JP2000007697A - 低分子ペプチドの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 低重合のペプチドは血圧降下作用、抗酸化作
用、脂質代謝促進作用、免疫力増強作用、血中コレステ
ロール低下作用、アルコール吸収阻害作用、鉄及びカル
シウム吸収促進作用等の生理機能が見出されており、
又、アレルゲン性が低下することが知られており、これ
らの機能特性が食品分野、化粧品分野、医薬品分野など
で素材として注目されており、安価で塩を含まない低分
子ペプチドを提供することを目的としている。 【解決手段】 低分子ペプチドの製造においてアミノ酸
スコアが良好な、動植物蛋白質を低級アルコールおよび
／または低級カルボン酸存在下で加水分解して、平均ア
ミノ酸鎖長３以下の低分子ペプチドで、塩が存在せず
に、工程中に脱塩工程のいらない、平均アミノ酸鎖長３
以下の低分子ペプチドを製造する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、動植物蛋白質を原
料として、加水分解して得られ、塩を含まない平均アミ
ノ酸鎖長３以下の低分子ペプチドで、アミノ酸スコアが
良好であり、食品、調味料、飼料、肥料、栄養剤、化粧
品、医薬品等あらゆる分野に、アミノ酸源として利用可
能な低分子ペプチドの製造方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】従来、ペプチドはペプチド結合により繋
がったアミノ酸の重合体の総称であり、狭義には、重合
度１００以上のものを蛋白質、これらより重合度の低い
ものをペプチドと分類している。ペプチドは重合度の高
い蛋白質を蛋白分解酵素若しくは酸分解等による加水分
解で得られ、原料蛋白質の供給源としては植物由来、動
物由来の蛋白質が用いられる。植物由来の蛋白質として
は、大豆、小麦、トウモロコシ等があり、動物由来で
は、魚肉、畜肉、牛乳、鶏卵等がある。

【０００３】蛋白質を分解する方法は強酸もしくは強ア
ルカリで加熱分解した後、中和して塩が生成されて作る
方法や、カビ等の微生物や蛋白質分解酵素によって、腐
敗を防ぐために食塩を加えて分解する方法。さらに、化
学的合成法により単一のペプチドを合成する方法などが
ある。

【０００４】これらの従来技術のうち、酸またはアルカ
リで加水分解する方法は発癌性の高い塩素化合物が生じ
ることが知られており、また、必須アミノ酸の一部が酸
またはアルカリに分解されることが知られている。さら
に、最終的には酸またはアルカリを中和する必要があ
り、塩を含んだペプチドとならざるを得ないために、ペ
プチド単体にするためには脱塩工程が必須となる。

【０００５】次に、カビ等の微生物や蛋白質分解酵素に
よる蛋白質の分解では、分解に有害となる腐敗菌の増殖
を抑える目的で食塩を加えるため、食塩を含んだペプチ
ドが得られる。この様な塩を含む蛋白質は、酵素分解が
進行しにくく低分子化に限界があり、平均アミノ酸鎖長
３以下に調整することは至難である。また、食塩が混入
しているため醤油や調味液としての用途以外には利用範
囲が狭くなる。脱塩技術によって食塩を除くことは可能
であるが１００％除くことは非常に困難であり、また脱
塩中にペプチドが損失したり、有用なミネラル成分も消
失する。また、脱塩により価格が高価になったりして、
産業上利用できない場合が多く見られる。さらに、食塩
の添加無しに分解することも可能であるが、有害な腐敗
菌の影響を抑える目的で短時間の加水分解や高温域、も
しくは低温域の加水分解となるため、ペプチドの低分子
化が出来ないのが実情である。さらに化学的合成法は単
一のペプチドを得るには良い方法であるが、アミノ酸ス
コアや必須アミノ酸のバランスを考えた場合は栄養的に
劣るものとなる。また、その他従来技術では、特開昭４
８−６８７７３号において卵白にエタノールやその他多
価アルコール（２価以上のＯＨ基を持つアルコール）を
０．０２〜１．０Ｍの少量を加えて分解する技術が開示
されているが、苦みのない卵白ペプチドの製造方法であ
り、そのペプチドは加熱凝固性を有するほど大きなもの
であり、最も有用となる低分子ペプチドまでは至ってい
ない技術である。

