ITVR20000096A1 - Procedimento per la preparazione di un tessuto non tessuto in fibroina di seta - Google Patents
Procedimento per la preparazione di un tessuto non tessuto in fibroina di seta Download PDFInfo
- Publication number
- ITVR20000096A1 ITVR20000096A1 IT2000VR000096A ITVR20000096A ITVR20000096A1 IT VR20000096 A1 ITVR20000096 A1 IT VR20000096A1 IT 2000VR000096 A IT2000VR000096 A IT 2000VR000096A IT VR20000096 A ITVR20000096 A IT VR20000096A IT VR20000096 A1 ITVR20000096 A1 IT VR20000096A1
- Authority
- IT
- Italy
- Prior art keywords
- silk fibroin
- silk
- process according
- fabric
- fibroin
- Prior art date
Links
- 108010022355 Fibroins Proteins 0.000 title claims abstract description 79
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 7
- 239000004744 fabric Substances 0.000 claims abstract description 24
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000004753 textile Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000002699 waste material Substances 0.000 claims abstract description 5
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 3
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 19
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 17
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 16
- AMXOYNBUYSYVKV-UHFFFAOYSA-M lithium bromide Chemical compound [Li+].[Br-] AMXOYNBUYSYVKV-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 108010013296 Sericins Proteins 0.000 claims description 7
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 5
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000004745 nonwoven fabric Substances 0.000 claims description 4
- 241000255789 Bombyx mori Species 0.000 claims description 3
- ZJZXSOKJEJFHCP-UHFFFAOYSA-M lithium;thiocyanate Chemical compound [Li+].[S-]C#N ZJZXSOKJEJFHCP-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 3
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 claims description 3
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 claims description 3
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000005859 cell recognition Effects 0.000 claims description 2
- XTVVROIMIGLXTD-UHFFFAOYSA-N copper(II) nitrate Chemical compound [Cu+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O XTVVROIMIGLXTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 claims description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 2
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 claims 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 claims 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 claims 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 6
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 5
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 4
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 4
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 4
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M perchlorate Inorganic materials [O-]Cl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 238000002411 thermogravimetry Methods 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 210000001724 microfibril Anatomy 0.000 description 2
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 2
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 2
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 2
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000001157 Fourier transform infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N [N].NC(N)=O Chemical compound [N].NC(N)=O PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011942 biocatalyst Substances 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000000113 differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 1
- 108010007093 dispase Proteins 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 108091005899 fibrous proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034240 fibrous proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003517 fume Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000004442 gravimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 239000006186 oral dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- -1 salt compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000005979 thermal decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001757 thermogravimetry curve Methods 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
- A61L27/3839—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by the site of application in the body
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/14—Macromolecular materials
- A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
- A61L27/225—Fibrin; Fibrinogen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
-
- D—TEXTILES; PAPER
- D01—NATURAL OR MAN-MADE THREADS OR FIBRES; SPINNING
- D01D—MECHANICAL METHODS OR APPARATUS IN THE MANUFACTURE OF ARTIFICIAL FILAMENTS, THREADS, FIBRES, BRISTLES OR RIBBONS
- D01D5/00—Formation of filaments, threads, or the like
- D01D5/40—Formation of filaments, threads, or the like by applying a shearing force to a dispersion or solution of filament formable polymers, e.g. by stirring
-
- D—TEXTILES; PAPER
- D01—NATURAL OR MAN-MADE THREADS OR FIBRES; SPINNING
- D01F—CHEMICAL FEATURES IN THE MANUFACTURE OF ARTIFICIAL FILAMENTS, THREADS, FIBRES, BRISTLES OR RIBBONS; APPARATUS SPECIALLY ADAPTED FOR THE MANUFACTURE OF CARBON FILAMENTS
- D01F4/00—Monocomponent artificial filaments or the like of proteins; Manufacture thereof
- D01F4/02—Monocomponent artificial filaments or the like of proteins; Manufacture thereof from fibroin
-
- D—TEXTILES; PAPER
- D04—BRAIDING; LACE-MAKING; KNITTING; TRIMMINGS; NON-WOVEN FABRICS
- D04H—MAKING TEXTILE FABRICS, e.g. FROM FIBRES OR FILAMENTARY MATERIAL; FABRICS MADE BY SUCH PROCESSES OR APPARATUS, e.g. FELTS, NON-WOVEN FABRICS; COTTON-WOOL; WADDING ; NON-WOVEN FABRICS FROM STAPLE FIBRES, FILAMENTS OR YARNS, BONDED WITH AT LEAST ONE WEB-LIKE MATERIAL DURING THEIR CONSOLIDATION
- D04H1/00—Non-woven fabrics formed wholly or mainly of staple fibres or like relatively short fibres
- D04H1/40—Non-woven fabrics formed wholly or mainly of staple fibres or like relatively short fibres from fleeces or layers composed of fibres without existing or potential cohesive properties
- D04H1/42—Non-woven fabrics formed wholly or mainly of staple fibres or like relatively short fibres from fleeces or layers composed of fibres without existing or potential cohesive properties characterised by the use of certain kinds of fibres insofar as this use has no preponderant influence on the consolidation of the fleece
- D04H1/4266—Natural fibres not provided for in group D04H1/425
-
- D—TEXTILES; PAPER
- D04—BRAIDING; LACE-MAKING; KNITTING; TRIMMINGS; NON-WOVEN FABRICS
- D04H—MAKING TEXTILE FABRICS, e.g. FROM FIBRES OR FILAMENTARY MATERIAL; FABRICS MADE BY SUCH PROCESSES OR APPARATUS, e.g. FELTS, NON-WOVEN FABRICS; COTTON-WOOL; WADDING ; NON-WOVEN FABRICS FROM STAPLE FIBRES, FILAMENTS OR YARNS, BONDED WITH AT LEAST ONE WEB-LIKE MATERIAL DURING THEIR CONSOLIDATION
- D04H3/00—Non-woven fabrics formed wholly or mainly of yarns or like filamentary material of substantial length
- D04H3/015—Natural yarns or filaments
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Textile Engineering (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Botany (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Mechanical Engineering (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Treatments For Attaching Organic Compounds To Fibrous Goods (AREA)
- Chemical Or Physical Treatment Of Fibers (AREA)
- Woven Fabrics (AREA)
- Spinning Methods And Devices For Manufacturing Artificial Fibers (AREA)
- Artificial Filaments (AREA)
Description
Descrizione del trovato avente per titolo:
"PROCEDIMENTO PER LA PREPARAZIONE DI UN TESSUTO NON TESSUTO IN FIBROINA DI SETA"
CAMPO TECNICO
La presente invenzione si riferisce ad un procedimento per la preparazione di un tessuto non tessuto in fibroina di seta .
