JP2000050896A - ペルオキシダ―ゼ活性を測定するための試薬系におけるヘモグロビン干渉を阻止する方法 - Google Patents
ペルオキシダ―ゼ活性を測定するための試薬系におけるヘモグロビン干渉を阻止する方法Info
- Publication number
- JP2000050896A JP2000050896A JP11218444A JP21844499A JP2000050896A JP 2000050896 A JP2000050896 A JP 2000050896A JP 11218444 A JP11218444 A JP 11218444A JP 21844499 A JP21844499 A JP 21844499A JP 2000050896 A JP2000050896 A JP 2000050896A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hydroperoxide
- metal chelate
- hemoglobin
- pyrazole
- assay
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/70—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving creatine or creatinine
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
- Y10T436/145555—Hetero-N
- Y10T436/147777—Plural nitrogen in the same ring [e.g., barbituates, creatinine, etc.]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/20—Oxygen containing
- Y10T436/206664—Ozone or peroxide
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/25—Chemistry: analytical and immunological testing including sample preparation
- Y10T436/25125—Digestion or removing interfering materials
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 ペルオキシダーゼ活性を測定するための試薬
系におけるヘモグロビン干渉を阻止する手段の提供。 【解決手段】 金属キレートが被酸化性指示薬のような
酸化を起こす能力を実質的に抑制することなく、ヘモグ
ロビンが染料を酸化させる能力を抑制する、ピラゾール
誘導体を試験系に含めること。
系におけるヘモグロビン干渉を阻止する手段の提供。 【解決手段】 金属キレートが被酸化性指示薬のような
酸化を起こす能力を実質的に抑制することなく、ヘモグ
ロビンが染料を酸化させる能力を抑制する、ピラゾール
誘導体を試験系に含めること。
Description
【０００１】本発明は、体液試料中のペルオキシダーゼ
活性を検出するための、その感度がヘモグロビン干渉に
よって損なわれるような方法に対する改良である。たと
えば、米国特許第５，３７４，５６１号明細書には、ク
レアチニンを含有する疑いのある尿試料を、第二銅イオ
ン、ヒドロペルオキシドならびに酸素フリーラジカル及
びヒドロペルオキシドの存在で色応答を発する被酸化性
染料と接触させる工程を含む、尿中クレアチニンを検出
する方法が開示されている。この検定では、第一の工程
は、Ｃｕ+ +・クレアチニンキレート錯体の形成を含む。
被酸化性染料は、そこからＣｕ+ +・クレアチニン錯体へ
の電子の移動によって酸化されて、非反応性Ｃｕ+・ク
レアチニン形態を提供し、この形態が、ヒドロペルオキ
シドへの電子の損失によってＣｕ+ +・クレアチニンに再
生される。この検定は、ヘモグロビンの非存在ではうま
く作用するが、ヘモグロビンの存在では、ヘモグロビン
が染料を酸化させ、それによって偽陽性を生じさせる傾
向により、その精度が影響を受ける。ヘモグロビンは、
体液、たとえば尿の中に頻繁に見られるため、その干渉
を封じることにより、より精密な検定を提供する必要が
ある。
活性を検出するための、その感度がヘモグロビン干渉に
よって損なわれるような方法に対する改良である。たと
えば、米国特許第５，３７４，５６１号明細書には、ク
レアチニンを含有する疑いのある尿試料を、第二銅イオ
ン、ヒドロペルオキシドならびに酸素フリーラジカル及
びヒドロペルオキシドの存在で色応答を発する被酸化性
染料と接触させる工程を含む、尿中クレアチニンを検出
する方法が開示されている。この検定では、第一の工程
は、Ｃｕ+ +・クレアチニンキレート錯体の形成を含む。
被酸化性染料は、そこからＣｕ+ +・クレアチニン錯体へ
の電子の移動によって酸化されて、非反応性Ｃｕ+・ク
レアチニン形態を提供し、この形態が、ヒドロペルオキ
シドへの電子の損失によってＣｕ+ +・クレアチニンに再
生される。この検定は、ヘモグロビンの非存在ではうま
く作用するが、ヘモグロビンの存在では、ヘモグロビン
が染料を酸化させ、それによって偽陽性を生じさせる傾
向により、その精度が影響を受ける。ヘモグロビンは、
体液、たとえば尿の中に頻繁に見られるため、その干渉
を封じることにより、より精密な検定を提供する必要が
ある。
【０００２】同時係属中の米国特許出願第０８／９９
０，３８９号には、流体試料を、アポペルオキシダー
ゼ、酸化還元染料、ヒドロペルオキシド、及び、少なく
とも約１８０キロダルトンの合計分子量を有する分析対
象物／分析対象物特異的結合相手に結合した遷移金属ポ
ルフィリンキレートを含む試薬系と合わせる工程を含
む、流体試料中の分析対象物の検定が開示されている。
この複合体が流体試料中の分析対象物と相互作用する
と、特異的結合相手の一部が複合体から解離し、それに
より、金属ポルフィリンをアポペルオキシダーゼとで再
構成させ、その再構成したペルオキシダーゼがヒドロペ
ルオキシド及び酸化還元染料と相互作用して、流体試料
中の分析対象物に対応する色応答を発することができ
る。このタイプの検定はまた、ヒドロペルオキシドの存
在における酸化還元染料の酸化のため、流体試料中のヘ
モグロビンの存在によって悪影響を受ける。
０，３８９号には、流体試料を、アポペルオキシダー
ゼ、酸化還元染料、ヒドロペルオキシド、及び、少なく
とも約１８０キロダルトンの合計分子量を有する分析対
象物／分析対象物特異的結合相手に結合した遷移金属ポ
ルフィリンキレートを含む試薬系と合わせる工程を含
