JP2000080089A

JP2000080089A - フェレドキシン：ｎａｄｐリダクタ―ゼ阻害剤

Info

Publication number: JP2000080089A
Application number: JP11182371A
Authority: JP
Inventors: Oliver Wagner; オリーファー、ヴァーグナー; Franz Roehl; フランツ、レール; Klaus Grossmann; クラウス、グロースマン; Schmidt Ralf-Michael; ラルフ−ミヒャエル、シュミット; Uwe Sonnewald; ウヴェ、ゾネヴァルト; Mohammad Dr Hajirezaei; モハメド、ハジレザエイ
Original assignee: BASF SE
Current assignee: BASF SE
Priority date: 1998-06-26
Filing date: 1999-06-28
Publication date: 2000-03-21
Also published as: EP1333098A2; EP0967211A1; US6124242A; EP1333098A3

Abstract

(57)【要約】（修正有）【課題】酵素フェレドキシン：ＮＡＤＰリダクターゼ
阻害剤、およびその除草剤としての使用法を提供する。【解決手段】下記一般式に示す、フェレドキシン：Ｎ
ＡＤＰリダクターゼ阻害剤。［式中、ＹはＣ＝ＯまたはＳＯ_２、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、
Ｒ^５、Ｒ^６およびＲ^７は水素、ハロゲン、シアノ、アル
キル、アルコキシなど、Ｒ^４は水素またはアルキル基を
示す］で示される化合物およびその塩。更に、上記の化
合物を有効成分として含む除草剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、フェレドキシン：
ＮＡＤＰリダクターゼ阻害剤、この様な阻害剤を研究す
る試験システム、および前記阻害剤を除草剤として使用
する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】フェレドキシン：ＮＡＤＰリダクターゼ
阻害剤（ＥＣ１．１８．１．２；ＦＮＲ）は、植物に
おける炭素、窒素および硫黄の同化のための還元体等の
製造に関与する酵素である。この酵素は以下の反応を触
媒する

【０００３】

【化３】

【０００４】光合成の間、反応はＮＡＤＰＨを生成しつ
つ進行し（Shin，M. およびArnold共著、 D.I.、J. Bio
l. Chem. 240(1965)、1405-1411 )、一方、非光合成組
織では還元されたフェレドキシンが得られる（Bowshe
r、C.G. 等の Plant J.における論考、3(1993)、463-46
7）。光合成阻害剤が除草剤として使用されることは公
知である。この様な除草剤は、例えばアトラジンのよう
に光学系ＩＩの阻害剤として作用するか（Hock, B.、Fe
dtke, C.、およびSchmidt, R.R共著. (1995) Herbinzid
e、Georg Thieme Verlag）、或いは例えばパラクアト
（paraquat)のように光学系Ｉのレドックス触媒として
作用する(Hock, B.、 Fedtke, C. およびSchmidt, R.R.
共著、(1995) Herbinzide, Georg Thieme Verlag）。

【０００５】除草剤のオキソフルオルフェン（oxofluor
fen)の、露光によるフェレドキシン：ＮＡＤＰリダクタ
ーゼに対する作用が報告されている（Gillham等著、(19
85)Proc. Br. Crop Prot. Conf. - Weeds、1195-120
1）。しかしながら、オキシフルオルフィンのプロトポ
ルフィリノゲンＩＸオキシダーゼに対する公知作用（Ho
ck, B.、 Fedtke, C.およびSchmidt, R.R.共著 (1995)
Herbizide, Georg Thieme Verlag ）と、これに関連す
る反応性酸素の光依存的形成については、この作用は間
接的効果を奏するが、除草作用に関しては無関係であ
る。

【０００６】除草剤としてのフェレドキシン：ＮＡＤＰ
リダクターゼ阻害剤は公知である。同化のための還元体
等の製造阻害は、植物の生長に大きな影響を与えると推
測される。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明は上記事情に鑑
みてなされたものであり、その目的は酵素フェレドキシ
ン：ＮＡＤＰリダクターゼ阻害剤またはその塩、および
その除草剤としての使用法を提供することにある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者等は、下式Ｉで
表され、式中

【０００９】

【化４】がＥ／Ｚ異性体を意味するフェレドキシン：ＮＡＤＰリ
ダクターゼ阻害剤により上記目的が達成されることを見
出した。同阻害剤はフェレドキシン：ＮＡＤＰリダクタ
ーゼテストにより初めて見出されたものである。すなわ
ち式Ｉの化合物は

【００１０】

【化５】

【００１１】で示され、式中Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³がそれぞれ
相互に独立に、水素、ハロゲン、シアノ、Ｃ₁−Ｃ₆アル
キル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシアルキ
ル、Ｃ₁−Ｃ₆ハロアルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルチオ、Ｃ
₁−Ｃ₆ハロアルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルカルボニル、
Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシカルボニル、Ｓ（Ｏ）_n−Ｃ₁−Ｃ₆
アルキル、Ｓ（Ｏ）_n−Ｃ₁−Ｃ₆ハロアルキル、Ｓ
（Ｏ）_n−Ｎ−Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｓ（Ｏ） _n−Ｎ（Ｃ₁
−Ｃ₆アルキル）₂（ｎ＝０、１、２）、ＳＯ₃Ｈ、ＣＯ
ＯＨ、ＰＯ₃Ｈ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＮＨ−Ｃ₁−Ｃ₆アルキ
ル、ＣＯ−Ｎ（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）₂、ＮＨ₂、ＮＨ−Ｃ
₁−Ｃ₆アルキル、またはＮ−（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）
₂を、Ｒ⁴が水素またはＣ₁−Ｃ₆アルキルを、ＹがＣＯま
たはＳＯ₂を、Ｒ⁵、Ｒ⁶、Ｒ⁷がそれぞれ相互に独立に、
水素、ハロゲン、シアノ、Ｃ₁−Ｃ₃₀アルキル、Ｃ₁−Ｃ
₃₀アルコキシアルキル、Ｃ₁−Ｃ₃₀ハロアルキル、Ｃ₁−
Ｃ₃₀アルキルチオ、Ｃ₁−Ｃ₃₀ハロアルコキシ、Ｃ₁−Ｃ
₃₀アルキルカルボニル、Ｃ₁−Ｃ₃₀アルコキシカルボニ
ル、ＳＯ₃Ｈ、Ｓ（Ｏ）_n−Ｃ₁−Ｃ₃₀アルキル、Ｓ
（Ｏ）_n−Ｃ₁−Ｃ₃₀ハロアルキル、Ｓ（Ｏ）_n−Ｎ−Ｃ₁
−Ｃ₃₀アルキル、Ｓ（Ｏ） _n−Ｎ（Ｃ₁−Ｃ₃₀アルキル）
₂（ｎ＝０、１、２）、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＮＨ
−Ｃ₁−Ｃ₃₀アルキル、ＣＯ−Ｎ（Ｃ₁−Ｃ₃₀アルキル）
₂、ＮＨ₂、ＮＨ−Ｃ ₁−Ｃ₃₀アルキル、またはＮ−（Ｃ₁
−Ｃ₃₀アルキル）₂を意味するものである。

【００１２】

【発明の実施の形態】式Ｉで示される化合物の数種類
は、文献により公知であり、或いは類似の方法で製造さ
れる（例えばＧＢ９７５９３２、ＢＥ７０４０２７、Ｂ
Ｅ６６５０３３、ＤＥ１９４２６６１、Lieb. Ann. Che
m. 700(1966) 65）。