Più particolarmente, la presente invenzione si riferisce ad un procedimento per la preparazione di un tessuto non tessuto in fibroina di seta per formare delle strutture atte ad essere utilizzate come biomateriali da impianto, supporti di colture cellulari per applicazioni di ingegneria tissutale, supporti di cellule come pure sistemi biologici per la filtrazione di fluidi e la captazione di proteine.
STATO DELLA TECNICA
La teoria alla base delle applicazioni di ingegneria tessutale consiste sostanzialmente nel combinare una matrice naturale o sintetica con cellule provenienti da una specifica fonte di tessuto, in modo tale che dette cellule possano essere fatte crescere in laboratorio e quindi trapiantate nel corpo umano.
Inoltre, grazie all'uso di materiali di impianto atti ad interagire positivamente con le cellule, si possono fare iniziare dei processi specifici di rigenerazione di tessuti, ed ottenere la formazione di nuove strutture tissutali integre. In molti casi tali tessuti rigenerati saranno in grado di assolvere le loro normali funzioni che siano andate eventualmente perdute a causa di danni subiti in precedenza.
La fibroina di seta è un biomateriale che può essere utilizzato in chirurgia come materiale da impianto, come pure per applicazioni di ingegneria tissutale.
In questo contesto è opportuno notare che la fibroina di seta possiede ottime proprietà quali un’alta resistenza, unita a flessibilità, emocompatibilità, permeabilità all'acqua ed un'alta permeabilità nei confronti dell'ossigeno; tutto ciò rende la fibroina di seta un ottimo candidato per applicazioni biomediche, sia nella forma di membrane in non-tessuto e fibre, come pure nella forma di membrane in tessuto e fibre.
La fibroina di seta costituisce una percentuale compresa tra 75 ed 80% in peso della seta grezza. Il contenuto in seta della proteina sericina, che avvolge i due tipi di filamenti di fibroina, varia tra'20 e 25% in peso, a seconda della specie, dell'origine e delle condizioni di coltura della seta grezza.
La fibroina di seta è una proteina fibrosa la cui struttura gerarchica è costituita da fibrille e microfibrille, nella quale le fibre sono disposte in una forma cristallina altamente orientata.
La fibroina di seta si dissolve facilmente in una soluzione acquosa di sali inorganici.
Desalinizzando tale soluzione tramite dialisi è possibile ottenere una soluzione acquosa di fibroina di seta.
A causa della struttura spirale ad alfa elica della fibroina, queste soluzioni non sono stabili, e la struttura della membrana rigenerata ottenibile da queste soluzioni può essere facilmente modificata tramite solventi polari, invecchiamento e forze fisiche (taglio, vibrazione, miscelazione ecc.).
Allo scopo di ottenere fibroina di seta, è possibile utilizzare seta in forma di bozzolo da baco da seta, materiale tessile in seta, oppure cascami di seta.
La bava di seta grezza non è solubile in acido formico a causa della presenza di uno strato esterno di sericina. Allo scopo di eliminare lo strato di sericina, la seta deve essere dapprima sgommata.
Con il termine "sgommare" si intende la parziale o completa rimozione della sericina che copre i due tipi di filamenti di fibroina.
Gli agenti sgommanti che vengono normalmente utilizzati sono principalmente costituiti da saponi privi di alcali.
Secondo un metodo di sgommatura noto nella tecnica, la seta è trattata in un bagno di sapone a 95-98°C per un periodo di 2-4 ore, a seconda della qualità e del tipo di tessuto .
E' già noto l'utilizzo di fibroina di seta come matrice per coltura cellulare (vedi ad esempio domanda di brevetto italiano n. VR99A000082), come membrana di rivestimento per ferite da ustioni (N. Minoura, M. Tsukada, M. Nagura, "Physico-chemical properties of silk fibroin membrane as a biomaterial " Biomaterials , 11, 430-434, 1990), come materiale per la immobilizzazione di enzimi (M. Demura, T. Asakura, T. Kuroo , "Immobilization of biocatalyst with Bombix mori silk fibroin by several kinds of physical treatment and its application to glucose sensors", Biosensors, 4, 361-372, 1989), e come forma di dosaggio orale (T. Hanawa, A. Watanabe, T. Tsuchiya, R. Ikoma, M. Hidaka, M. Sugihara, "New orai dosage form for elderly patients: Preparation and characterization of silk fibroin gel", Chem. Pharm. Bull. 43, 284-288, 1995).
Tuttavia, le membrane in fibroina di seta sono molto fragili e la loro preparazione è molto lunga e laboriosa.
Sarebbe in teoria possibile tentare di utilizzare delle tecniche tessili, e tessere delle fibre di fibroina di seta solamente sgommate allo scopo di ottenere un tessuto flessibile .
Tuttavia, la preparazione di strutture tridimensionali appare essere notevolmente difficoltosa, e l'adattabilità di un tessuto ottenuto in questo modo ai differenti requisiti applicativi non sarebbe ottimale per quanto riguarda specifiche proprietà meccaniche, struttura e capacità di interagire con altre cellule.
DESCRIZIONE DELL'INVENZIONE
La presente invenzione ha come principale scopo quello di fornire un procedimento per l'ottenimento di un tessuto non tessuto costituito da una rete di fibre in fibroina di seta, in modo tale da ottenere un materiale altamente flessibile, e che allo stesso tempo mantenga inalterate le dimostrate favorevoli funzioni biologiche della fibroina di seta .
Ciò è ottenuto grazie alla messa in opera delle caratteristiche descritte alla rivendicazione principale.
