JP2000088849A - フェリチン測定方法およびフェリチン測定用キット - Google Patents
フェリチン測定方法およびフェリチン測定用キットInfo
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 検体鮮度の影響が少ない状態でフェリチン濃
度を測定することができるフェリチン測定方法およびフ
ェリチン測定用キットを提供する。 【解決手段】 塩化コリンなどの第４級アンモニウム塩
を含ませたＲ１試薬と、抗フェリチン抗体が感作された
不溶性担体を含むＲ２試薬とを用いて、検体中のフェリ
チンの濃度を測定する。この方法によれば、図１に示し
てあるように、検体鮮度の影響が少ない状態でフェリチ
ン濃度を測定することができる。
度を測定することができるフェリチン測定方法およびフ
ェリチン測定用キットを提供する。 【解決手段】 塩化コリンなどの第４級アンモニウム塩
を含ませたＲ１試薬と、抗フェリチン抗体が感作された
不溶性担体を含むＲ２試薬とを用いて、検体中のフェリ
チンの濃度を測定する。この方法によれば、図１に示し
てあるように、検体鮮度の影響が少ない状態でフェリチ
ン濃度を測定することができる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、フェリチンの濃度
を測定するためのフェリチン測定方法およびフェリチン
測定用キットに関する。
を測定するためのフェリチン測定方法およびフェリチン
測定用キットに関する。
【０００２】
【従来の技術】フェリチンは、肝実質細胞や網内皮系細
胞、血清中に存在する、分子量が約４５万の可溶性の鉄
貯蔵タンパクである。フェリチンは、血清中のその濃度
が体内の鉄貯蔵量と密接に関係している物質であること
がわかっているため、フェリチンの濃度を指標として、
鉄代謝異常のある各種血液疾患の診断や治療経過観察が
行われている（臨床血液,20:1327-1325,1979）。
胞、血清中に存在する、分子量が約４５万の可溶性の鉄
貯蔵タンパクである。フェリチンは、血清中のその濃度
が体内の鉄貯蔵量と密接に関係している物質であること
がわかっているため、フェリチンの濃度を指標として、
鉄代謝異常のある各種血液疾患の診断や治療経過観察が
行われている（臨床血液,20:1327-1325,1979）。
【０００３】また、フェリチンは、白血病や肝癌などの
各種の悪性腫瘍において高値になることも報告されてお
り（Clin. Chim. Acta, 106:203-214,1980）、腫瘍マー
カーの一つとしても臨床的に有効とされている。
各種の悪性腫瘍において高値になることも報告されてお
り（Clin. Chim. Acta, 106:203-214,1980）、腫瘍マー
カーの一つとしても臨床的に有効とされている。
【０００４】フェリチンの濃度測定には、従来は、ラジ
オイムノアッセイ（放射性免疫測定法）が主に用いられ
ていた。しかしながら、この方法はラジオアイソトープ
を使用するものであるため、近年では、エンザイムイム
ノアッセイ法、ラテックス凝集による免疫測定法（ラテ
ックス比濁法・カウンティングイムノアッセイ法等）が
用いられるようになってきている。
オイムノアッセイ（放射性免疫測定法）が主に用いられ
ていた。しかしながら、この方法はラジオアイソトープ
を使用するものであるため、近年では、エンザイムイム
ノアッセイ法、ラテックス凝集による免疫測定法（ラテ
ックス比濁法・カウンティングイムノアッセイ法等）が
用いられるようになってきている。
【０００５】特に、ラテックス凝集による免疫測定法
が、他法に比べて簡便かつ迅速に測定が行える方法とな
っているため、広く使用されている。なお、ラテックス
比濁法の詳細については、例えば、医学と薬学,30(4),8
93-899,1993 を参照されたい。
が、他法に比べて簡便かつ迅速に測定が行える方法とな
っているため、広く使用されている。なお、ラテックス
比濁法の詳細については、例えば、医学と薬学,30(4),8
93-899,1993 を参照されたい。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】ラテックス凝集による
免疫測定法は、簡便かつ迅速にフェリチン濃度の測定が
行える方法となっているものの、検体の鮮度により測定
値が大きく異なる方法となっていた。すなわち、採血直
後における測定値と、冷蔵保存した後における測定値が
異なる方法になっていた。
免疫測定法は、簡便かつ迅速にフェリチン濃度の測定が
行える方法となっているものの、検体の鮮度により測定
値が大きく異なる方法となっていた。すなわち、採血直
後における測定値と、冷蔵保存した後における測定値が
異なる方法になっていた。
【０００７】また、冷蔵保存した日数によっても測定値
が異なる方法となっていた。従って、従来の、ラテック
ス凝集による免疫測定法を用いて、正確なフェリチン濃
度を得るためには、採血後、一定期間内に測定を行うと
いった管理が必要されることになるが、このような管理
を行うことは極めて困難である。
が異なる方法となっていた。従って、従来の、ラテック
ス凝集による免疫測定法を用いて、正確なフェリチン濃
度を得るためには、採血後、一定期間内に測定を行うと
いった管理が必要されることになるが、このような管理
を行うことは極めて困難である。
【０００８】本発明は、上記に鑑みてなされたものであ
って、検体鮮度の影響が少ない状態でフェリチン濃度を
