JP2000143619A - 活性物質を細胞へ移入させる化合物およびそれを含む組成物 - Google Patents

活性物質を細胞へ移入させる化合物およびそれを含む組成物

Info

Publication number
JP2000143619A
JP2000143619A JP11168838A JP16883899A JP2000143619A JP 2000143619 A JP2000143619 A JP 2000143619A JP 11168838 A JP11168838 A JP 11168838A JP 16883899 A JP16883899 A JP 16883899A JP 2000143619 A JP2000143619 A JP 2000143619A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
compound
iii
telomer
boc
polyamine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP11168838A
Other languages
English (en)
Inventor
Otmane Boussif
オトマーヌ、ブジフ
Biruringu Pierre
ピエール、ビルリング
Santaera Catherine
カトリーヌ、サンタエラ
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Transgene SA
Original Assignee
Transgene SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Transgene SA filed Critical Transgene SA
Publication of JP2000143619A publication Critical patent/JP2000143619A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/64—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms, e.g. histidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/60—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton with the carbon atom of at least one of the carboxyl groups bound to nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F2/00—Processes of polymerisation
    • C08F2/38—Polymerisation using regulators, e.g. chain terminating agents, e.g. telomerisation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【解決手段】 式Iの基を含んでなるポリアミンテロマ
ー化合物。 ｛式中、AはHまたはC1〜4アルキルもしくはC5〜7アリー
ルであり、重合度nは1〜100であり、R１は各[CH２-CA]
ｎ繰り返し単位において独立して-H、-CH３、-C２H５お
よび-(CH２)ｕ-Bから選択され、xおよびuは2〜4であ
り、Bは または （yは2〜4であり、zは0〜6であり、R３、R４、R５、R６
およびR７は独立してH、C1〜4のアルキルまたはヒドロ
キシアルキルから選択される）である｝