Le rivendicazioni dipendenti delineano forme di realizzazione particolarmente vantaggiose del procedimento secondo l’invenzione.
Inoltre, le rivendicazioni 13 e 14 descrivono un tessuto tridimensionale in fibroina di seta.
Ancora, le rivendicazioni 15 e 16 descrivono usi particolarmente vantaggiosi di un tessuto tridimensionale in fibroina di seta.
Il procedimento secondo la presente invenzione prevede l’iniziale sgommatura della fibroina di seta a mezzo di trattamento con soluzione NaHC03, oppure tramite altri metodi di per sé noti nella tecnica e descritti nella letteratura scientifica .
Conformemente all'invenzione, la seta sgommata è quindi sottoposta ad un trattamento di rottura dei legami disolfati tra le catene pesanti (350kDa) e leggere (27kDa) della fibroina di seta.
Vantaggiosamente, tale trattamento viene effettuato dissolvendo parzialmente la fibroina di seta in una soluzione di acido formico.
Di seguito, la soluzione risultante viene omogeneizzata ed asciugata, ottenendo come risultato un tessuto non tessuto avente le proprietà ricercate.
Infine, il tessuto viene ripetutamente lavato allo scopo di rimuovere eventuali residui dei trattamenti precedenti, ed è mantenuto in condizioni umide fino al momento dell ' uso .
Secondo una forma di realizzazione dell'invenzione, la soluzione di acido formico utilizzata nel procedimento comprende una piccola quantità di una miscela di sali selezionati dal gruppo che comprende cloruro di calcio, cloruro di zinco, cloruro di potassio, bromuro di litio, tiocianato di litio, cloruro di magnesio, nitrato di rame e cloruro di sodio.
Tali sali aggiuntivi possono essere rimossi tramite lavaggi in acqua doppiamente distillata.
Per quanto riguarda le condizioni di conservazione, la soluzione di fibroina di seta/acido formico può essere asciugata su piastre di vetro o di plastica a temperatura ambiente .
Il tessuto non tessuto in fibroina di seta secondo l'invenzione ha dimostrato di consentire la coltura simultanea in vitro di normali cheratinociti e fibroblasti (oltre che di altri tipi di cellule) di uomo adulto, ottenendo quindi degli equivalenti dermo-epidermici atti ad essere utilizzati per sperimentazioni in vivo.
Inoltre, il procedimento secondo la presente invenzione ha dimostrato formare dei frammenti biofunzionali che possono essere utilizzati come siti di riconoscimento specifico cellulare che promuovono l'adesione e la crescita di cellule di mammiferi ed umani.
ILLUSTRAZIONE DEI DISEGNI
Altri vantaggi e caratteristiche dell'invenzione risulteranno più chiaramente dalla descrizione seguente di alcuni esempi particolari di realizzazione, forniti a titolo di esempi non limitativi, e con l'ausilio dei disegni allegati, nei quali:
le figure la e lb rappresentano delle fotografie realizzate tramite un microscopio elettronico a scansione (SEM) di un tessuto di fibroina di seta costituito da reti non tessute di fibre e fibrille unite le une alle altre; la fotografia di cui alla figura la è realizzata con scala 100 micrometri, mentre la fotografia di cui alla figura lb è realizzata con scala 10 micrometri.
La figura 2 rappresenta un tipico spettro all'infrarosso di fibroina di seta trattata con acido formico.
La figura 3 rappresenta una tipica analisi gravimetrica di fibroina di seta trattata con acido formico.
La figura 4 è una fotografia realizzata con un microscopio a fluorescenza (set di filtri ottici per la fluoresceina [FITC]) e rappresenta dei fibroblasti sparsi normali di uomo adulto, mantenuti in coltura in vitro per 10 giorni su una rete di fibroina. Prima della semina, i fibroblasti furono marcati con il perclorato di 3 ,3 '-dioctadecil -oxacarboc ianina : pertanto, le cellule vitali vengono osservate emettere una ben distinta fluorescenza di colore verde, l'intensità della quale presenta un picco ad una lunghezza d'onda di circa 590 nm quando eccitate da luce ultravioletta. Si può anche apprezzare una assai debole autofluorescenza verdastra propria delle fibre di fibroina. L'ingrandimento originale è 100 x.
La figura 5 rappresenta lo stesso campione della figura 4, tuttavia osservato al microscopio a fluorescenza con un set di filtri ottici per la rodamina. L'osservazione evidenzia svariati isolotti costituiti da cheratinociti umani normali che appaiono di colore rosso arancione, mantenuti in co-coltura con i fibroblasti per quattro giorni sulla rete in fibroina. Prima della semina, i cheratinociti furono marcati con perclorato di 1,1'-dioctadecil-3,3,3,3'-tetrametil-indocarbocianina: pertanto, essi vengono osservati come chiazze che emettono una fluorescenza intravitale di colore rosso arancione, avente un picco ad una lunghezza d'onda di circa 500 nm quando eccitati con luce ultravioletta. L'ingrandimento originale è 100 x.
DESCRIZIONE DI FORME DI REALIZZAZIONE
Come più sopra indicato, allo scopo di ottenere fibroina di seta, è possibile utilizzare seta in forma di bozzolo da baco da seta, materiale tessile in seta, oppure cascami di seta.
Inoltre, poiché la bava di seta grezza non è solubile in acido formico a causa della presenza di uno strato esterno di sericina, la seta deve essere dapprima sgommata allo scopo di eliminare lo strato di sericina.
Conformemente all’invenzione, la seta sgommata viene quindi trattata con una soluzione di acqua ed acido formico.
In questo contesto, possono essere utilizzate soluzioni aventi una quantità di acido formico compresa tra 88 e 99% in peso, la soluzione al 99% in peso essendo tuttavia preferibile .
Secondo una forma di realizzazione preferita del procedimento, la fibroina dì seta viene immersa nell'acido formico a temperatura ambiente; ciononostante, il procedimento può essere effettuato a temperature più elevate, ad esempio fino a circa 60°C.
I test sono stati effettuati sotto una cappa di aspirazione dei fumi prodotti.
