ITMI20101089A1 - Profili di espressione di micro-rna nel sangue periferico per il monitoraggio del sistema immunitario - Google Patents
Profili di espressione di micro-rna nel sangue periferico per il monitoraggio del sistema immunitario Download PDFInfo
- Publication number
- ITMI20101089A1 ITMI20101089A1 IT001089A ITMI20101089A ITMI20101089A1 IT MI20101089 A1 ITMI20101089 A1 IT MI20101089A1 IT 001089 A IT001089 A IT 001089A IT MI20101089 A ITMI20101089 A IT MI20101089A IT MI20101089 A1 ITMI20101089 A1 IT MI20101089A1
- Authority
- IT
- Italy
- Prior art keywords
- mirna
- immune system
- gene product
- lymphocytes
- seq
- Prior art date
Links
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 title claims description 83
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 title claims description 67
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title claims description 46
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 title claims description 21
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 title claims description 21
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 title claims description 15
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims description 128
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 80
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 claims description 55
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 53
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 50
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 claims description 47
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 26
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims description 24
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 19
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 17
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 16
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 14
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 13
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 13
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims description 12
- 230000007170 pathology Effects 0.000 claims description 12
- 230000007815 allergy Effects 0.000 claims description 11
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims description 10
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims description 9
- 201000001263 Psoriatic Arthritis Diseases 0.000 claims description 7
- 208000036824 Psoriatic arthropathy Diseases 0.000 claims description 7
- 206010027654 Allergic conditions Diseases 0.000 claims description 6
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 claims description 6
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 claims description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 claims description 6
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 claims description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 6
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 claims description 5
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 5
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 5
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 4
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 claims description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 230000007257 malfunction Effects 0.000 claims description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 2
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 2
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 68
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 42
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 28
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 13
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 11
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 9
- 230000004044 response Effects 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 7
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 6
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 6
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 108091068670 Arabidopsis thaliana miR159a stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091063727 Homo sapiens miR-564 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 3
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 3
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 230000001185 psoriatic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 2
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 2
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 2
- 229940124589 immunosuppressive drug Drugs 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 11-dehydrocorticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 241000219195 Arabidopsis thaliana Species 0.000 description 1
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N Cortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N Cortisone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)(O)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010013082 Discomfort Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 108091067535 Homo sapiens miR-375 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067554 Homo sapiens miR-381 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091032109 Homo sapiens miR-423 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091032103 Homo sapiens miR-425 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091092227 Homo sapiens miR-489 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064365 Homo sapiens miR-505 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 1
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000010240 RT-PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 108020004688 Small Nuclear RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000039471 Small Nuclear RNA Human genes 0.000 description 1
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108091026822 U6 spliceosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000798 anti-retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940124623 antihistamine drug Drugs 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 229960004544 cortisone Drugs 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 210000000222 eosinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 230000003990 molecular pathway Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 238000011422 pharmacological therapy Methods 0.000 description 1
- 230000008288 physiological mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000005211 primary lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 1
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000000754 repressing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 210000005212 secondary lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA
Description
DESCRIZIONE
Annessa a domanda di brevetto per INVENZIONE INDUSTRIALE avente per titolo:
"PROFILI DI ESPRESSIONE DI MICRO-RNA NEL SANGUE PERIFERICO PER IL MONITORAGGIO DEL SISTEMA IMMUNITARIO"
La presente invenzione si riferisce ad un metodo per monitorare il sistema immunitario di un individuo in condizioni patologiche causate da o associate ad un disfunzionamento del sistema immunitario.
In particolare, dette condizioni patologiche possono essere immunodeficienze, neoplasie del sistema immunitario o patologie immunomediate, per esempio una condizione allergica o una patologia autoimmune.
Inoltre, il metodo della presente invenzione può essere utilizzato per il monitoraggio o "follow-up" di una vaccinazione.
Il sistema immunitario ha la funzione di proteggere l'organismo dall'attacco da parte di agenti estranei, detti antigeni.
La funzione di difesa viene espletata mediante cellule specializzate, definite immunocompetenti, che sono sparse e circolanti e organizzate in organi linfoidi primari e secondari.
Gli elementi cellulari del sistema immunitario sono:
• i linfociti T, B ed i Naturai Killer (NK);
· i macrofagi (che derivano dai monociti ematici circolanti che generano la grande famiglia di cellule che "presentano 1'antigene" ovvero le Antigen Presenting Celi "APC").
Altre cellule immunocompetenti circolanti nel sangue sono i granulociti neutrofili, granulociti eosinofili e granulociti basofili.
Questo sistema fine ed efficiente di difesa dell'organismo può a volte alterarsi funzionalmente fino a portare, in alcuni casi, alla compromissione dell'organismo.
Nelle immunodeficienze, per esempio, si assiste ad una aumentata suscettibilità alle infezioni e ad alcune neoplasie dovuta all'assenza o all'inefficienza di alcune parti del sistema immunitario. L'assenza o l'inefficienza del sistema immunitario può essere congenita o acquisita per via farmacologica o infettiva (come nella Sindrome da Immunodeficienza Acquisita).
Per quanto riguarda le patologie immunomediate, esse possono essere causate da o associate ad anomalie funzionali del sistema immunitario che si manifestano con uno "sbilanciamento" della sua attività verso una determinata linea cellulare. Ciò che si può verificare è un'attività incontrollata della linea cellulare interessata nelle sue fasi di maturazione e, conseguentemente, una compromissione delle sue funzioni effettrici .
Le reazioni di ipersensibilità e le allergie rappresentano particolari condizioni cliniche immunomediate, spesso transitorie, anch'esse correlate ad un disfunzionamento del sistema immunitario.
Tali condizioni sono caratterizzate da una esagerata attività del sistema immunitario in risposta ad antigeni innocui, definiti allergeni. La forma più comune di una tale disfunzione, la cosiddetta allergia in senso stretto, è mediata da IgE e si associa all'attivazione dei mastociti.
Tra le altre condizioni patologiche che coinvolgono un disfunzionamento del sistema immunitario destano particolare interesse anche le malattie autoimmuni, ovvero quelle patologie in cui la risposta immune è rivolta contro antigeni "propri", cioè verso i costituenti normali dell'organismo. Quest'ultimo rappresenta un meccanismo fisiologico del sistema immunitario atto alla produzione di minime quantità di autoanticorpi utili per mantenere e migliorare la capacità dell'organismo di discriminare tra ciò che è "proprio" e "non-proprio", ossia tra gli elementi ad esso appartenenti rispetto a quelli ad esso estranei. Questa capacità peculiare del sistema immunitario, prende il nome di tolleranza.
Le malattie autoimmuni comprendono quel gruppo di patologie correlate all'alterazione di questo fine meccanismo e che sono caratterizzate da una produzione sostenuta di anticorpi in grado di colpire singoli organi o di innescare malattie sistemiche capaci, in casi estremi, di compromettere completamente alcune funzioni dell'individuo.
Esempi di malattie autoimmuni sono il lupus eritematoso sistemico, l'artrite reumatoide, la spondilite anchilosante , la sclerosi multipla, il diabete mellito di tipo 1 e l'artrite psoriasica.
Le sopraindicate disfunzioni del sistema immunitario possono interessare le popolazioni linfocitarie, in particolare i linfociti T.
I linfociti T sono delle cellule che si originano dal midollo osseo, ma che maturano nel timo, dove acquisiscono sia la specifica capacità funzionale, sia il concetto di "self". Una volta maturi, i linfociti T lasciano la ghiandola e si ritrovano nel sangue periferico ed all'interno dei tessuti linfoidi. Essi esprimono le proteine di membrana CD4 o CD8, in una maniera mutuamente esclusiva.
Le cellule T che esprimono il CD4 vengono genericamente denominate linfociti T helper (TH)e rappresentano, generalmente, le cellule che regolano le risposte immunitarie adattative e le malattie infiammatorie.
Queste cellule possono essere suddivise in diverse categorie principali, a seconda della loro funzione, della risposta a diverse citochine e della capacità di secernere citochine.
L'opinione attuale è che le cellule THsiano in origine precursori cellulari che producono Interleuchina-2 (IL-2) . In seguito alla stimolazione iniziale, queste cellule si trasformano in cellule CD4<+>T naive (TH0), le quali hanno la capacità di secernere diverse citochine, compresi l'Interferone gamma (IFN-γ), l'IL-2, l'IL-4, 1 'IL-5 e l'IL-10.
In base alla citochina disponibile, le cellule TH0 possono dare origine a diverse cellule TH.
