JP2000210050A - 免疫調節活性分解物およびその製造方法並びにそれを用いた食品 - Google Patents
免疫調節活性分解物およびその製造方法並びにそれを用いた食品Info
- Publication number
- JP2000210050A JP2000210050A JP10348065A JP34806598A JP2000210050A JP 2000210050 A JP2000210050 A JP 2000210050A JP 10348065 A JP10348065 A JP 10348065A JP 34806598 A JP34806598 A JP 34806598A JP 2000210050 A JP2000210050 A JP 2000210050A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- genus
- type
- bacteria
- immunomodulatory
- producing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 ＩｇＥ抗体の産生を選択的に抑制する菌体、
菌体分解物、その製造方法及び食品を提供すること 【解決手段】 Corynebacterium glutamicumのようなCo
rynebacterium 属細菌及び／又はBrevibacterium属細菌
及び／又はMicrobacterium属細菌及び／又はこれらの細
菌から誘導される変異株の菌体又は、それらの細胞壁を
卵白リゾチームのようなグリコシダーゼ型酵素及び／又
はブロメライン等のエンドペプチダーゼ型蛋白分解酵素
により分解して得られる分解物、およびその製造方法並
びにこれを食品、飲料に用いる。
菌体分解物、その製造方法及び食品を提供すること 【解決手段】 Corynebacterium glutamicumのようなCo
rynebacterium 属細菌及び／又はBrevibacterium属細菌
及び／又はMicrobacterium属細菌及び／又はこれらの細
菌から誘導される変異株の菌体又は、それらの細胞壁を
卵白リゾチームのようなグリコシダーゼ型酵素及び／又
はブロメライン等のエンドペプチダーゼ型蛋白分解酵素
により分解して得られる分解物、およびその製造方法並
びにこれを食品、飲料に用いる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は新規な免疫調節活性
を有する菌体分解物およびその製造方法並びにそれを用
いた食品に関する。
を有する菌体分解物およびその製造方法並びにそれを用
いた食品に関する。
【０００２】
【従来の技術】アレルギーはその発症の免疫学的機序に
よって１型から４型に分類されている。このうち、１型
アレルギーは別名即時型アレルギー、アトピーとも呼ば
れ、花粉症、気管支喘息、アトピー性皮膚炎、食物アレ
ルギーなどの発症機序の主な原因となっており、抗原に
対するＩｇＥタイプの免疫グロブリンがその原因であ
る。これに対し、２型、３型アレルギーはＩｇＧおよび
ＩｇＭタイプの免疫グロブリンによる。
よって１型から４型に分類されている。このうち、１型
アレルギーは別名即時型アレルギー、アトピーとも呼ば
れ、花粉症、気管支喘息、アトピー性皮膚炎、食物アレ
ルギーなどの発症機序の主な原因となっており、抗原に
対するＩｇＥタイプの免疫グロブリンがその原因であ
る。これに対し、２型、３型アレルギーはＩｇＧおよび
ＩｇＭタイプの免疫グロブリンによる。
【０００３】通常、アレルギー体質といわれるのは、１
型アレルギーを発症しやすい体質を称するが、通常アレ
ルギー体質の患者においては、血液中のＩｇＥ抗体の濃
度が高く、様々な抗原に対して容易にＩｇＥ抗体を産生
することが知られている。産生されたＩｇＥ抗体は皮膚
や目、鼻、気管、消化管などの粘膜組織に多い肥満細胞
表面にあるＩｇＥ抗体の受容体に結合する。１型アレル
ギーの発症は、この抗体に抗原が結合すると肥満細胞か
らヒスタミン、セロトニン、ロイコトリエンなどの生理
活性物質（メデイエーター）が放出され、アレルギー反
応が惹起される。また、肥満細胞のみならず、抗原特異
的なリンパ球と抗原との反応に伴い、これらの細胞から
産生される各種サイトカインを介して、好酸球などが活
性化され炎症反応が進行する。
型アレルギーを発症しやすい体質を称するが、通常アレ
ルギー体質の患者においては、血液中のＩｇＥ抗体の濃
度が高く、様々な抗原に対して容易にＩｇＥ抗体を産生
することが知られている。産生されたＩｇＥ抗体は皮膚
や目、鼻、気管、消化管などの粘膜組織に多い肥満細胞
表面にあるＩｇＥ抗体の受容体に結合する。１型アレル
ギーの発症は、この抗体に抗原が結合すると肥満細胞か
らヒスタミン、セロトニン、ロイコトリエンなどの生理
活性物質（メデイエーター）が放出され、アレルギー反
応が惹起される。また、肥満細胞のみならず、抗原特異
的なリンパ球と抗原との反応に伴い、これらの細胞から
産生される各種サイトカインを介して、好酸球などが活
性化され炎症反応が進行する。
【０００４】１型アレルギーの予防治療には、現在これ
らのメデイエーターの拮抗する薬剤（抗ヒスタミン剤、
抗セロトニン剤、抗ロイコトリエン剤）や、肥満細胞か
らこれらのメデイエーターの放出を阻止する薬剤、免疫
担当細胞の活性化を抑制してサイトカインの産生を抑制
したり、サイトカインによる活性化を抑える副腎ホルモ
ンステロイド剤などが医薬品として用いられている。
らのメデイエーターの拮抗する薬剤（抗ヒスタミン剤、
抗セロトニン剤、抗ロイコトリエン剤）や、肥満細胞か
らこれらのメデイエーターの放出を阻止する薬剤、免疫
担当細胞の活性化を抑制してサイトカインの産生を抑制
したり、サイトカインによる活性化を抑える副腎ホルモ
ンステロイド剤などが医薬品として用いられている。
【０００５】１型アレルギーの原因抗体は、先に述べた
ようにＩｇＥ抗体であるので、ＩｇＥ抗体の産生を抑制
する薬剤は１型アレルギーの原因療法として有効と考え
られる。抗体の産生を抑制する薬剤として従来から知ら
れている薬品としては制癌作用を有する薬剤などが知ら
れているが、これらの薬物は毒性が強いために、アレル
ギー疾患の治療には使用されていない。先に述べた、２
型、３型アレルギーはＩｇＧおよびＩｇＭタイプの免疫
グロブリンによるとされているが、ＩｇＧおよびＩｇＭ
抗体はＩｇＡ抗体とともに、ウイルスや病原性細菌に対
する防御作用に重要な抗体であり、生体の正常な免疫機
能の維持のためには、これらの抗体にはむしろ増強させ
るような薬剤ないし食品が開発されることが望ましい。
ようにＩｇＥ抗体であるので、ＩｇＥ抗体の産生を抑制
する薬剤は１型アレルギーの原因療法として有効と考え
られる。抗体の産生を抑制する薬剤として従来から知ら
れている薬品としては制癌作用を有する薬剤などが知ら
れているが、これらの薬物は毒性が強いために、アレル
ギー疾患の治療には使用されていない。先に述べた、２
型、３型アレルギーはＩｇＧおよびＩｇＭタイプの免疫
グロブリンによるとされているが、ＩｇＧおよびＩｇＭ
抗体はＩｇＡ抗体とともに、ウイルスや病原性細菌に対
する防御作用に重要な抗体であり、生体の正常な免疫機
能の維持のためには、これらの抗体にはむしろ増強させ
るような薬剤ないし食品が開発されることが望ましい。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、Ｉｇ
Ｇ抗体などの抗体産生に影響しないか、乃至は増強する
のに対し、ＩｇＥ抗体の産生を抑制し、アトピー、アレ
ルギー体質を改善できる食品添加物ないしは健康食品を
提供することである。
Ｇ抗体などの抗体産生に影響しないか、乃至は増強する
のに対し、ＩｇＥ抗体の産生を抑制し、アトピー、アレ
ルギー体質を改善できる食品添加物ないしは健康食品を
提供することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記課題
を解決するために鋭意研究の結果、Corynebacterium属
細菌、Brevibacterium属細菌、Microbacterium属細菌及
び／又はこれらの細菌から誘導される変異株等の菌体を
経口的に与えることによりＩｇＧ等の免疫グロブリン抗
体の産生には影響しないか、増強するのに対し、アレル
ギーの原因抗体であるＩｇＥ型免疫グロブリン産生を抑
制することを見出した。さらに、Corynebacterium 属細
菌及び／又はBrevibacterium属細菌及び／又はMicrobac
terium属細菌及び／又はこれらの細菌から誘導される変
異株の酵素等による分解物を含む食品を摂取することに
より、ＩｇＧ抗体などの抗体産生に影響しないか、乃至
は増強するのに対し、ＩｇＥ抗体の産生を抑制すること