Secondo una forma di realizzazione vantaggiosa dell'invenzione, il grado di soluzione di fibroina di seta può essere aumentato allo scopo di ottenere un tessuto a fibre molto strettamente legate.
Ciò si ottiene utilizzando una percentuale compresa tra 0,1 e 10% in peso di una miscela di sali selezionati dal gruppo comprendente cloruro di calcio, cloruro di zinc cloruro di potassio, bromuro di litio, tiocianato di litio, cloruro di magnesio, nitrato di rame e cloruro di sodio. Preferibilmente, i composti di sale 'da utilizzare sono cloruro di calcio e bromuro di litio.
Secondo l'invenzione, le concentrazioni di migliore utilizzo di fibroina di seta sono comprese tra circa 0,1 e 10% in peso. I migliori risultati sono ottenuti per concentrazioni comprese tra 0,5 e 5% in peso.
Con riferimento alle figure la ed lb, la struttura gerarchica della fibroina è costituita da fibrille, microfibrille e molecole di polimero.
Ora, conformemente alla presente invenzione, la rottura dei legami disolfati tra le catene pesanti (350 kDa) e leggere (27kDa) di fibroina di seta, consente di produrre frammenti di catena utilizzabili come siti di riconoscimento cellulare specifico per promuovere l'adesione e la crescita di cellule.
La caratterizzazione del tessuto in fibroina di seta è stata effettuata utilizzando un microscopio elettronico a scansione (SEM), l'analisi termogravimetrica (TGA) e la calorimetria differenziale a scansione (DSC), oltre che test di tipo meccanico.
ESEMPIO 1
Nel seguente esempio, 0,5 ? di fibroina di seta sgommata (da bozzolo, tessuto o cascami di seta) venne immersa in 100 mi di soluzione acquosa di acido formico.
La soluzione risultante venne versata su piatti puliti di vetro o polistirene e quindi agitatala 100 giri/min per 30 minuti allo scopo di ottenere delle fibre omogeneamente distribuite .
La soluzione risultante venne lasciata a condizioni atmosferiche allo scopo di rimuovere l'acido formico.
Una volta rimosso quest'ultimo per evaporazione a temperatura ambiente, il tessuto risultante in fibroina di seta fu lavato numerose volte con acqua doppiamente distillata e quindi asciugato all'interno di un forno sotto vuoto a 50°C.
Allo scopo di incrementare la solubilità della fibroina di seta, venne utilizzato del cloruro di calcio.
La seguente tabella 1 riporta le caratteristiche di alcune delle soluzioni utilizzate di fibroina di seta.
Come si può verificare dai dati della tabella 1, il processo secondo la presente invenzione consente di disciogliere la fibroina di seta.
TABELLA 1
*Tuttigliesperimentifuronocondottiatemperaturaambiente
Come si può notare dai dati della Tabella 1, il processo secondo la presente invenzione produce una massa solubile o parzialmente solubile e dilatabile che viene ottenuta rompendo i legami disolfati tra le catene pesanti (350 kDa) e leggere (27 kDa) di fibroina di seta.
Alcune delle proprietà caratteristiche del tessuto in fibroina di seta prodotto mediante il processo secondo l'invenzione sono riportate nella Tabella 2.
TABELLA 2.
^Dimensione dei pori come misurate tramite SEM e microscopio ottico
Le proprietà relative alla messa in tensione della fibroina di seta sono generalmente misurate a mezzo di un test di estensione sotto carico.
Secondo la norma ASTM 638, tutti i test sono stati effettuati a temperatura ambiente in stato umido ed asciutto. Come viene evidenziato nella tabella 2, a causa dell'acqua il modulo di reti e membrane viene aumentato,· inoltre, l'allungamento cala.
La morfologia della fibroina di seta è stata pure controllata tramite SEM, microscopio ottico ed a fluorescenza. Nelle fotografie SEM si può chiaramente notare che i vuoti sono distribuiti in modo aleatorio, ed essi possono essere controllati tramite la concentrazione di fibroina di seta oppure preparando una pluralità di strati di strutture di fibre di fibroina di seta.
La figura 2 mostra un tipico spettro FTR di reti in fibroina di seta trattata con acido formico. Si può notare che tutte le composizioni testate avevano un simile spettro FTIR; la figura 2 comprende le rispettive bande Amido I, Amido II,<'>Amido III e Amido IV.
La figura 3 rappresenta in forma di diagramma una tipica analisi di tipo TGA di reti di fibroina di seta trattate con acido formico; tale analisi venne effettuata allo scopo di verificare le proprietà di assorbimento d'acqua e di decomposizione termica.
Nel termogramma di cui alla figura 3 si nota che tutti i campioni ebbero un comportamento simile: il contenuto d'acqua dei campioni immagazzinati a condizioni ambiente è dell'ordine tra 5 e 10% in peso, e la decomposizione ha inizio a temperature superiori a 280°C.
Un tessuto tridimensionale di fibre di fibroina venne preparato con le seguenti modalità.
Un primo strato, avente uno spessore di 200 |im e con un diametro medio dei pori pari a circa 15 μπ\ venne accoppiato con un secondo strato avente uno spessore di 1200 μτη e con un diametro medio dei pori pari a circa 40 μπ\. I due strati, prodotti separatamente, vennero uniti uno all'altro applicando una opportuna pressione, a formare un tessuto avente uno spessore di circa 1,5 mm.
Il materiale venne sterilizzato tramite esposizione per un periodo di circa 30 minuti su ciascun lato a raggi ultravioletti emessi da lampade battericide racchiuse all'interno di un contenitore chiuso a temperatura ambiente; di seguito esso venne tagliato in porzioni di dimensioni 2,7 x 2,9 cm, ognuna delle quali venne disposta all'interno delle pareti quadre (8,6 cm di lato) di piastre ad otto pozzetti (Nunc Ltd.).
Vennero isolati dei normali fibroblasti dermici umani provenienti da biopsia intraoperatoria (il paziente era informato e consenziente), tramite digestione con soluzione di tripsina (0,25% p/v) dello strato dermico triturato e vennero quindi numericamente espansi all'interno di flaconi standard TC75 (Falcon Ltd.) per coltura di tessuti contenenti 15 mL di Dulbecco's Minimum Essential Medium {DMEM ; Sigma Chemical Co.) fortificato con 5% in volume di siero fetale bovino (Biowhittaker Spa) scomplementato (56°C per 30 min).