In particolare, l'IFN-γ e l'IL-12 promuovono lo sviluppo delle cellule TH1, deputate alla regolazione dell'immunità cellulare. Queste cellule grazie alla caratteristica produzione di IFN-γ e all'attivazione di macrofagi, mediano la protezione nei confronti dei patogeni intracellulari ed, inoltre, sono responsabili delle risposte di ipersensibilità ritardata.
La presenza di IL-4 e di IL-10, invece, promuove il differenziamento delle cellule TH2 in grado di modulare l'immunità umorale e le risposte allergiche. Queste cellule, inoltre, mediante la produzione di IL-4, IL-5 ed IL-13, contribuiscono alla protezione dai parassiti extracellulari .
Recentemente è stata isolata e caratterizzata una nuova linea di linfociti T helper, distinta dalle cellule TH1 e Th2 e definita TH17 per la sua capacità di secernere IL-17.
Questa linea di linfociti T riveste un ruolo fondamentale nell'autoimmunità e nell'infiammazione. Il differenziamento dei linfociti TH17 a partire dai precursori indifferenziati è guidato, durante la risposta immune, da citochine e fattori trascrizionali specifici .
In particolare è stato dimostrato che il differenziamento in vitro di queste cellule è inibito dalla presenza dei linfociti TH1 e TH2. Alla luce del ruolo chiave delle cellule TH17 nell'autoimmunità e nell'infiammazione, si ritiene che, in condizioni normali, esista un meccanismo fine che controlla le cellule TH17 reprimendole. Questo meccanismo sembrerebbe essere mediato da citochine coinvolte nella biologia dei linfociti TH1 e TH2.
Le terapie attualmente più accreditate per combattere le immunodeficienze sono essenzialmente terapie farmacologiche. Per esempio le terapie utilizzate per combattere l'AIDS, si basano su farmaci antiretrovirali appartenenti a diverse classi farmacologiche ed ognuna caratterizzata da un diverso meccanismo d'azione. Tutti questi farmaci non sono in grado di uccidere il virus, ma agiscono bloccandone la replicazione. Tali farmaci, pertanto, ad oggi non sono curativi ed i pazienti in trattamento, anche se hanno una carica virale non rilevabile nel sangue, devono comunque ritenersi sempre potenzialmente infettanti.
Inoltre, la terapia farmacologica è spesso complicata dalla difficile tollerabilità dei farmaci, i quali possono provocare effetti collaterali che ne richiedono la sospensione e che determinano un impegno notevole da parte del paziente al fine di rispettare le dosi e le modalità di assunzione. Infine, i farmaci utilizzati hanno una difficile capacità di penetrazione nei vari distretti dell'organismo, difficoltà che impedisce l'attacco al virus in questi distretti; tale difficoltà è accompagnata anche dalla possibile insorgenza di resistenze che rendono inefficace l'azione dei farmaci utilizzati .
In generale, l'atteggiamento terapeutico attuale nei confronti dell'immunodeficienza segue il motto "Colpisci presto, Colpisci forte", ovvero si preferisce iniziare la terapia più precocemente di quanto non venisse fatto in passato. Il razionale di questa strategia consiste nell<1>iniziare il prima possibile la terapia in modo da bloccare la replicazione virale quando il sistema immunitario è ancora efficiente e quindi in grado di recuperare pienamente le sue funzioni. In questo modo si evita la possibilità che insorgano mutazioni nella popolazione virale in grado di indurre resistenza alla terapia stessa.
La possibilità di monitorare il sistema immunitario, la sua funzionalità e le sue risposte, potrebbe rappresentare un valido strumento clinico che potrebbe sia consentire di identificare il momento più opportuno per intraprendere la terapia farmacologica contro l'immunodeficienza, sia seguire il decorso della malattia durante e dopo il trattamento.
Per quanto concerne le allergie, invece, gli approcci terapeutici specifici disponibili prevedono la somministrazione di farmaci in grado di bloccare gli anticorpi o di farmaci antistaminici. Nelle forme più acute vengono somministrati i farmaci cortisonici che sono in grado di bloccare il sistema immunitario con più decisione, ma provocano, contemporaneamente, una maggiore tossicità.
In generale, quello che si effettua terapeuticamente è una vera e propria immunoterapia vaccinica attraverso la quale si cerca di riparare all'errore del sistema immunitario, inducendo una sorta di "abitudine" alla presenza delle sostanze allergizzanti. Questo approccio terapeutico, tuttavia ha degli aspetti limitanti che riguardano da una parte il fatto che un individuo allergico ad una sostanza può allergizzarsi ad altre; d'altro canto si verifica che il sistema immunitario, in molti casi, continua comunque a perseverare nell'errore. Per quanto concerne le patologie autoimmuni, gli approcci terapeutici attuabili sono spesso strettamente legati alle singole patologie e di solito si limitano unicamente ad alleviare i disagi ad esse associate piuttosto che a debellare alla radice la causa che la scatena.
Il trattamento terapeutico nei confronti delle patologie autoimmuni spesso prevede il controllo, mediante farmaci, dei vari aspetti fisiologici della risposta immunitaria, come per esempio l'infiammazione.
I farmaci più accreditati sono gli steroidi oppure possono essere utilizzati i farmaci immunosoppressori. La somministrazione dei farmaci steroidi può dare origine a molti effetti collaterali avversi, tuttavia la pratica viene attuata ugualmente sulla base del bilancio benefici-effetti avversi.
I farmaci immunosoppressori , invece, inibiscono la divisione delle cellule, comprese le cellule che non appartengono al sistema immunitario, e quindi, anche in questo caso, l'effetto può risultare molto pericoloso. Sulla base delle limitate possibilità terapeutiche attuabili nei confronti delle condizioni patologiche causate da o associate ad un disfunzionamento del sistema immunitario, è sentita una forte esigenza di individuare nuovi metodi terapeutici atti a prevenire, controllare e/o curare dette condizioni patologiche, ed a migliorare i disagi ad esse associati e quindi la qualità della vita del paziente.
Allo stesso tempo è anche molto sentita l'esigenza di poter disporre di metodi per valutare il rischio di compromissione della funzionalità del sistema immunitario, oppure metodi per monitorare l'efficacia di una terapia atta a curare una condizione patologica causata o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario o per monitorare l'evolversi di condizioni mediate dal sistema immunitario, per esempio monitorare una risposta ad una vaccinazione.
Tali metodi terapeutici risulterebbero utili innanzitutto per il miglioramento della salute umana, inoltre contribuirebbero ad ammortizzare i costi sociali della sanità.
I problemi tecnici sopra descritti sono risolti da un metodo per monitorare il sistema immunitario di un individuo come delineato nelle annesse rivendicazioni. La presente invenzione riguarda un metodo per monitorare il sistema immunitario (in particolare, la funzionalità del sistema immunitario) di un individuo, preferibilmente quando questo individuo è affetto da una condizione patologica causata da o associata al disfunzionamento del sistema immunitario. Il metodo dell'invenzione può anche essere impiegato per monitorare l'evolversi di condizioni mediate dal sistema immunitario (per esempio, per monitorare la risposta ad una vaccinazione).
Tale metodo per monitorare il sistema immunitario di un individuo (in particolare la sua funzionalità) è utile per la diagnosi, la prognosi, la prevenzione, il controllo e/o la cura di una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario stesso.
Inoltre, tale metodo per monitorare il sistema immunitario di un individuo è utile per valutare il rischio di compromissione della funzionalità del sistema immunitario stesso, oppure per monitorare l'efficacia di una terapia atta a curare una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario di un individuo, o per monitorare in un individuo l'evolversi di condizioni mediate dal sistema immunitario, quali per esempio la risposta ad una vaccinazione.
Il metodo secondo la presente invenzione comprende la misurazione, preferibilmente mediante RT-PCR quantitativa, del livello di espressione di almeno un prodotto genico di un microRNA (miRNA) in un campione di sangue periferico oppure in un campione di fluido biologico, ed il confronto di detto livello di espressione misurato con un livello di riferimento.
In particolare detto almeno un prodotto genico di un miRNA è espresso dalle popolazioni linfocitarie, preferibilmente dai linfociti T, più preferibilmente dai linfociti T helper che esprimono la proteina di membrana CD4 .
Per esempio, i linfociti T helper che esprimo la proteina CD4 sono CD4<+>T naive, TH1, TH2, TH17.
L'alterazione dei livelli di espressione del prodotto genico di un miRNA in un campione del soggetto in analisi, rispetto ad un campione o ad un livello di controllo, è indicativa del fatto che nel soggetto esiste un disfunzionamento del sistema immunitario o c'è un aumentato rischio che si verifichi un disfunzionamento del sistema immunitario. Tale metodo è, quindi, utile per la diagnosi o per la prevenzione di condizioni patologiche causate da o associate al disfunzionamento del sistema immunitario.