ができることを見出し、本発明に到達した。
を解決するために鋭意研究の結果、Corynebacterium属
細菌、Brevibacterium属細菌、Microbacterium属細菌及
び／又はこれらの細菌から誘導される変異株等の菌体を
経口的に与えることによりＩｇＧ等の免疫グロブリン抗
体の産生には影響しないか、増強するのに対し、アレル
ギーの原因抗体であるＩｇＥ型免疫グロブリン産生を抑
制することを見出した。さらに、Corynebacterium 属細
菌及び／又はBrevibacterium属細菌及び／又はMicrobac
terium属細菌及び／又はこれらの細菌から誘導される変
異株の酵素等による分解物を含む食品を摂取することに
より、ＩｇＧ抗体などの抗体産生に影響しないか、乃至
は増強するのに対し、ＩｇＥ抗体の産生を抑制すること
ができることを見出し、本発明に到達した。
【０００８】動物において免疫抗体を効率よく産生させ
るために、抗原と混合して非経口的に投与されるものを
称して、免疫アジュバントと呼んでいる。結核菌死菌体
には免疫アジュバント作用があることが古くから知られ
ている。その免疫アジュバント作用の有効成分を追求し
た結果、最小構成単位は細胞壁のペプチドグリカン構成
成分であるムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミ
ン（ＭＤＰ）であった。また、ＭＤＰは結核菌のみなら
ず、病原性、非病原性、グラム染色の陽性陰性菌を問わ
ず、全ての細菌にあることが知られている。実際検討さ
れた殆どの細菌で、ＭＤＰを含む細胞壁分画は免疫アジ
ュバント作用を示した。また、化学合成したＭＤＰは経
口的に投与しても免疫増強作用を示した（小谷尚三、生
化学、第48巻第12号第1081 1107頁、1976) 。
るために、抗原と混合して非経口的に投与されるものを
称して、免疫アジュバントと呼んでいる。結核菌死菌体
には免疫アジュバント作用があることが古くから知られ
ている。その免疫アジュバント作用の有効成分を追求し
た結果、最小構成単位は細胞壁のペプチドグリカン構成
成分であるムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミ
ン（ＭＤＰ）であった。また、ＭＤＰは結核菌のみなら
ず、病原性、非病原性、グラム染色の陽性陰性菌を問わ
ず、全ての細菌にあることが知られている。実際検討さ
れた殆どの細菌で、ＭＤＰを含む細胞壁分画は免疫アジ
ュバント作用を示した。また、化学合成したＭＤＰは経
口的に投与しても免疫増強作用を示した（小谷尚三、生
化学、第48巻第12号第1081 1107頁、1976) 。
【０００９】以上の背景から、免疫増強作用を目的とし
て、様々な研究がなされ、細胞壁を含む分画について、
腫瘍に対する抵抗性（Bogdanov IG et al.,Antitumor g
lycopeptides from Lactobacillus bulgaricus cell wa
ll FEBS LETT. 1975 57(3):251-261) や、細菌感染に対
する抵抗に関係するマクロファージや細胞免疫の活性化
や、細菌ウイルス感染に対する抵抗性に重要な役割をに
なうＩｇＧ抗体の増強作用（Namba Y et al.,Effect of
oral administration of lysozyme or digested cell
wall on immunostimulation in guinea pigs.,Infect I
mmun 31:580-583 1981) が知られている。また、活性と
構造との関係では、細胞壁、その酵素消化物について研
究がなされた（小谷尚三、生化学、第48巻第12号第1081
1107頁、1976) 。しかし、これまでの研究はＭＤＰを
含有する分画がアトピーなどの１型アレルギーの原因抗
体の産生にどのような影響を有するかについては知られ
ていなかった。
て、様々な研究がなされ、細胞壁を含む分画について、
腫瘍に対する抵抗性（Bogdanov IG et al.,Antitumor g
lycopeptides from Lactobacillus bulgaricus cell wa
ll FEBS LETT. 1975 57(3):251-261) や、細菌感染に対
する抵抗に関係するマクロファージや細胞免疫の活性化
や、細菌ウイルス感染に対する抵抗性に重要な役割をに
なうＩｇＧ抗体の増強作用（Namba Y et al.,Effect of
oral administration of lysozyme or digested cell
wall on immunostimulation in guinea pigs.,Infect I
mmun 31:580-583 1981) が知られている。また、活性と
構造との関係では、細胞壁、その酵素消化物について研
究がなされた（小谷尚三、生化学、第48巻第12号第1081
1107頁、1976) 。しかし、これまでの研究はＭＤＰを
含有する分画がアトピーなどの１型アレルギーの原因抗
体の産生にどのような影響を有するかについては知られ
ていなかった。
【００１０】本発明者らは、Corynebacterium 属細菌、
Brevibacterium属細菌、Microbacterium属細菌及びそれ
らの細菌から誘導される変異株について、菌体とその酵
素消化物を作成し、経口的に摂取させた場合のＩｇＥ抗
体産生について調べ、いずれの細菌ともに、そのＭＤＰ
を含む酵素分解物を投与することにより、ＩｇＥ抗体の
産生を抑制することができること、菌体それ自体では上
記活性は弱いが細胞壁溶解酵素により酵素分解すること
により、ＩｇＥ抗体産生の抑制活性が増強されることを
見出した。
Brevibacterium属細菌、Microbacterium属細菌及びそれ
らの細菌から誘導される変異株について、菌体とその酵
素消化物を作成し、経口的に摂取させた場合のＩｇＥ抗
体産生について調べ、いずれの細菌ともに、そのＭＤＰ
を含む酵素分解物を投与することにより、ＩｇＥ抗体の
産生を抑制することができること、菌体それ自体では上
記活性は弱いが細胞壁溶解酵素により酵素分解すること
により、ＩｇＥ抗体産生の抑制活性が増強されることを
見出した。
【００１１】細菌細胞壁のムコペプチド層は、Ｎ−アセ
チルグルコサミンとムラミン酸がβ−１，４結合で長鎖
に結合したポリマーとムラミン酸のカルボキシル残基か
らペプチド結合でＬ−アラニンまたはＬ−グリシン、Ｄ
−グルタミン酸、Ｌ−リジンまたはメゾジアミノピメリ
ン酸、Ｄ−アラニンなどの順にアミノ酸が結合する。最
後のＤ−アラニンは隣の糖鎖のムラミン酸のカルボキシ
ル残基から同様に派生するペプチド鎖のＤ−グルタミン
またはＬ−リジンまたはメゾジアミノピメリン酸にペプ
チド結合する。糖鎖間にまたがって結合するアミノ酸の
数は、菌により異なるが、全て６乃至７残基のアミノ酸
である。平行に並ぶ糖鎖と糖鎖を縦の糸とすると、これ
らと糖鎖を結ぶペプチド結合は横の糸の関係で、両者に
より網の構造をなし、ペプチドグリカンとも命名されて
いる。ペプチドグリカンは細胞質を含む形となり、細胞
が浸透圧の変化にも物理的に対応できる強固な壁を形成
する。
チルグルコサミンとムラミン酸がβ−１，４結合で長鎖
に結合したポリマーとムラミン酸のカルボキシル残基か
らペプチド結合でＬ−アラニンまたはＬ−グリシン、Ｄ
−グルタミン酸、Ｌ−リジンまたはメゾジアミノピメリ
ン酸、Ｄ−アラニンなどの順にアミノ酸が結合する。最
後のＤ−アラニンは隣の糖鎖のムラミン酸のカルボキシ
ル残基から同様に派生するペプチド鎖のＤ−グルタミン
またはＬ−リジンまたはメゾジアミノピメリン酸にペプ
チド結合する。糖鎖間にまたがって結合するアミノ酸の
数は、菌により異なるが、全て６乃至７残基のアミノ酸
である。平行に並ぶ糖鎖と糖鎖を縦の糸とすると、これ
らと糖鎖を結ぶペプチド結合は横の糸の関係で、両者に
より網の構造をなし、ペプチドグリカンとも命名されて
いる。ペプチドグリカンは細胞質を含む形となり、細胞
が浸透圧の変化にも物理的に対応できる強固な壁を形成
する。
【００１２】細菌細胞壁溶解酵素は、ペプチドグリカン
を加水分解する酵素で酵素の作用機序から大別して糖鎖
を切断するグリコシダーゼ型酵素（例えば卵白リゾチー
ムなど）、ペプチド結合に作用するエンドペプチダーゼ
（例えばAchromobacter プロテアーゼＩ）、糖鎖のムラ
ミン酸とアミノ酸の結合を分解するアミダーゼの３者に
大別される。
を加水分解する酵素で酵素の作用機序から大別して糖鎖
を切断するグリコシダーゼ型酵素（例えば卵白リゾチー
ムなど）、ペプチド結合に作用するエンドペプチダーゼ
（例えばAchromobacter プロテアーゼＩ）、糖鎖のムラ
ミン酸とアミノ酸の結合を分解するアミダーゼの３者に