む、流体試料中の分析対象物の検定が開示されている。
この複合体が流体試料中の分析対象物と相互作用する
と、特異的結合相手の一部が複合体から解離し、それに
より、金属ポルフィリンをアポペルオキシダーゼとで再
構成させ、その再構成したペルオキシダーゼがヒドロペ
ルオキシド及び酸化還元染料と相互作用して、流体試料
中の分析対象物に対応する色応答を発することができ
る。このタイプの検定はまた、ヒドロペルオキシドの存
在における酸化還元染料の酸化のため、流体試料中のヘ
モグロビンの存在によって悪影響を受ける。
【０００３】他の検定に使用される金属キレートは、第
二鉄イオン／クレアチニン、遷移金属／２，２′−ジピ
リジル、遷移金属／ジエチレンポリアミノポリ酢酸、た
とえばＥＧＴＡ、ＨＥＤＴＡ及びＮＴＡ、遷移金属／オ
キシム、遷移金属／フェニアントロリン、遷移金属／ト
ロカルバミド、遷移金属／トリエチレンテトラミンなら
びに遷移金属／カテコールを含む。過酸化水素を検出す
るための鉄キレート、特に鉄クレアチンの使用が、米国
特許第５，７０２，９５５号明細書に開示されている。
二鉄イオン／クレアチニン、遷移金属／２，２′−ジピ
リジル、遷移金属／ジエチレンポリアミノポリ酢酸、た
とえばＥＧＴＡ、ＨＥＤＴＡ及びＮＴＡ、遷移金属／オ
キシム、遷移金属／フェニアントロリン、遷移金属／ト
ロカルバミド、遷移金属／トリエチレンテトラミンなら
びに遷移金属／カテコールを含む。過酸化水素を検出す
るための鉄キレート、特に鉄クレアチンの使用が、米国
特許第５，７０２，９５５号明細書に開示されている。
【０００４】本発明は、流体試料中の分析対象物の濃度
に関連する、金属キレートの活性の検定に対する改良を
含む。検定は、分析対象物を含有する疑いのある流体試
料を、金属キレート又はその前駆体、ヒドロペルオキシ
ドならびに金属キレート及びヒドロペルオキシドの存在
で酸化して、金属キレートの存在を示す色応答を発する
ことができる酸化還元指示薬と合わせる工程を含む。改
良は、検定成分を、ヘモグロビンが酸化還元染料を酸化
させる能力を抑制し、かつ、金属キレートがそのような
酸化を生じさせる能力を実質的に抑制しないピラゾール
誘導体と合わせる工程を含む。
に関連する、金属キレートの活性の検定に対する改良を
含む。検定は、分析対象物を含有する疑いのある流体試
料を、金属キレート又はその前駆体、ヒドロペルオキシ
ドならびに金属キレート及びヒドロペルオキシドの存在
で酸化して、金属キレートの存在を示す色応答を発する
ことができる酸化還元指示薬と合わせる工程を含む。改
良は、検定成分を、ヘモグロビンが酸化還元染料を酸化
させる能力を抑制し、かつ、金属キレートがそのような
酸化を生じさせる能力を実質的に抑制しないピラゾール
誘導体と合わせる工程を含む。
【０００５】本発明は、流体試料中の金属キレートの活
性の測定試薬において、ヒドロペルオキシド；ヒドロペ
ルオキシドの存在で酸化されて、金属キレートの存在を
示す色応答を発することができる被酸化性指示薬；金属
キレートがそのような酸化を起こす能力を実質的に抑制
することなく、ヘモグロビンが染料を酸化させる能力を
抑制する、ピラゾール誘導体を含有する測定試薬に関す
る（１）。
性の測定試薬において、ヒドロペルオキシド；ヒドロペ
ルオキシドの存在で酸化されて、金属キレートの存在を
示す色応答を発することができる被酸化性指示薬；金属
キレートがそのような酸化を起こす能力を実質的に抑制
することなく、ヘモグロビンが染料を酸化させる能力を
抑制する、ピラゾール誘導体を含有する測定試薬に関す
る（１）。
【０００６】また、本発明は、ピラゾールが、式
【０００７】
【化３】
【０００８】（式中、Ｘは、ＣＯ2Ｈ、Ｈ又はＯＨであ
り、Ｙは、ＣＨ、ＣＨ2、Ｃ＝Ｏ、ＣＣＨ3、ＣＨ（ＣＨ
2ＣＨ2ＣＨ3）又はＣＨ（ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3）であ
り（場合により、Ｙ−Ｙ間に二重結合が存在する）、Ｚ
は、Ｈ又はＣ6Ｈ5或いは不存在である）で示される、測
定試薬（１）に関する（２）。
り、Ｙは、ＣＨ、ＣＨ2、Ｃ＝Ｏ、ＣＣＨ3、ＣＨ（ＣＨ
2ＣＨ2ＣＨ3）又はＣＨ（ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3）であ
り（場合により、Ｙ−Ｙ間に二重結合が存在する）、Ｚ
は、Ｈ又はＣ6Ｈ5或いは不存在である）で示される、測
定試薬（１）に関する（２）。
【０００９】更に、本発明は、ピラゾールが無色であ
る、測定試薬（１）に関する（３）。
る、測定試薬（１）に関する（３）。
【００１０】また、本発明は、金属キレートがクレアチ
ニンと第二銅イオンとの錯体である、測定試薬（１）に
関する（４）。
ニンと第二銅イオンとの錯体である、測定試薬（１）に
関する（４）。
【００１１】更に、本発明は、金属キレートが遷移金属
ポリフィリンである、測定試薬（１）に関する（５）。
ポリフィリンである、測定試薬（１）に関する（５）。
【００１２】また、本発明は、ピラゾールが、３−メチ
ル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン、４−
（３−メチル−５−オキソ−２−ピラゾリン−１−イ
ル）−安息香酸、フェンブタゾン又はオキシフェンブタ
ゾンである、測定試薬（１）に関する（６）。
ル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン、４−
（３−メチル−５−オキソ−２−ピラゾリン−１−イ
ル）−安息香酸、フェンブタゾン又はオキシフェンブタ
ゾンである、測定試薬（１）に関する（６）。
【００１３】更に、本発明は、被酸化性指示薬が、ベン
ジジン、ｏ−トリジン、３，３′，５，５′−テトラア
ルキルベンジジン（ここで、アルキル基は炭素原子１〜
約６個を含む）、ｏ−ジアニシジン、２，７−ジアミノ
フルオレン、ビス−（Ｎ−エチルキノール−２−オン）
−アジン、（Ｎ−メチルベンズチアゾール−２−オン）
−（１−エチル−３−フェニル−５−メチルトリアゾー
ル−２−オン）−アジン又はそれらの組み合わせであ
る、測定試薬（１）に関する（７）。
ジジン、ｏ−トリジン、３，３′，５，５′−テトラア
ルキルベンジジン（ここで、アルキル基は炭素原子１〜
約６個を含む）、ｏ−ジアニシジン、２，７−ジアミノ
フルオレン、ビス−（Ｎ−エチルキノール−２−オン）
−アジン、（Ｎ−メチルベンズチアゾール−２−オン）
−（１−エチル−３−フェニル−５−メチルトリアゾー
ル−２−オン）−アジン又はそれらの組み合わせであ
る、測定試薬（１）に関する（７）。
【００１４】また、本発明は、ヒドロペルオキシドが、
クメンヒドロペルオキシド、５−ブチルヒドロペルオキ
シド、ジイソプロピルベンゼンヒドロペルオキシド、１
−ヒドロキシシクロヘキサン−１−ヒドロペルオキシ