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】本発明は新規ポリアミンテロマー化合物お
よびそれらを含有する新規組成物に関する。さらに詳し
くは、本発明は負電荷を含んでなる有効物質、特に核酸
の、細胞、特に哺乳類細胞への導入に有用な複合体を製
造するためのこれらの化合物または組成物の使用に関す
る。
【０００２】一般に遺伝子治療は、機能的遺伝子を導入
することにより永続的治癒が達成され得る遺伝性欠乏疾
患（嚢胞性繊維症、ジストロフィー、血友病など）に主
に適用可能であるとして認識されてきた。しかしなが
ら、より大きな群をなす疾患、注目に値する後天性疾患
（癌、エイズ、多発性硬化症など）は、宿主細胞を一時
的に操作して有益なタンパク質を産生させることにより
治療できる可能性がある。
【０００３】遺伝子治療のもう１つの応用は予防接種で
ある。これについては、脊椎動物の細胞へ導入した核酸
によってコードされた免疫原産物は、細胞により発現お
よび分泌、または主要組織適合性抗原に関連して提示さ
れ、それにより発現した免疫原に対する免疫応答を惹起
し得る。機能的核酸は種々の技術により細胞へ導入可能
で、トランジェントトランスフェクションと呼ばれる注
目遺伝子の一時的発現が起こるか、または核酸の宿主ゲ
ノムへの組み込みによる宿主細胞の永続的形質転換が起
こる。
【０００４】遺伝子治療の成功は、生体細胞への効果的
な送達とそこでの遺伝情報の発現に依存している。今日
使用されているほとんどの送達メカニズムは、ウイルス
ベクター、特にアデノおよびレトロウイルスベクターに
関するものである。ウイルスは、細胞膜の通過、エンド
ソームおよびリソソーム分解の回避、さらについにはそ
れらのゲノムの核への送達、それに次ぐウイルスゲノム
の発現を含むこのゴールを達成する多様で極めて複雑な
メカニズムを発達させてきた。その結果、ウイルスはヒ
トに適用される予防接種または遺伝子治療における多く
の遺伝子送達用途に用いられてきた。ウイルスの使用で
は多くの不利益を被る：レトロウイルスベクターは大型
のＤＮＡ（例えば、ジストロフィン遺伝子、約13kb）に
は適用できず、このレトロウイルスゲノムは宿主細胞の
ＤＮＡへ組み込まれ、従って受容細胞において遺伝子変
異を引き起こす可能性があり、感染性のあるウイルス粒
子が生物や環境中に散布する可能性もある；またアデノ
ウイルスベクターは処置された患者において強力な免疫
応答を誘導する(Mc Coy et al, 1995, Human GeneThera
py, 6, 1553-1560; Yang et al, 1996, Immunity, 1, 4
33-442)。これらの欠点にもかかかわらずやはり、現在
では、その効率のためウイルスベクターが最も有用な送
達系である。
【０００５】1990年、Wolff et al.(Science, 247, 146
5-1468)は、いずれの特殊な送達系も用いずに裸のＲＮ
ＡまたはＤＮＡを直接マウス骨格筋に注入することによ
り、マウス細胞内でリポーター遺伝子が発現することを
示した。これらの結果は、核酸自身がin vivoにおいて
ある細胞の原形質膜を通過可能であることが示される
が、やはり実際に観察されたトランスフェクション効率
は、特に負電荷を帯びた細胞膜の通過を制限する核酸の
多陰イオン性により、依然非常に制限されたものであ
る。
【０００６】1989年、Felgner et al.(Nature, 337, 38
7-388)は、核酸などの大きな陰イオン分子の細胞への導
入を促進するための陽イオン脂質の使用を提案した。こ
れらの陽イオン脂質は陰イオン分子と複合体を形成する
ことができ、従ってこれらの分子の負電荷を中和する傾
向にあり、複合体をコンパクトにし、細胞への導入に有
利になる。このようにして、受容体が介在するメカニズ
ムに基づく(Perales et al., 1994, Eur. J. Biochem.
226, 255-266; Wagner et al., 1994, Advanced Drug D
elivery Reviews, 14, 113-135)、ポリアミドアミン(Ha
ensler et Szoka, 1993, Bioconjugate Chem., 4, 372-
379)、樹木上ポリマー(WO 95/24221)、ポリエチレンイ
ミンもしくはポリプロピレンイミン(WO 96/02655)、ポ
リリシン(US-A-5 595 897またはFR 2 719 316)などのポ
リマーが介在するトランスフェクションに基づき、また
はDOTMA (Felger et al., 1987, PNAS, 84, 7413-741
7)、DOGSもしくはTransfectam(商標)(Behr et al., 198
9, PNAS, 86, 6982-6986)、DMRIEもしくはDORIE (Felge
r et al., 1993, Methods 5, 67-75)、DC-CHOL (Gaoet
Huang, 1991, BBRC, 179, 280-285)、DOTAP(商標)(McLa
chlan et al., 1995,Gene Therapy, 2, 674-622)または
Lipofectamine(商標)などの脂質が介在するトランスフ
ェクション(Felger et al., 1989, Nature, 337, 387-3
88)に基づく関連の非ウイルス送達系が開発された。こ
れらの系には、大規模生産、安全性、トランスフェクト
可能な細胞の標的化、免疫原性の低さ、かつ大きなＤＮ
Ａ断片を送達できるという点で有利な点がある。
【０００７】しかしながらいくつかの研究（例えば、Ma
hato et al., J. Pharm. Sci., 1995, 84, 1267-1271,
Thierry et al., 1995, PNAS 92, 9742-9746)では、複
合体を形成した陰イオン性高分子の細胞への導入効率
は、特にin vivoにおける導入の場合には、複合体と細
胞膜の間の相互作用、関与する細胞種、陽イオン化合物
の脂質組成、陰イオン分子と間で形成された複合体の大
きさ、および特に複合体の種々の成分の正電荷と負電荷
の比率の作用で異なり得る。現在のところ、複合体と細
胞膜との相互作用および複合体の細胞への導入を可能に
するメカニズムに関してはほとんどわかっておらず、進
行中の研究は依然として経験に頼ることろが大きい。従
って、改良された特性すなわち既に記載したものとは異
なる特性を有する新規化合物、特に陽イオン化合物の開
発が必要とされている。
【０００８】本出願人らはいま、負電荷を有する有効物
質、特に核酸を細胞に導入することが可能であって、in
vivo遺伝子治療における応用を見出し得る新規ポリア
ミンテロマー化合物を同定した。
【０００９】本発明によれば、「ポリアミンテロマー化
合物」とは、1)少なくとも１種のモノマー（タキソゲン
(taxogen)Mという）、例えばポリアミン部分を含んでな
るアクリルアミドもしくはメチルアクリルアミド誘導
体、またはその前駆体の１つを、2)導入剤ZX（テロゲン
(telogen)という）、例えばパーフルオル化された基を
含有するアルカンエチオールまたはチオール、および3)
ラジカル発生剤であり得る開始剤、例えばイオジンまた
はα,α'-アゾ-イソブチロニトリル(AIBN)の存在下で重
合させることから得られる生成物を指す。従来の重合方
法により得られる化合物は重合度が高く(n＞＞200)、ゆ
えに分子量が極めて高い式(M)nのものであるが、本発明
のポリアミンテロマー類は重合度が低く(1≦n＜200)、
ゆえに分子量が比較的小さい式Z-(M)n-Xで示される化合
物である。さらに、ポリアミンテロマー化合物の平均重
合度(n)は特に、タキソゲン／テロゲンモル比に関連
し、本発明によりテロマーのアミン官能基の数を制御お
よび調整することが可能となる。
【００１０】このように本発明は、式I：
【化９】 ｛式中、AはH、または炭素数1〜4のアルキルもしくは炭
素数5〜7個のアリールであり、好ましくはAはC１-C４ア
ルキル、より好ましくはAは-CH３であり、重合度nは1〜
100、好ましくは2〜90の範囲であり、R１は、各[CH２-C
A]ｎ繰り返し単位において互いに独立して、-H、-C
H３、-C ２H５および-(CH２)ｕ-Bから選択され、xおよび
uは2〜4の整数であり、Bは
【化１０】 または
【化１１】 （ここで、yは2〜4の整数であり、zは0〜6、好ましくは
0〜3の整数であり、R３、R４、R５、R６およびR７は互
いに独立して、H、炭素数1〜4のアルキルまたはヒドロ
キシアルキル、特に-H、-CH３、-C２H５またはHOCH２CH
２-から選択され、好ましくはR３、R４、R５、R６およ
びR７は互いに独立して-Hまたは-CH３ある）である｝で
示される基を含んでなるポリアミンテロマー化合物に関
する。
【００１１】好ましい具体例によれば、このポリアミン
テロマー化合物は陽イオンの形態であり、このことはa)
ポリアミンに存在する少なくとも１個の窒素原子にプロ
トンを結合させることによるプロトン化形態であるか、
またはb)ポリアミンに存在する少なくとも１個の窒素原
子に-CH３、-C２H５またはHOCH２CH２-を結合させるこ
とによるアンモニウム形態であるか、またはc)a)および
b)の形態であるかのいずれかを意味する。これらの場合
では、陽イオン性ポリアミンテロマー化合物は、例えば
トリフルオロアセテート、モノエチルスルフェート、ア
セテート、ヨウ化物、塩化物、臭化物などの生物学上許
容される陰イオンの１つまたはいくつかと会合している
と考えられる。
【００１２】１つの具体例では、本発明は、式II：
【化１２】 ｛式中、A、R１、B、nおよびxは前記の定義に同じであ
り、Lは、基L0、L1、L2、L3、L4、L5およびL6から選択
され、[ここで、L0は-H、所望によりOH、COOHおよびNH
２、特に-CH３、-C２H５、-C３H ７、-CH２CH２-OH、-CH
２CH２CH２-OH、-CH２CH２-COOH、-CH２-CH（-OH）-CH
２-OH、-CH２CH２CH２-COOHから選択される少なくとも
１つの置換基で置換されていてもよい炭素数1〜4のアル
キルから選択され、かつ、L1、L2、L3、L4、L5およびL6
は式：
【化１３】 （ここで、rは1、2または3であり、bは1または2、か
つ、dは0または1、ただしbとdは各繰り返し単位pにおい
て互いに異なっていてもよく、gは0〜200の範囲であ
り、mおよびpは互いに独立して、1〜20、好ましくは8〜
17の範囲であり、R８、R９は互いに独立して、CH３-、w
が5または7であるCH３-(CH２)ｗ-CH=CH-（シスもしくは
トランス）、sが2、4、6、8または10であるCｓF
２ｓ＋１またはC ｓF２ｓ＋１-CH=CH-（シスもしくはト
ランス）から選択され、R１０、R１１またはR１２のう
ち少なくとも１つが、L4が式IIの化合物のSと結合して
いる結合部位であって、他のものが互いに独立して、基
-H、-OH、=O、-NH ２、-NH-COCH３、所望によりOH、COOH
およびNH２、特に-CH３、-C２H５、-C３H ７、-CH２CH２
-OH、-CH２CH２CH２-OH、-CH２CH２-COOH、-CH２-CH(O
H)-CH２-OH、-CH２CH２CH２-COOHから選択される少なく
とも１つの置換基で置換されていてもよい炭素数1〜4の
アルキル基から選択され、かつ、R１０、R１１またはR
１２は各繰り返し単位pにおいて互いに異なっていても
よく、R１３は基-H、-OH、-NH２、-NH-COCH３、所望に
よりOH、COOHおよびNH２、特に-CH３、-C２H５、-C３H
７、-CH２CH２-OH、-CH２CH２CH２-OH、-CH２CH２-COO
H、-CH２-CH(OH)-CH２-OH、-CH２CH２CH２-COOHから選
択される少なくとも１つの置換基で置換されていてよい
炭素数1〜4のアルキル基から選択され、R１３はbが2で
あるとき、各bにおいて互いに異なっていてもよい）を
有する]｝で示される化合物を提供する。
【００１３】[aa]はその酸官能基を介してアミン残基
と、またそのアミン官能基を介してCO(CH２)r部分と結
合したα-アミノ酸であり、このアミノ酸は弱いpKaを有
するアミン／アンモニウム官能基、例えばイミダゾール
／イミダゾリウムまたはカルボキシレート／カルボキシ
ル官能基を含んでなる。さらに明示すれば、[aa]はヒス
チジン、3-メチルヒスチジン、アスパラギン酸およびグ
ルタミン酸からなる群より選択される。具体例によれ
ば、L基は、例えばポリエーテル（PEGなど）、ポリチオ
エーテル、一様に飽和したまたは飽和していないポリ環
式残基、多糖類または糖類（それぞれデキストランまた
はヘキソースなど）などの結合部分によりI部分と結合
させることができる。
【００１４】L4の特定の場合では、pが少なくと2である
とき、繰り返しモチーフは直鎖状であっても分枝してい
てもよく、R１０、R１１、R１２およびR１３は各々R
１４で置換されていてもよいし、またはOHの水素がR
１４で置換されていてもよい。R１ ４は独立に、(i)所望
により-OH、-COOHおよび-NH２、特に-CH３、C２H５、-C
H２CH２-OH、-CH２CH２CH２OH、-CH２-CH２-COOH、-CH
２-CH(OH)-CH２-OH、-CH２CH２CH２-COOHから選択され
る少なくとも１つの置換基で置換されていてもよい炭素
数1〜4のアルキル基および(ii)標識分子、標的またはア
ンカー分子などから選択し得る。
【００１５】好ましい具体例では、OH基の置換によりエ
ーテルまたはエステル化合物が得られる。
【００１６】通常、モチーフが直鎖状に繰り返される場
合、繰り返し単位はC1/C3（またはb値によりC4）結合で
結びついている。さらに明示すれば、L4は、例えばフル
クトース、リボース、アラビノース、グルコース、グル
コサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、マンノー
ス、ラクトース、マルトース、セロビオースなどから誘
導される糖類または多糖類である。
【００１７】本発明によれば、新規ポリアミンテロマー
化合物はモジュール構造を示す。それらは第一に、種々
の数の第一および／または第二アミン官能基を含む極性
部分と、第二に種々の長さの炭化水素および／またはパ
ーフルオロアルキル鎖を含む疎水性部分からなる。それ
らのモジュール構造のために、これら化合物の特性およ
び生物学的挙動が適用できる。さらに、第一または第二
アミン官能基の存在により、本発明の化合物は置換され
得る。かかる置換は、例えばin vitroまたはinvivo投与
の後に化合物のまたはそれらを組み込んだ複合体の分布
の視覚化を可能にする少なくとも１種の標的分子（例え
ば、US-A-4711955に開示された分子を参照）、細胞標的
分子（リガンド）またはアンカー分子を付加することに
ある。１つの具体例では、本発明はまた、ポリアミン鎖
の少なくとも１つの第二または第一窒素原子と結合した
１以上の標的要素と共役させた、前記のもののような化
合物に関する。かかる要素は科学刊行物に広く記載され
ており、特異的細胞種の標的化、細胞への透過の促進、
エンドソームの溶解や核への細胞内輸送でさえも可能に
する。これらの要素は糖類、グリコール、ペプチド（例
えば、ガストリン放出ペプチド (GRP、Gastrin Releasi
ng Peptide)）、オリゴヌクレオチド、脂質、ホルモ
ン、ビタミン、抗原、抗体（もしくはその断片）、特異
的膜受容体リガンド、抗リガンドと反応し得るリガン
ド、融合誘導ペプチド、核局在化ペプチド、またはこれ
ら化合物の組み合わせのすべてまたは一部、例えばリン
パ球表面のアシアログリコプロテイン受容体を標的化す
るためのガラクトシル残基、膜融合のためのインフルエ
ンザウイルス赤血球凝集素のHA-2サブユニット由来のIN
F-7融合誘導ペプチド(Plank et al., 1994, J. Biol. C
hem. 269, 12918-12924)、またはSV40ウイルスのT抗原
由来の(Lanford and Butel, 1984, Cell 37, 801-813)
もしくはエピスタイン・バーウイルスのEBNA-1タンパク
質由来の(Ambinder etal., 1991, J. Virol. 65, 1466-
1478)核シグナル配列などの化合物であってよい。本発
明の化合物はまた、炭素原子、特にR１〜R１３のそれか
ら選択される炭素原子において置換されていてもよい。
CHまたはCH2の炭素原子などの非反応基の置換は当業者
によく知られた方法を用いて請求の化合物を合成する際
に達成されるべきであり、一方、第一または第二アミン
などの反応基は新たに合成された本発明の化合物におけ
る置換に関与し得ることに注目すべきである。
【００１８】かかる置換ポリアミンテロマー化合物は、
文献に記載の手法を用いて、特に化学的カップリング、
特にポリアミン部分のトリフルオロアセチル、Fmoc(9-
フルオルエニルメトキシカルボニル)またはBOC(t-ブチ
ルオキシカルボニル)などの保護基を用いることにより
容易に得ることができる。次いで、保護基の選択的除去
により、標的要素のカップリングと続いてのリポポリア
ミンの完全な脱保護が可能となる。
【００１９】本発明の特殊な場合では、L1、L2もしくは
L3、L4、L5もしくはL6で示されるポリアミンテロマー化
合物は、それらの脂質部分にフッ素化末端またはパーフ
ルオロアルキル末端を含み、これは得られたポリアミン
テロマー化合物／有効物質複合体（テロポリプレックス
という）をより安定にするフルオロカーボン物質の独自
性を作り出す特殊な特徴（すなわち、高い疎水性と低い
脂質親和性）の幾分か導入可能となる(Riess, 1994, Jo
urnal of Drug Targeting, 2, 455-468)。
【００２０】本発明のもう１つの特殊な場合では、L0、
L1、L2、L3、L4、L5およびL6で示されるポリアミンテロ
マー化合物のチオエーテル基は、スルホン(-SO２-)また
はスルホキシド(-SO-)へと酸化されている。
【００２１】好ましい具体例では、ポリアミンテロマー
化合物は下記の式III-L1〜III-L3：
【化１４】 （式中、m=p）からなる群より選択される。
【００２２】式III-L1の特に好ましい化合物は下記の化
合物である：m=17かつn=1である化合物III-L1a m=17かつn=2である化合物III-L1b m=17かつn=3である化合物III-L1c m=17かつn=4である化合物III-L1d m=17かつn=5である化合物III-L1e m=17かつn=10である化合物III-L1f m=17かつn=20である化合物III-L1g m=17かつn=40である化合物III-L1h m=17かつn=50である化合物III-L1i m=17かつn=60である化合物III-L1j m=13かつn=10である化合物III-L1k m=13かつn=20である化合物III-L1l m=13かつn=70である化合物III-L1m。
【００２３】式III-L2の特に好ましい化合物は下記の化
合物である：m=17かつn=2である化合物III-L2a m=17かつn=20である化合物III-L2b m=17かつn=30である化合物III-L2c m=17かつn=90である化合物III-L2d。
【００２４】式III-L3の特に好ましい化合物は下記の化
合物である：m=17かつn=1である化合物III-L3a m=17かつn=3である化合物III-L3b m=17かつn=6である化合物III-L3c m=17かつn=11である化合物III-L3d m=17かつn=16である化合物III-L3e。
【００２５】例示であり限定的ではない方法によれば、
本発明のポリアミンテロマー化合物は、ラジカル開始剤
として使用されるAIBNを用い、例えばL1-SH、L2-SHまた
はL3-SH種のテロゲン（それらの合成法は反応スキーム1
〜3に示されているが、これらのテロゲンは他の方法に
よっても得ることができる）とタキソゲンCH２=CA-CO-N
HCH２CH２-NHG、CH２=CA-CO-NH-CH２CH２NMe２またはCH
２=CA-CO-N[CH２CH２-NHG]２の間の重合反応（テロ重合
と呼ばれる）により製造できる。テロ重合の後、必要で
あれば、G基の脱保護反応を行う（反応スキーム4、経路
dを参照）。このテロ重合はテロゲン／タキソゲンの種
々のモル比で行うことができ、当業者ならばこれを容易
に決定でき、従ってテロマーの平均重合度(n)の調整が
可能である。
【００２６】別法として、反応スキーム4、経路fで示し
たように、化合物VII-L（ここで、-C(-O)-N(R1またはR
2)-(CH２)Ｘ-B1またはB2部分は、繰り返し単位[CH２-C
A]nの各々またはいくつかで異なる）などの本発明のポ
リアミンコテロマーの合成のためのタキソゲン混合物を
用いてテロ重合を行うこともできる。
【００２７】反応スキーム1
【化１５】 a1:［ClCO(CH2)rS］2/NEt3/CHCl3 a2: Zn/AcOH また
は NaBH4/THF b1: HOOC(CH2)rSH/DCC/HOBt
【００２８】反応スキーム2A
【化１６】 a1: DCC/HNS/Fmoc-His(Trt)/CHCl3 a2: モルホリン,
DMF a3:［ClCO(CH2)rS］2/NEt3/CHCl3 a4: NaBH4/THF b1: DCC/HNS/Fmoc-His(BOC)/CHCl3 b2: モルホリン,
DMF b3: HOOC(CH2)rSH/EDC/HOBt/CHCl3
【００２９】反応スキーム2B
【化１７】 a1: PyBrop/NEt3/CH2Cl2 a2: TFA a3: HOBt/EDC/NEt3/CH2Cl2
【００３０】反応スキーム3
【化１８】 a1: R(CH2)mX(X=Br,I,OMs,OTs)/Bu4NHSO4,Et2O,9N KOH
a2: Na,tBuOH
【００３１】反応スキーム4
【化１９】 G=BOC,Z,Trt,Fmoc,-COCF3,など A=H,CH3 L=L1,L2またはL3,L0,L4,L5,L6 a: AlBN/CH3CN/CH2=CACONH(CH2)2NHG b: AlBN/CH3CN/
CH2=CACONH(CH2)2NMe2) c: AlBN/CH3CN/CH2=CACON[(CH2)2NHG]2 d: 脱保護: TFA G=BOCのとき,X-=CF3CO-;塩基 G=COCF3
またはFmocのとき,X-=OH-e: 基質における異性化 f:
AlBN/CH3CN/CH2=CACOTl および CH2=CACOT2 T1,T2=NH(CH2)2NHG,-NH(CH2)2NMe2,-N[(CH2)2NHG])2
【００３２】化合物3、6および9の合成経路は、反応ス
キーム1〜3に示したように、例えばテロゲン（ここで、
R=CH３、m=17かつr=2）の合成のために使用してもよ
い。
【００３３】本発明の特殊な具体例では、AおよびR1〜R
6=H、x=2、z=0、かつ重合度n=1、2、3、5、6、10、11、
20、30、40、50、60、70であるものは、以下に提示され
る例III-L1a〜III-L1m、III-L2a〜III-L2dおよびIII-L3
a〜III-L3eをいう。
【００３４】一般に記載の合成法は、当業者により本発
明の実施および応用に適用できる。本発明のポリアミン
テロマー化合物は前記の方法により製造されるものに限
定されないが、本発明はまた、該方法により得られるポ
リアミンテロマー化合物も包含する。
【００３５】第一の具体例によれば、本発明は、前記の
ようなポリアミンテロマー化合物の少なくとも１種と、
所望により、ポリアミンテロマー化合物と少なくとも１
種の有効物質との間での複合体の形成をさらに向上させ
る、または細胞膜を渡る複合体輸送を促進し、かつ、エ
ンドソーム分解を回避すると思われる少なくとも１種の
アジュバントを含んでなる組成物に関する。
【００３６】本発明の１つの特に重要な態様は、そのア
ジュバントが負電荷を有する脂質、中性脂質または両性
脂質、例えばトリグリセリド、ジグリセリド、コレステ
ロール（例えばUS-A-5 438 044を参照）、特に負電荷を
有する脂質、中性脂質または両性脂質があるいはホスフ
ァチジルエタノールアミン(PE)、ホスファチジルコリ
ン、ホスホコリン、スフィンゴミエリン、セラミドまた
はセレブロシドに由来するもの、例えばグリセロ脂質
（PCT/FR98/00250を参照）またはPEG化脂質（WO 98/084
89）などの陽イオン脂質である。好ましい具体例によれ
ば、このアジュバントはジオレイルホスファチジルエタ
ノールアミン(DOPE)である。
【００３７】本発明のポリアミンテロマー化合物とアジ
ュバントとの比率は、（重量に対する重量を基にして）
1:0.1〜1:10の範囲であるが、この比率は化合物の種に
より適合させればよい。好ましい具体例では、この重量
比は1:1である。当業者ならばこれら最小の調整物を取
り扱うことができる。また、負電荷を有する脂質、中性
脂質および／または両性脂質の混合物を使用することも
できる。
【００３８】さらにもう１つの展望から、本発明は前記
したもののような少なくとも１種の化合物または組成物
と、少なくとも１個の負電荷を有してなる少なくとも１
種の有効物質を含んでなる複合体を包含する。本発明に
よれば、かかる複合体は「テロポリプレックス」と呼ば
れる。
【００３９】本発明の特に重要な１つの態様は、有効物
質が核酸およびタンパク質から選択されるかかる複合体
に関し、有効物質は核酸であることが好ましい。
【００４０】核酸は、大きさの制限なく核酸の断片また
は一部であることが明確に定義された、一本鎖もしくは
二本鎖、直鎖もしくは環状、天然もしくは合成、修飾も
しくは非修飾（修飾の例としてはUS-A-5525711、US-A-4
711955またはEP-A-302175を参照）ＤＮＡおよび／また
はＲＮＡ断片であってよい。それは、とりわけゲノムＤ
ＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボ
ソームＲＮＡ、リボザイム、ｔＲＮＡまたはかかるＲＮ
ＡをコードするＤＮＡであってもよい。「ポリヌクレオ
チド」と「核酸」は本発明に関しては同義である。また
核酸は、転写および翻訳されてポリペプチド、リボザイ
ム、アンチセンスまたは細胞への送達と言うことに関し
て注目される他の分子を生じることが可能な少なくとも
１つの核酸コーディング配列を含むプラスミドもしくは
直鎖状ポリヌクレオチドの形態であってもよい。また核
酸は、例えばアンチセンスまたはリボザイム作用のため
に細胞へ送達されるべきオリゴヌクレオチドでもあり得
る。本発明によれば、またこのような核酸を、ウイルス
タンパク質または陽イオン脂質または陽イオンポリマー
とともに処方することもできる。
【００４１】好ましい具体例では、ＤＮＡおよびｍＲＮ
Ａは双方とも細胞に送達され、そこで注目のペプチドを
生成し、それは細胞内に留まる場合もあるし、また細胞
から分泌される場合もある。さらに好ましい具体例で
は、プラスミドＤＮＡが好ましい。核酸が適切な遺伝情
報を含んでいるとすれば、相対的に多量のコードペプチ
ドの合成を指示するであろう。細胞に送達された核酸が
免疫ペプチドをコードする場合、本発明の使用は、細胞
内ウイルスを含む感染性病原体に対して、また腫瘍細胞
に対して、改良された有効な免疫を達成するために適用
できる。標的細胞による発現に必要とされる遺伝情報に
は、ＤＮＡのｍＲＮＡへの転写に、さらにｍＲＮＡのポ
リペプチドへの翻訳に必要な総ての要素が含まれる。種
々の脊椎動物系での使用のために適した転写プロモータ
ーはよく知られている。例えば、適切なプロモーターと
しては、ウイルスプロモーターRSV、MPSV、SV40、CMVま
たは7.5k、ワクシニアプロモーター、誘導プロモーター
などが挙げられる。また核酸としては、イントロン配
列、標的配列、輸送配列、複製または組み込みに関する
配列を挙げることができる。これら配列は文献で報告さ
れており、当業者ならば容易に得ることができる。核酸
はまた、安定化のためにスペルミンとして特殊な成分で
修飾されていてもよい。
【００４２】本発明によれば、核酸は標的の発現細胞の
同種であっても、異種であってもよい。この核酸はポリ
ペプチド、特に治療用または予防用のポリペプチドの総
てまたは一部をコードしていることが有利である。ポリ
ペプチドは大きさにかかわらず、またグリコシル化され
ていようがいまいが、ポリヌクレオチドの翻訳産物のい
ずれであってもよいと理解され、これにはペプチドおよ
びタンパク質が含まれる。治療用ポリペプチドの主な例
としては、動物において欠陥のあるもしくは欠損してい
るタンパク質を埋め合わせることができるポリペプチ
ド、または毒性作用により損傷細胞を制限するか、もし
くは損傷細胞を体内から除去するよう働くものが挙げら
れる。それらはまた、内生免疫原として体液応答もしく
は細胞応答またはその双方を誘発するよう働く免疫を授
与するポリペプチドであってもよい。本発明に従いコー
ドされるポリペプチドの例としては、酵素、ホルモン、
サイトカイン、膜受容体、構造ポリペプチド、輸送ポリ
ペプチド、アドヘシン、リガンド、転写因子、形質導入
因子、複製因子、安定化因子、抗体、さらに特には、CF
TR、ジストロフィン、因子VIIIまたはIX、HPV由来のE6
またはE7、MUC1、BRCA1、インターフェロンβ、インタ
ーフェロンγ、インターロイキン(IL)2、IL-4、IL-6、I
L-7、IL-12、GM-CSF（顆粒球マクロファージコロニー刺
激因子）、1型単純ヘルペスウイルス(HSV-1)由来のtk遺
伝子、p53、VEGFが挙げられる。ポリヌクレオチドはま
た、抗体をコードしていてもよい。これに関して、抗体
はいずれのクラスであろうと免疫グロブリンの総て、二
重もしくは多重抗原、または抗原決定基特異性を有する
キメラ抗体およびハイブリッド抗体、ならびにハイブリ
ッド断片および抗イディオタイプを含む、F(ab)2、Fa
b'、Fabなどの断片を包含する(US-A-4,699,880)。
【００４３】本発明の好ましい具体例では、本発明の陽
イオンポリアミンテロマー化合物／有効物質複合体の大
きさは小型（500nm未満、さらに有利には200nm、好まし
くは20〜100nmの範囲）である。複合体の大きさは、あ
る適用において最適に使用できるよう選択すればよい。
【００４４】複合体の大きさの測定は、限定されるもの
ではないが、動的レーザー光散乱（光量子相関分光学(p
hoton correlation spectrocopy, PCS)）ならびに当業
者に公知の他の技術をはじめとする多くの方法によって
達成することができる（Washington, Particle Size An
alysis in Pharmaceutics and other Industries, Elli
s Horwood, New York, 1992, 135-169を参照）。
【００４５】本発明はまた、陽イオンポリアミンテロマ
ー化合物と有効な陰イオン物質を含んでなる複合体を製
造する方法にも向けられる。この方法は、本発明の１種
以上のポリアミンテロマー化合物または組成物を、１種
以上の有効な陰イオン物質と混合し、次いでその複合体
を回収することを特徴とする。
【００４６】本法の第一の変法によれば、特許出願WO-A
-9603977に記載の方法に従い、１種以上の陽イオンポリ
アミンテロマー化合物を適当量の溶媒、すなわち水和性
溶媒混合物、例えばエタノール(EtOH)、ジメチルスルホ
キシド(DMSO)または好ましくは1:1(v/v)EtOH/DMSO混合
物に溶解させて脂質凝集塊を形成させる。本法の第二の
変法では、適切量の、オクチルグルコシド、例えばn-オ
クチルβ-D-グルコピラノシドまたは6-O-(N-ヘプチルカ
ルボモイル)-メチル-α-D-グルコピラノシドなどの界面
活性剤溶液を用いて、この陽イオンポリアミンテロマー
化合物懸濁液を調製ウイルスする。次いでこの懸濁液を
負電荷を有する有効物質の溶液と混合し、透析またはそ
れに関連した技術によって、界面活性剤の除去と同時に
テロマー／有効物質複合体の形成を達成する。
【００４７】最終的に得られる複合体が中性または両性
脂質を含むならば、陽イオンポリアミンテロマー化合物
を水和性溶媒に溶解させる前に、公知の方法に従い、与
えられた陽イオンポリアミンテロマーと与えられたDOPE
