JPH1026622A

JPH1026622A - ヒトα−フェトプロテインの定量法および測定キット

Info

Publication number: JPH1026622A
Application number: JP26181696A
Authority: JP
Inventors: Yoshie Matsumoto; 美枝松本; Motohito Tamaki; 元人玉木; Hiroshi Kuroda; 広志黒田
Original assignee: Sekisui Chemical Co Ltd
Current assignee: Sekisui Chemical Co Ltd
Priority date: 1996-05-10
Filing date: 1996-10-02
Publication date: 1998-01-27

Abstract

(57)【要約】【課題】非特異的反応による凝集がなく、低濃度域でも
正確な測定が可能な、高感度で迅速なヒトα−フェトプ
ロテインＡＦＰの定量法を提供する。【解決手段】抗ＡＦＰ抗体を感作した不溶性担体と試料
を混合し、抗原−抗体凝集反応による反応液の吸光度変
化量を測定し、検量線を用いて未知試料のＡＦＰを定量
するに当り、不溶性担体としてラテックス粒子を用い、
抗ＡＦＰ抗体感作不溶性担体を凝集反応液中の濃度が
０．０１〜０．０８重量％になるように用い、平均分子
量３千〜百万のポリエチレングリコールおよび／または
平均分子量３０万〜百万のポリビニルピロリドンを凝集
反応液中の濃度が０．１〜５重量％になるように加え、
不溶性担体と試料との反応を５秒〜１５分間恒温で行
い、ラテックス凝集反応の進行に伴う吸光度の増加を測
定するＡＦＰの定量法である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は試料中のヒトα−フ
ェトプロテイン（以下ＡＦＰと略す）の高感度で迅速な
定量法、特にラテックス凝集比濁法を利用する定量法に
関し、また、該ＡＦＰ定量法を利用したＡＦＰ測定用免
疫学的キットに関する。

【０００２】

【従来の技術】ＡＦＰは１９６３年Abelevにより発見さ
れた、平均分子量６４，０００の代表的な癌胎児性タン
パクであり、胎生６週から血中に出現して胎生１３週で
最高値を示し、出生時には低下する。ＡＦＰは、健康成
人血中にはほとんど認められないが、肝疾患ではしばし
ば血中に出現し、特に肝細胞癌では高値を呈する。ＡＦ
Ｐの推移は、腫瘍の状態を極めてよく反映することが認
められており、臨床検査分野では特に肝細胞癌に極めて
特異性の高い重要なマーカーとして広く用いられてきた
（小山研二ら、臨床成人病、１６巻６号（１９８６）、
２６５〜２６９頁）。

【０００３】従来、ＡＦＰの測定は定性法、半定量法な
どによって行われていたが、その後ラジオイムノアッセ
イ法やエンザイムイムノアッセイ法が広く普及し、数多
くの検討結果が報告されている。また、最近では反応系
の微量化、感度の向上、反応時間の短縮を目的として、
ラテックス凝集による免疫測定法を始めフェライト粒子
固相アッセイ、免疫蛍光測定法、免疫化学発光法などが
開発されている。特に、ラテックス凝集による免疫測定
法については、様々なラテックス凝集免疫試薬が市販さ
れている（大倉久直ら、臨床化学、２４巻４号（１９９
５）、１８８〜１９５頁）。しかし、この方法では、非
特異的反応による凝集がよく見られ、ラジオイムノアッ
セイ法に比べると、特に低濃度域では正確に測定できな
いなどの問題がある。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】従来、ＡＦＰの正常値
は２０ｎｇ／ｍｌ以下とされており、従ってほとんどの
ラテックス凝集免疫試薬の測定範囲は２０〜１，０００
ｎｇ／ｍｌ程度であった。しかし近年、画像診断の発達
と普及に伴って、早期の肝細胞癌が検出されるようにな
り、検出時の血清ＡＦＰレベルが低下したため、５ｎｇ
／ｍｌ程度までのＡＦＰの検出感度が要求されるように
なって来た。これに伴い、０〜２５０ｎｇ／ｍｌの範囲
で測定が可能なラテックス凝集免疫試薬が開発されてい
るが、これらの試薬は高感度を達成するため、特異性が
低下する傾向があるといわれている。特に、非特異的反
応による凝集が生じやすく、低濃度域での正確な定量が
困難になっている。

