JP2000001542A - カルボキシル基含有ポリオキシアルキレン化合物 - Google Patents
カルボキシル基含有ポリオキシアルキレン化合物Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 化合物ないしは薬剤の抗原性の低減、安定
化、体内（血中）滞留時間の延長などの目的をもって、
化合物ないしは薬剤を修飾するために使用され、しかも
修飾された化合物ないしは薬剤は毒性が少なく、さらに
副生物の生成が少ないカルボキシル基含有ポリオキシア
ルキレン化合物を提供することである。 【解決手段】 式（１）で示されるカルボキシル基含有
ポリオキシアルキレン化合物。 【化１】 （ただし、Ｒ1は水素原子、炭素数１〜２４の炭化水素
基または炭素数１〜２４のアシル基、Ｒ2は炭素数３ま
たは４の炭化水素基、Ｒ3は炭素数１〜１０の炭化水素
基、ＡＯは炭素数３または４のオキシアルキレン基、Ｙ
は水素原子または活性基を示し、ｎはオキシアルキレン
基の平均付加モル数で１〜１０００であり、ｍは炭素数
３または４のオキシアルキレン基の平均付加モル数で０
〜２５０であり、ｎ／（ｎ＋ｍ）は０．８以上であり、
オキシエチレン基と炭素数３または４のオキシアルキレ
ン基の付加状態はブロック状でもランダム状でもよ
い。）
化、体内（血中）滞留時間の延長などの目的をもって、
化合物ないしは薬剤を修飾するために使用され、しかも
修飾された化合物ないしは薬剤は毒性が少なく、さらに
副生物の生成が少ないカルボキシル基含有ポリオキシア
ルキレン化合物を提供することである。 【解決手段】 式（１）で示されるカルボキシル基含有
ポリオキシアルキレン化合物。 【化１】 （ただし、Ｒ1は水素原子、炭素数１〜２４の炭化水素
基または炭素数１〜２４のアシル基、Ｒ2は炭素数３ま
たは４の炭化水素基、Ｒ3は炭素数１〜１０の炭化水素
基、ＡＯは炭素数３または４のオキシアルキレン基、Ｙ
は水素原子または活性基を示し、ｎはオキシアルキレン
基の平均付加モル数で１〜１０００であり、ｍは炭素数
３または４のオキシアルキレン基の平均付加モル数で０
〜２５０であり、ｎ／（ｎ＋ｍ）は０．８以上であり、
オキシエチレン基と炭素数３または４のオキシアルキレ
ン基の付加状態はブロック状でもランダム状でもよ
い。）
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はトリグリセリンの中
央にカルボキシル基または活性化されたカルボキシル基
を導入したポリオキシアルキレン化合物に関する。さら
に詳しくは、ポリペプチド、生理活性蛋白質、酵素など
へのポリオキシアルキレン修飾や、リポソーム、ポリマ
ーミセルなどの薬物送達システム（以下ドラッグデリバ
リーシステムという）におけるポリオキシアルキレン修
飾など、主として医薬用途でのポリオキシアルキレン修
飾に用いられる末端カルボキシル基を有するポリオキシ
アルキレン化合物に関する。
央にカルボキシル基または活性化されたカルボキシル基
を導入したポリオキシアルキレン化合物に関する。さら
に詳しくは、ポリペプチド、生理活性蛋白質、酵素など
へのポリオキシアルキレン修飾や、リポソーム、ポリマ
ーミセルなどの薬物送達システム（以下ドラッグデリバ
リーシステムという）におけるポリオキシアルキレン修
飾など、主として医薬用途でのポリオキシアルキレン修
飾に用いられる末端カルボキシル基を有するポリオキシ
アルキレン化合物に関する。
【０００２】
【従来の技術】これまでポリオキシアルキレングリコー
ルの末端水酸基をカルボキシル基に置換した化合物は、
たとえば特公昭６３−４８７７号公報には潤滑油とし
て、あるいは特開昭６３−１８２３４３号公報には合成
樹脂添加剤として記載されており、幅広く利用されてい
る。近年になり、ポリオキシアルキレン化合物は、ドラ
ッグデリバリーシステムの重要な担体として注目を集め
るようになり、ポリオキシアルキレン化合物にアミノ基
やカルボキシル基を導入した化合物についても研究が盛
んに行われるようになっている。なかでも、２本のポリ
オキシアルキレン鎖を持つ化合物として、特開平３−７
２４６９号公報に示されているトリアジン環を介した
２，４−ビス（Ｏ−メトキシポリエチレングリコール）
−６−クロロ−Ｓ−トリアジン（以下「活性化ＰＥＧ
２」という）が知られている。また、ポリオキシアルキ
レン基の側鎖に多数のカルボキシル基を持つポリオキシ
アルキレン化合物も知られている（特開平８−４８７６
３号公報）。
ルの末端水酸基をカルボキシル基に置換した化合物は、
たとえば特公昭６３−４８７７号公報には潤滑油とし
て、あるいは特開昭６３−１８２３４３号公報には合成
樹脂添加剤として記載されており、幅広く利用されてい
る。近年になり、ポリオキシアルキレン化合物は、ドラ
ッグデリバリーシステムの重要な担体として注目を集め
るようになり、ポリオキシアルキレン化合物にアミノ基
やカルボキシル基を導入した化合物についても研究が盛
んに行われるようになっている。なかでも、２本のポリ
オキシアルキレン鎖を持つ化合物として、特開平３−７
２４６９号公報に示されているトリアジン環を介した
２，４−ビス（Ｏ−メトキシポリエチレングリコール）
−６−クロロ−Ｓ−トリアジン（以下「活性化ＰＥＧ
２」という）が知られている。また、ポリオキシアルキ
レン基の側鎖に多数のカルボキシル基を持つポリオキシ
アルキレン化合物も知られている（特開平８−４８７６
３号公報）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】特に、ポリオキシアル
キレン化合物にて修飾した化合物ないしは薬剤（例え
ば、蛋白質、生理活性物質、ＤＮＡ等）、該修飾を利用
するドラッグデリバリーシステムにおいては、抗原性
（免疫反応性）の低減、化合物ないしは薬剤としての
安定性の増加、体内滞留時間の延長などの効果が得ら
れるとされている。ところが、これら従来のカルボキシ
ル基含有ポリオキシアルキレン化合物は、例えば一本鎖
の末端カルボキシル基含有ポリオキシアルキレン化合物
の場合、これを用いて対象物質を修飾すると、一本鎖で
あるが故に、ポリオキシアルキレンの持つ抗原性の低
減、対象物質の安定化などの性能が十分に発揮できない
ケースが多々ある。
キレン化合物にて修飾した化合物ないしは薬剤（例え
ば、蛋白質、生理活性物質、ＤＮＡ等）、該修飾を利用
するドラッグデリバリーシステムにおいては、抗原性
（免疫反応性）の低減、化合物ないしは薬剤としての
安定性の増加、体内滞留時間の延長などの効果が得ら
れるとされている。ところが、これら従来のカルボキシ
ル基含有ポリオキシアルキレン化合物は、例えば一本鎖
の末端カルボキシル基含有ポリオキシアルキレン化合物
の場合、これを用いて対象物質を修飾すると、一本鎖で
あるが故に、ポリオキシアルキレンの持つ抗原性の低
減、対象物質の安定化などの性能が十分に発揮できない
ケースが多々ある。
【０００４】また、前述した活性化ＰＥＧ２はトリアジ
ン環を持つため、医薬品として体内に投与した場合、毒
性が生じる可能性がある。さらに、ポリオキシアルキレ
ン骨格の側鎖に多数のカルボキシル基を持つものは、反
応点が多数あるため修飾反応を制御するのが難しく、単
一の化合物を得ることが困難である。
ン環を持つため、医薬品として体内に投与した場合、毒
性が生じる可能性がある。さらに、ポリオキシアルキレ
ン骨格の側鎖に多数のカルボキシル基を持つものは、反
応点が多数あるため修飾反応を制御するのが難しく、単
一の化合物を得ることが困難である。
【０００５】本発明の目的は、化合物ないしは薬剤の抗