大別される。
【００１３】本発明はCorynebacterium 属細菌及び／又
はBrevibacterium属細菌及び／又はMicrobacterium属細
菌及び／又はこれらの細菌から誘導される変異株の細胞
壁を溶解して得られる免疫調節活性を有する菌体分解物
（以下、免疫調節活性分解物という）およびその製造方
法、並びにそれを含有する食品または飲料である。
はBrevibacterium属細菌及び／又はMicrobacterium属細
菌及び／又はこれらの細菌から誘導される変異株の細胞
壁を溶解して得られる免疫調節活性を有する菌体分解物
（以下、免疫調節活性分解物という）およびその製造方
法、並びにそれを含有する食品または飲料である。
【００１４】
【発明の実施の形態】Corynebacterium 属細菌、Brevib
acterium属細菌、Microbacterium属細菌及びこれらの細
菌から誘導される変異株は入手容易な細菌であり、なか
でもCorynebacterium glutamicumはグルタミン酸発酵菌
としてその安全性が認められており、また好気性菌であ
るため、培養が容易で菌体の生産効率もよく、経済的に
も安価であるという利点がある。Corynebacterium 属細
菌としては、上記Corynebacterium glutamicumのほか、
Corynebacterium herculisを挙げることができる。ま
た、Brevibacterium属細菌としては、Brevibacterium f
lavum を、Microbacterium属細菌としては、Microbacte
rium ammoniaphilumを挙げることができる。
acterium属細菌、Microbacterium属細菌及びこれらの細
菌から誘導される変異株は入手容易な細菌であり、なか
でもCorynebacterium glutamicumはグルタミン酸発酵菌
としてその安全性が認められており、また好気性菌であ
るため、培養が容易で菌体の生産効率もよく、経済的に
も安価であるという利点がある。Corynebacterium 属細
菌としては、上記Corynebacterium glutamicumのほか、
Corynebacterium herculisを挙げることができる。ま
た、Brevibacterium属細菌としては、Brevibacterium f
lavum を、Microbacterium属細菌としては、Microbacte
rium ammoniaphilumを挙げることができる。
【００１５】Corynebacterium 属細菌、Brevibacterium
属細菌及びMicrobacterium属細菌の培養は任意の培地を
用いて公知の方法で培養すればよい。菌体は培養物その
もの、遠心分離生菌体、凍結乾燥菌体、噴霧乾燥菌体な
どいずれも使用できる。
属細菌及びMicrobacterium属細菌の培養は任意の培地を
用いて公知の方法で培養すればよい。菌体は培養物その
もの、遠心分離生菌体、凍結乾燥菌体、噴霧乾燥菌体な
どいずれも使用できる。
【００１６】菌体より本発明の免疫調節活性分解物の製
造は、菌体細胞の細胞壁の溶解によるが細胞壁の溶解法
としては、細胞壁溶解酵素による方法、溶原ファージの
誘発による方法および菌自体の有する自己融解酵素によ
る方法を挙げることができる。
造は、菌体細胞の細胞壁の溶解によるが細胞壁の溶解法
としては、細胞壁溶解酵素による方法、溶原ファージの
誘発による方法および菌自体の有する自己融解酵素によ
る方法を挙げることができる。
【００１７】これらのうち、効率のよい細胞壁溶解酵素
による方法は細胞壁溶解酵素グルコシダーゼ型酵素及び
／又はエンドペプチダーゼ型蛋白分解酵素を作用させる
方法である。本発明においては両者の酵素の単独よりも
両酵素の併用が優れた活性を有する分解物を生ずること
ができ、好ましい。また、両者のうちではグルコシダー
ゼ型酵素を用いる分解が効率的であり、グルコシダーゼ
型酵素としては卵白リゾチーム、細菌リゾチーム、Ｎ−
アセチルムラミデイスＳＧを挙げることができるが、安
全性の点から食品添加物として用いられている卵白リゾ
チームが好ましい。
による方法は細胞壁溶解酵素グルコシダーゼ型酵素及び
／又はエンドペプチダーゼ型蛋白分解酵素を作用させる
方法である。本発明においては両者の酵素の単独よりも
両酵素の併用が優れた活性を有する分解物を生ずること
ができ、好ましい。また、両者のうちではグルコシダー
ゼ型酵素を用いる分解が効率的であり、グルコシダーゼ
型酵素としては卵白リゾチーム、細菌リゾチーム、Ｎ−
アセチルムラミデイスＳＧを挙げることができるが、安
全性の点から食品添加物として用いられている卵白リゾ
チームが好ましい。
【００１８】エンドペプチダーゼ型蛋白分解酵素として
はブロメライン、セラチオペプチターゼ、Streptomyces
griseus (K-1 株) の産生する蛋白分解酵素（商品名、
プロナーゼなど）、Bacillus subtilis の産生する蛋白
分解酵素（ナガーゼ、長瀬産業製など）、セアプローゼ
Ｓ(Armillaria mellea（ナラタケ）プロテアーゼ）、ト
リプシン、Achromobacter プロテアーゼI(リシルエンド
ペプチダーゼ）、Grifola frondosa（マイタケ）メタロ
エンドペプチダーゼを挙げることができるが、基質特異
性が広く、食品の加工に用いられているブロメラインが
最も好ましい。
はブロメライン、セラチオペプチターゼ、Streptomyces
griseus (K-1 株) の産生する蛋白分解酵素（商品名、
プロナーゼなど）、Bacillus subtilis の産生する蛋白
分解酵素（ナガーゼ、長瀬産業製など）、セアプローゼ
Ｓ(Armillaria mellea（ナラタケ）プロテアーゼ）、ト
リプシン、Achromobacter プロテアーゼI(リシルエンド
ペプチダーゼ）、Grifola frondosa（マイタケ）メタロ
エンドペプチダーゼを挙げることができるが、基質特異
性が広く、食品の加工に用いられているブロメラインが
最も好ましい。
【００１９】これらの酵素による処理はそれぞれの酵素
の至適ｐＨ付近で行う。グリコシダーゼ型酵素及びエン
ドペプチダーゼ型蛋白分解酵素処理は通常の中性付近ｐ
Ｈ５〜８で、酵素の添加量は乾燥菌体１ｇ当たり０．０
１〜１０ｍｇ、温度は室温から３０〜７０℃でよい。酵
素処理物には、粘度を下げる必要に応じて、核酸分解酵
素ＤＮａｓｅ、ＲＮａｓｅを１０〜５００μｇ／ｍｌ加
えてもよい。
の至適ｐＨ付近で行う。グリコシダーゼ型酵素及びエン
ドペプチダーゼ型蛋白分解酵素処理は通常の中性付近ｐ
Ｈ５〜８で、酵素の添加量は乾燥菌体１ｇ当たり０．０
１〜１０ｍｇ、温度は室温から３０〜７０℃でよい。酵
素処理物には、粘度を下げる必要に応じて、核酸分解酵
素ＤＮａｓｅ、ＲＮａｓｅを１０〜５００μｇ／ｍｌ加
えてもよい。
【００２０】溶原ファージの誘発による菌体の融解は C
orynebacterium属細菌及び／又はBrevibacterium属細菌
及び／又はMicrobacterium属細菌を紫外線照射をするこ
とにより行う。また、自己融解による方法は菌体を精製
水に懸濁し、５０℃付近に１〜３日間保温することによ
り行う。
orynebacterium属細菌及び／又はBrevibacterium属細菌
及び／又はMicrobacterium属細菌を紫外線照射をするこ
とにより行う。また、自己融解による方法は菌体を精製
水に懸濁し、５０℃付近に１〜３日間保温することによ
り行う。
【００２１】具体的な免疫調節活性分解物の製造方法と
しては、例えば Corynebacterium glutamicum を適当な
培地中で培養した後、遠心分離して集菌し、例えば生理
食塩液などの等張圧の媒体中で菌体懸濁液に卵白リゾチ
ーム等のグリコシダーゼ型酵素、またはブロメライン等
のエンドペプチダーゼ型蛋白分解酵素を添加して細胞壁
を溶かし、菌体の細胞膜とこれに囲まれた細胞質をプロ
トプラストの状態として残し、これを遠心分離または分
子篩などの手段で分離除去した後、上澄み液に、他方の
酵素、すなわちエンドペプチダーゼ型蛋白分解酵素、ま
たはグリコシダーゼ型酵素を作用させる方法を挙げるこ
とができるが、グリコシダーゼ型酵素でまず細胞壁を溶
解してプロトプラストを分離除去後、エンドペプチダー
ゼ型蛋白分解酵素処理を行う方が効率が高く、好まし
い。プロトプラストを分離除去することにより該媒体可
溶化画分に効率よく活性分解物を精製することができ
る。生じる免疫調節活性分解物の濃縮はエタノール、ア
セトン分別によることもできる。
しては、例えば Corynebacterium glutamicum を適当な
培地中で培養した後、遠心分離して集菌し、例えば生理
食塩液などの等張圧の媒体中で菌体懸濁液に卵白リゾチ