Inoltre, l'alterazione dei livelli di espressione del prodotto genico di un miRNA in un campione del soggetto in analisi, rispetto ad un campione o ad un livello di controllo è indicativa dell'efficacia, dell'evoluzione e dell'esito di una terapia contro una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario di un individuo.
L'alterazione dei livelli di espressione del prodotto genico di un miRNA in un campione del soggetto in analisi, rispetto ad un campione o ad un livello di controllo è anche indicativa dell'evoluzione di una condizione patologica e quindi della sua prognosi.
Infine, l'alterazione dei livelli di espressione del prodotto genico di un miRNA in un campione del soggetto in analisi, rispetto ad un campione o ad un livello di controllo è indicativa del "follow-up" di una vaccinazione in un individuo sottoposto a detta vaccinazione .
Ulteriori caratteristiche e vantaggi del metodo secondo la presente invenzione appariranno maggiormente chiari dai risultati sperimentali illustrati nelle unite figure, in cui:
la Figura 1 mostra una rappresentazione grafica mediante gradiente di colore (heatmap) dei valori di DCt (Ct: ciclo soglia) per i miRNA sovra-espressi (pannello superiore) e per i miRNA sotto-espressi (pannello inferiore) nella popolazione linfocitaria CD4<+>T naive rispetto alle popolazioni linfocitarie TH1, TH2e TH17. - la Figura 2 mostra una rappresentazione grafica mediante gradiente di colore (heatmap) dei valori di DCt (Ct: ciclo soglia) per i miRNA sovra-espressi (pannello superiore) e per i miRNA sotto-espressi (pannello inferiore) nella popolazione linfocitaria TH1, rispetto alle popolazioni linfocitarie CD4<+>T naive, TH2 e TH17. la Figura 3 mostra una rappresentazione grafica mediante gradiente di colore (heatmap) dei valori di DCt (Ct: ciclo soglia) per i miRNA sovra-espressi (pannello superiore) e per i miRNA sotto-espressi (pannello inferiore) nella popolazione linfocitaria TH2, rispetto alle popolazioni linfocitarie CD4<+>T naive, TH1 e TH17.
la Figura 4 mostra una rappresentazione grafica mediante gradiente di colore (heatmap) dei valori di DCt (Ct: ciclo soglia) per i miRNA sovra-espressi (pannello superiore) e per i miRNA sotto-espressi (pannello inferiore) nella popolazione linfocitaria TH17, rispetto alle popolazioni linfocitarie CD4<+>T naive, TH1 e TH2. - la Figura 5 mostra i risultati dell'analisi mediante RT quantitative PCR dei miRNA hsa-miR-564 e hsa-miR-200 nel sangue di pazienti affetti da artrite psoriasica rispetto ai donatori sani.
Secondo l'invenzione, per condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario si intende quella condizione in cui il sistema immunitario manifesta un funzionamento improprio che può condurre alla compromissione dell<1>integrità dell<1>organismo.
Preferibilmente, detta condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario è scelta tra le immunideficienze, le neoplasie del sistema immunitario e le patologie immunomediate .
Le patologie immunomediate sono, preferibilmente, scelte tra: una condizione allergica e una patologia autoimmune .
Detta patologia autoimmune è, preferibilmente, scelta tra: lupus eritematoso sistemico, artrite reumatoide, spondilite anchilosante, sclerosi multipla, diabete mellito di tipo 1 e artrite psoriasica.
Preferibilmente, la funzionalità del sistema immunitario in un individuo affetto da una condizione patologica secondo la presente invenzione o la risposta del sistema immunitario di un individuo in seguito ad una vaccinazione è effettuata monitorando il funzionamento delle popolazioni linfocitarie, in particolare i linfociti T.
Preferibilmente, tali linfociti T sono i linfociti T helper esprimenti la proteina CD4; più preferibilmente sono i linfociti CD4<+>T Naive, TH1, TH2, TH17 o loro combinazioni .
Detto monitoraggio è, in particolare, effettuato misurando il livello di espressione di almeno un prodotto genico di un miRNA, espresso da dette popolazioni linfocitarie.
Il monitoraggio di tali linfociti può essere utile per diagnosticare o prognosticare, oppure per valutare il rischio di sviluppare una patologia immunomediata o una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario CD4<+>T Naivedipendente, THl-dipendente, TH2-dipendente o TH17-dipendente, per monitorare l'efficacia di una terapia contro una patologia immunomediata o una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario CD4<+>T Naive-dipendente, TH1-dipendente, TH2-dipendente o TH17-dipendente, attraverso il metodo dell'invenzione che si basa sul confronto tra i livelli di espressione del prodotto genico di specifici miRNA (nel sangue o nei liquidi biologici di un paziente) espressi dai linfociti CD4<+>T Naive, TH1, Th2 O Th17 prima e dopo l'insorgere di una condizione patologica CD4<+>T Naive-dipendente, TH1-dipendente, TH2-dipendente o TH17-dipendente, oppure in fasi diverse di detta condizione patologica rispetto ad un livello di controllo.
In particolare, le condizioni allergiche possono essere determinate da o associate ad alterazioni nel normale funzionamento dei linfociti CD4<+>T Naive e/o TH2. Tali popolazioni cellulari possono essere utilizzate per diagnosticare o prognosticare oppure per valutare il rischio di sviluppare un'allergia, o per monitorare l'efficacia di una terapia contro un'allergia, attraverso il metodo dell'invenzione che si basa sul confronto tra i livelli di specifici miRNA (nel sangue o nei liquidi biologici di un paziente) espressi dai linfociti CD4<+>T Naive e/o TH2prima e dopo l'insorgere della condizione allergica, oppure in fasi diverse della condizione allergica rispetto ad un livello di controllo .
In particolare, le patologie autoimmunitarie, ad esempio il lupus eritematoso sistemico, l'artrite reumatoide, la spondilite anchilosante, la sclerosi multipla, il diabete mellito di tipo 1 e l'artrite psoriasica, possono essere determinate da o possono essere associate ad alterazioni nel normale funzionamento dei linfociti CD4<+>T Naive e/o TH17. Tali popolazioni cellulari possono essere utilizzate per diagnosticare o prognosticare una patologia autoimmune, oppure per valutare il rischio di sviluppare una patologia autoimmune o per monitorare l'efficacia di una terapia contro una patologia autoimmune, attraverso il metodo dell'invenzione che si basa sul confronto tra i livelli di specifici miRNA (nel sangue o nei liquidi biologici di un paziente) espressi dai linfociti CD4<+>T Naive e/o TH17 prima e dopo l'insorgere della patologia autoimmune, oppure in fasi diverse della patologia autoimmune rispetto ad un livello di controllo.
Alcuni stati della risposta immunitaria sono determinati da una reazione fisiologica indotta dei linfociti CD4<+>T Naive e/o TH1, per esempio in seguito ad una vaccinazione, in cui un antigene somministrato in forma attenuata evoca una risposta immunitaria.
I linfociti CD4<+>T Naive e/o TH1 possono, quindi, essere utilizzati per monitorare il follow-up di una vaccinazione, attraverso il metodo dell'invenzione che si basa sul confronto tra i livelli di specifici miRNA (nel sangue o nei liquidi biologici di un paziente) espressi dai linfociti CD4<+>T Naive e/o TH1 prima e dopo la vaccinazione oppure in fasi diverse della risposta ad una vaccinazione rispetto ad un livello di controllo. I miRNA sono molecole naturalmente presenti in molti organismi inclusi animali, piante e virus e svolgono un ruolo fondamentale nel controllo dell'espressione genica, regolando, in modo specifico, la stabilità e la traduzione degli RNA messaggeri (mRNA). I miRNA sono espressi inizialmente come lunghe molecole di RNA precursori, i pri-miRNA, che, attraverso un complesso meccanismo di processamento nucleo-citoplasmatico, vengono trasformati nella forma matura (miRNA) caratterizzata da una lunghezza di 17-24 nucleotidi. La funzione di molti miRNA non è nota; tuttavia, diversi studi hanno dimostrato il ruolo chiave che i miRNA hanno nella regolazione genica in molte funzioni biologiche fondamentali come l'apoptosi, lo sviluppo ematopoietico ed il differenziamento cellulare.
La rilevanza biologica e clinica dei profili dell'espressione dei miRNA è stata dimostrata nei tumori solidi umani (come il tumore alla mammella) e nella leucemia linfatica cronica.