原性の低減、安定化、体内（血中）滞留時間の延長など
の目的をもって、化合物ないしは薬剤を修飾するために
使用され、しかも修飾された化合物ないしは薬剤は毒性
が少なく、さらに副生物の生成が少ないカルボキシル基
含有ポリオキシアルキレン化合物を提供することであ
る。
原性の低減、安定化、体内（血中）滞留時間の延長など
の目的をもって、化合物ないしは薬剤を修飾するために
使用され、しかも修飾された化合物ないしは薬剤は毒性
が少なく、さらに副生物の生成が少ないカルボキシル基
含有ポリオキシアルキレン化合物を提供することであ
る。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記の課題
を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、トリグリセリンの
中央の水酸基にカルボキシル基およびＮ−ヒドロキシコ
ハク酸イミドまたはｐ−ニトロフェノールで活性化した
カルボキシル基を導入したポリオキシアルキレン化合物
が、上記した目的を達成できることを見出し、本発明に
到達した。すなわち本発明は、式（１）で示されるカル
ボキシル基含有ポリオキシアルキレン化合物である。
を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、トリグリセリンの
中央の水酸基にカルボキシル基およびＮ−ヒドロキシコ
ハク酸イミドまたはｐ−ニトロフェノールで活性化した
カルボキシル基を導入したポリオキシアルキレン化合物
が、上記した目的を達成できることを見出し、本発明に
到達した。すなわち本発明は、式（１）で示されるカル
ボキシル基含有ポリオキシアルキレン化合物である。
【０００７】
【化４】
【０００８】（式中、Ｒ1は水素原子、炭素数１〜２４
の炭化水素基または炭素数１〜２４のアシル基、Ｒ2は
炭素数３または４の炭化水素基、Ｒ3は炭素数１〜１０
の炭化水素基、ＡＯは炭素数３または４のオキシアルキ
レン基、Ｙは水素原子、式（２）あるいは式（３）で示
される活性基を示し、ｎはオキシエチレン基の平均付加
モル数で１〜１０００であり、ｍは炭素数３または４の
オキシアルキレン基の平均付加モル数で０〜２５０であ
り、ｎ／（ｎ＋ｍ）は０．８以上であり、オキシエチレ
ン基と炭素数３または４のオキシアルキレン基の付加状
態はブロック状でもランダム状でもよい。）
の炭化水素基または炭素数１〜２４のアシル基、Ｒ2は
炭素数３または４の炭化水素基、Ｒ3は炭素数１〜１０
の炭化水素基、ＡＯは炭素数３または４のオキシアルキ
レン基、Ｙは水素原子、式（２）あるいは式（３）で示
される活性基を示し、ｎはオキシエチレン基の平均付加
モル数で１〜１０００であり、ｍは炭素数３または４の
オキシアルキレン基の平均付加モル数で０〜２５０であ
り、ｎ／（ｎ＋ｍ）は０．８以上であり、オキシエチレ
ン基と炭素数３または４のオキシアルキレン基の付加状
態はブロック状でもランダム状でもよい。）
【０００９】
【化５】
【００１０】
【化６】
【００１１】
【発明の実施の形態】式（１）において、Ｒ1で示され
る炭素数１〜２４の炭化水素基としては、脂肪族炭化水
素基として、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプ
ロピル基、ブチル基、イソブチル基、第三ブチル基、ペ
ンチル基、イソペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、
イソヘプチル基、オクチル基、２−エチルヘキシル基、
ノニル基、イソノニル基、デシル基、ウンデシル基、ド
デシル基、トリデシル基、イソトリデシル基、テトラデ
シル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、イソヘキサ
デシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、イソオク
タデシル基、ノナデシル基、エイコシル基、オクチルド
デシル基、ヘンエイコシル基、ドコシル基、デシルテト
ラデシル基などの直鎖または分岐状のアルキル基、芳香
族炭化水素基として、ブチルフェニル基、ジブチルフェ
ニル基、オクチルフェニル基、ジノニルフェニル基およ
びα−メチルベンジルフェニル基などのアリール基、ベ
ンジル基などのアラルキル基、およびクレジル基などが
挙げられる。
る炭素数１〜２４の炭化水素基としては、脂肪族炭化水
素基として、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプ
ロピル基、ブチル基、イソブチル基、第三ブチル基、ペ
ンチル基、イソペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、
イソヘプチル基、オクチル基、２−エチルヘキシル基、
ノニル基、イソノニル基、デシル基、ウンデシル基、ド
デシル基、トリデシル基、イソトリデシル基、テトラデ
シル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、イソヘキサ
デシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、イソオク
タデシル基、ノナデシル基、エイコシル基、オクチルド
デシル基、ヘンエイコシル基、ドコシル基、デシルテト
ラデシル基などの直鎖または分岐状のアルキル基、芳香
族炭化水素基として、ブチルフェニル基、ジブチルフェ
ニル基、オクチルフェニル基、ジノニルフェニル基およ
びα−メチルベンジルフェニル基などのアリール基、ベ
ンジル基などのアラルキル基、およびクレジル基などが
挙げられる。
【００１２】また、炭素数１〜２４のアシル基として
は、酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、カプリル
酸、２−エチルヘキサン酸、イソノナン酸、カプリン
酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、イソパ
ルミチン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、オレイ
ン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキン酸、ベヘン
酸、パルミトレイン酸、安息香酸、ヒドロキシ安息香
酸、桂皮酸、没食子酸などに由来するアシル基が挙げら
れる。これらのなかでも、Ｒ1としては、水素原子およ
び炭素数１〜４の直鎖のアルキル基が好ましく、水素原
子およびメチル基が特に好ましい。なお、式（１）中に
はＲ1が４つ存在するが、これらは同一または異なって
いてもよい。
は、酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、カプリル
酸、２−エチルヘキサン酸、イソノナン酸、カプリン
酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、イソパ
ルミチン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、オレイ
ン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキン酸、ベヘン
酸、パルミトレイン酸、安息香酸、ヒドロキシ安息香
酸、桂皮酸、没食子酸などに由来するアシル基が挙げら
れる。これらのなかでも、Ｒ1としては、水素原子およ
び炭素数１〜４の直鎖のアルキル基が好ましく、水素原
