JP2000297291A - 香気成分、その製造法および用途 - Google Patents
香気成分、その製造法および用途Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 安全性の高い、かつ安価で生産性のよい香料
を提供する。 【解決手段】 メロン組織に微生物遺伝子導入して作出
したメロン毛状根の産生する香気成分、メロン組織に微
生物遺伝子を導入して毛状根を誘導し、誘導されたメロ
ン毛状根を培養して香気成分を産生させることを特徴と
する香気成分の製造法および該香気成分を含有してなる
ことを特徴とする香料。
を提供する。 【解決手段】 メロン組織に微生物遺伝子導入して作出
したメロン毛状根の産生する香気成分、メロン組織に微
生物遺伝子を導入して毛状根を誘導し、誘導されたメロ
ン毛状根を培養して香気成分を産生させることを特徴と
する香気成分の製造法および該香気成分を含有してなる
ことを特徴とする香料。
Description
【０００１】
【発明の属する技術野】本発明は香気成分、その製造法
および用途、さらに詳しくは、微生物による植物への遺
伝子導入を応用した、安全性の高い、かつ安価で生産性
のよい、香料として有用な香気成分、その製造法および
それを用いた、食品、化粧料、トイレタリー製品等、広
範囲の分野で使用できる香料に関する。
および用途、さらに詳しくは、微生物による植物への遺
伝子導入を応用した、安全性の高い、かつ安価で生産性
のよい、香料として有用な香気成分、その製造法および
それを用いた、食品、化粧料、トイレタリー製品等、広
範囲の分野で使用できる香料に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、食品、化粧料、トイレタリー製品
等で使用される香料には、高い安全性が要求されてお
り、例えば、食品では、長年安全に食用とされてきた天
然物に含有される物質を香料として使用する傾向が強く
なってきている。しかし、そのような物質を安価で、生
産性よく得ることは非常に困難であり、安全性の高い、
かつ安価で生産性のよい香料の開発が求められている。
等で使用される香料には、高い安全性が要求されてお
り、例えば、食品では、長年安全に食用とされてきた天
然物に含有される物質を香料として使用する傾向が強く
なってきている。しかし、そのような物質を安価で、生
産性よく得ることは非常に困難であり、安全性の高い、
かつ安価で生産性のよい香料の開発が求められている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、安全性の高
い、かつ安価で生産性のよい香料を提供することを目的
とする。
い、かつ安価で生産性のよい香料を提供することを目的
とする。
【０００４】
【課題を解決しようとする手段】本発明者らは、バイオ
テクノロジーを応用することにより、上記の目的が達成
できることを見出した。バイオテクノロジーは遺伝子工
学や細胞工学的技術の駆使によって基礎的生命化学や産
業分野における応用研究に大きく貢献している。その基
幹技術となる遺伝子操作は、有用な外来遺伝子を微生物
や動植物細胞に導入し、それら遺伝子の発現を制御する
ことによって、生命機構の解明や有用物質の多量生産を
可能としているばかりでなく、遺伝子治療のような、よ
り高度な医療技術への応用も試みられている。
テクノロジーを応用することにより、上記の目的が達成
できることを見出した。バイオテクノロジーは遺伝子工
学や細胞工学的技術の駆使によって基礎的生命化学や産
業分野における応用研究に大きく貢献している。その基
幹技術となる遺伝子操作は、有用な外来遺伝子を微生物
や動植物細胞に導入し、それら遺伝子の発現を制御する
ことによって、生命機構の解明や有用物質の多量生産を
可能としているばかりでなく、遺伝子治療のような、よ
り高度な医療技術への応用も試みられている。
【０００５】すなわち、本発明者らは、微生物遺伝子導
入によって作出したメロン毛状根がメロン果実特有の香
気成分を効率よく生産することを見出した。本発明は、
かかる本発明者らの新たな知見に基づいて完成したもの
で、メロン組織に微生物遺伝子導入して作出したメロン
毛状根の産生する香気成分を提供するものである。ま
た、本発明は、メロン組織に微生物遺伝子を導入して毛
状根を誘導し、誘導されたメロン毛状根を培養して香気
成分を産生させることを特徴とする香気成分の製造法を
提供するものである。さらに、本発明は、本発明の香気
成分を含有してなることを特徴とする香料を提供するも
のである。本発明によれば、微生物遺伝子導入によって
作出したメロン毛状根の培養によって短期間で優れた特
性を有する香気成分の多量生産が可能であり、安全性の
高い、安価な食品、化粧料、トイレタリー製品等で使用
される香料や芳香剤が提供できる。
入によって作出したメロン毛状根がメロン果実特有の香
