ITMI20081370A1 - Frazione glicolipidica di cianobatterio per il trattamento delle affezioni del cavo orale - Google Patents
Frazione glicolipidica di cianobatterio per il trattamento delle affezioni del cavo oraleInfo
- Publication number
- ITMI20081370A1 ITMI20081370A1 IT001370A ITMI20081370A ITMI20081370A1 IT MI20081370 A1 ITMI20081370 A1 IT MI20081370A1 IT 001370 A IT001370 A IT 001370A IT MI20081370 A ITMI20081370 A IT MI20081370A IT MI20081370 A1 ITMI20081370 A1 IT MI20081370A1
- Authority
- IT
- Italy
- Prior art keywords
- fraction
- treatment
- glycolipid
- organic solvent
- extract
- Prior art date
Links
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 18
- 241000605862 Porphyromonas gingivalis Species 0.000 claims description 26
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 claims description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 20
- 201000001245 periodontitis Diseases 0.000 claims description 20
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 241000192497 Oscillatoria Species 0.000 claims description 19
- 241000530769 Planktothrix Species 0.000 claims description 17
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 11
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000011109 contamination Methods 0.000 claims description 10
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 10
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 9
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 7
- 208000024693 gingival disease Diseases 0.000 claims description 7
- 208000007565 gingivitis Diseases 0.000 claims description 7
- 239000002324 mouth wash Substances 0.000 claims description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 6
- 235000015218 chewing gum Nutrition 0.000 claims description 5
- 229940112822 chewing gum Drugs 0.000 claims description 5
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 5
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 claims description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 4
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 3
- 241001135235 Tannerella forsythia Species 0.000 claims description 3
- 241000589892 Treponema denticola Species 0.000 claims description 3
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 3
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 229940051866 mouthwash Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 claims description 2
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims 2
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 claims 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 claims 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 claims 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 claims 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 claims 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 claims 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 claims 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 claims 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims 1
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 claims 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 claims 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 36
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 28
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 28
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 11
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 11
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 10
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 9
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 6
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 6
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 6
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 6
- GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N Chlorhexidine Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1NC(N)=NC(N)=NCCCCCCN=C(N)N=C(N)NC1=CC=C(Cl)C=C1 GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 description 5
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 5
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 5
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 5
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 229960003260 chlorhexidine Drugs 0.000 description 5
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 description 5
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 description 5
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 5
- 241001464430 Cyanobacterium Species 0.000 description 4
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 4
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 4
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 4
- -1 polyphosphates Chemical class 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000000606 toothpaste Substances 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 101001074035 Homo sapiens Zinc finger protein GLI2 Proteins 0.000 description 3
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 3
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 3
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 3
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 3
- 102100035558 Zinc finger protein GLI2 Human genes 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 3
- 230000003239 periodontal effect Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 208000002109 Argyria Diseases 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 2
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 2
- 208000005888 Periodontal Pocket Diseases 0.000 description 2
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 241000607662 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Abortusequi Species 0.000 description 2
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEFQLINVKFYRCS-UHFFFAOYSA-N Triclosan Chemical compound OC1=CC(Cl)=CC=C1OC1=CC=C(Cl)C=C1Cl XEFQLINVKFYRCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 2
- 230000002070 germicidal effect Effects 0.000 description 2
- ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N guanidinium thiocyanate Chemical compound SC#N.NC(N)=N ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 229960003500 triclosan Drugs 0.000 description 2
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 2
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 description 1
- JTYRXXKXOULVAP-UHFFFAOYSA-N 1,2-dibromo-3-phenoxybenzene Chemical compound BrC1=CC=CC(OC=2C=CC=CC=2)=C1Br JTYRXXKXOULVAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 3-(2-methoxyethoxy)benzohydrazide Chemical compound COCCOC1=CC=CC(C(=O)NN)=C1 GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000171897 Acacia nilotica subsp nilotica Species 0.000 description 1