【００１３】

【化６】

【００１４】上記式中ＹはＣ＝ＯまたはＳＯ₂であり、
Ｒ⁵、Ｒ⁶、Ｒ⁷はそれぞれ相互に独立に、水素、ハロゲ
ン、シアノ、Ｃ₁−Ｃ₃₀アルキル、Ｃ₁−Ｃ₃₀アルコキシ
アルキル、Ｃ₁−Ｃ₃₀ハロアルキル、Ｃ₁−Ｃ₃₀アルキル
チオ、Ｃ₁−Ｃ₃₀ハロアルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₃₀アルキルカ
ルボニル、Ｃ₁−Ｃ₃₀アルコキシカルボニル、ＳＯ₃Ｈ、
Ｓ（Ｏ）_n−Ｃ₁−Ｃ₃₀アルキル、Ｓ（Ｏ）_n−Ｃ₁−Ｃ₃₀
ハロアルキル、Ｓ（Ｏ）_n−Ｎ−Ｃ₁−Ｃ₃₀アルキル、Ｓ
（Ｏ） _n−Ｎ（Ｃ₁−Ｃ₃₀アルキル）₂（ｎ＝０、１、
２）、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＮＨ−Ｃ₁−Ｃ₃₀アル
キル、ＣＯ−Ｎ（Ｃ₁−Ｃ₃₀アルキル）₂、ＮＨ₂、ＮＨ
−Ｃ ₁−Ｃ₃₀アルキル、またはＮ−（Ｃ₁−Ｃ₃₀アルキ
ル）₂を意味するものである。また、式Ｉの化合物はＢ
Ｅ７０４０２７或いはLieb. Ann. Chem. 623 (1959),
191に記載の方法により製造される。

【００１５】

【化７】

【００１６】表Ａに式ＩＡの化合物を示す。同表の各一
行に記載の置換基の組み合わせを用いて、式ＩＡのそれ
ぞれの化合物を示すものとする。

【００１７】

【表１】

【００１８】

【表２】

【００１９】表Ｂに式ＩＢの化合物を示す。同表の各一
行に記載の置換基の組み合わせを用いて、式ＩＢのそれ
ぞれの化合物を示すものとする。

【００２０】

【表３】

【００２１】表Ｃに式ＩＣの化合物を示す。同表の各一
行に記載の置換基の組み合わせを用いて、式ＩＣのそれ
ぞれの化合物を示すものとする。

【００２２】

【表４】

【００２３】除草作用に関するシミュレーションは、ト
ランスジェニック植物により行うことができる。この様
な植物は遺伝子の非転写（アンチセンス）情報を含み、
遺伝子の抑制を生ずるため、例えばアセトラクテート・
シンセターゼについて示されているような酵素阻害状況
が生ずる（Hoefgen等著、Plant Physiol. 107(1995)、4
69-477）。

【００２４】後に実施例１〜３より、フェレドキシン：
ＮＡＤＰリダクターゼ遺伝子に対して非転写構造を発現
するトランスジェニックタバコ植物の形成について記載
する。

【００２５】トランスジェニック植物はフェレドキシ
ン：ＮＡＤＰリダクターゼの発現割合が低減した状況で
得られる。実施例４に後述するように、この様な植物で
は実際に成長が抑制され、ＦＮＲ酵素活性が低下してい
ることが観察される。

【００２６】更に本発明では、潜在的除草作用を有する
フェレドキシン：ＮＡＤＰリダクターゼ阻害剤を認識す
るテスト組成物が使用される。また、本発明では植物フ
ェレドキシン：ＮＡＤＰリダクターゼの阻害または失活
による潜在的除草作用または生長抑制作用を有する物質
を認識する方法であって、ａ）最初に酵素フェレドキシン：ＮＡＤＰリダクターゼ
を、トランスジェニック生物またはトランスジェニック
細胞中に、この輸送タンパク質をコードするＤＮＡ配列
の異種発現により得、ｂ）この組換え生物全体またはこの生物の細胞ダイジェ
ストを、酵素フェレドキシン：ＮＡＤＰリダクターゼに
対する阻害作用に関する化学物質の研究に用い、ｃ）酵素フェレドキシン：ＮＡＤＰリダクターゼに対し
て活性な化合物の、植物に対する除草作用または植物の
生長調節作用をテストする方法に関する。

【００２７】本発明で使用される組換え生物は、単細胞
生物または植物細胞であってもよい。ホウレンソウの
葉に由来する酵素フェレドキシン：ＮＡＤＰリダクター
ゼ（フェレドキシン：ＮＡＤＰオキシドリダクターゼ
（NADP oxidoreductase)、Ｅ．Ｃ．１．１８．１．２）
（ドイツ、Sigma社により市販）を上記テストシステム
の構築に用いてもよい。

【００２８】本発明は更に、式Ｉの化合物の除草剤とし
て、または植物の乾燥／落葉に使用する方法、式Ｉの化
合物を活性物質して含む除草剤組成物、および植物の乾
燥／落葉用組成物、式Ｉの化合物の製造法、除草組成物
の製造法および式Ｉの化合物を用いた植物の乾燥／落葉
用組成物の製造法、式Ｉの化合物を用いた、望ましくな
い植生を防除する方法、および植物の乾燥／落葉のため
の方法に関する。

【００２９】本発明者等は、更に式Ｉの化合物を含み、
非常に優れた除草作用を有する化合物を含む除草剤組成
物を見出した。更に本発明者等は、これらの化合物の製
造法、式Ｉの化合物を用いた望ましくない植生を防除す
る方法を見出した。

【００３０】更に、式Ｉの化合物が植物組織の乾燥／落
葉にも適することも見出されている。この場合の適する
植物は、農作物、例えば綿花、ジャガイモ、アブラナ、
ヒマワリおよび大豆または豆類、特に綿花の乾燥／落葉
に適していることがわかった。これに関連して、植物の
乾燥および／または落葉用組成物、このような組成物の
製造法、式Ｉの化合物を用いて植物を乾燥および／また
は落葉させる方法が見出された。

【００３１】農業上使用可能な塩とは、主に化合物Ｉと
これらのカチオンの塩、化合物Ｉとこれらの酸の酸付加
塩であって、化合物Ｉの除草作用または乾燥／落葉作用
に悪影響を与えないものである。

【００３２】適するカチオンとしては、アルカリ金属、
例えばナトリウムおよびカリウムの各イオン、アルカリ
土類金属、例えばカルシウム、マグネシウムおよびバリ
ウムの各イオン、遷移金属、例えばマンガン、銅、亜
鉛、鉄、およびＣ₁−Ｃ₄アルキル、フェニルまたはベン
ジル置換基と、必要に応じて更に１個〜３個の他のＣ₁
−Ｃ₄アルキル基を有してもよいアンモニウムイオン、
好ましくはジイソプロピルアンモニウム、テトラメチル
アンモニウム、テトラブチルアンモニウム、トリメチル
ベンジルアンモニウム、更にホスホニウムイオン、好ま
しくはトリ（Ｃ₁−Ｃ₄アルキル）ホスホニウム、スルホ
ニウムイオン、好ましくはトリ（Ｃ₁−Ｃ ₄アルキル）ス
ルホニウム、およびスルホキソニウムイオン、好ましく
はトリ（Ｃ₁−Ｃ₄アルキル）スルホキソニウムが挙げら
れる。

【００３３】式Ｉの化合物の農業上有用な塩は、上記カ
チオンを、塩基、好ましくはアルカリ金属水酸化物また
はアルカリ金属水素化物と反応させるか、或いは上記ア
ニオンを、酸、好ましくは塩酸、臭化水素酸、硫酸、燐
酸または硝酸と反応させたものである。