【０００６】産業上、ペプチドの動植物に関する生理機
能の研究が進み、ペプチドに血圧降下作用、抗酸化作
用、脂質代謝促進作用、免疫力増強作用、血中コレステ
ロール低下作用、アルコール吸収阻害作用、鉄およびカ
ルシウム吸収促進作用等の生理機能が見出されており、
また、蛋白質のアレルゲン性は低分子化することで低下
することが知られている。ペプチドの有するこれらの機
能特性は食品分野、化粧品分野、医薬品分野などで素材
として注目されており、安価で塩を含まない低分子ペプ
チドが得られれば産業上非常に有益なものとなる。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】このような従来技術の
背景において、本発明の目的はアミノ酸スコアが良好
な、動植物蛋白質を加水分解して、平均アミノ酸鎖長３
以下のペプチドで、塩が存在せずに、工程中に脱塩工程
を含まない、平均アミノ酸鎖長３以下の低分子ペプチド
の製造方法を確立するものである。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者は、上記課題の
解決に鋭意工夫を重ねた結果、動植物蛋白に低級アルコ
ールおよび／または低級カルボン酸存在下で蛋白分解酵
素により加水分解すると、平均アミノ酸鎖長３以下のペ
プチドが製造できるという知見に至り本発明を完成し
た。

【０００９】すなわち、本発明のペプチドの製造法は、
従来の加水分解によるペプチドの製造方法では平均アミ
ノ酸鎖長３以下の低分子ペプチドを得ることが困難であ
ったものを低級アルコールおよび／または低級カルボン
酸存在下で動植物蛋白を加水分解することにより、効率
良く蛋白質が分解され、容易に平均アミノ酸分子３以下
の低分子ペプチドを得ることを可能とするものである。
さらに、本発明の低分子ペプチドは、製造工程中、食塩
の添加あるいは中和による塩の生成がないため、ペプチ
ド生成後の脱塩工程が不要であり、産業上有用な低分子
ペプチドの製造方法である。

【００１０】ここで、アミノ酸鎖長については、既知の
種々の方法により測定可能であり、Ｎａ₂ ＳＯ₃ −ＴＮ
ＢＳ法やＨＰＬＣ法等により測定するものであり、一例
としてＮａ₂ ＳＯ₃ −ＴＮＢＳ法によるアミノ酸鎖長の
測定は、通常下記の方法により行われる。

【００１１】＜原理＞Ｎａ₂ ＳＯ₃ −ＴＮＢＳ法は蛋白
質のＴＮＰ化に基づいたアミノ基の定量方法で、ＴＮＢ
Ｓ（２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸ナトリ
ウム塩−２Ｈ₂ Ｏ）がアミノ基を持つ化合物と混合し、
適度のアルカリ性にすると反応が始まり、橙色を呈する
ときの吸光度（４２０ｎｍ）を測定するものである。平
均アミノ酸鎖長としては、ＴＮＢＳ法にて測定した値を
用い下式にて平均アミノ酸鎖長を算出するものである。

【００１２】＜方法＞試料（本測定法に測定可能な希釈
した試料）０．５ｍｌに呈色用緩衝液２．０ｍｌ、０．
０１Ｍ亜硫酸溶液０．５ｍｌ、ＴＮＢＳ溶液０．５ｍｌ
を加えて、３７℃×６０分反応させた後、吸光度 ４２
０ｎｍで測定する。

【００１３】＜試薬＞ＴＮＢＳ溶液：２，４，６−トリ
ニトロベンゼンスルホン酸ナトリウム塩−２Ｈ₂ Ｏ、１
００ｍｇをとり、１００ｍｌ の蒸留水に溶解する
（０．００２８４Ｍ）。尚、この試薬を０．５ｍｌを用
いた場合、１．４２μｍｏｌｅのＴＮＢＳが含まれてい
るので、０．５μｍｏｌｅ程度までのアミノ酸の定量に
は支障はない。 呈色用緩衝液：０．１５Ｍホウ酸ナトリウム緩衝液（ホ
ウ砂３．８１ｇを１００ｍｌの温水に溶かす）あるいは
４Ｍ−ホウ酸カリウム緩衝液（ホウ酸２４．７ｇに水酸
化カリウムを入れ、溶解しながらｐＨ９．２に調整を行
う、後に蒸留水で１００ｍｌとする）を使用する。

【００１４】また、遊離のアミノ酸の測定は公知の測定
方法であるフォルモール滴定により測定され、総アミノ
酸量についてはケルダール法により測定するものであ
る。以下本発明を詳述する。

【００１５】

【発明の実施の形態】本発明において使用される、動物
蛋白質としては特に限定するものではないが通常以下に
述べる蛋白質が用いられる。すなわち、鶏卵液、鶏卵粉
末を原料として有機溶剤抽出法もしくは超臨界抽出法に
て脂質部分を取り除いた鶏卵蛋白質であり、液体、粉末
体の形態は問わない。また、卵黄蛋白質、卵白蛋白質の
割合は任意の割合で使用可能である。