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 101710184216 Cardioactive peptide Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 208000006558 Dental Calculus Diseases 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 101100114828 Drosophila melanogaster Orai gene Proteins 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 208000034619 Gingival inflammation Diseases 0.000 description 1
- 101001033249 Homo sapiens Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 1
- 101001055222 Homo sapiens Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 1
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920000388 Polyphosphate Polymers 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000220304 Prunus dulcis Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 108010060804 Toll-Like Receptor 4 Proteins 0.000 description 1
- 102000008233 Toll-Like Receptor 4 Human genes 0.000 description 1
- 102000008228 Toll-like receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108010060888 Toll-like receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000001785 acacia senegal l. willd gum Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 235000020224 almond Nutrition 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000675 anti-caries Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002882 anti-plaque Effects 0.000 description 1
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010256 biochemical assay Methods 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L calcium lactate Chemical compound [Ca+2].CC(O)C([O-])=O.CC(O)C([O-])=O MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960002401 calcium lactate Drugs 0.000 description 1
- 239000001527 calcium lactate Substances 0.000 description 1
- 235000011086 calcium lactate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940105329 carboxymethylcellulose Drugs 0.000 description 1
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 1
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 1
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 1
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 229960001927 cetylpyridinium chloride Drugs 0.000 description 1
- YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M cetylpyridinium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 208000001277 chronic periodontitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000749 chronicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 239000003975 dentin desensitizing agent Substances 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 108010051357 endoexonuclease Proteins 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 125000001153 fluoro group Chemical class F* 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 210000000224 granular leucocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 102000057041 human TNF Human genes 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229940074371 monofluorophosphate Drugs 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007826 nucleic acid assay Methods 0.000 description 1
- 230000009965 odorless effect Effects 0.000 description 1
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 1
- RARSHUDCJQSEFJ-UHFFFAOYSA-N p-Hydroxypropiophenone Chemical compound CCC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 RARSHUDCJQSEFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 208000028169 periodontal disease Diseases 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000001205 polyphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011176 polyphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007112 pro inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 235000020354 squash Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 229940032147 starch Drugs 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000009967 tasteless effect Effects 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 239000004408 titanium dioxide Substances 0.000 description 1
- 229940034610 toothpaste Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/748—Cyanobacteria, i.e. blue-green bacteria or blue-green algae, e.g. spirulina
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Structure Of Telephone Exchanges (AREA)
- Instruments For Viewing The Inside Of Hollow Bodies (AREA)
- Electrical Discharge Machining, Electrochemical Machining, And Combined Machining (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Descrizione della domanda di brevetto per invenzione industriale dal titolo:
FRAZIONE GLICOLIPIDICA DI CIANOBATTERIO PER IL TRATTAMENTO DELLE AFFEZIONI DEL CAVO ORALE
CAMPO DELL'INVENZIONE
La presente invenzione riguarda il Gampo dei coadiuvanti per l'igiene orale e per il trattamento delle affezioni del cavo orale.
TECNICA ANTERIORE
La parodontite à ̈ patologia del cavo orale causata da alcune specie di batteri gram-negativi. Si tratta di una patologia infiammatoria cronica del tessuto orale, caratterizzata da infezioni batteriche croniche che causano la distruzione irreversibile del tessuto di supporto dei denti. Si tratta di una patologia molto diffusa che colpisce, a vari livelli di gravità , circa i 3⁄4 della popolazione adulta (1). Il tessuto subgengivale à ̈ caratterizzato dalla presenza di numerose specie batteriche; tuttavia solo poche di queste sono responsabili dell'inizio e della progressione della parodontite. Si tratta di 4 specie di batteri gram-negativi
(Actinobacillum actinomycetemconcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola ), anaerobi obbligati o facoltativi, che producono una serie di fattori che consentono loro di colonizzare la regione subgengivale, resistere alle difese immunitarie dell'ospite e causare distruzione tissutale (2-4). Di questi, tuttavia, Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) rappresenta il batterio che più frequentemente si associa alla parodontite di stadio avanzato. L'incidenza e il grado di progressione della malattia parodontale coinvolge complesse interazioni tra i batteri periodontopatici e il sistema immunitario dell'ospite. E' stato dimostrato che l'attivazione delle cellule immunitarie dell'ospite da parte di questi batteri e dei loro prodotti porta alla secrezione di una serie di mediatori pro-infiammatori come le citochine e le metalloproteinasi di matrice (MMPs) che modulano la distruzione del tessuto periodontale, inducendo anche osteoclastogenesi (2). Il lipopolisaccaride (LPS), presente sulla parete cellulare dei batteri gram-negativi, rappresenta il principale fattore in grado di scatenare il rilascio di mediatori pro-infiammatori da parte delle cellule immunitarie residenti nella mucosa orale o reclutate durante il processo infettivo, come monociti, macrofagi, leucociti polimorfonucleati, cellule dendritiche (4-6).