測定することができるフェリチン測定方法およびフェリ
チン測定用キットを提供することを目的とする。
って、検体鮮度の影響が少ない状態でフェリチン濃度を
測定することができるフェリチン測定方法およびフェリ
チン測定用キットを提供することを目的とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に、請求項１にかかるフェリチン測定方法は、抗フェリ
チン抗体が感作された不溶性担体と、検体中のフェリチ
ンとの抗原抗体反応による前記不溶性担体の凝集反応に
基づき前記フェリチンの濃度が測定されるフェリチン測
定方法において、前記凝集反応が生ずる反応系内に第４
級アンモニウム塩が含まれる状態で前記フェリチンの濃
度が測定されることを特徴とする。
に、請求項１にかかるフェリチン測定方法は、抗フェリ
チン抗体が感作された不溶性担体と、検体中のフェリチ
ンとの抗原抗体反応による前記不溶性担体の凝集反応に
基づき前記フェリチンの濃度が測定されるフェリチン測
定方法において、前記凝集反応が生ずる反応系内に第４
級アンモニウム塩が含まれる状態で前記フェリチンの濃
度が測定されることを特徴とする。
【００１０】また、請求項２にかかるフェリチン測定方
法は、検体中に含まれるフェリチン濃度を測定するため
のフェリチン測定方法において、前記検体と、前記検体
を希釈するための第１試薬であって、第４級アンモニウ
ム塩を含む第１試薬とを混和する第１混和工程と、この
第１混和工程で得られた混和物と、抗フェリチン抗体が
感作された不溶性担体を含む第２試薬とを混和する第２
混和工程と、この第２混和工程で得られた反応系内で生
ずる前記不溶性担体の凝集反応に基づき前記フェリチン
の濃度を測定する測定工程と、を含むことを特徴とす
る。
法は、検体中に含まれるフェリチン濃度を測定するため
のフェリチン測定方法において、前記検体と、前記検体
を希釈するための第１試薬であって、第４級アンモニウ
ム塩を含む第１試薬とを混和する第１混和工程と、この
第１混和工程で得られた混和物と、抗フェリチン抗体が
感作された不溶性担体を含む第２試薬とを混和する第２
混和工程と、この第２混和工程で得られた反応系内で生
ずる前記不溶性担体の凝集反応に基づき前記フェリチン
の濃度を測定する測定工程と、を含むことを特徴とす
る。
【００１１】また、請求項３にかかるフェリチン測定方
法は、前記反応系内の前記第４級アンモニウム塩の含有
率が０．４〜２０％であることを特徴とする。
法は、前記反応系内の前記第４級アンモニウム塩の含有
率が０．４〜２０％であることを特徴とする。
【００１２】また、請求項４にかかるフェリチン測定方
法は、前記反応系内の前記第４級アンモニウム塩の含有
率が２〜１４％であることを特徴とする。
法は、前記反応系内の前記第４級アンモニウム塩の含有
率が２〜１４％であることを特徴とする。
【００１３】また、請求項５にかかるフェリチン測定方
法は、前記反応系内の前記第４級アンモニウム塩の含有
率が４〜７％であることを特徴とする。
法は、前記反応系内の前記第４級アンモニウム塩の含有
率が４〜７％であることを特徴とする。
【００１４】また、請求項６にかかるフェリチン測定方
法は、前記不溶性担体がラテックス粒子であることを特
徴とする。
法は、前記不溶性担体がラテックス粒子であることを特
徴とする。
【００１５】また、請求項７にかかるフェリチン測定用
キットは、検体中に含まれるフェリチン濃度を測定する
ために用いられるフェリチン測定用キットにおいて、前
記検体を希釈するための第１試薬であって、第４級アン
モニウム塩を含む第１試薬と、前記第１試薬によって希
釈された前記検体と混和される第２試薬であって、抗フ
ェリチン抗体が感作された不溶性担体を含む第２試薬
と、を含むことを特徴とする。
キットは、検体中に含まれるフェリチン濃度を測定する
ために用いられるフェリチン測定用キットにおいて、前
記検体を希釈するための第１試薬であって、第４級アン
モニウム塩を含む第１試薬と、前記第１試薬によって希
釈された前記検体と混和される第２試薬であって、抗フ
ェリチン抗体が感作された不溶性担体を含む第２試薬
と、を含むことを特徴とする。
【００１６】また、請求項８にかかるフェリチン測定用
キットは、前記第１試薬と前記第２試薬が、混和後の前
記第４級アンモニウム塩の含有率が０．４〜２０％とな
る割合で使用される試薬であることを特徴とする。
キットは、前記第１試薬と前記第２試薬が、混和後の前
記第４級アンモニウム塩の含有率が０．４〜２０％とな
る割合で使用される試薬であることを特徴とする。
【００１７】また、請求項９にかかるフェリチン測定用
キットは、前記第１試薬の第４級アンモニウム塩の含有
率が０．５〜３０％であることを特徴とする。
キットは、前記第１試薬の第４級アンモニウム塩の含有
率が０．５〜３０％であることを特徴とする。
【００１８】また、請求項１０にかかるフェリチン測定
方法は、検体中に含まれるフェリチン濃度を測定するた
めのフェリチン測定方法において、前記検体と、前記検
体を希釈するための第１試薬であって、攪拌により激し
く泡立たない程度の量の界面活性剤を含む第１試薬とを
混和する第１混和工程と、この第１混和工程で得られた
混和物と、抗フェリチン抗体が感作された不溶性担体を
含む第２試薬とを混和する第２混和工程と、この第２混
和工程で得られた反応系内で生ずる前記不溶性担体の凝
集反応に基づき前記フェリチンの濃度を測定する測定工