気成分を効率よく生産することを見出した。本発明は、
かかる本発明者らの新たな知見に基づいて完成したもの
で、メロン組織に微生物遺伝子導入して作出したメロン
毛状根の産生する香気成分を提供するものである。ま
た、本発明は、メロン組織に微生物遺伝子を導入して毛
状根を誘導し、誘導されたメロン毛状根を培養して香気
成分を産生させることを特徴とする香気成分の製造法を
提供するものである。さらに、本発明は、本発明の香気
成分を含有してなることを特徴とする香料を提供するも
のである。本発明によれば、微生物遺伝子導入によって
作出したメロン毛状根の培養によって短期間で優れた特
性を有する香気成分の多量生産が可能であり、安全性の
高い、安価な食品、化粧料、トイレタリー製品等で使用
される香料や芳香剤が提供できる。
【０００６】
【発明の実施の形態】本発明において、微生物遺伝子導
入を行うメロンの組織としては、特に限定するものでは
ないが、メロン（Cucumis melo）の葉等の組織が使用で
きる。微生物遺伝子導入は、植物に毛根病を誘発する植
物病原菌として知られているアグロバクテリウム・リゾ
ゲネス（Agrobacterium rhizogenes）を用いるアグロバ
クテリウム感染により行う。アグロバクテリウム・リゾ
ゲネスの有するＲｉ−プラスミドを用いてメロンの組織
に毛状根を形成させる。Ｒｉ−プラスミドのＴ−ＤＮＡ
領域は宿主細胞ＤＮＡに全く無作為に挿入されるので、
挿入部位の遺伝子が不活化されることもあるが、イント
ロン部位に挿入された場合には、Ｔ−ＤＮＡ領域支配の
ホルモン多量生産によって、導入細胞は他の形質には全
く変化なく、無制限な細胞分裂を繰り返し毛状根とな
り、メロン組織に毛状根を作出させることができる。生
物の形態形成、分化はきわめて規則的な遺伝子発現によ
って制御されており、メロンの場合にも、その香気成分
は特定の成熟過程に達しなければ産生されない。しか
し、上記のＴ−ＤＮＡがそれら生合成系の制御領域に導
入された場合には、制御系が作動せず、毛状根のような
未分化組織においてもメロン成熟果実の香気成分が産生
される。かくして作出された毛状根を培養することによ
り、当該香気成分を短期間に多量に産生することができ
る。
入を行うメロンの組織としては、特に限定するものでは
ないが、メロン（Cucumis melo）の葉等の組織が使用で
きる。微生物遺伝子導入は、植物に毛根病を誘発する植
物病原菌として知られているアグロバクテリウム・リゾ
ゲネス（Agrobacterium rhizogenes）を用いるアグロバ
クテリウム感染により行う。アグロバクテリウム・リゾ
ゲネスの有するＲｉ−プラスミドを用いてメロンの組織
に毛状根を形成させる。Ｒｉ−プラスミドのＴ−ＤＮＡ
領域は宿主細胞ＤＮＡに全く無作為に挿入されるので、
挿入部位の遺伝子が不活化されることもあるが、イント
ロン部位に挿入された場合には、Ｔ−ＤＮＡ領域支配の
ホルモン多量生産によって、導入細胞は他の形質には全
く変化なく、無制限な細胞分裂を繰り返し毛状根とな
り、メロン組織に毛状根を作出させることができる。生
物の形態形成、分化はきわめて規則的な遺伝子発現によ
って制御されており、メロンの場合にも、その香気成分
は特定の成熟過程に達しなければ産生されない。しか
し、上記のＴ−ＤＮＡがそれら生合成系の制御領域に導
入された場合には、制御系が作動せず、毛状根のような
未分化組織においてもメロン成熟果実の香気成分が産生
される。かくして作出された毛状根を培養することによ
り、当該香気成分を短期間に多量に産生することができ
る。
【０００７】用いるアグロバクテリウム・リゾゲネス
は、特に限定するものではなく、入手可能なものいずれ
でもよく、例えば、茨城県つくば市観音台２−１−２の
農林水産省農業生物資源研究所から入手できるアグロバ
クテリウム・リゾゲネスＭＡＦＦ０３−０１７２４株が
好適に使用できる。
は、特に限定するものではなく、入手可能なものいずれ
でもよく、例えば、茨城県つくば市観音台２−１−２の
農林水産省農業生物資源研究所から入手できるアグロバ
クテリウム・リゾゲネスＭＡＦＦ０３−０１７２４株が
好適に使用できる。
【０００８】アグロバクテリウム・リゾゲネスのメロン
組織への感染、毛状根の誘導、作出は、自体公知の感染
法、植物組織培養法で行うことができる。例えば、アグ
ロバクテリウム・リゾゲネスをＬＢ培地で、２０〜３０
℃、ｐＨ６．５〜７．５、好ましくは２５〜２６℃、ｐ
Ｈ７．０〜７．２にて、１２〜２４時間、好ましくは１
２〜１６時間培養後、メロン組織を該培養液に浸漬する
ことにより行うことができる。これにより、微生物遺伝
子が導入され、毛状根の作出が誘導される。通常、２５
〜２６℃で、５分程度の浸漬で所望の感染効果が得ら
れ、感染させた組織を、例えば、寒天プレートで数日培
養し、さらにＭＳ培地等で培養し、毛状根を誘導後、同
様な培地で継代培養することにより、生育の活発な系統