子およびメチル基が特に好ましい。なお、式（１）中に
はＲ1が４つ存在するが、これらは同一または異なって
いてもよい。
【００１３】Ｒ2で示される炭素数３または４の炭化水
素基としては、重合性不飽和基をもつ炭化水素基に由来
する基、好ましくはアリル基、メタリル基など二重結合
をもつ炭化水素基に由来する基、トリメチレン基、ブチ
レン基等の直鎖または分岐状のアルキレン基などが挙げ
られる。
素基としては、重合性不飽和基をもつ炭化水素基に由来
する基、好ましくはアリル基、メタリル基など二重結合
をもつ炭化水素基に由来する基、トリメチレン基、ブチ
レン基等の直鎖または分岐状のアルキレン基などが挙げ
られる。
【００１４】Ｒ3で示される炭素数１〜１０の炭化水素
基としては、メチレン基、エチレン基、プロピレン基お
よびトリメチレン基などの直鎖または分岐状のアルキレ
ン基、フェニレン基および式（４）で示される２価の芳
香族炭化水素基が挙げられ、メチレン基およびエチレン
基が好ましい。
基としては、メチレン基、エチレン基、プロピレン基お
よびトリメチレン基などの直鎖または分岐状のアルキレ
ン基、フェニレン基および式（４）で示される２価の芳
香族炭化水素基が挙げられ、メチレン基およびエチレン
基が好ましい。
【００１５】
【化７】
【００１６】ＡＯで示される炭素数３または４のオキシ
アルキレン基のアルキレン部分は、直鎖または分岐状の
いずれでもよく、このようなオキシアルキレン基とし
て、たとえば、オキシプロピレン基、オキシトリメチレ
ン基、オキシブチレン基、オキシテトラメチレン基など
が挙げられる。
アルキレン基のアルキレン部分は、直鎖または分岐状の
いずれでもよく、このようなオキシアルキレン基とし
て、たとえば、オキシプロピレン基、オキシトリメチレ
ン基、オキシブチレン基、オキシテトラメチレン基など
が挙げられる。
【００１７】Ｙは水素原子、式（２）または式（３）で
示される活性基であるが、対象物質との反応性の点から
式（２）および式（３）で示される活性基が好ましい。
ｎはオキシエチレン基の平均付加モル数で１〜１０００
であり、ｍは炭素数３または４のオキシアルキレン基の
平均付加モル数で０〜２５０であり、ｎ／（ｎ＋ｍ）は
０．８以上、好ましくは０．９以上、より好ましくは
１．０以上である。オキシエチレン基と炭素数３または
４のオキシアルキレン基の付加状態はブロック状でもラ
ンダム状でもよい。
示される活性基であるが、対象物質との反応性の点から
式（２）および式（３）で示される活性基が好ましい。
ｎはオキシエチレン基の平均付加モル数で１〜１０００
であり、ｍは炭素数３または４のオキシアルキレン基の
平均付加モル数で０〜２５０であり、ｎ／（ｎ＋ｍ）は
０．８以上、好ましくは０．９以上、より好ましくは
１．０以上である。オキシエチレン基と炭素数３または
４のオキシアルキレン基の付加状態はブロック状でもラ
ンダム状でもよい。
【００１８】式（１）で示される本発明のカルボキシル
基含有ポリオキシアルキレン化合物は、例えば、以下の
ようにして製造することができる。まず、式（５）
基含有ポリオキシアルキレン化合物は、例えば、以下の
ようにして製造することができる。まず、式（５）
【００１９】
【化８】
【００２０】（式中、Ｒ2'は重合性不飽和基をもつ炭化
水素基、好ましくはアリル基あるいはメタリル基などの
炭素数３または４の二重結合含有アルキル基を示す。）
で示される化合物に、エチレンオキシド単独、あるいは
エチレンオキシドおよび炭素数３または４のアルキレン
オキシドとを付加させる。この際、式（５）で示される
化合物にエチレンオキシドを付加させた後、炭素数３ま
たは４のアルキレンオキシドを付加させてもよいし、エ
チレンオキシドと炭素数３または４のアルキレンオキシ
ドとを混合して一度に付加反応を行ってもよい。エチレ
ンオキシドと炭素数３または４のアルキレンオキシドの
付加モル数の比率は、修飾化時に修飾率が低下する恐れ
があるので、オキシエチレン基が８０％以上となるよう
にする。
水素基、好ましくはアリル基あるいはメタリル基などの
炭素数３または４の二重結合含有アルキル基を示す。）
で示される化合物に、エチレンオキシド単独、あるいは
エチレンオキシドおよび炭素数３または４のアルキレン
オキシドとを付加させる。この際、式（５）で示される
化合物にエチレンオキシドを付加させた後、炭素数３ま
たは４のアルキレンオキシドを付加させてもよいし、エ
チレンオキシドと炭素数３または４のアルキレンオキシ
ドとを混合して一度に付加反応を行ってもよい。エチレ
ンオキシドと炭素数３または４のアルキレンオキシドの
付加モル数の比率は、修飾化時に修飾率が低下する恐れ
があるので、オキシエチレン基が８０％以上となるよう
にする。
【００２１】具体的には、まず式（５）で示される化合
物を反応釜に仕込み、窒素置換を行い、１００〜１４０
℃でエチレンオキシド単独、あるいはエチレンオキシド
と炭素数３または４のアルキレンオキシドとの混合物で
あるアルキレンオキシドを圧入し、反応させる。反応終
了後、減圧下で未反応アルキレンオキシドを除去し、８
０℃に冷却し、リン酸、塩酸などの酸を加え中和し、脱
水および濾過を行い、式（６'）
物を反応釜に仕込み、窒素置換を行い、１００〜１４０
℃でエチレンオキシド単独、あるいはエチレンオキシド
と炭素数３または４のアルキレンオキシドとの混合物で
あるアルキレンオキシドを圧入し、反応させる。反応終
了後、減圧下で未反応アルキレンオキシドを除去し、８
０℃に冷却し、リン酸、塩酸などの酸を加え中和し、脱
水および濾過を行い、式（６'）
【００２２】
【化９】
【００２３】（式中の記号は前記と同義）で示される化
合物を得る。必要に応じて末端水酸基をアルキル化ある
いはアシル化するなど、炭化水素基の導入を行って、式
（６''）
合物を得る。必要に応じて末端水酸基をアルキル化ある
いはアシル化するなど、炭化水素基の導入を行って、式
（６''）
【００２４】
【化１０】
【００２５】（式中、Ｒ1'は炭素数１〜２４の炭化水素
基または炭素数１〜２４のアシル基を示し、その他の記
号は前記と同義）で示される化合物となる。例えば、ア
ルキル化反応は、Ｒ1で示される炭化水素基を有するア
ルキルハライド（ハロゲン化アルキル）、アルケニルハ
ライドなどのアルキル化剤を、化合物（６'）の水酸基
に対して１．１〜３．０倍モル加え、９０〜１２０℃で
２〜５時間反応を行い、水洗し、未反応物を除去し、中
和、脱水および濾過を行う。アシル化の反応は、Ｒ1で
示されるアシル基を有するハロゲン化アシルやカルボン
酸無水物などのアシル化剤を、式（６'）で示される化
合物の水酸基に対して１．１〜２．０倍モル加え、ｐ−
トルエンスルホン酸存在下、１１０〜１４０℃で９時
間、脱水縮合反応を行い、吸着剤処理し、脱水、濾過す
る。
基または炭素数１〜２４のアシル基を示し、その他の記
号は前記と同義）で示される化合物となる。例えば、ア
ルキル化反応は、Ｒ1で示される炭化水素基を有するア
ルキルハライド（ハロゲン化アルキル）、アルケニルハ
ライドなどのアルキル化剤を、化合物（６'）の水酸基
に対して１．１〜３．０倍モル加え、９０〜１２０℃で
２〜５時間反応を行い、水洗し、未反応物を除去し、中
和、脱水および濾過を行う。アシル化の反応は、Ｒ1で
示されるアシル基を有するハロゲン化アシルやカルボン
酸無水物などのアシル化剤を、式（６'）で示される化
合物の水酸基に対して１．１〜２．０倍モル加え、ｐ−
トルエンスルホン酸存在下、１１０〜１４０℃で９時
間、脱水縮合反応を行い、吸着剤処理し、脱水、濾過す
る。