程と、を含むことを特徴とする。
方法は、検体中に含まれるフェリチン濃度を測定するた
めのフェリチン測定方法において、前記検体と、前記検
体を希釈するための第１試薬であって、攪拌により激し
く泡立たない程度の量の界面活性剤を含む第１試薬とを
混和する第１混和工程と、この第１混和工程で得られた
混和物と、抗フェリチン抗体が感作された不溶性担体を
含む第２試薬とを混和する第２混和工程と、この第２混
和工程で得られた反応系内で生ずる前記不溶性担体の凝
集反応に基づき前記フェリチンの濃度を測定する測定工
程と、を含むことを特徴とする。
【００１９】
【発明の実施の形態】以下、この発明にかかるフェリチ
ン測定方法およびフェリチン測定用キットの実施の形態
を詳細に説明する。
ン測定方法およびフェリチン測定用キットの実施の形態
を詳細に説明する。
【００２０】上記課題を解決するために、鋭意、研究を
行った結果、発明者らは、抗フェリチン抗体が感作され
た不溶性担体と、検体中のフェリチンとの抗原抗体反応
による前記不溶性担体の凝集反応に基づき前記フェリチ
ンの濃度を測定するに際してその凝集反応が生ずる反応
系内に、塩化コリン、臭化コリン、塩化アセチルコリン
等の第４級アンモニウム塩を含めておけば、検体鮮度の
影響が少ない状態でフェリチン濃度を測定することがで
きることを見出した。
行った結果、発明者らは、抗フェリチン抗体が感作され
た不溶性担体と、検体中のフェリチンとの抗原抗体反応
による前記不溶性担体の凝集反応に基づき前記フェリチ
ンの濃度を測定するに際してその凝集反応が生ずる反応
系内に、塩化コリン、臭化コリン、塩化アセチルコリン
等の第４級アンモニウム塩を含めておけば、検体鮮度の
影響が少ない状態でフェリチン濃度を測定することがで
きることを見出した。
【００２１】このフェリチン測定方法の具体的な実現方
法は、特に限定されない。いわゆる、１液型の試薬の使
用により実現しても良く、２液型の試薬の使用により実
現しても良い。
法は、特に限定されない。いわゆる、１液型の試薬の使
用により実現しても良く、２液型の試薬の使用により実
現しても良い。
【００２２】例えば、検体を希釈するための第１試薬で
あって、第４級アンモニウム塩を含む第１試薬と、前記
第１試薬によって希釈された前記検体と混和される第２
試薬であって、抗フェリチン抗体が感作された不溶性担
体を含む第２試薬とを用意しておき（すなわち、フェリ
チン測定用キットを用意しておき）、まず、検体と第１
試薬とを混和し、つぎに、得られた混和物と第２試薬と
を混和することによって反応系を調整し、その反応系内
で生ずる前記不溶性担体の凝集反応に基づき前記フェリ
チンの濃度を測定するといった手順で、本発明にかかる
フェリチン測定方法を実現することもできる。
あって、第４級アンモニウム塩を含む第１試薬と、前記
第１試薬によって希釈された前記検体と混和される第２
試薬であって、抗フェリチン抗体が感作された不溶性担
体を含む第２試薬とを用意しておき（すなわち、フェリ
チン測定用キットを用意しておき）、まず、検体と第１
試薬とを混和し、つぎに、得られた混和物と第２試薬と
を混和することによって反応系を調整し、その反応系内
で生ずる前記不溶性担体の凝集反応に基づき前記フェリ
チンの濃度を測定するといった手順で、本発明にかかる
フェリチン測定方法を実現することもできる。
【００２３】また、本発明によるフェリチン測定方法を
使用する場合、反応系における第４級アンモニウム塩の
含有率（濃度）を高くしておいた方が、検体鮮度の影響
がより少ない状態での測定が可能となる。しかしなが
ら、測定感度が低下することになるため、反応系内の第
４級アンモニウム塩の含有率は、０．４〜２０％程度で
あることが好ましく、２〜１４％、特に、４〜７％とし
ておくことが望ましい。
使用する場合、反応系における第４級アンモニウム塩の
含有率（濃度）を高くしておいた方が、検体鮮度の影響
がより少ない状態での測定が可能となる。しかしなが
ら、測定感度が低下することになるため、反応系内の第
４級アンモニウム塩の含有率は、０．４〜２０％程度で
あることが好ましく、２〜１４％、特に、４〜７％とし
ておくことが望ましい。
【００２４】また、第１試薬と第２試薬とを用いる形態
で本発明を実施する場合には、その混合の結果物の第４
級アンモニウム塩含有率が上記範囲となるようにしてお
けば良い。すなわち、第１試薬と第２試薬の双方に第４
級アンモニウム塩を含ませておいても良く、一方のみに
第４級アンモニウム塩を含ませておいても良い。
で本発明を実施する場合には、その混合の結果物の第４
級アンモニウム塩含有率が上記範囲となるようにしてお
けば良い。すなわち、第１試薬と第２試薬の双方に第４
級アンモニウム塩を含ませておいても良く、一方のみに
第４級アンモニウム塩を含ませておいても良い。
【００２５】なお、不溶性担体としては、一般に免疫学
的凝集法に用いられているラテックス粒子が用いること
ができることは当然として、リポゾーム、金コロイド等
を用いることができる。ただし、粒子径が０．０５〜
０．３μｍのものを用いることが好ましい。また、何種
類かの不溶性担体を組み合わせて用いても良い。抗フェ
リチン抗体は、ポリクロナール抗体、モノクロナール抗
体のいずれであっても良い。また、抗体由来の動物種は
特に限定されない。不溶性担体への抗フェリチン抗体の
感作は、周知の方法を用いて抗フェリチン抗体を不溶性
担体へ吸着又は結合させることにより実現できる。
的凝集法に用いられているラテックス粒子が用いること