【００３４】金属イオンがアルカリ金属イオンでない場
合の化合物Ｉの塩は、対応のアルカリ金属塩およびアン
モニウム塩、ホスホニウム塩、スルホニウム塩およびス
ルホキソニウム塩を、アンモニア、ホスホニウム、水酸
化物、水酸化スルホニウム、または水酸化スルホニウム
を用いて複分解することにより、慣用の方法で製造可能
である。

【００３５】式Ｉの化合物およびその農業上使用可能な
塩は、異性体混合物の形態および純粋な異性体の形態の
双方で除草剤として好適に使用される。化合物Ｉを含有
する除草剤組成物は、特に高施与率にて非耕作地帯の植
生を非常に良好に防除するという作用を有する。小麦、
稲、トウモロコシ、大豆、綿花などの農作物に重大な被
害を与えずに、これらにおける広葉の雑草およびイネ科
雑草を非常に良好に防除する。この効果は特に低使用量
において得られる。

【００３６】施与方法に応じて、化合物Ｉおよびこれを
含有する除草剤を他の多数の農作物に使用し、望ましく
ない植物を防除することも可能である。例えば以下の農
作物が適している。タマネギ（Ａｌｌｉｕｍｃｅｐａ）パイナップル（Ａｎａｎａｓｃｏｍｏｓｕｓ）ナンキンマメ（Ａｒａｃｈｉｓｈｙｐｏｇａｅａ）アスパラガス（Ａｓｐａｒａｇｕｓｏｆｆｉｃｉｎａ
ｌｉｓ）フダンソウ（Ｂｅｔａｖｕｌｇａｒｉｓｓｐｅｃ．
ａｌｔｉｓｓｉｍａ）サトウジシヤ（Ｂｅｔａｖｕｌｇａｒｉｓｓｐｅ
ｃ．ｒａｐａ）アブラナ（変種カブラ）（Ｂｒａｓｓｉｃａｎａｐｕ
ｓｖａｒ．ｎａｐｕｓ）カブカンラン（変種ナポプラシーカ）（Ｂｒａｓｓｉｃ
ａｎａｐｕｓｖａｒ．ｎａｐｏｂｒａｓｓｉｃａ）テンサイ（変種シルベストリス）（Ｂｒａｓｓｉｃａ
ｒａｐａｖａｒ．ｓｉｌｖｅｓｔｒｉｓ）トウツバキ（Ｃａｍｅｌｌｉａｓｉｎｅｎｓｉｓ）ベニバナ（Ｃａｒｔｈａｍｕｓｔｉｎｃｔｏｒｉｕ
ｓ）キヤリーヤイリノイネンシス（Ｃａｒｙａｉｌｌｉｎ
ｏｉｎｅｎｓｉｓ）レモン（Ｃｉｔｒｕｓｌｉｍｏｎ）ナツミカン（Ｃｉｔｒｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓ）コーヒー〔Ｃｏｆｆｅａａｒａｂｉｃａ（Ｃｏｆｆｅ
ａｃａｎｅｐｈｏｒａ、Ｃｏｆｆｅａｌｉｂｅｒｉ
ｃａ）〕キユウリ（Ｃｕｃｕｍｉｓｓａｔｉｖｕｓ）ギヨウギシバ（Ｃｙｎｏｄｏｎｄａｃｔｙｌｏｎ）ニンジン（Ｄａｕｃｕｓｃａｒｏｔａ）アブラヤシ（Ｅｌａｅｉｓｇｕｉｎｅｅｎｓｉｓ）イチゴ（Ｆｒａｇａｒｉａｖｅｓｃａ）大豆（Ｇｌｙｃｉｎｅｍａｘ）木棉〔Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍｈｉｒｓｕｔｕｍ（Ｇｏｓ
ｓｙｐｉｕｍａｒｂｏｒｅｕｍ、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ
ｈｅｒｂａｃｅｕｍ、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍｖｉｔｉｆ
ｏｌｉｕｍ）〕ヒマワリ（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓａｎｎｕｕｓ）ゴムノキ（Ｈｅｖｅａｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）大麦（Ｈｏｒｄｅｕｍｖｕｌｇａｒｅ）カラハナソウ（Ｈｕｍｕｌｕｓｌｕｐｕｌｕｓ）アメリカイモ（Ｉｐｏｍｏｅａｂａｔａｔａｓ）オニグルミ（Ｊｕｇｌａｎｓｒｅｇｉａ）レンズマメ（Ｌｅｎｓｃｕｌｉｎａｒｉｓ）アマ（Ｌｉｎｕｍｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ）トマト（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎｌｙｃｏｐｅｒｓ
ｉｃｕｍ）リンゴ属（Ｍａｌｕｓｓｐｅｃ．）キヤツサバ（Ｍａｎｉｈｏｔｅｓｃｕｌｅｎｔａ）ムラサキウマゴヤシ（Ｍｅｄｉｃａｇｏｓａｔｉｖ
ａ）バシヨウ属（Ｍｕｓａｓｐｅｃ．）タバコ〔Ｎｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍ（Ｎ．ｒ
ｕｓｔｉｃａ）〕オリーブ（Ｏｌｅａｅｕｒｏｐａｅａ）イネ（Ｏｒｙｚａｓａｔｉｖａ）アズキ（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓｌｕｎａｔｕｓ）ゴガツササゲ（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓｖｕｌｇａｒｉ
ｓ）トウヒ（Ｐｉｃｅａａｂｉｅｓ）マツ属（Ｐｉｎｕｓｓｐｅｃ．）シロエンドウ（Ｐｉｓｕｍｓａｔｉｖｕｍ）サクラ（Ｐｒｕｎｕｓａｖｉｕｍ）モモ（Ｐｒｕｎｕｓｐｅｒｓｉｃａ）ナシ（Ｐｙｒｕｓｃｏｍｍｕｎｉｓ）スグリ（Ｒｉｂｅｓｓｙｌｖｅｓｔｒｅ）トウゴマ（Ｒｉｃｉｎｕｓｃｏｍｍｕｎｉｓ）サトウキビ（Ｓａｃｃｈａｒｕｍｏｆｆｉｃｉｎａｒ
ｕｍ）ライムギ（Ｓｅｃａｌｅｃｅｒｅａｌｅ）ジャガイモ（Ｓｏｌａｎｕｍｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）モロコシ〔Ｓｏｒｇｈｕｍｂｉｃｏｌｏｒ（ｓ．ｖｕ
ｌｇａｒｅ）〕カカオ（Ｔｈｅｏｂｒｏｍａｃａｃａｏ）ムラサキツメクサ（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍｐｒａｔｅｎ
ｓｅ）小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍ）トリテイカムドラム（Ｔｒｉｔｉｃｕｍｄｕｒｕｍ）ソラマメ（Ｖｉｃｉａｆａｂａ）ブドウ（Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ）トウモロコシ（Ｚｅａｍａｙｓ）。

【００３７】更に、遺伝子工学的方法を含む品質改良の
結果として除草剤の作用に耐性を有する農作物において
も化合物Ｉを使用することができる。

【００３８】また式Ｉの置換化合物も、植物の乾燥およ
び／または落葉用に適している。

【００３９】これらの化合物は乾燥剤として、ジャガイ
モ、アブラナ、ヒマワリおよび大豆の地上部分を乾燥さ
せるのに特に適している。これにより、上記のような重
要な農作物を完全に機械的に収穫することができる。