【００１６】本発明において使用される植物蛋白質と
は、特に限定するものではないが通常以下に述べる蛋白
質が用いられる。すなわち、搾油目的で絞り滓として残
った大豆滓、とうもろこし滓等の若干油が残った絞り滓
であり、また豆腐の残査であるおからや、有機溶剤抽出
法もしくは超臨界抽出法にて脂質部分を完全に取り除い
た植物蛋白質であり、一例を挙げれば、小麦蛋白質や大
豆蛋白質やその精製品のグルテン、グリアジン、グリテ
ニン、ツエイン等が単独あるいは混合物として使用可能
である。

【００１７】本発明の低級アルコールとは、メタノー
ル、エタノールなどの炭素数１〜１１個のアルコールで
あり、アルコール分子に含まれるヒドロキシル基（−Ｏ
Ｈ）の数が１個の一価アルコールであり、これらの精製
品や粗製品が利用でき、好ましくは炭素数１〜６個の低
級アルコールであり、さらに好ましくは炭素数１〜４個
の低級アルコールであるメタノール、エタノール、ブタ
ノール、プロパノールが好ましい。

【００１８】本発明の低級カルボン酸とは、ギ酸、酢
酸、プロピオン酸、酪酸等の炭素数が８個以下の水に可
溶なカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）を有する化合物であ
り、これらの精製品や粗製品が利用でき、好ましくは炭
素数１〜５個の低級カルボン酸であり、さらに好ましく
は炭素数１〜４個の低級カルボン酸であるギ酸、酢酸、
プロピオン酸、酪酸が好ましい。

【００１９】本発明の蛋白分解酵素とは、蛋白質を加水
分解するプロテアーゼ、ペプチダーゼの酵素であり、通
常Ｒｈｉｚｏｐｕｓ属、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属、Ｍ
ｕｃｏｒ属、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｅｓｃｈｅｒ
ｉｃｈｉａ属等の微生物由来、レンニン、パンクレアチ
ン等の動物由来、パパイン、ブロメライン、フィシン等
の植物に由来する酵素が用いられ、好ましくはＲｈｉｚ
ｏｐｕｓ属、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属、Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓ属由来の酵素が望ましく、その精製品や粗製品が単
独もしくは２種以上を併用して利用できる。

【００２０】蛋白分解酵素は至適ｐＨによってアルカリ
性、中性、酸性に大きく分けられ、さらに基質を分解す
る部位によりエンド型とエキソ型に分けられるが、本発
明ではこれら蛋白分解酵素の活性が最も発揮される条件
で使用すれば良い。これら蛋白分解酵素の使用量は、用
いる蛋白分解酵素の種類や組み合わせによって適宜決め
られるものであり、特に限定されるものではないが、通
常基質である蛋白質１ｇ当たりに対する蛋白分解酵素の
活性単位で表され、通常２５０〜７０００単位、好まし
くは１０００〜５０００単位、さらに好ましくは１００
０〜３０００単位の範囲から任意に選ばれるものであ
る。

【００２１】尚、上記活性単位の測定法として一例を挙
げれば、カゼインに蛋白分解酵素が作用するときにペプ
チド結合の切断に伴って増加する酸可溶性分解物（ＴＣ
Ａ可溶性分解物）の量を測定する方法があり、蛋白分解
酵素がカゼインに３０℃で作用するとき、反応初期の１
分間に１マイクログラム（μｇ）のチロシンに相当する
非蛋白性のフォリン試液呈色物質の増加をもたらす酵素
量を１単位とするものである。

【００２２】測定法の詳細は、カゼイン溶液（注１）５
ｍｌを正確に量り、試験管に入れ、３０±０．５℃で１
０分間加温した後、試料溶液（注２）１ｍｌを正確に量
って加え、直ちに振り混ぜ、３０±０．５℃で正確に１
０分間放置し、トリクロル酢酸溶液５ｍｌを加えてよく
振り混ぜ、再び３０±０．５℃で３０分間放置した後、
濾紙で濾過する。その濾液２ｍｌを正確に量り、炭酸ナ
トリウム溶液５ｍｌ及び薄めたフォリン試液１ｍｌを加
えてよく振り混ぜ、３０±０．５℃で３０分間放置した
後、この液について波長６６０ｎｍにおける吸光度Ａ_T
を測定する。別に試料溶液１ｍｌにトリクロル酢酸溶液
５ｍｌを加え、次に、カゼイン溶液５ｍｌを加えて振り
混ぜ、３０±０．５℃で３０分間放置し、以下同様の操
作にて吸光度Ａ_B 測定する。