ーム等のグリコシダーゼ型酵素、またはブロメライン等
のエンドペプチダーゼ型蛋白分解酵素を添加して細胞壁
を溶かし、菌体の細胞膜とこれに囲まれた細胞質をプロ
トプラストの状態として残し、これを遠心分離または分
子篩などの手段で分離除去した後、上澄み液に、他方の
酵素、すなわちエンドペプチダーゼ型蛋白分解酵素、ま
たはグリコシダーゼ型酵素を作用させる方法を挙げるこ
とができるが、グリコシダーゼ型酵素でまず細胞壁を溶
解してプロトプラストを分離除去後、エンドペプチダー
ゼ型蛋白分解酵素処理を行う方が効率が高く、好まし
い。プロトプラストを分離除去することにより該媒体可
溶化画分に効率よく活性分解物を精製することができ
る。生じる免疫調節活性分解物の濃縮はエタノール、ア
セトン分別によることもできる。
【００２２】また、別な製造方法しては、例えば Coryn
ebacterium glutamicum を培養後、分離集菌し、精製水
中に懸濁してグリコシダーゼ型酵素を加えて攪拌して細
胞壁を溶かし、その後エンドペプチダーゼ型蛋白分解酵
素を加えてさらに攪拌する方法によってもよい。
ebacterium glutamicum を培養後、分離集菌し、精製水
中に懸濁してグリコシダーゼ型酵素を加えて攪拌して細
胞壁を溶かし、その後エンドペプチダーゼ型蛋白分解酵
素を加えてさらに攪拌する方法によってもよい。
【００２３】本発明の免疫調節活性分解物の標準的な摂
取量は乾燥死菌体に換算して一日０．２〜２ｇ相当量
で、好ましくは１ｇ程度である。
取量は乾燥死菌体に換算して一日０．２〜２ｇ相当量
で、好ましくは１ｇ程度である。
【００２４】本発明の免疫調節活性分解物は粉末、倍
散、錠剤、カプセル、お菓子、パン、麺類、ドリンク剤
などの形態で食品または飲料とすることができる。これ
らの食品は公知の方法によって製造すればよい。
散、錠剤、カプセル、お菓子、パン、麺類、ドリンク剤
などの形態で食品または飲料とすることができる。これ
らの食品は公知の方法によって製造すればよい。
【００２５】
【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に
説明する。実施例中、％、部はともに重量基準である。
説明する。実施例中、％、部はともに重量基準である。
【００２６】実施例１ ブイヨン培地１０ｍｌを含むＬ字管にCorynebacterium
glutamicum IAM 12435を接種し３０℃で７時間振盪培養
した。この培養液の各１ｍｌを三村らの培地（醗酵工学
雑誌 第４１巻 第５号 ｐ．275-281, 1963 ）１００
ｍｌを含む５００ｍｌ容三角フラスコ１０本に接種し、
３０℃で２４時間振盪培養した。なお、この時対数期に
ペニシリンＧを０．２ユニット／ｍｌになるように添加
した。菌体を遠心して集菌し、約５ｇの湿菌体を得た。
生理食塩液で１回遠心洗浄の後、菌体に生理食塩水１リ
ットルを加えて懸濁し、攪拌しながら卵白リゾチーム５
ｍｇを加え、３７℃で１時間攪拌の後、セラチオペプチ
ターゼ５ｍｇを加え、さらに３７℃で１時間攪拌し、分
解物とした。分解物を８０℃で３０分間加熱の後、凍結
乾燥し、乾燥物５ｇを得た。
glutamicum IAM 12435を接種し３０℃で７時間振盪培養
した。この培養液の各１ｍｌを三村らの培地（醗酵工学
雑誌 第４１巻 第５号 ｐ．275-281, 1963 ）１００
ｍｌを含む５００ｍｌ容三角フラスコ１０本に接種し、
３０℃で２４時間振盪培養した。なお、この時対数期に
ペニシリンＧを０．２ユニット／ｍｌになるように添加
した。菌体を遠心して集菌し、約５ｇの湿菌体を得た。
生理食塩液で１回遠心洗浄の後、菌体に生理食塩水１リ
ットルを加えて懸濁し、攪拌しながら卵白リゾチーム５
ｍｇを加え、３７℃で１時間攪拌の後、セラチオペプチ
ターゼ５ｍｇを加え、さらに３７℃で１時間攪拌し、分
解物とした。分解物を８０℃で３０分間加熱の後、凍結
乾燥し、乾燥物５ｇを得た。
【００２７】実施例２ ブイヨン培地１０ｍｌを含むＬ字管にCorynebacterium
glutamicum IAM 12435を接種し３０℃で７時間振盪培養
した。この培養液の１ｍｌをブイヨン培地１００ｍｌを
含む５００ｍｌ容三角フラスコに接種し、３０℃で８時
間振盪培養した。この培養液を三村らの培地１．５リッ
トルを含む２リットル容ジャーファーメンターに接種
し、３０℃で２０時間、通気攪拌培養した。なお、この
時、対数期にペニシリンＧを０．２ユニット／ｍｌにな
るように添加した。菌体を遠心して集菌し、約７．５ｇ
の湿菌体を得た。生理食塩液で１回遠心洗浄の後、菌体
に生理食塩液２００ｍｌを加えて懸濁し、攪拌しながら
卵白リゾチーム５ｍｇを加え、３７℃で１時間攪拌の
後、１３０００回転／３０分遠心して沈殿するプロトプ
ラストを除き、上澄みを分取した。上澄みにセラチオペ
プチターゼ５ｍｇを加え、さらに３７℃で１時間攪拌
し、分解物とした。分解物を８０℃で３０分間加熱の
後、透析して食塩を除いた後、凍結乾燥し、乾燥物０．
２ｇを得た。
glutamicum IAM 12435を接種し３０℃で７時間振盪培養
した。この培養液の１ｍｌをブイヨン培地１００ｍｌを
含む５００ｍｌ容三角フラスコに接種し、３０℃で８時
間振盪培養した。この培養液を三村らの培地１．５リッ
トルを含む２リットル容ジャーファーメンターに接種
し、３０℃で２０時間、通気攪拌培養した。なお、この
時、対数期にペニシリンＧを０．２ユニット／ｍｌにな
るように添加した。菌体を遠心して集菌し、約７．５ｇ
の湿菌体を得た。生理食塩液で１回遠心洗浄の後、菌体
に生理食塩液２００ｍｌを加えて懸濁し、攪拌しながら
卵白リゾチーム５ｍｇを加え、３７℃で１時間攪拌の
後、１３０００回転／３０分遠心して沈殿するプロトプ
ラストを除き、上澄みを分取した。上澄みにセラチオペ
プチターゼ５ｍｇを加え、さらに３７℃で１時間攪拌
し、分解物とした。分解物を８０℃で３０分間加熱の
後、透析して食塩を除いた後、凍結乾燥し、乾燥物０．
２ｇを得た。
【００２８】実施例３ セラチオペプチターゼ５ｍｇの代わりにブロメライン５
ｍｇを用いるほかは実施例２と同様に処理して乾燥物
０．３ｇを得た。
ｍｇを用いるほかは実施例２と同様に処理して乾燥物
０．３ｇを得た。
【００２９】実施例４ Corynebacterium glutamicum IAM 12435の凍結乾燥菌体
１ｋｇを２０リットルの生理食塩液に懸濁し、３０℃で
攪拌しつつ、卵白リゾチーム５ｇを含む生理食塩液１０
０ｍｌを加えて３０℃で１時間攪拌の後、ブロメライン
５ｇを含む生理食塩液２００ｍｌを加え、さらに３０℃
で１時間攪拌し、分解物とした。分解物を噴霧乾燥し、
乾燥物１ｋｇを得た。
１ｋｇを２０リットルの生理食塩液に懸濁し、３０℃で
攪拌しつつ、卵白リゾチーム５ｇを含む生理食塩液１０
０ｍｌを加えて３０℃で１時間攪拌の後、ブロメライン
５ｇを含む生理食塩液２００ｍｌを加え、さらに３０℃
で１時間攪拌し、分解物とした。分解物を噴霧乾燥し、
乾燥物１ｋｇを得た。
【００３０】実施例５ Corynebacterium glutamicum IAM 12435の凍結乾燥菌体
の代わりにCorynebacterium glutamicum ATCC 13032 の
凍結乾燥菌体を用いるほかは実施例４と同様に処理して
乾燥物１ｋｇを得た。
の代わりにCorynebacterium glutamicum ATCC 13032 の
凍結乾燥菌体を用いるほかは実施例４と同様に処理して
乾燥物１ｋｇを得た。
【００３１】実施例６ Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 の凍結乾燥菌
体１ｋｇを２０リットルの精製水に懸濁し、５０℃に２
４時間静置し自己融解させた。自己融解物を噴霧乾燥
し、乾燥物１ｋｇを得た。
体１ｋｇを２０リットルの精製水に懸濁し、５０℃に２
４時間静置し自己融解させた。自己融解物を噴霧乾燥
し、乾燥物１ｋｇを得た。
【００３２】実施例７ Corynebacterium 溶原ファージの誘導による溶菌を以下
のようにして実施した。ブイヨン培地１００ｍｌを含む
５００ｍｌ三角フラスコにCorynebacterium glutamicum
ATCC 31830 を接種し、３０℃で２４時間振盪培養し
た。菌体を遠心して集菌し、リン酸緩衝生理食塩液に懸
濁した。この菌液の２０ｍｌを経９ｃｍのペトリ皿に入
れ、マグネチックスタラーで攪拌しながら１５Ｗの殺菌
灯で４０ｃｍの距離で２０秒間照射した。照射液に２倍
濃度のブイヨン培地２０ｍｌを加え、３０℃で２時間振
盪培養した。培養開始時の菌液の濁度はＯＤ660nm ＝
５．０であったが、２時間の振盪培養後にはＯＤ660nm
＝２．２となり、溶菌が認められた。
のようにして実施した。ブイヨン培地１００ｍｌを含む