Il trattamento dentistico professionale della parodontite à ̈ stato affiancato dall'utilizzo di coadiuvanti dell'igiene orale, ad esempio dentifrici e colluttori, che, preferibilmente, contengono agenti disinfettanti o antibatterici ad ampio spettro di azione, ad esempio il triclosan, la clorexidina o.,_in alcuni casi, antibiotici.
Tuttavia, secondo gli studi più recenti, l'uso di agenti disinfettanti e/o antibatterici di tale genere non à ̈ del tutto consigliabile per diversi motivi, il primo à ̈ sicuramente la presunta tossicità cellulare di alcuni composti ad es. il riclosan, motivo per cui il loro uso à ̈ stato addirittura vietato in alcuni paesi della Comunità Europea; il secondo à ̈ che LPS (o molecole simili a LPS) principale stimolo pro-infiammatorio, non à ̈ inattivato dall'attività germicida comunemente presente nei colluttori e/o dentifrici; quindi il suo effetto quale stimolo pro-infiammatorio si mantiene anche dopo l'eradicazione dell'infezione batterica.
Il terzo motivo à ̈ che l'ampio spettro di attività anti-microbica, ha quale effetto collaterale indesiderato anche l'eliminazione della flora microbica “utile†del cavo orale, cosiddetta “buona†. Non da ultimo, quindi, anche l'utilizzo dei normali presidi per l'igiene orale, non elimina specificamente l'attività pro-infiammatoria.
Pertanto à ̈ altamente auspicabile nel settore dentistico la messa a punto di preparati per l'igiene orale che oltre all'eliminazione dell'agente batterico contribuiscano all'inibizione specifica dello stimolo pro-infiammatorio associato. SOMMARIO
La presente invenzione riguarda la frazione glicolipidica di Oscillatoria Planktothrix sp., per il trattamento e/o la prevenzione delle affezioni gengivali ad eziologia batterica, in cui la contaminazione proteica à ̈ inferiore al 2% e la contaminazione da acidi nucleici à ̈ inferiore al 5%.
L'eziologia à ̈ preferibilmente dovuta ad infezione di un batterio anaerobio selezionato nel gruppo di consistente di: Actinobacillum actinomycetemconcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola e ancor più preferibilmente à ̈ Porphyromonas gingivalis. Le affezioni gengivali sono preferibilmente la gengivite, la parodontite (piorrea).
Ulteriore oggetto dell'invenzione sono composizioni dentistiche comprendenti la frazione glicolipidica sopra ricordata, preferibilmente in quantità compresa tra 0.1 e 100 Î1⁄4g/ml, comprendenti quali eccipienti e/o diluenti, e/o stabilizzanti, e/o additivi, composti adatti per la somministrazione orale ed opzionalmente uno o più principi attivi diversi. Preferibilmente la concentrazione della frazione attiva à ̈ compresa tra 1 e 50 Î1⁄4g/ml, preferibilmente 4-20 Î1⁄4g /ml per paste o gel e 1-5 Î1⁄4g /ml per colluttori. Ulteriore oggetto dell'invenzione à ̈ un procedimento per la preparazione di una. frazione glicolipidica di Oscillatoria Planktothrix sp. adatta per l'uso orale.