【００２３】 Ｆ：吸光度差が１．０００に相当するチロシン量を検量
線より求めた値（μｇ） Ｗ：試料溶液１ｍｌ中の試料の量（ｇ）

【００２４】（注１） １）酸性プロテアーゼの場合：カゼイン１．２０ｇ（無
水物換算）を量り、０．０５Ｎ乳酸１００ｍｌを加えて
加温溶解し、０．５Ｎ水酸化ナトリウムを加えてｐＨ
３．０に調整し、Ｍｃｌｌｖａｉｎｅ緩衝液４０ｍｌ及
び水を加えて２００ｍｌとする。 ２）中性及びアルカリ性プロテアーゼの場合：カゼイン
１．２０ｇ（無水物換算）を量り、０．０５Ｎリン酸二
ナトリウム溶液１６０ｍｌを加えて加温溶解し、０．５
Ｎ塩酸を加えてｐＨ７．０に調整し、水を加えて２００
ｍｌとする。

【００２５】（注２） １）酸性プロテアーゼの場合：試料１．０００ｇを正確
に量り、水を加えて溶かし１００ｍｌとする。必要なら
ば遠心分離する。次いで蛋白分解力が２５〜４０単位／
ｍｌの範囲に入るように水を用いて希釈し、試料溶液と
する。 ２）中性及びアルカリ性プロテアーゼの場合：試料１．
０００ｇを正確に量り、酢酸カルシウム・塩化ナトリウ
ム混液を加えて溶かし、１００ｍｌとする。必要ならば
遠心分離する。次いで蛋白分解力が中性プロテアーゼの
場合は３０〜４０単位／ｍｌ、アルカリ性プロテアーゼ
の場合は１５〜２０単位／ｍｌの範囲に入るように酢酸
カルシウム・塩化ナトリウム混液を用いて希釈して試料
溶液とする。

【００２６】＜試薬・試液の調製＞ １）トリクロル酢酸溶液 酸性プロテアーゼの場合：トリクロル酢酸７１．７ｇに
水を加えて溶かし、１０００ｍｌとする。 中性及びアルカリ性プロテアーゼの場合：トリクロル酢
酸１８ｇ及び酢酸ナトリウム（無水）１８ｇに６Ｎ酢酸
５５ｍｌ及び水を加えて溶かし１０００ｍｌとする。 ２）炭酸ナトリウム（０．５５Ｍ） 炭酸ナトリウム（無水）５８．３ｇに水を加えて溶か
し、１０００ｍｌとする。 ３）フォリン試液 市販品のフェノール試薬１０ｍｌに水を加えて３０ｍｌ
とする。 ４）Ｍｃｌｌｖａｉｎｅ緩衝液 ０．２Ｍリン酸ナトリウム溶液に０．１Ｍクエン酸溶液
を加えてｐＨ３．０に調整する。 ０．２Ｍリン酸ナトリウム溶液：リン酸ナトリウム（１
２水塩）７１．６ｇを水に溶かし、１０００ｍｌとす
る。 ０．１Ｍクエン酸溶液：クエン酸２１．０ｇに水を加え
て溶かし、１０００ｍｌとする。 ５）酢酸カルシウム・塩化ナトリウム混液 酢酸カルシウム０．３５ｇ及び塩化ナトリウム０．５８
ｇを量り、水を加えて溶かした後、１Ｎ塩酸又は１Ｎ水
酸化ナトリウム溶液を加えてｐＨ６．０に調整し、水を
加えて１０００ｍｌとする。

【００２７】＜チロシン検量線の作成＞市販のチロシン
標準品を１０５℃で３時間乾燥し、その０．５００ｇを
正確に量り、０．２Ｎ塩酸を加えて溶かし、正確に５０
０ｍｌとする。この液１ｍｌ、２ｍｌ、３ｍｌ及び４ｍ
ｌを正確に量り、それぞれに０．２Ｎ塩酸を加えて正確
に１００ｍｌとする。それぞれの液２ｍｌ中にはチロシ
ンが２０μｇ、４０μｇ、６０μｇ及び８０μｇ含まれ
る。それぞれの液２ｍｌを正確に量り、炭酸ナトリウム
溶液５ｍｌ及び薄めたフォリン試液１ｍｌを加え、３０
±０．５℃で３０分間放置した後、この液につき６６０
ｎｍにおける吸光度Ａ１、Ａ２、Ａ３及びＡ４を測定す
る。別に０．２Ｎ塩酸２ｍｌを用いて同様に操作して吸
光度Ａ０を測定する。これより縦軸に吸光度差（Ａ１−
Ａ０、Ａ２−Ａ０、Ａ３−Ａ０及びＡ４−Ａ０）を、横
軸にそれぞれの液２ｍｌ中のチロシン量（μｇ）をとり
検量線とする。

【００２８】以上の操作より、吸光度差１．０００に対
するチロシン量（Ｆμｇ）を求めるものである。

【００２９】本発明においては、まず動植物蛋白質の混
合液を調整することから始まる。動植物蛋白質の純度に
もよるが、通常、粗蛋白値として１〜３０％、好ましく
は１〜２０％、更に好ましくは１〜１０％に調整後、低
級アルコールおよび／または低級カルボン酸を５〜３０
％、好ましくは５〜２０％、さらに好ましくは５〜１０
％加えるものである。

