Ｍ）を添加した後、液体窒素で凍結し、通常の凍結乾燥
機で除水した。調製した粉末状の試料は、その成分が化
学変化しないように真空または窒素ガス充填下に封管し
て保存した。
有製剤の調製 反応液は、容量の２０〜６０％の、参考例１に記載の方
法で調製したコムギ胚芽抽出液を含み、上記Ｅｒｉｃｋ
ｓｏｎらの方法に準じた以下の成分組成である、３０ｍ
Ｍ ＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ，ｐＨ７．６、９５ｍＭ 酢酸
カリウム、２．６５ｍＭ 酢酸マグネシウム、２．８５
ｍＭ ジチオスレイトール、０．５ｍｇ／ｍｌ クレア
チンキナーゼ、１．２ｍＭ ＡＴＰ、 ０．２５ｍＭ
ＧＴＰ、１６ｍＭ クレアチンリン酸、０．３８０ｍＭ
スペルミジン、２０種類のＬ型アミノ酸（各０．３ｍ
Ｍ）を添加した後、液体窒素で凍結し、通常の凍結乾燥
機で除水した。調製した粉末状の試料は、その成分が化
学変化しないように真空または窒素ガス充填下に封管し
て保存した。
【００３０】
【実施例５】タンパク質合成活性の測定 本発明からなる実施例４の方法で調製した無細胞タンパ
ク質合成コムギ胚芽抽出物含有製剤を−８０度摂氏で２
ヶ月間保存したものと、同期間液体窒素中（−１９６度
摂氏）に保存したコムギ胚芽抽出液に実施例４に記した
Ｅｒｉｃｋｓｏｎらの方法に準じた成分組成の物質を添
加した無細胞タンパク質合成コムギ胚芽抽出液との、タ
ンパク質合成活性を比較した。各溶液に、さらに１、０
００ｕｎｉｔｓ／ｍｌ リボヌクレアーゼ阻害剤（ＲＮ
ａｓｉｎ）とＮＰ−４０（終濃度０．０５％）を添加し
た後、タンパク質合成活性の測定を実施例３に記載した
方法で行った。図３に示したように、本発明の凍結乾燥
した無細胞タンパク質合成コムギ胚芽抽出物含有製剤
（□−−□）は、従来法で調製し液体窒素保存（■−−
■）したものと同等なタンパク質合成活性を保持してい
た。
ク質合成コムギ胚芽抽出物含有製剤を−８０度摂氏で２
ヶ月間保存したものと、同期間液体窒素中（−１９６度
摂氏）に保存したコムギ胚芽抽出液に実施例４に記した
Ｅｒｉｃｋｓｏｎらの方法に準じた成分組成の物質を添
加した無細胞タンパク質合成コムギ胚芽抽出液との、タ
ンパク質合成活性を比較した。各溶液に、さらに１、０
００ｕｎｉｔｓ／ｍｌ リボヌクレアーゼ阻害剤（ＲＮ
ａｓｉｎ）とＮＰ−４０（終濃度０．０５％）を添加し
た後、タンパク質合成活性の測定を実施例３に記載した
方法で行った。図３に示したように、本発明の凍結乾燥
した無細胞タンパク質合成コムギ胚芽抽出物含有製剤
（□−−□）は、従来法で調製し液体窒素保存（■−−
■）したものと同等なタンパク質合成活性を保持してい
た。
【００３１】すなわち、本発明の手段を適用することに
より、無細胞タンパク質合成用細胞抽出物を含む製剤
を、従来の保存温度より高い温度である−８０度摂氏〜
室温で、高品質を維持しながら安定に保存、供給するこ
とができ、さらに無細胞タンパク質合成系の作業工程を
簡便化する方法を提供することが可能である。
より、無細胞タンパク質合成用細胞抽出物を含む製剤
を、従来の保存温度より高い温度である−８０度摂氏〜
室温で、高品質を維持しながら安定に保存、供給するこ
とができ、さらに無細胞タンパク質合成系の作業工程を
簡便化する方法を提供することが可能である。
【００３２】
【発明の効果】本発明からなる製剤は、（１）無細胞タ
ンパク質合成用細胞抽出液の保存に超低温槽やドライア
イス等を用いる低温輸送の必要無しに、長期にわたって
高品質管理が可能となる。（２）本発明からなる無細胞
タンパク質合成用細胞抽出物とアミノ酸やＡＴＰ等の合
成基質、及び各種イオン等、翻訳反応に不可欠、あるい
は同反応効率を高める化学物質をあらかじめ混合して調
製した無細胞タンパク質合成用細胞抽出物含有製剤をそ
のまま凍結乾燥することによって、タンパク質合成の高
活性を有したままの形で容易に保存・輸送が可能であ
る。本発明の無細胞タンパク質合成用細胞抽出物含有製
剤質は、生体外でのタンパク質合成に当たって反応混液
の調製を必要とせず、基本的には水と、目的とする翻訳
鋳型（ｍＲＮＡ）を添加するだけで、遺伝子産物の同定
やその多量合成やその翻訳機構の解析が手軽にできる手
段を提供するものである。
ンパク質合成用細胞抽出液の保存に超低温槽やドライア
イス等を用いる低温輸送の必要無しに、長期にわたって
高品質管理が可能となる。（２）本発明からなる無細胞
タンパク質合成用細胞抽出物とアミノ酸やＡＴＰ等の合
成基質、及び各種イオン等、翻訳反応に不可欠、あるい
は同反応効率を高める化学物質をあらかじめ混合して調
製した無細胞タンパク質合成用細胞抽出物含有製剤をそ
のまま凍結乾燥することによって、タンパク質合成の高
活性を有したままの形で容易に保存・輸送が可能であ
る。本発明の無細胞タンパク質合成用細胞抽出物含有製
剤質は、生体外でのタンパク質合成に当たって反応混液
の調製を必要とせず、基本的には水と、目的とする翻訳
鋳型（ｍＲＮＡ）を添加するだけで、遺伝子産物の同定
やその多量合成やその翻訳機構の解析が手軽にできる手
段を提供するものである。
【００３３】本発明により、無細胞タンパク質合成系に
必要な、無細胞タンパク質合成用細胞抽出物、翻訳鋳型