【００２６】上記のハロゲン化物やカルボン酸無水物中
のＲ1が芳香族炭化水素基である化合物を用いた場合、
芳香族炭化水素基が導入される。この場合の反応条件も
上記したアルキル化およびアシル化に準じる。このよう
にして得た式（６）
のＲ1が芳香族炭化水素基である化合物を用いた場合、
芳香族炭化水素基が導入される。この場合の反応条件も
上記したアルキル化およびアシル化に準じる。このよう
にして得た式（６）
【００２７】
【化１１】
【００２８】（式中の各記号は前記と同義）で示される
化合物に、式（７） ＨＳ−Ｒ3−ＣＯＯＨ （７） （式中Ｒ3は前記と同義）で示される化合物を、式
（６）で示される化合物中のアリル基またはメタリル基
に対して１．５〜１０倍モル加え、例えばメタノール、
エタノールなどのアルコール中で３０〜４０℃で３〜７
時間反応させ、カルボキシル基の導入を行う。反応終了
後、アルコールを留去し、反応混合物をクロロホルムや
ジクロロメタンなどの溶媒に溶解し、その後水洗して未
反応の式（７）で示される化合物を除去する。ついで溶
媒を留去し、濾過し、式（１）で示される化合物（ただ
し、式中のＹは水素原子）を得る。
化合物に、式（７） ＨＳ−Ｒ3−ＣＯＯＨ （７） （式中Ｒ3は前記と同義）で示される化合物を、式
（６）で示される化合物中のアリル基またはメタリル基
に対して１．５〜１０倍モル加え、例えばメタノール、
エタノールなどのアルコール中で３０〜４０℃で３〜７
時間反応させ、カルボキシル基の導入を行う。反応終了
後、アルコールを留去し、反応混合物をクロロホルムや
ジクロロメタンなどの溶媒に溶解し、その後水洗して未
反応の式（７）で示される化合物を除去する。ついで溶
媒を留去し、濾過し、式（１）で示される化合物（ただ
し、式中のＹは水素原子）を得る。
【００２９】その後、例えばジメチルホルムアミド、ク
ロロホルム、トルエンなどの溶媒中、ジシクロヘキシル
カルボジイミド存在下で、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミ
ドまたはｐ−ニトロフェノールを３０〜４０℃で反応さ
せ、濾過後、イソプロピルアルコールやヘキサンで晶析
を行うことによって、カルボキシル基が活性化された式
（１）（ただし、式中のＹは式（２）または（３）で示
される活性基）の化合物となる。
ロロホルム、トルエンなどの溶媒中、ジシクロヘキシル
カルボジイミド存在下で、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミ
ドまたはｐ−ニトロフェノールを３０〜４０℃で反応さ
せ、濾過後、イソプロピルアルコールやヘキサンで晶析
を行うことによって、カルボキシル基が活性化された式
（１）（ただし、式中のＹは式（２）または（３）で示
される活性基）の化合物となる。
【００３０】本発明のカルボキシル基含有ポリオキシア
ルキレン化合物は、例えば（１）抗腫瘍蛋白質であるア
スパラギナーゼ、アルギナーゼなどに対する修飾、
（２）代謝異常酵素であるアデノシンデアミナーゼ、イ
ンスリン、ウリカーゼなどに対する修飾、（３）抗原蛋
白質である免疫グロブリン、血清アルブミンなどに対す
る修飾、（４）抗炎症酵素であるカタラーゼ、スーパー
オキシドジスムターゼなどに対する修飾、（５）血液成
分蛋白質であるアルブミン、顆粒球コロニー刺激因子な
どに対する修飾に使用することが考えられる。
ルキレン化合物は、例えば（１）抗腫瘍蛋白質であるア
スパラギナーゼ、アルギナーゼなどに対する修飾、
（２）代謝異常酵素であるアデノシンデアミナーゼ、イ
ンスリン、ウリカーゼなどに対する修飾、（３）抗原蛋
白質である免疫グロブリン、血清アルブミンなどに対す
る修飾、（４）抗炎症酵素であるカタラーゼ、スーパー
オキシドジスムターゼなどに対する修飾、（５）血液成
分蛋白質であるアルブミン、顆粒球コロニー刺激因子な
どに対する修飾に使用することが考えられる。
【００３１】また、ドラッグデリバリーシステムへの利
用としては、制癌剤であるアドリアマイシン、シスプラ
チンなどを内包するリポソームの基材であるリン脂質へ
の化学修飾などが考えられる。いずれも、ポリオキシア
ルキレン基で修飾されることにより、免疫原性の向上、
薬物の安定化、血中滞留時間の延長などの効果が期待さ
れる。
用としては、制癌剤であるアドリアマイシン、シスプラ
チンなどを内包するリポソームの基材であるリン脂質へ
の化学修飾などが考えられる。いずれも、ポリオキシア
ルキレン基で修飾されることにより、免疫原性の向上、
薬物の安定化、血中滞留時間の延長などの効果が期待さ
れる。
【００３２】
【実施例】以下、本発明を実施例により更に詳細に説明
する。 製造例１ トリグリセリルモノアリルエーテル１４０ｇ（０．５モ
ル）と水酸化カリウム１ｇを５リットル容オートクレー
ブに仕込み、系内を窒素ガスに置換した後、１２０℃に
昇温した。次いでエチレンオキシド２３６０ｇ（５４モ
ル）を圧入後、１３０±５℃で１時間反応を行った。次
いで、窒素ガスを通じながら減圧下（２００ｍｍＨｇ、
０．５時間）で未反応のエチレンオキシドを除去し、８
０℃まで冷却した。その後、１０重量％塩酸水溶液でｐ
Ｈを７．０に調整し、１００±５℃で１００ｍｍＨｇ、
１時間脱水を行った。次いで反応混合物を８０℃に冷却
し、析出した塩を濾別して化合物２４１０ｇを得た。得
られた化合物の水酸基価は、４５．２（計算値は４４．
９）、不飽和度は０．１９（計算値は０．２）であっ
た。なお、水酸基価は、ＪＩＳ Ｋ−１５５７ ６．４
（１９７０）の方法に準じて、不飽和度は、ＪＩＳ Ｋ
−１５５７ ６．７（１９７０）の方法に準じて測定し
た。化合物の赤外線吸収スペクトルを図１に示す。1Ｈ
−ＮＭＲスペクトルの結果を以下に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（δ（ｐｐｍ），ＣＤＣｌ／ＴＭＳ） δ＝５．２ｐｐｍ （Ｃ＝ＣＨ2 ） δ＝５．９ｐｐｍ （−ＣＨ＝） 出発原料、反応条件及び上記の分析値より、得られた化
合物は式（８）
する。 製造例１ トリグリセリルモノアリルエーテル１４０ｇ（０．５モ
ル）と水酸化カリウム１ｇを５リットル容オートクレー
ブに仕込み、系内を窒素ガスに置換した後、１２０℃に
昇温した。次いでエチレンオキシド２３６０ｇ（５４モ
ル）を圧入後、１３０±５℃で１時間反応を行った。次
いで、窒素ガスを通じながら減圧下（２００ｍｍＨｇ、
０．５時間）で未反応のエチレンオキシドを除去し、８
０℃まで冷却した。その後、１０重量％塩酸水溶液でｐ
Ｈを７．０に調整し、１００±５℃で１００ｍｍＨｇ、
１時間脱水を行った。次いで反応混合物を８０℃に冷却
し、析出した塩を濾別して化合物２４１０ｇを得た。得
られた化合物の水酸基価は、４５．２（計算値は４４．
９）、不飽和度は０．１９（計算値は０．２）であっ
た。なお、水酸基価は、ＪＩＳ Ｋ−１５５７ ６．４
（１９７０）の方法に準じて、不飽和度は、ＪＩＳ Ｋ
−１５５７ ６．７（１９７０）の方法に準じて測定し
た。化合物の赤外線吸収スペクトルを図１に示す。1Ｈ
−ＮＭＲスペクトルの結果を以下に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（δ（ｐｐｍ），ＣＤＣｌ／ＴＭＳ） δ＝５．２ｐｐｍ （Ｃ＝ＣＨ2 ） δ＝５．９ｐｐｍ （−ＣＨ＝） 出発原料、反応条件及び上記の分析値より、得られた化
合物は式（８）
【００３３】
【化１２】
【００３４】で示される化合物（平均分子量：４９６
５）と推定した。
５）と推定した。
【００３５】製造例２ トリグリセリルモノアリルエーテル１４０ｇ（０．５モ