ド、２，５−ジメチルヘキサン−２，５−ジヒドロペル
オキシド、パラメンタンヒドロペルオキシド、１，４−
ジイソプロピルベンゼンモノヒドロペルオキシド、ｐ−
tert−ブチルイソプロピルベンゼンヒドロペルオキシ
ド、２−（α−ヒドロペルオキシイソプロピル）−６−
イソプロピルナフタレン、テトラリンヒドロペルオキシ
ド又はそれらの組み合わせである、測定試薬（１）に関
する（８）。
クメンヒドロペルオキシド、５−ブチルヒドロペルオキ
シド、ジイソプロピルベンゼンヒドロペルオキシド、１
−ヒドロキシシクロヘキサン−１−ヒドロペルオキシ
ド、２，５−ジメチルヘキサン−２，５−ジヒドロペル
オキシド、パラメンタンヒドロペルオキシド、１，４−
ジイソプロピルベンゼンモノヒドロペルオキシド、ｐ−
tert−ブチルイソプロピルベンゼンヒドロペルオキシ
ド、２−（α−ヒドロペルオキシイソプロピル）−６−
イソプロピルナフタレン、テトラリンヒドロペルオキシ
ド又はそれらの組み合わせである、測定試薬（１）に関
する（８）。
【００１５】更に、本発明は、試薬が吸収性支持体上で
乾燥形態にある、測定試薬（１）に関する（９）。
乾燥形態にある、測定試薬（１）に関する（９）。
【００１６】また、本発明は、流体試料が尿である、測
定試薬（１）に関する（１０）。
定試薬（１）に関する（１０）。
【００１７】更に、本発明は、ピラゾールの濃度が０．
５〜５mMである、測定試薬（１）に関する（１１）。
５〜５mMである、測定試薬（１）に関する（１１）。
【００１８】また、本発明は、ヒドロペルオキシド、Ｃ
ｕＳＯ4、シトレート、３，３′，５，５′−テトラメ
チルベンジジン及び３−メチル−１−フェニル−２−ピ
ラゾリン−５−オンを含有する、尿試料中クレアチニン
の測定試薬及びこれを乾燥形態で含有する吸収性支持体
を有する試験片に関する（１２）。更には、本発明は、
測定試薬（１）〜（１１）のいずれか一つが乾燥形態に
ある、吸収性支持体を有する試験片に関する（１
２′）。
ｕＳＯ4、シトレート、３，３′，５，５′−テトラメ
チルベンジジン及び３−メチル−１−フェニル−２−ピ
ラゾリン−５−オンを含有する、尿試料中クレアチニン
の測定試薬及びこれを乾燥形態で含有する吸収性支持体
を有する試験片に関する（１２）。更には、本発明は、
測定試薬（１）〜（１１）のいずれか一つが乾燥形態に
ある、吸収性支持体を有する試験片に関する（１
２′）。
【００１９】流体試料中のクレアチニン濃度の比色測定
のための新規な方法が米国特許第５，３７４，５６１号
明細書に開示されている。この方法は、クレアチニン／
遷移金属錯体のペルオキシダーゼ活性を利用する。この
検定では、クレアチニンによる遷移金属のキレート化
が、ヒドロペルオキシド、たとえばジイソプロピルベン
ゼンジヒドロペルオキシドによる被酸化性染料、たとえ
ばテトラメチルベンジジンの酸化を触媒し、それによ
り、色応答を発することができる錯体を作り出す。より
最近、この検定が、体液中に普通に見られるヘモグロビ
ンの反応によっていくぶん不正確になることが見いださ
れた。この問題は、この検定におけるヘモグロビン干渉
を防ぐピラゾール誘導体の群の発見を含む本発明によっ
て解消される。J. Ziegenhornらは、J. Clin. Chem. Cl
in. Biochem., 15:1977:13-9で、ピラゾール誘導体アミ
ノピリンが、特にフェノール及び過酸化物の存在におい
て、ペルオキシダーゼ活性の酸化還元指示薬になること
を報告している。この参考文献は、ヘモグロビンをフェ
ノールとともに過酸化物及びピラゾール誘導体によって
検出できることを開示しているが、過酸化物の存在にお
けるヘモグロビン干渉を防ぐためのピラゾール誘導体の
使用を取り上げてはいない。
のための新規な方法が米国特許第５，３７４，５６１号
明細書に開示されている。この方法は、クレアチニン／
遷移金属錯体のペルオキシダーゼ活性を利用する。この
検定では、クレアチニンによる遷移金属のキレート化
が、ヒドロペルオキシド、たとえばジイソプロピルベン
ゼンジヒドロペルオキシドによる被酸化性染料、たとえ
ばテトラメチルベンジジンの酸化を触媒し、それによ
り、色応答を発することができる錯体を作り出す。より
最近、この検定が、体液中に普通に見られるヘモグロビ
ンの反応によっていくぶん不正確になることが見いださ
れた。この問題は、この検定におけるヘモグロビン干渉
を防ぐピラゾール誘導体の群の発見を含む本発明によっ
て解消される。J. Ziegenhornらは、J. Clin. Chem. Cl
in. Biochem., 15:1977:13-9で、ピラゾール誘導体アミ
ノピリンが、特にフェノール及び過酸化物の存在におい
て、ペルオキシダーゼ活性の酸化還元指示薬になること
を報告している。この参考文献は、ヘモグロビンをフェ
ノールとともに過酸化物及びピラゾール誘導体によって
検出できることを開示しているが、過酸化物の存在にお
けるヘモグロビン干渉を防ぐためのピラゾール誘導体の
使用を取り上げてはいない。
【００２０】米国特許第４，３８５，１１４号明細書に
は、ヒドロペルオキシド及び酸化還元指示薬がヘモグロ
ビンのペルオキシダーゼ活性を検出する能力が開示され
ている。ヒドロペルオキシドとのヘモグロビンのこの反
応性こそが、本発明が、抑制し、それにより、検定にお
ける偽陽性の結果を避けるために設計されているもので
ある。
は、ヒドロペルオキシド及び酸化還元指示薬がヘモグロ
ビンのペルオキシダーゼ活性を検出する能力が開示され
ている。ヒドロペルオキシドとのヘモグロビンのこの反
応性こそが、本発明が、抑制し、それにより、検定にお
ける偽陽性の結果を避けるために設計されているもので
ある。
【００２１】ヘモグロビン掃去剤を、試料に直接添加す
るか、試薬に添加したのち試薬と試料を混合するかのい
ずれかによって試験流体に添加することによってヘモグ
ロビン干渉を防ぐため手法がいくつか開発された。濃度
は０．５〜１０mMであった。評価した方法を表１にまと
める。
るか、試薬に添加したのち試薬と試料を混合するかのい
ずれかによって試験流体に添加することによってヘモグ
ロビン干渉を防ぐため手法がいくつか開発された。濃度
は０．５〜１０mMであった。評価した方法を表１にまと
める。
【００２２】
【表１】
【００２３】これらの方法、すなわち、ヘモグロビン上
の鉄原子へのアニオン結合、ペルオキシダーゼの無色の
競合基質、銅に結合しない鉄キレート化剤及び強い酸化
剤によるヘモグロビンのヘマチンへの分解のうち、競合
基質、中でも比較的少ないピラゾール類の使用だけが、
クレアチニン検定に干渉することなく、ヘモグロビン耐
性を提供するのに効果的であることがわかった。試験し
たピラゾール類のうち、以下の化合物が所望の結果を提