にような中性または両性脂質を組み込んでなる複合体で
薄膜を調製する。
【００４８】本発明の複合体を形成するために陽イオン
ポリアミンテロマー化合物または組成物に添加し得る負
電荷を有する有効物質、好ましくは核酸の濃度は、10μ
g/ml〜2000μg/mlの範囲である。本発明の好ましい具体
例では、この負電荷を有する有効物質の濃度は100μg/m
l〜1000μg/mlの範囲である。
【００４９】本発明のテロポリプレックスはまた、複合
体において存在する陽イオンポリアミンテロマー化合物
により与えられる正電荷と有効物質により与えられる負
電荷の比率である、それらの理論電荷比(+/-)により特
徴づけられ、ここでは存在し得る総ての陽イオン基が実
際に陽イオン状態にあり、存在し得る総ての陰イオン基
が実際に陰イオン状態にあると仮定される。一般に、複
合体の過剰な正電荷は、負電荷を帯びた細胞表面と複合
体の結合を助ける。このような比率を得るためには、有
効物質の総ての負電荷を考慮に入れて計算し、さらに前
記で示した所望の理論電荷比を得るのに必要な陽イオン
ポリアミンテロマー化合物の量を調節すべきである。そ
の他の成分の量および濃度は、それらの個々のモル量お
よびそれらの正電荷数の相関において調節すべきであ
る。この比率は特に限定されるものではなく：その量
は、陽イオンポリアミンテロマー化合物または組成物の
正電荷数と有効物質の負電荷数の比が0.05〜20の間、特
に0.8〜15の間、2.5〜15の間、好ましくは約5〜10.0の
間になるように選択する。
【００５０】第二の変法の場合、所望により、界面活性
剤を除去し、複合体を回収するためにその懸濁液は引き
続いて透析することができる。このような方法の原理は
例えばHofland et al.(1996, PNAS 93, p 7305-7309)に
より、またPhilippot et al.(G. Gregoriadis, 81-89,
CRC Press 1993)による文献の第II章に記載されてい
る。
【００５１】第一の変法は得られる複合体の大きさと再
生産性の点で優れた結果をもたらすことが実証されてい
る。
【００５２】第三の変法を用いる場合には、１種以上の
陽イオンポリアミンテロマー化合物または組成物と緩衝
液を含んでなる懸濁液を調製する。次いでこの懸濁液を
視覚的に均一になるまで超音波処理にかける。次いでこ
のポリアミンテロマー化合物懸濁液を適当な圧力の下、
所定のポアサイズの２つの微孔膜を通して押し出し成形
する。この懸濁液はリポソームからなってもよく、次い
でそれを負電荷を有する有効物質溶液と混合する。この
超音波処理−押し出し法は当技術分野でよく知られてい
る。
【００５３】このようにして形成された複合体の特徴は
いくつかの測定法を用いて評価することができる。それ
らは例えば： 有効物質との複合化状態：有効物質がが核酸である場合
は、遊離核酸に関する試験のためゲル電気泳動を用い
る、 粒子径：準弾性光散乱による、長期にわたって沈殿が生
じないことなどである。
【００５４】本発明はまた、前記に挙げた方法によって
得られる複合体に関する。
【００５５】本発明のもう１つの態様によれば、in vit
ro、ex vivoまたはin vivoにおいて少なくとも１種の有
効物質、特に核酸を細胞へ導入するための本発明の化合
物、組成物または複合体の使用が提供される。さらに特
には、それはヒトまたは動物の治療処置法に関する。
【００５６】本発明によれば、「細胞」には原核細胞お
よび真核細胞、酵母細胞、植物細胞、ヒトまたは動物細
胞、特に哺乳類細胞が含まれる。特には癌細胞を記載す
べきである。本発明はin vivoにおいて腸管、または
肺、気管、皮膚、筋肉、脳、肝臓心臓、脾臓、骨髄、胸
腺、膀胱、リンパ系、血液、膵臓、胃、腎臓、卵巣、精
巣、直腸、末梢または中枢神経系、眼、リンパ器官、軟
骨、内皮組織の管腔空間に適用できる。好ましい具体例
では、その細胞は筋肉細胞、造血系幹細胞または気道細
胞、さらに特には気管または肺細胞、好ましくは呼吸器
上皮細胞であろう。
【００５７】本発明のこの態様によれば、治療、予防ま
たは予防接種目的用の医薬製剤としての使用のためのポ
リアミンテロマー化合物、組成物または／有効物質複合
体が提供される。かかる複合体は、少なくとも１種の有
効物質、特に核酸を細胞へ導入することからなる治療処
置に使用できる。
【００５８】本発明はまた、核酸を細胞へ導入する方法
であって、細胞を少なくとも１種の本発明の複合体と接
触させることを含んでなる方法を包含する。この方法は
in vivoにおけるこの複合体の動物細胞への直接投与に
よるか、または動物から回収した細胞をin vitroで処理
し、その後動物の体内へ再導入する(ex vivo法)ことに
より適用できる。in vitroにおける適用では、細胞を適
当な培地で培養し、本発明の複合体からなる懸濁液と接
触するように置く。一定のインキュベーション期間の
後、細胞を洗浄、回収する。有効物質が導入されたこと
は、いずれの適当な方法によってでも（結局は細胞溶解
の後に）確認できる。
【００５９】導入(introduction)または移入(transfer)
方法はそれ自身よく知られている。「導入または移入」
とは、負電荷を有する有効物質が細胞に導入され、この
工程の終了時には細胞の内部、または細胞膜中もしくは
細胞膜上にあることを意味する。有効物質が核酸であれ
ば、これは「トランスフェクション」と呼ばれる。トラ
ンスフェクションはいずれの適切な方法でも、例えばそ
の遺伝子の発現を測定することにより、または発現した
タンパク質の濃度を測定することにより確認できる。
【００６０】本発明は特に、ヒトまたは動物の治療、予
防、予防接種処置用、さらに明示すれば遺伝子治療用の
医薬製剤の製造のための本発明の化合物、組成物または
複合体の使用に関する。
【００６１】この特定の場合においては、本発明の医薬
製剤はまた、医薬上許容される注射可能な担体を含んで
なる。この担体は、等張、低張またはやや高張であり、
スクロース溶液により与えられるような比較的低いイオ
ン強度を有することが好ましい。いずれの適した溶媒、
滅菌した発熱物質を含まない水、分散媒質、被覆剤およ
び／またはその同等物を含有する水性もしくはいく分か
水性の液体担体がこれに含まれる。この医薬製剤のpHは
適切に調節し、緩衝させる。
【００６２】例えば、かかる医薬製剤は、少なくとも１
種の本発明の化合物、組成物もしくは複合体を、当業者
に十分に公知な方法を用いて、注射可能な油相、例えば
脂肪酸化合物もしくはパーフルオロオクチルブロミド
（Perflubron(登録商標)）などのフルオロカーボン中に
逆ミセルもしくはエマルジョンの形で可溶化させること
により、または油相もしくは分散させたフルオロカーボ
ン中に水性エマルジョンの形で可溶化させても調製する
ことができる。
【００６３】本発明の医薬製剤は脊椎動物組織に投与で
きる。この投与は皮内、皮下、静脈内、筋肉内、鼻腔
内、脳内、気管内、動脈内、腹膜内、膀胱内、胸膜内、
冠状動脈内または腫瘍内注射により、シリンジまたは他
の器具を用いて行ってよい。吸入またはエアゾル経路の
ような経皮投与も考えられる。
【００６４】本発明によれば、この医薬製剤は、筋肉、
皮膚、脳、肺、肝臓、脾臓、骨髄、胸腺、心臓、リン
パ、骨、軟骨、膵臓、腎臓、胆嚢、胃、腸、精巣、卵
巣、子宮、直腸、神経系、眼、腺、結合組織、血液、腫
瘍などを含む脊椎動物の身体の標的組織に投与すること
ができる。
【００６５】in vivoにおける遺伝子治療に適用する場
合、本発明により、投与した製剤が重大な免疫反応を引
き起こす恐れなく患者に繰り返し投与することが可能な
る。投与は単回用量でも繰り返し用量でもよく、１回ま
たは一定の時間後の数回投与してもよい。繰り返し投与
により、１回に投与する有効物質、特にＤＮＡの用量を
減らすことができる。投与経路および適切な用量はいく
つかのパラメーター、例えば個々の患者、治療される疾
病、または導入される核酸の相関により異なる。
【００６６】さらに詳しくは本発明は、少なくとも１種
の前記複合体を含んでなり、かつまたこの複合体のトラ
ンスフェクション能力を向上させ得る少なくとも１種の
アジュバントを組み込んでなる医薬製剤に関する。アジ
ュバントはクロロキン、プロピレングリコール、ポリエ
チレングリコール、グリセロール、EtOH、1-メチルL--2
-ピロリドンもしくはそれらの誘導体などのプロトン性
極性化合物、またはジメチルスルホキシド(DMSO)、ジエ
チルスルホキシド、ジ-n-プロピル-スルホキシド、ジメ
チルスルホン、スルホラン、ジメチルホルムアミド、ジ
メチルアセトアミド、テトラメチルウレア、アセトニト
リルもしくはそれらの誘導体などの非プロトン性極性化
合物からなる群より選択すればよい。
【００６７】本発明のin vivo処置の場合、トランスフ
ェクション率を向上させるため、前記医薬製剤を投与す
る前に、患者に対してマクロファージ涸渇処置を行って
もよい。かかる技術は文献に記載されている（特にVan
Rooijen et al., 1997, TibTech, 15, 178-184を参
照）。
【００６８】最後に本発明は、前記のような複合体、特
に原核細胞、酵母または真核細胞、特に哺乳類細胞、さ
らに特に癌細胞でトランスフェクトした細胞に関する。
本発明は特に気道細胞、特に気管または肺細胞に対し、
またなおさらに呼吸器上皮細胞に対して有効である。
【００６９】以上のように本発明を説明したが、用いた
用語は説明のためのものであって、限定を意図するもの
でないと理解すべきである。上記教示に照らして、本発
明において多くの変形や変更が存在し得ることは明らか
である。従ってそれは添付の請求の範囲内にあると理解
され、本発明は特に記載されたもの以外でも実施され得
る。
【００７０】
【実施例】実施例1：式III-L1a〜III-L1m、III-L2a〜II
I-L2d、およびIII-L3a〜III-L3eのポリアミンテロマー
の合成 1.1 一般的な実験および分析条件 示したようなシリカゲル60(Merck，70-230メッシュ)お
よびクロロホルム(CHCl ３)、ジクロロメタン(CH２C
l２)、メタノール(MeOH)、ジエチルエーテル(Et２O)、
またはそれらの混合物を用いて、カラムクロマトグラフ
ィーによる精製を行った。重合反応の進行後に、シリカ
プレートF２５４(Merck)における薄層クロマトグラフィ
ー(TLC)を行った。以下の展開系を用いた：紫外線；KMn
O４；H２SO４/MeOH；Dragendorff試薬；DTNB(5,5'-ジチ
オビス(2-ニトロ安息香酸))；ニンヒドリン試薬(Sigm
a)。
【００７１】Bruker FT-ITS 45分光光度計を用いてIRス
ペクトルを記録した。KBrディスク法により固体化合物
を分析した；液体は、2個のKBrブロック間に薄膜を形成
して分析した。１H、１３Cおよび１９F NMRスペクトル
は、Bruker AC-200を用い、それぞれ200、50.3および18
8.3MHzにおいて記録した。ケミカルシフトは、１Hにつ
いてはCHCl３(σ7.27)またはCH３OD(σ3.35)に対して、
１３CについてはCDCl３(σ76.9)に対して測定し、TMSに
対して間接的に表し、１９Fについては内部標準としてC
Cl３Fに対して測定した。以下の略号をシグナルの多重
性を記載するために使用する：S（一重線）、d（二重
線）、t（三重線）、q(四重線）、m（多重線）。ケミカ
ルシフトはppmで表し、以下のように記載する：ppmで表
すシフト（多重性、完全性、共役、属性）。質量スペク
トル(MS)は、大気圧イオン化(API)源を装備したFinning
an MAT TSQ 7000を用いて記録した。試験する分子の極
性部分によっては、電子噴霧イオン化(ESI)質量分光光
度法を用いた。陽性モードで使用されるこの方法は、M+
H＋またはM+Na＋シグナルのいずれかを示し得る。ま
た、FABモードのVG-ZAB-HF質量分光光度計または陽イオ
ン化電子噴霧モードのFisons BioQ quadrupol、VG Bio
Techによっても分子を分析した。元素分析は、Service
Central de Microanalyses de CNRSにより行った。
【００７２】1.2 テロゲンL-SHの合成 1.2.1 テロゲンL1-SH（反応スキーム1の化合物3a）の
合成 テロゲン3aの合成は、前記の反応スキーム1に記載した
ように、2段階で行う。
【００７３】1.2.1.1 3,3'-ジチオビス(N,N-ジオクタ
デシルプロパンアミド（反応スキーム1の化合物2a)の合
成 50mlの無水CHCl３中、4.0g(7.2ミリモル)の塩酸ジオク
タデシルアンモニウム(化合物1a；Fluka)および8ml(58
ミリモル)のトリエチルアミン溶液に、3mlの無水CHCl３
中、0.88g(3.6ミリモル)の3,3'-塩化ジチオジプロパノ
イル（SOCl２と3,3'-ジチオジプロピオン酸(Fluka)との
反応により得られる）を室温にて滴下した。室温にて2
日放置した後、この反応混合物を0.1N HCl水溶液で洗浄
する。この有機相を濃縮し、その濃縮物をシリカカラム
上でクロマトグラフィー(溶出液：CH２Cl２)に付して、
2.1g(1.75ミリモル，49%)の2aを白色固体として得る。
[TLC(ヘキサン/Et２O 1/1, KMnO４) Rf = 0.4, IR(v cm
-l,KBr): 1639 (CO). １H NMR (CDCl３): δ 0.83(t, 1
2H, ３J = 6.0 Hz, CH３); 0.90-1.40 (m, 120H,(CH ２)
１５); 1.40-1.65 (m, 8H, CH２CH２NCO); 2.60-2.80
(m, 4H, CH２CON); 2.80-3.05 (m, 4H, CH２S); 3.10-
3.40 (m, 8H, CH２N). １３C NMR (CDCl３):δ 14.2
(CH３); 22.8 (CH２CH３); 27.1, 27.2, 27.7, 29.5, 2
9.6, 29.7および29.9 ((CH２)１４); 32.0 (CH２CH２CH
３); 33.5 (CH２S); 34.9 (CH２CO); 46.5および48.5
(CH２N); 170.4 (s, CO). MS-ESI (M+Na＋) m/z = 1240
C７８H １５６N２O２S２の理論値 + Na＋ = 1239)].
【００７４】1.2.1.2. 化合物3aの合成（反応スキーム
1） 60℃にて、10mlの酢酸中の2.04g(1.67ミリモル)の化合
物2a溶液に、700mg(10.7ミリモル)の亜鉛粉末を、3時間
の間に4回に分けて加える。この反応混合物を60℃にて3
時間攪拌し、次いで熱濾過する。CHCl３を加え、中性と
なるまで水洗する。この有機相をNa２SO４上で乾燥し、
次いで濾過および蒸発させる。得られた濃縮物をシリカ
カラム上でクロマトグラフィー（溶出液CHCl３）に付
す。1.67g(2.73ミリモル，82%)のテロゲン3aが白色固体
として得られる。[TLC (ヘキサン/Et２O 2/3, DTNB) Rf
= 0.6; １H NMR (CDCl３); δ 0.80 (t, 6H, ３J = 6.
0 Hz, CH３); 1.00-1.35 (m, 60H, (CH２)１５); 1.35-
1.60 (m, 4H, CH２CH２N); 1.63 (t, 1H, ３J = 8.0 H
z,SH); 2.55 (t, 2H, ３J = 6.5 Hz CH２CON); 2.65-2.
85 (m, 2H, CH２S); 3.05-3.35 (m, 4H, CH２N). １３
C NMR (CDCl３): δ 14.2 (CH３); 20.8 (CH２S); 22.8
(CH２CH３); 27.0, 27.2, 27.9, 29.2, 29.4,29.5およ
び29.8 ((CH２)１４); 32.0 (CH２CH２CH３); 37.2 (CH
２CO); 46.2および48.0 (CH２N); 170.2 (CO). MS-ESI
m/z = 610(C３９H７９NOSの計算値+ H ＋ = 610)].
【００７５】1.2.2 テロゲンL1-SH（反応スキーム1の
化合物3b）の合成 テロゲン3bの合成は、前記のように1段階で行う（反応
スキーム1）。0℃に維持した2mlの無水CHCl３中の、21
μl(0.24ミリモル)の3-メルカプトプロピオン酸(Aldric
h)溶液に、51mg(0.24ミリモル)のジシクロヘキシルカル
ボジイミド(DCC；Aldrich)を加え、次いで8mlの無水CHC
l３中33mg(0.24ミリモル)の1-ヒドロキシ-1H-ベンゾト
リアゾール(HOBt，Aldrich)および100mg(0.24ミリモル)
のジテトラデシルアミン1bを加える。この反応混合物を
室温にて12時間攪拌維持し、次いでCHCl３で希釈して水
洗する。その有機相をNa２SO４上で乾燥し、濾過および
蒸発させる。この濃縮物を、シリカカラム上でクロマト
グラフィー（溶出液CHCl３）に付す。37mg(0.07ミリモ
ル，31%)のテロゲン3bが白色固体として得られる。[TLC
(CH２Cl２, DTNB) Rf = 0.5. １H NMR (CDCl３): δ
0.81 (t, 6H, ３J = 6.0 Hz, CH３); 1.00-1.35 (m, 44
H, (CH２)１１); 1.35-1.60 (m, 4H, CH２CH ２N); 1.6
5 (t, 1H, ３J = 8.2 Hz, SH); 2.55 (t, 2H, ３J = 6.
5 Hz CH２CO);2.65-2.85 (m, 2H, CH２S); 3.05-3.35
(m, 4H, CH２N). １３C NMR (CDCl３): δ 14.2 (C
H３); 20.5 (CH２S); 22.8 (CH２CH３); 27.0, 27.2, 2
7.9, 29.2,29.4, 29.5および29.7 ((CH２)１０); 32.0
(CH２CH２CH３); 37.2 (CH２CO);46.2および48.0 (CH２
NCO); 170.2 (CO).
【００７６】1.2.3 テロゲンL2-SH、化合物6a(Y=Trt)
の合成（反応スキーム2） テロゲン6a(Y=Trt[=トリチル])の合成は、Nα-Fmoc-im-
トリチル-L-ヒスチジンから出発し、4段階で行う（反応
スキーム2）。
【００７７】1.2.3.1 化合物4a(Y=Trt)(Fmoc)の合成
（反応スキーム2） 3.7g(5.9ミリモル)のNα-Fmoc-im-トリチル-L-ヒスチジ
ン(Sigma)を、25mlの無水CHCl３に溶解する。0.68g(5.9
ミリモル)のN-ヒドロキシスクシンイミド(NHS，Aldric
h)および1.2g(5.9ミリモル)のDCCをともに加える。この
反応混合物を室温にて24時間攪拌維持する。50mlの無水
CHCl３中、3.3g(5.9ミリモル)の塩化ジオクタデシルア
ンモニウム（化合物1a）および0.59g(5.9ミリモル)のト
リエチルアミンの溶液を、室温にて30分間かけて滴下す
る。この混合物をCHCl３還流下にて24時間加熱し、次い
で溶媒を蒸発させる。乾燥させた反応混合物をCHCl３中
にとり、水洗する。この有機相を濃縮し、シリカカラム
上でクロマトグラフィー（溶出液：CHCl３/MeOH，98/
2）に付して、3.2g(2.8ミリモル，48%)の化合物4a(Y=Tr
t)(Fmoc)を無色の油状物質として得る。[TLC (CH２Cl３
/MeOH, 9/1, KMnO４)Rf = 0.4. IR (v cm-1.KBr); 1719
(OCON); 1638 (CON). １H NMR (CDCl３); δ0.80 (t,
6H, ３J = 6.0 Hz, CH３); 0.97-1.35 (m, 60H, (CH２)
１５); 1.35-1.55 (m, 4H, CH２CH２NCO); 2.70-3.20
(m, 6H, CH２NCOおよびCH２im); 4.05-4.35 (m, 3H, CH
CH２OCO); 4.85 (td, 1H, ３J = 8.0 Hz, ３J = 8.7 H
z, CHCH ２im); 5.80 (d, 1H, ３J = 8.7 Hz, NH); 6.65
(s, 1H, CH=C(im)); 6.95-7.05(m, 6H, Trt); 7.10-7.
40 (m, 9H, Trt, 4H Fmoc, 1H CH=N); 7.50 (d, 2H, ３
J = 8.0 Hz, Fmoc); 7.68 (d, 2H, ３J = 8.0 Hz, Fmo
c). １３C NMR (CDCl３):δ 14.2 (CH３); 22.7 (CH２C
H３); 27.0, 27.2, 27.7, 29.4, 29.6, 29.7および29.8
((CH２)１４); 32.0 (CH２CH２CH３); 33.0 (CH２im);
46.5および48.0(CH２NCO); 47.3 (CH２CH (Fmoc)); 5
1.1 (CHNH); 67.1 (CH２OCO); 75.2 (C-Ph); 119.4 (CH
=C); 136.5 (CH=C); 138.7 (CH=N); 120.0, 125.4, 12
7.1, 127.7.(CH (Fmoc)); 128.1, 129.9 (CH (Trt)); 1
41.3および144.1 (C (Fmoc)); 142.6 (C (Trt)); 155.8
(CO (Fmoc)); 171.2(s, NCO)].
【００７８】1.2.3.2 化合物4n(Y=Trt)の合成（反応ス
キーム2） 2.9g(2.6ミリモル)の化合物4a(Y=Trt)(Fmoc)および36g
(0.41モル)のモルホリンを50mlのDMFに溶解する。この
反応混合物を室温にて2時間攪拌維持し、次いで濃縮し
て、シリカカラム上でクロマトグラフィー（溶出液：CH
Cl３/MeOH，96/4)に付して、2.0g(2.3ミリモル，86%)の
化合物4a(Y=Trt)を無色の油状物質として得る。[TLC (C
HCl３/MeOH, 98/2, UV, KMnO４) Rf = 0.8. IR (v cm-
1.KBr); 1642 (CO). １H NMR (CDCl３); δ 0.79 (t, 6
H, ３J = 6.0 Hz, CH３); 0.95-1.30 (m, 60H, (CH２)
１５); 1.30-1.55 (m, 4H, CH２CH２NCO); 2.55および
2.80 (ABX系のAB部, 2H, ２JＡＢ = 14.0 Hz, ３JＡＸ
= 7.6 Hzおよび３JＢＸ = 5.6Hz, CH２im); 2.88 (m, 4
H, CH２NCO); 3.90 (dd, ３J = 7.5 Hz, ３J = 5.6 Hz,
NCHCO); 6.54 (s, 1H, CH = C(im)); 7.0-7.15および
7.20-7.26 (m, m, 6H, 9H, Trt); 7.29 (s, 1H, CH=N(i
m)). １３C NMR (CDCl３): δ 14.2 (CH３); 22.7 (CH
２CH３)); 27.0, 27.2, 27.7, 29.4, 29.6, 29.7, 29.8
および29.9 ((CH２)１４); 32.0 (CH２CH２CH３); 35.8
(CH２im); 46.5および47.7 (CH２N); 51.4(CHN); 75.2
(C-Ph); 119.5 (CH=C); 137.6 (CH=C); 138.8 (CH=N);
128.1および129.8 (CH(Trt)); 142.5 (C (Trt)); 174.
5 (CO)].
【００７９】1.2.3.3 化合物5a(Y=Trt)の合成（反応
スキーム2） 前記の化合物2aのためのプロトコールを、0.27g(1.13ミ
リモル)の3,3'-塩化ジチオジプロピオニル、2.04g(2.26
ミリモル)の化合物4a(Y=Trt)、0.91g(9.06ミリモル)の
トリエチルアミンおよび15mlのCHCl３に適用した。1.52
g(0.77ミリモル，34%)の化合物5a(Y=Trt)が白色固体と
して得られた。[TLC (CHCl３/MeOH, 98/2, UV, KMnO４)
Rf = 0.3. IR (v cm-1. KBr); 1631 (CO). １H NMR (C
DCl３);δ 0.80 (t, 6H, ３J = 6.0 Hz, CH３); 0.95-
1.30 (m, 60H, (CH２)１５); 1.30-1.70 (m, 4H, CH２C
H２NCO); 2.1-3.4 (m, 10H, CH２S, CH２CO, CH２Nおよ
びCHCH２); 4.99 (m, 1H, CHCO); 6.49-6.60 (m, 1H, C
H = C (im [= イミダゾール])); 7.00-7.15 (m, 6H, Tr
t); 7.15-7.35 (m, 10H, TrtおよびCH=N). １３CNMR (C
DCl３): δ 14.2 (CH３); 22.7 (CH２CH３); 27.0, 27.
2, 27.7, 29.4, 29.7および29.8 ((CH２)１４); 32.0
(CH２CH２CH３); 33.6 (CH２S); 34.7 (CH ２CO); 35.8
および35.9 (CH２im); 46.3および48.0 (CH２NCO); 49.
7 (CHN); 75.2 (NC (Trt)); 119.4および119.6 (CH=C);
136.6および136.8 (CH=C); 138.4 (CH=N); 128.0, 12
9.8 (CH (Ph)); 142.5および142.6 (C (Ph)); 169.9, 1
70.9および171.7 (CO),（あるシグナルの分裂は、化合
物5a(y=Trt)がCONHのレベルで偏左右異性体およびシス
／トランス異性体の混合物であることに起因するもので
ある）].
【００８０】1.2.3.4 化合物6a(Y=Trt)の合成（反応ス
キーム2） 7mlの無水THFに溶解した1.01g(0.51ミリモル)の化合物5
a(Y=Trt)に、0.24g(6.1ミリモル)のNaBH４を加える。こ
の反応混合物を、THF還流下で48時間攪拌維持する。室
温まで冷却した後に、数滴の水を加える。この反応混合
物を濃縮乾燥し、その残渣をCHCl３中に取り、0.05Nの
塩酸水溶液で洗浄する。この有機相を乾燥、濃縮する。
シリカカラムクロマトグラフィーによる精製の後に（溶
出液：CHCl３/MeOH 98/2）、0.88g(0.44ミリモル，87%)
の化合物6a(Y=Trt)が無色の油状物質として得られる。
[TLC (CHCl３/MeOH, 96/4, UV, DTNB) Rf = 0.8. １H N
MR(CDCl３); δ 0.79 (t, 6H, ３J = 6.0 Hz, CH３);
0.90-1.80 (m, 64H, (CH２)１６); 1.80-3.80 (m, 10H,
CH２im, CH２S, CH２COおよびCH２N); 4.90-5.20(m, 1
H, CHCO); 6.40-6.70 (m, CH = C); 6.90-7.10 (m, 6H,
Trt); 7.10-7.30(m, 10H, TrtおよびCH =N). １３C NM
R (CDCl３): δ 14.2 (CH３); 20.5 (CH２SH); 22.8 (C
H２CH３); 26.9, 27.7, 29.7, 29.8および29.9 ((CH２)
１４); 32.0 (CH２CH２CH３); 33.5 (CH２CO); 46.3お
よび46.5 (CH２N); 48.1および48.4(CHN); 76.9 (NC (T
rt)); 121.0および122.3 (CH=C); 134.0, 134.2および1
34.4(CH=C); 138.0および138.3 (C=N); 128.1, 128.5,
128.7, 129.7および129.8 (C (Ph)); 140.9(C (Ph)); 1
69.8, 171.1, 172.3および172.6(CO). MS-ESI: m/z= 98
9; Mの理論質量 = [C６４H１００N４O２S] + H＋ = 98
9)].
【００８１】1.2.4 反応スキーム2のテロゲンL2-SH、
化合物6b(Y=BOC)の合成 6b(Y=BOC)は、Nα-Fmoc-im-BOC-L-ヒスチジンから3段階
で得られる。
【００８２】1.2.4.1 化合物4b(Y=BOC)(Fmoc)の合成
（反応スキーム2） 1mlの無水CHCl３中の、500mg(1.04ミリモル)のNα-Fmoc
-im-L-ヒスチジン(Bachem)溶液に、0.15ml(1.04ミリモ
ル)のトリエチルアミンおよび488mg(1.04ミリモル)のPy
BroPn(登録商標)(Novabiochem)を加える。次いで、15ml
の無水CHCl３に溶解した1.09g(2.09ミリモル)の塩酸ジ
オクタデシルアンモニウム（化合物1）を加える。この
反応混合物を室温にて4時間攪拌維持し、次いで濃縮す
る。この乾燥反応混合物をCHCl３中に取り、水洗する。
この有機相を蒸発させて、その残渣をEt２Oで抽出す
る。濾液を濃縮して、シリカカラム上でクロマトグラフ
ィー（溶出液：CHCl３）に付す。550mg(0.56ミリモル，
53%)の化合物4b(Y=BOC)(Fmoc)が淡黄色の油状物質とし
て得られる。[TLC (CHCl３/MeOH, 99/1, KMnO４) Rf =
0.7. １H NMR (CDCl３); δ 0.84 (t, 6H, ３J = 6.0 H
z, CH３); 1.05-1.50 (m, 64H, (CH２)１６); 1.50-1.8
0 (m, 9H, CH３(BOC)); 2.75-3.70 (m, 6H, CH２NCOお
よびCH２im); 4.10-4.45 (m, 3H, CHCH２ OCO); 4.94
(td, 1H, ３J = 8.0 Hz, ３J = 8.7 Hz, CHCH２im); 5.
90 (d, 1H, ３J = 8.7 Hz, NH); 7.15 (s,1H, CH = C(i
m)); 7.05-7.45 (m, 4H, Fmoc); 7.55 (d, 2H, ３J =
8.0 Hz, Fmoc); 7.70 (d, 2H，３J = 8.0 Hz, Fmoc);7.
96 (s, 1H, CH = N (im)). １３C NMR (CDCl３): δ 1
4.2 (CH３); 22.7 (CH２CH３); 27.9 (CH３(BOC)); 27.
0, 27.1, 27.7, 29.5および29.8 ((CH２)１４); 32.0
(CH２CH２CH３); 33.0 (CH２im); 46.4および47.3 (CH
２NCO); 48.0 (CH２CH(Fmoc)); 51.1 (CHNH); 67.2 (CH
２OCO); 85.4 (C (BOC)); 114.8 (CH=C); 136.8 (CH=
C); 139.0 (CH=N); 120.0, 125.3, 127.1, 127.7. (CH
(Fmoc)); 141.3および144.1 (C (Fmoc)); 147.0 (CO(BO
C)); 155.8 (CO(Fmoc)); 171.2 (NCO)].
【００８３】1.2.4.2 化合物4b(Y=BOC)の合成（反応ス
キーム2） 390mg(0.39ミリモル)の化合物4b(Y=BOC)(Fmoc)および3.
6ml(60ミリモル)のモルフホリンを7mlのDMFに溶解させ
る。この反応混合物を室温にて3時間攪拌維持し、次い
で濃縮する。その残渣をEt２O中に取り、濾過する。Et
２O相を水洗し、蒸発させ、シリカカラム上でクロマト
グラフィー（溶出液：CHCl３次いでCHCl３/MeOH：99/1)
に付す。187mg(0.24ミリモル，62%)の化合物4b(Y=BOC)
が淡黄色の油状物質として得られる。[TLC (CHCl３/MeO
H, 9/1, UV, ニンヒドリン) Rf = 0.5. １H NMR (CDCl
３): δ 0.80 (t, 6H, ３J = 6.0 Hz, CH３); 1.05-1.3
0 (m,60H, (CH２)１５); 1.30-1.45 (m, 4H, CH２CH２N
CO); 1.45-1.60 (m, 9H, CH ３ (BOC)); 2.50および2.8
5 (ABX系のAB部, 2H, ２JＡＢ = 14.0 Hz, ３JＡＸ= 8.
0 Hzおよび３JＢＸ = 5.3 Hz, CH２im); 2.90-3.55 (m,
4H, CH２NCO); 3.90 (dd, ３J = 8.0 Hz, ３J = 5.3 H