DESCRIZIONE DELLE FIGURE
Figura 1. Inibizione della produzione di citochine pro-infiammatorie in presenza di estratto cianobatterico (EC) (20Î1⁄4g/ml) aggiunto contemporaneamente, 30, 60, 120, 240 minuti dopo l'LPS di P. gingivalis. Pannello A: TNF-α; pannello B: IL-6; pannello C: IL-8; pannello D: IL-1β.
DESCRIZIONE DETTAGLIATA DELL'INVENZIONE
Recentemente, Ã ̈ stato dimostrato che un estratto glicolipidico preparato dal cianobatterio Oscillatoria Planktothrix FP1 , Ã ̈ in grado di antagonizzare gli effetti pro-infiammatori scatenati dagli LPS agonisti del recettore TLR4, come l'LPS di E. coli e di S. abortus equi, in cellule dendritiche umane (10).
La presente invenzione nasce dall'ulteriore osservazione che tale estratto antagonizza anche gli effetti pro-infiammatori dell'LPS di Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis).
P. gingivalis rappresenta il batterio che più frequentemente si associa alla parodontite o periodontite cronica, della quale à ̈ stato dimostrato essere l'agente eziologico principale. In particolare, la risposta pro-infiammatoria à ̈ legata alle presenza delle sue componenti purificate LPS e Firn 1, come descritto in (9).
Tali componenti sono attualmente accreditati quali principali responsabili della distruzione del tessuto periodontale associata all'infezione da P. gingivalis , spesso accompagnata da osteoclastogenesi (aumento del numero di osteoclasti responsabili della distruzione del tessuto osseo), e della cronicizzazione dell'infezione.
II trovato della presente invenzione risulta particolarmente sorprendente a fronte dell'attività dimostrata in precedenza verso l'LPS di E. coli e S. abortus equi poiché, mentre in genere gli LPS batterici attivano le cellule dell'immunità innata attraverso l'interazione con il recettore di membrana TLR4 della famiglia dei Tolllike receptors (TLR), l'LPS di P. gingivalis esplica la sua attività anche grazie all'interazione con il recettore TLR2 (7-9).
Secondo un primo aspetto, quindi, l'invenzione riguarda la frazione glicolipidica ottenuta da una coltura di Oscillatoria Planktothrìx sp. il cui isolamento e condizioni di crescita sono descritti in (12), per la prevenzione e/o il trattamento delle affezioni gengivali e della parodontite ad eziologia batterica.
Infatti à ̈ stato dimostrato attraverso gli studi effettuati su una linea cellulare monocitica umana, in vitro, che la frazione glicolipidica di Oscillatoria Planktothrìx sp. à ̈ in grado di antagonizzare gli effetti pro-infiammatori (ossia la produzione di citochine e chemiochine pro-infiammatorie) indotti pricipalmente dall' LPS di P. gingivalis. Pertanto esso risulta un buon candidato per contrastare l'infiammazione gengivale (gengivite) e dell'alveo dentale (parodontite o piorrea), nelle forme lievi o severe, la distruzione del tessuto periodontale associata alla cronicizzazione dell'infezione ed i più gravi fenomeni di osteoclastogenesi che, altrettanto frequentemente, si riscontrano in queste infezioni.
È stato anche dimostrato attraverso studi effettuati in vitro, che gli estratti del cianobatterio, preparati secondo l'invenzione e che presentano un livello di contaminazione proteica inferiore al 2% e da acidi nucleici inferiori a! 5%, non sono citotossici per le cellule di mammifero come rilevato sia in linee cellulari, che in PBMC isolati dal sangue umano. Pertanto à ̈ possibile rivendicare il loro utilizzo nel cavo orale sia sotto forma di composizione per il trattamento professionale delle affezioni gengivali, in particolare della gengivite, della piorrea e della parodontite, che in forma di composizioni coadiuvanti dell'igiene orale, quali colluttori, gel, paste, o dispositivi da sciogliere o masticare in bocca, ad es. chewing-gum o caramelle.