【０００５】本発明の目的は、上記のごとき実情に鑑
み、非特異的反応による凝集がなく、低濃度域でも正確
な測定が可能な、高感度で迅速なＡＦＰの定量法および
該ＡＦＰの定量法を利用した免疫学的キットを提供する
ことにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明は、抗ＡＦＰ抗体
を感作した不溶性担体と試料を混合し、抗原−抗体反応
による凝集反応を生ぜしめ、該反応液の吸光度変化量を
測定し、予め濃度既知のＡＦＰを試料として測定し、得
られた検量線を用いて、濃度未知の試料中のＡＦＰを定
量するに当り、(1) 不溶性担体としてラテックス粒子を
用い、(2) 抗ヒトα−フェトプロテイン抗体を感作した
不溶性担体を、凝集反応を生ぜしめる反応液中の濃度が
０．０１〜０．０８重量％になるように使用し、(3) 平
均分子量３，０００〜１，０００，０００のポリエチレ
ングリコールおよび／または平均分子量３００，０００
〜１，０００，０００のポリビニルピロリドンを、凝集
反応を生ぜしめる反応液中の濃度が０．１〜５重量％に
なるように添加し、(4) 不溶性担体と試料との反応を５
秒〜１５分間、恒温で行い、(5) ラテックス凝集反応の
進行に伴う吸光度の増加を測定することを特徴とするＡ
ＦＰの定量法である。

【０００７】本発明はまた、上記該ＡＦＰの定量法を利
用して、ＡＦＰを定量するキットであって、(1) 抗ヒト
α−フェトプロテイン抗体を感作したラテックス粒子
と、(2) 平均分子量３，０００〜１，０００，０００の
ポリエチレングリコールおよび／または平均分子量３０
０，０００〜１，０００，０００のポリビニルピロリド
ンを含む検体希釈用希釈液とからなるＡＦＰ測定用免疫
学的キットである。

【０００８】

【発明の実施の形態】以下、本発明の構成要件について
詳述する。

【０００９】試料としては、血清、血漿などがある。

【００１０】不溶性担体としては、ラテックス粒子を用
いる。粒子としては、粒径が比較的一定であり、一定の
品質、性能を有し、工業的に大量生産できる有機系微粒
子が好ましい。例えば、スチレン、塩化ビニル、アクリ
ロニトリル、酢酸ビニル、アクリル酸エステル、メタク
リル酸エステルなどのビニル系モノマーの単独重合体お
よび／または共重合体、スチレン−ブタジエン共重合
体、メチルメタクリレート−ブタジエン共重合体などの
ブタジエン系共重合体などの微粒子が挙げられる。抗体
の吸着性に優れており、かつ生物学的活性を長期間安定
に保持できるなどの理由から、特にポリスチレン系のラ
テックス粒子が好ましい。不溶性担体への抗ＡＦＰ抗体
の感作は、担体に抗体を物理的または化学的に吸着させ
る方法にて行う。不溶性担体としての粒子の粒径は、
０．０５〜１μｍであるのが好ましいが、特に好ましく
は、０．１〜０．４μｍである。該粒径が０．０５μｍ
未満であると、凍結乾燥を行ったときに粒子の分散が困
難になる。また、該粒径が１μｍを超えると、自己凝集
が進み、分散性が低下する。

【００１１】抗ＡＦＰ抗体は、ポリクローナル抗体、モ
ノクローナル抗体のいずれでもよい。ポリクローナル抗
体の場合、由来の動物種（ヒト、ウサギ、ヤギなど）や
純度（グロブリン画分またはアフィニティ精製画分な
ど）は特に限定されず、また抗体の構造も限定されず、
抗体の構造についても、免疫グロブリン分子自体のほ
か、Ｆａｂ' やＦ（ａｂ）₂断片のような断片であって
もよい。

【００１２】抗ＡＦＰ抗体を感作した不溶性担体は、凝
集反応を生ぜしめる反応液中の濃度が０．０１〜０．０
８重量％になるように使用する。該濃度が０．０１重量
％未満であると、凝集塊の形成が不十分で、必要な感度
が得られない。また、該濃度量が０．０８重量％を超え
ると、バックグラウンドとしての吸光度が高すぎ、正確
な定量が行えない。