５００ｍｌ三角フラスコにCorynebacterium glutamicum
ATCC 31830 を接種し、３０℃で２４時間振盪培養し
た。菌体を遠心して集菌し、リン酸緩衝生理食塩液に懸
濁した。この菌液の２０ｍｌを経９ｃｍのペトリ皿に入
れ、マグネチックスタラーで攪拌しながら１５Ｗの殺菌
灯で４０ｃｍの距離で２０秒間照射した。照射液に２倍
濃度のブイヨン培地２０ｍｌを加え、３０℃で２時間振
盪培養した。培養開始時の菌液の濁度はＯＤ660nm ＝
５．０であったが、２時間の振盪培養後にはＯＤ660nm
＝２．２となり、溶菌が認められた。
【００３３】実施例８ Microbacterium ammoniaphilum ATCC 15354 をブイヨン
培地１００ｍｌを含む三角フラスコ２０本に接種し、３
０℃で１８時間振盪培養した。菌体を遠心して集菌し、
約３ｇの菌体を得た。生理食塩水で１回遠心洗浄の後、
菌体に生理食塩水５００ｍｌを加えて懸濁し、攪拌しな
がらリゾチーム４ｍｇを加え、３７℃で２時間攪拌の
後、セラチオペプチダーゼ４ｍｇを加え、さらに、３７
℃で２時間攪拌し、分解物とした。分解物を８０℃で３
０分間加熱の後、凍結乾燥し、乾燥物３ｇを得た。
培地１００ｍｌを含む三角フラスコ２０本に接種し、３
０℃で１８時間振盪培養した。菌体を遠心して集菌し、
約３ｇの菌体を得た。生理食塩水で１回遠心洗浄の後、
菌体に生理食塩水５００ｍｌを加えて懸濁し、攪拌しな
がらリゾチーム４ｍｇを加え、３７℃で２時間攪拌の
後、セラチオペプチダーゼ４ｍｇを加え、さらに、３７
℃で２時間攪拌し、分解物とした。分解物を８０℃で３
０分間加熱の後、凍結乾燥し、乾燥物３ｇを得た。
【００３４】実施例９ ６週齢のＢＡＬＢ／ｃ系雌マウス１群６匹にCorynebact
erium glutamicum加熱死体、実施例３と４で得られた乾
燥物、のそれぞれを加えた混餌飼料を作成した。混餌飼
料で２週間飼育の後、卵白アルブミン１０μｇ、水酸化
アルミニウム１ｍｇを含む０．１ｍｌで免疫した。免疫
の１４日後に眼底静脈叢より採血し血清を分離した。６
匹の血清をプールし、プール血清のＩｇＥ抗体をラット
における受け身皮膚反応により測定した。すなわち、１
５〜２０週齢の雄性ＳＤ系ラットの背部の毛を刈り、ネ
ンブタール麻酔下に、皮内に注射用生理食塩液で希釈し
た血清の０．１ｍｌを各希釈血清とも２匹の動物に投与
した。皮内投与の２４時間後に、ネンブタール麻酔下
に、エヴァンスブルー色素１０ｍｇと卵白アルブミン１
ｍｇを含む生理食塩液１ｍｌを静脈内投与し、静脈内投
与の３０分後に皮内投与部位に見られた青色漏出色素の
長径と短径を計り、その平均径が５ｍｍ以上を陽性と判
定した。抗体価は血清の希釈倍数で示し、２匹の抗体価
の高い値をその血清の抗体価とした。結果を表１に示し
た。なお、表中効果の判定は血清希釈２倍希釈倍数で２
管以上の差を有意とし、１管の差につき＋と判定した。
erium glutamicum加熱死体、実施例３と４で得られた乾
燥物、のそれぞれを加えた混餌飼料を作成した。混餌飼
料で２週間飼育の後、卵白アルブミン１０μｇ、水酸化
アルミニウム１ｍｇを含む０．１ｍｌで免疫した。免疫
の１４日後に眼底静脈叢より採血し血清を分離した。６
匹の血清をプールし、プール血清のＩｇＥ抗体をラット
における受け身皮膚反応により測定した。すなわち、１
５〜２０週齢の雄性ＳＤ系ラットの背部の毛を刈り、ネ
ンブタール麻酔下に、皮内に注射用生理食塩液で希釈し
た血清の０．１ｍｌを各希釈血清とも２匹の動物に投与
した。皮内投与の２４時間後に、ネンブタール麻酔下
に、エヴァンスブルー色素１０ｍｇと卵白アルブミン１
ｍｇを含む生理食塩液１ｍｌを静脈内投与し、静脈内投
与の３０分後に皮内投与部位に見られた青色漏出色素の
長径と短径を計り、その平均径が５ｍｍ以上を陽性と判
定した。抗体価は血清の希釈倍数で示し、２匹の抗体価
の高い値をその血清の抗体価とした。結果を表１に示し
た。なお、表中効果の判定は血清希釈２倍希釈倍数で２
管以上の差を有意とし、１管の差につき＋と判定した。
【００３５】
【表１】
【００３６】マウスにおいて抗原刺激の前処置でＩｇＥ
抗体産生を抑制したことは、菌体およびその分解物の摂
取により生体の反応性乃至体質に影響していることを示
した。また菌体自体より実施例４の分解物摂取群で強い
抑制が認められたことは、酵素分解により活性が強まっ
たこと、さらに、ＩｇＥ抗体産生抑制作用が実施例３の
分解物摂取群で最も高かったことはその活性分解物は主
として細胞壁の構成成分であることを示した。
抗体産生を抑制したことは、菌体およびその分解物の摂
取により生体の反応性乃至体質に影響していることを示
した。また菌体自体より実施例４の分解物摂取群で強い
抑制が認められたことは、酵素分解により活性が強まっ
たこと、さらに、ＩｇＥ抗体産生抑制作用が実施例３の
分解物摂取群で最も高かったことはその活性分解物は主
として細胞壁の構成成分であることを示した。
【００３７】実施例１０ 免疫調節活性分解物摂取のＩｇＧ抗体産生に及ぼす作用
を卵白アルブミンで免疫したマウス血清中の抗卵白アル
ブミンＩｇＧ抗体産生により調べた。すなわち、平底９
６穴マイクロプレート（Coster,Cambridge,MA,USA)に、
０．０５ＭのｐＨ９．５の炭酸ナトリウム緩衝液に溶解
した卵白アルブミン０．１ｍｇ／ｍｌの５０μｌを入
れ、４℃に一晩置いた。洗浄液（０．９％ＮａＣｌ，
０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）で洗浄後、牛血清アルブミ
ン１ｍｇ／ｍｌを含有する燐酸緩衝生理食塩水（日水製
薬、ＰＢＳ）２００μｌを加え、３７℃、１時間おいて
ブロッキングし、洗浄後、牛血清アルブミン１０ｍｇ／
ｍｌ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、食塩３％を含むＰＢ
Ｓ（溶液Ａ）にて希釈した実施例９のマウス血清を加
え、３７℃に１時間置いた。洗浄後、ペルオキシダーゼ
標識抗マウスＩｇＧヤギ抗体（生化学工業製）の溶液Ａ
による１００００倍希釈液５０μｌを加え、３７℃に１
時間置いた後、洗浄し、基質溶液（ｏ−フェニレンジア
ミン４０ｍｇ、３０％過酸化水素２０μｌ／クエン酸−
リン酸ナトリウム緩衝液１００ｍｌ）１００μｌを加
え、室温に置き、４９２ｎｍの吸光度で測定した。
を卵白アルブミンで免疫したマウス血清中の抗卵白アル
ブミンＩｇＧ抗体産生により調べた。すなわち、平底９
６穴マイクロプレート（Coster,Cambridge,MA,USA)に、
０．０５ＭのｐＨ９．５の炭酸ナトリウム緩衝液に溶解
した卵白アルブミン０．１ｍｇ／ｍｌの５０μｌを入
れ、４℃に一晩置いた。洗浄液（０．９％ＮａＣｌ，
０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）で洗浄後、牛血清アルブミ
ン１ｍｇ／ｍｌを含有する燐酸緩衝生理食塩水（日水製
薬、ＰＢＳ）２００μｌを加え、３７℃、１時間おいて
ブロッキングし、洗浄後、牛血清アルブミン１０ｍｇ／
ｍｌ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、食塩３％を含むＰＢ
Ｓ（溶液Ａ）にて希釈した実施例９のマウス血清を加
え、３７℃に１時間置いた。洗浄後、ペルオキシダーゼ
標識抗マウスＩｇＧヤギ抗体（生化学工業製）の溶液Ａ
による１００００倍希釈液５０μｌを加え、３７℃に１
時間置いた後、洗浄し、基質溶液（ｏ−フェニレンジア
ミン４０ｍｇ、３０％過酸化水素２０μｌ／クエン酸−
リン酸ナトリウム緩衝液１００ｍｌ）１００μｌを加
え、室温に置き、４９２ｎｍの吸光度で測定した。
【００３８】抗体量は、卵白アルブミンをフロインドの
完全アジュバントとともに免疫したマウス血清より、卵
白アルブミン結合セファロース４Ｂアフィニテイーカラ
ムを用いて精製したＩｇＧ抗体を用いて作成した検量線
より求めた。実施例９で用いたプール血清中の抗卵白ア
ルブミンＩｇＧ抗体（抗ＥＡＩｇＧ）の測定結果を表２
に示した。
完全アジュバントとともに免疫したマウス血清より、卵
白アルブミン結合セファロース４Ｂアフィニテイーカラ
ムを用いて精製したＩｇＧ抗体を用いて作成した検量線
より求めた。実施例９で用いたプール血清中の抗卵白ア
ルブミンＩｇＧ抗体（抗ＥＡＩｇＧ）の測定結果を表２
に示した。
【００３９】
【表２】
【００４０】この結果はCorynebacterium glutamicumの
菌体乃至酵素分解物の摂取により、ＩｇＧ抗体産生の増
強（対照群の２倍以上）乃至増強傾向を示している。
菌体乃至酵素分解物の摂取により、ＩｇＧ抗体産生の増
強（対照群の２倍以上）乃至増強傾向を示している。
【００４１】実施例１１ ＩｇＥ抗体産生抑制性分解物の安全性 ４週齢のＳＤ系雄ラット一群５匹に実施例４で得られた