ができることは当然として、リポゾーム、金コロイド等
を用いることができる。ただし、粒子径が０．０５〜
０．３μｍのものを用いることが好ましい。また、何種
類かの不溶性担体を組み合わせて用いても良い。抗フェ
リチン抗体は、ポリクロナール抗体、モノクロナール抗
体のいずれであっても良い。また、抗体由来の動物種は
特に限定されない。不溶性担体への抗フェリチン抗体の
感作は、周知の方法を用いて抗フェリチン抗体を不溶性
担体へ吸着又は結合させることにより実現できる。
【００２６】また、第１試薬は、グリシン緩衝液、トリ
ス緩衝液、りん酸緩衝液などを元として調製することが
でき、その際、アルブミン等のタンパク、ポリエチレン
グリコール等の高分子、ツイーン、トライトン等の界面
活性剤、塩化ナトリウム等の塩化物、アジ化ナトリウム
等の防腐剤等を含めることもできる。
ス緩衝液、りん酸緩衝液などを元として調製することが
でき、その際、アルブミン等のタンパク、ポリエチレン
グリコール等の高分子、ツイーン、トライトン等の界面
活性剤、塩化ナトリウム等の塩化物、アジ化ナトリウム
等の防腐剤等を含めることもできる。
【００２７】さらに、本発明者らは、第４級アンモニウ
ム塩ではなく、比較的多量の界面活性剤を含む第１試薬
を用いても、検体鮮度の影響が少ない状態でフェリチン
濃度を測定することができることを見出しているが、こ
の方法では、界面活性剤の量の調整を誤ると、攪拌時に
泡が立ってしまい測定が行えなくなるといったことが生
ずるので、第４級アンモニウム塩を用いた方法の方が好
ましいものと考えている。
ム塩ではなく、比較的多量の界面活性剤を含む第１試薬
を用いても、検体鮮度の影響が少ない状態でフェリチン
濃度を測定することができることを見出しているが、こ
の方法では、界面活性剤の量の調整を誤ると、攪拌時に
泡が立ってしまい測定が行えなくなるといったことが生
ずるので、第４級アンモニウム塩を用いた方法の方が好
ましいものと考えている。
【００２８】以下、本発明におけるフェリチン測定方法
およびフェリチン測定用キットについて、図面を参照し
てさらに具体的に、その実施例について説明する。ここ
では、第１試薬と第２試薬（以下、それぞれ、Ｒ１試
薬、Ｒ２試薬と表記する）とを用いる形態での本発明の
フェリチン測定方法にかかる実施例を説明することにす
る。
およびフェリチン測定用キットについて、図面を参照し
てさらに具体的に、その実施例について説明する。ここ
では、第１試薬と第２試薬（以下、それぞれ、Ｒ１試
薬、Ｒ２試薬と表記する）とを用いる形態での本発明の
フェリチン測定方法にかかる実施例を説明することにす
る。
【００２９】まず、Ｒ１試薬、Ｒ２試薬の調製手順を説
明する。Ｒ１試薬として、５０ｍＭグリシン緩衝液（１
５０ｍＭ塩化ナトリウム、０．１％アジ化ナトリウムを
含む。以下、ＧＢＳと略記する。）に、ウシ血清アルブ
ミン（以下、ＢＳＡと略記する。）、ポリエチレングリ
コール6,000 、第４級アンモニウム塩である塩化コリン
を、それぞれ、１％、２％、Ｘ％（Ｘ＝０．２、０．
５、１、２、５、１０、２０、３０）含むように添加し
たものを調製した。
明する。Ｒ１試薬として、５０ｍＭグリシン緩衝液（１
５０ｍＭ塩化ナトリウム、０．１％アジ化ナトリウムを
含む。以下、ＧＢＳと略記する。）に、ウシ血清アルブ
ミン（以下、ＢＳＡと略記する。）、ポリエチレングリ
コール6,000 、第４級アンモニウム塩である塩化コリン
を、それぞれ、１％、２％、Ｘ％（Ｘ＝０．２、０．
５、１、２、５、１０、２０、３０）含むように添加し
たものを調製した。
【００３０】また、塩化コリンの代わりに界面活性剤
（Triton X-100）を、０．０１％、０．０５％含むＲ１
試薬の調製も行った。さらに、塩化コリンを含まないＲ
１試薬（以下、比較用Ｒ１試薬と表記する）も調製し
た。そして、調製した各Ｒ１試薬を５℃で保存してお
き、測定（詳細は後述）に用いた。
（Triton X-100）を、０．０１％、０．０５％含むＲ１
試薬の調製も行った。さらに、塩化コリンを含まないＲ
１試薬（以下、比較用Ｒ１試薬と表記する）も調製し
た。そして、調製した各Ｒ１試薬を５℃で保存してお
き、測定（詳細は後述）に用いた。
【００３１】Ｒ２試薬としては、以下の手順で調製した
１種の試薬を用意した。１０ｍｇの抗フェリチン抗体を
９．５ｍＬのＧＢＳに溶解し、０．５ｍＬのラテックス
（粒子径０．１６μｍ、固形分１０％懸濁液）を加え、
３７℃で一夜、インキュベーションした。そして、この
ようにして調製した感作ラテックス懸濁液を、１０℃、
14,000rpm にて３０分間遠心分離した後、その上清を除
去した。
１種の試薬を用意した。１０ｍｇの抗フェリチン抗体を
９．５ｍＬのＧＢＳに溶解し、０．５ｍＬのラテックス
（粒子径０．１６μｍ、固形分１０％懸濁液）を加え、
３７℃で一夜、インキュベーションした。そして、この
ようにして調製した感作ラテックス懸濁液を、１０℃、
14,000rpm にて３０分間遠心分離した後、その上清を除
去した。
【００３２】つぎに、得られた沈殿に、１％ＢＳＡ添加
ＧＢＳ１０ｍＬを加え、３７℃で１時間インキュベーシ
ョンを行った。その後、再び、１０℃、14,000rpm での
３０分間の遠心分離を行い、上清の除去により得られた
沈殿を、１％ＢＳＡ添加ＧＢＳ２０ｍＬに懸濁させるこ
とにより、Ｒ２試薬を調製した。
ＧＢＳ１０ｍＬを加え、３７℃で１時間インキュベーシ