【００１３】反応液中に添加するポリエチレングリコー
ルとしては、感度向上または反応促進を目的として、
３，０００〜１，０００，０００の平均分子量を有する
ものを用いる。ポリエチレングリコールの平均分子量が
３，０００未満であると、感度向上または反応促進の効
果が不十分であり、また、ポリエチレングリコールの平
均分子量が１，０００，０００を超えると、媒体へのポ
リエチレングリコールの溶解度が著しく低くなり、溶解
性の点で問題が生じる。平均分子量３，０００〜１，０
００，０００のポリエチレングリコールは、凝集反応を
生ぜしめる反応液中の濃度が０．１〜５重量％になるよ
うに添加して使用する。該ポリエチレングリコール濃度
が０．１重量％未満であると、感度が低く、低濃度域で
の正確な測定ができない。また、該ポリエチレングリコ
ール濃度が５重量％を超えると、非特異的反応による凝
集が生じ、正確な測定ができない。

【００１４】また、ポリエチレングリコールと同じ目的
で反応液中に添加するポリビニルピロリドンとしては、
３００，０００〜１，０００，０００の平均分子量を有
するものを用いる。ポリビニルピロリドンの平均分子量
が３００，０００未満であると、感度向上または反応促
進の効果が不十分であり、また、ポリビニルピロリドン
の平均分子量が１，０００，０００を超えると、媒体へ
のポリビニルピロリドンの溶解度が著しく低くなり、溶
解性の点で問題が生じる。平均分子量３００，０００〜
１，０００，０００のポリビニルピロリドンは、凝集反
応を生ぜしめる反応液中の濃度が０．１〜５重量％にな
るように添加して使用する。該ポリビニルピロリドン濃
度が０．１重量％未満であると、感度が低く、低濃度域
での正確な測定ができない。また、該ポリビニルピロリ
ドン濃度が５重量％を超えると、非特異的反応による凝
集が生じ、正確な測定ができない。

【００１５】平均分子量３，０００〜１，０００，００
０のポリエチレングリコールおよび／または平均分子量
３００，０００〜１，０００，０００のポリビニルピロ
リドンは、それぞれ適当な水性媒体に分散および溶解し
て使用するのが好ましい。この場合、前記の抗体を感作
した不溶性担体とポリエチレングリコールおよび／また
はポリビニルピロリドンとは、同一の媒体に分散または
溶解して１液のラテックス試薬としてもよいし、また、
不溶性担体とポリエチレングリコールおよび／またはポ
リビニルピロリドンとを別個に水性媒体に分散または溶
解させて不溶性担体のラテックス試薬とポリエチレング
リコールおよび／またはポリビニルピロリドンの溶液状
の試薬（検体希釈用希釈液）との２液型試薬として使用
してもよい。好ましくは２液型の試薬を用いる。

【００１６】ここで、水性媒体としては、リン酸緩衝
液、グリシン緩衝液、トリス塩酸緩衝液、グッド緩衝液
などが好ましい。水性媒体のｐＨは、好ましくは５．５
〜８．５、特に好ましくは６．５〜８．０である。

【００１７】上記一液のラテックス試薬中には、さら
に、牛血清アルブミン、ショ糖、塩濃度調整用の塩化ナ
トリウムなどを適宜溶解させてもよい。また、ラテック
ス試薬と溶液状の試薬（検体希釈用希釈液）との２液型
試薬にも、それぞれに牛血清アルブミン、ショ糖、塩濃
度調整用の塩化ナトリウムなどを適宜溶解させてもよ
い。

【００１８】不溶性担体と試料との反応は、抗原−抗体
反応およびそれに伴なうラテックス凝集反応であり、５
秒〜１５分間、恒温で行う。反応時間が５秒未満である
と、正確な測定ができない。また、反応時間が１５分を
超えると、非特異的反応による凝集が生じ、正確な測定
ができない。該反応は、特に２５℃〜３７℃で行うのが
好ましい。

【００１９】吸光度測定について、ラテックス凝集反応
の進行に伴う吸光度の増加を測定する。吸光度測定は、
通常５００〜１０００ｎｍ、好ましくは５００〜８００
ｎｍ、特に好ましくは５５０〜６５０ｎｍの範囲内で適
切な波長を選択して測定される。

【００２０】測定に使用する機器は、経時的に反応液の
吸光度を測定しうるものであればよいが、汎用の生化学
自動分析装置が好ましい。上記の測定波長、検体量、試
薬量などは、装置に合わせて適宜選択できる。