ル）と水酸化カリウム０．６ｇを５リットル容オートク
レーブに仕込み、系内を窒素ガスに置換した後、１００
℃に昇温した。次いでエチレンオキシド１３２０ｇ（３
０モル）、プロピレンオキシド１１６ｇ（２モル）を計
量槽に計り取り、均一になるまで混合した。１１０±５
℃、１０ｋｇ／ｃｍ2以下の条件で計量槽よりエチレン
オキシドとプロピレンオキシド混合物を８時間かけて圧
入した。圧入後、１時間反応を行い、次いで、窒素ガス
を通じながら２００ｍｍＨｇの減圧下、３０分間で未反
応のエチレンオキシドとプロピレンオキシドを除去した
後、８０℃まで冷却した。その後、１０重量％塩酸水溶
液でｐＨを７．０に調整し、１００±５℃、１００ｍｍ
Ｈｇの条件で１時間脱水を行った。次に８０℃に冷却し
て、析出した塩を濾別して化合物１５０５ｇを得た。得
られた化合物の水酸基価は７２．０（計算値は７１．
２）、不飽和度は０．３０（計算値は０．３２）であっ
た。なお、水酸基価および不飽和度は、製造例１と同様
にして測定した。出発原料、反応条件及び上記の分析値
より、得られた化合物は式（９）
ル）と水酸化カリウム０．６ｇを５リットル容オートク
レーブに仕込み、系内を窒素ガスに置換した後、１００
℃に昇温した。次いでエチレンオキシド１３２０ｇ（３
０モル）、プロピレンオキシド１１６ｇ（２モル）を計
量槽に計り取り、均一になるまで混合した。１１０±５
℃、１０ｋｇ／ｃｍ2以下の条件で計量槽よりエチレン
オキシドとプロピレンオキシド混合物を８時間かけて圧
入した。圧入後、１時間反応を行い、次いで、窒素ガス
を通じながら２００ｍｍＨｇの減圧下、３０分間で未反
応のエチレンオキシドとプロピレンオキシドを除去した
後、８０℃まで冷却した。その後、１０重量％塩酸水溶
液でｐＨを７．０に調整し、１００±５℃、１００ｍｍ
Ｈｇの条件で１時間脱水を行った。次に８０℃に冷却し
て、析出した塩を濾別して化合物１５０５ｇを得た。得
られた化合物の水酸基価は７２．０（計算値は７１．
２）、不飽和度は０．３０（計算値は０．３２）であっ
た。なお、水酸基価および不飽和度は、製造例１と同様
にして測定した。出発原料、反応条件及び上記の分析値
より、得られた化合物は式（９）
【００３６】
【化１３】
【００３７】で示される化合物（平均分子量：３１１
７）と推定した。
７）と推定した。
【００３８】製造例３ 製造例２で得られた式（９）の化合物１０００ｇ（０．
３２モル）と水酸化カリウム１５０ｇを、５リットル容
オートクレーブに仕込み、系内を窒素ガスに置換した
後、１００℃に昇温した。次いでメチルクロリド８７．
０ｇ（１．６８モル）を１００±５℃の条件下で仕込ん
だ。４時間反応後、８０℃に冷却し、窒素ガスを通じな
がら減圧下（２００ｍｍＨｇ以下）で０．５時間、未反
応のメチルクロリドを除去した。次いで５００ｇの水を
系中に加え撹拌を行った後、静置して分層を行い下層の
過剰のアルカリ分を取り除いた。その後、１０重量％塩
酸水溶液でｐＨを７．０に調整し、１００±５℃、１０
０ｍｍＨｇの条件で１時間脱水を行った。次に８０℃に
冷却し、析出した塩を濾別して化合物９４７ｇを得た。
得られた化合物の水酸基価は０．０７（計算値は０）、
不飽和度は０．２８（計算値は０．３２）であった。な
お、水酸基価および不飽和度は製造例１と同様にして測
定した。出発原料、反応条件及び上記の分析値より、得
られた化合物は式（１０）
３２モル）と水酸化カリウム１５０ｇを、５リットル容
オートクレーブに仕込み、系内を窒素ガスに置換した
後、１００℃に昇温した。次いでメチルクロリド８７．
０ｇ（１．６８モル）を１００±５℃の条件下で仕込ん
だ。４時間反応後、８０℃に冷却し、窒素ガスを通じな
がら減圧下（２００ｍｍＨｇ以下）で０．５時間、未反
応のメチルクロリドを除去した。次いで５００ｇの水を
系中に加え撹拌を行った後、静置して分層を行い下層の
過剰のアルカリ分を取り除いた。その後、１０重量％塩
酸水溶液でｐＨを７．０に調整し、１００±５℃、１０
０ｍｍＨｇの条件で１時間脱水を行った。次に８０℃に
冷却し、析出した塩を濾別して化合物９４７ｇを得た。
得られた化合物の水酸基価は０．０７（計算値は０）、
不飽和度は０．２８（計算値は０．３２）であった。な
お、水酸基価および不飽和度は製造例１と同様にして測
定した。出発原料、反応条件及び上記の分析値より、得
られた化合物は式（１０）
【００３９】
【化１４】
【００４０】で示される化合物（平均分子量：３１７
３）と推定した。
３）と推定した。
【００４１】実施例１ 四つ口フラスコに式（７）の化合物としてメルカプト酢
酸（ＨＳＣＨ2ＣＯＯＨ）３７ｇ（０．４モル）を入
れ、攪拌しながら温度を３５±５℃に保持した。次いで
製造例１で合成した式（８）の化合物５００ｇ（０．１
モル）をメタノール５００ｇに溶解させ、滴下ロートに
より四つ口フラスコに５時間かけて滴下した。全量滴下
終了後、更に４０±５℃で５時間保持して反応を続け
た。次に６０±１０℃、２００ｍｍＨｇ以下の減圧下で
メタノールを留去したのち、反応混合物をクロロホルム
１０００ｇに再び溶解させた。次に全量を分液ロートに
移し、飽和食塩水１リットルで３回水洗し、未反応のメ
ルカプト酢酸を除去した。次いで１１０±１０℃、窒素
雰囲気下、５０ｍｍＨｇ以下の減圧下でクロロホルムお
よび水を留去し、析出した食塩を濾過により除去し、化
合物（分子量：５０４５）４７０ｇを得た。得られた化
合物の酸価は１１．５（計算値は１１．１）、不飽和度
０．０２（計算値は０）であった。なお、酸価はＪＩＳ
Ｋ−１５５７，６．６（１９７０）の方法に準じて測
定し、不飽和度は製造例１と同様にして測定した。赤外
線吸収スペクトルを図２に示す。1Ｈ−ＮＭＲスペクト
ルの結果を以下に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（δ（ｐｐｍ），ＣＤＣｌ／ＴＭＳ） δ＝１．８５ｐｐｍ （−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2 ＣＨ2−Ｓ−
ＣＨ2−ＣＯＯＨ） δ＝２．７５ｐｐｍ （−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2 −Ｓ−
ＣＨ2−ＣＯＯＨ） δ＝３．２ｐｐｍ （−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−Ｓ−Ｃ
Ｈ2 −ＣＯＯＨ） 出発原料、反応条件および上記の分析値より、得られた
化合物は式（１１）
酸（ＨＳＣＨ2ＣＯＯＨ）３７ｇ（０．４モル）を入
れ、攪拌しながら温度を３５±５℃に保持した。次いで
製造例１で合成した式（８）の化合物５００ｇ（０．１
モル）をメタノール５００ｇに溶解させ、滴下ロートに
より四つ口フラスコに５時間かけて滴下した。全量滴下
終了後、更に４０±５℃で５時間保持して反応を続け
た。次に６０±１０℃、２００ｍｍＨｇ以下の減圧下で
メタノールを留去したのち、反応混合物をクロロホルム
１０００ｇに再び溶解させた。次に全量を分液ロートに
移し、飽和食塩水１リットルで３回水洗し、未反応のメ
ルカプト酢酸を除去した。次いで１１０±１０℃、窒素
雰囲気下、５０ｍｍＨｇ以下の減圧下でクロロホルムお
よび水を留去し、析出した食塩を濾過により除去し、化
合物（分子量：５０４５）４７０ｇを得た。得られた化
合物の酸価は１１．５（計算値は１１．１）、不飽和度
０．０２（計算値は０）であった。なお、酸価はＪＩＳ
Ｋ−１５５７，６．６（１９７０）の方法に準じて測
定し、不飽和度は製造例１と同様にして測定した。赤外