ョンを行った。その後、再び、１０℃、14,000rpm での
３０分間の遠心分離を行い、上清の除去により得られた
沈殿を、１％ＢＳＡ添加ＧＢＳ２０ｍＬに懸濁させるこ
とにより、Ｒ２試薬を調製した。
【００３３】以下、このＲ２試薬と各Ｒ１試薬とからな
る各フェリチンラテックス試薬（フェリチン測定キッ
ト）の検体鮮度依存性を評価するために行った実験の内
容、結果を説明する。
る各フェリチンラテックス試薬（フェリチン測定キッ
ト）の検体鮮度依存性を評価するために行った実験の内
容、結果を説明する。
【００３４】本発明者らは、各フェリチンラテックス試
薬（フェリチン測定キット）の検体鮮度依存性を評価す
るために、５℃で冷蔵保存された検体（ヒト血清）に対
して、その採血後４日間経過した日を基準日とし、その
基準日におけるフェリチン濃度と、基準日から、それぞ
れ、４、７、１４日経過した日におけるフェリチン濃度
の測定を行った。また、比較用Ｒ１試薬とＲ２試薬とか
らなるフェリチンラテックス試薬に対しても同様の測定
を行った。
薬（フェリチン測定キット）の検体鮮度依存性を評価す
るために、５℃で冷蔵保存された検体（ヒト血清）に対
して、その採血後４日間経過した日を基準日とし、その
基準日におけるフェリチン濃度と、基準日から、それぞ
れ、４、７、１４日経過した日におけるフェリチン濃度
の測定を行った。また、比較用Ｒ１試薬とＲ２試薬とか
らなるフェリチンラテックス試薬に対しても同様の測定
を行った。
【００３５】この際、フェリチン濃度の測定は、自動分
析装置５０２Ｘ（Ａ＆Ｔ社製）を用いて行った。より具
体的には、２４μＬの検体（ヒト血清）に、１８０μＬ
のＲ１試薬を添加して約３００秒間インキュベーション
させた後、３０μＬのＲ２試薬を添加し、その約３０秒
後から約３００秒間の、波長６６５ｎｍにおける吸光度
を測定し、直線回帰から算出された値を、10,000倍して
濁度変化量ΔＯＤを求めた。そして、同様の測定を既知
濃度のフェリチン試料（コントロール血清）に対して行
うことにより作成しておいた検量線を用いて、ΔＯＤか
らフェリチン濃度を算出した。
析装置５０２Ｘ（Ａ＆Ｔ社製）を用いて行った。より具
体的には、２４μＬの検体（ヒト血清）に、１８０μＬ
のＲ１試薬を添加して約３００秒間インキュベーション
させた後、３０μＬのＲ２試薬を添加し、その約３０秒
後から約３００秒間の、波長６６５ｎｍにおける吸光度
を測定し、直線回帰から算出された値を、10,000倍して
濁度変化量ΔＯＤを求めた。そして、同様の測定を既知
濃度のフェリチン試料（コントロール血清）に対して行
うことにより作成しておいた検量線を用いて、ΔＯＤか
らフェリチン濃度を算出した。
【００３６】表１に、上記実験結果を変化率で整理した
結果を示し、図１に、当該結果をプロットしたグラフを
示す。ここで、変化率とは、保存期間が０日である検体
（採血後４日間冷蔵保存された検体）のフェリチン濃度
測定結果Ｃ0 と、保存期間がｎ日である検体のフェリチ
ン濃度測定結果Ｃn とから、100 ×( Ｃn - Ｃ0 ）/Ｃ
0 で算出した値のことである。
結果を示し、図１に、当該結果をプロットしたグラフを
示す。ここで、変化率とは、保存期間が０日である検体
（採血後４日間冷蔵保存された検体）のフェリチン濃度
測定結果Ｃ0 と、保存期間がｎ日である検体のフェリチ
ン濃度測定結果Ｃn とから、100 ×( Ｃn - Ｃ0 ）/Ｃ
0 で算出した値のことである。
【００３７】
【表１】
【００３８】表１および図１から明らかなように、比較
用Ｒ１試薬を用いて測定を行った場合（表１では、比較
例と表記してある）、検体の冷蔵保存日数が長くなるに
つれ、変化率は大きくなり、保存日数が１４日となった
ときの変化率はおよそ３０％に達する。
用Ｒ１試薬を用いて測定を行った場合（表１では、比較
例と表記してある）、検体の冷蔵保存日数が長くなるに
つれ、変化率は大きくなり、保存日数が１４日となった
ときの変化率はおよそ３０％に達する。
【００３９】これに対して、塩化コリンを含むＲ１試薬
を用いて測定を行った場合（表１では、実施例と表記し
てある）には、保存日数が長くなるにつれ、変化率が大
きくなる傾向は認められるものの、いずれのＲ１試薬を
用いた場合においても、各保存日数に対する変化率は、
比較用Ｒ１試薬を用いた場合における対応する変化率よ
りも小さな値を示している。すなわち、塩化コリンを含
めた各Ｒ１試薬とＲ２試薬とを用いた上記した手順の測
定は、検体鮮度の影響が少ない状態でフェリチン濃度を
測定することができるものとなっている。
を用いて測定を行った場合（表１では、実施例と表記し
てある）には、保存日数が長くなるにつれ、変化率が大
きくなる傾向は認められるものの、いずれのＲ１試薬を
用いた場合においても、各保存日数に対する変化率は、
比較用Ｒ１試薬を用いた場合における対応する変化率よ
りも小さな値を示している。すなわち、塩化コリンを含
めた各Ｒ１試薬とＲ２試薬とを用いた上記した手順の測
定は、検体鮮度の影響が少ない状態でフェリチン濃度を
測定することができるものとなっている。
【００４０】また、上記した手順の測定は、極めて信頼
性の高いものであることも確認されている。そのことを
裏付ける実験結果の一例を、図２、３に示す。なお、図
２は、塩化コリン濃度が５％のＲ１試薬を用いて、ヒト
血清１５０例について行った測定の結果から作成した、
０日保存後に測定されたフェリチン濃度と１４日保存後
に測定されたフェリチン濃度との間の相関図であり、図