【００２１】ＡＦＰの定量は、ＡＦＰ既知量の試料（例
えば、ＡＦＰ標準血清とその希釈系列）について、前記
の測定を行い、その測定値とＡＦＰ量とから検量線を作
成しておき、ＡＦＰ未知量の試料について同一条件で測
定した測定値から該検量線において対応するＡＦＰ量を
求めることによって行うことができる。

【００２２】

【作用】上記のように、本発明によれば、抗ＡＦＰ抗体
を感作した不溶性担体と試料を混合し、抗原−抗体反応
およびこれに伴なうラテックス凝集反応を生ぜしめ、該
反応液の吸光度変化量を測定し、予め作成した検量線を
用いて、濃度未知の試料中のＡＦＰ量を正確に測定する
ことができる。また、該ＡＦＰの定量法を利用して濃度
未知の試料中のＡＦＰ量を正確に測定するＡＦＰ測定用
免疫学的キットを提供することができる。

【００２３】

【実施例】以下、本発明の実施例を説明する。

【００２４】１）試薬および材料ＡＦＰの定量に用いる試薬および材料は以下の通りであ
る。

【００２５】ラテックス：平均粒径０．３０４μｍのポ
リスチレンラテックス（固形分１０％（Ｗ／Ｖ）、積水
化学社製）を用いた。

【００２６】ラテックス希釈用緩衝液：５０ｍＭのＮａ
₂ＨＰＯ₄と５０ｍＭのＮａＨ₂ＰＯ₄をｐＨ７．５０
になるように混合し、この混合液をラテックス希釈用緩
衝液として用いた。

【００２７】抗ＡＦＰ抗体：ウサギの抗血清からイムノ
グロブリン分画にまで精製したウサギ抗ＡＦＰ抗体を用
いた。

【００２８】抗体希釈用緩衝液：上記ラテックス希釈用
緩衝液を抗体希釈用緩衝液としても用いた。

【００２９】ブロッキング用緩衝液：１００ｍＭのＮａ
₂ＨＰＯ₄と１００ｍＭのＮａＨ₂ＰＯ₄をｐＨ７．４
０になるように混合し、この混合液にウシ血清アルブミ
ン（Bovine serum albumin Fraction V 、Reagent Grad
e 、Miles Corp. 社製）を１％（Ｗ／Ｖ）になるよう
に、またＮａＮ₃（試薬特級、ナカライテスク社製）を
０．１％（Ｗ／Ｖ）になるように添加したものを、ブロ
ッキング用緩衝液として用いた。

【００３０】血清検体：肝細胞癌患者および健常人の血
清を用いた。

【００３１】ＡＦＰ標準品：ヒトプール血清から精製さ
れたＡＦＰ標準品（ＷＨＰ標準品、９０，８９０Ｉ．
Ｕ．／ｍｌ、１１０．０μｇ／ｍｌ、ＤＡＫＯ社製）を
生理食塩水にて２，０００、５００、１００、２０およ
び５ｎｇ／ｍｌにそれぞれ希釈して使用した。また、Ａ
ＦＰ標準品を含まない生理食塩水だけのものを０ｎｇ／
ｍｌとして用いた。

【００３２】検体希釈用希釈液（Ｒ１−Ａ液）：ブロッ
キング用緩衝液に、ポリエチレングリコール６０００
（平均分子量７，５００、和光純薬社製）を３％（Ｗ／
Ｖ）になるように添加したものを検体希釈用希釈液（Ｒ
１−Ａ液）として用いた。

【００３３】検体希釈用希釈液（Ｒ１−Ｂ液）：ブロッ
キング用緩衝液に、ポリビニルピロリドン（平均分子量
９００，０００、ＢＡＳＦ社製）を０．５％（Ｗ／Ｖ）
になるように添加したものを検体希釈用希釈液（Ｒ１−
Ｂ液）として用いた。