【００４０】柑橘類、オリーブその他の種類の果樹、お
よび種々の核果、石果、堅果において、樹木に対する接
着性を時期的に集中させるか、或いは接着性を低減させ
て収穫を簡便化させることは、経済的に極めて重要であ
る。植物の果実ないし葉部と苗条との間の分離組織形成
の促進と称され得るこのメカニズムは、例えば綿花のよ
うな有用な植物の落葉を容易に制御可能とするために極
めて重要である。

【００４１】また、各綿花植物の成熟期間を短縮するこ
とにより、収穫後の繊維品質が向上する。

【００４２】上記式Ｉの化合物またはこれを含有する組
成物は、例えば直接的に噴霧可能な溶液、粉末、懸濁
液、高濃度の水性、油性またはその他の懸濁液または分
散液、エマルジョン、油性分散液、ペースト、ダスト
剤、散布剤または顆粒の形で噴霧、ミスト法、ダスト
法、散布法または注入法によって適用することができ
る。使用形式は、完全に使用目的に基づいて決定され
る。いずれの場合にも、本発明の有効物質の可能な限り
の微細分が保証されるべきである。

【００４３】適する不活性助剤としては、中位乃至高位
の沸点の鉱油留分、例えば燈油またはディーゼル油、更
にコールタール油等、並びに植物性または動物性油、脂
肪族、環式および芳香族炭化水素、例えばパラフィン、
テトラヒドロナフタレン、アルキル化ナフタレンまたは
その誘導体、アルキル化ベンゼンおよびその誘導体、ア
ルコール、例えばメタノール、エタノール、プロパノー
ル、ブタノール、およびシクロヘキサノール、ケトン、
例えばシクロヘキサノン、強極性溶媒、例えばアミン、
例えばＮ−メチルピロリドンおよび水が使用される。

【００４４】水性使用形は乳濁液濃縮物、ペースト、ま
たは湿潤可能の粉末、水分散可能の粒体に水を添加する
ことにより製造される。乳濁液、ペーストまたは油分散
液を製造するためには、物質をそのまま、または油また
は溶剤中に溶解して、湿潤剤、接着剤、分散剤または乳
化剤により水中に均質に混合することができる。一方で
有効物質、湿潤剤、接着剤、分散剤または乳化剤、およ
び場合により溶剤または油より成る濃縮物を製造するこ
ともでき、これを水で好適に希釈することができる。

【００４５】界面活性剤としては、芳香族スルホン酸、
たとえばリグノスルホン酸、フェノールスルホン酸、ナ
フタレンスルホン酸、ジブチルナフタレンスルホン酸の
各アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム
塩、並びに脂肪酸、アルキルスルホナート、アルキルア
リールスルホナート、アルキルスルファート、ラウリル
エーテルスルファート、脂肪アルコールスルファートの
アルカリ金属塩およびアルカリ土類金属塩、アンモニウ
ム塩、並びに硫酸化ヘキサデカノール、ヘプタデカノー
ルおよびオクタデカノールの塩、並びに硫酸化脂肪アル
コールグリコールエーテルの塩、スルホン化ナフタレン
またはナフタレン誘導体とホルムアルデヒドとの縮合生
成物、ナフタレン或はナフタレンスルホン酸とフェノー
ルおよびホルムアルデヒドとの縮合生成物、ポリオキシ
エチレン−オクチルフェノールエーテル、エトキシル化
イソオクチルフェノール、オクチルフェノール、ノニル
フェノール、アルキルフェノールポリグリコールエーテ
ル、トリブチルフェニルポリグリコールエーテル、アル
キルアリールポリエーテルアルコール、イソトリデシル
アルコール、脂肪アルコールエチレンオキシド−縮合
物、エトキシル化ヒマシ油、ポリオキシエチレンアルキ
ルエーテル、またはポリオキシプロピレン、ラウリルア
ルコールポリグリコールエーテルアセタート、ソルビッ
トエステル、リグニン−亜硫酸塩廃液、またはメチルセ
ルロースが適している。

【００４６】粉末、散布剤およびダスト剤は有効物質と
固状担体物質とを混合または一緒に磨砕することにより
製造することができる。

【００４７】粒状体、例えば被覆−、含浸−および均質
粒状体は、有効物質を固状担体物質に結合することによ
り製造することができる。固状担体物質は例えば鉱物
土、例えばシリカ、シリカゲル、シリケート、滑石、カ
オリン、石灰石、石灰、白亜、膠塊粘土、石灰質黄色粘
土、粘土、白雲石、珪藻土、硫酸カルシウム、硫酸マグ
ネシウム、酸化マグネシウム、磨砕合成材料、肥料、例
えば硫酸アンモニウム、燐酸アンモニウム、硝酸アンモ
ニウム、尿素および植物性生成物、例えば穀物粉、樹
皮、木材およびクルミ穀粉、セルロース粉末および他の
固状担体物質である。

【００４８】直接使用可能な製品における式Ｉの化合物
の濃度は、広範囲で変更可能である。通常、製剤には約
０．００１〜９８重量％、好ましくは０．０１〜９５重
量％の有効物質が含まれる。有効物質は純度９０〜１０
０％、特に９５〜１００％（ＮＭＲスペクトルによる）
で使用される。

【００４９】以下の製剤例により、上記製品の調製を説
明する。

【００５０】Ｉ．２０重量部の式Ｉの化合物を、アルキ
ル化ベンゼン８０重量部、エチレンオキシド８〜１０モ
ルをオレイン酸−Ｎ−モノエタノールアミド１モルに付
加した付加生成物１０重量部、ドデシルベンゼンスルホ
ン酸のカルシウム塩５重量部およびエチレンオキシド４
０モルをヒマシ油１モルに付加した付加生成物５重量部
から成る混合物中に溶解する。この溶液を１０００００
重量部の水に注入しかつ細分布することにより有効成分
０．０２重量％を含有する水性分散液が得られる。

【００５１】ＩＩ．２０重量部の式Ｉの化合物を、シク
ロヘキサノン４０重量部、イソブタノール３０重量部、
エチレンオキシド７モルをイソオクチルフェノールに付
加した付加生成物２０重量部、エチレンオキシド４０モ
ルをヒマシ油１モルに付加した付加生成物１０重量部よ
りなる混合物中に溶解する。この溶液を水１０００００
重量部に注入することにより有効成分０．０２重量％を
含有する水性分散液が得られる。

【００５２】ＩＩＩ．２０重量部の式Ｉの化合物を、シ
クロヘキサノール２５重量部、沸点２１０〜２８０℃の
鉱油留分６５重量部およびエチレンオキシド４０モルを
ヒマシ油１モルに付加した付加生成物１０重量部よりな
る混合物中に分散する。この混合物を水１０００００重
量部に注入することにより有効成分０．０２重量％を含
有する水性分散液が得られる。

【００５３】ＩＶ．２０重量部の式Ｉの化合物を、ジイ
ソブチル−ナフタレン−α−スルホン酸のナトリウム塩
３重量部、亜硫酸塩廃液よりのリグノスルホン酸のナト
リウム塩１７重量部および粉末状シリカゲル６０重量部
と充分に混和し、得られた混合物をハンマーミルで磨砕
する。この混合物を水２００００重量部に細分布するこ
とにより有効成分０．１重量％を含有する噴霧液が得ら
れる。