酵素分解物の２ｇ／ｋｇ体重当てを強制経口投与し、単
回投与における安全性を調べた。また、４週齢のＳＤ系
雄ラット一群１０匹に５％含有する飼料で４週間に亘っ
て飼育し、飼料のみを与えた群を対照群として投与群と
比較した。その結果、単回投与では何らの急性症状も認
められず、表３に示した如く、反復投与試験において
も、体重増加、一般状態ともに対照群との間に差は認め
られなかった。
酵素分解物の２ｇ／ｋｇ体重当てを強制経口投与し、単
回投与における安全性を調べた。また、４週齢のＳＤ系
雄ラット一群１０匹に５％含有する飼料で４週間に亘っ
て飼育し、飼料のみを与えた群を対照群として投与群と
比較した。その結果、単回投与では何らの急性症状も認
められず、表３に示した如く、反復投与試験において
も、体重増加、一般状態ともに対照群との間に差は認め
られなかった。
【００４２】
【表３】
【００４３】実施例１２ 実施例４で得られたCorynebacterium glutamicum菌体の
卵白リゾチームおよびブロメラインを用いた酵素分解物
９０ｍｇ、デンプン３０ｍｇ、アビセル（セルロース）
１８０ｍｇの割合で用いて１錠３００ｍｇの食品を常法
により製造した。
卵白リゾチームおよびブロメラインを用いた酵素分解物
９０ｍｇ、デンプン３０ｍｇ、アビセル（セルロース）
１８０ｍｇの割合で用いて１錠３００ｍｇの食品を常法
により製造した。
【００４４】実施例１３ 実施例４で得られたCorynebacterium glutamicum菌体の
卵白リゾチーム及びブロメラインを用いた分解物２部、
ココアバター１０部、グラニュー糖７部、牛乳７部、乳
化剤０．０５部に精製水を加え、全量を１００部とし、
常法によりココア飲料を製造した。
卵白リゾチーム及びブロメラインを用いた分解物２部、
ココアバター１０部、グラニュー糖７部、牛乳７部、乳
化剤０．０５部に精製水を加え、全量を１００部とし、
常法によりココア飲料を製造した。
【００４５】実施例１４ 実施例８で得られたMicrobacterium ammoniaphilum 菌
体の卵白リゾチーム及びブロメラインを用いた分解物９
０ｍｇ、デンプン３０ｍｇ、アビセル（セルロース、旭
化成製）１８０ｍｇの割合で用いて、１錠３００ｍｇの
食品を常法により製造した。
体の卵白リゾチーム及びブロメラインを用いた分解物９
０ｍｇ、デンプン３０ｍｇ、アビセル（セルロース、旭
化成製）１８０ｍｇの割合で用いて、１錠３００ｍｇの
食品を常法により製造した。
【００４６】実施例１５ 実施例８で得られたMicrobacterium ammoniaphilum 菌
体の卵白リゾチーム及びブロメラインを用いた分解物２
部、ココアバター１０部、グラニュー糖７部、牛乳７
部、乳化剤０．０５部に精製水を加え、全量を１００部
とし、常法によりココア飲料を製造した。
体の卵白リゾチーム及びブロメラインを用いた分解物２
部、ココアバター１０部、グラニュー糖７部、牛乳７
部、乳化剤０．０５部に精製水を加え、全量を１００部
とし、常法によりココア飲料を製造した。
【００４７】
【発明の効果】本発明によるとＩｇＧ抗体の産生を増強
し、ＩｇＥ抗体の産生を選択的に抑制する免疫調節活性
分解物を容易に製造することができ、そのような作用を
有する食品を提供することができる。
し、ＩｇＥ抗体の産生を選択的に抑制する免疫調節活性
分解物を容易に製造することができ、そのような作用を
有する食品を提供することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） // Ａ６１Ｐ 37/02 Ａ６１Ｋ 31/00 ６３７Ａ Ａ６１Ｋ 35/74 35/74 Ｂ (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:15） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:13） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 塩野谷 博 東京都中央区日本橋室町４丁目２番１号 室町化学工業株式会社内 (72)発明者 矢嶋 瑞夫 東京都中央区日本橋小伝馬町20番３号 ア サマ化成株式会社内 (72)発明者 岩下 定一 福岡県大牟田市新勝立町１丁目38番５ 室 町ケミカル株式会社内 Ｆターム(参考） 4B018 LB01 LB08 MD85 MD90 ME07 MF01 MF06 MF12 4B065 AA22X AA24X AA32X BD03 BD08 BD09 BD10 BD15 BD45 BD46 CA41 4C087 AA01 AA02 AA03 AA10 BC55 BC72 CA09 MA01 MA02 MA16 MA52 NA06 NA14 ZB07 ZB13
Claims (14)
- 【請求項１】 Corynebacterium 属細菌及び／又はBrev
ibacterium属細菌及び／又はMicrobacterium属細菌及び
／又はこれらの細菌から誘導される変異株の細胞壁を溶
解して得られる免疫調節活性を有する菌体分解物（以
下、免疫調節活性分解物という）。 - 【請求項２】 Corynebacterium 属細菌及び／又はBrev
ibacterium属細菌及び／又はMicrobacterium属細菌及び
／又はこれらの細菌から誘導される変異株の細胞壁を溶
解することを特徴とする免疫調節活性分解物の製造方
法。 - 【請求項３】 細胞壁の溶解をグルコシダーゼ型酵素、
及び／又はエンドペプチダーゼ型蛋白分解酵素を作用さ
せて行う請求項２記載の免疫調節活性分解物の製造方
法。 - 【請求項４】 グルコシダーゼ型酵素、又はエンドペプ
チダーゼ型蛋白分解酵素による細胞壁の溶解を等張圧の
媒体中で行い、生じたプロトプラストを分離除去し、媒
体中の可溶化画分をエンドペプチダーゼ型蛋白分解酵素
またはグルコシダーゼ型酵素処理を行う請求項２または
３記載の免疫調節活性分解物の製造方法。 - 【請求項５】 Corynebacterium 属細菌としてCoryneba
cterium glutamicumまたはCorynebacterium herculisを
用いる請求項２〜４のいずれか１項記載の免疫調節活性
分解物の製造方法。 - 【請求項６】 Brevibacterium属細菌として Brevibact
erium flavumを用いる請求項２〜４のいずれか１項記載
の免疫調節活性分解物の製造方法。 - 【請求項７】 Microbacterium属細菌として、Microbac
terium ammoniaphilumを用いる請求項２〜４のいずれか
１項記載の免疫調節活性分解物の製造方法。 - 【請求項８】 グルコシダーゼ型酵素として卵白リゾチ
ームまたはＮ−アセチルムラミデイス ＳＧを用いる請
求項３または４記載の免疫調節活性分解物の製造方法。 - 【請求項９】 細胞壁の溶解を溶原ファージの誘発によ
り行う請求項２記載の免疫調節活性分解物の製造方法。 - 【請求項１０】 細胞壁の溶解を細菌の自己消化により
行う請求項２記載の免疫調節活性分解物の製造方法。 - 【請求項１１】 エンドペプチダーゼ型蛋白分解酵素と
してブロメラインを用いる請求項３または４記載の免疫
調節活性分解物の製造方法。 - 【請求項１２】 エンドペプチダーゼ型蛋白分解酵素と
してセラチオペプチターゼ、Streptomyces griseus (K-
1 株) の産生する蛋白分解酵素、Bacillus subtilis の
産生する蛋白分解酵素、セアプローゼＳ、トリプシン、
Achromobacter プロテアーゼＩ、Grifola frondosa（マ
イタケ）メタロエンドペプチダーゼのいずれかを用いる
請求項３または４記載の免疫調節活性分解物の製造方
法。 - 【請求項１３】 請求項１記載の、または請求項２〜１
２記載の製造方法によって得られた免疫調節活性分解物
を含有する食品または飲料。 - 【請求項１４】 Corynebacterium 属細菌及び／又はBr
evibacterium属細菌及び／又はMicrobacterium属細菌及
び／又はこれらの細菌から誘導される変異株の菌体より
なる免疫調節活性物。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10348065A JP2000210050A (ja) | 1998-11-20 | 1998-12-08 | 免疫調節活性分解物およびその製造方法並びにそれを用いた食品 |
| US09/441,162 US6506388B1 (en) | 1998-11-20 | 1999-11-15 | Immunomodulator, immunomodulator food |