を選抜する。選抜した系統株を、そのまま、あるいは、
例えば、ＭＳ培地で、２０〜３０℃、ｐＨ５〜７、好ま
しくは２５〜２６℃、ｐＨ５．６〜５．７にて、１５日
間以下、好ましくは１２日間以下程度、好ましくは、植
物ホルモン無添加、無照明で培養することにより、メロ
ン成熟果実の香気を発する香気成分産生毛状根を作出で
きる。
組織への感染、毛状根の誘導、作出は、自体公知の感染
法、植物組織培養法で行うことができる。例えば、アグ
ロバクテリウム・リゾゲネスをＬＢ培地で、２０〜３０
℃、ｐＨ６．５〜７．５、好ましくは２５〜２６℃、ｐ
Ｈ７．０〜７．２にて、１２〜２４時間、好ましくは１
２〜１６時間培養後、メロン組織を該培養液に浸漬する
ことにより行うことができる。これにより、微生物遺伝
子が導入され、毛状根の作出が誘導される。通常、２５
〜２６℃で、５分程度の浸漬で所望の感染効果が得ら
れ、感染させた組織を、例えば、寒天プレートで数日培
養し、さらにＭＳ培地等で培養し、毛状根を誘導後、同
様な培地で継代培養することにより、生育の活発な系統
を選抜する。選抜した系統株を、そのまま、あるいは、
例えば、ＭＳ培地で、２０〜３０℃、ｐＨ５〜７、好ま
しくは２５〜２６℃、ｐＨ５．６〜５．７にて、１５日
間以下、好ましくは１２日間以下程度、好ましくは、植
物ホルモン無添加、無照明で培養することにより、メロ
ン成熟果実の香気を発する香気成分産生毛状根を作出で
きる。
【０００９】産生された香気成分は、天然のメロン組織
から由来する成分で安全であり、また、通常のメロン果
実の香気と比較して、１−ノナナール、６Ｚ−ノネノー
ル、ノナジエナールを多く含有し、香料成分として工業
的に産生、使用することが可能である。通常、香気成分
は、自体公知の方法、例えば、超臨界抽出法、溶剤抽出
法等の抽出法、水蒸気蒸留法等、好ましくは、溶剤界抽
出法で毛状根から分離され、必要により適宜、濃縮、凍
結乾燥等の処理を施し、香料に使用される。他の香料成
分や、香料添加物と共に使用することが可能であり、通
常の方法により、固体ないしは液体の香料とすることが
できる。例えば、ジュース、シャーベット、ゼリー、冷
菓、キャンディー、チューインガム、菓子パンのクリー
ムなどの食品香料（着香料）、石鹸、歯磨き粉、芳香剤
などの化粧品、トイレタリー製品の香料として使用でき
る。
から由来する成分で安全であり、また、通常のメロン果
実の香気と比較して、１−ノナナール、６Ｚ−ノネノー
ル、ノナジエナールを多く含有し、香料成分として工業
的に産生、使用することが可能である。通常、香気成分
は、自体公知の方法、例えば、超臨界抽出法、溶剤抽出
法等の抽出法、水蒸気蒸留法等、好ましくは、溶剤界抽
出法で毛状根から分離され、必要により適宜、濃縮、凍
結乾燥等の処理を施し、香料に使用される。他の香料成
分や、香料添加物と共に使用することが可能であり、通
常の方法により、固体ないしは液体の香料とすることが
できる。例えば、ジュース、シャーベット、ゼリー、冷
菓、キャンディー、チューインガム、菓子パンのクリー
ムなどの食品香料（着香料）、石鹸、歯磨き粉、芳香剤
などの化粧品、トイレタリー製品の香料として使用でき
る。
【００１０】
【実施例】以下に、実施例をあげて本発明をさらに詳し
く説明するが、それらは一例に過ぎず、本発明はそれら
に限定されるものではない。 実施例１ メロン毛状根の誘導 アグロバクテリウム・リゾゲネス（A. rhizogenes）Ｍ
ＡＦＦ０３−０１７２４株を使用して、メロン（Cucumi
s melo.品種 Earl's Favourit)葉片から以下のとおり毛
状根を誘導した。無菌播種した７〜１４日目のメロン子
葉から約１ｃｍ2の葉外植片を作製し、約１６時間培養
したアグロバクテリウム・リゾゲネスＭＡＦＦ０３−１
７２４株の細菌懸濁液に５分間浸漬した。余分な細菌懸
濁液を濾紙で取り除き、寒天プレートに置床して２〜４
日間培養した。約４００個の葉外植片を植物ホルモン無
添加ＭＳ培地に移植し、１４〜２０日培養することによ
り毛状根を誘導した。その結果、一つの葉外片から５〜
１０個の毛状根が誘導された。約５ｃｍに成長した毛状
根から、先端部分を約２ｃｍ切り取り、植物ホルモン無
添加ＭＳ培地で継代培養を繰り返すことにより、生育の
活発な系統を選抜した。
く説明するが、それらは一例に過ぎず、本発明はそれら
に限定されるものではない。 実施例１ メロン毛状根の誘導 アグロバクテリウム・リゾゲネス（A. rhizogenes）Ｍ
ＡＦＦ０３−０１７２４株を使用して、メロン（Cucumi
s melo.品種 Earl's Favourit)葉片から以下のとおり毛
状根を誘導した。無菌播種した７〜１４日目のメロン子
葉から約１ｃｍ2の葉外植片を作製し、約１６時間培養
したアグロバクテリウム・リゾゲネスＭＡＦＦ０３−１
７２４株の細菌懸濁液に５分間浸漬した。余分な細菌懸
濁液を濾紙で取り除き、寒天プレートに置床して２〜４