３は、同じ測定を、比較用Ｒ１試薬を用いて行った結果
から作成した相関図である。
性の高いものであることも確認されている。そのことを
裏付ける実験結果の一例を、図２、３に示す。なお、図
２は、塩化コリン濃度が５％のＲ１試薬を用いて、ヒト
血清１５０例について行った測定の結果から作成した、
０日保存後に測定されたフェリチン濃度と１４日保存後
に測定されたフェリチン濃度との間の相関図であり、図
３は、同じ測定を、比較用Ｒ１試薬を用いて行った結果
から作成した相関図である。
【００４１】これらの図から明らかなように、塩化コリ
ンを含まない比較用Ｒ１試薬を用いた場合に、両測定結
果の間に比較的低い相関（相関係数γが０．９８４８）
しか存在しないのに対し、塩化コリンを含むＲ１試薬を
用いた場合、両測定結果の間に極めて高い相関（相関係
数γが０．９９９４）が存在しており、上記した手順の
測定は、極めて信頼性の高いものであるということがで
きる。
ンを含まない比較用Ｒ１試薬を用いた場合に、両測定結
果の間に比較的低い相関（相関係数γが０．９８４８）
しか存在しないのに対し、塩化コリンを含むＲ１試薬を
用いた場合、両測定結果の間に極めて高い相関（相関係
数γが０．９９９４）が存在しており、上記した手順の
測定は、極めて信頼性の高いものであるということがで
きる。
【００４２】また、これらの図は、本実施例の測定手順
が、検体鮮度（保存日数）の影響が少ない状態でフェリ
チン濃度を測定できるものであることも示している。す
なわち、塩化コリンを含まない比較用Ｒ１試薬を用いた
場合、測定結果が、検体鮮度（保存日数）の影響を受け
ることは、図１等を用いて既に説明したが、このこと
は、図３に示したデータの回帰方程式のｘの係数が
“１”より明らかに大きくなっている点に示されてい
る。
が、検体鮮度（保存日数）の影響が少ない状態でフェリ
チン濃度を測定できるものであることも示している。す
なわち、塩化コリンを含まない比較用Ｒ１試薬を用いた
場合、測定結果が、検体鮮度（保存日数）の影響を受け
ることは、図１等を用いて既に説明したが、このこと
は、図３に示したデータの回帰方程式のｘの係数が
“１”より明らかに大きくなっている点に示されてい
る。
【００４３】逆に、実施例の測定方法を用いた場合、測
定結果が、検体鮮度（保存日数）の影響を受けにくいこ
とは、図２に示したデータの回帰方程式のｘの係数が
“１”に極めて近くなっている点に示されている。
定結果が、検体鮮度（保存日数）の影響を受けにくいこ
とは、図２に示したデータの回帰方程式のｘの係数が
“１”に極めて近くなっている点に示されている。
【００４４】ここで、同様の測定を、市販のフェリチン
測定用ラテックス試薬を用いて行った結果から作成した
相関図である図４，５を用いて、実施例の測定方法と、
市販試薬を用いた測定方法とを簡単に比較しておく。
測定用ラテックス試薬を用いて行った結果から作成した
相関図である図４，５を用いて、実施例の測定方法と、
市販試薬を用いた測定方法とを簡単に比較しておく。
【００４５】図４、５に記載してある回帰方程式、相関
係数と、図２に記載してある回帰方程式、相関係数とか
ら明らかなように、実施例の測定方法は、市販薬品Ａ、
Ｂを用いた測定方法よりも、検体鮮度（保存日数）の影
響が少ない状態で、かつ、信頼性が高い状態でフェリチ
ン濃度の測定が行えるものとなっている。
係数と、図２に記載してある回帰方程式、相関係数とか
ら明らかなように、実施例の測定方法は、市販薬品Ａ、
Ｂを用いた測定方法よりも、検体鮮度（保存日数）の影
響が少ない状態で、かつ、信頼性が高い状態でフェリチ
ン濃度の測定が行えるものとなっている。
【００４６】なお、市販薬品Ｂに関する実験結果につい
ての相関係数（０．９９９３）は、実施例の測定方法の
実験結果についての相関係数（０．９９９４）に匹敵す
る値となっており、この点だけからは、市販薬品Ｂを用
いた測定方法は信頼性が高いものであるということがで
きる。ただし、その回帰方程式の定数項の値が大きくな
っていることから明らかなように、市販薬品Ｂを用いた
測定方法は、フェリチンの濃度が低い検体に対する測定
精度が、実施例の測定方法に比して低いものとなってい
る。
ての相関係数（０．９９９３）は、実施例の測定方法の
実験結果についての相関係数（０．９９９４）に匹敵す
る値となっており、この点だけからは、市販薬品Ｂを用
いた測定方法は信頼性が高いものであるということがで
きる。ただし、その回帰方程式の定数項の値が大きくな
っていることから明らかなように、市販薬品Ｂを用いた
測定方法は、フェリチンの濃度が低い検体に対する測定
精度が、実施例の測定方法に比して低いものとなってい
る。
【００４７】図１（表１）に戻って、実施例の測定方法
についての説明を続ける。既に説明したように、この図
は、塩化コリンを含むＲ１試薬を用いると検体鮮度の影
響をあまり受けない状態でフェリチン濃度を測定できる
ことを示しているが、さらに、Ｒ１試薬中の塩化コリン
濃度を高くするほど、検体鮮度への依存性を小さくでき
ることをも示している。
についての説明を続ける。既に説明したように、この図
は、塩化コリンを含むＲ１試薬を用いると検体鮮度の影
響をあまり受けない状態でフェリチン濃度を測定できる
ことを示しているが、さらに、Ｒ１試薬中の塩化コリン
濃度を高くするほど、検体鮮度への依存性を小さくでき
ることをも示している。
【００４８】従って、より多くの塩化コリンを含むＲ１
試薬を用いた方が、検体鮮度の影響を受けないようにす