【００３０】この低級アルコールおよび／または低級カ
ルボン酸を動植物蛋白質の混合液に加えることにより、
後の加水分解が加速的に向上し、平均アミノ酸鎖長３以
下の低分子ペプチドが容易に得られるものである。尚、
低級アルコールおよび／または低級カルボン酸は単独で
も使用可能であるが、２種以上を併用して使用しても何
ら問題はなく、一例としてはエタノールと酢酸、ブタノ
ールと酪酸等任意に選ぶことが可能である。

【００３１】次に、低級アルコールおよび／または低級
カルボン酸を加えた動植物蛋白質の混合液に、さらに蛋
白分解酵素を加えて、加水分解するものである。蛋白分
解酵素の添加量としては前述の、通常基質である蛋白質
１ｇ当たりに対する蛋白分解酵素の活性単位で表され、
通常２５０〜７０００単位、好ましくは１０００〜５０
００単位、更に好ましくは１０００〜３０００単位の範
囲から任意に選ばれるものである。

【００３２】その他加水分解の条件として、温度は蛋白
分解酵素が働く温度域で有れば如何なる温度帯でも加水
分解可能であるが、本特許の平均アミノ酸鎖長３以下の
低分子ペプチドを得るためには、通常−５〜５０℃の範
囲で良く、好ましくは０〜４０℃、さらに好ましくは０
〜３０℃が良い。−５℃以下では完全に凍結してしまう
ために加水分解が出来なくなり、また、５０℃以上では
蛋白分解酵素の酵素活性が低下してしまい蛋白質の効率
的な分解が出来なくなるためである。次に、加水分解の
時間は、平均アミノ酸鎖長３以下の低分子ペプチドを得
るに足る時間だけ分解すれば良く、基質の蛋白質の量、
蛋白質分解酵素の量、加水分解の温度によって適宜決定
されるが、通常、加水分解の温度が−５〜１０℃であれ
ば１時間〜９０日、１０〜２０℃であれば１時間〜６０
日、２０〜３０℃であれば１時間〜３０日で十分であ
る。

【００３３】本発明は、低級アルコールおよび／または
低級カルボン酸を加えた動植物蛋白質の混合液に蛋白分
解酵素を加えて、加水分解することを特徴としており、
低級アルコールおよび／または低級カルボン酸を加える
ことにより如何なる理由で平均アミノ酸鎖長３以下の低
分子ペプチドが容易に得られるものであるかは定かでは
無いが、低級アルコールおよび／または低級カルボン酸
の存在下で加水分解した場合、基質の蛋白質のアミノ酸
結合部位に蛋白分解酵素が特異的に働くものである。低
級アルコールおよび／または低級カルボン酸を加えない
場合では、平均アミノ酸鎖長３以下の低分子ペプチドは
得られない。

【００３４】以上の工程で得られる低分子ペプチドは加
水分解工程中に食塩や中和による塩が加えられていない
ために、脱塩工程は必要なく、産業上、塩が存在してい
ないことは有益であり、この状態のペプチドで利用可能
であるが、さらに本特許では低級アルコールおよび／ま
たは低級カルボン酸を取り除くことにより、利用範囲を
広範囲なものとした。低級アルコールおよび／または低
級カルボン酸を取り除く方法としては、減圧濃縮、スプ
レードライ、フリーズドライ等によって容易に取り除く
ことが可能であり、一例として減圧濃縮の場合、水流式
の真空ポンプを使用しながら１０〜６０ｍｍＨｇの減圧
下で、６０〜７０℃程度に加熱することにより、容易に
取り除くことができる。

【００３５】かくして得られる本発明のペプチドは、モ
ノ・ジペプチド、トリペプチドの形態であり、アミノ酸
単体やジペプチドで有ればＡｓｐ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−Ｓ
ｅｒ、Ｓｅｒ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ等であり、トリ
ペプチドで有れば、Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ、Ｇｌｕ−
Ｌｅｕ−Ｓｅｒ等であり、そのままで食品分野、化粧品
分野、医薬品分野などで素材として利用可能であるが、
必要に応じて、他のペプチド、または調味や栄養価、保
存性を向上させる目的で核酸系調味料、化学調味料、旨
味調味料、味噌、醤油、塩、食塩、油脂等あらゆる素材
と混合することは何ら問題はなく、食品、調味料、飼
料、肥料、栄養剤、化粧品、医薬品等の分野に、アミノ
酸源として利用可能な低分子ペプチドである。以下実施
例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれ
によって限定されるものではない。