日間培養した。約４００個の葉外植片を植物ホルモン無
添加ＭＳ培地に移植し、１４〜２０日培養することによ
り毛状根を誘導した。その結果、一つの葉外片から５〜
１０個の毛状根が誘導された。約５ｃｍに成長した毛状
根から、先端部分を約２ｃｍ切り取り、植物ホルモン無
添加ＭＳ培地で継代培養を繰り返すことにより、生育の
活発な系統を選抜した。
【００１１】実施例２ 香気成分産生毛状根の選抜 実施例１で誘導したメロン毛状根を植物生長調節物質無
添加の液体ＭＳ培地（ｐＨ５．７）で２６℃にて４日間
培養し、生育、伸長の速い３０系統を選抜した。そのう
ち、良好な香気を生産し、かつ増殖の速いＫＭＨ−００
９株を香気成分産生性毛状根として選抜し、以下の試験
に供した。 （１）メロン毛状根に組み込まれたＴ−ＤＮＡ領域の検
出 香気成分産生性毛状根ＫＭＨ−００９株が、A. rhizoge
nesの感染によって誘導されたものであることを証明す
るため、ＫＭＨ−００９株から染色体ＤＮＡを抽出し、
それを鋳型とし、rolＣ遺伝子の一部をプライマーに用
いてＰＣＲを行った。得られた結果を図１に示す。図１
は、毛状根から抽出した染色体ＤＮＡを鋳型としたＰＣ
Ｒ産物のアガーロースゲル（１％）電気泳動パターンを
示す図である。図中、レーンＭはλＤＮＡ−Hind III、
レーンＣはA. rhizogenes ＭＡＦＦ０３−０１７２４株
プラスミドＤＮＡからのＰＣＲ産物、レーン１は、ＫＭ
Ｈ−００９株染色体ＤＮＡからのＰＣＲ産物である。図
１の電気泳動の結果からも明らかなように A. rhizogen
esＭＡＦＦ０３−０１７２４株から抽出したプラスミド
ＤＮＡを鋳型としたＰＣＲ産物（対照実験）は、図１の
レーンＣと同位置に期待サイズ（９８８ｂｐ）のＤＮＡ
として検出された。この結果から、メロン毛状根へのＴ
−ＤＮＡ領域の組込みが確認されたので香気成分産生性
毛状根ＫＭＨ−００９株は、A. rhizogenesの感染によ
って誘導されたものであることが実証された。
添加の液体ＭＳ培地（ｐＨ５．７）で２６℃にて４日間
培養し、生育、伸長の速い３０系統を選抜した。そのう
ち、良好な香気を生産し、かつ増殖の速いＫＭＨ−００
９株を香気成分産生性毛状根として選抜し、以下の試験
に供した。 （１）メロン毛状根に組み込まれたＴ−ＤＮＡ領域の検
出 香気成分産生性毛状根ＫＭＨ−００９株が、A. rhizoge
nesの感染によって誘導されたものであることを証明す
るため、ＫＭＨ−００９株から染色体ＤＮＡを抽出し、
それを鋳型とし、rolＣ遺伝子の一部をプライマーに用
いてＰＣＲを行った。得られた結果を図１に示す。図１
は、毛状根から抽出した染色体ＤＮＡを鋳型としたＰＣ
Ｒ産物のアガーロースゲル（１％）電気泳動パターンを
示す図である。図中、レーンＭはλＤＮＡ−Hind III、
レーンＣはA. rhizogenes ＭＡＦＦ０３−０１７２４株
プラスミドＤＮＡからのＰＣＲ産物、レーン１は、ＫＭ
Ｈ−００９株染色体ＤＮＡからのＰＣＲ産物である。図
１の電気泳動の結果からも明らかなように A. rhizogen
esＭＡＦＦ０３−０１７２４株から抽出したプラスミド
ＤＮＡを鋳型としたＰＣＲ産物（対照実験）は、図１の
レーンＣと同位置に期待サイズ（９８８ｂｐ）のＤＮＡ
として検出された。この結果から、メロン毛状根へのＴ
−ＤＮＡ領域の組込みが確認されたので香気成分産生性
毛状根ＫＭＨ−００９株は、A. rhizogenesの感染によ
って誘導されたものであることが実証された。
【００１２】（２）メロン毛状根の最適培養条件の検討 （ａ）毛状根の生長と香気成分の嗅覚検定 一定期間振とう培養した毛状根について、それらの嗅覚
検定を行った。嗅覚検定は、メロン果実香気の強いもの
から５、４、３、２、１点の評点を与え、１０人のパネ
ラーによって判定した。その結果を図２に示す。図２
は、毛状根の増殖と香気の嗅覚検定の結果を示すグラフ
である。図中、縦軸は、右側が毛状根の生産量（ｇ）、
左側が嗅覚検定の平均得点を表し、横軸は培養日数
（日）である。図２に示すごとく、培養３日目が最も高
く、培養の日数が長くなるにつれて香気は減少した。 （ｂ）毛状根の生長に及ぼす照明の影響 培養中における照明の有無が毛状根の増殖に及ぼす影響
を調べた。培地としては、ホルモン無添加ＭＳ培地（３
％のショ糖を含み、ｐＨを５．６に調整）を用い、照明
は２７μｍｏl／ｍ2・ｓの光量子密度としたＭＳ培地
（３％のショ糖を含み、ｐＨを５．６に調整した）を用
いて固形培養ならびに液体振とう培養法により毛状根を
３日間培養した。結果を図３に示す。図３は、毛状根の
増殖に及ぼす照明の影響を示すグラフで、Ａは、固形培
養、Ｂは、液体振とう培養の場合である。図Ａ中、縦軸
は伸長率、横軸は照明の有無、図Ｂ中、縦軸は増殖度、
横軸は照明の有無を表す。図３Ａに示すごとく、固形培
養では照明区を１００とした場合に、無照明区（暗所）
では１２７．４となり、図３Ｂに示すごとく液体培養で