Ulteriore prerogativa dei miRNA è la loro presenza, in una forma stabile RNA resistente, nel sangue (siero e plasma) ed in diversi altri fluidi biologici. Recentemente è stato dimostrato che il sangue di pazienti affetti da carcinoma alla prostata o cancro ovarico evidenziano dei profili di espressione di miRNA peculiari .
Per gli scopi della presente invenzione, 1'almeno un prodotto genico di un miRNA utilizzato nel metodo è almeno un miRNA.
L 'almeno un prodotto genico di un miRNA è scelto, singolarmente od in combinazione, nel gruppo costituito da SEQ ID NO: 1-151.
In una forma preferita dell'invenzione, 1 'almeno un prodotto genico di un miRNA è selezionato, singolarmente od in combinazione, nel gruppo costituito da SEQ ID NO: 1-3 e SEQ ID NO: 19-58, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 67-101, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 18, 102, 109, e 111-138; più preferibilmente è scelto nel gruppo costituito da: SEQ ID NO: 1, 3, 18, 27, 32-33, 48, 58, 67, 79, 84, 92, 111-116, 118-119, 121-124, 126, 128, 130, 132-133, e 137.
Tali sequenze di miRNA sono caratterizzate da un livello di espressione relativa maggiore in un campione di un soggetto affetto da una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario rispetto ad un controllo, oppure in un campione di un soggetto in cui sia stata eseguita una vaccinazione rispetto ad un controllo.
In un'altra forma preferita di realizzazione della presente invenzione, 1'almeno un prodotto genico di un miRNA è selezionato, singolarmente od in combinazione, nel gruppo costituito da SEQ ID NO: 4-18 e SEQ ID NO: 59-66, SEQ ID NO: 102-110 e SEQ ID NO: 139-151 e SEQ ID NO: 37, 92; più preferibilmente è scelto nel gruppo costituito da: SEQ ID NO: 9, 18, 144 e 149.
Tali sequenze di miRNA sono caratterizzate da un livello di espressione relativa minore in un campione di un soggetto affetto da una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario rispetto ad un controllo, oppure in un campione di un soggetto in cui sia stata eseguita una vaccinazione rispetto ad un controllo.
Una ulteriore forma di realizzazione della presente invenzione riguarda 1'almeno un prodotto genico di un miRNA selezionato, singolarmente od in combinazione, nel gruppo costituito da SEQ ID NO: 18, 102, 109 e SEQ ID NO: 111-138.
Tali sequenze di miRNA sono caratterizzate da un livello di espressione relativa maggiore in un campione di un soggetto affetto da una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario rispetto ad un controllo o in un campione di un soggetto in cui sia stata eseguita una vaccinazione rispetto ad un controllo.
In particolare, tali miRNA sono sovraespressi dalle popolazioni linfocitarie CD4<+>T naive.
In una ulteriore forma di realizzazione della presente invenzione, 1<1>almeno un prodotto genico di un miRNA è selezionato, singolarmente od in combinazione, nel gruppo costituito da SEQ ID NO: 1-3.
Tali sequenze di miRNA sono caratterizzate da un livello di espressione relativa maggiore in un campione di un soggetto in cui sia stata eseguita una vaccinazione rispetto ad un controllo.
In particolare, tali miRNA sono sovraespressi dalle popolazioni linfocitarie TH1.
Un'altra forma di realizzazione dell'invenzione descrive 1<1>almeno un prodotto genico di un miRNA selezionato, singolarmente od in combinazione, nel gruppo costituito da SEQ ID NO: 19-58, SEQ ID NO: 10 e SEQ ID NO: 14.
Tali sequenze di miRNA sono caratterizzate da un livello di espressione relativa maggiore in un campione di un soggetto affetto da una allergia rispetto ad un controllo .
In particolare, tali miRNA sono sovraespressi dalle popolazioni linfocitarie TH2.
Una ulteriore forma di realizzazione della presente invenzione riguarda 1<1>almeno un prodotto genico di un miRNA selezionato, singolarmente od in combinazione, nel gruppo costituito da SEQ ID NO: 67-101 e SEQ ID NO: 5.
Tali sequenze di miRNA sono caratterizzate da un livello di espressione relativa maggiore in un campione di un soggetto affetto da una malattia autoimmune rispetto ad un controllo.
In particolare, tali miRNA sono sovraespressi dalle popolazioni linfocitarie TH17.
Una ulteriore forma di realizzazione della presente invenzione riguarda 1'almeno un prodotto genico di un miRNA selezionato, singolarmente od in combinazione, nel gruppo costituito da SEQ ID NO: 37, 92 e SEQ ID NO: 139-151.
Tali sequenze di miRNA sono caratterizzate da un livello di espressione relativa minore in un campione di un soggetto affetto da una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario rispetto ad un controllo, o in un campione di un soggetto in cui sia stata eseguita una vaccinazione rispetto ad un controllo.
In particolare, tali miRNA sono sottoespressi dalle popolazioni linfocitarie CD4<+>T naive.
In una ulteriore forma di realizzazione della presente invenzione, 1'almeno un prodotto genico di un miRNA è selezionato, singolarmente od in combinazione, nel gruppo costituito da SEQ ID NO: 4-18.
Tali sequenze di miRNA sono caratterizzate da un livello di espressione relativa minore in un campione di un soggetto in cui sia stata eseguita una vaccinazione rispetto ad un controllo.
In particolare, tali miRNA sono sottoespressi nelle popolazioni linfocitarie TH1.
Un'altra forma di realizzazione dell'invenzione descrive 1'almeno un prodotto genico di un miRNA selezionato, singolarmente od in combinazione, nel gruppo costituito da SEQ ID NO: 59-66.
Tali sequenze di miRNA sono caratterizzate da un livello di espressione relativa minore in un campione di un soggetto affetto da una allergia rispetto ad un controllo .
In particolare, tali miRNA sono sottoespressi dalle popolazioni linfocitarie TH2.
Una ulteriore forma di realizzazione della presente invenzione riguarda 1'almeno un prodotto genico di un miRNA selezionato, singolarmente od in combinazione, nel gruppo costituito da SEQ ID NO: 102-110.
Tali sequenze di miRNA sono caratterizzate da un livello di espressione relativa minore in un campione di un soggetto affetto da una malattia autoimmune rispetto ad un controllo.
In particolare, tali miRNA sono sottoespressi dalle popolazioni linfocitarie TH17.
In una forma preferita di realizzazione della presente invenzione 1'almeno un prodotto genico di un miRNA è selezionato tra le sequenze: SEQ ID NO: 18, 37, 92, 102, 109 e 111-151 ed è sovraespresso o sottoespresso in un soggetto affetto da una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario rispetto ad un controllo, o in un campione di un soggetto in cui sia stata eseguita una vaccinazione rispetto ad un controllo.
In una forma preferita di realizzazione della presente invenzione 1'almeno un prodotto genico di un miRNA è selezionato tra le sequenze: SEQ ID NO: 1-18, preferibilmente SEQ ID NO: 1, 3 e 18, ed è sovraespresso o sottoespresso in un soggetto a cui sia stata eseguita una vaccinazione rispetto ad un controllo.
In una forma preferita di realizzazione della presente invenzione 1'almeno un prodotto genico di un miRNA è selezionato tra le sequenze: SEQ ID NO: 19-66, SEQ ID NO: 10 e SEQ ID NO: 14, preferibilmente SEQ ID NO: 27, 32, 33, 48, 58, ed è sovraespresso o sottoespresso in un soggetto affetto da un'allergia rispetto ad un controllo.
In una forma preferita di realizzazione della presente invenzione 1<1>almeno un prodotto genico di un miRNA è selezionato tra le sequenze: SEQ ID NO: 67-110 e SEQ ID NO: 5, preferibilmente SEQ ID NO: 67, 79, 84 e 92 ed è sovraespresso o sottoespresso in un soggetto affetto da malattia autoimmune rispetto ad un controllo.
Il metodo oggetto della presente invenzione è preferibilmente realizzato in vitro, in particolare su campioni di sangue o fluido biologico di un soggetto umano .
Il campione di sangue periferico oggetto dell'indagine può essere sangue intero, cellule mononucleate periferiche del sangue, siero o plasma isolati (ex vivo) .
II campione oggetto dell'indagine può essere anche un qualsiasi fluido biologico, per esempio urina o saliva. Il metodo descritto si riferisce ad una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario di un individuo, in particolare, tale condizione è una allergia o una malattia autoimmune, in uno stadio avanzato o anche precoce.