Prima di essere seminati sul tessuto di fibroina i fibroblasti vennero staccati dal fondo dei flaconi, quindi marcati con perclorato di 3-3'-dioctadecil-oxacarbocianina, un colorante intravitale che emette una luminosa fluorescenza verde, visibile con un microscopio a fluorescenza con filtri ottici per la FITC, ove eccitato da luce ultravioletta (Molecular Probes Ine.), ed infine contati.
Furono quindi seminati circa 100.000 fibroblasti per centimetro quadrato sui pezzi di tessuto di fibroina ottenuti come sopra descritto.
Prima della semina, i pezzi di tessuto furono rovesciati in modo tale da disporre nella parte superiore le parti con i pori di diametro maggiore.
I campioni vennero quindi incubati a 37°C in atmosfera di aria arricchita con CO-, {5% volume).
I fibroblasti si attaccarono immediatamente alle fibre di fibroina, e si potè riscontrare una percentuale di fibroblasti non adesi alla fibroina inferiore ad 1% del numero totale dei fibroblasti seminati.
I fibroblasti proliferarono intensamente, come fu possibile verificare tramite osservazione al microscopio a fluorescenza (vedasi fig. 4).
Essi vennero messi in coltura in vitro e crebbero per 10 settimane consecutive sui pezzi di tessuto di fibroina.
II loro aumento numerico non venne rilevato unicamente al microscopio a fluorescenza, ma potè essere ulteriormente comprovato dall'aumentato consumo di glucosio presente nel medium di crescita.
La vitalità e l'alto metabolismo anabolico delle celle vennero confermati anche dalla pressoché totale assenza, di azoto ureico (una misura della demolizione di proteine) dai terreni di crescita condizionati.
Vennero quindi isolati dei normali cheratinociti dermici umani provenienti da biopsia intraoperatoria (il paziente era informato e consenziente), tramite digestione con dispasi, che vennero dapprima seminati su uno strato di fibroblasti umani irradiati (6000 rads; feeder layer) ed espansi tramite esposizione ad una miscela in volume 1:1 di medium MCDB 153 (Sigma) e medium Ham's F12 (Biowhittaker GmbH) con l'aggiunta di 5% in volume di siero fetale bovino (Biowhittaker Spa) scomplementato (56°C per 30 min).
Ad una confluenza pari a 70% i cheratinociti vennero staccati dai flaconi, quindi marcati con perclorato di 1,1'-dioctadecil-3 ,3 ,3,3 '-tetrametil-indocarbocianina, un colorante intravitale 'fluorescente che emette una fluorescenza luminosa di colore rosso-arancione rilevabile con un set di filtri ottici per la rodamina, ove eccitato con luce ultravioletta (Molecular Probes, Ine.), ed infine contati .
Furono quindi seminati circa 100.000 cheratinociti per centimetro quadrato sugli stessi pezzi di tessuto di fibroina sui quali erano già attaccati i fibroblasti umani.
In questo caso i pezzi di tessuto vennero rovesciati m modo tale da disporre nella parte superiore le porzioni con i pori di dimensione minore.
I campioni vennero quindi incubati-a 37°C in atmosfera di aria arricchita con CO-, (5% volume).
Anche i cheratinociti aderirono immediatamente alla struttura reticolare di fibre di fibroina, e la percentuale di cheratinociti non adesi alla fibroina fu irrilevante.
Come da previsioni, i cheratinociti crebbero inizialmente in modo lento, ma dopo 3-4 giorni la loro crescita divenne più rapida, per cui si formarono cospicui isolotti di cellule che erano facilmente rilevabili al microscopio per la loro intensa fluorescenza di colore rosso, e perfettamente distiguibili dai fibroblasti compresenti nella stessa coltura, fluorescenti in verde con filtri ottici per la FITC ed occupanti lo strato inferiore della rete di fibroina(vedasi fig. 5).
La descrizione sopra esposta dimostra quindi che il tessuto in fibre di fibroina di seta secondo l'invenzione consente la produzione in vi tro di un tipo completamente nuovo di equivalente dermico/epidermico che potrebbe essere utilizzato in vivo come pelle artificiale.
L'invenzione è stata precedentemente descritta con riferimento ad alcune forme di realizzazione preferenziali della stessa .
Tuttavia, appare chiaro che l'invenzione è suscettibile di numerose varianti che rientrano nei propri scopi, nell’ambito delle rivendicazioni di seguito allegate.
A titolo di esempio, appare chiaro che, sulla base del modello più sopra divulgato, altri tessuti tridimensionali in fibre di fibroina di seta possono essere dotati di attributi ad hoc ed essere quindi utilizzati come supporti per la ingegnerizzazione di altri tessuti (come ad esempio arterie, tendini, cartilagini, ossa ecc.) ed organi (trachea, esofago, fegato ecc.) trapiantabili o connessi all'organismo temporaneamente (ad esempio sistemi di fegato bio-artificiale) oppure in modo permanente in vivo.
Claims (16)
- RIVENDICAZIONI 1. Procedimento per la produzione di un tessuto non tessuto in fibre di fibroina di seta comprendente le seguenti fasi: a) ottenere bava di seta grezza, ad esempio da bozzolo di baco da seta, da materiale tessile in seta, oppure da cascami di seta; b) ove presente, rimuovere lo strato di sericina che ricopra le fibre di fibroina di seta; c) spezzare i legami disolfati tra le catene pesanti (350 kDa) e leggere (27 kDa) di fibroina di seta allo scopo di produrre frammenti biofunzionali in grado di agire come siti per il riconoscimento specifico di cellule che promuovano l'adesione e la crescita di cellule; d) omogeneizzare il materiale risultante dalla detta fase c).
- 2. Procedimento secondo la rivendicazione 1, nel quale la detta fase b) viene effettuata a mezzo di trattamento con soluzione NaHCO3 oppure tramite altri metodi di cosiddetta sgommatura di per sé noti nella tecnica.