線吸収スペクトルを図２に示す。1Ｈ−ＮＭＲスペクト
ルの結果を以下に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（δ（ｐｐｍ），ＣＤＣｌ／ＴＭＳ） δ＝１．８５ｐｐｍ （−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2 ＣＨ2−Ｓ−
ＣＨ2−ＣＯＯＨ） δ＝２．７５ｐｐｍ （−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2 −Ｓ−
ＣＨ2−ＣＯＯＨ） δ＝３．２ｐｐｍ （−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−Ｓ−Ｃ
Ｈ2 −ＣＯＯＨ） 出発原料、反応条件および上記の分析値より、得られた
化合物は式（１１）
【００４２】
【化１５】
【００４３】で示される化合物と推定した。
【００４４】実施例２ 四つ口フラスコに式（７）の化合物としてメルカプト酢
酸（ＨＳＣＨ2ＣＯＯＨ）５９ｇ（０．６４モル）を入
れ、かき混ぜながら温度を３５±５℃に保持した。次い
で製造例３で合成した式（１０）の化合物５００ｇ
（０．１６モル）をメタノール５００ｇに溶解させ、滴
下ロートにより四つ口フラスコに５時間かけて滴下し
た。全量滴下終了後、更に４０±５℃で５時間保持して
反応を続けた。次に６０±１０℃、２００ｍｍＨｇ以下
の減圧下でメタノールを留去したのち、クロロホルム１
０００ｇに再び溶解させた。次に全量を分液ロートに移
し、飽和食塩水１リットルで３回水洗し、未反応のメル
カプト酢酸を除去した。次いで１１０±１０℃、窒素雰
囲気下、５０ｍｍＨｇ以下の減圧下でクロロホルムおよ
び水を留去し、析出した食塩を濾過により除去し、化合
物（分子量：３２５３）４６８ｇを得た。得られた化合
物の酸価は１７．７（計算値は１７．２）、不飽和度
０．０３（計算値は０）であった。1Ｈ−ＮＭＲスペク
トルの結果を以下に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（δ（ｐｐｍ），ＣＤＣｌ／ＴＭＳ） δ＝１．８５ｐｐｍ （−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2 ＣＨ2−Ｓ−
ＣＨ2−ＣＯＯＨ） δ＝２．７５ｐｐｍ （−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2 −Ｓ−
ＣＨ2−ＣＯＯＨ） δ＝３．２ｐｐｍ （−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−Ｓ−Ｃ
Ｈ2 −ＣＯＯＨ） 出発原料、反応条件および上記の分析値より、得られた
化合物は式（１２）
酸（ＨＳＣＨ2ＣＯＯＨ）５９ｇ（０．６４モル）を入
れ、かき混ぜながら温度を３５±５℃に保持した。次い
で製造例３で合成した式（１０）の化合物５００ｇ
（０．１６モル）をメタノール５００ｇに溶解させ、滴
下ロートにより四つ口フラスコに５時間かけて滴下し
た。全量滴下終了後、更に４０±５℃で５時間保持して
反応を続けた。次に６０±１０℃、２００ｍｍＨｇ以下
の減圧下でメタノールを留去したのち、クロロホルム１
０００ｇに再び溶解させた。次に全量を分液ロートに移
し、飽和食塩水１リットルで３回水洗し、未反応のメル
カプト酢酸を除去した。次いで１１０±１０℃、窒素雰
囲気下、５０ｍｍＨｇ以下の減圧下でクロロホルムおよ
び水を留去し、析出した食塩を濾過により除去し、化合
物（分子量：３２５３）４６８ｇを得た。得られた化合
物の酸価は１７．７（計算値は１７．２）、不飽和度
０．０３（計算値は０）であった。1Ｈ−ＮＭＲスペク
トルの結果を以下に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（δ（ｐｐｍ），ＣＤＣｌ／ＴＭＳ） δ＝１．８５ｐｐｍ （−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2 ＣＨ2−Ｓ−
ＣＨ2−ＣＯＯＨ） δ＝２．７５ｐｐｍ （−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2 −Ｓ−
ＣＨ2−ＣＯＯＨ） δ＝３．２ｐｐｍ （−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−Ｓ−Ｃ
Ｈ2 −ＣＯＯＨ） 出発原料、反応条件および上記の分析値より、得られた
化合物は式（１２）
【００４５】
【化１６】
【００４６】で示される化合物と推定した。
【００４７】実施例３ 四つ口フラスコに式（７）の化合物として３−メルカプ
トプロピオン酸（ＨＳＣＨ2ＣＨ2ＣＯＯＨ）４２ｇ
（０．４モル）を入れ、攪拌しながら温度を３５±５℃
に保持した。次いで製造例１で合成した式（８）の化合
物５００ｇ（０．１モル）をメタノール５００ｇに溶解
させ、滴下ロートにより四つ口フラスコに５時間かけて
滴下した。全量滴下後、更に４０±５℃で５時間保持し
て反応を続けた。次に６０±１０℃、２００ｍｍＨｇ以
下の減圧下でメタノールを留去したのち、クロロホルム
１０００ｇに再び溶解させた。次に全量を分液ロートに
移し、飽和食塩水１リットルで３回水洗し、未反応の３
−メルカプトプロピオン酸を除去した。次いで１１０±
１０℃、窒素雰囲気下、５０ｍｍＨｇ以下の減圧下でク
ロロホルムおよび水を留去し、析出した食塩を濾過によ
り除去し、化合物（分子量：５０５９）４８１ｇを得
た。得られた化合物の酸価は１１．４（計算値は１１．
１）、不飽和度０．０２（計算値は０）であった。1Ｈ
−ＮＭＲスペクトルの結果を以下に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（δ（ｐｐｍ），ＣＤＣｌ／ＴＭＳ） δ＝１．８５ｐｐｍ（−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2 ＣＨ2−Ｓ−Ｃ
Ｈ2ＣＨ2−ＣＯＯＨ） δ＝２．７５ｐｐｍ（−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2 −Ｓ−Ｃ
Ｈ2ＣＨ2−ＣＯＯＨ） δ＝２．８５ｐｐｍ（−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−Ｓ−Ｃ
Ｈ2 ＣＨ2−ＣＯＯＨ） δ＝２．８１ｐｐｍ（−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−Ｓ−Ｃ
Ｈ2ＣＨ2 −ＣＯＯＨ） 出発原料、反応条件および上記の分析値より、得られた
化合物は式（１３）
トプロピオン酸（ＨＳＣＨ2ＣＨ2ＣＯＯＨ）４２ｇ
（０．４モル）を入れ、攪拌しながら温度を３５±５℃
に保持した。次いで製造例１で合成した式（８）の化合
物５００ｇ（０．１モル）をメタノール５００ｇに溶解
させ、滴下ロートにより四つ口フラスコに５時間かけて
滴下した。全量滴下後、更に４０±５℃で５時間保持し
て反応を続けた。次に６０±１０℃、２００ｍｍＨｇ以
下の減圧下でメタノールを留去したのち、クロロホルム
１０００ｇに再び溶解させた。次に全量を分液ロートに
移し、飽和食塩水１リットルで３回水洗し、未反応の３
−メルカプトプロピオン酸を除去した。次いで１１０±
１０℃、窒素雰囲気下、５０ｍｍＨｇ以下の減圧下でク
ロロホルムおよび水を留去し、析出した食塩を濾過によ
り除去し、化合物（分子量：５０５９）４８１ｇを得
た。得られた化合物の酸価は１１．４（計算値は１１．