Il metodo dell'invenzione è impiegato per diagnosticare se un soggetto è affetto da una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario oppure se è a rischio di sviluppare tale condizione patologica verificando l'eventuale alterazione dei livelli di espressione di almeno un prodotto genico di un miRNA in un campione di sangue periferico o di fluido biologico del soggetto in analisi, rispetto ad un campione o ad un livello di controllo .
Il metodo dell'invenzione è anche impiegato per definire la prognosi di una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario mediante la comparazione dei livelli di espressione di almeno un prodotto genico di un miRNA in un campione di sangue periferico o di fluido biologico di un soggetto affetto da una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario ed un livello di riferimento. L'alterazione dei livelli di espressione dell'almeno un prodotto genico di un miRNA in un campione del soggetto in analisi, rispetto a un campione di riferimento è indicativa del grado di avanzamento della condizione patologica, dal quale è possibile dedurre la prognosi della condizione stessa. Il metodo dell'invenzione viene anche utilizzato per monitorare l'efficacia di un trattamento terapeutico diretto contro una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario, in particolare il trattamento di una allergia o di una patologia autoimmune, in particolare il lupus eritematoso sistemico, l'artrite reumatoide, la spondilite anchilosante, la sclerosi multipla, il diabete mellito di tipo 1 e l'artrite psoriasica.
In questo caso il metodo comprende la comparazione dei livelli di espressione di almeno un prodotto genico di un miRNA in un campione di sangue periferico o di fluido biologico del soggetto in analisi con un campione od un livello di riferimento. L'alterazione dei livelli di espressione dell'almeno un prodotto genico di un miRNA in un campione del soggetto in analisi, rispetto ad un campione dello stesso soggetto in fasi diverse del trattamento terapeutico in oggetto, è indicativa dell'efficacia del trattamento stesso.
In alternativa, il metodo per determinare l'efficacia di un trattamento terapeutico diretto contro una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario comprende la comparazione dei livelli di espressione di almeno un prodotto genico di un miRNA in un campione di sangue periferico di un paziente affetto da una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario e soggetto ad un trattamento terapeutico diretto contro detta condizione patologica, ed un campione di sangue periferico di un paziente affetto da una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario e non soggetto ad un trattamento terapeutico diretto contro detta condizione patologica. L'alterazione dei livelli di espressione del prodotto genico di un miRNA tra i due gruppi di pazienti è indicativa della validità e dell'efficacia o meno di un nuovo metodo di trattamento terapeutico diretto contro una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario.
Il metodo dell'invenzione viene anche utilizzato per il follow-up di una vaccinazione. In questo caso il metodo comprende la comparazione dei livelli di espressione di almeno un prodotto genico di un miRNA in un campione di sangue periferico del soggetto vaccinato rispetto ad un controllo, nei giorni successivi alla pratica di vaccinazione ed agli eventuali richiami, preferibilmente dopo 15-30 giorni dalla vaccinazione.
In un'altra forma di realizzazione, il metodo secondo la presente invenzione può anche essere utilizzato in combinazione con altri metodi diagnostici/prognostici attualmente in uso, integrando validamente tali tecniche di indagine.
Per esempio, il metodo può essere applicato in combinazione con microarray, analisi proteomiche ed immunologiche , analisi di sequenziamento di specifiche sequenze di DNA, allo scopo di poter definire un approccio terapeutico ad hoc per il singolo paziente. Il completamento delle informazioni cliniche provenienti dalle tecniche di indagine note e quella oggetto della presente invenzione aiuterebbe ad affrontare la cura del paziente, affetto da una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario in maniera completamente personalizzata e vantaggiosa sia per quanto riguarda il rischio di sviluppare una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario, sia per la diagnosi, per la prognosi e la terapia di una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario.
In un'altra forma di realizzazione, il metodo dell'invenzione può essere utilizzato per identificare nuovi bersagli terapeutici.
Infatti, ciascun miRNA ha la capacità di regolare l'espressione di centinaia di geni e quindi può modulare l'attività di molte vie molecolari di trasduzione del segnale all'interno della cellula. Pertanto, i pannelli di miRNA identificati nel sangue periferico di un soggetto affetto da una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario, riflettono la biologia del danno o tumore primario .
Tali miRNA sono utili come biomarcatori nell'identificazione della condizione patologica, per definire la risposta alle terapie e per la sorveglianza di eventuali ricorrenze di una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario. Tali miRNA sono anche utili per definire le vie molecolari alterate in una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario e contribuire, quindi, a identificare nuovi bersagli terapeutici.
La presente invenzione si riferisce anche ad una composizione farmaceutica, per trattare una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario, comprendente un carrier farmaceuticamente accettabile ed almeno un prodotto genico di miRNA isolato, e/o un acido nucleico ad esso complementare, che risulta essere up o down regolato nel sangue periferico di un soggetto affetto da una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario, rispetto ad un campione di controllo adatto. L'almeno un prodotto genico di miRNA isolato è scelto, singolarmente od in diverse combinazioni, tra le sequenze identificate precedentemente.
La presente invenzione si riferisce ulteriormente ad un metodo per identificare una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario che comprende un passaggio in cui si somministra una sostanza test a cellule isolate (exvivo) . Dopo la somministrazione, si misura il livello di almeno un prodotto genico di un miRNA la cui aumentata espressione è associata ad una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario.
Successivamente si confronta il livello di espressione di detto almeno un prodotto genico di un miRNA nelle cellule trattate rispetto a cellule di controllo. Un abbassamento di detto livello di espressione, è indicativo del fatto che la sostanza test è utile nel trattamento della condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento del sistema immunitario .
PARTE SPERIMENTALE ESEMPIO 1
Le indagini sono state effettuate sui linfociti TH1, TH2, Th17e CD4<+>T naive isolati da sangue periferico di donatori sani. L'RNA totale è stato estratto utilizzando il kit mirVanaTM miRNA Isolation Kit (Cat# AM1561-Ambion). Un'aliquota del campione estratto (10 ng di RNA totale) è stata sottoposta alla reazione di retrotrascrizione condotta, utilizzando il kit TaqMan<®>MicroRNA Reverse Transcription, in presenza di una soluzione di MgCl25 mM (Part no. 4366597 - Applied Biosystems). Come primers per la retrotrascrizione sono stati utilizzati MegaplexTM RT Primers, un set di 2 pools predefiniti (Pool A e Pool B) di 380 RT primers ognuno, che permette la sintesi simultanea di cDNAs da miRNA maturi (MegaplexTM RT Primers Human Pool A, Part No.: 4399966; Human Pool B, Part No.: 4399968 - Applied Biosystems) . Volume finale di reazione (μ]3): 7.5.
Condizioni di incubazione per un ciclo di reazione:
16 °C 2 min
42 °C 1 min
50<0>C 1 sec
85 °C 5 min
4 °C ∞
(per 40 cicli)
Il cDNA, così prodotto, è stato pre-amplificato (2.5 μϋ. dei 7.5) utilizzando TaqMan PreAmp Master Mix (2x) (Part No.: 4384266 - Applied Biosystems) e MegaplexTM PreAmp Primers, un set di 2 pools di primers gene-specifici, forward e reverse (Megaplex™ PreAmp Primers, Human Pool A, Part no. 4399233; Human Pool B (Part no. 4399201 -Applied Biosystems). Volume finale di reazione (μΐ,): 25.
Condizioni di incubazione:
95 °C 10 min
55 °C 2 min
72 °C 2 min
95 °C 15 sec
60 °C 4 min x 12 cicli
4 °C∞
Il cDNA pre-amplif icato è stato utilizzato per la reazione di real-time PCR. La reazione è stata condotta utilizzando TaqMan Universal PCR Master Mix, No Amperase UNG, 2X (Part No: 4326614 - Applied Biosystems) in 900 μΐ,finali e caricata su 2 set di cards di microfluidica, TaqMan<®>Human MicroRNA Low Density Arrays (Part No.: 4400238 - Applied Biosystems), a 384 pozzetti ognuna, contenenti sonde TaqMan. Tale analisi (Array A e Array B) consente la quantificazione dei livelli di espressione genica di 665 miRNA e dei relativi controlli (http://www3.appliedbiosvsteims.com/cims/aroups/portal/documents/qene raldocuments/cms 052133.xls).
Il valore di Ct medio di tre diversi snRNA cellulari, U6 snRNA, RNU44 e RNU48, può essere usato come controllo interno per calcolare la relativa espressione genica. L'espressione relativa di ogni miRNA può essere calcolata utilizzando l'equazione 2<"Act>, dove ACt = (Ct miRNA) - (Ct etri interno).