【００５４】Ｖ．３重量部の式Ｉの化合物を細粒状カオ
リン９７重量部と混和する。これにより有効成分３重量
％を含有する噴霧液が得られる。

【００５５】ＶＩ．２０重量部の式Ｉの化合物を、ドデ
シルベンゼンスルホン酸のカルシウム塩２重量部、脂肪
アルコールポリグリコールエーテル８重量部、フェノー
ル／尿素／ホルムアルデヒド縮合物のナトリウム塩２重
量部およびパラフィン系鉱油６８重量部と密に混和し、
安定な油状分散液を得る。

【００５６】ＶＩＩ．１重量部の式Ｉの化合物Ｉを、７
０重量部のシクロヘキサノン、２０重量部のエトキシル
化イソオクチルフェノール、および１０重量部のエトキ
シル化ヒマシ油から成る混合物に溶解した。得られた混
合物を水で希釈し、所望の有効成分濃度を得る。安定な
乳濁液が得られる。

【００５７】ＶＩＩＩ．１重量部の式Ｉの化合物を、８
０重量部のシクロヘキサンと２０重量部のＷｅｔｔｏｌ
（登録商標）ＥＭ３１（ＢＡＳＦ社製、エトキシル化ヒ
マシ油に基づく非イオン性乳濁液）との混合物に溶解す
る。次いでこの混合物を水で希釈し、所望の濃度の有効
成分を得る。これにより安定な乳濁液濃縮物が得られ
る。

【００５８】式Ｉの化合物、またはその除草剤組成物は
出芽前法または出芽後法により施用される。有効物質が
ある種の栽培植物にうまく適合しない場合は、下部に成
長している望ましくない植物の葉または露出している土
壌には付着し、敏感な栽培植物が存在する場合には、こ
れらの葉にできるだけ接触しないように、噴霧装置によ
り除草剤組成物を噴霧することができる（後直接撒布、
レイーバイ）。

【００５９】施与目的、季節、目的植物および成長段階
に応じて、ヘクタールあたりの有効物質（ａ．ｓ）の施
与量を０．００１−３．０ｋｇ、好ましくは０．０１−
１．０ｋｇとする。

【００６０】有効作用範囲を拡張し、相乗効果を達成す
るために、式Ｉの（置換）化合物を、多様な他の除草剤
ないし生長調整有効成分と混合して、または同時に施与
することが可能である。混合打つ中の適する成分として
は、例えば１，２，４−チアジアゾール、１，３，４−
チアジアゾール、アミド、アミノ燐酸およびその誘導
体、アミノトリアゾール、アニリド、アリールオキシ−
／ヘテロアリールオキシアルカン酸およびその誘導体、
安息香酸およびその誘導体、ベンゾチアジアジノン、２
−（ヘテロアリール／アロイル）−１，３−シクロヘキ
サンジオン、ヘテロアリールアリールケトン、ベンジル
イソキサゾリジノン、メタ−ＣＦ₃−フェニル誘導体、
カルバマート、キノリンカルボン酸およびその誘導体、
クロロアセトアニリド、シクロヘキサン−１，３−ジオ
ン誘導体、ジアジン、ジクロロプロピオン酸およびその
誘導体、ジヒドロベンゾフラン、ジヒドロフラン−３−
オン、ジニトロアニリン、ジニトロフェノール、ジフェ
ニルエーテル、ジピリジリル、ハロカルボン酸およびそ
の誘導体、尿素、３−フェニルウラシル、イミダゾー
ル、イミダゾリノン、Ｎ−フェニル−３，４，５，６−
テトラヒドロフタルイミド、オキサジアゾール、オキシ
ラン、フェノール、アリールオキシ−およびヘテロアリ
ールオキシフェノキシプロピオン酸エステル、フェニル
酢酸およびその誘導体、２−フェニルプロピオン酸およ
びその誘導体、ピラゾール、フェニルピラゾール、ピリ
ダジン、ピリジンカルボン酸およびその誘導体、ピリミ
ジルエーテル、スルホンアミド、スルホニル尿素、トリ
アジン、トリアジノン、トリアゾリノン、トリアゾール
カルボキシアミドおよびウラシルなどが挙げられる。

【００６１】更に、式Ｉの化合物は、単独でまたは他の
除草剤との混合物として、または更なる植物保護剤との
混合物の形状で、例えば殺害虫剤または植物生病原菌類
の殺菌剤または殺バクテリア剤と混合して施用すること
ができるという利点を有する。苗栄養不足、希元素欠乏
などの症状治癒のために使用されるミネラル塩溶液と混
合し得ること、植物に無害の油類、油濃縮物類に添加し
得ることも重要である。

【００６２】以下、実施例により本発明を更に詳細に説
明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるも
のではない。

【００６３】

【実施例】［実施例１］フェレドキシン：ＮＡＤＰリダクターゼ遺伝子に対する
非転写構造を発現するトランスジェニックタバコ植物の
形成Ａ．一般的クローニング法制限切断、アガロースゲル電気泳動法、ＤＮＡフラグメ
ントの生成、核酸のニトロセルロースまたはナイロン膜
への移行、ＤＮＡフラグメントの結合、E. Coli細胞の
形質転換、バクテリア培養、ファージ増殖、および組換
えＤＮＡの配列分析等のクローニング法は、Sambrook等
著、(1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press (IS
BN 0-87969-309-6）に記載の方法で行なわれた。アグロ
バクテリウム・ツメファシエンス（Agrobacterium tsum
efaciens)の形質転換は、HoefgenおよびWillmitzer著
（Nucl. Acid Res. 16 (1988)、9877）により行われ
た。アグロバクテリアの増殖はＹＥＢ培地で行った（Ve
rvliet等著、J. Gen. Virol. 26 (1975)、33）。

【００６４】Ｂ．ｃＤＮＡライブラリーの形成葉部に特異的なｃＤＮＡライブラリーを形成するため、
形質転換の行われていないタバコ植物の全葉部ＲＮＡ
（Sonnewald Plant J. 2 (1992)、571）をLongemann等
による方法(Anal. Biochem. 163 (1987), 21 ）を用い
て単離した。次いでポリ（Ａ）−ＲＮＡをオリゴ（ｄ
Ｔ）−セルロース・タイプ７（Pharmacia Biotech Euro
pe社、Munzgerstr. 9、79111 Freiburg）を用い、説明
書に従って精製した。濃度を光分解法で測定した後、得
られたＲＮＡ５μｇをｃＤＮＡ合成用に使用した。ｃＤ
ＮＡの製造に必要な全ての薬品および酵素はStratagene
社（11099 North Torrey Pines Road、La Jolla、CA 92
037、USA）から入手した。これらの使用方法は、説明書
に従った。第一および第二のｃＤＮＡ鎖を、λ−ＣＡＰ
−ｃＤＮＡ合成キットを使用して合成した。次いで、こ
の様に得られた二本鎖ｃＤＮＡに対してＥｃｏＲＩ−Ｎ
ｏｔＩアダプターを用い、ＥｃｏＲＩダイジェスト・ラ
ムダＺＡＰＩＩベクター中でクローンした。この組換ラ
ムダＤＮＡを生体外（in vitro)の充填に付した（Gigap
ack IIパッキングエクストラクト）、ＸＬ−１Ｅ．
ｃｏｌｉ細胞（Stratagene社）を形質転換した。ｃＤＮ
Ａライブラリーのタイターを形成されたプラークを数え
て求めた。

【００６５】Ｃ．膜−拘束タンパク質耐性用ポリクロー
ナル抗体の形成タバコ植物（Nicotiana tabacum L. cv. Samsun NN）の
約４００ｇの葉を用い、これから膜−拘束タンパク質
を、分画遠心分離による標準的方法で単離した。抗血清
を得るために１００μｇのタンパク質を用いてマウスに
免疫を与えた。