を除いた他の合成基質やエネルギー源、及び各種イオン
等、の翻訳反応に不可欠、あるいは同反応効率を高める
化学物質を含む、無細胞タンパク質合成反応系に関与す
る物質のように常温では不安定な物質を、安定に保存お
よび供給することが可能になり、これらの物質を長期に
わたって高品質管理することが可能になった。また、本
発明の凍結乾燥した無細胞タンパク質合成用細胞抽出物
を含む製剤を提供することにより、無細胞タンパク質合
成系の取り扱いが従来より容易になり、さらに反応液を
調製する必要がないため、作業工程が短縮され、該タン
パク質合成系の産業上の有用性が向上した。
必要な、無細胞タンパク質合成用細胞抽出物、翻訳鋳型
を除いた他の合成基質やエネルギー源、及び各種イオン
等、の翻訳反応に不可欠、あるいは同反応効率を高める
化学物質を含む、無細胞タンパク質合成反応系に関与す
る物質のように常温では不安定な物質を、安定に保存お
よび供給することが可能になり、これらの物質を長期に
わたって高品質管理することが可能になった。また、本
発明の凍結乾燥した無細胞タンパク質合成用細胞抽出物
を含む製剤を提供することにより、無細胞タンパク質合
成系の取り扱いが従来より容易になり、さらに反応液を
調製する必要がないため、作業工程が短縮され、該タン
パク質合成系の産業上の有用性が向上した。
【図面の簡単な説明】
【図１】 凍結乾燥したコムギ胚芽抽出物を−８０度摂
氏で２ヶ月間保存したものと、凍結乾燥していないコム
ギ胚芽抽出液を液体窒素中で２ヶ月間保存したものと
の、タンパク質合成活性を比較した図である。液体窒素
中に従来法で２ヶ月間保存した抽出液（□−−□）、凍
結乾燥後、同期間保存したもの（■−−■）。縦軸はタ
ンパク質に取り込まれた放射線（ＤＰＭ／５μｌ当たり
の反応液）を、横軸は２６度摂氏における反応時間を示
す。
氏で２ヶ月間保存したものと、凍結乾燥していないコム
ギ胚芽抽出液を液体窒素中で２ヶ月間保存したものと
の、タンパク質合成活性を比較した図である。液体窒素
中に従来法で２ヶ月間保存した抽出液（□−−□）、凍
結乾燥後、同期間保存したもの（■−−■）。縦軸はタ
ンパク質に取り込まれた放射線（ＤＰＭ／５μｌ当たり
の反応液）を、横軸は２６度摂氏における反応時間を示
す。
【図２】 凍結乾燥抽出液の保存温度のタンパク質合成
活性に与える影響を示した図である。室温１ヶ月間（□
−−□）、４度摂氏で同期間（■−−■）、−８０度摂
氏で同期間（●−−●）。
活性に与える影響を示した図である。室温１ヶ月間（□
−−□）、４度摂氏で同期間（■−−■）、−８０度摂
氏で同期間（●−−●）。
【図３】 凍結乾燥したコムギ無細胞タンパク質合成溶
液のバッチ反応系におけるタンパク質合成活性を示した
図である。液体窒素中に従来法で２ヶ月間保存した抽出
液（■−−■）、凍結乾燥後、同期間保存したもの（□
−−□）。
液のバッチ反応系におけるタンパク質合成活性を示した
図である。液体窒素中に従来法で２ヶ月間保存した抽出
液（■−−■）、凍結乾燥後、同期間保存したもの（□
−−□）。
Claims (20)
- 【請求項１】生物体から、自己のタンパク質合成反応の
阻害に関与する系を排除することによって調製した無細
胞タンパク質合成用細胞抽出物を含む物質を、室温保存
可能であって、該細胞抽出物の生物学的機能を維持した
状態の製剤に調製されたことを特徴とする無細胞タンパ
ク質合成用細胞抽出物含有製剤。 - 【請求項２】製剤が、乾燥製剤である請求項１に記載の
無細胞タンパク質合成用細胞抽出物含有製剤。 - 【請求項３】製剤化が、凍結乾燥処理によっておこなわ
れる請求項２に記載の無細胞タンパク質合成用細胞抽出
物含有製剤。 - 【請求項４】細胞抽出物を利用した無細胞タンパク質合
成系の合成系反応に不可欠な物質を添加、又は合成系反
応に不可欠な物質と合成系反応の効率を高める物質を添
加して製剤化をおこなうことを特徴とする請求項１〜３
のいずれかに記載の無細胞タンパク質合成用細胞抽出物
含有製剤。 - 【請求項５】合成系反応に不可欠な物質が、合成基質お
よびエネルギー源である請求項４に記載の無細胞タンパ
ク質合成用細胞抽出物含有製剤。 - 【請求項６】合成系反応の効率を高める物質が、カリウ
ムイオン化合物、マグネシウムイオン化合物である請求
項４に記載の無細胞タンパク質合成用細胞抽出物含有製
剤。 - 【請求項７】要時、水溶液への溶解性を容易化する物質
を添加した請求項４〜６のいずれかに記載の無細胞タン
パク質合成用細胞抽出物含有製剤。 - 【請求項８】生物体が、胚芽である請求項１〜７のいず
れかに記載の無細胞タンパク質合成用細胞抽出物含有製
剤。 - 【請求項９】自己のタンパク質合成反応の阻害に関与す
る系を排除する方法が、非イオン性界面活性剤を用い
て、胚芽抽出物を処理することを特徴とする請求項１〜
７のいずれかに記載の無細胞タンパク質合成用細胞抽出
物含有製剤。 - 【請求項１０】非イオン性界面活性剤を用いて、胚芽抽
出物を処理する方法が、超音波処理により、洗浄液が白
濁しなくなるまでおこなうことを特徴とする請求項９に
記載の無細胞タンパク質合成用細胞抽出物含有製剤。 - 【請求項１１】胚芽が、コムギ、大麦、いね、コーン、
およびほうれん草から選択される請求項８〜１０のいず
れかに記載の無細胞タンパク質合成用細胞抽出物含有製