供することがわかった。 ３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン ４−（３−メチル−５−オキソ−２−ピラゾリン−１−
イル）−安息香酸 フェンブタゾン オキシフェンブタゾン
の鉄原子へのアニオン結合、ペルオキシダーゼの無色の
競合基質、銅に結合しない鉄キレート化剤及び強い酸化
剤によるヘモグロビンのヘマチンへの分解のうち、競合
基質、中でも比較的少ないピラゾール類の使用だけが、
クレアチニン検定に干渉することなく、ヘモグロビン耐
性を提供するのに効果的であることがわかった。試験し
たピラゾール類のうち、以下の化合物が所望の結果を提
供することがわかった。 ３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン ４−（３−メチル−５−オキソ−２−ピラゾリン−１−
イル）−安息香酸 フェンブタゾン オキシフェンブタゾン
【００２４】これらの化合物の構造に基づき、本発明の
利点を提供するのに効果的であるピラゾール類は、ピラ
ゾール環の窒素原子（カルボニル基に直接結合してい
る）に結合したフェニル基を有していなければならない
と判断することができる。われわれの実験に基づくと、
効果的なピラゾール類は、環外アミン、すなわち、環の
一部ではないが、環を形成するか、環につながっている
原子に結合しているアミンを有しないはずである。
利点を提供するのに効果的であるピラゾール類は、ピラ
ゾール環の窒素原子（カルボニル基に直接結合してい
る）に結合したフェニル基を有していなければならない
と判断することができる。われわれの実験に基づくと、
効果的なピラゾール類は、環外アミン、すなわち、環の
一部ではないが、環を形成するか、環につながっている
原子に結合しているアミンを有しないはずである。
【００２５】したがって、式
【００２６】
【化４】
【００２７】（式中、Ｘは、ＣＯ2Ｈ、Ｈ又はＯＨであ
り、Ｙは、ＣＨ、ＣＨ2、Ｃ＝Ｏ、ＣＣＨ3、ＣＨ（ＣＨ
2ＣＨ2ＣＨ3）又はＣＨ（ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3）であ
り（場合により、Ｙ−Ｙ間に二重結合が存在する）、Ｚ
は、Ｈ又はＣ6Ｈ5或いは不存在である）に対応するピラ
ゾール類が、本発明における使用に適当である。
り、Ｙは、ＣＨ、ＣＨ2、Ｃ＝Ｏ、ＣＣＨ3、ＣＨ（ＣＨ
2ＣＨ2ＣＨ3）又はＣＨ（ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3）であ
り（場合により、Ｙ−Ｙ間に二重結合が存在する）、Ｚ
は、Ｈ又はＣ6Ｈ5或いは不存在である）に対応するピラ
ゾール類が、本発明における使用に適当である。
【００２８】銅+ 2検定では、第二銅イオンの供給源は、
そのアニオンがクレアチニンの比色検出の反応に有害に
作用しないならば、いかなる可溶性の銅塩であってもよ
い。適当な塩は、銅の硫酸塩、硝酸塩、酸化物、水酸化
物、リン酸塩、ヨウ化物、塩化物、臭化物、酢酸塩又は
シュウ酸塩を含む。Ｃｕ（II）・クレアチニン錯体を形
成を許すならば、他の可溶性の第二銅塩を使用すること
もできる。アニオンが銅に強く結合しすぎる塩は、銅
（II）・クレアチニン錯体を形成させないであろう。し
たがって、Ｃｕ（II）錯体、たとえば第二銅イオンと、
ＥＤＴＡ、ＨＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ及びＤＴＰＡとの間で
形成される錯体は、Ｃｕ（II）・クレアチニン錯体の形
成に十分なＣｕ（II）を放出しないであろう。クエン酸
塩及び硫酸塩が最も低いブランク反応性を有し、したが
って、これらが好ましいことが見いだされた。第二銅ク
エン酸塩が、最小のブランク反応性及び最大のＣｕ（I
I）・クレアチニン錯体の形成を示すため、特に好まし
い。クレアチニンの非存在で染料を酸化させる塩は、そ
れほど望ましくない。第二銅２，２′−ビピリジンのよ
うな塩は、クレアチニンの非存在でＴＭＢの有意な酸化
を生じさせるおそれがあり、したがって、本発明に使用
するのには不適当である。クエン酸銅を第二銅イオン源
として使用するとき、クエン酸イオンの濃度は、少なく
とも銅の濃度にあるべきである。クエン酸塩によるＣｕ
（II）の完全な錯化を保証するためには、銅イオンの少
なくとも２倍のクエン酸イオンが好ましい。
そのアニオンがクレアチニンの比色検出の反応に有害に
作用しないならば、いかなる可溶性の銅塩であってもよ
い。適当な塩は、銅の硫酸塩、硝酸塩、酸化物、水酸化
物、リン酸塩、ヨウ化物、塩化物、臭化物、酢酸塩又は
シュウ酸塩を含む。Ｃｕ（II）・クレアチニン錯体を形
成を許すならば、他の可溶性の第二銅塩を使用すること
もできる。アニオンが銅に強く結合しすぎる塩は、銅
（II）・クレアチニン錯体を形成させないであろう。し
たがって、Ｃｕ（II）錯体、たとえば第二銅イオンと、
ＥＤＴＡ、ＨＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ及びＤＴＰＡとの間で
形成される錯体は、Ｃｕ（II）・クレアチニン錯体の形
成に十分なＣｕ（II）を放出しないであろう。クエン酸
塩及び硫酸塩が最も低いブランク反応性を有し、したが
って、これらが好ましいことが見いだされた。第二銅ク
エン酸塩が、最小のブランク反応性及び最大のＣｕ（I
I）・クレアチニン錯体の形成を示すため、特に好まし
い。クレアチニンの非存在で染料を酸化させる塩は、そ
れほど望ましくない。第二銅２，２′−ビピリジンのよ
うな塩は、クレアチニンの非存在でＴＭＢの有意な酸化
を生じさせるおそれがあり、したがって、本発明に使用
するのには不適当である。クエン酸銅を第二銅イオン源
として使用するとき、クエン酸イオンの濃度は、少なく
とも銅の濃度にあるべきである。クエン酸塩によるＣｕ
（II）の完全な錯化を保証するためには、銅イオンの少
なくとも２倍のクエン酸イオンが好ましい。
【００２９】通常、尿が試験される水性流体であると
き、尿中クレアチニンの基準範囲が３〜２０mMであるた
め、第二銅イオンの濃度は５〜３０mMであろう。この範
囲は、他の流体、たとえば、好ましくは０．０５〜０．
３０mMの範囲の第二銅イオンの濃度を用いるであろう血
清では異なる。第一銅イオンは、クレアチニンの非存在
における染料の酸化により、いくらかバックグラウンド
干渉を生じさせる傾向にある。したがって、Ｃｕ（Ｉ）
塩は使用することができない。
き、尿中クレアチニンの基準範囲が３〜２０mMであるた
め、第二銅イオンの濃度は５〜３０mMであろう。この範
囲は、他の流体、たとえば、好ましくは０．０５〜０．
３０mMの範囲の第二銅イオンの濃度を用いるであろう血
清では異なる。第一銅イオンは、クレアチニンの非存在
における染料の酸化により、いくらかバックグラウンド
干渉を生じさせる傾向にある。したがって、Ｃｕ（Ｉ）