L'espressione relativa di ogni miRNA, determinata attraverso la PCR, può essere calcolata utilizzando metodi standard per cui le popolazioni linfocitarie in esame vengono prese a turno come riferimento e paragonate alle altre popolazioni linfocitarie rimanenti. I dati di espressione ottenuti (ACt) per ogni miRNA vengono confrontati e vengono selezionati i miRNA per cui sussiste una differenza maggiore di 1.5 (in valore assoluto) tra il suo valore ACt nella popolazione di riferimento e i relativi valori ACt in tutte le altre popolazioni.
Le figure 1, 2, 3 e 4 riportano i risultati di tali selezioni visualizzati in grafici "heatmap" per le quattro popolazioni linfocitarie, in un gradiente di espressione bianco/nero (bianco per gli espressi e nero per i non espressi) e in due gruppi per ogni popolazione: quelli sovra espressi nella popolazione di riferimento (pannello superiore) e quelli sotto espressi nella popolazione di riferimento (pannello inferiore) . L'analisi per "RT quantitative PCR" ha mostrato la presenza di 18 miRNA, elencati nella Tabella 1, che sono presenti in quantità maggiore o inferiore nei linfociti TH1 rispetto ai linfociti TH2, TH17 o alle cellule CD4<+>T naive .
Tabella 1:
Nome miRNA Sequenza miRNA Numero sequenza miRNA
hsa-miR-135b UAUGG CUUUUCAUU CCUAUGUGA SEQ ID NO: 1 hsa-miR-375 UUUGUUCGUUCGGCUCGCGUGA SEQ ID NO: 2 hsa-miR-381 UAUACAAGGGCAAGCUCUCUGU SEQ ID NO: 3 hsa-miR-128 UCACAGUGAACCGGUCUCUUU SEQ ID NO: 4 hsa-miR- ACAGUAGU CUGCACAUUGGUUA SEQ ID NO: 5 199a-3p
hsa-miR-200b UAAUACUGCCUGGUAAUGAUGA SEQ ID NO: 6 hsa-miR-339- UCCCU GUCCUCCAGGAGCU CACG SEQ ID NO: 7 5p
hsa-miR-423 - UGAGGGGCAGAGAGCGAGACUUU SEQ ID NO: 8 5p
hsa-miR-425* AUCGGGAAUGUCGUGUCCGCCC SEQ ID NO: 9 hsa-miR-489 GUGACAUCACAUAUACGGCAGC SEQ ID NO: 10 hsa-miR-505* GGGAGCCAGGAAGUAUUGAUGU SEQ ID NO: 11 hsa-miR- 513- UAAAUUU CACCUUUCUGAGAAGG SEQ ID NO: 12 3p
hsa-miR- UGCUUCCUUUCAGAGGGU SEQ ID NO: 13 516a-3p
hsa-miR- CUACAAAGGGAAGC C CUUUC SEQ ID NO: 14
In particolare nella Tabella 2 sono riportati i miRNA presenti in quantità maggiore nei linfociti TH1 rispetto ai linfociti TH2, TH17 o alle cellule CD4<+>T naive.
Tabella 2:
Lista dei miRNA sovraespressi nei linfociti TH1 (rispetto ai Naive e altri T helper), con un minimo di 1.5 CT.
In particolare nella Tabella 3 sono riportati i miRNA presenti in quantità minore nei linfociti TH1 rispetto a ai linfociti TH2, TH17 o alle cellule CD4<+>T naive.
Tabella 3:
Lista dei miRNA sottoespressi nei linfociti TH1 (rispetto ai Naive e altri T helper), con un minimo di 1.5 CT.
ESEMPIO 2
Le indagini sono state effettuate su linfociti TH2 isolati da sangue periferico di donatori sani. Un'analisi per "RT quantitative PCR" , condotta ed analizzata come riportato nell'esempio 1, ha mostrato la presenza di 50 miRNA, descritti nella Tabella 4, che sono presenti in quantità maggiore o inferiore nei linfociti Th2 rispetto a ai linfociti TH1, TH17o alle cellule CD4<+>T naive.
Tabella 4
In particolare, i miRNA riportati nella Tabella 5 sono presenti in quantità maggiore nei linfociti TH2 rispetto ai linfociti TH1, TH17 o alle cellule CD4<+>T naive.
Tabella 5
Lista dei miRNA sovraespressi nei linfociti TH2 (rispetto ai Naive e altri T helper), con un minimo di 1.5 CT
In particolare, i miRNA riportati nella Tabella 6 sono presenti in quantità minore nei linfociti TH2 rispetto ai linfociti TH1, TH17 o alle cellule CD4<+>T naive.
Tabella 6:
Lista dei miRNA sottoespressi nei linfociti TH2 (rispetto ai Naive e altri T helper), con un minimo di 1.5 CT
ESEMPIO 3
Le indagini sono state effettuate su linfociti TH17 isolati da sangue periferico di donatori sani. Un'analisi per "RT quantitative PCR", condotta ed analizzata come riportato nell'esempio 1, ha mostrato la presenza di 45 miRNA, descritti nella Tabella 7, che sono presenti in quantità maggiore o inferiore nei linfociti Th17 rispetto a linfociti TH1, TH2 o alle cellule CD4<+>T naive.
Tabella 7
In particolare, i miRNA riportati nella Tabella 8 sono presenti in quantità maggiore nei linfociti TH17 rispetto a linfociti TH1, TH2 o alle cellule CD4<+>T naive.
Tabella 8
Lista dei miRNA sovraespressi nei linfociti TH17 (rispetto ai Naive e altri T helper), con un minimo di 1.5 CT
In particolare, i miRNA riportati nella Tabella 9 sono presenti in quantità minore nei linfociti TH17 rispetto a linfociti TH1, Th2 O alle cellule CD4<+>T naive.
Tabella 9
Lista dei miRNA sottoespressi nei linfociti TH17(rispetto ai Naive e altri T helper), con un minimo di 1.5 CT
ESEMPI04
Le indagini sono state effettuate su linfociti CD4<+>T naive isolati da sangue periferico di donatori sani.
Un'analisi per "RT quantitative PCR" , condotta ed analizzata come riportato nell'esempio 1, ha mostrato la presenza di 46 miRNA, descritti nella Tabella 10, che sono presenti in quantità maggiore o inferiore nei linfociti CD4<+>T naive rispetto ai linfociti TH1, TH2 o ai TH17.
Tabella 10
In particolare, nella Tabella 11 sono riportati i miRNA presenti in quantità maggiore nei linfociti CD4<+>T naive sani rispetto ai linfociti TH1, TH2 o ai TH17.
Tabella 11
Lista dei miRNA sovraespressi nei linfociti CD4<+>T Naive (rispetto ai linfociti TH1, TH2 o ai TH17), con un minimo di 1.5 CT
In particolare, nella Tabella 12 sono riportati i miRNA presenti in quantità minore nei linfociti CD4<+>T naive sani rispetto ai linfociti TH1, TH2 o ai TH17.
Tabella 12
Lista dei miRNA sottoespressi nei linfociti CD4<+>T Naive (rispetto ai linfociti TH1, TH2 o ai TH17), con un minimo di 1.5 CT
ESEMPIO 5
Le indagini sono state effettuate su 13 soggetti psoriasici .
Il tessuto analizzato è costituito da sangue periferico ed il controllo sperimentale è rappresentato dal sangue periferico di donatori sani.
L 'RNA totale è stato estratto da 70 μΐ di siero utilizzando il kit mirVanaTM miRNA Isolation Kit (Cat# AM1561- Ambion) . Come normalizzatore quantitativo è stato aggiunto l'RNA sintetico ath-miR159a (3 fmoli per aliquota di siero) , microRNA di Arabidopsis thaliana non espresso nell'uomo. Un'aliquota di campione (3 /iL dei 50 μϋι totali di RNA estratto) è stata sottoposta alla reazione di retrotrascrizione condotta, utilizzando il kit TaqMan<®>MicroRNA Reverse Transcription, in presenza di una soluzione di MgCl25 mM (Part no. 4366597 Applied Biosystems) . Come primers per la retrotrascrizione sono stati utilizzati Primers, specifici per il hsa-miR564, specificamente espresso dai linfociti Th17 e per 1'ath-miR159a (Applied Biosystem Assay ID 001531 e Assay ID 000338) . Volume finale di reazione (μΐθ : 15.
Condizioni di incubazione per un ciclo di reazione:
16 °C 30 min
42 °C 30 min
85 °C 5 min
4 °C ∞
(per 40 cicli)
Lo stesso volume di cDNA prodotto da siero di pazienti psoriasici e donatori sani è stato utilizzato per la reazione di real-time PCR. La reazione è stata condotta utilizzando TaqMan Universal PCR Master Mix, No Amperase UNG, 2X (Part No: 4326614 - Applied Biosystems) in 20μΒ finali finali con primers e sonda Taqman specidifci per l'hsa-miR564 e ath-miR159a (Applied Biosystem Assay ID 001531 e Assay ID 000338).