【００６６】Ｄ．膜−拘束タンパク質をコードするｃＤ
ＮＡクローンの単離膜に拘束されたタバコタンパク質をコードするｃＤＮＡ
を単離するために、λ−ＺＡＰＩＩ（Stratagene社)の
葉部特異的ＤＮＡライブラリを、用意された抗血清によ
りスクリーニングした。ｃＤＮＡライブラリを３×１０
⁵プラーク形成単位によるタイターでプレート状とし
た。これらのプレートからプラークが、予め１０ｍＭの
ＩＰＴＧに１５分間浸したニトロセルロースフィルター
に移行した。膜−拘束タンパク質をコードするｃＤＮＡ
クローンを有するファージを検出するため、このニトロ
セルロースフィルター上で特定の抗体（Ｃ参照）を培養
した。次いで酵素の結合した第二の抗体と、呈色反応
（Amersham-Buchler)によりこの特定抗体の結合が検出
された。次いでこれらを取り出し、均一の集団を得るた
めの第二のスクリーニングに付した。４クローンを各プ
ラークまで精製し、配列した。１０５０塩基対の長さを
有するクローンＯＲ１５は、２９１アミノ酸長さのポリ
ペプチドをコードしていた。相同の比較により、このポ
リペプチドは豆ＦＮＲと８０％同一であることが明らか
にされた。

【００６７】Ｅ．完全なＦＮＲクローンの単離クローンＯＲ１５が全ＦＮＲコード領域を含まないた
め、λ−ＺＡＰＩＩ（Stratagene社)の葉部特異的ｃＤ
ＮＡライブラリを３×１０⁵プラーク形成単位によるタ
イターでプレート状とし、完全なＦＮＲクローンを単離
した。これらのプレートから、プラークをナイロン膜に
移行させ、プローブ（ＯＲ１５）として用いた放射線標
識ｃＤＮＡフラグメントによりハイブリッドが形成され
た。プラークフィルター上の、相同ｃＤＮＡフラグメン
トによるプローブのハイブリッド化のため、Ｘ線フィル
ム上に放射線活性による暗色斑点が現れた。このＸ線フ
ィルムを用いることにより、所望のｃＤＮＡフラグメン
トを有するファージを認識することができた。単離した
ファージをＳＭ培地に貯蔵した。４クローンが得られ、
制限分析により特性決定を行った。これらは配列長に関
して多少の違いを有していたのみであったため、最長配
列によるクローンを以下のＦで用いた。

【００６８】Ｆ．プラスミドＤＮＡの配列特定のプライマーを用いてｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔによ
り得られたｃＤＮＡクローンを配列した。配列反応が各
ｃＤＮＡクローンの５’−末端からも、３’−末端から
も行われる用に、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔにおけるこれ
らの結合部位を決定した。認識されたＦＮＲのヌクレオ
チド配列（Jamsen、T. 等著、Current Genetics 13(198
8)、517-522により公開）と、タンパク質配列（Karplu
s、P.A.等著、Biochemistry 23(1984)、6576-6583に公
開）を以下に示す。完全なＦＮＲクローンは、１３３３
塩基対長によるものであり、３６２アミノ酸長のポリペ
プチドをコードする読み枠を有していた（図１）

【００６９】Ｇ．バクテリア菌株Ｅ．ｃｏｌｉ（ＸＬ−１Ｂｌｕｅ）バクテリアをStra
tagene社より入手した。植物の形質転換（プラスミドｐ
ＧＶ３８５０ｋａｎを有するＣ５８Ｃ１）に用いたアグ
ロバクテリウム・ツメファシエンス菌株に関しては、De
bleare等のNucl. Acid Res.における論考（13(1985)、4
777に記載が成されている。

【００７０】Ｈ．タバコの形質転換タバコ植物の形質転換（Nicotiana tabacum L. cv. Sam
sun NN）の形質転換を行うために、選択的条件下で培養
したアグロバクテリウム・ツメファシエンスの一晩培養
菌１０ミリリットルを遠心分離し、上澄みを捨て、この
バクテリアを同容量の抗体非含有培地に再懸濁した。無
菌状態の植物の葉部平板円盤状組織(leaf disks)（直径
約１ｃｍ）を、無菌ペトリ皿中の上記バクテリア溶液に
浸漬させた。次いで、この葉部平板円盤状組織を、ペト
リ皿中の、２％蔗糖と０．８％のバクトアガー（Bacto
agar)の添加されたＭＳ培地（MurashigeおよびSkoog等
による論考、Physiol. Plant. 15(1962)、473)に配置し
た。２５℃の暗所で２日間培養した後、１００ｍｇ／リ
ットルのカナマイシン、５００ｍｇ／リットルのクラフ
ォラン、１ｍｇ／ベンジルアミノプリン(ＢＡＰ）、
０．２ｍｇ／リットルのナフチル酢酸（ＮＡＡ）、１．
６％のグルコース、および０．８％のバクトアガーを含
むＭＳ培地に移し、培養を継続した（明所１６時間／暗
所８時間）。生長段階の苗条を、２％の蔗糖、２５０ｍ
ｇ／リットルのクラフォランおよび０．８％のバクトア
ガーを含むホルモン非含有ＭＳ培地に移植した。

【００７１】Ｉ．植物組織由来の全ＲＮＡ分析植物組織由来の全ＲＮＡを、Logemann等の論考（Anal.
Biochem. 163 (1987)、21)に記載されているように単離
した。分析のため、ＲＮＡの２０〜４０μｇのバッチを
それぞれ、ホルムアルデヒド含有１．５％濃度のアガロ
ースゲル中に施した。電気泳動によるＲＮＡ分子の分離
後、得られたＲＮＡを毛管移動によりナイロン膜上に移
行させた。Amashinoによる論考（Anal. Biochem. 152
(1986)、304)に記載された特異的な転写が検出された。
プローブとして使用したｃＤＮＡフラグメントをランダ
ム・プライムド・ＤＮＡ・ラベリング・キット（Boehri
nger社製、マンハイム）を用いて放射線標識した。

【００７２】Ｊ．プラスミドｐＰｉｎＡＲ−ＦＮＲアン
チセンス（非転写構造）の製造プラスミドｐＰｉｎＡＲ−ＦＮＲアンチセンスは、５部
分のフラグメントＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅから構成される
（図２）。発現ベクターｐＢｉｎＡＲはフラグメントＡ
を含み、これには３５ＳＣａＭＶプロモーターが存在す
る。これはカリフラワーモザイクウィルス（ＣａＭＶ）
のヌクレオチド６９０９〜７４３７を含むフラグメント
から構成される（Franck等著、Cell 21 (1989)、285)。
これはプラスミドｐＤＨ５１（Pietrzak等によるNuclei
c. Acid. Resにおける論考、14(1986)、5857）からＥｃ
ｏＲｉ−ＫｐｎＩフラグメントとして単離されたもので
ある。フラグメントＢおよびＤには、複数のクローニン
グ部位が含まれ、フラグメントＣ（ＦＮＲｃＤＮＡ）
がｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫからＡｓｐ７１８−Ｂａ
ｍＨＩフラグメントとして単離された。得られたＦＮＲ
ｃＤＮＡを非転写方向（antisence orientation)に、Ａ
ｓｐ７１８−ＢａｍＨＩフラグメントとしてベクターｐ
ＢｉｎＡＲ中でクローンした（図２）。フラグメントＥ
はＴｉプラスミドｐＴｉＡＣＨ５（Gielen等著、EmBO
J. 3 (1984)、835)のＴ−ＤＮＡの遺伝子３のポリアデ
ニル化シグナル、ヌクレオチド１１７４９−１１９３９
（プラスミドｐＡＧＶ４０からＰｖｕＩＩ−ＨｉｎｄＩ
ＩＩフラグメントとして単離されている）（Herrera-Es
trella等の、Natureにおける論考、303 (1983)、209）
を含み、これをＰｖｕＩＩ切断部位にＳｐｈＩリンカー
を結合した後に、ベクターのＳｐｈＩ−ＨｉｎｄＩＩＩ
切断部位間でクローンした。得られたプラスミドＢｉｎ
ＡＲ−ＦＮＲアンチセンスを、アグロバクテリウム組織
によりタバコの形質転換に用いた。