z, NCHCO); 7.10 (s, 1H, CH=C(im)); 7.98(s, 1H, CH=
N(im))].
【００８４】1.2.4.3 化合物6b(Y=BOC)の合成（反応ス
キーム2） 0℃に維持した1.5ml(0.15ミリモル)の無水CH２Cl２中
の、化合物4b(Y=BOC)の溶液に、14μl(0.15ミリモル)の
3-メルカプトプロピオン酸、23mg(0.17ミリモル)のHOBt
および33mg(0.17ミリモル)の1-(3-ジメチルアミノプロ
ピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩(EDC，Aldrich)を
加える。この反応混合物を室温にて12時間攪拌維持した
後、CHCl３で希釈し、続いて8%NaHCO３水溶液、次いで
水で洗浄する。この有機相をNa２SO４上で乾燥させ、濾
過し、蒸発させる。得られた残渣をシリカカラム上でク
ロマトグラフィー（溶出液CH２Cl２ 、CH２Cl２/Et
２O：9/1)に付す。31mg(0.03ミリモル)の化合物6b(Y=BO
C)が淡黄色の油状物質として得られる。[TLC (CHCl３/M
eOH, 98/2, UV, DTNB, KMnO４) Rf = 0.4. １H NMR (CD
Cl ３): δ 0.80 (t, 6H, ３J = 6.0 Hz, CH３); 1.05-
1.45 (m, 64H, (CH２)１６); 1.45-1.75 (m, 9H, CH
３ (BOC)); 2.35-2.55 (m, 2H, CH２CO); 2.55-3.50
(m, 8H, CH２im, CH２SHおよびCH２N); 5.00-5.30 (m,
1H, CHCO); 6.70-6.85 (m, 1H, NH); 7.10 (s, CH=C);
7.95 (s, CH=N). １３C NMR (CDCl３): δ 14.2 (C
H３); 20.4 (CH２SH); 22.8 (CH２CH３); 27.9 (CH３
(BOC)); 26.9, 27.1, 27.6, 29.4および29.8 ((CH２)
１４); 32.0 (CH２CH２CH３); 32.1 (CH２im); 40.4 (C
H２CO); 46.4および48.0 (CH２N); 48.8 (CHN); 85.5
(C (BOC)); 114.7 (CH=C); 136.8 (C=CH); 138.8 (C=
N);; 147.5 (CO (BOC)); 170.0, 170.8 (CO)].
【００８５】1.2.5 テロゲンL2-SH（反応スキーム2Bの
化合物12）の合成 1.2.5.1 化合物10の合成（反応スキーム2B） 2mlの無水CH２Cl２中の、100mg(0.31ミリモル)のBoc-As
p(OBzl)-OH(Bachem)に、126mg(0.31ミリモル)の1b、0.1
2ml(0.92ミリモル)の無水NEt３および144mg(0.31ミリモ
ル)のPyBrop(登録商標)(Novabiochem)を加える。この反
応を、攪拌しながら還流下で24時間維持し、次いで濃縮
する。その残渣をCHCl３中に取り、5%KHSO４、8%NaHCO
３次いで水で連続的に洗浄する。その有機相をNa２SO４
上で乾燥させ、濾過し、蒸発させる。その残渣をシリカ
カラム上でクロマトグラフィー（溶出液：CHCl３〜CHCl
３/CH３OH：99/1)に付す。156mg(0.22ミリモル，71%)の
化合物10が無色の油状物質として得られる。
【００８６】[TLC (CHCl３/CH３OH, 85/15, ニンヒドリ
ン) Rf = 0.8. １H NMR (CDCl３): δ0.80 (t, 6H, ３J
= 6.0 Hz, CH３); 1.05-1.35 (m, 44H, (CH２)１１);
1.35-1.60 (m, 13H, CH３ (BOC)およびCH２CH２N); 2.
55および2.76 (ABX系のAB部,2H, ２J = 15.6 Hz, ３J =
7.0 Hz, ３J = 6.0 Hz, CH２CH); 3.00-3.40 (m, 4H,
CH２N); 4.80-4.95 (m, 1H, CH); 5.02 (s, 2H, CH２P
h); 5.32 (d, 1H, ３J= 9.4 Hz, NH); 7.25 (s, 5H, P
h). １３C NMR (CDCl３): δ 14.2 (CH３); 22.7 (CH２
CH３); 28.3 ((CH３) BOC)); 26.9, 27.0, 27.5, 29.3,
29.4, 29.6および29.7 ((CH２)１１); 32.0 (CH２CH２
CH３); 38.4 (CH２CO); 46.4, 47.4および48.0 (CH２N
およびCH２Ph); 66.6 (CH); 79.9(C (BOC)); 128.2, 12
8.3および128.5 (CH=CH); 135.8 (C=CH); 154.9 (CO (B
OC)); 170.3 (CO２); 170.5 (CON).
【００８７】1.2.5.2 化合物11の合成（反応スキーム2
B） 156mg(0.22ミリモル)の化合物10を、4.2ml(54.5ミリモ
ル)のTFAとともに、室温にて1時間攪拌する。シクロヘ
キサンの存在下、過剰のTFAを蒸発させて除去する。126
mg(0.22ミリモル，100%)の化合物11が無色の油状物質と
して得られる。
【００８８】TLC (CHCl３/CH３OH, 95/5, ニンヒドリ
ン) Rf = 0.6. １H NMR (CDCl３): δ 0.83 (t, 6H, ３
J = 6.0 Hz, CH３); 1.05-1.75 (m, 48H, (CH２)１２);
2.70-3.60 (m, 6H, CH２NおよびCH２CH); 4.55-4.75
(m, 1H, CH); 5.08 (m, 2H, CH２Ph);7.28 (s, 5H, P
h). １３C NMR (CDCl３): δ 14.2 (CH３); 22.8 (CH２
CH３); 26.9, 27.1, 27.3, 28.8, 29.3, 29.5, 29.6お
よび29.8 ((CH２)１１); 32.0(CH２CH２CH３); 35.4 (C
H２CO); 46.7, 47.3および48.0 (CH２NおよびCH２Ph);6
7.7 (CH); 128.7 (CH=CH); 135.1 (C=CH); 161.9 (q,
１JＣＦ = 35H, CF３CO ２ −); 167.1 (CO２); 169.7 (C
ON).
【００８９】1.2.5.3 化合物12の合成（反応スキーム2
B） 154mg(0.21ミリモル)の化合物11に0.1ml(0.72ミリモル)
の無水NEt３および無水CH２Cl２ 10ml中の0.18mlの3-メ
ルカプトプロピオン酸(Aldrich)溶液1.5ml(0.31ミリモ
ル)を加える。この溶液を、窒素雰囲気下で0℃に維持
し、次いで45mg(0.33ミリモル)のHOBtを加える。5分後
に、64mg(0.33ミリモル)のEDCおよび1mlの無水CH２Cl２
を加える。この反応混合物を、室温にて17時間攪拌放置
し、次いで濃縮する。この残渣をCHCl３中に取り、8%Na
HCO３、5%KHSO４水溶液、次いで水で連続的に洗浄す
る。その有機相をNa２SO４上で乾燥させ、濾過し、蒸発
させる。その残渣をシリカカラム上でクロマトグラフィ
ー（溶出液：CH２Cl２/ヘキサン：8/2〜CH２Cl２)に付
して、55mgの出発化合物8(36%)および65mg(0.09ミリモ
ル；43%)の化合物12を、無色の油状物質として得る。
【００９０】TLC (CHCl３， ニンヒドリン, DTNB) Rf =
0.2. １H NMR (CDCl３): δ 0.80 (t, 6H, ３J = 6.0
Hz, CH３); 1.05-1.75 (m, 48H, (CH２)１２); 1.49
(t, 1H， ３J = 8.2 Hz, SH); 2.39 (t, 2H, ３J = 6.5
Hz, CH２CONH); 2.50-2.90 (m, 4H, CH２SHおよびCH２C
H); 3.00-3.45 (m, 4H, CH２N); 5.02 (s, 2H, CH２P
h);5.22 (dd, 1H, ３J = 15.0 Hz, ３J = 6.5 Hz, CH);
6.90-7.05 (m, 1H, NH); 7.26 (s, 5H, Ph). １３C NM
R (CDCl３): δ 14.2 (CH３); 20.4 (CH２SH); 22.8(CH
２CH３); 26.9, 27.1, 29.3, 29.5および29.8 ((CH２)
１１); 32.0 (CH２CH ２CH３); 38.2 (CH２CO); 40.2 (C
H２CONH); 46.0, 46.6および48.2 (CH２NおよびCH２P
h); 66.8 (CH); 128.4, 128.5および128.6 (CH=CH); 13
5.7 (C=CH); 170.1および170.3 (CO).
【００９１】1.2.6 反応スキーム3のテロゲンL3-SH、
化合物9の合成 テロゲン9は、rac-3-メルカプトプロパン-1,2-ジオール
から、3段階で得られた。
【００９２】1.2.6.1 rac-3-ベンジルチオプロパン-1,
2-ジオール（反応スキーム3の化合物7）の合成 3.2g(29ミリモル)のrac-3-メルカプトプロパン-1,2-ジ
オール(Ardrich)を、28mlの2N NaOHおよび35mlのEtOHの
混合溶液中に溶解する。0℃に維持したこの溶液に、5.6
g(44ミリモル)のベンジルクロリドを滴下する。チオー
ルの反応が完了した後に(TLC)、HClでpHを5に調整し、
溶媒を蒸発させる。その残渣を蒸留精製すると(沸点：1
50℃，0.4mmHg)、3.9g(20ミリモル，68%)の化合物7が無
色の油状物質として得られる。[TLC (CHCl３/MeOH 98/
2, DTNB, UV) Rf = 0.3. １H NMR (CDCl３): δ 2.59
(d, 2H, ３J = 6.0 Hz, CH２SBn [Bn = benzyl]); 3.45
-3.78(m, 2H, CH２O); 3.78-3.91 (m, 3H, CHおよびSCH
２Ph); 7.26-7.50 (m, 5H, C ６H５). １３C NMR (CDCl
３): δ 34.5 (CH２SBn); 36.5 (SCH２Ph); 65.3 (CH ２
O); 70.7 (CH); 127.2および128.9 (C オルトおよびパ
ラ); 128.6 (C メタ);138.0 (第四C)].
【００９３】1.2.6.2 rac-1,2-ジオクタデシルオキシ-
3-ベンジルチオ-プロパン（反応スキーム3の化合物8）
の合成 3.9g(20ミリモル)の化合物7および15g(43ミリモル)のス
テアリルメシレートを30mlのEt２Oに溶解する[ステアリ
ルメシレートは、ピリジン中での塩化メシルと1-オクタ
デカノールの反応により得られる]。[TLC (CH２Cl
２， H２SO４， UV)Rf = 0.6. １H NMR (CDCl３): δ
0.85 (t, 3H, ３J = 5.8 Hz, CH３); 1.15-1.55 (m, 30
H,(CH２)１５); 1.65-1.85 (m, 2H, CH２CH２OMs); 2.9
7 (s, 3H, CH ３S); 4.19 (t, 2H, ３J = 6.6 Hz, CH２O
Ms). １３C NMR (CDCl３): δ 14.1 (CH３); 22.7 (CH
２CH３); 25.4 (CH２CH２CH２O); 29.0, 29.2, 29.3, 2
9.4, 29.5, 29.6および29.7((CH２)１３); 31.9 (CH２C
H２CH３); 37.4 (CH３S); 70.2(CH２OMs)]。この溶液
に、0.94g(2.8ミリモル)の硫化水素テトラブチルアンモ
ニウム(Aldrich)および25mlの9N KOH水溶液を加える。
この反応混合物をEt２O還流下にて96時間維持する。そ
の有機相を水洗し、次いで蒸発させ、その残渣をシリカ
カラム上でのクロマトグラフィーにより精製する（溶出
液：石油エーテル/Et ２O，95/5）。10.5g(15ミリモル，
76%)の化合物8が、白色固体として得られる。[TLC (石
油エーテル/Et２O, 95/5, H２SO４) Rf = 0.8. １H NMR
(CDCl３): δ0.82 (t, 6H，３J = 6.0 Hz，CH３); 1.1
0-1.36 (m, 60H, (CH２)１５); 1.39-1.62 (m, 4H, CH
２CH２O); 2.40-2.68 (m, 4H, CH２SBn); 3.30-3.52
(m, 7H, CH ２OおよびCHO); 3.68 (s, 2H, SCH２Ph); 7.
11-7.35 (m, 5H, C６H５). １３C NMR (CDCl３); δ 1
4.1 (CH３); 22.7 (CH２CH３); 26.2 (CH２ γ O); 29.
4; 29.5; 29.7; 29.8および30.1 ((CH２)１３); 32.0
(CH２CH２CH３); 32.9 (CH２SBz); 37.1 (SCH２PH); 7
0.4; 71.6および71.8 (CH２O); 78.6 (CHO); 126.9およ
び129.0 (C オルトおよびメタ);128.4 (C パラ); 138.6
(第四C)].
【００９４】1.2.6.3 反応スキーム3の化合物9の合成 2.3g(3.3ミリモル)の化合物8を、35mlの無水tBuOH（第
三ブタノール）に溶解する。この溶液に0.86g(38ミリモ
ル)のNaを加える。この反応混合物を12時間還流加熱(70
℃)する。次いで数滴の水を加える。溶媒を蒸発させた
後、残渣をヘキサン中に取り、次いで水洗する。有機相
を濃縮し、残渣をシリカカラム上でのクロマトグラフィ
ーにより精製すると（溶出液；CHCl３）、1.6g(2.6ミリ
モル，78%)の化合物9が白色固体として得られる。[TLC
(CHCl３, DTNB) Rf = 0.7.１H NMR (CDCl３); δ 0.80
(t, 6H, ３J = 6.0 Hz, CH３); 1.00-1.37 (m, 60H, (C
H ２)１５); 1.37-1.70(m, 4H, CH２CH２O); 2.48-2.76
(m, 2H, CH２S); 3.27-3.65 (m, 7H, CH２OおよびCH).
１３C NMR (CDCl３): δ 14.0 (CH３); 22.6 (CH２C
H３); 26.1 (CH２S); 29.3, 29.4, 29.6, 29.7, 30.0お
よび31.9 (CH２)１５);70.3, 71.0 および71.6 (CH
２O); 79.3(CH)].
【００９５】1.2.7 テロゲンL4-SH(6-デオキシ-6-チオ
-1,2:3,4-ジ-O-イソプロピリデン-D-ガラクトピラノー
スの合成 1.2.7.1 6-デオキシ-6-ヨード-1,2:3,4-ジ-O-イソプロ
ピリデン-D-ガラクトピラノースの合成 この合成は、P.J. Garegg and B.Samuelsson, JCS Perk
in I, 1980, 2866-2869に記載された通りに行った。
【００９６】120mlのトルエン中1.2g(4.7ミリモル)の1,
2:3,4-ジ-O-イソプロピリデン-D-ガラクトピラノース(A
ldrich)の溶液に、3.7g(14ミリモル)のトリフェニルホ
スフィン(Aldrich)、1.0g(14ミリモル)のイミダゾール
(Aldrich)および2.4g(9.4ミリモル)のヨウ素(Aldrich)
を加える。この反応混合物を、1,2:3,4-ジ-O-イソプロ
ピリデン-D-ガラクトピラノースが消失するまで、3.5時
間還流加熱する(次いでTLC/H２SO４を行う)。この混合
物を、NaHCO３飽和水溶液とともに5分間攪拌する。次い
で、有機相が着色するまでヨウ素を加える。この混合物
を15分間攪拌し、次いで脱色するまでNa２S２O３水溶液
を加える。この反応混合物を水洗し、有機相をNa２SO４
上で乾燥させ、濾過し、蒸発させる。この残渣をEt２O
で抽出する。濾液を濃縮し、シリカカラム上でクロマト
グラフィー（溶出液：石油エーテル〜石油エーテル/Et
２O、7/3)に付す。1.6g(4.2ミリモル，89%)の 6-デオキ
シ-6-ヨード-1,2:3,4-ジ-O-イソプロピリデン-D-ガラク
トピラノースが淡黄色固体として得られる。
【００９７】TLC (石油エーテル/ET２O 1/1 H２SO４）
Rf = 0.9. 1H NMR (CDCl３):δ 1.25,1.27, 1.36, 1.46
(4s, 12H, CH３); 3.12 (ABX系のA部, 1H, ２J = 9.9
Hz, ３J = 6.9 Hz, GalH６); 3.24 (ABX系のB部, 1H, ３
J = 6.9 Hz, GalH６); 3.85(ddd, 1H, ３J = 6.9 Hz,３
J = 6.9 Hz, ３J = 1.8 Hz, GalH５); 4.22 (dd, 1H,
３J = 5.0 Hz, ３J = 2.5 Hz, GalH２); 4.32 (dd, 1H,
３J = 7.8 Hz, ３J= 1.8 Hz, GalH４); 4.53 (dd, 1H,
３J = 7.8 Hz, ３J = 2.5 Hz, GalH３); 5.46 (d, 1H,
３J = 5.0 Hz, GalH１). １３C NMR (CDCl３); δ 2.3
(GalC６); 24.4, 24.8, 25.9および26.0 (CH３); 88.9
(GalC４); 70.5 (GalC３); 71.1 (GalC２); 71.5 (Gal
C５); 96.6 (GalC１); 108.8および109.5 (C(CH３)２).
【００９８】1.2.7.2 L4-SH、6-デオキシ-6-チオ-1,
2:3,4-ジ-O-イソプロピリデン-D-ガラクトピラノースの
合成 1mlのCH３CNおよび1ml DMF中の、200mg(0.54ミリモル)
の 6-デオキシ-6-ヨード-1,2:3,4-ジ-O-イソプロピリデ
ン-D-ガラクトピラノースおよび123mg(1.62ミリモル)の
チオ尿素(Aldrich)溶液を、ヨウ素誘導体が消費される
まで、36時間加熱(110℃)する(後にTLC/HSO４を行う)。
次いで0.5ml水中の、50mg(1.25ミリモル)のNaOH水溶液
を加え、得られた反応混合物を3時間加熱する(100℃)。
溶媒を蒸発させた後、その残渣をCHCl３中にとり、KHSO
４(pH5)水溶液および水で洗浄する。有機相をNa２SO４
上で乾燥させ、濾過し、蒸発させる。濃縮物をシリカカ
ラム上でクロマトグラフィー（溶出液：ヘキサン/Et
２O、95/5〜Et２O)に付して、128mg(0.23ミリモル，83
%)の、6-デオキシ-6-チオ-1,2:3,4-ジ-O-イソプロピリ
デン-D-ガラクトピラノースに相当するジスルフィドを
白色固体として得る。このジスルフィドを、1ml無水CHC
l３中の107g(0.69ミリモル)DTT(Aldrich)および0.1ml
(0.69ミリモル)の無水NEt３とともに亜硝酸気流下、2.5
時間放置する。この反応混合物を濃縮し、CHCl３中にと
り、KHSO４(pH=5)水溶液次いで水で洗浄する。有機相を
Na２SO４上で乾燥させ、濾過し、蒸発させる。その残渣
をシリカカラム上でクロマトグラフィー（溶出液：石油
エーテル〜石油エーテル/Et２O：95/5）に付す。107mg
（0.38ミリモル，72%）の 6-デオキシ-6-チオ-1,2:3,4-
ジ-O-イソプロピリデン-D-ガラクトピラノースが、無色
の油状物質として得られる。
【００９９】TLC (石油エーテル/ET２O, 7/3, DTNB, H
２SO４) Rf = 0.6. １H NMR(CDCl３):δ 1.22, 1.24,
1.33, 1.43 (s, 12H, CH３); 1.48-1.56 (m, 1H, SH);
2.48-2.73 (m, 2H, GalH６); 3,67 (t, 1H, ３J = 6.9
Hz, GalH５); 4.19-4.26 (m, 2H, GalH２およびGal
H４); 4.52 (dd, 1H, ３J = 7.8 Hz, ３J = 2.5 Hz, Ga
lH３); 5.42 (d, 1H, ３J = 5.0 Hz, GalH１). １３C N
MR (CDCl３); δ 24.2および24.3 (CH３); 24.8 (GalC
６); 25.8および25.9 (CH３); 69.7 (GalC４); 70.4 (G
alC３); 70.7 (GalC２); 71.1 (GalC５); 96.4 (Gal
C１); 108.5および109.1 (C(CH３)２).
【０１００】1.3.1 タキソゲンA(N-{2-[(BOC)アミノエ
チル]}アクリルアミド)の合成 タキソゲンAの合成は、下記に記載する通りに行う。
【０１０１】窒素雰囲気下、0℃にて、35mlの無水CHCl
３中の2.0g(12.4ミリモル)のN-(BOC)-エチレンジアミン
(Fluka)および5.0g(49.1ミリモル)のトリエチルアミン
に、5mlの無水CHCl３中の1.7g(18.7ミリモル)の塩化ア
クリロイル(Aldrich)溶液を、30分かけて滴下する。反
応混合物を室温にて90分間攪拌放置し、次いで濃縮乾燥
する。シリカカラムによる精製の後（溶出液：CHCl３/M
eOH 98/2)、2.0g(9.2ミリモル，75%)のタキソゲンAが白
色固体として得られる。[TLC (CHCl３/MeOH, 98/2, KMn
O４) Rf = 0.2. １H NMR (CDCl３): δ 1.36 (m, 9H, C
H３); 3.10-3.34 (m, 2H, CH２NH); 3.34-3.50 (m, 2H,
NCH２); 5.55 (dd, 1H, ３J = 9.6 Hz, ２J = 2.2 Hz,
CH=CH２); 6.05 (dd, 1H, ３J = 9.6 Hz, ３J = 17.0
Hz, CH=CH２); 6.20 (dd, 1H, ３J = 17.0 Hz, ２J =
2.2 Hz, CH=CH２). １３C NMR (CDCl ３): δ 28.3 (CH
３); 40.1および40.7 (CH２N); 79.6 (C(BOC)); 126.1
(CH２=CH); 130.9 (CH=CH２); 157.0 (CO(BOC)); 166.3
(COCH).元素分析：C１０H１８N２O３の理論値 (M=214.
2): C 56.05; H 8.46; N 13.07; Exp.: C 55.79; H 8.4
7; N 13.16.
【０１０２】1.3.2 タキソゲンB(N-{2-{ジメチルアミ
ノエチル}}アクリルアミド塩酸塩)の合成窒素雰囲気
下、0℃にて、18mlの無水CH２Cl２中の2.2ml(27.4ミリ
モル)の塩化アクリロイルに、25mlの無水CH２Cl２中の2
ml(18.3ミリモル)の無水2-ジメチルアミノエチルアミン
(Fluka)溶液を2.5時間かけて滴下する。この反応混合物
を、0℃にて2時間、次いで室温にて2時間攪拌放置し、
その後蒸発乾燥させると、白色固体としてタキソゲンB
が得られ、これをさらに精製を行わずに、その後のテロ
マー化反応に使用した。１H NMRによると、その純度は9
0%である。
【０１０３】TLC (CHCl３/CH３OH, 6/4, UV, KMnO４) R
f = 0.4. １H NMR(CD３OD): δ 3.00(s, 6H, NMe); 3.4
0および3.72 (t, t, J = 6.0 Hz,CH２N); 5.77 (dd, 1
H, J =3.8および8.1 Hz, HCH =); 6.28 (dd, 1H, J =
3.8および17.0 Hz, HCH=); 6.38 (dd, 1H, J = 8.1およ
び17.0 Hz,CH２=CH).１３C NMR (CD３OD): δ 34.2 (CH
２NHCO); 42.3 (NMe); 56.7 (CH２N); 126.0 (CH２=);
130.1 (CH=); 167.5 (CO).
【０１０４】1.4 テロマーの合成（反応スキーム4） 1.4.1 テロゲンL1-SH(化合物3a)およびタキソゲンAか
らのテロマーIII-L1a(BOC)〜III-L1m(BOC)の合成 15mlの無水アセトニトリル中の500mg(0.82ミリモル)の
テロゲン3a、1.68g(7.85ミリモル)のタキソゲンA（すな
わち、タキソゲン／テロゲンのモル比は9.5）および40m
g(0.24ミリモル)のAIBNの溶液を、テロゲン3aが消失す
るまで還流下で24時間攪拌する（後にTLC/DTNBを行
う）。この溶液を濃縮し、シリカカラムのクロマトグラ
フィーにかけ（溶出液：CHCl３〜CHCl３/MeOH 98/2)、C
HCl３を溶出液としてSephadex LH 20カラム(Sigma)によ
り分画する。この方法では、平均重合度(aDP)n=1のテロ
マーIII-L1a(BOC)が83mg、n=2のテロマーIII-L1b(BOC)
が85mg、n=3のテロマーIII-L1c(BOC)が93mg、そしてaDP
n=10のテロマーIII-L1f(BOC)が1.64gの白色固体として
単離できる。aDPは１H NMRにより測定する。aDPは、テ
ロゲンのメチル基に相当するシグナルに対するタキソゲ
ンのエチルジアミドメチレンに相当するシグナルの積分
比に等しい。
【０１０５】タキソゲン／テロゲンのモル比40でテロゲ
ン3aおよびタキソゲンAに適用したこのプロトコールに
より、同一条件の濃度および温度の下、クロマトグラフ
ィーおよび分画の後に、aDP n=4(テロマーIII-L1d(BO
C))、aDP n=5(テロマーIII-L1e(BOC))、aDP n=20(テロ
マーIII-L1h(BOC))、aDP n=40(テロマーIII-L1i(BO
C))、aDP n=50(テロマーIII-L1i(BOC))、およびaDP n=6
0(テロマーIII-L1j(BOC))のテロマーが得られる。aDP
は、前記同様、１H NMRにより測定する。
【０１０６】テロマーIII-L1a(BOC) (aDP n = 1). １H
NMR (CDCl３): δ 0.80 (t, 6H, ３J = 6.0 Hz, CH３);
1.00-1.30 (m, 60H, (CH２)１５); 1.25-1.75 (m, 13
H,CH２CH２NCO, およびCH３(BOC)); 2.43 (t, 2H, ３J
= 7.0 Hz, CH２CO); 2.51(t, 2H, ３J = 7.0 Hz, CH２C
O); 2,65-2.85 (m, 4H, CH２S); 3.05-3.35 (m, 8H, CH
２NCOおよびCH２NHCO); 5.20-5.30 (m, 1H, NH (BOC));
6.55-6.75 (m, 1H,NH). １３C NMR (CDCl３): δ 14.1
(CH３); 22.7 (CH２CH３)); 28.5 (CH３(BOC)); 27.0,
27.2, 27.3, 27.9, 28.3, 29.2, 29.4, 29.5および29.
8 ((CH２)１ ４); 32.0 (CH２CH２CH３); 33.4 (CH２S);
36.7 (CH２CO); 40.5 (CH２NHCO);46.3および48.1 (CH
２NCO); 79.5 (C(BOC)); 156.8 (NCO (BOC)); 170.7お
よび172.0 (CON).
【０１０７】テロマーIII-L1b(BOC) (aDP n = 2). １H
NMR (CDCl３): δ 0.80 (t, 6H, ３J = 6.0 Hz, CH３);
1.00-1.30 (m, 60H,(CH２)１５)); 1.30-1.75 (m, 22
H,CH２CH２NCO, CH３ (BOC)); 1.75-1.95 (m, 2H, CHC
H２CH２CONH); 1.95-2.30(m, 2H, CHCH２CH２CONH); 2.
30-2.85(m, 7H, CH２CON, CHCONH, CH２S); 3.00-3.60
(m, 12H, CH２NCOおよびCH２NHCO); 5.35-5.60(m, 2H,
NH (BOS)); 6.75-6.95 (m, 1H, NH); 6.95-7.10 (m, 1
H, NH). MS-ESI: m/z = 1061 (C５９H１１５N５O７Sの
計算値 + NA＋ = 1061).
【０１０８】テロマーIII-L1c(BOC) (aDP n = 3). １H
NMR (CDCl３): δ 0.80 (t, 6H, ３J = 6.0 Hz, CH３);
1.00-1.30 (m, 60H,(CH２)１５); 1.30-1.75 (m,(4+9
n)H, CH２CH２NCO, CH３ (BOC)); 1.75-2.90(m, (3n+
5)H, CHCO, CH２CON, CH２S,CH２CH２COおよびCH２CHC
O); 3.00-3.60 (m, (4+4n)H, CH２NCOおよびCH２NHCO);
5.15-5.65(m, nH, NH (BOC)); 6.45-7.20(m, nH, NH).
１３C NMR (CDCl３): δ 14.1 (CH３); 22.7 (CH２C
H３); 28.5 (CH３ (BOS)); 27.0, 27.2, 27.4, 27.9,
28.1, 28.4, 29.2, 29.4および29.8 ((CH２)１４および
CHCH２CH); 32.0 (CH２CH２CH３); 33.4および34.2(CH
２S); 35.0 (CH２CO); 39.9, 40.2, 40.5および40.9 (C
H２NHCO); 46.0 (CHCONH); 46.3および48.1 (CH２NCO);
79.5 (C(BOC)); 156.8 (CO (BOC)); 171.0, 173.3およ
び174.6 (CO).
【０１０９】テロマーIII-L1d(BOC) (aDP n=4).１H NMR
スペクトルはテロマーIII-LIc(BOC)のスペクトルと一致
するが、aDP n=4である。１３C NMR (CDCl３): δ 14.
1 (CH３); 22.7 (CH２CH３); 28.6 (CH３ (BOS)); 27.
0, 27.2, 27.9, 29.2, 29.4および29.8 ((CH２)１４お
よびCHCH２CH); 32.0 (CH２CH２CH３); 46.3および48.1
(CH２NCO); 79.6 (C (BOC)); 156.8 (CO (BOC)).炭素CH
２NHCO、CH２CO、CHCOに、また炭素NCOに相当する共鳴
は、それぞれ38〜43ppmの間、および170〜177ppmの間
に、強いシグナルとして現れる。CH２Sの炭素に相当す
る共鳴は検出されない。
【０１１０】テロマーIII-L1e(BOC)(aDP n = 5)。１H N
MRスペクトルはテロマーIII-L1c(BOC)のスペクトルに一
致するが、aDP n = 5である。１３C NMRスペクトルはテ
ロマーIII-L1d(BOC)のスペクトルと一致する。
【０１１１】テロマーIII-L1f(BOC)(aDP n=10)。１H NM
RスペクトルはテロマーIII-L1c(BOC)のスペクトルと一
致するが、aDP n=10である。１３C NMRスペクトルはテ
ロマーIII-L1d(BOC)のスペクトルと一致する。MS-ESI法
により、n=3〜15の化合物の存在が示される：n=3〜15の
m/z=(610 + 214.2n + 23)は、[C３９H７９NOS + n(C１
０H１８N２O３)+ Na＋]でn=3から15として計算される質
量と一致する。
【０１１２】テロマーIII-L1g(BOC)(aDP n=20)。１H NM
RスペクトルはテロマーIII-L1c(BOC)のスペクトルと一
致するが、aDP n=20である。１３C NMRスペクトルはテ
ロマーIII-L1d(BOC)のスペクトルと一致する。MS-ESI法
により、n=4〜33の化合物の存在が示される： n=4〜15
のm/z=(610 + 214.2n + 23)は、[C３９H７９NOS + n(C
１０H１８N２O３) + Na＋]でn=4〜15として計算される
質量と一致する； n=9〜33のm/2z=(305 + 107.1n + 23)
は、[C３９H７９NOS + n(C１０H１８N２O３) + 2Na＋]/
2でn=9〜33として計算される質量と一致する。
【０１１３】テロマーIII-L1h(BOC)(aDP n=40)。１H NM