Il controllo interno ath-miR159a può essere usato per calcolare la relativa espressione genica. L'espressione relativa di ogni miRNA può essere calcolata utilizzando l'equazione 2 dove ACt = (Ct miRNA) - (Ct athmiR159a) .
Nella Figura 5 sono rappresentati i valori di tale analisi di RT-PCR.
In particolare, i valori di hsa-miR-564 (Seq ID NO: 92), che è maggiormente espresso nella popolazione linfocitaria CD4<+>TH17, mostrano un incremento nel sangue dei pazienti affetti da artrite psoriasica rispetto ai controlli (donatori sani) . Un'analoga analisi condotta su un miRNA controllo (hsa-miR-200 ) non mostra differenze significative tra pazienti psoriasici e donatori sani.
Claims (17)
- RIVENDICAZIONI 1. Metodo per monitorare il sistema immunitario di un individuo, comprendente le fasi di: a) misurare il livello di espressione di almeno un prodotto genico di un miRNA scelto tra SEQ ID NO: 1-151 o loro combinazioni; b) confrontare detto livello di espressione misurato con un livello di riferimento, caratterizzato dal fatto che detta misurazione del livello di espressione di almeno un prodotto genico di un miRNA è effettuata in un campione isolato di sangue periferico o fluido biologico.
- 2. Metodo secondo la rivendicazione 1, in cui detto individuo è affetto da una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento di detto sistema immunitario, oppure detto individuo è sottoposto ad una vaccinazione.
- 3. Metodo secondo la rivendicazione 1 o 2, per la diagnosi, prognosi o prevenzione di una condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento di detto sistema immunitario, o per valutare il rischio di compromissione della funzionalità di detto sistema immunitario, o per monitorare l'efficacia di un trattamento terapeutico per detta condizione patologica causata da o associata ad un disfunzionamento di detto sistema immunitario.
- 4. Metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni dalla 1 alla 3, in cui detto almeno un prodotto genico di un miRNA è espresso da popolazioni linfocitarie del sistema immunitario, preferibilmente dai linfociti T.
- 5. Metodo secondo la rivendicazione 4, in cui detti linfociti T sono linfociti T helper esprimenti la proteina CD4 , preferibilmente sono linfociti CD4<+>T naive, TH1, TH2, TH17 o loro combinazioni.
- 6. Metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni dalla 1 alla 5, in cui dette condizioni patologiche causate da o associate ad un disfunzionamento del sistema immunitario sono scelte tra immunodeficienze, neoplasie del sistema immunitario, patologie immunomediate , dette patologie immunomediate essendo, preferibilmente, condizioni allergiche o patologie autoimmuni .
- 7. Metodo secondo la rivendicazione 6, in cui dette patologie autoimmuni sono scelte tra: lupus eritematoso sistemico, artrite reumatoide, spondilite anchilosante, sclerosi multipla, diabete mellito di tipo 1 o artrite psoriasica .
- 8. Metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni dalla 1 alla 7, in cui detto almeno un prodotto genico di un miRNA è selezionato tra: SEQ ID NO: 1-3, 5, 10, 14, 18, 19-58, 67-101, 102, 109 e 111-138, preferibilmente è selezionato tra: SEQ ID NO: 1, 3, 18, 27, 32-33, 48, 58, 67, 79, 84, 92, 111-116, 118-119, 121-124, 126, 128, 130, 132-133, e 137.
- 9. Metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni dalla 1 alla 7, in cui detto almeno un prodotto genico di un miRNA è selezionato tra: SEQ ID NO: 4-18, 37, 92, 59-66, 102-110 e 139-151, più preferibilmente è scelto tra: SEQ ID NO: 9, 18, 144 e 149.
- 10. Metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni dalla 1 alla 9, in cui detto almeno un prodotto genico di un miRNA è selezionato tra: SEQ ID NO: 18, 37, 92, 102, 109 e 111-151 ed è sovraespresso o sottoespresso in un soggetto affetto da una condizione patologica causata da un disfunzionamento del sistema immunitario rispetto ad un controllo o in un soggetto in cui sia stata eseguita una vaccinazione rispetto ad un controllo, preferibilmente detto almeno un prodotto genico di un miRNA è sovra o sottoespresso dai linfociti CD4+ T Naive.
- 11. Metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni dalla 1 alla 9, in cui detto almeno un prodotto genico di un miRNA è selezionato tra: SEQ ID NO: 1-18 ed è sovra o sotto espresso in un soggetto a cui sia stata eseguita una vaccinazione rispetto ad un controllo, preferibilmente detto almeno un prodotto genico di un miRNA è sovra o sottoespresso dai linfociti TH1.
- 12. Metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni dalla 1 alla 9, in cui detto almeno un prodotto genico di un miRNA è selezionato tra: SEQ ID NO: 10, 14 e 19-66 ed è sovra o sottoespresso in un soggetto affetto da un'allergia rispetto ad un controllo, preferibilmente detto almeno un prodotto genico di un miRNA è sovra o sotto espresso dai linfociti TH2.
- 13. Metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni dalla 1 alla 9, in cui detto almeno un prodotto genico di un miRNA è selezionato tra: SEQ ID NO: 5, 67-110 ed è sovra o sottoespresso in un soggetto affetto da una malattia autoimmune rispetto ad un controllo, preferibilmente detto almeno un prodotto genico di un miRNA è sovra o sottoespresso dai linfociti TH17.
- 14. Metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni dalla 1 alla 13, in cui detto campione di sangue periferico è scelto tra sangue intero, cellule mononucleate periferiche del sangue, siero o plasma; detto campione di fluido biologico è scelto tra urina o saliva .
- 15. Uso del metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni dalla 1 alla 14 per identificare nuovi bersagli terapeutici.
- 16. Composizione farmaceutica comprendente un carrier farmaceuticamente accettabile ed almeno un prodotto genico di miRNA, isolato, secondo una qualsiasi delle rivendicazioni dalla 1 alla 14 e/o un acido nucleico ad esso complementare.
- 17. Composizione secondo la rivendicazione 16 per l'uso nel trattamento di una condizione patologica causata da un disfunzionamento del sistema immunitario.