【００７３】［実施例２］個々の形質転換したタバコ植
物から８０個体の植物を再生し、温室に移植した。クロ
ロプラスト精製後の酵素活性を直接測定、およびAmersh
am-Buchlerによる、ビオチン／ストレプタビジン（stre
ptavidin)組成物を用いた免疫化学的検出を用いたウエ
スタンブロットの双方により測定した。更にアンチセン
ス遺伝子発現をノーザンブロットにより調べた。

【００７４】［実施例３］ＦＮＲ酵素活性の測定単離した葉緑体の酵素活性を文献により公知の方法で測
定した（Meth. Enzymol.69 (1980) 250-251)。

【００７５】葉部から単離した葉緑体の未加工の重量お
よび乾重量測定、並びにクロロフィルおよびタンパク質
含有量の測定を標準的な方法により行った。

【００７６】［実施例４］アンチセンス植物ＦＮＲ−４４の性質

【００７７】

【表５】

【００７８】植物のＦＮＲ−４４のＦＮＲｍＲＮＡ含有
量は低く、酵素活性が低減していることがわかった。こ
れにより生長も陥込んだ。

【００７９】すなわち酵素阻害剤が植物の生長も阻害し
ていることがわかる。

【００８０】［実施例５］フェレドキシン：ＮＡＤＰリダクターゼ阻害剤の研究の
ための測定システムフェレドキシン：ＮＡＤＰリダクターゼは生理学的に関
連するＮＡＤＰとフェレドキシンとの可逆反応（フェレ
ドキシンリダクターゼ活性）を触媒するのみならず、ヘ
キサシアノ亜鉄（ＩＩＩ）カリウムのＮＡＤＰＨ依存的
還元（ジアホラーゼ活性）を触媒する。これらの反応の
測定法は、文献に開示されている（Meth. Enzymol.、第
２３および６９巻）。

【００８１】ジアホラーゼ活性は、例えば葉緑体または
単離されたフェレドキシン：ＮＡＤＰリダクターゼ（Si
gma社)を、Ｔｒｉｓ／ＨＣｌバッファ１００ｍＭ、ｐＨ
８．２、０．５ｍＭのヘキサシアノ亜鉄（ＩＩＩ）カリ
ウム、０．５ｍＭＮＡＤＰＨまたはＮＡＤＰＨ再生系、
例えば０．５ｍＭＮＡＤＰおよび２．５ｍＭグルコース
−６−燐酸、およびミリリットルあたり１単位のグルコ
ース−６−燐酸デヒドロゲナーゼ中、２５℃で培養し、
４２０ｎｍにおける吸収の低減を監視することにより測
定可能である。フェレドキシン：ＮＡＤＰリダクターゼ
非添加の培養混合物がブランク値用に用いられる。

【００８２】フェレドキシン：ＮＡＤＰリダクターゼ活
性は、例えば葉緑体抽出物または単離されたフェレドキ
シン：ＮＡＤＰリダクターゼ（Sigma社)を、Ｔｒｉｓ／
ＨＣｌバッファ１００ｍＭ、ｐＨ７．８、０．２ｍＭの
ＮＡＤＰＨ、０．６５ｍｇ／ｍｌシトクロームＣ、およ
び０．１ｍｇ／ｍｌフェレドキシン中、２５℃で培養
し、５５０ｎｍにおける吸収変化を測定するか、或いは
５５０ｎｍおよび５４０ｎｍでの吸収変化の差異により
測定可能である。フェレドキシン非添加の培養混合物が
ブランク値用に用いられる。

【００８３】被検物質を適する溶媒、例えばジメチルス
ルホキシド等に溶解し、溶液のアリコートをピペットで
上記培養液混合物に添加した。これに対し、純粋な溶媒
のアリコートが対照として用いられる。各培養液バッチ
の吸収変化を比較して、被検物質の作用を測定すること
ができる。

【００８４】［実施例６］ジアホラーゼ反応の阻害

【００８５】

【表６】 ¹フェレドキシン：ＮＡＤＰリダクターゼ非添加² ６平均値±実験の標準偏差フェレドキシンリダクターゼ反応の阻害

【００８６】

【表７】 ¹フェレドキシン非添加² ６平均値±実験の標準偏差

【００８７】

【化８】

【００８８】［実施例７］フェレドキシン−ＮＡＤＰ＋オキシドリダクターゼ阻害
剤［使用実施例］本発明の除草化合物によるアオウキクサ
（ｄｕｃｋｗｅｅｄ）に対する効果を以下の実験により
示す。

【００８９】アオウキクサ（Lemna paucicostata)を、
１％蔗糖を添加した１００ｍｌの無機栄養剤溶液を含有
する２５０ｍｌのガラス容器中、Grossmann等著、Pesti
cideScience 35 (1992)、283-289に記載の方法により無
菌状態で培養した。実験開始時に、有効成分のアセトン
溶液１５０μｌ（原液：１００倍希釈）をピペットで、
１５ｍｌの栄養剤溶液（蔗糖非添加のもの）を含有する
ペトリ皿（直径６ｃｍ、高さ１．５ｃｍ、Greiner Fric
ｋenhausen社製）に添加した。対照実験用として有効成
分溶液の溶媒成分のみを栄養剤溶液に添加した。次いで
４個体のLemna植物を各ペトリ皿に導入し、ペトリ皿を
蓋で覆い、２５℃、永久光(permanentlight)条件下（Ph
illips TL 白色ネオン管、約４０μｍｏｌｍ^-2ｓ^-1、λ
＝４００〜７５０ｎｍ）の環境調節キャビネットにおい
て培養した。８〜１０日後、葉面の増大をイメージング
機器（Imago、Compulog Computer Syst. Boeblingen)を
用いて測定し、これを生長パラメータとした。すなわち
このデータを対照を基準とした生長阻害％に換算して用
いた。

【００９０】実験結果を以下の表に示す。本発明の化合
物による除草作用がLemnaの生長の効果的阻害により示
されている。

【００９１】

【表８】

【００９２】［実施例８］３−メチル−６−ｎ−プロピルアミノスルホニルベンゾ
チアゾロン−２−（（２−ｎ−ブチルスルホニル）安息
香酸）ヒドラゾン０．３３ｇ（０．００１３モル）の２−（ｎ−ブチルス
ルホニル）ベンゾヒドラジドおよび０．５６ｇ（０．０
０１２６モル）の２−メチルメルカプト−３−メチル−
６−（ｎ−プロピルアミノスルホニル）ベンズイミダゾ
リウム−ｐ−トルエンスルファートを、７ｍｌのピリジ
ンと７ｍｌのピペリジンの混合物中で６時間還流した。
次いで混合物を濃縮し、得られた残留物を酢酸エチルと
共に攪拌した。不溶残留物を除去し、濾液を濃縮し、シ
リカゲルカラムクロマトグラフィーに付した（塩化メチ
レン／メタノール９：１）。収量：１１０ｍｇ（融点１２４〜１２７℃）。類似：３−メチル−６−スルホニルベンゾチアゾロン−
２−（（４−ｎ−ブチルアミノスルホニル）安息香酸）
ヒドラゾン（融点＞２５０℃）