【００３６】

【実施例】実施例１ 脱脂卵黄粉末（蛋白質含有量８２％）０．８２７ｋｇと
小麦蛋白粉末（蛋白質含量８０％）１．６５ｋｇに水１
０．７２ｋｇを加えて混合液を調整し、さらに苛性ソー
ダ１３．２ｇを加えた後、エタノール２．６８ｋｇを混
合し、加水分解するために蛋白質分解酵素として細菌ア
ルカリプロテアーゼ（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉ
ｓ起源：活性単位２２００００単位／ｇ）を対蛋白質１
ｇ当たり６０００単位を混合して、これを８℃にて７０
日間加水分解を行った。その後８５℃で３０分間加熱し
て酵素を失活させ、低分子ペプチド液を得た。得られた
低分子ペプチド液をＮｏ．２濾紙（ＡＤＯＶＡＮＴＥＣ
ＴＯＹＯ製）を用いて濾過して、濾液７．２ｋｇを得
た。このもののペプチドを測定したところ、総アミノ酸
チッソ量（以下Ｔ．Ｎ）１．３８％、遊離アミノ酸チッ
ソ量（以下Ｆ．Ｎ）０．９３８％、平均アミノ酸鎖長
１．４６であり、その食塩含有量（モール法）は０％で
あった。

【００３７】比較例１ 一方、脱脂卵黄粉末（蛋白質含有量８２％）０．８２７
ｋｇと小麦蛋白粉末（蛋白質含量８０％）１．６５ｋｇ
に水１３．４ｋｇを加えて混合液を調整し、さらに苛性
ソーダ１３．２ｇを加えた。加水分解するために蛋白質
分解酵素として細菌アルカリプロテアーゼ（Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ起源：活性単位２２００００
単位／ｇ）を対蛋白質１ｇ当たり６０００単位を混合し
て、これを８℃にて７０日間加水分解を行った。その後
８５℃で３０分間加熱して酵素を失活させ、低分子ペプ
チド液を得た。得られた低分子ペプチド液をＮｏ．２濾
紙（ＡＤＯＶＡＮＴＥＣ ＴＯＹＯ製）を用いて濾過し
て、濾液７．２ｋｇを得た。このもののペプチドを測定
したところ、Ｔ．Ｎ１．３８％、Ｆ．Ｎ０．５８２％、
平均アミノ酸鎖長８．８８であり、その食塩含有量（モ
ール法）は０％であった。

【００３８】実施例１と比較例１の結果より、低級アル
コール存在下で加水分解を行うことにより、平均アミノ
酸鎖長３以下の優れた品質の低分子ペプチドが得られる
ことは明らかである。

【００３９】実施例２ おから（蛋白質含有量４．０％）３．３ｋｇと脱脂全卵
粉末（蛋白質含量８５．２％）２．６４ｋｇに水１０．
７２Ｋｇを加えて混合液を調整し、ブタノール２．６８
Ｋｇを加え、加水分解するために蛋白質分解酵素として
細菌中性プロテアーゼ（Ａｓｐｅｒｕｇｉｌｌｕｓ ｏ
ｒｙｚａｅ起源：活性単位３００００００単位／ｇ）を
対蛋白質１ｇ当たり４０００単位を混合して、これを１
５℃にて４０日間加水分解を行った。その後８５℃で３
０分間加熱して酵素を失活させ、低分子ペプチド液を得
た。得られた低分子ペプチド液をＮｏ．２濾紙（ＡＤＯ
ＶＡＮＴＥＣ ＴＯＹＯ製）を用いて濾過して、濾液
５．９ｋｇを得、このもののペプチドを測定したところ
Ｔ．Ｎ０．９２％、Ｆ．Ｎ０．６８６％、平均アミノ酸
鎖長１．３５であり、その食塩含有量（モール法）は０
％であった。さらに定法通り、凍結真空乾燥法でブタノ
ールと水を除去しペプチドを得た。

【００４０】比較例２ 一方、おから（蛋白質含有量４．０％）３．３ｋｇと脱
脂全卵粉末（蛋白質含量８５．２％）２．６４ｋｇに水
１３．４Ｋｇを加えて混合液を調整し、加水分解するた
めに蛋白質分解酵素として細菌中性プロテアーゼ（Ａｓ
ｐｅｒｕｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ起源：活性単位３
００００００単位／ｇ）を対蛋白質１ｇ当たり４０００
単位を混合して、これを１５℃にて４０日間加水分解を
行った。その後８５℃で３０分間加熱して酵素を失活さ
せ、低分子ペプチド液を得た。得られた低分子ペプチド
液をＮｏ．２濾紙（ＡＤＯＶＡＮＴＥＣ ＴＯＹＯ製）
を用いて濾過して、濾液５．９ｋｇを得、このもののペ
プチドを測定したところ、Ｔ．Ｎ０．９２％、Ｆ．Ｎ
０．３５４％、平均アミノ酸鎖長７．９６であり、その
食塩含有量（モール法）は０％であった。さらに定法通
り、凍結真空乾燥法で水を除去しペプチドを得た。