L'assenza di citotossicità dell'estratto dell'invenzione à ̈ stata verificata in sistemi cellulari in vitro fino ad una concentrazione (100 Î1⁄4g/ml) 100 volte superiore alla minima concentrazione efficace.
L'estratto dell'invenzione, preparato come descritto più avanti, à ̈ inodore, incolore ed insapore: pertanto à ̈ anche possibile il suo utilizzo nelle preparazioni alimentari masticabili o scioglibili nel cavo orale ad es. sotto forma di confetti, chewing-gum o caramelle o pasticche (anche in combinazione con altre sostanze attive ad es. con xilitolo) se associato ad altri ingredienti o componenti con le stesse caratteristiche. Le composizioni contenenti l'estratto presentano, quindi, le caratteristiche vantaggiose sia di assenza di citotossicità nelle condizioni descritte, che di qualità organolettiche soddisfacenti.
Al fine di migliorare quest'ultime, tuttavia, le composizioni possono comprendere aromi e coloranti o agenti dolcificanti, in quantità minime.
L'estratto à ̈ convenientemente preparato in forma di composizione adatta alla somministrazione orale e può essere preparato in forma più o meno concentrata come presidio per l'uso professionale nella pulizia dentale e per la prevenzione ed il trattamento della piorrea, della gengiviti più gravi ed in genere delle parodontiti, oppure come coadiuvante dell'igiene orale.
Le composizioni secondo l'invenzione comprendono l'estratto glicolipidico di Oscillatoria Planktothrix sp., preferibilmente in quantità compresa tra 0.1 e 100 pg/ml, più preferibilmente in quantità compresa tra 1 e 50 Î1⁄4g/ml o ancor più preferibilmente 4-20 Î1⁄4g /ml, in genere, per i preparati per il trattamento dentistico professionale, ed 1-5 Î1⁄4g /ml, per i presidi per l'igiene orale.
In un loro aspetto preferito, inoltre, tali composizioni comprendono eccipienti, diluenti e/o altri principi attivi, adatti all'uso nel cavo orale, quali ad esempio: agenti batteriostatici o germicidi, ad es. derivati dell'ammonio quaternario (come il cetilpiridinio cloruro o la clorexidina, oppure surfattanti, detergenti, triclosan e composti simili, ad es. DDDE (2,2,-diidrossi- 5,5 dibromodifenil etere) e stabilizzanti. Quali agenti anti-batterici possono essere utilizzati anche antibiotici, quali ad es. penicillina, eritromicina o tetraciclina o altri farmaci con attività antibatterica.
Le composizioni dell'invenzione possono anche comprendere noti coadiuvanti dell'igiene orale ad es. composti anti-tartaro, quali i polifosfati, agenti anticarie, come i sali di fluoro (ad es. monofluorofosfato), composti antiplacca (quale urea, lattato di calcio o loro analoghi), sali di potassio come agenti desensibilizzanti (ad es. citrato di potassio o analoghi).
L'estratto glicolipidico à ̈ diluibile sia in acqua che in un solvente aprotico come il DMSO ed à ̈ stabile in soluzione acquosa anche quando combinato, ad esempio, con clorexidina. Risulta inoltre stabile al calore.
Nella formulazione come colluttorio, l'estratto cianobatterico à ̈ in soluzione acquosa o diluibile in acqua, mentre nelle composizioni solide (pasta dentifricia, gel, etc. caramelle o chewing-gum ) possono essere presenti agenti addensanti o gelificanti quali polisaccaridi-naturali o sintetici (ad es. carragenano, carbossimetilcellulosa, idrossimetil-cellulosa, destrano, amido, glicerina vegetale), silice amorfa o diossido di titanio, gomme naturali o sintetiche (ad es. gomma arabica) polivinilpirrolidone, polietilen-glicole, o composti in grado di conferire caratteristiche simili, noti al tecnico del ramo.