【００９３】［実施例９］３−メチル−５−スルホニルベンゾチアゾロン−２−
（（２−ｎ−ブチルアミノスルホニル）安息香酸）ヒド
ラゾン０．４７ｇ（０．００１２７モル）の２−（ｎ−ブチル
スルホニル）ベンゾヒドラジドおよび０．７５ｇ（０．
００１７２モル）の２−メチルメルカプト−３−メチル
−５−スルホニルベンズイミダゾリウムｐ−トルエンス
ルファートを、１０ｍｌのピリジンと１０ｍｌのピペリ
ジンの混合物中で６時間還流した。次いで混合物を水で
希釈し塩酸酸性とした。得られた沈殿物を吸引濾過し、
乾燥した。収量：２８０ｍｇ（融点２４７℃、分解）。類似：３−メチル−５−スルホニルベンゾチアゾロン−
２−（（４−ｎ−ブチルアミノスルホニル）安息香酸）
ヒドラゾン（融点＞２５０℃）

【図面の簡単な説明】

【図１】（ａ）ヌクレオチド配列を示す図である。（ｂ）全ＦＮＲクローンのタンパク配列を示す図であ
る。

【図２】ＮＡＤＰ依存的ＦＮＲ非転写ＲＮＡの発現を調
整するキメラ遺伝子の構成図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者フランツ、レールドイツ、67105、シファーシュタット、ゼバスティアン−クナイプ−シュトラーセ、 17 (72)発明者クラウス、グロースマンドイツ、67141、ノイホーフェン、マインシュトラーセ、１ (72)発明者ラルフ−ミヒャエル、シュミットドイツ、67489、キルヴァイラー、アム、シュロスガルテン、９デー (72)発明者ウヴェ、ゾネヴァルトドイツ、06484、クヴェドリンブルク、アム、ハング、６ (72)発明者モハメド、ハジレザエイドイツ、06466、ガテルスレーベン、ハンス−シュトゥベ−シュトラーセ、５

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式Ｉ【化１】で表され式中【化２】がそのＥ／Ｚ異性体を、ＹがＣ＝ＯまたはＳＯ₂を、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³がそれぞれ相互に独立に、水素、ハロゲ
ン、シアノ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、
Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシアルキル、Ｃ₁−Ｃ₆ハロアルキル、
Ｃ₁−Ｃ₆アルキルチオ、Ｃ₁−Ｃ₆ハロアルコキシ、Ｃ₁
−Ｃ₆アルキルカルボニル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシカルボ
ニル、Ｓ（Ｏ）_n−Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｓ（Ｏ）_n−Ｃ₁
−Ｃ₆ハロアルキル、Ｓ（Ｏ）_n−Ｎ−Ｃ₁−Ｃ₆アルキ
ル、Ｓ（Ｏ） _n−Ｎ（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）₂（ｎ＝０、
１、２）、ＳＯ₃Ｈ、ＣＯＯＨ、ＰＯ₃Ｈ、ＣＯＮＨ₂、
ＣＯＮＨ−Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、ＣＯ−Ｎ（Ｃ₁−Ｃ₆アル
キル）₂、ＮＨ₂、ＮＨ−Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、またはＮ−
（Ｃ₁−Ｃ₆アルキル）₂を、Ｒ⁴が水素またはＣ₁−Ｃ₆アルキルを、Ｒ⁵、Ｒ⁶、Ｒ⁷がそれぞれ相互に独立に、水素、ハロゲ
ン、シアノ、Ｃ₁−Ｃ₃₀アルキル、Ｃ₁−Ｃ₃₀アルコキシ
アルキル、Ｃ₁−Ｃ₃₀ハロアルキル、Ｃ₁−Ｃ₃₀アルキル
チオ、Ｃ₁−Ｃ₃₀ハロアルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₃₀アルキルカ
ルボニル、Ｃ₁−Ｃ₃₀アルコキシカルボニル、ＳＯ₃Ｈ、
Ｓ（Ｏ）_n−Ｃ₁−Ｃ₃₀アルキル、Ｓ（Ｏ）_n−Ｃ₁−Ｃ₃₀
ハロアルキル、Ｓ（Ｏ）_n−Ｎ−Ｃ₁−Ｃ₃₀アルキル、Ｓ
（Ｏ） _n−Ｎ（Ｃ₁−Ｃ₃₀アルキル）₂（ｎ＝０、１、
２）、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＮＨ−Ｃ₁−Ｃ₃₀アル
キル、ＣＯ−Ｎ（Ｃ₁−Ｃ₃₀アルキル）₂、ＮＨ₂、ＮＨ
−Ｃ ₁−Ｃ₃₀アルキル、またはＮ−（Ｃ₁−Ｃ₃₀アルキ
ル）₂を、それぞれ意味することを特徴とする化合物、
およびその塩。
【請求項２】請求項１に記載の、有効量の１種類以上
の式Ｉの化合物またはその塩と、１種類以上の慣用の製
剤助剤を含むことを特徴とする、有害植物の防除に適す
る組成物。
【請求項３】請求項１に記載の、除草有効量の１種類
以上の式Ｉの化合物またはその塩を、１種類以上の慣用
の製剤助剤と共に、公知方法により加工することを特徴
とする、請求項２に記載の組成物の調製方法。
【請求項４】請求項１に記載の式Ｉの化合物もしくは
その塩または請求項２に記載の組成物の、除草剤として
の、または植物の乾燥／落葉用の使用法。
【請求項５】酵素フェレドキシン：ＮＡＤＰリダクタ
ーゼを、植物フェレドキシン：ＮＡＤＰリダクターゼ阻
害剤の認識に使用する方法。
【請求項６】請求項５に記載の酵素フェレドキシン：
ＮＡＤＰリダクターゼを、除草活性化合物の認識に使用
する方法。
【請求項７】植物フェレドキシン：ＮＡＤＰリダクタ
ーゼの阻害または失活による潜在的除草作用または生長
調節作用を有する物質を認識する方法であって、ａ）最初に酵素フェレドキシン：ＮＡＤＰリダクターゼ
を、トランスジェニック生物またはトランスジェニック
細胞中に、この輸送タンパク質をコードするＤＮＡ配列
の異種発現により得、ｂ）この組換え生物全体またはこの生物の細胞ダイジェ
ストを、酵素フェレドキシン：ＮＡＤＰリダクターゼに
対する阻害作用に関する化学物質の研究に用い、ｃ）酵素フェレドキシン：ＮＡＤＰリダクターゼに対し
て活性な化合物の除草作用または植物の生長調節作用を
テストすることを特徴とする方法。
【請求項８】前記トランスジェニック生物が単細胞生
物または植物細胞であることを特徴とする、請求項７に
記載の方法。
【請求項９】請求項７または８に記載の方法により認
識される、除草作用および／または生長調節作用を有す
る化合物。
【請求項１０】請求項９に記載の除草剤および生長調
節作用を有する成分を、他の除草剤、殺虫剤、殺菌剤、
殺ダニ剤、殺線虫剤および農業上有用な助剤と共に農作
物保護剤として使用する方法。