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT001089A ITMI20101089A1 (it) | 2010-06-16 | 2010-06-16 | Profili di espressione di micro-rna nel sangue periferico per il monitoraggio del sistema immunitario |
| CA2802950A CA2802950A1 (en) | 2010-06-16 | 2011-06-15 | Monitoring of immune system using peripheral blood micro-rna expression profile analysis and uses thereof |
| US13/703,730 US20130165497A1 (en) | 2010-06-16 | 2011-06-15 | Monitoring of immune system using peripheral blood micro-rna expression profile analysis and uses thereof |
| AU2011266620A AU2011266620A1 (en) | 2010-06-16 | 2011-06-15 | Monitoring of immune system using peripheral blood micro-RNA expression profile analysis and uses thereof |
| PCT/IB2011/052599 WO2011158191A1 (en) | 2010-06-16 | 2011-06-15 | Monitoring of immune system using peripheral blood micro-rna expression profile analysis and uses thereof |
| EP11738813.2A EP2582844A1 (en) | 2010-06-16 | 2011-06-15 | Monitoring of immune system using peripheral blood micro-rna expression profile analysis and uses thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT001089A ITMI20101089A1 (it) | 2010-06-16 | 2010-06-16 | Profili di espressione di micro-rna nel sangue periferico per il monitoraggio del sistema immunitario |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ITMI20101089A1 true ITMI20101089A1 (it) | 2011-12-17 |
Family
ID=43216526
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| IT001089A ITMI20101089A1 (it) | 2010-06-16 | 2010-06-16 | Profili di espressione di micro-rna nel sangue periferico per il monitoraggio del sistema immunitario |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20130165497A1 (it) |
| EP (1) | EP2582844A1 (it) |
| AU (1) | AU2011266620A1 (it) |
| CA (1) | CA2802950A1 (it) |
| IT (1) | ITMI20101089A1 (it) |
| WO (1) | WO2011158191A1 (it) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MX2013005875A (es) | 2010-12-15 | 2014-04-30 | Miragen Therapeutics | Inhibidores de microarn que comprenden nucleotidos bloqueados. |
| WO2013020926A1 (en) * | 2011-08-11 | 2013-02-14 | Febit Holding Gmbh | Complex sets of mirnas as non-invasive biomarkers for psoriasis |
| JP6177243B2 (ja) | 2011-10-06 | 2017-08-09 | ミラゲン セラピューティクス， インコーポレイテッド | マイクロｒｎａの調節による全身エネルギーホメオスタシスの制御 |
| WO2013131567A1 (en) | 2012-03-07 | 2013-09-12 | Febit Holding Gmbh | Mirna based treatment monitoring in multiple sclerosis |
| EP2653554A1 (en) * | 2012-04-17 | 2013-10-23 | Istituto Nazionale Di Genetica Molecolare-INGM | Immune response biomarkers |
| EP2864482A4 (en) | 2012-06-21 | 2016-02-10 | Miragen Therapeutics Inc | OLIGONUCLEOTIDE INHIBITORS COMPRISING A BLOCKED NUCLEIC ACID PATTERN |
| SG11201705907XA (en) | 2015-01-20 | 2017-08-30 | Miragen Therapeutics Inc | Mir-92 inhibitors and uses thereof |
| CN105567838B (zh) * | 2016-02-02 | 2019-04-16 | 首都医科大学附属北京佑安医院 | miR-331-5p作为急性HIV感染检测标志物中的应用 |
| WO2018008017A1 (en) * | 2016-07-03 | 2018-01-11 | Hadasit Medical Research Services And Development Ltd. | Circulating micrornas as biomarkers for therapy in neuromyelitis optica (nmo) and multiple sclerosis (ms) |
| JP2019050772A (ja) * | 2017-09-15 | 2019-04-04 | 国立大学法人 熊本大学 | ワクチン接種後副反応を予測する検査方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20070161004A1 (en) * | 2004-05-28 | 2007-07-12 | David Brown | Methods and compositions involving microRNA |
| WO2008142567A2 (en) * | 2007-05-18 | 2008-11-27 | Karolinska Institutet Innovations Ab | Microrna molecules associated with inflammatory skin disorders |
| US20090123933A1 (en) * | 2007-11-12 | 2009-05-14 | Wake Forest University Health Sciences | Microrna biomarkers in lupus |
| WO2009085234A2 (en) * | 2007-12-20 | 2009-07-09 | Signal Pharmaceuticals, Inc. | Use of micro-rna as a biomarker of immunomodulatory drug activity |
| EP2133431A1 (en) * | 2007-11-02 | 2009-12-16 | Jiangsu Mingma Biotech CO., LTD | Micrornas in serum/blood plasma and their uses |
-
2010
- 2010-06-16 IT IT001089A patent/ITMI20101089A1/it unknown
-
2011
- 2011-06-15 CA CA2802950A patent/CA2802950A1/en not_active Abandoned
- 2011-06-15 EP EP11738813.2A patent/EP2582844A1/en not_active Withdrawn
- 2011-06-15 AU AU2011266620A patent/AU2011266620A1/en not_active Abandoned
- 2011-06-15 WO PCT/IB2011/052599 patent/WO2011158191A1/en active Application Filing
- 2011-06-15 US US13/703,730 patent/US20130165497A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20070161004A1 (en) * | 2004-05-28 | 2007-07-12 | David Brown | Methods and compositions involving microRNA |
| WO2008142567A2 (en) * | 2007-05-18 | 2008-11-27 | Karolinska Institutet Innovations Ab | Microrna molecules associated with inflammatory skin disorders |
| EP2133431A1 (en) * | 2007-11-02 | 2009-12-16 | Jiangsu Mingma Biotech CO., LTD | Micrornas in serum/blood plasma and their uses |
| US20090123933A1 (en) * | 2007-11-12 | 2009-05-14 | Wake Forest University Health Sciences | Microrna biomarkers in lupus |
| WO2009085234A2 (en) * | 2007-12-20 | 2009-07-09 | Signal Pharmaceuticals, Inc. | Use of micro-rna as a biomarker of immunomodulatory drug activity |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| BALLABIO ERICA ET AL: "MicroRNA expression in Sezary syndrome: identification, function, and diagnostic potential", BLOOD, vol. 116, no. 7, 6 May 2010 (2010-05-06), pages 1105 - 1113, XP002612685, Retrieved from the Internet <URL:http://bloodjournal.hematologylibrary.org/cgi/content/abstract/116/7/1105> [retrieved on 20101103] * |
| SONKOLY E ET AL: "MicroRNAs: novel regulators in skin inflammation", CLINICAL AND EXPERIMENTAL DERMATOLOGY, BLACKWELL SCIENTIFIC PUBLICATIONS, GB, vol. 33, no. 3, 1 May 2008 (2008-05-01), pages 312 - 315, XP002511185, ISSN: 0307-6938, DOI: DOI:10.1111/J.1365-2230.2008.02804.X * |
| SONKOLY ENIKÖ ET AL: "MicroRNAs: novel regulators involved in the pathogenesis of Psoriasis?", PLOS ONE, PUBLIC LIBRARY OF SCIENCE, SAN FRANCISCO, CA, US, vol. 2, no. 7, 1 July 2007 (2007-07-01), pages E610 - 1, XP002511184, ISSN: 1932-6203, DOI: DOI:10.1371/JOURNAL.PONE.0000610 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20130165497A1 (en) | 2013-06-27 |
| CA2802950A1 (en) | 2011-12-22 |
| AU2011266620A1 (en) | 2013-01-10 |
| WO2011158191A1 (en) | 2011-12-22 |
| EP2582844A1 (en) | 2013-04-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ITMI20101089A1 (it) | Profili di espressione di micro-rna nel sangue periferico per il monitoraggio del sistema immunitario | |
| Friedman et al. | Diverse brain myeloid expression profiles reveal distinct microglial activation states and aspects of Alzheimer’s disease not evident in mouse models | |
| Suárez-Fariñas et al. | Suppression of molecular inflammatory pathways by Toll-like receptor 7, 8, and 9 antagonists in a model of IL-23-induced skin inflammation | |
| US20180147233A1 (en) | Micro-rnas and compositions comprising same for the treatment and diagnosis of serotonin-, adrenalin-, noradrenalin-, glutamate-, and corticotropin-releasing hormone- associated medical conditions | |
| KR20140074997A (ko) | 신경병성 질환에서 마이크로rna | |
| CN110791560B (zh) | 一种用于阿尔茨海默病诊断和/或治疗的miRNA标志物 | |
| WO2015164431A2 (en) | Methods, processes, devices and kits for the measurement of post traumatic stress disorder microrna markers | |
| EP2757157A1 (en) | Modulation of mitophagy and use thereof | |
| CN111748618A (zh) | 一种帕金森病早期诊断的生物标志物及其应用 | |
| Li et al. | MicroRNA-218 alleviates sepsis inflammation by negatively regulating VOPP1 via JAK/STAT pathway. | |
| Laanesoo et al. | Dual role of the miR‐146 family in rhinovirus‐induced airway inflammation and allergic asthma exacerbation | |
| Garchow et al. | HIF-1α and miR-210 differential and lineage-specific expression in systemic lupus erythematosus | |
| CN104694639B (zh) | 一种用于骨质疏松的诊断的血液检测试剂盒 | |
| Wang et al. | Activation of a hippocampal CREB-pCREB-miRNA-MEF2 axis modulates individual variation of spatial learning and memory capability | |
| Liu et al. | MicroRNA-155 regulates MAIT1 and MAIT17 cell differentiation | |
| JP5757032B2 (ja) | ｍｉＲＮＡを利用した慢性肝疾患の線維化の検査方法 | |
| Pangrazzi et al. | Immune dysfunction in the cerebellum of mice lacking the autism candidate gene Engrailed 2 | |
| Laliberté | An examination of the role of MicroRNA-21 in the pathobiology of degenerative cervical myelopathy using human and animal data | |
| KR102011182B1 (ko) | 익상편 과발현 유전자 및 이의 용도 | |
| CN113403390B (zh) | lncRNA在儿童心肌炎诊治中的应用 | |
| CN110585228B (zh) | LncRNA PTPRE-AS1在制备抑制蟑螂提取物诱导的过敏性哮喘药物中的应用 | |
| CN111979239B (zh) | 用于日本血吸虫减虫减卵的siRNA及其应用 | |
| Corbin et al. | Ligand up-regulation does not correlate with a role for CCR1 in pathogenesis in a mouse model of non-lymphocyte-mediated neurological disease | |
| Kight | Defining the Mechanisms that Mediate Sexual Differentiation of the Developing Hippocampus | |
| Jin et al. | Cell-type specific molecular signatures of aging revealed in a brain-wide transcriptomic cell-type atlas |