【００４１】実施例２と比較例２の結果より、低級アル
コール存在下で加水分解を行うことにより、平均アミノ
酸鎖長３以下の優れた品質の低分子ペプチドが得られる
ことが明らかである。

【００４２】実施例３ 小麦グルテン（蛋白質含有量７６．６％）０．８８５ｋ
ｇと脱脂大豆（蛋白質含量８２．０％）２．６４ｋｇに
水１０．７２ｋｇを加えて混合液を調整し、さらに低級
カルボン酸である酢酸（酸度２０）２．６８ｋｇを加
え、加水分解するために蛋白質分解酵素として細菌酸性
プロテアーゼ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ起
源：活性単位２２００００単位／ｇ）を対蛋白質１ｇ当
たり６０００単位を混合して、これを２５℃にて１０日
間加水分解を行った。その後８５℃で３０分間加熱して
酵素を失活させ、低分子ペプチド液を得た。得られた低
分子ペプチド液をＮｏ．２濾紙（ＡＤＯＶＡＮＴＥＣ
ＴＯＹＯ製）を用いて濾過して、濾液１０．０ｋｇを
得、このもののペプチドを測定したところ、Ｔ．Ｎ１．
５２％、Ｆ．Ｎ０．８９６％、平均アミノ酸鎖長１．３
３であり、その食塩含有量（モール法）は０％であっ
た。さらに定法通り、減圧濃縮法で酢酸と水を除去しペ
プチドを得た。

【００４３】比較例３ 一方、小麦グルテン（蛋白質含有量７６．６％）０．８
８５ｋｇと脱脂大豆（蛋白質含量８２．０％）２．６４
ｋｇに水１３．４ｋｇを加えて混合液を調整し、加水分
解するために蛋白質分解酵素として細菌酸性プロテアー
ゼ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ起源：活性単
位２２００００単位／ｇ）を対蛋白質１ｇ当たり６００
０単位を混合して、これを２５℃にて１０日間加水分解
を行った。その後８５℃で３０分間加熱して酵素を失活
させ、低分子ペプチド液を得た。得られた低分子ペプチ
ド液をＮｏ．２濾紙（ＡＤＯＶＡＮＴＥＣ ＴＯＹＯ
製）を用いて濾過して、濾液１０．０ｋｇを得、このも
ののペプチドを測定したところ、Ｔ．Ｎ１．５２％、
Ｆ．Ｎ０．７５４％、平均アミノ酸鎖長７．５３であ
り、その食塩含有量（モール法）は０％であった。さら
に定法通り、減圧濃縮法で酢酸と水を除去しペプチドを
得た。

【００４４】実施例３と比較例３の結果より、低級カル
ボン酸存在下で加水分解を行うことにより、平均アミノ
酸鎖長３以下の優れた品質の低分子ペプチドが得られる
ことが明らかである。上記で得られた本発明実施例１〜
３の低分子ペプチドについてアミノ酸分析をアミノ酸ア
ナライザー（日立製作所、８３５型高速アミノ酸分析
計）を用いて行った。得られた結果を、Ｔ．Ｎ１．０当
たりのアミノ酸量（ｍｇ／ｄｌ）にて、表１に示す。

【００４５】

【表１】

【００４６】本発明の実施態様を挙げれば、たとえば以
下のとおりである。 （１）動植物蛋白質を低級アルコールおよび／または低
級カルボン酸存在下で加水分解した、平均アミノ酸鎖長
３以下の低分子ペプチドの製造方法。 （２）ペプチドの製造過程で食塩が無添加もしくは、ま
たは中和による食塩が存在しない、脱塩工程のない前記
（１）記載の低分子ペプチドの製造方法。 （３）減圧濃縮又はスプレードライ、フリーズドライに
より低級アルコール、低級カルボン酸を除いた前記
（１）記載の低分子ペプチドの製造方法。 （４）前記（１）〜（３）いずれか記載のペプチドを含
む食品、調味料、飼料、肥料、栄養剤、化粧品、医薬
品。