１）、不飽和度０．０２（計算値は０）であった。1Ｈ
−ＮＭＲスペクトルの結果を以下に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（δ（ｐｐｍ），ＣＤＣｌ／ＴＭＳ） δ＝１．８５ｐｐｍ（−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2 ＣＨ2−Ｓ−Ｃ
Ｈ2ＣＨ2−ＣＯＯＨ） δ＝２．７５ｐｐｍ（−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2 −Ｓ−Ｃ
Ｈ2ＣＨ2−ＣＯＯＨ） δ＝２．８５ｐｐｍ（−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−Ｓ−Ｃ
Ｈ2 ＣＨ2−ＣＯＯＨ） δ＝２．８１ｐｐｍ（−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−Ｓ−Ｃ
Ｈ2ＣＨ2 −ＣＯＯＨ） 出発原料、反応条件および上記の分析値より、得られた
化合物は式（１３）
【００４８】
【化１７】
【００４９】で示される化合物と推定した。 実施例４ 四つ口フラスコに実施例１で得られた式（１１）の化合
物３００ｇ（０．０６モル）とジメチルホルムアミド４
５０ｇを入れ、かき混ぜながら温度を５０℃まで昇温し
溶解した。次いで温度を３５±５℃まで冷却し、窒素雰
囲気下でＮ−ヒドロキシコハク酸イミド８．３ｇ（０．
０７モル）、ジシクロヘキシルキシルカルボジイミド１
４．７ｇ（０．０７モル）を加え２時間反応を行った。
反応終了後、加圧濾過を行い得られた溶液に、−１０℃
に冷却したイソプロピルアルコール５リットルを加え、
０．５時間、室温で撹拌を行い、ポリオキシアルキレン
化合物の結晶を析出させた。得られた結晶を減圧濾過に
より分取した後、再び−１０℃に冷却した後に、イソプ
ロピルアルコール５リットルを加え、０．５時間洗浄を
行った。減圧濾過により再び結晶を取り出した後、ヘキ
サン１０リットルを加え洗浄を行った。最後に得られた
結晶を真空乾燥機を使用して３５℃、５０ｍｍＨｇ以下
で４時間真空乾燥を行い、化合物（分子量：５１６２）
２５３ｇを得た。赤外線吸収スペクトルを図３に示す。
1Ｈ−ＮＭＲスペクトルの結果を以下に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（δ（ｐｐｍ），ＣＤＣｌ／ＴＭＳ）
物３００ｇ（０．０６モル）とジメチルホルムアミド４
５０ｇを入れ、かき混ぜながら温度を５０℃まで昇温し
溶解した。次いで温度を３５±５℃まで冷却し、窒素雰
囲気下でＮ−ヒドロキシコハク酸イミド８．３ｇ（０．
０７モル）、ジシクロヘキシルキシルカルボジイミド１
４．７ｇ（０．０７モル）を加え２時間反応を行った。
反応終了後、加圧濾過を行い得られた溶液に、−１０℃
に冷却したイソプロピルアルコール５リットルを加え、
０．５時間、室温で撹拌を行い、ポリオキシアルキレン
化合物の結晶を析出させた。得られた結晶を減圧濾過に
より分取した後、再び−１０℃に冷却した後に、イソプ
ロピルアルコール５リットルを加え、０．５時間洗浄を
行った。減圧濾過により再び結晶を取り出した後、ヘキ
サン１０リットルを加え洗浄を行った。最後に得られた
結晶を真空乾燥機を使用して３５℃、５０ｍｍＨｇ以下
で４時間真空乾燥を行い、化合物（分子量：５１６２）
２５３ｇを得た。赤外線吸収スペクトルを図３に示す。
1Ｈ−ＮＭＲスペクトルの結果を以下に示す。1 Ｈ−ＮＭＲ（δ（ｐｐｍ），ＣＤＣｌ／ＴＭＳ）
【００５０】
【化１８】
【００５１】出発原料、反応条件および上記の分析値よ
り、得られた化合物は式（１４）
り、得られた化合物は式（１４）
【００５２】
【化１９】
【００５３】で示される化合物と推定した。同様に、前
記のＮ−ヒドロキシコハク酸イミドの代わりにｐ−ニト
ロフェノールを反応させて、式（３）で示される活性基
をもつ化合物を得た。
記のＮ−ヒドロキシコハク酸イミドの代わりにｐ−ニト
ロフェノールを反応させて、式（３）で示される活性基
をもつ化合物を得た。
【００５４】試験例１ Ｌ−アスパラギナーゼ１０ｍｇを含む０．１Ｍホウ酸緩
衝液（ｐＨ１０）２ｍｌに、実施例４で得られた式（１
４）の化合物をアスパラギナーゼ分子中のアミノ基に対
して１５倍モル比加え、３７℃で１時間反応させた。常
法により精製し、白色粉末の修飾アスパラギナーゼを得
た。分子量は４０万であり、アミノ基の分析の結果、５
０個が結合していたので、付加部分の分子量５０×５１
６２＝約２５．８万とアスパラギナーゼの分子量１３．
４万との合計値とほぼ一致した。このものは抗体との結
合能は完全に消失しているが、酵素活性はＡ法で３５
％、Ｂ法で４０％保持していた。これらの結果を表１に
示す。なお、アスパラギナーゼ分子中の結合したアミノ
基の数の測定は、トリニトロベンゼンスルホン酸を用い
て測定を行った。また、酵素活性の測定は、Ｌ−グルタ
ミン酸−オキザロ酢酸トランスアミナーゼを用い、リン
ゴ酸の生成に伴うＮＡＤ＋の変化量を分光学的に測定す
る方法（Ａ法）及びアスパラギン酸とヒドロキシアミン
共存下における同酵素によるアスパラギン酸ヒドロキサ
メートの生成を塩化第二鉄による発色させる方法（Ｂ
法）により測定した。更に抗原性の測定は、ウサギをＬ
−アスパラギナーゼで免役した杭血清を用い、抗原−抗
体反応により生ずる沈澱量を測定する方法により行い、
抗体との結合能（抗原性）を測定した。
衝液（ｐＨ１０）２ｍｌに、実施例４で得られた式（１
４）の化合物をアスパラギナーゼ分子中のアミノ基に対
して１５倍モル比加え、３７℃で１時間反応させた。常
法により精製し、白色粉末の修飾アスパラギナーゼを得
た。分子量は４０万であり、アミノ基の分析の結果、５
０個が結合していたので、付加部分の分子量５０×５１
６２＝約２５．８万とアスパラギナーゼの分子量１３．
４万との合計値とほぼ一致した。このものは抗体との結
合能は完全に消失しているが、酵素活性はＡ法で３５
％、Ｂ法で４０％保持していた。これらの結果を表１に
示す。なお、アスパラギナーゼ分子中の結合したアミノ
基の数の測定は、トリニトロベンゼンスルホン酸を用い
て測定を行った。また、酵素活性の測定は、Ｌ−グルタ
ミン酸−オキザロ酢酸トランスアミナーゼを用い、リン
ゴ酸の生成に伴うＮＡＤ＋の変化量を分光学的に測定す
る方法（Ａ法）及びアスパラギン酸とヒドロキシアミン
共存下における同酵素によるアスパラギン酸ヒドロキサ
メートの生成を塩化第二鉄による発色させる方法（Ｂ
法）により測定した。更に抗原性の測定は、ウサギをＬ
−アスパラギナーゼで免役した杭血清を用い、抗原−抗
体反応により生ずる沈澱量を測定する方法により行い、
抗体との結合能（抗原性）を測定した。
【００５５】比較試験例１ Ｌ−アスパラギナーゼ１０ｍｇを含む０．１Ｍホウ酸緩
衝液（ｐＨ１０）２ｍｌに式（１５）
衝液（ｐＨ１０）２ｍｌに式（１５）
【００５６】
【化２０】
【００５７】の化合物をアスパラギナーゼ分子中のアミ
ノ基に対して１１倍モル比加え、３７℃で１時間反応さ
せた。常法により精製し、白色粉末の修飾アスパラギナ
ーゼを得た。分子量は４２万であり、アミノ基の分析結
果、５４個が結合していたので、付加部分の分子量５４
×５２００＝約２８万とアスパラギナーゼの分子量１
３．４万との合計値とほぼ一致した。そして、このもの
は抗体との結合能は３５％になった。酵素活性はＡ法で
１５％、Ｂ法で２２％保持していた。これらの結果を表
１に示す。なお、アスパラギナーゼ分子中の結合したア