は、図３Ｂに示すごとく、無照明区が照明区の１．０３
倍の値を示した。このことから固形、液体培養のいずれ
においても無照明区で毛状根の生長が速いことが示され
た。伸長率は、固形培地に置床した毛状根の伸長した長
さから求め、照明区の毛状根の伸長を１００％として求
めた。増殖度は、液体培地に移植した毛状根の重量増加
で求めた。
検定を行った。嗅覚検定は、メロン果実香気の強いもの
から５、４、３、２、１点の評点を与え、１０人のパネ
ラーによって判定した。その結果を図２に示す。図２
は、毛状根の増殖と香気の嗅覚検定の結果を示すグラフ
である。図中、縦軸は、右側が毛状根の生産量（ｇ）、
左側が嗅覚検定の平均得点を表し、横軸は培養日数
（日）である。図２に示すごとく、培養３日目が最も高
く、培養の日数が長くなるにつれて香気は減少した。 （ｂ）毛状根の生長に及ぼす照明の影響 培養中における照明の有無が毛状根の増殖に及ぼす影響
を調べた。培地としては、ホルモン無添加ＭＳ培地（３
％のショ糖を含み、ｐＨを５．６に調整）を用い、照明
は２７μｍｏl／ｍ2・ｓの光量子密度としたＭＳ培地
（３％のショ糖を含み、ｐＨを５．６に調整した）を用
いて固形培養ならびに液体振とう培養法により毛状根を
３日間培養した。結果を図３に示す。図３は、毛状根の
増殖に及ぼす照明の影響を示すグラフで、Ａは、固形培
養、Ｂは、液体振とう培養の場合である。図Ａ中、縦軸
は伸長率、横軸は照明の有無、図Ｂ中、縦軸は増殖度、
横軸は照明の有無を表す。図３Ａに示すごとく、固形培
養では照明区を１００とした場合に、無照明区（暗所）
では１２７．４となり、図３Ｂに示すごとく液体培養で
は、図３Ｂに示すごとく、無照明区が照明区の１．０３
倍の値を示した。このことから固形、液体培養のいずれ
においても無照明区で毛状根の生長が速いことが示され
た。伸長率は、固形培地に置床した毛状根の伸長した長
さから求め、照明区の毛状根の伸長を１００％として求
めた。増殖度は、液体培地に移植した毛状根の重量増加
で求めた。
【００１３】（ｃ）毛状根の生長に及ぼすショ糖の影響 培地中のショ糖含有量が毛状根の生長に及ぼす影響につ
いて検討した。すなわち、１、２、３、４および５％の
ショ糖濃度を添加した固形ＭＳ培地および液体ＭＳ培地
を用い、培地のｐＨを５．６、暗所で培養温度を２５℃
として、３日間毛状根を培養した。結果を図４に示す。
図４は、毛状根の増殖に及ぼすショ糖の影響を示すグラ
フで、Ａは、固形培養の場合、Ｂは、液体振とう培養の
場合である。図Ａ中、縦軸は伸長率、横軸はショ糖濃度
（％）、図Ｂ中、縦軸は増殖度、横軸はショ糖濃度
（％）を表す。図４に示すごとく、いずれの培地におい
ても２％のショ糖濃度区で最も速い生長が認められた。
伸長率、増殖度は上記（ｃ）と同じである。ただし、伸
長率は、ｐＨ５．６の場合を１００％とした。 （ｄ）毛状根の生長に及ぼすｐＨの影響 培地のｐＨが毛状根の生長に及ぼす影響を検定した。す
なわち、ｐＨを３．０、４．０、５．６、７．０および
８．０とした固形ＭＳ培地および液体ＭＳ培地を用い、
暗所で３日間毛状根を培養した。結果を図５に示す。図
５は、毛状根の増殖に及ぼすｐＨの影響を示すグラフ
で、Ａは、固形培養の場合、Ｂは、液体振とう培養の場
合である。図Ａ中、縦軸は伸長率、横軸はｐＨ、図Ｂ
中、縦軸は増殖度、横軸はｐＨを表す。図５に示すごと
く、培地のショ糖濃度を２％、暗所で培養温度を２５℃
としたいずれの培養条件においてもｐＨを４．０とした
区において最も高い増殖が認められた。しかし、酸性条
件下では香気成分に含まれる化合物が分解し、香気の劣
化を引き起こす可能性を考慮して培養条件は、できるだ
け中性領域が好ましく、特に、ｐＨ７．０付近が好まし
い。伸長率、増殖度は上記（ｃ）と同じである。ただ
し、伸長率は３％ショ糖の場合を１００％とした。
いて検討した。すなわち、１、２、３、４および５％の
ショ糖濃度を添加した固形ＭＳ培地および液体ＭＳ培地
を用い、培地のｐＨを５．６、暗所で培養温度を２５℃
として、３日間毛状根を培養した。結果を図４に示す。
図４は、毛状根の増殖に及ぼすショ糖の影響を示すグラ
フで、Ａは、固形培養の場合、Ｂは、液体振とう培養の
場合である。図Ａ中、縦軸は伸長率、横軸はショ糖濃度
（％）、図Ｂ中、縦軸は増殖度、横軸はショ糖濃度
（％）を表す。図４に示すごとく、いずれの培地におい
ても２％のショ糖濃度区で最も速い生長が認められた。
伸長率、増殖度は上記（ｃ）と同じである。ただし、伸
長率は、ｐＨ５．６の場合を１００％とした。 （ｄ）毛状根の生長に及ぼすｐＨの影響 培地のｐＨが毛状根の生長に及ぼす影響を検定した。す
なわち、ｐＨを３．０、４．０、５．６、７．０および
８．０とした固形ＭＳ培地および液体ＭＳ培地を用い、
暗所で３日間毛状根を培養した。結果を図５に示す。図
５は、毛状根の増殖に及ぼすｐＨの影響を示すグラフ
で、Ａは、固形培養の場合、Ｂは、液体振とう培養の場