塩は使用することができない。
【００３０】適当な酸化性指示薬は、たとえば、ベンジ
ジン、ｏ−トリジン、３，３′，５，５′−テトラアル
キルベンジジン（アルキル基が炭素原子１〜約６個を含
む）、ｏ−ジアニシジン、２，７−ジアミノフルオレ
ン、ビス−（Ｎ−エチルキノル−２−オン）−アジン、
（Ｎ−メチル−ベンズチアゾール−２−オン）−（１−
エチル−３−フェニル−５−メチルトリアゾール−２−
オン）−アジン又はそれらの組み合わせを含む。
ジン、ｏ−トリジン、３，３′，５，５′−テトラアル
キルベンジジン（アルキル基が炭素原子１〜約６個を含
む）、ｏ−ジアニシジン、２，７−ジアミノフルオレ
ン、ビス−（Ｎ−エチルキノル−２−オン）−アジン、
（Ｎ−メチル−ベンズチアゾール−２−オン）−（１−
エチル−３−フェニル−５−メチルトリアゾール−２−
オン）−アジン又はそれらの組み合わせを含む。
【００３１】本発明に使用するのに適したヒドロペルオ
キシドは、クメンヒドロペルオキシド、５−ブチルヒド
ロペルオキシド、ジイソプロピルベンゼンヒドロペルオ
キシド、１−ヒドロキシシクロヘキサン−１−ヒドロペ
ルオキシド、２，５−ジメチルヘキサン−２，５−ジヒ
ドロペルオキシド、パラメンタンヒドロペルオキシド、
１，４−ジイソプロピルベンゼンモノヒドロペルオキシ
ド、ｐ−tert−ブチルイソプロピルベンゼンヒドロペル
オキシド、２−（α−ヒドロペルオキシイソプロピル）
−６−イソプロピルナフタレン、テトラリンヒドロペル
オキシド又はそれらの組み合わせを含む。
キシドは、クメンヒドロペルオキシド、５−ブチルヒド
ロペルオキシド、ジイソプロピルベンゼンヒドロペルオ
キシド、１−ヒドロキシシクロヘキサン−１−ヒドロペ
ルオキシド、２，５−ジメチルヘキサン−２，５−ジヒ
ドロペルオキシド、パラメンタンヒドロペルオキシド、
１，４−ジイソプロピルベンゼンモノヒドロペルオキシ
ド、ｐ−tert−ブチルイソプロピルベンゼンヒドロペル
オキシド、２−（α−ヒドロペルオキシイソプロピル）
−６−イソプロピルナフタレン、テトラリンヒドロペル
オキシド又はそれらの組み合わせを含む。
【００３２】通常、可溶性銅塩、ヒドロペルオキシド及
び被酸化性指示薬を含む試薬系は、水に溶解させる。し
かし、検定機構を妨害しないならば、有機溶媒を系に組
み込むこともできる。ヒドロペルオキシド及び被酸化性
指示薬の濃度は、通常１０〜１５０mMの範囲であり、６
０〜１００mMの範囲が好ましい。
び被酸化性指示薬を含む試薬系は、水に溶解させる。し
かし、検定機構を妨害しないならば、有機溶媒を系に組
み込むこともできる。ヒドロペルオキシド及び被酸化性
指示薬の濃度は、通常１０〜１５０mMの範囲であり、６
０〜１００mMの範囲が好ましい。
【００３３】本発明の実施において、検定は、湿式フォ
ーマット又は乾式フォーマット（試験片）のいずれかで
実施することができる。検定を実施する際には、試料
を、緩衝したpH、好ましくは４．０〜９．０で、試薬試
験片又は試薬のアセトニトリル水溶液の使用により、銅
塩、たとえばクエン酸第二銅、染料及びヒドロペルオキ
シドと混合する。試薬試験片は、吸収性支持体を第二銅
塩及び緩衝剤の水溶液に浸漬し、支持体を乾燥させ、そ
れを染料及びヒドロペルオキシドの有機溶液に浸漬した
のち乾燥させる従来の方法で調製される。
ーマット又は乾式フォーマット（試験片）のいずれかで
実施することができる。検定を実施する際には、試料
を、緩衝したpH、好ましくは４．０〜９．０で、試薬試
験片又は試薬のアセトニトリル水溶液の使用により、銅
塩、たとえばクエン酸第二銅、染料及びヒドロペルオキ
シドと混合する。試薬試験片は、吸収性支持体を第二銅
塩及び緩衝剤の水溶液に浸漬し、支持体を乾燥させ、そ
れを染料及びヒドロペルオキシドの有機溶液に浸漬した
のち乾燥させる従来の方法で調製される。
【００３４】
【実施例】以下の例によって本発明をさらに説明する。
【００３５】例Ｉ Whatman ３mmろ紙の試験片を第一の浸漬溶液に浸漬し、
１００℃で６〜８分間乾燥させたのち、第二の浸漬溶液
に浸漬し、乾燥させる二浸漬法により、クレアチニン検
出のための試験片を調製した。第一及び第二の浸漬溶液
は、以下のように構成されていた。
１００℃で６〜８分間乾燥させたのち、第二の浸漬溶液
に浸漬し、乾燥させる二浸漬法により、クレアチニン検
出のための試験片を調製した。第一及び第二の浸漬溶液
は、以下のように構成されていた。
【００３６】
【表２】
【００３７】この試験片を、配合物のヘモグロビン耐性
を増すその能力に関し、目視分析及び計器分析によって
試験した。５０mg/dlクレアチニン尿基準を１mg/dlヘモ
グロビンでスパイクした。CLINITEK 50及びCLINITEK 10
0反射分光計を使用し、５０、１００、２００及び３０
０mg/dlクレアチニンを含有する尿基準に対してクレア
チニンカラーチャートを目視的に使用して、ヘモグロビ
ンの５０mg/dl基準を計器的に比較した。室温貯蔵し、
ストレスを加えた（６０℃で１週間）試験片を評価し
た。試験片は、クレアチニン５０mg/dl及びヘモグロビ
ン１０mg/dlを含有する尿試料の場合に５０mg/dlの結果
を出すことがわかった。これは、クレアチニン５０mg/d
l及びヘモグロビン１mg/dlを含有する尿に関して３００
mg/dlの結果を出した、ピラゾールを欠く同じクレアチ
ニン試薬とは対照的であった。この実験の目的は二つあ
った。第一に、クレアチニン５０mg/dl及びヘモグロビ
ン１mg/dlを含有する試料を使用して得られる結果が、
クレアチニン５０mg/dl及びヘモグロビンなしの場合の
結果と同じになる検定を提供し、第二に、５０mg/dlク
レアチニンレベルで１０mg/dlまでのヘモグロビン（す
なわち、≦１００mg/dlクレアチニン）の反応性におけ
る１レベルを超えない増大を達成することである。
を増すその能力に関し、目視分析及び計器分析によって
試験した。５０mg/dlクレアチニン尿基準を１mg/dlヘモ
グロビンでスパイクした。CLINITEK 50及びCLINITEK 10
0反射分光計を使用し、５０、１００、２００及び３０
０mg/dlクレアチニンを含有する尿基準に対してクレア
チニンカラーチャートを目視的に使用して、ヘモグロビ
ンの５０mg/dl基準を計器的に比較した。室温貯蔵し、
ストレスを加えた（６０℃で１週間）試験片を評価し
た。試験片は、クレアチニン５０mg/dl及びヘモグロビ
ン１０mg/dlを含有する尿試料の場合に５０mg/dlの結果
を出すことがわかった。これは、クレアチニン５０mg/d
l及びヘモグロビン１mg/dlを含有する尿に関して３００
mg/dlの結果を出した、ピラゾールを欠く同じクレアチ
ニン試薬とは対照的であった。この実験の目的は二つあ
った。第一に、クレアチニン５０mg/dl及びヘモグロビ