るためには有効であることになる。しかしながら、図６
に示したように、Ｒ１試薬中の塩化コリン濃度を大きく
すると、ΔＯＤの値が低下してしまうことが確認されて
いる。このため、測定に用いる装置の検出感度や、必要
とする測定精度にも依存するが、Ｒ１試薬中の塩化コリ
ン濃度を、２〜２０％、特に、５〜１０％としておくこ
と、換言すれば、反応系における塩化コリン濃度を、
１．５〜１４％、特に、４〜７％としておくことが望ま
しいと考えられる。
試薬を用いた方が、検体鮮度の影響を受けないようにす
るためには有効であることになる。しかしながら、図６
に示したように、Ｒ１試薬中の塩化コリン濃度を大きく
すると、ΔＯＤの値が低下してしまうことが確認されて
いる。このため、測定に用いる装置の検出感度や、必要
とする測定精度にも依存するが、Ｒ１試薬中の塩化コリ
ン濃度を、２〜２０％、特に、５〜１０％としておくこ
と、換言すれば、反応系における塩化コリン濃度を、
１．５〜１４％、特に、４〜７％としておくことが望ま
しいと考えられる。
【００４９】最後に、塩化コリンの代わりに界面活性剤
（Triton X-100）を含めたＲ１試薬についての実験結果
を説明しておく。界面活性剤を０．０５％含むように調
製したＲ１試薬を用いた場合、攪拌により泡が発生して
しまい、その影響で測定が行えなかった。しかしなが
ら、０．０１％含むように調製したＲ１試薬を用いた場
合、図７に示したように、塩化コリンを１〜２％含むＲ
１試薬と同程度の結果が得られることが確認された。
（Triton X-100）を含めたＲ１試薬についての実験結果
を説明しておく。界面活性剤を０．０５％含むように調
製したＲ１試薬を用いた場合、攪拌により泡が発生して
しまい、その影響で測定が行えなかった。しかしなが
ら、０．０１％含むように調製したＲ１試薬を用いた場
合、図７に示したように、塩化コリンを１〜２％含むＲ
１試薬と同程度の結果が得られることが確認された。
【００５０】
【発明の効果】以上詳細に説明したように、本発明にか
かるフェリチン測定方法によれば、検体鮮度の影響が少
ない状態でフェリチン濃度を測定することができるとい
う効果を奏する。
かるフェリチン測定方法によれば、検体鮮度の影響が少
ない状態でフェリチン濃度を測定することができるとい
う効果を奏する。
【００５１】また、本発明にかかるフェリチン測定用キ
ットを用いれば、本発明にかかるフェリチン測定方法を
簡単に実施することができるという効果を奏する。
ットを用いれば、本発明にかかるフェリチン測定方法を
簡単に実施することができるという効果を奏する。
【図１】本発明の実施例にかかるフェリチン測定方法の
検体鮮度依存性を示した図である。
検体鮮度依存性を示した図である。
【図２】本発明の実施例にかかるフェリチン測定方法の
検体鮮度依存性を示した相関図である。
検体鮮度依存性を示した相関図である。
【図３】比較例にかかるフェリチン測定方法の検体鮮度
依存性を示した相関図である。
依存性を示した相関図である。
【図４】市販薬品Ａを用いたフェリチン測定方法の検体
鮮度依存性を示した相関図である。
鮮度依存性を示した相関図である。
【図５】市販薬品Ｂを用いたフェリチン測定方法の検体
鮮度依存性を示した相関図である。
鮮度依存性を示した相関図である。
【図６】本発明の実施例にかかるフェリチン測定方法に
おいて塩化コリン濃度が吸光度測定値に与える影響を示
した図である。
おいて塩化コリン濃度が吸光度測定値に与える影響を示
した図である。
【図７】本発明の実施例にかかる、界面活性剤を用いた
フェリチン測定方法の検体鮮度依存性を示した図であ
る。
フェリチン測定方法の検体鮮度依存性を示した図であ
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 石田 博文 東京都日野市日野320番地の11 株式会社 エイアンドティー内 (72)発明者 吉村 佳典 東京都日野市日野320番地の11 株式会社 エイアンドティー内 Ｆターム(参考） 2G045 AA01 BA11 BB29 BB31 BB46 BB51 CA26 CB02 CB17 FA11 FA29 FB03 FB15 GC10
Claims (10)
- 【請求項１】 抗フェリチン抗体が感作された不溶性担
体と、検体中のフェリチンとの抗原抗体反応による前記
不溶性担体の凝集反応に基づき前記フェリチンの濃度が
測定されるフェリチン測定方法において、 前記凝集反応が生ずる反応系内に第４級アンモニウム塩
が含まれる状態で前記フェリチンの濃度が測定されるこ
とを特徴とするフェリチン測定方法。 - 【請求項２】 検体中に含まれるフェリチン濃度を測定
するためのフェリチン測定方法において、 前記検体と、前記検体を希釈するための第１試薬であっ
て、第４級アンモニウム塩を含む第１試薬とを混和する
第１混和工程と、 この第１混和工程で得られた混和物と、抗フェリチン抗
体が感作された不溶性担体を含む第２試薬とを混和する
第２混和工程と、 この第２混和工程で得られた反応系内で生ずる前記不溶
性担体の凝集反応に基づき前記フェリチンの濃度を測定
する測定工程と、 を含むことを特徴とするフェリチン測定方法。 - 【請求項３】 前記反応系内の前記第４級アンモニウム
塩の含有率が０．４〜２０％であることを特徴とする請
求項１または２に記載のフェリチン測定方法。 - 【請求項４】 前記反応系内の前記第４級アンモニウム
塩の含有率が２〜１４％であることを特徴とする請求項