| EP99309254A EP1002539B1 (en) | 1998-11-20 | 1999-11-19 | Immunomodulator comprising bacterial cells or cell wall decomposition products thereof |
| DE69919302T DE69919302T2 (de) | 1998-11-20 | 1999-11-19 | Immunomodulator enthaltend bakterielle Zellen oder Abbauprodukte ihrer Zellwände |
| US10/310,445 US20030091596A1 (en) | 1998-11-20 | 2002-12-05 | Immunomodulator, immunomodulator food |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10-330395 | 1998-11-20 | ||
| JP33039598 | 1998-11-20 | ||
| JP10348065A JP2000210050A (ja) | 1998-11-20 | 1998-12-08 | 免疫調節活性分解物およびその製造方法並びにそれを用いた食品 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000210050A true JP2000210050A (ja) | 2000-08-02 |
Family
ID=26573514
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10348065A Pending JP2000210050A (ja) | 1998-11-20 | 1998-12-08 | 免疫調節活性分解物およびその製造方法並びにそれを用いた食品 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6506388B1 (ja) |
| EP (1) | EP1002539B1 (ja) |
| JP (1) | JP2000210050A (ja) |
| DE (1) | DE69919302T2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006160694A (ja) * | 2004-12-09 | 2006-06-22 | Asama Chemical Co Ltd | 抗体を含有する機能性組成物 |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030202980A1 (en) * | 1995-12-29 | 2003-10-30 | Caplan Michael J. | Methods and reagents for decreasing clinical reaction to allergy |
| US7879977B2 (en) * | 1998-01-31 | 2011-02-01 | University Of Arkansas | Methods and reagents for decreasing clinical reaction to allergy |
| US8246945B2 (en) * | 2000-04-06 | 2012-08-21 | University Of Arkansas | Methods and reagents for decreasing clinical reaction to allergy |
| US20050063994A1 (en) * | 2000-04-06 | 2005-03-24 | Caplan Michael J. | Methods and reagents for decreasing clinical reaction to allergy |
| DK1272213T3 (da) | 2000-04-06 | 2006-07-10 | Seer Pharmaceuticals Llc | Mikrobielt afgivelsessystem |
| US7112564B2 (en) * | 2003-04-09 | 2006-09-26 | Zylacta Corporation | Biodegradable glucosaminemuramyl peptides for apoptosis modulation |
| EP2163239A1 (de) * | 2008-05-27 | 2010-03-17 | Qiagen GmbH | Produkte, die Biopartikel enthalten, Verfahren zu ihrer Herstellung |
| EP2361632B1 (en) * | 2010-02-19 | 2014-03-19 | Protectimmun GmbH | Specific environmental bacteria for the protection from and/or the treatment of allergic, chronic inflammatory and/or autoimmune diseases |
| RU2648156C1 (ru) * | 2017-04-10 | 2018-03-22 | Елена Александровна Шмелёва | Метабиотический препарат-иммуномодулятор, содержащий клеточные стенки симбионтных коринебактерий, для укрепления врожденного иммунитета и способ его получения |
| CN107213172A (zh) * | 2017-06-13 | 2017-09-29 | 颜鑫 | 脑心舒口服液及其制备方法 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS547860B2 (ja) * | 1972-03-02 | 1979-04-10 | ||
| JPS5946206B2 (ja) * | 1975-10-08 | 1984-11-10 | （株） 目黒研究所 | 免疫学的活性を有する非病原性好気性コリネバクテリウム培養物の製造法 |
| JPS58874B2 (ja) | 1979-08-30 | 1983-01-08 | 株式会社 目黒研究所 | 糖蛋白ｗｅｎａｃ及びその製造法 |
| US4360510A (en) * | 1979-11-30 | 1982-11-23 | Proctor Julian W | Method for screening anti-tumor agents of the reticulo-endothelial stimulant class |
| US4479935A (en) | 1980-04-22 | 1984-10-30 | Institut Pasteur | Fractions extracted from aerobic bacteria, endowed with antitumoral, antibacterial and interferon inducing properties, and process for their preparation |
| AT392570B (de) | 1980-10-16 | 1991-04-25 | Vni Ex K I Elektro | Verfahren zum gefrieren und aufbewahren von produkten und kaeltemittel fuer seine durchfuehrung |
| RO81008A2 (ro) * | 1981-07-23 | 1983-02-01 | Institutul "Cantacuzino",Ro | Imunostimulator de natura bacteriana pentru bovine si procedeu de preparare a acestuia |
| JPS58126797A (ja) | 1982-01-22 | 1983-07-28 | Dainippon Pharmaceut Co Ltd | ジサツカライドトリペプチド及びジサツカライドテトラペプチドの製法 |
| GB2133032B (en) | 1983-01-07 | 1986-09-24 | Coalite Group Plc | Preparation of dimethylnaphthalenes |