剤。 - 【請求項１２】自己のタンパク質合成反応の阻害に関与
する系が、リボソーム不活性化タンパク質である請求項
１〜１１のいずれかに記載の無細胞タンパク質合成用細
胞抽出物含有製剤。 - 【請求項１３】リボソーム不活性化タンパク質が、トリ
チンである請求項１２に記載の無細胞タンパク質合成用
細胞抽出物含有製剤。 - 【請求項１４】自己のタンパク質合成反応の阻害に関与
する系を排除することが、リボソームの脱アデニン化を
制御することである請求項１〜１１のいずれかに記載の
無細胞タンパク質合成用細胞抽出物含有製剤。 - 【請求項１５】自己のタンパク質合成反応の阻害に関与
する系を排除するために、リボソームの脱アデニン化を
制御する物質を添加する請求項１４に記載の無細胞タン
パク質合成用細胞抽出物含有製剤。 - 【請求項１６】非イオン性界面活性剤と、リボソームの
脱アデニン化を制御する物質を添加することによって胚
芽を処理する請求項９〜１１のいずれかに記載の無細胞
タンパク質合成用細胞抽出物含有製剤。 - 【請求項１７】請求項１〜１６のいずれかに記載の無細
胞タンパク質合成用細胞抽出物含有製剤を調製すること
からなる無細胞タンパク質合成用細胞抽出物の保存方
法。 - 【請求項１８】請求項１〜１６のいずれかに記載の無細
胞タンパク質合成用細胞抽出物含有製剤を含む無細胞タ
ンパク質合成反応用キット。 - 【請求項１９】請求項１〜１６のいずれかに記載の無細
胞タンパク質合成用細胞抽出物含有製剤に水を添加する
ことによって合成反応系の反応液組成を至適化できるよ
うに、翻訳鋳型を除いて調製されることを特徴とする鋳
型依存的に作動する無細胞タンパク質合成反応用キッ
ト。 - 【請求項２０】水、合成基質、エネルギ−源、反応効率
を高める物質から選ばれる化合物を、要時追加添加可能
にセットされた請求項１８に記載の無細胞タンパク質合
成反応用キット。
Priority Applications (11)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11130393A JP2000316594A (ja) | 1999-05-11 | 1999-05-11 | 無細胞タンパク質合成用細胞抽出物含有製剤、及び無細胞タンパク質合成反応用キット |
| AU49301/99A AU765632B2 (en) | 1999-05-11 | 1999-07-29 | Preparation containing cell extract for synthesizing cell-free protein and means for synthesizing cell-free protein |
| AT99933168T ATE424467T1 (de) | 1999-05-11 | 1999-07-29 | Zubereitung, die einen zellextrakt zur herstellung eines zellfreien proteins enthalten und vorrichtung zur herstellung eines zellfreien proteins |
| EP99933168A EP1176210B1 (en) | 1999-05-11 | 1999-07-29 | Preparation containing cell extract for synthesizing cell-free protein and means for synthesizing cell-free protein |
| PCT/JP1999/004088 WO2000068412A1 (fr) | 1999-05-11 | 1999-07-29 | Preparation contenant un extrait de cellules pour la synthese d'une proteine exempte de cellules, et moyen de synthese d'une proteine exempte de cellules |
| KR1020017014336A KR100546009B1 (ko) | 1999-05-11 | 1999-07-29 | 무세포 단백질 합성용 세포추출물 함유제제 및 무세포단백질 합성수단 |
| US10/019,995 US6905843B1 (en) | 1999-05-11 | 1999-07-29 | Preparation containing cell extracts for synthesizing cell-free protein and means for synthesizing cell-free protein |
| EA200101189A EA006162B1 (ru) | 1999-05-11 | 1999-07-29 | Препарат для бесклеточного синтеза белка, способ синтеза белка с использованием данного препарата и устройство для его осуществления |