１または２に記載のフェリチン測定方法。 - 【請求項５】 前記反応系内の前記第４級アンモニウム
塩の含有率が４〜７％であることを特徴とする請求項１
または２に記載のフェリチン測定方法。 - 【請求項６】 前記不溶性担体がラテックス粒子である
ことを特徴とする請求項１〜６のいずれか一つに記載の
フェリチン測定方法。 - 【請求項７】 検体中に含まれるフェリチン濃度を測定
するために用いられるフェリチン測定用キットにおい
て、 前記検体を希釈するための第１試薬であって、第４級ア
ンモニウム塩を含む第１試薬と、 前記第１試薬によって希釈された前記検体と混和される
第２試薬であって、抗フェリチン抗体が感作された不溶
性担体を含む第２試薬と、 を含むことを特徴とするフェリチン測定用キット。 - 【請求項８】 前記第１試薬と前記第２試薬が、混和後
の前記第４級アンモニウム塩の含有率が０．４〜２０％
となる割合で使用される試薬であることを特徴とする請
求項７に記載のフェリチン測定用キット。 - 【請求項９】 前記第１試薬の第４級アンモニウム塩の
含有率が０．５〜３０％であることを特徴とする請求項
８に記載のフェリチン測定用キット。 - 【請求項１０】 検体中に含まれるフェリチン濃度を測
定するためのフェリチン測定方法において、 前記検体と、前記検体を希釈するための第１試薬であっ
て、攪拌により激しく泡立たない程度の量の界面活性剤
を含む第１試薬とを混和する第１混和工程と、 この第１混和工程で得られた混和物と、抗フェリチン抗
体が感作された不溶性担体を含む第２試薬とを混和する
第２混和工程と、 この第２混和工程で得られた反応系内で生ずる前記不溶
性担体の凝集反応に基づき前記フェリチンの濃度を測定
する測定工程と、 を含むことを特徴とするフェリチン測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10255345A JP2000088849A (ja) | 1998-09-09 | 1998-09-09 | フェリチン測定方法およびフェリチン測定用キット |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10255345A JP2000088849A (ja) | 1998-09-09 | 1998-09-09 | フェリチン測定方法およびフェリチン測定用キット |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000088849A true JP2000088849A (ja) | 2000-03-31 |
Family
ID=17277507
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10255345A Pending JP2000088849A (ja) | 1998-09-09 | 1998-09-09 | フェリチン測定方法およびフェリチン測定用キット |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000088849A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104062287A (zh) * | 2014-07-01 | 2014-09-24 | 福建工程学院 | 一种基于纳米金催化的化学发光分析检测铁蛋白的方法 |
| JP2018155629A (ja) * | 2017-03-17 | 2018-10-04 | 東ソー株式会社 | ペプチドの吸着抑制剤 |
| JP2018169273A (ja) * | 2017-03-29 | 2018-11-01 | 東ソー株式会社 | ペプチドの吸着抑制剤 |
-
1998
- 1998-09-09 JP JP10255345A patent/JP2000088849A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104062287A (zh) * | 2014-07-01 | 2014-09-24 | 福建工程学院 | 一种基于纳米金催化的化学发光分析检测铁蛋白的方法 |
| JP2018155629A (ja) * | 2017-03-17 | 2018-10-04 | 東ソー株式会社 | ペプチドの吸着抑制剤 |
| JP2018169273A (ja) * | 2017-03-29 | 2018-11-01 | 東ソー株式会社 | ペプチドの吸着抑制剤 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
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Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20050512 |
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| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060912 |
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| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20070130 |