【００４７】（５）動物蛋白質が、鶏卵液、鶏卵粉末を
原料として有機溶剤抽出法もしくは超臨界抽出法にて脂
質部分を取り除いた鶏卵蛋白質であり、液体、粉末体の
形態は問わず、卵黄蛋白質、卵白蛋白質の割合について
特に限定なしに、任意の割合で使用する前記（１）〜
（３）いずれか記載の低分子ペプチドの製造方法。 （６）植物蛋白質が、大豆滓、とうもろこし滓、おか
ら、有機溶剤抽出法もしくは超臨界抽出法にて脂質部分
を完全に取り除いた植物蛋白質、小麦蛋白質、大豆蛋白
質、グルテン、グリアジン、グリテニン、ツエイン等が
単独あるいは混合物として使用する前記（１）〜（３）
いずれか記載の低分子ペプチドの製造方法。 （７）低級アルコールが、メタノール、エタノールなど
の炭素数１〜１１個のアルコールで、アルコール分子の
含まれるヒドロキシル基（−ＯＨ）の数が１個の一価ア
ルコールであり、これらの精製品や粗製品を利用する前
記（１）〜（３）いずれか記載の低分子ペプチドの製造
方法。 （８）低級カルボン酸が、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、
酪酸等の炭素数が１〜８個の水に可溶なカルボキシル基
（−ＣＯＯＨ）であり、これらの精製品や粗製品を利用
する前記（１）〜（３）いずれか記載の低分子ペプチド
の製造方法。

【００４８】（９）蛋白分解酵素が、プロテアーゼ、ペ
プチダーゼの酵素で、通常Ｒｈｉｚｏｐｕｓ属、Ａｓｐ
ｅｒｇｉｌｌｕｓ属、Ｍｕｃｏｒ属、Ｂａｃｉｌｌｕｓ
属、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃ
ｃｕｓ属、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属等の微生物由来、
レンニン、パンクレアチン等の動物由来、パパイン、ブ
ロメライン、フィシン等の植物に由来する酵素であり、
好ましくはＲｈｉｚｏｐｕｓ属、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓ属、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属由来の酵素で、その精製品や
粗製品が単独もしくは２種以上を併用して利用する前記
（１）〜（３）いずれか記載のペプチドの製造方法。 （１０）粗蛋白値として１〜３０％、好ましくは１〜２
０％、更に好ましくは１〜１０％の混液に調整する前記
（１）〜（３）いずれか記載の低分子ペプチドの製造方
法。 （１１）低級アルコールおよび／または低級カルボン酸
を５〜３０％、好ましくは５〜２０％、さらに好ましく
は５〜１０％加える前記（１）〜（３）いずれか記載の
低分子ペプチドの製造方法。

【００４９】（１２）蛋白分解酵素の添加量が、通常基
質である蛋白質１ｇ当たりに対する蛋白分解酵素の活性
単位で、通常２５０〜７０００単位、好ましくは１００
０〜５０００単位、更に好ましくは１０００〜３０００
単位の範囲から任意に選ばれる前記（１）〜（３）いず
れか記載の低分子ペプチドの製造方法。 （１３）加水分解の温度が、通常−５〜５０℃の範囲で
良く、好ましくは０〜４０℃、さらに好ましくは０〜３
０℃である前記（１）〜（３）いずれか記載の低分子ペ
プチドの製造方法。（１４）加水分解時間が、加水分解
の温度が−５〜１０℃であれば１時間〜９０日、１０〜
２０℃であれば１時間〜６０日、２０〜３０℃であれば
１時間〜３０日で十分である前記（１）〜（３）いずれ
か記載の低分子ペプチドの製造方法。

【００５０】

【発明の効果】動植物蛋白質を原料として、加水分解し
て得られた、塩を含まない平均アミノ酸鎖長３以下のペ
プチドで、アミノ酸スコアが良好であり、食品、調味
料、飼料、肥料、栄養剤、化粧品、医薬品等あらゆる分
野に、アミノ酸源として広く利用可能な低分子ペプチド
を提供するするものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｋ 1/12 Ｃ０７Ｋ 1/14 1/14 5/08 5/08 Ａ６１Ｋ 35/12 // Ａ６１Ｋ 35/12 37/02 ＡＤＤ Ｆターム(参考） 4C083 AA072 AA112 AB032 AC061 AC102 AC231 AD411 AD412 AD472 FF01 4C084 AA06 CA41 MA01 4C087 AA01 AA03 BB61 MA01 4H045 AA20 AA30 BA11 BA12 CA32 CA33 CA40 EA01 EA05 EA07 EA15 EA20 FA16 4H061 AA01 BB01

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 動植物蛋白質を低級アルコールおよび／
   または低級カルボン酸存在下で加水分解した、平均アミ
   ノ酸鎖長３以下の低分子ペプチドの製造方法。
2. 【請求項２】 ペプチドの製造過程で食塩の添加工程、
   中和工程、または脱塩工程を有さないことを特徴とする
   請求項１記載の低分子ペプチドの製造方法。
3. 【請求項３】 減圧濃縮もしくはスプレードライまたは
   フリーズドライにより低級アルコール、低級カルボン酸
   を除くことを特徴とする請求項１記載の低分子ペプチド
   の製造方法。
4. 【請求項４】 請求項１〜３記載の低分子ペプチドを含
   む食品、調味料、飼料、肥料、栄養剤、化粧品、医薬
   品。