RスペクトルはテロマーIII-L1c(BOC)のスペクトルと一
致するが、aDP n=40である。１３C NMRスペクトルはテ
ロマーIII-L1d(BOC)のスペクトルと一致する。
【０１１４】テロマーIII-L1i(BOC)(aDP n=50)。１H NM
RスペクトルはテロマーIII-L1c(BOC)のスペクトルと一
致するが、aDP n=50である。１３C NMRスペクトルはテ
ロマーIII-L1d(BOC)のスペクトルと一致する。
【０１１５】テロマーIII-L1j(BOC)(aDP n=60)。１H NM
RスペクトルはテロマーIII-L1c(BOC)のスペクトルと一
致するが、aDP n=60である。１３C NMRスペクトルはテ
ロマーIII-L1d(BOC)のスペクトルと一致する。
【０１１６】1.4.2 テロゲンL1-SH（化合物3a）および
タキソゲンAからのテロマーIII-L1k(BOC)〜III-L1m(BO
C)の合成 タキソゲン／テロゲンのモル比40で、テロゲン3bおよび
タキソゲンAに適用したこのプロトコールにより、同一
条件の濃度および温度の下、クロマトグラフィーおよび
分画の後に、aDP n=10のテロマーIII-L1k(BOC)、aDP n=
20のテロマーIII-L1l(BOC)、および aDP n=70のテロマ
ーIII-L1m(BOC)が得られる。aDPは、前記同様、１H NMR
により測定する。
【０１１７】テロマーIII-L1k(BOC) (aDP n=10). １H N
MR (CDCl３): δ 0.80 (t, 6H, ３J = 6.0 Hz, CH３);
1.00-1.30 (m, 44H, (CH２)１１); 1.30-1.75 (m, (9n
+4)H, CH２CH２NCOおよびCH３ (BOC)); 1.75-3.00 (m,
(3n+5)H, CHCO, CH２CON, CH２S, CH２CH２COおよびCH
２CHCO); 3.00-3.60 (m, (4+4n)H, CH２NCOおよびCH ２N
HCO); 5.15-5.65 (m, nH, NH (BOC)). MS-ESI法によ
り、n=2〜10の化合物の存在が示される： n=2〜10のm/z
=(498 + 214.2n + 23)は、[C３１H６３NOS + n(C１０H
１８N２O３) + Na＋]でn=2〜10として計算される質量と
一致する。
【０１１８】テロマーIII-L1l(BOC)(aDP n=20)。１H NM
RスペクトルはテロマーIII-L1k(BOC)のスペクトルと一
致するが、aDP n=20である。 MS-ESI法により、n=8〜20
の化合物の存在が示される： m/2z = (249 + 107.1n +
23)は、[C３１H６３NOS + n(C１０H１８N２O３) + 2Na
＋]/2でn=〜20として計算される質量と一致する。
【０１１９】テロマーIII-L1m(BOC)(aDP n=70)。１H NM
RスペクトルはテロマーIII-L1k(BOC)のスペクトルと一
致するが、aDP n=70である。
【０１２０】1.4.3 テロマーIII-L1a〜III-L1m：テロ
マーの脱保護 テロマーIII-L1a(BOC)〜III-L1m(BOC)の脱保護は、これ
らのテロマーを、大過剰量のトリフルオロ酢酸(TFA；Al
drich)に溶解し、室温にて1時間維持することにより定
量的に行った。過剰量のTFAは、シクロヘキサンの存在
下での蒸発により除去する。テロマーIII-L1a〜III-L1m
が白色固体として得られる。
【０１２１】テロマーIII-L1a (n = 1): １H NMR (CDCl
３/CD３OD): δ 0.85 (t, 6H, ３J= 6.0 Hz, CH３);
1.15-1.45 (m, 60H, (CH２)１５); 1.45-1.60 (m, 4H,
CH２CH２N); 2.51および2.57 (t, t, 2H, 2H, ３J = 7.
0 Hz, CH２CO); 2.70-2.90 (m, 4H, CH２S); 3.04 (t,
2H, ３J = 5.5 Hz, CH２NH３); 3.15-3.40 (m, 4H, CH
２N); 3.45 (t, 2H, ３J = 5.5 Hz, CH２NH).１３C NMR
(CDCl３/CD３OD): δ14.2 (CH３); 22.8 (CH２CH３);
27.1, 27.2, 27.8, 29.5, 29.6, 29.8 ((CH２)１４);
32.0 (CH２CH２CH３); 33.4 (CH２S); 34.8 (CH２CO);
37.5 (CH２NH３); 39.9 (CH２NH); 46.3および48.1 (CH
２N); 117.0 (q, １J = 300 Hz, CF３CO ２ −); 162.8
(q, ２J = 46 Hz, CF３CO２ −); 171.0および175.2 (C
O).
【０１２２】テロマーIII-L1b (n = 2): １H NMR (CDCl
３): δ 0.80 (t, 6H, ３J = 6.0Hz, CH３); 1.00-1.3
0 (m, 60H, (CH２)１５); 1.30-1.65 (m, 4H, CH２CH２
NCO); 1.65-1.95 (m, 2H, CHCH２CH２CONH); 1.95-2.30
(m, 2H, CHCH２CH２CONH);2.30-2.85 (m, 7H, CH２CO
N, CHCON, CH２S); 3.00-3.60 (m, 12H, CH２NH３,CH２
NCOおよびCH２NHCO).１３C NMR (CDCl３): δ 14.2(CH
３); 22.8 (CH２CH ３)); 27.1, 27.2, 27.8, 29.5, 29.
6, 29.8, ((CH２)１４); 32.0 (CH２CH２NH ３); 33.4
(CH２S); 34.8 (CH２CO); 37.5 (CH２NH３ ＋); 39.9 (C
H２NH); 46.0(CHCO); 46.3および48.1 (CH２NCO); 117.
0 (q, １JＣＦ = 300 Hz, CF３CO２ −); 162.8 (q, ２J
ＣＦ = 46 Hz, CF３CO２ −); 171.0, 175.2および177.0
(CON). MS-ESI: m/z = 839, M[= C３９H７９NOS + 2(C
５H１０N２O)] + H＋の計算質量と一致。
【０１２３】テロマーIII-L1c〜III-L1j : １H NMR (CD
３OD): δ 0.80 (t, 6H, ３J = 6.0 Hz, CH３); 1.00-
1.35 (m, 60H, (CH２)１５); 1.35-2.60 (m, (9+3n)H,
CH２CH２N, CH２CON, CHCO, CH２S, CH２CH２COおよびC
H２CHCO); 2.70-3.60 (m, (4n+4)H, CH２NH３ ＋, CH２N
COおよびCH２NHCO)、それぞれaDP n = 3(テロマーIII-L
1c)、4 (テロマーIII-L1d)、5 (テロマーIII-L1e)、10
(テロマーIII-L1f)、20 (テロマーIII-L1h)、40 (テロ
マーIII-L1i)、50 (テロマーIII-L1i) および60(テロマ
ーIII-L1j)。 １３C NMR (CD３OD): δ 14.3 (CH３);
23.3 (CH２CH３)); 29.0, 29.6, 29.9および30.3 (CHCH
２CHおよび(CH２)１４); 32.5 (CH２CH ２CH３); 37.7
(CH２NCO); 40.0 (CH２NH３ ＋); 117.0 (q, １J = 300
Hz, CF３CO２ −); 162.8 (q, ２JＣＦ = 46 Hz, CF３CO
２ −); 176.2 (NCO).炭素CHCOおよびNHCOに相当する共
鳴は、それぞれ41〜45ppmの間および176.5〜179ppmの間
に幅広のシグナルとして現れる。炭素CH２SおよびCH２C
Oに相当する共鳴は検出されない。
【０１２４】テロマーIII-L1fのMS-ESIより、n=3〜15の
化合物の存在が示される： n=3〜10のm/z = (610 + 11
4.1n + 1)は、[C３９H７９NOS + n(C５H１０N２O) + H
＋]でn=3〜10として計算される質量と一致する； n=3〜
15のm/2z = (305 + 57n + 1)は、[C３９H７９NOS+ n (C
５H１０N２O) + 2H＋]/2でn=3〜15として計算される質
量と一致する； n=5〜n=13のm/3z = (203 + 38n + 1)
は、[C３９H７９NOS + n(C ５H１０N２O) + 3H＋]/3でn=
3〜13として計算される質量と一致する。
【０１２５】テロマーIII-L1k〜III-L1m : １H NMR (CD
３OD): δ 0.80 (t, 6H, ３J = 6.0 Hz, CH３); 1.00-
1.35 (m, 44H, (CH２)１１); 1.35-2.60 (m, (9+3n)H,
CH２CH２N, CH２CON, CHCO, CH２S, CH２CH２COおよびC
H２CHCO); 2.70-3.60 (m, (4n+4)H, CH２NH３ ＋, CH２N
COおよびCH２NHCO)、それぞれaDPが10 (テロマーIII-L1
k)、20 (テロマーIII-L1l)および70 (テロマーIII-L1
m)。１３C NMRスペクトルは、テロマーIII-L1c〜III-L1
jのスペクトルと一致する。
【０１２６】1.4.4 テロゲンL2-SH（化合物6a）とタキ
ソゲンAからのテロマーIII-L2a(Y=Trt)(BOC) テロマーIII-L1a(BOC)〜III-L1m(BOC)の合成のための前
記の方法(1.4.1を参照)を、20mlの無水アセトニトリル
中の846mg(0.85ミリモル)のテロゲン6a(Y=Trt)、0.77g
(3.6ミリモル)のタキソゲンA（タキソゲン／テロゲン比
4.5）および0.029g(0.17ミリモル)のAIBNに適用し、精
製および分画の後に、345mg(0.24ミリモル)のテロマーI
II-L2a(Y=Trt)(BOC)(aDP n=2)が白色固体として得られ
る。
【０１２７】テロマーIII-L2a (Y=Trt)(BOC)(n=2): １H
NMR (CDCL３): δ 0.87 (t, 6H, ３J = 6.0 Hz, C
H３); 1.10-1.40 (m, 60H, (CH２)１５); 1.40-2.00
(m,22H, CH２CH２NおよびCH３(BOC)); 2.00-3.50 (m, 2
5H, CH２CO３, CH２S, CH２-im, CH２NおよびCH２CHCH
２CH２CO); 4.90-5.20 (m, 1H, CHN); 6.5-7.6 (m, 17H
,Trtおよびim). １３C NMR (CDCl３): δ 14.1 (C
H３); 22.7 (CH２CH３); 26.9,27.1, 27.7, 29.4および
29.7 ((CH２)１４); 28.5 (CH３(BOC)); 31.9 (CH２CH
２CH３); 46.6および48.1 (CH２N); 49.5 (CHN); 75.2
(N-C (Trt)); 79.1 (OC(BOC)); 119.4 (CH=C); 136.3
(CH=C); 138.4 (CH=N); 128.0および129.7 (CH (Ph));
142.3 (C (Ph)); 156.6 (CO (BOC)); 170.7, 173.4およ
び175.9 (NCO).CH ２-imおよび(CH２CH)ｎCH２CH２CO
は、幅広のシグナルとして33〜44ppmの間に現れる。
【０１２８】1.4.5 テロゲンL2-SH（化合物6b）とタキ
ソゲンAからのテロマーIII-L2b-d(Y=BOC)(BOC) テロマーIII-L1a(BOC)〜III-L1m(BOC)の合成のための前
記の方法を、2mlの無水アセトニトリル中の20mg(0.02ミ
リモル)のテロゲン6b(Y=BOC)、202mg(0.9ミリモル)のタ
キソゲンA（タキソゲン／テロゲン比45）および2mg(0.0
1ミリモル)のAIBNに適用した。精製および分画の後に、
26mgのaDP n=20のテロマーIII-L2b(Y=BOC)(BOC)、40mg
のaDP n=30のテロマーIII-L2c(Y=BOC)(BOC)、 および15
6mgのaDPn=90のテロマーIII-L2d(Y=BOC)(BOC)が白色固
体として得られる。
【０１２９】テロマーIII-L2b(Y=BOC)(BOC)〜III-L2d(Y
=BOC)(BOC):III-L2b(Y=BOC)(BOC)〜III-L2d(Y=BOC)(BO
C)の１H NMR (CDCl３)スペクトルは一致する：δ 0.81
(t, 6H, ３J = 6.0 Hz, CH３); 1.10-1.75 (m, 60H, (C
H２)１５); 1.40-1.80 (m, (13+9n)H, CH２CH２Nおよび
CH３(BOC)); 1.80-3.50 (m, (11+7n)H, CH２CO, CH２S,
CH２-im, CH２NおよびCH２CHCH２CH２CO); 4.90-6.50
(m, (n+1)H, CHN, NH(BOC)); 6.5-8.0 (m, NH, im),そ
れぞれaDP n=20, 30および90。
【０１３０】1.4.6 テロマーIII-L2a(Y=Trt)(BOC)およ
びIII-L2b(Y=BOC)(BOC)〜III-L2d(Y=BOC)(BOC)：テロマ
ーの脱保護 テロマーIII-L2a(Y=Trt)(BOC)の脱保護は、化合物を大
過剰量のTFAに溶解し、室温にて24時間放置することに
より達成される。この反応混合物を蒸発させ、乾燥残渣
を3mlのTHF中に取り、5mlの6N HCl(30ミリモル)を加
え、この反応混合物を室温にて3時間攪拌維持する。溶
媒を蒸発させた後に、残渣をCH３CNで洗浄するとテロマ
ーIII-L2aが得られる。
【０１３１】テロマーIII-L2b(Y=BOC)(BOC)〜III-L2d(Y
=BOC)(BOC)の脱保護は、化合物を大過剰量のTFA中に溶
解し、室温にて1時間維持することにより定量的に達成
される。過剰量のTFAは、シクロヘキサンの存在下で蒸
発除去する。テロマーIII-L2b〜III-L2dが白色固体とし
て得られる。
【０１３２】テロマーIII-L2a (aDP n=2) : １H NMR (C
DCl３): δ 0.87 (t, 6H, ３J = 6.0 Hz, CH３); 1.10
-1.40 (m, 60H, (CH２)１５); 1.40-1.80 (m, 4H, CH２
CH２N); 1.80-3.50 (m, (11+7n)H, CH２CO, CH２S, CH
２-im, CH２NCO, CH２NH３およびCH２CHCH２CH２CO);
4.90-5.20 (m, 1H, CHN). １３C NMR (CDCl３): δ 1
4.1 (CH３); 22.7 (CH２CH３); 26.9, 27.1, 27.7, 29.
4および29.7 ((CH２)１ ４)およびCH２CHCH２);32.0 (CH
２CH２CH３); 47.0および48.5 (CH２NおよびCHN); 118.
0 (CH=C); 134.0 (CH=CおよびCH=N); 170.3および171.1
(NCO).炭素CH２NHCO、CH２NH３ ＋、CH２CO、CH２S、CH
COおよびCH２-imに相当する共鳴は、34.6〜35.9ppmの間
に幅広のシグナルとして現れる。
【０１３３】テロマーIII-L2b (aDP n=20) : １H NMR
(CD３OD): δ 0.94 (t, 6H, ３J =6.0 Hz, CH３); 1.2
0-1.50 (m, 60H, (CH２)１５); 1.50-2.10 (m, (2+2n)
H, CH ２CH２NCOおよびCHCH２CH); 2.10 - 3.00 (m, (9+
n)H, CH２CO, CH２S, CH２-imおよびCHCO); 3.00-3.80
(m,(4+4n), CH２NCO, CH２NHCOおよびCH２NH３); 7.38
(s, 1H, CH=C); 8.86 (s, 1H, CH=N).CHNに相当するシ
グナルは、5ppmにおいてH２Oのシグナルでマスクされ
る。１３C NMR(CD３OD):σ 29.7 (CH２CHCH２および(CH
２)１４); 37.7 (CH２NCO); 40.0 (CH２NH３ ＋); 117.0
(q, １J = 300 Hz, CF３CO２ −); 162.8 (q, ２J = 46
Hz, CF３CO２ −); 177.5 (NHCO).炭素CH３、CH２C
H３、CH２CH２CH３、CH２N、CHN、CH２CO、CH２S、CH２
-im、(CH２CH)ｎCH２CH２CO、NCO、CH=CおよびCH=Nに相
当する共鳴は位置は定められなかった。
【０１３４】テロマーIII-L2c(aDP n=30)およびIII-L2d
(aDP n=90)：１H NMR(CD３OD)スペクトルはテロマーIII
-L2bのスペクトルと一致するが、それぞれaDP n=30およ
び90である。１３C NMR(CD３OD)スペクトルはテロマーI
II-L2bのスペクトルと一致する。
【０１３５】1.4.7 テロゲンL2-SH（化合物9）とタキ
ソゲンAからのテロマーIII-L2e(Bzl)(B OC)およびIII-L2
f(Bzl)(BOC) III-L1a(BOC)〜III-L1m(BOC)の合成のための前記方法
を、1.8mlのアセトニトリル中の32mg(0.045ミリモル)テ
ロゲン9、195mg(0.91ミリモル)タキソゲンA（すなわ
ち、タキソゲン／テロゲンモル比20）および3mg(0.018
ミリモル)AIBNに適用し、精製および分画の後に、aDP n
=20のテロマーIII-L2a(Bzl)(BOC)64mgとaDP n=70のIII-
L2b(Bzl)(BOC)138mgが白色固体として得られる。
【０１３６】テロマーIII-L2e(Bzl)(BOC)(aDP n=20):
１H NMR (CDCl３): δ 0.80 (t, 6H, ３J = 6.0 Hz, C
H３); 1.05-1.20 (m, 44H, (CH２)１１); 1.20-1.60
(m, (4+9n)H, CH２CH２NOおよびCH３(Boc)); 1.60-2.90
(m, (3n+7)H, CHCO, CH２CO, CH２S, CH２CH２COおよ
びCH２CHCO); 2.90-4.00 (m, (4n+4)H, CH２NCOおよびC
H ２NHCO); 5.05 (s, 2H, CH２Ph); 5.10-5.40 (m, 1H,
CH); 5.40-6.50 (m, nH,NH); 7.30 (s, 5H, Ph). １３C
NMR (CDCl３): δ 14.2 (CH３); 22.7 (CH２CH ３); 2
8.5 (CH３(BOC)); 26.9, 27.0, 27.5, 29.3および29.6
((CH２)１１); 31.9 (CH２CH２CH３); 46.1, 46.7およ
び48.1 (CH２NおよびCH２Ph); 66.7 (CH);128.3および1
28.5 (CH=CH); 135.6 (C=CH); 156.6 (CO(BOC)); 170.2
(CO).炭素CHCH２CH、CH２NHCO、CHCOおよびNCOに相当
する共鳴は、それぞれ32〜38ppmの間、38〜45ppmの間、
ならびに175〜178ppmの間に、大きなシグナルとして現
れる。炭素CH２S、CH２COおよびCH２CO２は検出されな
い。
【０１３７】テロマーIII-L2f(Bzl)(BOC)(aDP n=70)。
１H NMR (CDCl３)スペクトルはテロマーIII-L2e(Bzl)(B
OC)のスペクトルと一致するが、aDP n=70である。
【０１３８】1.4.8 テロマーIII-L2eおよびIII-L2f：
テロマーIII-L2e(Bzl)(BOC)およびIII-L2f(Bzl)(BOC)の
脱保護 テロマーIII-L2e(Bzl)(BOC)およびIII-L2f(Bzl)(BOC)の
脱保護は、これらのテロマーを大過剰量の30%HBr/AcOH
(Aldrich)に溶解し、0℃にて2時間維持することにより
達成される。蒸発させた後に、残渣をMeOHに溶解し、沈
殿物が現れるまでアセトンを加える。濾過、CHCl３およ
びシクロヘキサンで洗浄した後、テロマーIII-L2eとIII
-L2f（それらのBr−塩として）が白色固体として得られ
る。
【０１３９】テロマーIII-L2e (n=20) : １H NMR (CD３
OD): 0.90 (t, 6H, J = 6.0 Hz), CH３); 1.27 (bs, 44
H, (CH２)１１); 1.40-2.15 (m, (2n+2)H, CHCH２CH, C
H２CH２N); 2.15 - 3.00 (m, (n+9)H, CH２S, CH２COお
よびCHCO); 3.00-3.40 (m,(2n+4)H, CH２NHCO, CH２N);
3.40-3.90 (m, 2n, CH２NH３ ＋); 5.15 (m, 1H, COCH
N). １３C NMR (CD３OD): 14.4 (Me); 23.6 (CH２Me);
30.4および30.7 ((CH ２)１１); 33.0 (CH２CH２Me); 3
8.4 (bs, CH２NHCO); 40.8 (bs, CH２NH３); 178.3 (b
s, CO).炭素CHCH２CHおよびCHCH２CHに相当する共鳴
は、それぞれ32〜38ppmの間、42〜48ppmの間に、大きな
シグナルとして現れる。炭素COCH２CH２SCH ２およびCOC
HCH２COは検出されない。
【０１４０】テロマーIII-L2f (aDP n=70): １H NMR(D
２O)：テロマーIII-L2eののスペクトルと一致するが、a
DP n=70である。１３C NMR (D２O): δ 37.0 (bs, CH
２NHCO); 38.9 (bs, CH２NH３); 42.62 (CHCO); 177.2
(bs, CO).炭素CHCH２CHに相当する共鳴は、32〜40ppmの
間に大きなシグナルとして現れる。COCH２CH２SCH２、C
H３(CH２)１３NおよびCOCHCH２COの炭素は検出されな
い。
【０１４１】1.4.9 テロゲンL3-SH、9およびタキソゲ
ンAからのテロマーIII-L3a(BOC)〜III-L3e(BOC)（反応
スキーム3） タキソゲンとテロゲンのモル比を3対5として、テロマー
III-L1a(BOC)〜III-L1m(BOC)の合成のための前記プロト
コールを、テロゲンL3-SH9とタキソゲンAに適用した。
シリカカラムのクロマトグラフィー（溶出液：CHCl３）
による精製の後、2系列のテロマーが収率60%で白色固体
として得られる。Sephadex LH-20による第１の系列の分
画ではテロマーIII-L3a(BOC)(n=1)、III-L3b(BOC)(aDP
n=3)およびIII-L3d(BOC)(aDP n=11)が得られ；第2の系
列の分画では、最初の3つのテロマーに加えて、テロマ
ーIII-L3c(BOC)(aDP n=6)およびIII-L3e(BOC)(aDP n=1
6)が単離できる。aDPは、前記の通り１H NMRにより測定
する（1.41を参照）。
【０１４２】テロマーIII-L3a(BOC)(n=1): １H NMR (CD
Cl３): δ 0.80 (t, 6H, ３J = 6.0 Hz, CH３); 1.02-
1.32 (m, 60H, (CH２)１５); 1.37 (s, 9H, CH３(Bo
c)); 1.44-1.55 (m, 4H, CH２CH２O); 2.39 (t, 2H, ３
J = 6.9 Hz, CH２CO); 2.64 (d,2H, ３J = 4.8 Hz, CH
２S); 2.78 (t, 2H, ３J = 6.2 Hz, SCH２CH２CO); 3.1
2-3.60 (m, 11H, CH２O, CHOおよびCH２N); 5.16および
6.60 (m 2H, NH). １３CNMR (CDCl３): δ 14.0 (C
H３); 22.7 (CH２CH３); 26.1 (CH２γO); 28.4 (CH
３(BOC)); 29.3, 29.5, 29.6, 29.7および30.0 ((CH２)
１３); 31.9 (CH２CH２CH３); 33.9 (CH２S); 36.7 (CH
２CO); 40.3および40.5 (CH２N); 70.5, 71.5および71.
7 (CH２O); 78.5 (CHO); 79.5 (O-C (BOC)); 156.7 (C=
O (BOC)); 171.9(C=O).
【０１４３】テロマーIII-L3b(BOC)(aDP n=3): １H NMR
(CDCl３): δ 0.80 (t, 6H, ３J= 6.0 Hz, CH３); 0.
98-1.30 (m, 60H, (CH２)１５); 1.30-1.60 (m, (9n+4)
H,CH３ (BOC)およびCH２H２O); 1.60-3.00 (m, (3n+3)
H, CH２CO, CHCO, CH２CHCO, CH２CH２COおよびCH２S);
3.05-3.55 (m, (4n+7)H, CH２O, CHOおよびCH２N).
１３C NMR (CDCl３): δ 14.1 (CH３); 22.6 (CH２CH
３); 26.1 (CH２ γ O); 28.4 (CH３ (BOC));29.3, 2
9.5, 29.6, 29.7および30.1 ((CH２)１３およびCH２CHC
O); 31.9 (CH２CH２CH３); 33.8および34.5 (CH２S); 3
5.6 (CH２CO); 35.8および36.2 (CHCO); 70.4, 71.6お
よび71.7 (CH２O); 78.5 (CHO); 79.6 (O-C (BOC)); 15
6.7 (C=O (BOC)); 172.0, 173.1および174.4 (CO).炭素
CH２Nは、39〜41ppmの間に幅広の共鳴として現れる。
【０１４４】テロマーIII-L3c(BOC)(aDP n=6):１H NMR
(CDCl３)のスペクトルはIII-L2bのスペクトルと一致す
るが、aDP n=6である。１３C NMR (CDCl３): δ 14.0
(CH ３); 22.6 (CH２CH３); 26.0 (CH２ γ O); 28.4
(CH３ (BOC)); 29.3, 29.4,29.6および29.7 ((CH２)
１３およびCH２CHCO); 31.8 (CH２CH２CH３); 33.6およ
び34.4 (CH２S); 70.4, 71.7および71.9 (CH２O); 78.5
(CHO); 79.6 (O-C (BOC)); 156.6 (C=O (BOC)); CH２
(C=O)、CHC=O、CH２NおよびNHC=Oの炭素は、38〜44pp
m、および173〜176ppmの間に、非常に幅の広い共鳴シグ
ナルとして現れる。
【０１４５】テロマーIII-L3d(BOC)(aDP n=11)およびII
I-L3e(aDP n=16)：それらの１Hおよび１３C NMRスペク
トルは、テロマーIII-L3c(BOC)のスペクトルと一致する
が、aDPはそれぞれ11および16である。
【０１４６】1.4.10 テロマーIII-L3a(BOC)〜III-L3e
(BOC)：テロマーの脱保護 テロマーIII-L3a(BOC)〜III-L3e(BOC)からのBOC保護基
の除去は、これらのテロマーを大過剰量のTFA中に溶解
し、室温にて1時間維持することにより定量的に達成さ
れる。過剰量のTFAは、シクロヘキサンの存在下での共
蒸発により除去する。テロマーIII-L3a(BOC)〜III-L3e
(BOC)が白色固体として得られる。
【０１４７】テロマーIII-L3a (n=1): IR (ν cm-1, KB
r): 1875 (C=O). １H NMR (CDCl３): δ 0.80 (t, 6H,
３J = 6.0 Hz, CH３); 1.00-1.36 (m, 60H, (CH２)
１５);1.37-1.70 (m, 4H, CH２CH２O); 2.43 (t, 2H,
３J = 6.1 Hz, CH２CO); 2.62 (d, 2H, ３J = 5.0 Hz,
CH２S); 2.74 (t, 2H, ３J = 6.2 Hz, SCH２CH２CO);
3.00-3.25 (m, 2H, CH２NH３); 3.30-3.65 (m, 9H, CH
２O, CHOおよびCH２N). １ ３C NMR (CDCl３): δ 14.1
(CH３); 22.7 (CH２CH３); 26.1 (CH２ γ O); 29.3,
29.5, 29.7および30.0 ((CH２)１３); 31.9 (CH２CH２
CH３); 33.8 (CH２S); 36.1 (CH２CO); 37.5 (CH２N);
39.4 (CH２NH３); 70.6, 71.6および71.8 (CH２O); 78.
3 (CHO); 79.5 (O-C (BOC)); 171.9 (C=O). １９F NMR
(CDCl３): δ-76.0 (CF２CO２ −).
【０１４８】テロマーIII-L3b (aDP n =3): １H NMR (C
DCl３， CD２OD): δ 0.84 (t, 6H, ３JＨＨ = 5.8 H
z, CH３); 1.00-1.45 (m, 60H, (CH２)１５); 1.45-1.7
5 (m, 4H, CH２CH２O); 1.75-3.25 (m, (5n+3)H, CH２C
H２CO, CH２CHCO, CH２CO, CHCO, CH２NH３およびCH
２S); 3.25-3.70 (m, (2n+7)H, CH２O, CHOおよびCH
２N). １３C NMR (CDCl３, CD２OD): δ 15.0 (C
H３); 23.7 (CH２CH３); 27.2 (CH２ γ O); 29.0, 2
9.1, 30.4, 30.6, 30.7, 30.8および30.9 ((CH２)１３
およびCH２CHCO); 33.0 (CH２CH２CH３); 33.7 (CH
２S); 38.1 (CH２CO); 40.7 (CH ２N); 41.0 (CH２N
H３); 43.4 (CHCO); 70.5, 70.6および71.8 (CH２O); 7
8.3 (CHO); 163.4 (q, ２JＣＦ = 34 Hz, CF３CO２ −);
174.8, 175.1および177.1 (NC=O). CH-Oの炭素は検出
されない。１９F NMR (CDCl３, CD２OD): δ -76.6
(CF３CO２ −).
【０１４９】テロマーIII-L3c (aDP n=6):１H NMRおよ
び１９F NMR (CDCl３, CD２OD)のスペクトルはそれぞ
れ、テロマーIII-L3bのスペクトルと一致するが、aDP n
=6である。１３C NMR (CDCl３, CD３OD): δ 14.8 (C
H３); 23.7 (CH２CH３); 27.1(CH２ γ O); 30.4, 30.
5, 30.7および31.1 ((CH２)１３およびCH２CHCO); 33.0
(CH２CH２CH３); 34.0 (CH２S); 35.0 (CH２CO); 38.1
(CH２N); 40.7 (CH２NH３); 71.5, 72.8および72.9 (C
H２O); 79.6 (CHO); 163.0 (q, ２JＣＦ = 36 Hz, CF３
CO２ −); 176.2および177.9 (NC=O).炭素CH(C=O)は、41
〜46ppmの間の幅広の共鳴シグナルとして現れる。MS-FA
BおよびMS-ESIは、n=4〜9のオリゴマーの存在を示す：
m/z=1085.5; 1199.5; 1313.6; 1427.6; 1541.6; 1657.2
は、n=4〜9としたM( = C３９＋５ｎH８０＋１１ｎN２ｎ
O２＋ｎS) + 16 + H＋] とそれぞれ一致する。質量 M +
16は、この分析条件下での硫黄の酸化に一致する。
【０１５０】テロマーIII-L3d (aDP n=11):１H NMRおよ
び１９F NMR (CDCl３, CD２OD)のスペクトルはそれぞ
れ、テロマーIII-L3bのスペクトルと一致するが、aDP n
=11である。 １３C NMR (CDCl３, CD３OD): δ 14.8
(CH３); 23.7 (CH２CH３);27.1 (CH２ γ O); 30.3, 3
0.6および30.7 ((CH２)１３およびCH２CHCO); 32.3(CH