【００３４】ＡＦＰ測定用ラジオイムノアッセイキッ
ト：市販のラジオイムノアッセイキット（α−フェト・
リアビーズ、ダイナボット社製）を用いた。

【００３５】ＡＦＰ測定用ラテックス凝集免疫試薬：市
販のラテックス凝集免疫試薬（エルピアエースＡＦＰ、
ヤトロン社製）を用いた。

【００３６】２）調製および試験方法 (1) ラテックス試薬の調製平均粒径０．３０４μｍのポリスチレンラテックス（固
形分１０％（Ｗ／Ｖ）１容に、ラテックス希釈用緩衝液
で３容を添加し、２．５％ラテックス液を得た。抗ＡＦ
Ｐ抗体は、タンパク濃度が５０μｇ／ｍｌになるように
抗体希釈用緩衝液で希釈し、抗体液とした。上記２．５
％（Ｗ／Ｖ）ラテックス液２００μｌを２５℃のインキ
ュベーター中でマグネチックスターラーで攪拌しなが
ら、ここへ上記抗体液８００μｌを素早く添加し、２５
℃にて１時間攪拌した。その後、ブロッキング用緩衝液
を２．０ｍｌ添加し、２５℃にて続けて２時間攪拌し
た。次にこの混合液を１５℃、１５，０００ｒｐｍにて
１５分間遠心分離した。得られた沈澱にブロッキング用
緩衝液４．０ｍｌを添加し、上記と同様に遠心分離をす
ることにより、沈澱を洗浄した。洗浄操作は３回行っ
た。この沈澱にブロッキング用緩衝液を２．０ｍｌ添加
し、よく攪拌した後、超音波破砕機にて分散処理を行
い、固形分０．２５％（Ｗ／Ｖ）のラテックス試薬を得
た。このようにして調製したラテックス試薬を４℃にて
保存した。

【００３７】(2) ラテックス試薬によるＡＦＰ量の測定ラテックス試薬によるＡＦＰ量の測定は、生化学用自動
分析装置７１５０形（日立製作所社製）を用いて行っ
た。上記操作(1) で得られた固形分０．２５％（Ｗ／
Ｖ）のラテックス試薬をそのままＲ２液（固形分０．２
５％（Ｗ／Ｖ））とした。測定条件は以下の通りであ
る。

【００３８】検体容量２０μｌ検体希釈用希釈液（Ｒ１−Ａ液またはＲ１−Ｂ液）２１０μｌラテックス試薬（Ｒ２液）３０μｌ測定波長５７０ｎｍ測定温度３７℃

【００３９】試薬（Ｒ２液）を添加してから約８０秒後
の吸光度と約３２０秒後の吸光度の差（ΔＯＤ５７０）
を測定し、この吸光度の差を１０，０００倍したものを
吸光度変化量とした。

【００４０】検体の代わりに既知濃度のＡＦＰ標準品を
用いて上記と同様の測定を行って、予め検量線を作成し
ておき、上清検体の吸光度変化量を上記検量線に外挿し
て、検体中のＡＦＰ量を算出した。

【００４１】(3) ラジオイムノアッセイ法によるＡＦＰ
量の測定上記操作(2) で測定したすべての検体について、市販の
ラジオイムノアッセイキット（α−フェト・リアビー
ズ、ダイナボット社製）を用いて、検体中のＡＦＰ量を
測定した。測定方法は、キット添付の操作法に従って行
った。

【００４２】(4) 市販のラテックス凝集免疫試薬による
ＡＦＰ量の測定上記操作(2) で測定したすべての検体について、市販の
ラテックス凝集免疫試薬（エルピアエースＡＦＰ、ヤト
ロン社製）を用いて、検体中のＡＦＰ量を測定した。測
定方法は、キット添付の操作法に従い、生化学用自動分
析装置７１５０形（日立製作所社製）を用いて行った。

【００４３】３）試験と結果 (1) 実施例１〜５０肝細胞癌患者および健常人の血清を検体として、検体希
釈用希釈液（Ｒ１−Ａ液）を用い、上記２）の操作(2)
「ラテックス試薬によるＡＦＰ量の測定」に従って、検
体中のＡＦＰ量を測定した。また、上記２）の操作(3)
「ラジオイムノアッセイ法によるＡＦＰ量の測定」に従
って、検体中のＡＦＰ量を測定した。これらの測定結果
は、表１に示すとおりである。また、表１に示したラテ
ックス試薬によるＡＦＰ量とラジオイムノアッセイ法に
よるＡＦＰ量との相関を図１に示す。

【００４４】(2) 実施例５１〜１００検体希釈用希釈液（Ｒ１−Ａ液）の代わりに検体希釈用
希釈液（Ｒ１−Ｂ液）を用いた点の除いて、実施例１〜
５０と同様にして、検体中のＡＦＰ量を測定した。これ
らの測定結果は、表１に示すとおりである。また、表１
に示したラテックス試薬によるＡＦＰ量とラジオイムノ
アッセイ法によるＡＦＰ量との相関を図２に示す。