ミノ基の数の測定は、トリニトロベンゼンスルホン酸を
用いて測定を行った。また、酵素活性の測定は、Ｌ−グ
ルタミン酸−オキザロ酢酸トランスアミナーゼを用い、
リンゴ酸の生成に伴うＮＡＤ＋の変化量を分光学的に測
定する方法（Ａ法）及びアスパラギン酸とヒドロキシア
ミン共存下における同酵素によるアスパラギン酸ヒドロ
キサメートの生成を塩化第二鉄による発色させる方法
（Ｂ法）により測定した。更に抗原性の測定は、ウサギ
をＬ−アスパラギナーゼで免役した杭血清を用い、抗原
−抗体反応により生ずる沈澱量を測定する方法により行
い、抗体との結合能（抗原性）を測定した。
ノ基に対して１１倍モル比加え、３７℃で１時間反応さ
せた。常法により精製し、白色粉末の修飾アスパラギナ
ーゼを得た。分子量は４２万であり、アミノ基の分析結
果、５４個が結合していたので、付加部分の分子量５４
×５２００＝約２８万とアスパラギナーゼの分子量１
３．４万との合計値とほぼ一致した。そして、このもの
は抗体との結合能は３５％になった。酵素活性はＡ法で
１５％、Ｂ法で２２％保持していた。これらの結果を表
１に示す。なお、アスパラギナーゼ分子中の結合したア
ミノ基の数の測定は、トリニトロベンゼンスルホン酸を
用いて測定を行った。また、酵素活性の測定は、Ｌ−グ
ルタミン酸−オキザロ酢酸トランスアミナーゼを用い、
リンゴ酸の生成に伴うＮＡＤ＋の変化量を分光学的に測
定する方法（Ａ法）及びアスパラギン酸とヒドロキシア
ミン共存下における同酵素によるアスパラギン酸ヒドロ
キサメートの生成を塩化第二鉄による発色させる方法
（Ｂ法）により測定した。更に抗原性の測定は、ウサギ
をＬ−アスパラギナーゼで免役した杭血清を用い、抗原
−抗体反応により生ずる沈澱量を測定する方法により行
い、抗体との結合能（抗原性）を測定した。
【００５８】
【表１】
【００５９】
【発明の効果】本発明の化合物はトリグリセリンの中央
の水酸基にカルボキシル基あるいは活性化されたカルボ
キシル基を有するため、ポリペプチド、生理活性蛋白
質、酵素等のアミノ基や水酸基と容易に反応することが
でき、かつ４本のポリオキシアルキレン鎖によって、当
該物質の抗原性の低減、安定化、体内（血中）滞留時間
の延長等の性能が発揮でき、毒性も少なく、さらに副生
物の生成が少ないカルボキシル基含有ポリオキシアルキ
レン化合物を得ることができる。
の水酸基にカルボキシル基あるいは活性化されたカルボ
キシル基を有するため、ポリペプチド、生理活性蛋白
質、酵素等のアミノ基や水酸基と容易に反応することが
でき、かつ４本のポリオキシアルキレン鎖によって、当
該物質の抗原性の低減、安定化、体内（血中）滞留時間
の延長等の性能が発揮でき、毒性も少なく、さらに副生
物の生成が少ないカルボキシル基含有ポリオキシアルキ
レン化合物を得ることができる。
【図１】製造例１で得た化合物の赤外吸収スペクトルを
示す。
示す。
【図２】実施例１で得た化合物の赤外吸収スペクトルを
示す。
示す。
【図３】実施例４で得た化合物の赤外吸収スペクトルを
示す。
示す。
Claims (1)
- 【請求項１】式（１）で示されるカルボキシル基含有ポ
リオキシアルキレン化合物。 【化１】 （ただし、Ｒ1は水素原子、炭素数１〜２４の炭化水素
基または炭素数１〜２４のアシル基、Ｒ2は炭素数３ま
たは４の炭化水素基、Ｒ3は炭素数１〜１０の炭化水素
基、ＡＯは炭素数３または４のオキシアルキレン基、Ｙ
は水素原子、式（２）あるいは式（３）で示される活性
基を示し、ｎはオキシエチレン基の平均付加モル数で１
〜１０００であり、ｍは炭素数３または４のオキシアル
キレン基の平均付加モル数で０〜２５０であり、ｎ／
（ｎ＋ｍ）は０．８以上であり、オキシエチレン基と炭
素数３または４のオキシアルキレン基の付加状態はブロ
ック状でもランダム状でもよい。） 【化２】 【化３】
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04435099A JP3812204B2 (ja) | 1998-04-14 | 1999-02-23 | カルボキシル基含有ポリオキシアルキレン化合物 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10242998 | 1998-04-14 | ||
| JP10-102429 | 1998-04-14 | ||
| JP04435099A JP3812204B2 (ja) | 1998-04-14 | 1999-02-23 | カルボキシル基含有ポリオキシアルキレン化合物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000001542A true JP2000001542A (ja) | 2000-01-07 |
| JP3812204B2 JP3812204B2 (ja) | 2006-08-23 |
Family
ID=26384209
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP04435099A Expired - Fee Related JP3812204B2 (ja) | 1998-04-14 | 1999-02-23 | カルボキシル基含有ポリオキシアルキレン化合物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3812204B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008105514A1 (ja) | 2007-02-28 | 2008-09-04 | Nof Corporation | 多分岐鎖ポリオキシアルキレン誘導体 |
| WO2010114074A1 (ja) | 2009-03-31 | 2010-10-07 | 日油株式会社 | 多分岐鎖ポリオキシアルキレン化合物、およびその製造方法 |
-
1999
- 1999-02-23 JP JP04435099A patent/JP3812204B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008105514A1 (ja) | 2007-02-28 | 2008-09-04 | Nof Corporation | 多分岐鎖ポリオキシアルキレン誘導体 |
| JP2008248232A (ja) * | 2007-02-28 | 2008-10-16 | Nof Corp | 多分岐鎖ポリオキシアルキレン誘導体 |
| US8071712B2 (en) | 2007-02-28 | 2011-12-06 | Nof Corporation | Multibranched polyoxyalkylene derivative |
| WO2010114074A1 (ja) | 2009-03-31 | 2010-10-07 | 日油株式会社 | 多分岐鎖ポリオキシアルキレン化合物、およびその製造方法 |
| US8716435B2 (en) | 2009-03-31 | 2014-05-06 | Nof Corporation | Multibranched polyoxyalkylene compound and producing method thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3812204B2 (ja) | 2006-08-23 |
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