| CA002373057A CA2373057A1 (en) | 1999-05-11 | 1999-07-29 | Preparation containing cell extracts for cell-free protein synthesis and means for synthesizing protein using the preparation |
| DE69940525T DE69940525D1 (de) | 1999-05-11 | 1999-07-29 | Zubereitung, die einen zellextrakt zur herstellung eines zellfreien proteins enthalten und vorrichtung zur herstellung eines zellfreien proteins |
| US11/089,652 US7235382B2 (en) | 1999-05-11 | 2005-03-25 | Preparation containing cell extracts for cell-free protein synthesis and means for synthesizing protein using the preparation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11130393A JP2000316594A (ja) | 1999-05-11 | 1999-05-11 | 無細胞タンパク質合成用細胞抽出物含有製剤、及び無細胞タンパク質合成反応用キット |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2005203081A Division JP2005348739A (ja) | 2005-07-12 | 2005-07-12 | 無細胞タンパク質合成用細胞抽出物含有製剤、及び無細胞タンパク質合成反応用キット |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000316594A true JP2000316594A (ja) | 2000-11-21 |
| JP2000316594A5 JP2000316594A5 (ja) | 2005-06-23 |
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ID=15033249
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|---|---|---|---|
| JP11130393A Pending JP2000316594A (ja) | 1999-05-11 | 1999-05-11 | 無細胞タンパク質合成用細胞抽出物含有製剤、及び無細胞タンパク質合成反応用キット |
Country Status (1)
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|---|---|
| JP (1) | JP2000316594A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005015212A1 (en) * | 2003-08-07 | 2005-02-17 | Cellfree Sciences Co., Ltd. | Reagent for producing a protein chip |
| JP2008514240A (ja) * | 2004-10-01 | 2008-05-08 | インヴィトロジェン コーポレーション | 生体分子のインビトロ合成用の供給バッファー、系、及び方法 |
| JP2009526546A (ja) * | 2006-02-17 | 2009-07-23 | ハンソン バイオテック カンパニー リミテッド | 無細胞タンパク質合成用細胞抽出物の調製及びその用途 |
-
1999
- 1999-05-11 JP JP11130393A patent/JP2000316594A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005015212A1 (en) * | 2003-08-07 | 2005-02-17 | Cellfree Sciences Co., Ltd. | Reagent for producing a protein chip |
| JP2007528718A (ja) * | 2003-08-07 | 2007-10-18 | 株式会社セルフリーサイエンス | タンパク質チップ作製用試薬 |
| JP2008514240A (ja) * | 2004-10-01 | 2008-05-08 | インヴィトロジェン コーポレーション | 生体分子のインビトロ合成用の供給バッファー、系、及び方法 |
| JP2009526546A (ja) * | 2006-02-17 | 2009-07-23 | ハンソン バイオテック カンパニー リミテッド | 無細胞タンパク質合成用細胞抽出物の調製及びその用途 |
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