合である。図Ａ中、縦軸は伸長率、横軸はｐＨ、図Ｂ
中、縦軸は増殖度、横軸はｐＨを表す。図５に示すごと
く、培地のショ糖濃度を２％、暗所で培養温度を２５℃
としたいずれの培養条件においてもｐＨを４．０とした
区において最も高い増殖が認められた。しかし、酸性条
件下では香気成分に含まれる化合物が分解し、香気の劣
化を引き起こす可能性を考慮して培養条件は、できるだ
け中性領域が好ましく、特に、ｐＨ７．０付近が好まし
い。伸長率、増殖度は上記（ｃ）と同じである。ただ
し、伸長率は３％ショ糖の場合を１００％とした。
【００１４】（ｅ）毛状根の生長に及ぼす温度の影響 毛状根の生長に及ぼす培養温度の影響を調べた。固形培
養ならびに液体振とう培養法により、培地のショ糖濃度
を２％、ｐＨを７．０とし、暗所で３日間毛状根を培養
した。結果を図６に示す。図６は、毛状根の増殖に及ぼ
す温度の影響を示すグラフで、Ａは、固形培養、Ｂは液
体振とう培養の場合である。 図Ａ中、縦軸は伸長率、
横軸は温度（℃）、図Ｂ中、縦軸は増殖度、横軸は温度
（℃）である。図６Ａに示すごとく、固形培養では３０
℃の温度区で最も高い毛状根の生長が認められ、図６Ｂ
に示すごとく、液体培養では２５℃の温度区が３０℃の
温度区の１．３１倍の値を示した。伸長率、増殖度は上
記（ｃ）と同じである。 （ｆ）毛状根の生長に及ぼす植物ホルモンの影響 毛状根の生長に及ぼすホルモンの影響を調べた。培地の
ショ糖濃度を２％、ｐＨを７．０、暗所で培養温度を２
５℃とし、０ｍｇ／リットル、０．００１ｍｇ／リット
ル、０．００２ｍｇ／リットル、０．００５ｍｇ／リッ
トルまたは０．０１ｍｇ／リットルの２，４−Ｄを添加
した固形ＭＳ培地および液体ＭＳ培地を用い、暗所で毛
状根を３日間培養した。結果を図７に示す。図７は、毛
状根の増殖に及ぼすホルモンの影響を示すグラフであ
り、Ａは、固形培養、Ｂは、液体振とう培養の場合であ
る。図Ａ中、縦軸は伸長率、横軸は２，４−Ｄ濃度、図
Ｂ中、縦軸は増殖度、横軸は２，４−Ｄ濃度を表す。図
７Ａに示すごとく、固形培養では０．００１ｍｇ／リッ
トルの２，４−Ｄ濃度区で最も速やかな生長が認めら
れ、図７Ｂに示すごとく、液体振とう培養では２，４−
Ｄ無添加区で最も高い増殖が認められた。伸長率、増殖
度は上記（ｃ）と同じである。
養ならびに液体振とう培養法により、培地のショ糖濃度
を２％、ｐＨを７．０とし、暗所で３日間毛状根を培養
した。結果を図６に示す。図６は、毛状根の増殖に及ぼ
す温度の影響を示すグラフで、Ａは、固形培養、Ｂは液
体振とう培養の場合である。 図Ａ中、縦軸は伸長率、
横軸は温度（℃）、図Ｂ中、縦軸は増殖度、横軸は温度
（℃）である。図６Ａに示すごとく、固形培養では３０
℃の温度区で最も高い毛状根の生長が認められ、図６Ｂ
に示すごとく、液体培養では２５℃の温度区が３０℃の
温度区の１．３１倍の値を示した。伸長率、増殖度は上
記（ｃ）と同じである。 （ｆ）毛状根の生長に及ぼす植物ホルモンの影響 毛状根の生長に及ぼすホルモンの影響を調べた。培地の
ショ糖濃度を２％、ｐＨを７．０、暗所で培養温度を２
５℃とし、０ｍｇ／リットル、０．００１ｍｇ／リット
ル、０．００２ｍｇ／リットル、０．００５ｍｇ／リッ
トルまたは０．０１ｍｇ／リットルの２，４−Ｄを添加
した固形ＭＳ培地および液体ＭＳ培地を用い、暗所で毛
状根を３日間培養した。結果を図７に示す。図７は、毛
状根の増殖に及ぼすホルモンの影響を示すグラフであ
り、Ａは、固形培養、Ｂは、液体振とう培養の場合であ
る。図Ａ中、縦軸は伸長率、横軸は２，４−Ｄ濃度、図
Ｂ中、縦軸は増殖度、横軸は２，４−Ｄ濃度を表す。図
７Ａに示すごとく、固形培養では０．００１ｍｇ／リッ
トルの２，４−Ｄ濃度区で最も速やかな生長が認めら
れ、図７Ｂに示すごとく、液体振とう培養では２，４−
Ｄ無添加区で最も高い増殖が認められた。伸長率、増殖
度は上記（ｃ）と同じである。
【００１５】実施例３ 香気成分の分析 一般市販のメロン果実の香気成分（Ａ、マスクメロンの
精油）と、メロン毛状根の有効成分は、培養方法によっ
て異なるが、一例として、上記実施例１で得られた選抜
毛状根系統ＫＭＨ−００９毛状根の香気成分（Ｂ）のＧ
ＬＣ分析結果を表１に示す。ＫＭＨ−００９毛状根から
の香気成分（Ｂ）の調製は、以下のとおり行なった。Ｋ
ＭＨ−００９毛状根（８７．４ｇ）をｎ−ペンタン中で
細かくした後、水蒸気蒸留を１時間行なった。その留出
液をエーテル（２５０ｍｌ×２）で抽出し、ついで５％
炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）および５％水酸化
ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）で順次洗浄し、酸性部
およびフェノール部を除去した。エーテル可溶部は、無
水硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を留去して中性部（香