- 3. Procedimento secondo una delle rivendicazioni precedenti, nel quale la detta fase c) avviene tramite immersione della fibroina di seta in una soluzione acquosa di acido formico.
- 4 Procedimento secondo la rivendicazione 3, nel quale la fibroina di seta è presente in percentuale compresa tra 0,1 e 10% in peso nella detta soluzione.
- Procedimento secondo una delle rivendicazioni 3 e 4, in cui la fase c) viene effettuata ad una temperatura non superiore a 60°C.
- 6. Procedimento secondo la rivendicazione 5, in cui la detta fase c) viene effettuata a temperatura ambiente.
- 7. Procedimento secondo una delle rivendicazioni da 3 a 6, in cui la soluzione acquosa viene dotata di una percentuale compresa tra 0,1 e 10% in peso di una miscela di sali selezionati dal gruppo comprendente cloruro di calcio, cloruro di zinco, cloruro di potassio, bromuro di litio, tiocianato di litio, cloruro di magnesio, nitrato di rame e cloruro di sodio .
- 8. Procedimento secondo una delle rivendicazioni da 3 a 7, in cui l'omogeneizzazione del materiale risultante dalla detta fase c) avviene per agitazione della soluzione per un periodo di tempo predeterminato.
- 9. Procedimento secondo una delle rivendicazioni da 3 a 8, in cui il materiale risultante dalla detta fase d) viene privato dell'acido formico.
- 10 Procedimento secondo la rivendicazione 9, in cui l'acido formico viene rimosso per evaporazione.
- 11. Procedimento secondo una delle rivendicazioni 9 e in cui il materiale viene ripetutamente lavato con acqua distillata e quindi asciugato.
- 12. Procedimento secondo la rivendicazione 11, in cui l'asciugatura del materiale avviene all'interno di una camera a temperatura controllata e predeterminata.
- 13. Tessuto tridimensionale in fibre di fibroina di seta, caratterizzato dal fatto che esso è costituito da una struttura reticolare di fibre di fibroina di seta nella quale i legami tra le catene pesanti (350kDa) e leggere (27 kDa) di fibroina di seta sono spezzati e sono presenti frammenti biofunzionali agenti da siti specifici di riconoscimento cellulare per promuovere l’adesione e la crescita di cellule.
- 14. Tessuto secondo la rivendicazione 13, caratterizzato dal fatto che esso è ottenuto mediante un procedimento secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 12.
- 15. Uso di un tessuto secondo una delle rivendicazioni 13 e 14 per la bioingegnerizzazione di tessuti come ad esempio pelle, arterie, tendini, cartilagini, ossa, oppure organi come ad esempio trachea, esofago, fegato, atti ad essere connessi all'organismo o trapiantati temporaneamente oppure permanentemente.
- 16. Uso di varianti del tessuto secondo una delle rivendicazioni 13, 14 e 15 fornite commercialmente come supporti atti ad allestire colture tridimensionali in vitro di cellule isolate o costituenti degli aggregati simil-tissutali o degli organoìdì destinate ad indagini sperimentali condotte in ambito scientifico e/o industriale.
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT2000VR000096A IT1316885B1 (it) | 2000-10-02 | 2000-10-02 | Procedimento per la preparazione di un tessuto non tessuto in fibroinadi seta. |
| PCT/IT2001/000501 WO2002029141A1 (en) | 2000-10-02 | 2001-09-28 | Method for the preparation of a non-woven silk fibroin fabrics |
| AU2001295891A AU2001295891A1 (en) | 2000-10-02 | 2001-09-28 | Method for the preparation of a non-woven silk fibroin fabrics |
| US10/398,252 US7285637B2 (en) | 2000-10-02 | 2001-09-28 | Method for the preparation of a non-woven silk fibroin fabrics |
| DE60115271T DE60115271T2 (de) | 2000-10-02 | 2001-09-28 | Verfahren zur herstellung von seidenfibroinvliesstoffen |
| ES01976631T ES2254500T3 (es) | 2000-10-02 | 2001-09-28 | Metodo para la preparacion de estructuras textiles no tejidas convencionalmente a partir de fibroina de seda. |
| AT01976631T ATE310840T1 (de) | 2000-10-02 | 2001-09-28 | Verfahren zur herstellung von seidenfibroinvliesstoffen |
| EP01976631A EP1327014B1 (en) | 2000-10-02 | 2001-09-28 | Method for the preparation of a non-woven silk fibroin fabrics |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT2000VR000096A IT1316885B1 (it) | 2000-10-02 | 2000-10-02 | Procedimento per la preparazione di un tessuto non tessuto in fibroinadi seta. |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ITVR20000096A0 ITVR20000096A0 (it) | 2000-10-02 |
| ITVR20000096A1 true ITVR20000096A1 (it) | 2002-04-02 |
| IT1316885B1 IT1316885B1 (it) | 2003-05-13 |
Family
ID=11461889
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| IT2000VR000096A IT1316885B1 (it) | 2000-10-02 | 2000-10-02 | Procedimento per la preparazione di un tessuto non tessuto in fibroinadi seta. |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7285637B2 (it) |
| EP (1) | EP1327014B1 (it) |
| AT (1) | ATE310840T1 (it) |
| AU (1) | AU2001295891A1 (it) |
| DE (1) | DE60115271T2 (it) |
| ES (1) | ES2254500T3 (it) |
| IT (1) | IT1316885B1 (it) |