Secondo un ulteriore aspetto l'invenzione riguarda un procedimento per ottenere la frazione glicolipica da una coltura di Oscillatoria Planktothrix sp., basato su quanto descritto in Yi et al. (11) ed in cui il campione à ̈ trattato a temperatura ambiente, compresa tra 18 e 30°C per un breve tempo di incubazione, almeno 5 minuti, preferibilmente almeno 10, comprendente ulteriori passaggi di purificazione quali almeno una precipitazione della frazione glicolipidica in presenza di sodio acetato e di acetone, dopo l'estrazione con un reagente a base di: un solvente organico, preferibilmente fenolo, un agente caotropico (quale guanidinio tiocianato) quali il Trireagent® (Sigma cat. N T3934) o reagenti analoghi, quali il Trizol® (Invitrogen) e un secondo solvente organico quale il cloroformio, successivi lavaggi con etanolo 70% e la rimozione dei contaminanti proteici mediante digestione con una proteinasi, ad esempio con proteinasi K.
Questi trattamenti aggiuntivi permettono di ottenere una migliore attività specifica in quanto vengono eliminati contaminanti come i fosfolipidi e proteine eterologhe che potrebbero avere un effetto di stimolo sulla produzione di citochine proinfiammatorie e quindi rendere meno efficace l'estratto.
La riduzione della concentrazione di contaminanti rende possibile l'utilizzo dell'estratto grezzo nel cavo orale a concentrazioni più basse. Inoltre la precipitazione con sale (ad es. sodio acetato) ed un solvente organico quale acetone e i lavaggi ulteriori del fondello in etanolo diluito con acqua, consentono di eliminare la presenza anche di tracce residue di solventi tossici necessari per l'estrazione di questo tipo di costituenti cellulari.
Secondo una sua realizzazione preferita, il processo per ottenere l'estratto di Oscillatoria Planktothrix sp. prevede la centrifugazione di una coltura di Cianobatteri che abbia raggiunto la fase stazionaria di crescita, in terreno di coltura, quale il BG11 (Sigma-Aldrich cat. N. C3061), come descritto in Pomati et al (12). Il fondello ottenuto può essere congelato prima del processo di estrazione che avviene, dopo scongelamento, mediante:
a) diluizione del fondello, preferibilmente con uno stesso volume di acqua o di un solvente acquoso;
b) miscelazione con un adeguato volume di soluzione di estrazione (denaturante), descritta in (13), costituita preferibilmente da un reagente a base di un solvente organico polare pratico, preferibilmente fenolo, ed un agente caotropico (quale guanidinio tiocianato) quali il Trireagent® (Sigma cat. N T3934) o reagenti analoghi, quali il Trizol® (Invitrogen), ed un solvente organico aprotico, quale il cloroformio, in proporzione di circa 1 volume di sospensione acquosa di cianobatteri, 2-4 volumi di soluzione di estrazione, preferibilmente circa 3, e cloroformio, circa 0.5-1 volume; c) incubazione della miscela per almeno 5 minuti, più preferibilmente per un tempo di almeno 10 minuti a temperatura ambiente;
d) centrifugazione, preferibilmente a circa 2000xg e raccolta del sovranatante (fase acquosa) contenente la frazione glicolipidica, che può essere misurata mediante dosaggio biochimico ad es. mediante elettroforesi e silver-staining , oppure mediante inibizione del saggio di citotossicità in presenza di LPS.