| EP0416892B2 (en) | 1989-09-05 | 1998-10-21 | Ajinomoto Co., Inc. | Agents for the prevention and treatment of diarrhoea |
| JPH04335885A (ja) * | 1991-05-10 | 1992-11-24 | Terutake Yabiki | 抗ヘルペスウイルスならびに抗病性製剤及び食品添加剤 |
| EP1098199B1 (en) | 1997-03-03 | 2008-07-23 | Adcock Ingram Limited | A composition comprising a carrier and a purified mycobacterial lipid cell-wall component and its use in the prevention, treatment and diagnosis of disease |
-
1998
- 1998-12-08 JP JP10348065A patent/JP2000210050A/ja active Pending
-
1999
- 1999-11-15 US US09/441,162 patent/US6506388B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-19 EP EP99309254A patent/EP1002539B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-19 DE DE69919302T patent/DE69919302T2/de not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-12-05 US US10/310,445 patent/US20030091596A1/en not_active Abandoned
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006160694A (ja) * | 2004-12-09 | 2006-06-22 | Asama Chemical Co Ltd | 抗体を含有する機能性組成物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69919302D1 (de) | 2004-09-16 |
| US6506388B1 (en) | 2003-01-14 |
| US20030091596A1 (en) | 2003-05-15 |
| EP1002539B1 (en) | 2004-08-11 |
| EP1002539A1 (en) | 2000-05-24 |
| DE69919302T2 (de) | 2004-12-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2390352C2 (ru) | Композиция адъюванта, содержащая поли-гамма-глутаминовую кислоту | |
| Kirjavainen et al. | New aspects of probiotics–a novel approach in the management of food allergy. | |
| Namba et al. | Effect of oral administration of lysozyme or digested bacterial cell walls on immunostimulation in guinea pigs | |
| Prioult et al. | Mucosal immunity and allergic responses: lack of regulation and/or lack of microbial stimulation? | |
| US9416160B2 (en) | Macromolecular complex of bacterial origin and use of said macromolecular complex for preventing and treating inflammatory rheumatism | |
| Bodera et al. | Immunomodulatory effect of probiotic bacteria | |
| RU2511044C2 (ru) | ПОЛИСАХАРИД ИЗ ШТАММА Bifidobacterium infantis И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИЛИ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ РАССТРОЙСТВ. | |
| Nemoto-Kawamura et al. | Phycocyanin enhances secretary IgA antibody response and suppresses allergic IgE antibody response in mice immunized with antigen-entrapped biodegradable microparticles | |
| JP4074006B2 (ja) | ＩｇＥ抗体産生抑制物質の製造方法並びにそれを用いた食品 | |
| US5759554A (en) | Immunostimulatory bacterial cell wall traction | |
| JP2010047504A (ja) | アトピー性皮膚炎緩和剤 | |
| JP2000210050A (ja) | 免疫調節活性分解物およびその製造方法並びにそれを用いた食品 | |
| JPH10309178A (ja) | ビフィズス菌を有効成分とする抗アレルギー剤および醗酵食品 | |
| JPH07228536A (ja) | 乳酸菌を用いた免疫賦活剤 | |
| AU2002344421B2 (en) | Interleukin-18 inducing agent | |
| Alvarez et al. | Specific immunity induction at the mucosal level by viable Lactobacillus casei: A perspective for oral vaccine development | |
| JP2968374B2 (ja) | ＩｇＡ産生促進剤 | |
| JPH07106142B2 (ja) | ＩｇＡ誘導能を有するビフィドバクテリウム・ロンガム又はビフィドバクテリウム・ブレーベ | |
| JP4064515B2 (ja) | Ｉｌ−１２産生誘導組成物 | |
| JPH0680575A (ja) | 経口免疫賦活剤 | |
| JP2007513124A (ja) | ストレプトコッカス・フォカエワクチン | |
| KR100813637B1 (ko) | 비피도박테리움 인팬티스 ｍａｅｉｌ－ｋ９ 유래의펩티도글리칸 함유 추출물 및 이를 함유하는 로타바이러스감염성 설사증의 예방용 및 치료용 조성물 | |
| JPH1192389A (ja) | 免疫賦活剤 | |
| Nagy et al. | Induction of specific mucosal immune responses by viable or heat denatured probiotic bacteria of Lactobacillus strains | |
| CZ466590A3 (en) | Extracellular exopolymer, process of its preparation, pharmaceutical composition containing such extracellular exopolymer and use |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20051110 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20051110 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20061108 |
|
| RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20070626 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20080311 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20080701 |