| WO (1) | WO2002029141A1 (it) |
Families Citing this family (51)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2002367580A1 (en) * | 2001-05-16 | 2003-09-22 | Tracy C. Grikscheit | Tissue-engineered organs |
| EP1446169B1 (en) | 2001-10-25 | 2009-01-14 | University of Connecticut | Fibroin compositions and methods of making the same |
| US6902932B2 (en) * | 2001-11-16 | 2005-06-07 | Tissue Regeneration, Inc. | Helically organized silk fibroin fiber bundles for matrices in tissue engineering |
| US20110009960A1 (en) * | 2001-11-16 | 2011-01-13 | Allergan, Inc. | Prosthetic fabric structure |
| EP1472394A1 (en) * | 2002-01-09 | 2004-11-03 | E. I. du Pont de Nemours and Company | Polypeptide fibers and processes for making them |
| EP1558444B1 (en) * | 2002-06-24 | 2016-09-21 | Tufts University | Silk biomaterials and methods of use thereof |
| WO2004062697A2 (en) | 2003-01-07 | 2004-07-29 | Tufts University | Silk fibroin materials and use thereof |
| DK2374919T3 (da) * | 2003-03-11 | 2013-08-05 | Allergan Inc | Biokompatibelt helingsunderstøttende silkestof |
| EP1613796B1 (en) | 2003-04-10 | 2017-03-22 | Tufts University | Concentrated aqueous silk fibroin solution and use thereof |
| WO2005000483A1 (en) * | 2003-06-06 | 2005-01-06 | Tufts University | Method for forming inorganic coatings |
| WO2005123114A2 (en) | 2004-06-11 | 2005-12-29 | Trustees Of Tufts College | Silk-based drug delivery system |
| KR100762928B1 (ko) | 2004-10-29 | 2007-10-04 | 재단법인서울대학교산학협력재단 | 견 피브로인 나노섬유로 이루어진 부직포 형태의 골조직유도 재생용 차폐막 및 그 제조방법 |
| US9102916B2 (en) * | 2007-02-27 | 2015-08-11 | Trustees Of Tufts College | Tissue-engineered silk organs |
| JP2010522042A (ja) | 2007-03-20 | 2010-07-01 | セリカ テクノロジーズ インコーポレイティッド | 腱の人工装具およびその製造方法 |
| KR101839659B1 (ko) | 2007-05-29 | 2018-03-16 | 트러스티즈 오브 터프츠 칼리지 | 음파 처리를 이용한 실크 피브로인 겔화 방법 |
| JP2011511668A (ja) * | 2008-02-07 | 2011-04-14 | トラスティーズ オブ タフツ カレッジ | ３次元絹ハイドロキシアパタイト組成物 |
| GB0807868D0 (en) * | 2008-04-30 | 2008-06-04 | Knight David P | Cartilage repair material and a method for the preparation thereof |
| US9040073B2 (en) * | 2008-05-15 | 2015-05-26 | Trustees Of Tufts College | Silk polymer-based adenosine release: therapeutic potential for epilepsy |
| US8501172B2 (en) * | 2008-09-26 | 2013-08-06 | Trustees Of Tufts College | pH-induced silk gels and uses thereof |
| KR20110094277A (ko) * | 2008-10-09 | 2011-08-23 | 트러스티즈 오브 터프츠 칼리지 | 글리세롤을 함유하는 변성 실크 필름 |
| CA2745571C (en) | 2008-12-15 | 2015-03-24 | Allergan, Inc. | A prosthetic device and method of manufacturing the same |
| US9204953B2 (en) | 2008-12-15 | 2015-12-08 | Allergan, Inc. | Biocompatible surgical scaffold with varying stretch |
| US9326840B2 (en) | 2008-12-15 | 2016-05-03 | Allergan, Inc. | Prosthetic device and method of manufacturing the same |
| US9204954B2 (en) * | 2008-12-15 | 2015-12-08 | Allergan, Inc. | Knitted scaffold with diagonal yarn |
| US9308070B2 (en) | 2008-12-15 | 2016-04-12 | Allergan, Inc. | Pliable silk medical device |
| IN2012DN00445A (it) | 2009-07-14 | 2015-05-15 | Tufts College | |
| WO2011031854A1 (en) * | 2009-09-11 | 2011-03-17 | Allergan, Inc. | Prosthetic device and method of manufacturing the same |
| WO2011038401A2 (en) * | 2009-09-28 | 2011-03-31 | Trustees Of Tufts College | Drawn silk egel fibers and methods of making same |
| WO2011041395A2 (en) | 2009-09-29 | 2011-04-07 | Trustees Of Tufts College | Silk nanospheres and microspheres and methods of making same |
| US9603971B2 (en) | 2010-03-05 | 2017-03-28 | Trustees Of Tufts College | Silk-based ionomeric compositions |
| US8309689B2 (en) | 2010-05-20 | 2012-11-13 | Taipei Medical University | High yield dialysis-free process for producing organosoluble regenerated silk fibroin |
| WO2012031144A2 (en) | 2010-09-01 | 2012-03-08 | Trustees Of Tufts College | Silk fibroin and polyethylene glycol-based biomaterials |
| WO2012054582A2 (en) | 2010-10-19 | 2012-04-26 | Trustees Of Tufts College | Silk fibroin-based microneedles and methods of making the same |
| US10335519B2 (en) | 2011-04-20 | 2019-07-02 | Trustees Of Tufts College | Dynamic silk coatings for implantable devices |
| US10912862B2 (en) | 2012-02-06 | 2021-02-09 | Children's Medical Center Corporation | Multi-layer biomaterial for tissue regeneration and wound healing |
| WO2013152265A1 (en) * | 2012-04-06 | 2013-10-10 | Trustees Of Tufts College | Methods of producing and using silk microfibers |
| KR101313898B1 (ko) | 2012-04-27 | 2013-09-30 | 서울대학교산학협력단 | 히알루론산―도파민 컨쥬게이트로 표면이 개질된 하이드록시아파타이트 나노입자를 포함하는 실크피브로인 나노섬유 및 이를 이용한 지지체 |
| EP2712955A1 (en) | 2012-09-27 | 2014-04-02 | Ludwig Boltzmann Gesellschaft GmbH | Product made of silk |
| CN103446623B (zh) * | 2013-09-18 | 2015-03-11 | 中国人民解放军军事医学科学院卫生装备研究所 | 一种组织工程表皮模型的构建方法 |
| CN103668782B (zh) * | 2013-11-29 | 2016-05-11 | 温州医科大学 | 超薄多孔复合纳米纤维仿生Bruch’s膜的静电纺丝制备方法 |
| KR101573838B1 (ko) * | 2014-06-13 | 2015-12-07 | 대한민국 | 누에고치를 이용한 인공 생체막 및 이의 제조방법 |