ン１mg/dlを含有する試料を使用して得られる結果が、
クレアチニン５０mg/dl及びヘモグロビンなしの場合の
結果と同じになる検定を提供し、第二に、５０mg/dlク
レアチニンレベルで１０mg/dlまでのヘモグロビン（す
なわち、≦１００mg/dlクレアチニン）の反応性におけ
る１レベルを超えない増大を達成することである。
【００３８】例II 例Ｉに記載した方法と同様にして、他のピラゾール化合
物を、ヘモグロビンがＴＭＢ指示薬を酸化させる傾向に
対して耐性を提供するそれらの能力に関して選別した。
試験片を調製するために使用した第二の浸漬におけるピ
ラゾール濃度は通常、０．５mM〜５mMであった。これら
の実験の結果を表２にまとめる。
物を、ヘモグロビンがＴＭＢ指示薬を酸化させる傾向に
対して耐性を提供するそれらの能力に関して選別した。
試験片を調製するために使用した第二の浸漬におけるピ
ラゾール濃度は通常、０．５mM〜５mMであった。これら
の実験の結果を表２にまとめる。
【００３９】
【表３】
【００４０】表２のデータから、フェンブタゾン及びオ
キシフェンブタゾンが、いずれも、２個の芳香族基を、
カルボニル基に隣接する２個の環窒素に結合させること
ができることを実証すると判断することができる。３−
メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン及び
４−（３−メチル−５−オキソ−２−ピラゾリン−１−
イル）−安息香酸を用いた結果は、いずれも、所望のヘ
モグロビン耐性を達成するためには、カルボニル基１個
及び芳香族基１個を環窒素に結合させるだけでよいこと
を示す。
キシフェンブタゾンが、いずれも、２個の芳香族基を、
カルボニル基に隣接する２個の環窒素に結合させること
ができることを実証すると判断することができる。３−
メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン及び
４−（３−メチル−５−オキソ−２−ピラゾリン−１−
イル）−安息香酸を用いた結果は、いずれも、所望のヘ
モグロビン耐性を達成するためには、カルボニル基１個
及び芳香族基１個を環窒素に結合させるだけでよいこと
を示す。
【００４１】アンチピレン及びフェニドンを用いた結果
は、所望の結果を達成するためには、芳香族基をカルボ
ニルの隣にある窒素に結合しなければならないことを実
証し、５−アミノ−１−フェニル−４−ピラゾールカル
ボキサミド及び３−メチル−１−フェニルピラゾールの
活性は、窒素に隣接するカルボキシルが必要であること
を示し、３−アミノ−１−フェニル−２−ピラゾリン−
５−オンの失敗は、アミン置換基がヘモグロビン干渉の
減少にとって有害であることを示す。最後に、１−（４
−ニトロフェニル）−３−ピロリジノ−２−ピラゾリン
−５−オンを使用した結果は、ニトロ置換基又は芳香環
上の電子求引基の存在が、ピラゾールをヘモグロビン干
渉の減少にとって非効果的にすることを実証する。
は、所望の結果を達成するためには、芳香族基をカルボ
ニルの隣にある窒素に結合しなければならないことを実
証し、５−アミノ−１−フェニル−４−ピラゾールカル
ボキサミド及び３−メチル−１−フェニルピラゾールの
活性は、窒素に隣接するカルボキシルが必要であること
を示し、３−アミノ−１−フェニル−２−ピラゾリン−
５−オンの失敗は、アミン置換基がヘモグロビン干渉の
減少にとって有害であることを示す。最後に、１−（４
−ニトロフェニル）−３−ピロリジノ−２−ピラゾリン
−５−オンを使用した結果は、ニトロ置換基又は芳香環
上の電子求引基の存在が、ピラゾールをヘモグロビン干
渉の減少にとって非効果的にすることを実証する。
フロントページの続き (72)発明者 マイケル・ジェー・プジア アメリカ合衆国、インデイアナ州、46530、 グレンジャー、タッディントン・ドライブ 14342
Claims (16)
- 【請求項１】 金属キレート又はその前駆体を、ヒドロ
ペルオキシドならびに金属キレート及びヒドロペルオキ
シドの存在で酸化されて、金属キレートの存在を示す色
応答を発することができる被酸化性指示薬と合わせる工
程を含む、流体試料中の金属キレートの活性の検定法に
おいて、 金属キレートがそのような酸化を起こす能力を実質的に
抑制することなく、ヘモグロビンが染料を酸化させる能
力を抑制する、ピラゾール誘導体を試験系に含めること
を特徴とする検定法。 - 【請求項２】 ピラゾールが、式 【化１】 （式中、Ｘは、ＣＯ2Ｈ、Ｈ又はＯＨであり、Ｙは、Ｃ
Ｈ、ＣＨ2、Ｃ＝Ｏ、ＣＣＨ3又はＣＨ（ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ
2ＣＨ3）であり（場合により、Ｙ−Ｙ間に二重結合が存
在する）、Ｚは、Ｈ又はＣ6Ｈ5或いは不存在である）で
示される、請求項１記載の検定法。 - 【請求項３】 ピラゾールが無色である、請求項１記載
の検定法。 - 【請求項４】 金属キレートがクレアチニンと第二銅イ
オンとの錯体である、請求項１記載の検定法。 - 【請求項５】 金属キレートが遷移金属ポリフィリンで
ある、請求項１記載の検定法。 - 【請求項６】 ピラゾールが、３−メチル−１−フェニ
ル−２−ピラゾリン−５−オン、４−（３−メチル−５
−オキソ−２−ピラゾリン−１−イル）−安息香酸、フ
ェンブタゾン又はオキシフェンブタゾンである、請求項
１記載の検定法。 - 【請求項７】 被酸化性指示薬が、ベンジジン、ｏ−ト
リジン、３，３′，５，５′−テトラアルキルベンジジ
ン（ここで、アルキル基は炭素原子１〜約６個を含
む）、ｏ−ジアニシジン、２，７−ジアミノフルオレ
ン、ビス−（Ｎ−エチルキノール−２−オン）−アジ
ン、（Ｎ−メチルベンズチアゾール−２−オン）−（１
−エチル−３−フェニル−５−メチルトリアゾール−２
−オン）−アジン又はそれらの組み合わせである、請求
項１記載の検定法。 - 【請求項８】 ヒドロペルオキシドが、クメンヒドロペ
ルオキシド、５−ブチルヒドロペルオキシド、ジイソプ
ロピルベンゼンヒドロペルオキシド、１−ヒドロキシシ
クロヘキサン−１−ヒドロペルオキシド、２，５−ジメ
チルヘキサン−２，５−ジヒドロペルオキシド、パラメ
ンタンヒドロペルオキシド、１，４−ジイソプロピルベ
ンゼンモノヒドロペルオキシド、ｐ−tert−ブチルイソ
プロピルベンゼンヒドロペルオキシド、２−（α−ヒド
ロペルオキシイソプロピル）−６−イソプロピルナフタ
レン、テトラリンヒドロペルオキシド又はそれらの組み
合わせである、請求項１記載の検定法。 - 【請求項９】 試薬が吸収性支持体上で乾燥形態にあ
る、請求項１記載の検定法。 - 【請求項１０】 流体試料が尿である、請求項１記載の
検定法。 - 【請求項１１】 ピラゾールの濃度が０．５〜５mMであ
る、請求項１記載の検定法。 - 【請求項１２】 尿を、第二銅イオン、ヒドロペルオキ