２CH２CH３); 33.2 (CH２S); 163.0 (q, ２JＣＦ = 36
Hz, CF３CO２ −); 165.0 (NC=O). 炭素CH２N、CH２COお
よびCHCOに相当する共鳴は、38〜43ppmの間に幅広のシ
グナルとして現れる；炭素CH２OおよびCHOに相当する共
鳴は検出されない。MS-FABおよびMS-ESIにより、n=4〜1
5のオリゴマーの存在が示される： m/z=1085.9; 1199.
9; 1314.0; 1428.1; 1542.1; 1656.2; 1770.3; 1884.4;
1998.4; 2113.5; 2226.5は、n=4〜14としたM( = C
３９＋５ｎH８０＋１１ｎN２ｎO２＋ ｎS) + 16と一致す
る。 MS-ESI： m/2z = 771.8; 829.0; 886.0; 943.0; 1
000.0; 1057.3; 1114; 1171は、n=8〜15とした[M( = C
３９＋５ｎH８０＋１１ｎN２ｎO２＋ｎS) + 16 + 2H＋]
/2 とそれぞれ一致する。質量 M + 16は、この分析条件
下での硫黄の酸化に一致する。
【０１５１】テロマーIII-L3e (aDP n=16):１Hおよび
１９F NMR(CDCl３，CD３OD)のスペクトルはそれぞれ、
テロマーIII-L3bのスペクトルと一致する、aDP n=16で
ある。 １３C NMR (CDCl３, CD３OD): δ 14.8 (C
H３); 23.7 (CH２CH３); 27.1 (CH ２ γ O); 30.3, 3
0.6および30.7 ((CH２)１３およびCH２CHCO); 32.3 (CH
２CH ２CH３); 33.2 (CH２S); 163.0 (q, ２JＣＦ = 36
Hz, CF３CO２ −);炭素CH２N、CH２CO、CHCOおよびNCOに
相当する共鳴はそれぞれ、38〜43ppmの間、および176〜
179ppmの間に幅広のシグナルとして現れる；炭素CH２O
およびCHOに相当する共鳴は検出されない。MS-FABおよ
びMS-ESIにより、n=6〜17のオリゴマーの存在が示され
る： m/z=1314; 1428.1; 1542.2; 1656.3; 1771.3; 188
5.4; 1999.5; 2113.5; 2227.6; 2341.4; 2455; 2569; 2
683; 2798はそれぞれ、n=6〜7としたM(= C３９＋５ｎH
８０＋１１ｎN２ｎO２＋ｎS) + 16と一致する。質量 M
+ 16は、この分析条件下では硫黄の酸化に一致する。
【０１５２】1.4.11 テロゲンL4-SH、6-デオキシ-6-チ
オ-1,2,:3,4-ジ-O-イソプロピリデン-D-ガラクトピラノ
ースとタキソゲンAからのテロマーIII-L4a(BOC)およびI
II-L4b(BOC) テロマーIII-L1a(BOC)〜III-L1m(BOC)の合成のための前
記方法を、2.3mlの無水アセトニトリル中の16mg(0.058
ミリモル)のテロゲン6-デオキシ-6-チオ-1,2,:3,4-ジ-O
-イソプロピリデン-D-ガラクトピラノース、248mg(1.16
ミリモル)のタキソゲンA（タキソゲン／テロゲン比20）
および4mg(0.023ミリモル)のAIBNに適用した。クロマト
グラフィーおよび分画の後に、aDP n=15のテロマーIII-
L4a(BOC)205mg、およびaDP n=30のIII-4b(BOC)46mgが得
られる。aDPは１H NMRにより測定する。
【０１５３】テロマーIII-L4a(BOC)(aDP n=15): １H NM
R (CDCl３): δ 1.00-1.60 (m, (9n+12)H, CH３(BOC)
および(CH３)２C); 1.60-2.60 (m, (3n-1)H, CH２CO, C
HCOおよびCHCH２CH); 2.60-4.00 (m, (4n+4)H, CH２Sお
よびCH２NHCO); 4.05-4.15 (m, 1H, GalH５); 4.15-4.3
5 (m, 2H, GalH２およびGalH４); 4.55-4.65 (m, 1H,Ga
lH３); 5.40-5.50 (m, 1H, GalH１); 5.50-6.50 (m, n
H, NH). １３C NMR (CDCl３): δ 24.4, 25.1および2
6.0((CH３)２C); 28.5 (CH３(BOC);70.5, 70.9,71.8お
よび71.9 (GalC２−５); 96.4 (GalC１); 79.5 (C(BO
C)); 108.6および109.3 (C(CH３)２); 156.7 (CO(BO
C)).炭素CHCH２CH、CH２NHCO、CHCOおよびNCOに相当す
る共鳴はそれぞれ、32〜38ppmの間、38〜45ppmの間、お
よび175〜178ppmの間に大きなシグナルとして現れる。
炭素CH２SおよびCH２COに相当する共鳴は検出されな
い。MS-ESIにより、n=2〜21の化合物の存在が示され
る： n=2〜10のm/z=(276.3 + 214.2n + 23)は、[C１２H
２０O５S + n(C１０H１８N２O３) + Na＋]でn=2〜10と
して計算される質量と一致する；n=7〜21のm/2z=(138.1
+ 107.1n+ 23)は、[C１２H２０O５S + n(C１０H１８N
２Ｏ3) + 2Na＋]/2でn=7〜21として計算される質量と一
致する。
【０１５４】テロマーIII-L4b(BOC)(aDP n=30)。１H NM
R(CDCl３)：１H NMRスペクトルは、テロマーIII-L4a(BO
C)のスペクトルと一致するが、aDP n=30である。
【０１５５】1.4.12 それぞれテロマーIII-L4a(BOC)お
よびIII-L4b(BOC)からのテロマーIII-L4a(O)(BOC)およ
びIII-L4b(O)(BOC) テロマーの酸化 テロマーIII-L4a(O)(BOC)およびIII-L4b(O)(BOC)はそれ
ぞれ、テロマーIII-L4a(BOC)およびIII-L4b(BOC)の酸化
により得られる。この酸化は、これらのテロマーを空気
の存在下で市販のEt２O中に懸濁させることにより定量
的に行われる。
【０１５６】テロマーIII-L4a(O)(BOC)(aDP n=15)。１H
および１３C NMR(CDCl３)：それぞれテロマーIII-L4a(B
OC) (aDP n=15)のスペクトルと一致する。MS-ESIによ
り、n=2〜27の化合物の存在が示される： n=2〜13のm/z
=(292.3 + 214.2n + 23)は、[C１２H２０O６S + n(C
１０H１８N２O３) + Na＋]でn=2〜13として計算される
質量と一致する；n=12〜27のm/2z=(146.1 + 107.1n + 2
3)は、[C１２H２０O６S +n(C１０H１８N２O３) + 2N
a＋]/2でn=12〜27として計算される質量と一致する。
【０１５７】テロマーIII-L4b(O)(BOC)(aDP n=30)。１H
NMR(CDCl３)：テロマーIII-L4a(BOC) (aDP n=30)のス
ペクトルと一致する。１３C NMR(CDCl3)：テロマーIII-
L4a(BOC) (aDP n=15)のスペクトルと一致するが、Gal共
鳴は検出されない。
【０１５８】1.4.13 それぞれテロマーIII-L4a(BOC)、
III-L4a(O)(BOC)、III-L4b(BOC)およびIII-L4b(O)(BOC)
からのテロマーIII-L4a、III-L4a(O)、III-L4bおよび I
II-L4b(O) テロマーの脱保護 テロマーIII-L4a(BOC)、III-L4a(O)(BOC)、III-L4b(BO
C)およびIII-L4b(O)(BOC)の脱保護は、大過剰量のTFA中
で室温にて1時間維持することにより定量的に達成され
た。過剰量のTFAは、シクロヘキサンの存在下での共蒸
発により除去する。テロマーIII-L4a、III-L4a(O)、III
-L4bおよびIII-L4b(O)が白色固体として得られる。
【０１５９】テロマーIII-L4a (aDP n=15): １H NMR (C
D３OD): δ 1.25-2.05 (m, (2n-2)H, CH２CHCO); 2.05
-2.95 (m, (n+5)H, CH２S, CH２COおよびCHCO); 2.95-
3.90(m, 4nH CH２N);Gal-Hの共鳴は検出されない。１３
C NMR (CD３OD): δ 38.3 (bs, CH２NHCO); 40.4 (bs,
CH２NH３); 118.3 (q, J = 292 Hz, CF３); 163.0 (q,
J = 35 Hz, CF３CO); 178.0 (bs, NCO).炭素CHCH２CH
およびCHCOに相当する共鳴はそれぞれ、35〜38ppmの
間、42〜48ppmの間に大きなシグナルとして現れる。Ga
l、CH２SおよびCH２COの炭素は検出されない。
【０１６０】テロマーIII-L4a(O)(aDP n=15)。１H NMR
(CD３OD)：III-L4a (aDP n=15)のそれと一致する。１３
C NMR(CD３OD)：III-L4aのそれと一致する。
【０１６１】テロマーIII-L4b(aDP n=30)。１H NMR(CD
３OD)：III-L4a のそれと一致するが、aDP n=30であ
る。１３C NMR(CD３OD)：III-L4aのそれと一致する。
【０１６２】テロマーIII-L4b(O)(aDP n=30)。１H NMR
(CD３OD)：III-L4aのそれと一致するが、 aDP n=30であ
る。１３C NMR(CD３OD)：III-L4aのそれと一致する。
【０１６３】1.4.14 テロゲンL0-SH(1-プロパンチオー
ル) とタキソゲンAからのテロマーIII-L0(BOC) テロマーIII-L1a(BOC)〜III-L1m(BOC)の合成のための前
記方法を、無水アセトニトリル中の0.25ml(0.023ミリモ
ル)の1-プロパンチオール(Aldrich)の0.092N溶液、200m
g(0.93ミリモル)のタキソゲンA（タキソゲン／テロゲン
比40）および2mg(0.012ミリモル)のAIBNおよび1.75mlの
無水アセトニトリルに適用した。クロマトグラフィーお
よび分画の後、168mgのテロマーIII-L0(BOC)が得られ
た。
【０１６４】テロマーIII-L0(BOC): １H NMR (CDCl３):
δ 1.35 (s, 9nH, CH３(BOC))および0.90-2.80 (m,
(3n+1)H, CH２COおよびCH２CHCO); 2.80-3.90 (m, 4n,
CH２N). １３C NMR (CDCL３): δ 28.7 (CH３(BOC));
79.5 (C, BOC); 156.7 (CO,BOC);炭素CHCH２CH、CH
２N、CHCOおよびNCOに相当する共鳴はそれぞれ、32〜38
ppmの間、38〜45ppmの間、および175〜178ppmの間に大
きなシグナルとして現れる。プロピル１Hおよび１３Cの
共鳴は検出されない。
【０１６５】1.4.15 テロマーIII-L0(BOC)からのテロ
マーIII-L0：テロマーIII-L0(BOC)の脱保護 150mgのテロマーIII-L0(BOC)の脱保護は、このテロマー
を大過剰量のTFA中で室温にて1時間維持することにより
定量的に達成される。過剰量のTFAは、シクロヘキサン
の存在下での共蒸発により除去する。その残渣をCHCl３
で洗浄し、Sephadex LH 20カラム（溶出液CH３OH）上で
クロマトグラフィーに付して、100mgのテロマーIII-L0
を白色固体として得る。
【０１６６】テロマーIII-L0: １H NMR (CD３OD): δ
1.20-2.60 (m, (3n+1)H, CH２COおよびCH２CHCO); 2.80
-3.30 (m, 2n, CH２NCO); 3.30-3.80 (m, 2n, CH２N).
１ ３C NMR (CDCl３): δ 38.1 (ls, CH２NHCO), 40.3
(ls, CH２NH３), 117.7 (q, J = 292 Hz, CF３); 162.4
(q, J = 35 Hz, CF３CO); 177.9 (ls, NCO).炭素CHCH
２CHおよびCHCOに相当する共鳴はそれぞれ、32〜38ppm
の間、42〜45ppmの間に大きなシグナルとして現れる。
プロピル１Hおよび１３Cの共鳴は検出されない。
【０１６７】1.4.16 テロゲンL1-SH（化合物3a）とタ
キソゲンBからのテロマーIV-L1aおよびIV-L1b 2mlの無水メタノール中の112mg(0.18ミリモル)のテロゲ
ン3a、164mg(0.91ミリモル)のタキソゲンB（すなわち、
タキソゲン／テロゲンのモル比は5)、および12mg(0.07
ミリモル)のAIBNの溶液を加熱攪拌する(60℃)。24時間
後に、この反応混合物に5mg(0.03ミリモル)のAIBNを加
え、タキソゲンが消失するまで60℃にて4時間攪拌放置
する（後にTLC/DTNB、KMnO４を行う）。蒸発させた後、
その残渣をCHCl３に取り、濾過する。沈殿物をSephadex
LH 20カラムで分画する（溶出液CH３OH）。aDP n=35の
テロマーIV-L1a 37mgおよびaDP n=80のテロマーIV-L1b
114mgが白色固体として得られる。aDPは１H NMRにより
測定する。
【０１６８】テロマーIV-L1a (aDP n=35): １H NMR (CD
Cl３ + CD３OD): δ 0.80 (t, 6H, ３J = 6.0 Hz, CH
３); 1.10-1.30 (m, 60H, (CH２)１５); 1.30-1.90 (m,
(2+2n)H, CH２CH２NCOおよびCH２CHCO); 1.90-2.80
(m, (7+n)H, CH２S, CH２COおよびCHCO); 2.80-3.10
(m, 6nH,(CH３)２N); 3.10-4.00 (m, (4+4n)H, CH２Nお
よびCH２NH).テロマーIV-L1a (aDP n=35).１３C NMR (C
DCl３ + CD３OD): δ14.6 (CH３); 23.7 (CH２CH３);
27.1, 28.1, 28.8, 30.4, 30.7 ((CH２)１５);33.0 (C
H２CH２CH３);; 36.0 (bs, CONHCH２CH２N(CH３)２); 4
4.2 (bs, N(CH ３)２); 58.1 (bs, CH２N(CH３)２); 17
7.8 (bs,NCO).炭素CHCH２CHおよびCHCOに相当する共鳴
はそれぞれ、35〜38ppmの間、および40〜48ppmの間に大
きなシグナルとして現れる。CH２S、CH２NおよびCH２CO
の炭素は検出されない。
【０１６９】テロマーIV-L1b(aDP n=80)。１H NMR(CD３
OD)：１H NMRスペクトルはテロマーIV-L1aのスペクトル
と一致するが、aDP n=80である。１３C NMRスペクトル
はテロマーIV-L1aのスペクトルと一致する。
【０１７０】1.4.17 テロゲンL1-SH（化合物3a）とタ
キソゲンAおよびBからのコテロマーVII-L1a(BOC) 4.5mlの無水CH３OH中の38mg(0.21ミリモル)のタキソゲ
ンBおよび455mg(2.12ミリモル)のタキソゲンA（テロゲ
ン／タキソゲンA/Bのモル比は1/10/1)溶液に、129mg(0.
21ミリモル)のテロゲン3aを加える。次いでこの混合物
を40℃まで加熱し、14mg(0.08ミリモル)のAIBNを加え
る。得られた反応混合物をテロゲン3aが消失するまで、
24時間、加熱攪拌(62℃)する（後にTLC/DTNBを行う）。
この溶液を濃縮し、Sephadex LH 20カラム上でクロマト
グラフィー（溶出液CH３OH）に付す。その残渣をn-ヘキ
サンで洗浄すると、aDP n=10（A単位の数に相当する）
およびaDP2 n'=1（B単位の数に相当する）のコテロマー
VII-L1a(BOC)555mgが白色固体として得られる。aDP値
は、１H NMRにより測定する。
【０１７１】コテロマーVII-L1a(BOC) (aDP n=10および
n'=1). １H NMR (CDCl３): δ 0.88 (t, 6H, J = 6.0
Hz, CH３); 1.05-1.30 (m, 60H, (CH２)１５); 1.30-1.
60 (m, (9n+4)H, CH２CH２NおよびCH３(BOC)); 1.60-2.
00 (m, (2n+2n'-2)H, CH２CHCO); 2.00-2.85 (m, (n+n'
+7)H, CH２S, CH２COおよびCHCO); 2.85-3.05 (m, 6n'
H,(CH３)２N); 3.05-3.90 (m, (4+4n'+4)H, CH２N); 5.
40-6.50 (m, nH, NH(BOC)). １３C NMR (CDCl３): δ
14.1 (CH３); 22.7 (CH２CH３); 28.5 (CH３(BOC)); 2
7.0, 27.1, 27.8, 29.4, 29.7 ((CH２)１５); 31.9 (CH
２CH２CH３); 79.4 (bs, C(BOC)); 156.6 (bs, CO(BO
C)).炭素CHCH２CH、CH２N、N(CH３)２、CHCOおよびNCO
に相当する共鳴はそれぞれ、32〜38ppmの間、38ppm〜48
ppmの間、および175〜178ppmの間に大きなシグナルとし
て現れる。CH２S、CH２N(CH３)２およびCH２COの炭素は
検出されない。
【０１７２】1.4.18 テロゲンL1-SH（化合物3a）とタ
キソゲンAおよびBからのコテロマーVII-L1b(BOC) 2mlの無水アセトニトリル中の40mg(0.065ミリモル)のテ
ロゲン3a溶液に、1ml無水メタノール中の140mg(0.65ミ
リモル)のタキソゲンAおよび117mg(0.65ミリモル)のタ
キソゲンBの溶液（テロゲン／タキソゲンA/Bモル比は1/
10/10）を加える。加熱した(80℃)反応混合物に5mg(0.0
3ミリモル)のAIBNを加え、テロゲン3aが消失するまで、
19時間、加熱攪拌(60℃)する（後にTLC/DTNBを行う）。
この溶液を濃縮し、Sephadex LH 20カラム上でクロマト
グラフィー（溶出液CHCl３）に付す。aDP1 n=10およびa
DP2 n'=17のテロマーVII-L1b(BOC) 282mgが淡黄色固体
として得られる。
【０１７３】コテロマーVII-L1b (BOC) (aDP n=10およ
びn'=17).１H NMR (CDCl３):１H NMRスペクトルはテロ
マーVII-L1a(BOC)のスペクトルと一致するが、aDP n=10
およびn'=17である。１３C NMR (CDCl３): δ 14.2 (C
H３); 22.8 (CH２CH３); 28.7(CH３(BOC)); 29.4, 29.8
((CH２)１５); 32.0 (CH２CH２CH３); 43.7 (bs, N(CH
３)２); 79.5 (bs, C(BOC)); 156.7 (bs, CO(BOC)).炭
素CHCH２CH、CH２NH、CHCOおよびNCOに相当する共鳴は
それぞれ、32〜38ppmの間、38ppm〜48ppmの間、および1
75〜178ppmの間に大きなシグナルとして現れる。CH
２S、CH２N(CH３)２およびCH２COの炭素は検出されな
い。
【０１７４】1.4.19 コテロマーVII-L1aおよびVII-L1
b：テロマーVII-L1a(BOC)および VII-L1a(BOC)の脱保護 コテロマーVII-L1a(BOC)およびVII-L1b(O)(BOC)の脱保
護は、大過剰量のTFA中で室温にて1時間放置することに
より定量的に達成される。過剰量のTFAは、シクロヘキ
サンの存在下での共蒸発により除去する。コテロマーVI
I-L1aおよびVII-L1b が白色固体として得られる。
【０１７５】コテロマーVII-L1a (aDP n=10およびn'=
1). １H NMR (CD３OD): δ 0.95 (t,6H, CH３); 1.15-
1.45 (m, 60H, (CH２)１５); 1.45-2.00 (m, (2n+2n'+
2)H, CH２CH２NおよびCH２CHCO); 2.00-2.90 (m, (n+n'
+5)H, CH２S, CH２COおよびCHCO); 2.90-3.05 (m, 6n',
(CH３)２N); 3.05-3.90 (m, (4n+4n'+4)H, CH２N).)).
１３C NMR (CDCl３): δ 14.4 (CH３); 23.6 (CH２CH
３); 27.7, 27.9, 30.3,30.4, 30.7 ((CH２)１５); 33.
0 (CH２CH２CH３); 34.1および34.3 (bs, CONHCH ２CH２
N(CH３)２); 38.2 (bs, CONHCH２CH２NH３); 40.4 (bs,
CH２NH３); 43.8(bs, N(CH３)２); 58.0 (bs, CH２N(C
H３)２); 118.0 (q, J = 292 Hz, CF３);162.8 (q, J =
35 Hz, CF３CO); 177.9 (bs, NCO).炭素CHCH２CHに相
当する共鳴は、35〜38ppmの間に大きなシグナルとして
現れる。CH２S、CHCO、CH２NおよびCH２COの炭素は検出
されない。
【０１７６】コテロマーVII-L1b (aDP n=10およびn'=1
7).１H NMR (CDCl３):１H NMRスペクトルはテロマーVII
-L1aのスペクトルと一致するが、aDP n=10およびn'=17
である。１３C NMR (CDCl３): δ 14.3 (CH３); 23.6
(CH２CH３); 30.3, 30.6 ((CH ２)１５); 32.9 (CH２CH
２CH３); 35.7 (bs, CONHCH２CH２N(CH３)２); 38.2 (b
s, CONHCH２CH２NH３); 40.5 (bs, CH２NH３); 43.9 (b
s, N(CH３)２); 58.0 (bs, CH２N(CH３)２); 118.2 (q,
J = 292 Hz, CF３); 162.5 (q, J = 35 Hz, CF ３CO);
177.8 (bs, NCO).炭素CHCH２CHに相当する共鳴は、35〜
38ppmの間に大きなシグナルとして現れる。CH２S、CHC
O、CH２NおよびCH２CO炭素は検出されない。
【０１７７】実施例2 ：本発明のポリアミンテロマー化
合物とプラスミドpTG11033を含んでなる複合体の製造
（フランス特許出願第97/08267号） 本発明に使用される化合物の量は、所望のDNA濃度0.1mg
/ml(in vitro試験用)、荷電比、モル重量、本発明に従
って選択された化合物に存在し得る正電荷数に従って算
出する。ポリアミンテロマー／ＤＮＡ複合体は、10mg/m
l（10% DMSOおよび10% EtOHを含有する20mM HEPES緩衝
液、pH7.5）の濃度のテロマー調製物を所望の容量で、
所望のＤＮＡ濃度（例えば0.1mg/ml）となるような所望
容量のＤＮＡ溶液に加えることにより処方する。このよ
うに、荷電比5のポリアミンテロマーIII-L1h/ＤＮＡ複
合体の調製のためには、0.1g/mlのＤＮＡと40μlのポリ
アミンテロマー溶液(CHCl３中10mg/ml)をホウケイ酸塩
ガラス試験管(16×100mm)に移す。Rotavap蒸発系(45
℃、30pm、0.2バール、40分)で溶媒を蒸発させる。得ら
れた薄膜に、4μlのDMSO、4μlのEtOHおよび32μlのHEP
ES 20mM、pH7.5を加える。この調製物を、攪拌しつつ(3
0rpm)5分間50℃で加熱する。室温まで冷却した後、この
調製物37μlを、963μlのＤＮＡ溶液[(863μlのHEPES緩
衝液で希釈した100μl ＤＮＡ(1mg/ml))]に加える。こ
の調製物はさらなる実験に使用できる。
【０１７８】組成物がさらにDOPEを含んでなる場合、所
望の容量の1mg/mlクロロホルム溶液（モル／モル陽イオ
ンテロマー/DOPE)を、ポリアミンテロマー溶液(CHCl３
中10mg/ml)に加え、次いでその混合物をホウケイ酸塩ガ
ラス試験管に移す。以下の工程は、前記同様である。
【０１７９】実施例3：生成した複合体の大きさの測定 分析は、サンプルを25℃にて20分間平衡化した後に、Co
ulter N4Plus (Coultronics France S.A., Margency, F
rance)を用いて、25℃にて行う。ピペット採取の前に、
サンプルの一部を数回吸引排出する。このサンプルを測
定試験管中で希釈し、ホモジナイズする。これらの分析
は、このように10μl/ml濃度のＤＮＡを有する複合体に
対して行われる。180秒後に、90°における光回折を180
秒間測定する。範囲は3nm〜10,000nmとし、31ビンを用
いる。サンプルが50,000〜1,000,000／秒を示せば、大
きさの測定は有効である。
【０１８０】また、共通の疎水部分(C１８)と種々の数
のアミン基を有するポリアミンテロマー化合物のＤＮＡ
凝縮能も分析した。6〜60の第一アミンを含有するポリ
アミンテロマー化合物は総て、荷電比10で、ＤＮＡを10
0nm以下の大きさにまで凝縮することができる。以下の
表1は、DOPEを含む、または含まない場合、より小さい
(〜50nm)複合体も得られることを示している。第一アミ
ンの数は、III-L3c(n=6)またはIII-L2a(n=2)のようなポ
リアミンテロマー化合物を含んでなる複合体の大きさに
影響を与えると考えられ、それらはIII-L1g(n=20)、III
-L1h(n=40)またはIII-L1j(n=60)から得られるものより
大きいことがわかっている。
【０１８１】
【表１】
【０１８２】実施例4：A549細胞のトランスフェクショ
ン効率 トランスフェクションの20時間前、A549細胞（ヒト肺癌
に由来する上皮細胞）を、湿潤(37℃)、5% CO２/95%空
気下で、96穴のマルチウェルプレートのウェル中、10%
ウシ胎児血清(Gibco BRL)を含有するダルベッコの改変
イーグル培地(Dulbeco-modified Eagle culture mediu
m, DMEM)で培養する(2 x 10４細胞／ウェル)。一定容量
のＤＮＡ／ポリアミンテロマー複合体（それぞれ、40、
20、5および1μl）を、DMEMまたは10%ウシ胎児血清を添
加したDMEM（血清の存在下で行うトランスフェクション
用）で100μlに希釈して、ＤＮＡを種々の量（それぞれ
4、2、0.5および0.1μg）で含む調製物を得る。培地を
除き、所望の量のＤＮＡを含有する10%血清を含む、ま
たは含まないDMEM100μlに置換する。DMEM＋30%ウシ胎
児血清（または血清を用いて行うトランスフェクション
用としては10%）50μlを加える。20時間後、100μlのDM
EM＋10%血清を加える。
【０１８３】トランスフェクション後48時間で培地を除
き、細胞を、50μlの溶解緩衝液(Promega)を含むリン酸
溶液PBSおよびLysol 100μlで洗浄する。この溶解物は
ルシフェラーゼ活性の分析まで-80℃で冷凍する。この
測定は、96ウェルプレート中で「ルシフェラーゼ」測定
系(Promega)を用い、動的モードのBerthold LB96Pルミ
ノメーターにて、20μlの溶解混合物に対して１分間行
う。
【０１８４】結果は図1、2、3および4に示されている。
値はルシフェラーゼfg／タンパク質mgで表される。ウェ
ル当たりの全タンパク質濃度は慣用法(BAC試験、Pierc
e)を用いて測定する。例えば、１ウェルには約20〜30μ
gのタンパク質が含まれる。
【０１８５】同様の条件の下、裸のＤＮＡで処理した細
胞では、発現レベルは約50fgルシフェラーゼ／タンパク
質mgであることが判明した。
【０１８６】これらの結果は、本発明のポリアミン類は
細胞へプラスミドをトランスフェクトすることが可能で
あり、そのトランスフェクション効率はポリアミン鎖の
長さ、荷電比、ならびにＤＮＡ量に依存することを示す
ものである。等モル量のDOPEの存在は、特に血清の存在
下では、帯電の多いポリアミン(III-L1g、III-L1hまた
はIII-L1j)を含んでなる複合体の使用をする場合よりも
効果が高い。
【０１８７】実施例5：試験された新規な複合体：2μg
のプラスミド(pTG11033)と所望の量の10mM陽イオンポリ
マーpcTG146（アミン単量体に相当する濃度）を各々、2
0mM HEPES緩衝液、pH7.5溶液で10μlに希釈し、攪拌す
る。次いで、この２種の溶液を混合し、穏やかに攪拌す
る。15分後、形成した複合体を細胞に加える。
【０１８８】HeLa細胞を48穴のマルチウェルプレートに
入れ、トランスフェクション時に70〜80%の群叢になる
ようにする。これらを、N/P比が1、1.5、2.5および5と
なるよう所望の量のテロマーpcTG146を配合したpTG1103
3 2μgでトランスフェクトした。ＤＮＡの最終濃度は0.
1g/lであった。トランスフェクションは血清の不在下で
行い、3時間後に培地を除き、10%ウシ胎児血清を添加し
た新鮮培地に置換した。48時間後、発現を停止させ、ル
シフェラーゼを定量した。各条件につき3回行い、結果
は平均値±SD（標準誤差）で表す。
【０１８９】図5は種々のN/P比で得られたトランスフェ
クション効率を示している。図に示されたように、pcTG
146（L0がプロピルであるテロマー化合物III-L0に相当
する）は、試験したN/P比で顕著な導入遺伝子の発現を
もたらした。
【０１９０】形成した複合体の大きさの測定：（詳細に
ついては実施例3を参照） 複合体は前記と同様にして製造した。60μlを20mM HEPE
S緩衝液、pH7.5 540μlに希釈し、大きさの測定を行っ
た。以下の表は得られた結果を要約したものである。
【０１９１】
【表２】 複合体pcTG146/pTG11033の大きさは、いずれの荷電比を
用いても比較的小さい(＜150nm）。
【図面の簡単な説明】
【図１】血清の存在下での、荷電比+/-が10、5または2.
5（示した通り）のときの、本発明のポリアミンテロマ
ー化合物とプラスミドpTG11033からなる複合体でのA549
細胞のトランスフェクション。ＤＮＡ量を示す（μgＤ
ＮＡ）。白の柱は血清を含まない場合のトランスフェク
ションを、黒の柱は10%血清を含む場合のトランスフェ
クションを示す。分析した複合体はDOPEを含まない。
【図２】血清の存在下での、荷電比+/-が10、5または2.
5（示した通り）のときの、本発明のポリアミンテロマ
ー化合物とプラスミドpTG11033からなる複合体でのA549
細胞のトランスフェクション。ＤＮＡ量を示す（μgＤ
ＮＡ）。白の柱は血清を含まない場合のトランスフェク
ションを、黒の柱は10%血清を含む場合のトランスフェ
クションを示す。複合体中にDOPEが存在する。
【図３】血清の存在下での、荷電比+/-が10、5または2.
5（示した通り）のときの、本発明のポリアミンテロマ
ー化合物とプラスミドpTG11033からなる複合体でのA549
細胞のトランスフェクション。ＤＮＡ量を示す（μgＤ
ＮＡ）。白の柱は血清を含まない場合のトランスフェク
ションを、黒の柱は10%血清を含む場合のトランスフェ
クションを示す。分析した複合体はDOPEを含まない。
【図４】血清の存在下での、荷電比+/-が10、5または2.
5（示した通り）のときの、本発明のポリアミンテロマ
ー化合物とプラスミドpTG11033からなる複合体でのA549
細胞のトランスフェクション。ＤＮＡ量を示す（μgＤ
ＮＡ）。白の柱は血清を含まない場合のトランスフェク
ションを、黒の柱は10%血清を含む場合のトランスフェ
クションを示す。複合体中にDOPEが存在する。
【図５】種々のN/P比で得られたトランスフェクション
効率を示している。図で示されたように、pcTG146（L0
がプロピルであるテロマー化合物III-L0に相当する）
は、試験したN/P比で導入遺伝子の顕著な発現をもたら
した。
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０８Ｆ 20/60 Ｃ０８Ｌ 33/24 Ｃ０８Ｌ 33/24 Ａ６１Ｋ 37/02 // Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ 15/09 15/00 Ａ (72)発明者 カトリーヌ、サンタエラ フランス国サン、メム、プラース、ド、 ラ、メリー