| KR101714545B1 (ko) * | 2014-06-26 | 2017-03-15 | 대한민국 | 골조직 형성 촉진용 차폐막의 제조방법 및 이를 이용하여 제조된 골조직 형성 촉진용 차폐막 |
| KR101570717B1 (ko) | 2014-08-04 | 2015-11-24 | 대한민국 | 누에고치를 이용한 치과용 차폐막 및 이의 제조방법 |
| SG11201704010UA (en) * | 2014-08-20 | 2017-06-29 | Silk Tech Ltd | Fibroin-derived protein composition |
| US10611888B2 (en) | 2015-04-23 | 2020-04-07 | Rowan University | Processes of increasing crystallinity alignment of protein films and products thereof |
| US11365292B2 (en) | 2016-03-31 | 2022-06-21 | Ear Science Institute Australia | Silk fibroin glycerol membranes |
| US11298443B2 (en) | 2016-07-01 | 2022-04-12 | Trustees Of Tufts College | Innervated artificial skin |
| CN109862851A (zh) | 2016-08-12 | 2019-06-07 | 蚕丝科技有限公司 | 用于治疗炎症的丝衍生蛋白质 |
| US11549198B2 (en) | 2017-04-17 | 2023-01-10 | Rowan University | Method of producing non-woven protein fibers |
| US20200188178A1 (en) * | 2018-12-18 | 2020-06-18 | National Taiwan University Of Science And Technology | Double-layer dressing containing silk fibroin and a method for making the same |
| CN116392636A (zh) * | 2023-03-29 | 2023-07-07 | 深圳高性能医疗器械国家研究院有限公司 | 蚕丝修复补片及其制备方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US976977A (en) * | 1908-11-27 | 1910-11-29 | Carl Rudolf Baumann | Process for obtaining silk fibroin. |
| US5171505A (en) * | 1990-11-28 | 1992-12-15 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Process for spinning polypeptide fibers |
| DE19841649A1 (de) * | 1998-09-11 | 2000-04-27 | Thueringisches Inst Textil | Verfahren zur Herstellung und produktorientierten Verarbeitung von konzentrierten Lösungen fibrillärer Proteine in NMMNO-Monohydrat |
-
2000
- 2000-10-02 IT IT2000VR000096A patent/IT1316885B1/it active
-
2001
- 2001-09-28 DE DE60115271T patent/DE60115271T2/de not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-28 US US10/398,252 patent/US7285637B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-28 AU AU2001295891A patent/AU2001295891A1/en not_active Abandoned
- 2001-09-28 EP EP01976631A patent/EP1327014B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-28 WO PCT/IT2001/000501 patent/WO2002029141A1/en active IP Right Grant
- 2001-09-28 ES ES01976631T patent/ES2254500T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-28 AT AT01976631T patent/ATE310840T1/de not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2001295891A1 (en) | 2002-04-15 |
| US20040097709A1 (en) | 2004-05-20 |
| WO2002029141A1 (en) | 2002-04-11 |
| ITVR20000096A0 (it) | 2000-10-02 |
| IT1316885B1 (it) | 2003-05-13 |
| US7285637B2 (en) | 2007-10-23 |
| DE60115271T2 (de) | 2006-08-24 |
| EP1327014A1 (en) | 2003-07-16 |
| DE60115271D1 (de) | 2005-12-29 |
| ES2254500T3 (es) | 2006-06-16 |
| EP1327014B1 (en) | 2005-11-23 |
| ATE310840T1 (de) | 2005-12-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ITVR20000096A1 (it) | Procedimento per la preparazione di un tessuto non tessuto in fibroina di seta | |
| Sah et al. | Regenerated silk fibroin from B. mori silkcocoon for tissue engineering applications | |
| CN109847105B (zh) | 一种神经导管支架及其制备方法和应用 | |
| Wang et al. | Exploring natural silk protein sericin for regenerative medicine: an injectable, photoluminescent, cell-adhesive 3D hydrogel | |
| Lawrence et al. | Silk film biomaterials for cornea tissue engineering | |
| Mandal et al. | Biospinning by silkworms: silk fiber matrices for tissue engineering applications | |
| Li et al. | Silk fibroin-based scaffolds for tissue engineering | |
| JP3774466B2 (ja) | キトサンと酸性生体高分子とのハイブリッド繊維および動物細胞培養基材 | |
| KR101640499B1 (ko) | 형질 전환 누에고치로부터 추출한 형광 실크 단백질 용액의 제조 방법 및 이를 이용한 지지체 제조 방법 | |
| ITVR20010098A1 (it) | Procedimento per l'ottenimento di idrogeli di fibroina di seta. | |
| Hu et al. | Preparation of fibroin/recombinant human‐like collagen scaffold to promote fibroblasts compatibility | |
| KR20100121169A (ko) | 실크단백질을 이용한 인공고막 및 그 제조방법 | |
| CN105521525B (zh) | 一种骨组织工程用多孔复合支架及其制备方法 | |
| CN105233336B (zh) | 丝胶蛋白神经导管及其制备方法与应用 | |
| KR100751547B1 (ko) | 조직공학용 지지체 및 그 제조방법, 및 조직공학용지지체를 제조하기 위한 전기방사장치 | |
| Wöltje et al. | Natural biodegradable medical polymers: silk | |
| Dal Pra et al. | Novel dermo-epidermal equivalents on silk fibroin-based formic acid-crosslinked three-dimensional nonwoven devices with prospective applications in human tissue engineering/regeneration/repair | |
| JP5875761B2 (ja) | コラーゲン線維ゲルおよびその用途 | |
| BRPI0815761B1 (pt) | Transportador celular contendo colágeno | |
| Plowman et al. | Fibrous protein nanofibers | |
| EP3439707A1 (en) | Engineered tissues having structural components embedded therein, and methods of making and using | |
| Du et al. | Construction and characterization of three-dimensional silk fibroin-gelatin scaffolds | |
| Pugno et al. | Frontiers in silk science and technology | |
| Wu et al. | Preparation and properties study of polylactic acid/bacterial cellulose composite scaffolds by solvent removal | |
| CN109331225A (zh) | 一种可降解复合神经导管及其制备方法 |