Il lisato cianobatterico, ottenuto in d), che costituisce il fondello ottenuto con la centrifugazione, può opzionalmente essere ri-estratto per ottenere la frazione glicolipidica riaggiungendo acqua o un tampone acquoso (in quantità circa pari a quella prelevata) e ricentrifugando il campione. Il secondo sovranatante à ̈ unito al precedente e quindi sottoposto ad ulteriori passaggi di:
e) precipitazione mediante aggiunta di un sale, ad es. acetato di sodio (5-20 mM finale) e di un solvente organico, preferibilmente acetone, in quantità di circa 2 volumi e centrifugazione nelle stesse condizioni sopra riportate; f) lavaggio del fondello ottenuto dalla centrifugazione con etanolo diluito con acqua, ad esempio etanolo al 70%, per almeno 1 volta, preferibilmente 2 volte e risospensione dei-fondello in una soluzione acquosa, preferibilmente tamponata, ad es. TRIS 50 mM.
g) trattamento enzimatico dei contaminanti nucleici con endo- eso-nucleasi (ad es. con DNAsi e RNAsi) e successivamente di quelli proteici, mediante digestione con una proteasi, ad es. proteinasi K, preferibilmente in quantità di 100 Î1⁄4g/ml, per un tempo sufficiente (almeno 1 ora a 37°C). Dopo digestione enzimatica il campione viene centrifugato ancora, il sovranatante prelevato ed ulteriormente precipitato con l'aggiunta di un sale (ad es. acetato di sodio, circa 10 mM finale) e un adeguato volume (preferibilmente 2) di acetone o di altro solvente organico, centrifugato nuovamente ed il fondello risospeso in acqua o in soluzione acquosa e separato a livello molecolare con un filtro (o adatto congegno) con taglio (cut off) a 30 k Dalton, eliminando tutto ciò che passa attraverso il filtro e recuperando la frazione lipidica trattenuta, con acqua o con soluzione acquosa tamponata. L'attività della frazione glicolipidica così ottenuta à ̈ misurata mediante test biologici di inibizione dell'attività pro-infiammatoria indotta da LPS (di P. gingivalis o di E. coli) su cellule che producono citochine quali IL-6, IL-8 TNF-alfa e/o IL-1β, ad es. THP1, e/o dosaggio mediante metodi biochimici, ad es. elettroforesi.
E' inteso che il procedimento sopra descritto à ̈ attuabile dal tecnico del ramo con piccole variazioni nelle concentrazioni finali e/o nei volumi riportati e/o nelle condizioni di centrifugazione, senza che l'attività del prodotto finale risulti modificata.
Secondo un ulteriore aspetto l'invenzione riguarda un procedimento di purificazione della frazione glicolipidica descritta in 10) che comprende solo il passaggio g) descritto sopra.
Essenziali per l'uso nel cavo orale sono i passaggi di rimozione delle tracce di solvente organico, ad es. fenolo, e la rimozione della maggiore parte dei contaminanti di tipo proteico.
Infatti l'estratto glicolipidico ottenuto come descritto presenta una contaminazione proteica <2% e una contaminazione da acidi nucleici <5%, la prima determinata mediante metodo Bradford per il dosaggio proteico e la seconda mediante lettura spettrofotometrica a 260nm per il dosaggio degli acidi nucleici.
Secondo un aspetto preferito l'invenzione riguarda un metodo per la prevenzione ed il trattamento di affezioni gengivali, dalle più lievi, quali le gengiviti, alle più gravi, quali la parodontite (piorrea) in tutti i loro stadi, anche nella loro forma cronica, in soggetti affetti da tali disturbi, che consiste nel trattare la cavità orale con una delle composizioni dell'invenzione, nell'applicare paste o gel nel sito di infezione o nell'utilizzare con costanza i presidi per l'igiene orale secondo l'invenzione.
Inoltre, come ricordato sopra, poiché l'attività anti-proinfiammatoria delle composizioni dell'invenzione si esplica anche successivamente all'eradicamento dell'agente batterico, ai fini della presente invenzione, si parla di trattamento e prevenzione perchà ̈ l'infiammazione delle gengive, o dell'alveo dentale nelle forme più gravi di piorrea, determina le conseguenze a livello della sede dentale -formazione di tasche periodontali in prima istanza - che, a loro volta, favoriscono la colonizzazione da parte dei batteri presenti, la ricorrenza dell'infezione e la cronicizzazione della malattia.