Claims (38)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】式I： 【化１】 ｛式中、 AはH、または炭素数1〜4のアルキルもしくは炭素数5〜7
    のアリールであり、 重合度nは1〜100の範囲であり、 R１は、各[CH２-CA]ｎ繰り返し単位において互いに独立
    して、-H、-CH３、-C ２H５および-(CH２)ｕ-Bから選択
    され、 xおよびuは2〜4の整数であり、 Bは 【化２】 または 【化３】 （ここで、 yは2〜4の整数であり、 zは0〜6の整数であり、 R３、R４、R５、R６およびR７は互いに独立して、H、炭
    素数1〜4のアルキルまたはヒドロキシアルキルから選択
    される）である｝で示される基を含んでなるポリアミン
    テロマー化合物。
  2. 【請求項２】式II： 【化４】 ｛式中、 A、R１、B、nおよびxは請求項１の定義に同じであり、 Lは、基L0、L1、L2およびL3から選択され、 [ここで、L0はH、所望によりOH、COOHおよびNH２から選
    択される少なくとも１つの置換基で置換されていてもよ
    い炭素数1〜4のアルキルから選択され、かつ、L1、L2お
    よびL3は式： 【化５】 （ここで、 rは1、2または3であり、 bは1または2、かつ、dは0または1、ただしbとdは各繰り
    返し単位pにおいて互いに異なっていてもよく、 gは0〜200の範囲であり、 mおよびpは互いに独立して、1〜20、好ましくは8〜17の
    範囲であり、 R８、R９は互いに独立して、CH３-、wが5または7である
    CH３-(CH２)ｗ-CH=CH-（シスもしくはトランス）、sが
    2、4、6、8または10であるCｓF２ｓ＋１またはC ｓF
    ２ｓ＋１-CH=CH-（シスもしくはトランス）から選択さ
    れ、 R１０、R１１またはR１２のうち少なくとも１つが、L4
    が式IIの化合物のSと結合している結合部位であって、
    他の１つが互いに独立して、基-H、-OH、=O、-NH ２、-N
    H-COCH３、所望によりOH、COOHおよびNH２、特に-C
    H３、-C２H５、-C３H ７、-CH２CH２-OH、-CH２CH２CH２
    -OH、-CH２CH２-COOH、-CH２-CH(OH)-CH２-OH、-CH２CH
    ２CH２-COOHから選択される少なくとも１つの置換基で
    置換されていてもよい炭素数1〜4のアルキル基から選択
    され、かつ、R１０、R１１またはR１２は各繰り返し単
    位pにおいて互いに異なっていてもよく、 R１３は基-H、-OH、-NH２、-NH-COCH３、所望によりO
    H、COOHおよびNH２、特に-CH３、-C２H５、-C３H７、-C
    H２CH２-OH、-CH２CH２CH２-OH、-CH２CH２-COOH、-CH
    ２-CH(OH)-CH２-OH、-CH２CH２CH２-COOHから選択され
    る少なくとも１つの置換基で置換されていてよい炭素数
    1〜4のアルキル基から選択され、R１３はbが2であると
    き、各繰り返し単位pにおいて互いに異なっていてもよ
    く、 [aa]はその酸官能基を介してアミン残基と、またそのア
    ミン官能基を介してCO(CH２)r部分と結合したα-アミノ
    酸であり、このアミノ酸は弱いpKaを有するアミン／ア
    ンモニウム官能基を含んでなる）を有する]｝で示され
    る、請求項１記載のポリアミンテロマー化合物。
  3. 【請求項３】弱いpKaを有するアミン／アンモニウム官
    能基がイミダゾール／イミダゾリウムまたはカルボキシ
    レート／カルボキシル官能基である、請求項２記載のポ
    リアミンテロマー化合物。
  4. 【請求項４】α-アミノ酸がヒスチジン、3-メチルヒス
    チジン、アスパラギン酸およびグルタミン酸からなる群
    より選択される、請求項２または３記載のポリアミンテ
    ロマー化合物。
  5. 【請求項５】nが2〜60の整数である、請求項１〜４のい
    ずれか１項に記載のポリアミンテロマー化合物。
  6. 【請求項６】zが0である、請求項１〜５のいずれか１項
    に記載のポリアミンテロマー化合物。
  7. 【請求項７】化合物のポリアミン部分の少なくとも１つ
    の第二または第一窒素原子を介して結合した１以上の標
    的要素を更に含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載
    のポリアミンテロマー化合物。
  8. 【請求項８】標的要素が糖、グリコール誘導体、ペプチ
    ド、オリゴヌクレオチド、脂質、ホルモン、ビタミン、
    抗原、抗体、特異的な膜受容体リガンド、抗リガンドと
    反応し得るリガンド、融合誘導ペプチド、核局在化ペプ
    チドまたはこれら化合物の組み合わせからなる群より総
    てまたは一部が選択される、請求項７記載のポリアミン
    テロマー化合物。
  9. 【請求項９】脂質部分にフッ素化またはパーフルオロア
    ルキル末端を含む、請求項２記載のポリアミンテロマー
    化合物。
  10. 【請求項１０】式III-L1： 【化６】 ｛式中、m=p、すなわち：m=17かつn=1である化合物III-
    L1a m=17かつn=2である化合物III-L1b m=17かつn=3である化合物III-L1c m=17かつn=4である化合物III-L1d m=17かつn=5である化合物III-L1e m=17かつn=10である化合物III-L1f m=17かつn=20である化合物III-L1g m=17かつn=40である化合物III-L1h m=17かつn=50である化合物III-L1i m=17かつn=60である化合物III-L1j m=13かつn=10である化合物III-L1k m=13かつn=20である化合物III-L1l m=13かつn=70である化合物III-L1m｝ で示される化合物および式lll-L2： 【化７】 ｛式中、m=p、すなわち：m=17かつn=2である化合物III-
    L2a m=17かつn=20である化合物III-L2b m=17かつn=30である化合物III-L2c m=17かつn=90である化合物III-L2d｝ で示される化合物および式III-L3： 【化８】 ｛式中、m=p、すなわち：m=17かつn=1である化合物III-
    L3a m=17かつn=3である化合物III-L3b m=17かつn=6である化合物III-L3c m=17かつn=11である化合物III-L3dおよびm=17かつn=16
    である化合物III-L3e｝で示される化合物から選択され
    る、請求項２記載のポリアミンテロマー化合物。
  11. 【請求項１１】チオエーテル基がスルホン(-SO２-)また
    はスルホキシド(-SO-)へ酸化されている、請求項１〜１
    ０のいずれか１項に記載のポリアミンテロマー化合物。
  12. 【請求項１２】請求項１〜１１のタイプのポリアミンテ
    ロマー化合物の少なくとも１つと所望により少なくとも
    １つのアジュバントを含んでなる組成物。
  13. 【請求項１３】アジュバントが負電荷を有する脂質、中
    性脂質または両性イオン脂質である、請求項１２記載の
    組成物。
  14. 【請求項１４】アジュバントがホスファチジルエタノー
    ルアミン(PE)、ホスファチジルコリン、ホスホコリン、
    スフィンゴミエリン、セラミドもしくはセレブロシド、
    またはそれらの誘導体から選択される、請求項１３記載
    の組成物。
  15. 【請求項１５】アジュバントがジオレイルホスファチジ
    ルエタノールアミン(DOPE)である、請求項１４記載の組
    成物。
  16. 【請求項１６】アジュバントが陽イオン脂質化合物から
    選択される、請求項１２または１３記載の組成物。
  17. 【請求項１７】有効物質を細胞へ導入するための複合体
    であって、請求項１〜１１の化合物の少なくとも１種お
    よび／または請求項１２〜１６の組成物の少なくとも１
    種、および少なくとも１つの負電荷を含んでなる有効物
    質の少なくとも１種を含んでなる複合体。
  18. 【請求項１８】有効物質が核酸またはタンパク質であ
    る、請求項１７記載の複合体。
  19. 【請求項１９】有効物質が、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、
    プラスミドＤＮＡ、メッセンジャーＤＮＡ、アンチセン
    スＲＮＡ、リボザイム、トランスファーＲＮＡ、リボゾ
    ームＲＮＡ、またはかかる種のＲＮＡをコードするＤＮ
    Ａからなる群より選択される核酸である、請求項１８記
    載の複合体。
  20. 【請求項２０】核酸が治療上有効な遺伝子配列とその発
    現を可能にする構成要素とを含む、請求項１９記載の複
    合体。
  21. 【請求項２１】大きさが500nm未満である、請求項１７
    〜２０のいずれか１項に記載の複合体。
  22. 【請求項２２】大きさが20〜100nmの範囲である、請求
    項２１記載の複合体。
  23. 【請求項２３】化合物および／または組成物の正電荷数
    と有効物質の負電荷数の間の比率が0.05〜20の間であ
    る、請求項１７〜２２のいずれか１項に記載の複合体。
  24. 【請求項２４】下記工程：請求項１〜１１の化合物の少
    なくとも１種および／または請求項１２〜１６の組成物
    の少なくとも１種を、少なくとも１種の有効物質、特に
    治療物質と接触させ、少なくとも１個の負電荷を組み込
    み、 次いで精製工程の後、最後にその複合体を回収すること
    を含んでなる、請求項１７〜２３のいずれか１項に記載
    の複合体の製造方法。
  25. 【請求項２５】化合物および／または組成物をまず、水
    和溶媒、好ましくはエタノールもしくはジメチルスルホ
    キシドまたは両者の混合物に溶解させる、請求項２４記
    載の方法。
  26. 【請求項２６】化合物および／または組成物の懸濁液を
    まず、界面活性剤溶液として調製する、請求項２４記載
    の方法。
  27. 【請求項２７】複合体を透析により精製する付加工程を
    含む、請求項２４〜２６のいずれか１項に記載の方法。
  28. 【請求項２８】化合物および／または組成物を、予備音
    波処理／押し出し成形工程にかける、請求項２４〜２７
    のいずれか１項に記載の方法。
  29. 【請求項２９】in vitroで少なくとも１種の有効物質、
    特に核酸を細胞へ導入するための、請求項１〜１１の化
    合物、または請求項１２〜１６の組成物、または請求項
    １７〜２３の複合体の使用。
  30. 【請求項３０】細胞が哺乳類細胞である、請求項２９記
    載の使用。
  31. 【請求項３１】in vitroで少なくとも１種の有効物質を
    細胞へ導入する方法であって、細胞を請求項１７〜２３
    の複合体と接触させる方法。
  32. 【請求項３２】ヒトまたは動物の治療、予防または予防
    接種処置用の、さらに具体的には遺伝子治療用の医薬組
    成物を製造するための、請求項１〜１１の化合物、請求
    項１２〜１６の組成物、または請求項１７〜２３の複合
    体の使用。
  33. 【請求項３３】医薬組成物を筋肉内注射、吸入、気管内
    注入、点滴注入、エアゾル噴霧または局所塗布により投
    与する、請求項３２記載の方法。
  34. 【請求項３４】請求項１７〜２３の複合体の少なくとも
    １種を含んでなる医薬組成物。
  35. 【請求項３５】少なくとも１種のアジュバントを含んで
    なる、請求項３４記載の医薬組成物。
  36. 【請求項３６】アジュバントがクロロキン、プロピレン
    グリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール、
    エタノール、1-メチルL-2-ピロリドンもしくはそれらの
    誘導体などのプロトン性極性化合物、またはジメチルス
    ルホキシド(DMSO)、ジエチルスルホキシド、ジ-n-プロ
    ピルスルホキシド、ジメチルスルホン、スルホラン、ジ
    メチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、テトラメ
    チルウレア、アセトニトリルもしくはそれらの誘導体な
    どの非プロトン性極性化合物から選択される、請求項３
    ５記載の医薬組成物。
  37. 【請求項３７】ヒトまたは動物における投与が可能な医
    薬上許容される媒質を含んでなる、請求項３６〜３６の
    いずれか１項に記載の医薬組成物。
  38. 【請求項３８】請求項１７〜２３の複合体によりトラン
    スフェクトされた細胞。
JP11168838A 1998-06-15 1999-06-15 活性物質を細胞へ移入させる化合物およびそれを含む組成物 Pending JP2000143619A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP98401471A EP0965583A1 (en) 1998-06-15 1998-06-15 Polyamine compounds and compositions containing them useful for the transfer of active substances into a cell
EP98401471.2 1998-06-15