気成分）２３８ｍｇ（収率０．２７％）を得た。標準試
料としてマスクメロン９８．３ｇについても上記と同様
の操作を行ない、中性部（香気成分Ａ）２００ｍｇ（収
率０．２０％）を得た。ＧＬＣ条件は以下のとおりであ
る。 装置、検出器：島津製作所、Shimadzu９Ａ ＦＩＤ カラム： ２０ｍｍ×０．２５ｍｍＰＥＧ ２０Ｍカラ
ム 温度：５０℃、１０分、ついで１９０℃まで２．５℃／
分で昇温
精油）と、メロン毛状根の有効成分は、培養方法によっ
て異なるが、一例として、上記実施例１で得られた選抜
毛状根系統ＫＭＨ−００９毛状根の香気成分（Ｂ）のＧ
ＬＣ分析結果を表１に示す。ＫＭＨ−００９毛状根から
の香気成分（Ｂ）の調製は、以下のとおり行なった。Ｋ
ＭＨ−００９毛状根（８７．４ｇ）をｎ−ペンタン中で
細かくした後、水蒸気蒸留を１時間行なった。その留出
液をエーテル（２５０ｍｌ×２）で抽出し、ついで５％
炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）および５％水酸化
ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）で順次洗浄し、酸性部
およびフェノール部を除去した。エーテル可溶部は、無
水硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を留去して中性部（香
気成分）２３８ｍｇ（収率０．２７％）を得た。標準試
料としてマスクメロン９８．３ｇについても上記と同様
の操作を行ない、中性部（香気成分Ａ）２００ｍｇ（収
率０．２０％）を得た。ＧＬＣ条件は以下のとおりであ
る。 装置、検出器：島津製作所、Shimadzu９Ａ ＦＩＤ カラム： ２０ｍｍ×０．２５ｍｍＰＥＧ ２０Ｍカラ
ム 温度：５０℃、１０分、ついで１９０℃まで２．５℃／
分で昇温
【００１６】
【表１】
【００１７】培養条件によって、香気成分に変動がある
が、以上から選抜毛状根系統ＫＭＨ−００９はメロンの
香気成分を多量に生産することが明らかであり、１−ノ
ナナール、６Ｚ−ノネノールおよびノナジエナールにつ
いてはメロン毛状根がメロン果実の７．９倍、４．７倍
および１０．５倍の値を示し、工業的生産に適合するこ
とが認められた。
が、以上から選抜毛状根系統ＫＭＨ−００９はメロンの
香気成分を多量に生産することが明らかであり、１−ノ
ナナール、６Ｚ−ノネノールおよびノナジエナールにつ
いてはメロン毛状根がメロン果実の７．９倍、４．７倍
および１０．５倍の値を示し、工業的生産に適合するこ
とが認められた。
【図１】 毛状根から抽出した染色体ＤＮＡを鋳型とし
たＰＣＲ産物のアガーロースゲル（１％）電気泳動パタ
ーンを示す図である。
たＰＣＲ産物のアガーロースゲル（１％）電気泳動パタ
ーンを示す図である。
【図２】 毛状根の増殖と香気の嗅覚検定の結果を示す
グラフである。
グラフである。
【図３】 Ａは固形培養による毛状根の増殖に及ぼす照
明の影響を表すグラフ、Ｂは液体振とう培養による毛状
根の増殖に及ぼす照明の影響を表すグラフである。
明の影響を表すグラフ、Ｂは液体振とう培養による毛状
根の増殖に及ぼす照明の影響を表すグラフである。
【図４】 Ａは、固形培養による毛状根の増殖に及ぼす
ショ糖の影響を示すグラフ、Ｂは、液体振とう培養によ
る毛状根の増殖に及ぼすショ糖の影響を示すグラフであ
る。
ショ糖の影響を示すグラフ、Ｂは、液体振とう培養によ
る毛状根の増殖に及ぼすショ糖の影響を示すグラフであ
る。
【図５】 Ａは、固形培養による毛状根の増殖に及ぼす
ｐＨの影響を示すグラフ、Ｂは、液体振とう培養による
毛状根の増殖に及ぼすｐＨの影響を示すグラフである。
ｐＨの影響を示すグラフ、Ｂは、液体振とう培養による
毛状根の増殖に及ぼすｐＨの影響を示すグラフである。
【図６】 Ａは、固形培養による毛状根の増殖に及ぼす
温度の影響を示すグラフ、Ｂは、液体振とう培養による
毛状根の増殖に及ぼす温度の影響を示すグラフである。
温度の影響を示すグラフ、Ｂは、液体振とう培養による
毛状根の増殖に及ぼす温度の影響を示すグラフである。
【図７】 Ａは、固形培養による毛状根の増殖に及ぼす
ホルモンの影響を示すグラフ、Ｂは、液体振とう培養に
よる毛状根の増殖に及ぼすホルモンの影響を示すグラフ
である。
ホルモンの影響を示すグラフ、Ｂは、液体振とう培養に
よる毛状根の増殖に及ぼすホルモンの影響を示すグラフ
である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｃ (72)発明者 前田 和彦 和歌山県御坊市湯川町財部393 Ｆターム(参考） 2B030 AA02 AB03 AD08 CA06 CA17 CA19 CB02 CD03 CD06 CD09 CD10 CD14 4B047 LB03 LG37 LP01 LP20 4B065 AA89X AA89Y AB01 AC20 BA02 BB16 BB35 BC02 BC03 BC32 BC48 CA02 CA41 4C083 AA031 AA111 FF01 4H059 BC44 CA11 CA12 CA18 CA72 CA74 CA99 DA09 EA21 EA40