【００４５】(3) 比較例１〜５０上記の肝細胞癌患者および健常人の血清を検体として、
上記２）の操作(4) 「市販のラテックス凝集免疫試薬に
よるＡＦＰ量の測定」に従って、検体中のＡＦＰ量を測
定した。これらの測定結果は、表２に示すとおりであ
る。また、表２に示した市販のラテックス凝集免疫試薬
によるＡＦＰ量と表１に示したラジオイムノアッセイ法
によるＡＦＰ量との相関を図３に示す。

【００４６】表１、表２、図１、図２および図３から明
らかなように、本発明のラテックス試薬によって測定さ
れたＡＦＰ量は、ラジオイムノアッセイ法によるＡＦＰ
量と、低濃度域においてもよく一致したが、市販のラテ
ックス凝集免疫試薬によるＡＦＰ量は、ラジオイムノア
ッセイ法によるＡＦＰ量と、低濃度域および高濃度域に
おいて、必ずしも一致しなかった。

【００４７】以上の結果から、本発明によるＡＦＰ定量
法は、従来のラテックス凝集免疫試薬よりも高感度で、
しかもラジオイムノアッセイ法よりも迅速、簡便な優れ
た定量法であることが確認された。

【００４８】

【表１】

【表２】

【００４９】

【発明の効果】本発明のＡＦＰの定量法および該ＡＦＰ
の定量法を利用した免疫学的キットの構成は上記の通り
であるので、従来のラテックス凝集免疫試薬で見られた
ような検体中の共存物質による非特異的反応を抑制し、
かつ低濃度域でもラジオイムノアッセイ法と同様の検出
感度を示すＡＦＰの定量法を提供することができ、ま
た、該ＡＦＰの定量法を利用したＡＦＰ測定用免疫学的
キットを提供することができる。このキットは、迅速か
つ簡便にヒト検体中のＡＦＰを正確に定量することが可
能であり、疾患の発見、病態の把握、治療方法の決定な
どに有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１〜５０に使用された検体中の、ラテッ
クス試薬によるＡＦＰ量とラジオイムノアッセイ法によ
るＡＦＰ量との相関を示す図である。

【図２】実施例５１〜１００に使用された検体中の、ラ
テックス試薬によるＡＦＰ量とラジオイムノアッセイ法
によるＡＦＰ量との相関を示す図である。

【図３】比較例１〜５０に使用された検体中の、市販の
ラテックス試薬によるＡＦＰ量とラジオイムノアッセイ
法によるＡＦＰ量との相関を示す図である。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】抗ヒトα−フェトプロテイン抗体を感作
した不溶性担体と試料を混合し、抗原−抗体反応による
凝集反応を生ぜしめ、該反応液の吸光度変化量を測定
し、予め濃度既知のヒトα−フェトプロテインを試料と
して測定し、得られた検量線を用いて、濃度未知の試料
中のヒトα−フェトプロテインを定量するに当り、 (1) 不溶性担体としてラテックス粒子を用い、 (2) 抗ヒトα−フェトプロテイン抗体を感作した不溶性
担体を、凝集反応を生ぜしめる反応液中の濃度が０．０
１〜０．０８重量％になるように使用し、 (3) 平均分子量３，０００〜１，０００，０００のポリ
エチレングリコールおよび／または平均分子量３００，
０００〜１，０００，０００のポリビニルピロリドン
を、凝集反応を生ぜしめる反応液中の濃度が０．１〜５
重量％になるように添加し、 (4) 不溶性担体と試料との反応を５秒〜１５分間、恒温
で行い、 (5) ラテックス凝集反応の進行に伴う吸光度の増加を測
定することを特徴とするヒトα−フェトプロテインの定
量法。
【請求項２】請求項１記載のヒトα−フェトプロテイ
ンの定量法を利用して、ヒトα−フェトプロテインを定
量するキットであって、 (1) 抗ヒトα−フェトプロテイン抗体を感作したラテッ
クス粒子と、 (2) 平均分子量３，０００〜１，０００，０００のポリ
エチレングリコールおよび／または平均分子量３００，
０００〜１，０００，０００のポリビニルピロリドンを
含む検体希釈用希釈液とからなるヒトα−フェトプロテ
インの測定キット。