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2000143619A true JP2000143619A (ja) 2000-05-26

Family

ID=8235405

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP11168838A Pending JP2000143619A (ja) 1998-06-15 1999-06-15 活性物質を細胞へ移入させる化合物およびそれを含む組成物

Country Status (4)

Country Link
EP (1) EP0965583A1 (ja)
JP (1) JP2000143619A (ja)
AU (1) AU3504399A (ja)
CA (1) CA2274365A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4847962B2 (ja) * 2004-10-29 2011-12-28 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド 動物タンパク質を含まない細胞培養培地

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS63251409A (ja) * 1987-04-09 1988-10-18 Nippon Shokubai Kagaku Kogyo Co Ltd カチオン性オリゴマ−
JPH0543529A (ja) * 1991-08-10 1993-02-23 Taisho Pharmaceut Co Ltd アルカンアミドアンモニウム化合物
EP0618191A1 (en) * 1993-04-02 1994-10-05 AMERSHAM INTERNATIONAL plc Metal chelating compounds
ES2242198T3 (es) * 1995-10-25 2005-11-01 Octoplus B.V. Poliacrilatos y poli(alquil) acrilatos cationicos o las correspondientes acrilamidas para utilizar en sistemas de transfeccion sinteticos.
GB9623051D0 (en) * 1996-11-06 1997-01-08 Schacht Etienne H Delivery of DNA to target cells in biological systems

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4847962B2 (ja) * 2004-10-29 2011-12-28 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド 動物タンパク質を含まない細胞培養培地
US8440408B2 (en) 2004-10-29 2013-05-14 Baxter International Inc. Animal protein-free media for cultivation of cells
US8748156B2 (en) 2004-10-29 2014-06-10 Baxter International Inc. Animal protein-free media for cultivation of cells
US9222075B2 (en) 2004-10-29 2015-12-29 Baxalta Incorporated Animal protein-free media for cultivation of cells
US9714411B2 (en) 2004-10-29 2017-07-25 Baxalta GmbH Animal protein-free media for cultivation of cells
US9809796B2 (en) 2004-10-29 2017-11-07 Baxalta GmbH Animal protein-free media for cultivation of cells
US10138461B2 (en) 2004-10-29 2018-11-27 Baxalta GmbH Animal protein-free media for cultivation of cells
US10655099B2 (en) 2004-10-29 2020-05-19 Baxalta Incorporated Animal protein-free media for cultivation of cells

Also Published As

Publication number Publication date
CA2274365A1 (en) 1999-12-15
AU3504399A (en) 1999-12-23
EP0965583A1 (en) 1999-12-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4999784B2 (ja) トランスフェクション剤としてのリポポリアミン及びその医薬的使用
AU727040B2 (en) New lipid compounds and compositions containing them which can be used for the transfer of at least one active substance, in particular a polynucleotide, into a target cell and use in gene therapy
US6218370B1 (en) Glycerolipidic compounds used for the transfer of an active substance into a target cell
US6172049B1 (en) Phosphonic acid-based cationic lipids
DE69828045T2 (de) Verbindungen, ihre herstellung und ihre verwendung für den transfer von nucleinsäuren in zellen
US6291423B1 (en) Lipid complexes for transferring at least a therapeutically active substance, in particular a polynucleotide into a target cell and use in gene therapy
US20100305198A1 (en) Cationic lipids
US6489495B2 (en) Cationic amphiphiles for liposomal gene transfer
AU759197B2 (en) Transfecting compounds which are sensitive to reducing conditions, pharmaceutical compositions containing them and their applications
JP2000143619A (ja) 活性物質を細胞へ移入させる化合物およびそれを含む組成物
AU750696B2 (en) Use of a cationic polymer for the preparation of a complex with nucleic acid and related compositions
EP0965584A2 (en) Polyamine compounds and compositions containing them useful for the transfer of active substances into a cell
EP1228236A2 (en) Compositions for transfecting nucleic acids and their use
EP1300161A1 (en) Cationic lipids suitable for gene transfer