Claims (8)
- 【請求項１】 メロン組織に微生物遺伝子導入して作出
したメロン毛状根の産生する香気成分。 - 【請求項２】 微生物遺伝子導入を、アグロバクテリウ
ム感染により行う請求項１記載の香気成分。 - 【請求項３】 メロン毛状根の抽出物である請求項１記
載の香気成分。 - 【請求項４】 メロン組織に微生物遺伝子を導入して毛
状根を誘導し、誘導されたメロン毛状根を培養して香気
成分を産生させることを特徴とする香気成分の製造法。 - 【請求項５】 微生物遺伝子導入を、アグロバクテリウ
ム感染により行う請求項４記載の製造法。 - 【請求項６】 アグロバクテリウム・リゾゲネス（Agro
bacterium rhizogenes）を感染させる請求項５記載の製
造法。 - 【請求項７】 誘導した毛状根を、継代培養した後、植
物ホルモン無添加、無照明で、ｐＨ５〜７、２０〜３０
℃にて、１５日間以下培養する請求項６記載の製造法。 - 【請求項８】 請求項１〜３項いずれか１項記載の香気
成分を含有してなることを特徴とする香料。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11107798A JP2000297291A (ja) | 1999-04-15 | 1999-04-15 | 香気成分、その製造法および用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11107798A JP2000297291A (ja) | 1999-04-15 | 1999-04-15 | 香気成分、その製造法および用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000297291A true JP2000297291A (ja) | 2000-10-24 |
Family
ID=14468311
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11107798A Pending JP2000297291A (ja) | 1999-04-15 | 1999-04-15 | 香気成分、その製造法および用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000297291A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012513466A (ja) * | 2008-12-23 | 2012-06-14 | エイボン プロダクツ インコーポレーテッド | シス−６−ノネノール及びその誘導体を含有する局所用組成物、並びに皮膚を治療する方法 |
| JP2013515054A (ja) * | 2009-12-22 | 2013-05-02 | エイボン プロダクツ インコーポレーテッド | パキシリン刺激組成物及びその化粧品としての使用 |
| US9687440B2 (en) | 2009-12-29 | 2017-06-27 | Avon Products, Inc | CGRP compositions and uses thereof |
-
1999
- 1999-04-15 JP JP11107798A patent/JP2000297291A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012513466A (ja) * | 2008-12-23 | 2012-06-14 | エイボン プロダクツ インコーポレーテッド | シス−６−ノネノール及びその誘導体を含有する局所用組成物、並びに皮膚を治療する方法 |
| JP2013515054A (ja) * | 2009-12-22 | 2013-05-02 | エイボン プロダクツ インコーポレーテッド | パキシリン刺激組成物及びその化粧品としての使用 |
| US9066896B2 (en) | 2009-12-22 | 2015-06-30 | Avon Products, Inc. | Paxillin stimulating compositions and cosmetic uses thereof |
| US9687440B2 (en) | 2009-12-29 | 2017-06-27 | Avon Products, Inc | CGRP compositions and uses thereof |
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