シドならびに酸素フリーラジカル及びヒドロペルオキシ
ドの存在で色応答を発する被酸化性染料と、ヘモグロビ
ンが染料を酸化させる能力を抑制し、かつ、他の検定成
分がそのような酸化を生じさせる能力を実質的に抑制し
ないピラゾール誘導体とともに合わせる工程を含むこと
を特徴とする、尿中クレアチニンの検定法。 - 【請求項１３】 ピラゾール誘導体が、式 【化２】 （式中、Ｘは、ＣＯ2Ｈ、Ｈ又はＯＨであり、Ｙは、Ｃ
Ｈ、ＣＨ2、Ｃ＝Ｏ、ＣＣＨ3又はＣＨ（ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ
2ＣＨ3）であり（場合により、Ｙ−Ｙ間に二重結合が存
在する）、Ｚは、Ｈ又はＣ6Ｈ5或いは不存在である）で
示される、請求項１２記載の検定法。 - 【請求項１４】 ピラゾール誘導体が、３−メチル−１
−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン、４−（３−メ
チル−５−オキソ−２−ピラゾリン−１−イル）−安息
香酸、フェンブタゾン又はオキシフェンブタゾンであ
る、請求項１２記載の検定法。 - 【請求項１５】 ピラゾール誘導体の濃度が０．５〜５
mMである、請求項１２記載の検定法。 - 【請求項１６】 尿試料を、ヒドロペルオキシド、Ｃｕ
ＳＯ4、シトレート、３，３′，５，５′−テトラメチ
ルベンジジン及び３−メチル−１−フェニル−２−ピラ
ゾリン−５−オンと合わせて変色を生じさせる工程と、
変色の大きさを測定して尿試料中のクレアチンの濃度を
決定する工程とを含むことを特徴とする、尿試料中クレ
アチニンの測定法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US09/128009 | 1998-08-03 | ||
| US09/128,009 US6074881A (en) | 1998-08-03 | 1998-08-03 | Method for the prevention of hemoglobin interference in reagent systems for measuring peroxidase activity |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000050896A true JP2000050896A (ja) | 2000-02-22 |
Family
ID=22433145
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11218444A Pending JP2000050896A (ja) | 1998-08-03 | 1999-08-02 | ペルオキシダ―ゼ活性を測定するための試薬系におけるヘモグロビン干渉を阻止する方法 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6074881A (ja) |
| EP (1) | EP0978568B1 (ja) |
| JP (1) | JP2000050896A (ja) |
| AT (1) | ATE284604T1 (ja) |
| AU (1) | AU752729B2 (ja) |
| CA (1) | CA2269163C (ja) |
| DE (1) | DE69920599T2 (ja) |
| DK (1) | DK0978568T3 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6872573B2 (en) * | 2003-01-02 | 2005-03-29 | Bayer Corporation | Fluorescent creatinine assay |
| CN102680702B (zh) * | 2012-04-28 | 2014-12-17 | 广州鸿琪光学仪器科技有限公司 | 一种快速定量检测c-反应蛋白的免疫荧光试纸条组件、及其制成的检测卡组件和制备方法 |
| CN102680704B (zh) * | 2012-04-28 | 2015-02-11 | 广州鸿琪光学仪器科技有限公司 | 一种快速定量检测微量白蛋白的免疫荧光试纸条组件及其制成的检测卡组件和制备方法 |
| CN102680703B (zh) * | 2012-04-28 | 2014-12-17 | 广州鸿琪光学仪器科技有限公司 | 一种快速定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件及其制成的检测卡组件和制备方法 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1767931C3 (de) * | 1967-10-26 | 1973-09-27 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Diagnostisches Mittel und Verfahren zum Nachweis von Urobilinogen-Körpern |
| US4069016A (en) * | 1977-01-14 | 1978-01-17 | Eastman Kodak Company | Assay for bilirubin |
| DE2936745A1 (de) * | 1979-09-12 | 1981-04-16 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Diagnostisches mittel zum nachweis von bilirubin in koerperfluessigkeiten und dafuer geeignetes reagenz |
| IT1130252B (it) * | 1980-02-04 | 1986-06-11 | Elvi Spa | Metodo per l'eliminazione dell'interferenza da biliribuna nel dosaggio di perossido di idrigeno mediante una reazione di trinder modificata |
| US4562043A (en) * | 1983-09-09 | 1985-12-31 | Mennen Frederick C | Self-contained swab cartridge apparatus for detecting occult blood |
| US5183741A (en) * | 1983-10-13 | 1993-02-02 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Integral multilayer element for glucose analysis |
| US4637978A (en) * | 1983-10-28 | 1987-01-20 | Eastman Kodak Company | Assay for analysis of whole blood |
| EP0281000B1 (en) * | 1987-02-27 | 1991-10-16 | Konica Corporation | Multi-layer analytical element for creatinine analysis |
| AU640162B2 (en) * | 1989-08-28 | 1993-08-19 | Lifescan, Inc. | Blood separation and analyte detection techniques |
| US5242832A (en) * | 1990-03-01 | 1993-09-07 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Reagent for measurement of leukocytes and hemoglobin in blood |
| US5374561A (en) * | 1993-10-25 | 1994-12-20 | Miles Inc. | Oxidative creatinine assay |
| ES2184795T3 (es) * | 1994-03-11 | 2003-04-16 | Abbott Lab | Reactivo sin cianuro y procedimiento de dosificado de hemoglobina. |
| US5702955A (en) * | 1995-05-22 | 1997-12-30 | Bayer Corporation | Ascorbate resistant detection of hydrogen peroxide |
| CA2249778A1 (en) * | 1997-12-15 | 1999-06-15 | Bayer Corporation | Competitive apo-peroxidase assay |
-
1998
- 1998-08-03 US US09/128,009 patent/US6074881A/en not_active Expired - Fee Related
-
1999
- 1999-04-16 CA CA002269163A patent/CA2269163C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-07-21 EP EP99114166A patent/EP0978568B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-07-21 DK DK99114166T patent/DK0978568T3/da active
- 1999-07-21 AT AT99114166T patent/ATE284604T1/de not_active IP Right Cessation
- 1999-07-21 DE DE69920599T patent/DE69920599T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1999-07-30 AU AU42389/99A patent/AU752729B2/en not_active Ceased
- 1999-08-02 JP JP11218444A patent/JP2000050896A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0978568A3 (en) | 2000-03-15 |
| CA2269163A1 (en) | 2000-02-03 |
| DE69920599T2 (de) | 2006-02-02 |
| DK0978568T3 (da) | 2004-12-20 |
| ATE284604T1 (de) | 2004-10-15 |
| US6074881A (en) | 2000-06-13 |
| EP0978568B1 (en) | 2004-09-29 |
| AU752729B2 (en) | 2002-09-26 |
| CA2269163C (en) | 2004-10-05 |
| DE69920599D1 (de) | 2004-11-04 |
| AU4238999A (en) | 2000-02-24 |
| EP0978568A2 (en) | 2000-02-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0123115B1 (en) | Ascorbate interference-resistant composition, device and method for the determination of peroxidatively active substances | |
| JP2928649B2 (ja) | 過酸化活性物質の検定のための組成物、用具及び方法 | |
| JP3537507B2 (ja) | クレアチニンの検出方法及び検出具 | |
| JPH05184392A (ja) | 所定の被分析物について検定するための、アスコルビン酸塩干渉耐性組成物、試験具及び方法 | |
| JP4017704B2 (ja) | クレアチニンを検出する方法 | |
| JP3644756B2 (ja) | アスコルビン酸の影響を受けない、過酸化水素の検出方法 | |
| JP3154837B2 (ja) | 銅酸化によるタンパク質の分析試験方法 | |
| JP3263051B2 (ja) | 改善されたクレアチニン検出方法 | |
| JP3442022B2 (ja) | 改良されたクレアチニン検出検査 | |
| JP2000050896A (ja) | ペルオキシダ―ゼ活性を測定するための試薬系におけるヘモグロビン干渉を阻止する方法 | |
| EP0504663A1 (en) | Peroxidase indicator system for basic media | |
| JPH05505243A (ja) | 血清鉄アッセイに関する試薬及び方法 | |
| US6872573B2 (en) | Fluorescent creatinine assay | |
| JPH0599928A (ja) | 尿中銅イオン検出用試薬組成物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20040304 |