Inoltre, come si evidenzia dai dati sperimentali presentati, l'estratto grezzo non antagonizza lo stimolo pro-infiammatorio (nel caso specifico LPS di P. gingivalis) solo quando somministrato insieme ad esso, ma anche quando somministrato prima o successivamente (fino ad almeno 4 ore dopo) ad esso.
Per trattamento e/o prevenzione, si intende sia il trattamento professionale effettuato da un dentista, ad esempio la pulitura delle tasche periodontali, che il mantenimento di una migliore igiene orale con i dispositivi dell'invenzione: paste dentifrice, gel, colluttori, caramelle o chewing-gum ed in genere con le composizioni ed i dispositivi dell'invenzione.
E' altresì compreso nella presente invenzione l'uso cosmetico delle composizioni descritte, per la rimozione l'arrossamento gengivale nei casi più lievi di gengivite.
PARTE SPERIMENTALE
Esempio 1. Preparazione dell'estratto da una coltura di Oscillatoria Planktothrix FP1.
L'estratto fu preparato dal cianobatterio Oscillatoria Planktothrix FP1 (12) adattando l'estrazione a freddo dei lipopolisaccaridi (LPS) finora utilizzata solo per LPS estratto da batteri gram-negativi, descritta in Yi et al. (11) alle necessità attuali.
In dettaglio, i cianobatteri (CCAP N° 1459/45, Scotland UK) furono diluiti 1:1 in acqua, miscelati con 3 volumi (valutati sul volume totale dei cianobatteri diluiti in acqua) di Tri-reagent (Sigma-Aldrich cat. N. T3934) e 1 volume di cloroformio e incubati per 10 minuti a temperatura ambiente.
Al termine dell'incubazione, si centrifugò a 2000xg per 15 min e si raccolse il sovranatante (fase acquosa) contenente la frazione attiva, dosata mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide e colorazione silver staining. Si procedette quindi con un'ulteriore estrazione dai cianobatteri, riaggiungendo acqua (in quantità pari a quella prelevata) e ricentrifugando il campione. I sovranatanti così raccolti vennero precipitati con acetato di sodio (10mM finale), 2 volumi di acetone e centrifugati. Al termine della centrifugazione il sovranatante fu eliminato ed il pellet fu ulteriormente lavato 2 volte con etanolo al 70%. Si procedette quindi eliminando il sovranatante di lavaggio e sciogliendo il pellet in una soluzione di TRIS 50mM per la digestione con RNAsi e DNAsi e quindi con proteinasi K (100 Î1⁄4g/ml) per una incubazione overnight a 37°C. Il giorno successivo si procedette centrifugando il campione a 2000xg per 15 min; si recuperò il sovranatante che fu precipitato in acetato di sodio (10mM finale) e 2 volumi di acetone. Il fondello ottenuto venne risospeso in acqua passato su filtro con taglio ( cut-off) a 30 KD eliminando tutte le componenti con peso molecolare inferiore. Il trattenuto venne ri-diluito in apposito volume di acqua, per ottenere una concentrazione della frazione glicolipidica di almeno 1 mg/ml per i successivi test biologici.
L'estratto così ottenuto presentava una contaminazione proteica <2% e una contaminazione da acidi nucleici <5%.
Esempio 2. inibizione della produzione di citochine pro-infiammatorie indotta dall'LPS del batterio P. gingivalis.
La frazione glicolipidica di Oscillatoria Planktothrix FP1 preparata come descritto nell'esempio precedente, fu utilizzata in vitro per studiare i suoi effetti sulla produzione di citochine pro-infiammatorie in una linea cellulare monocitica umana (THP1). I monociti furono portati alla concentrazione di 0.5x10<6>cellule /ml, seminati in piastre da 24 pozzetti (1 ml/pozzetto) e incubati con LPS di P. gingivalis alla concentrazione di 1Î1⁄4g/ml in assenza o in presenza dell'estratto cianobatterico a diverse concentrazioni (1-20 Î1⁄4g/ml). Colture furono fatte anche in presenza del solo estratto cianobatterico alla concentrazione di 10 Î1⁄4g/ml. Le colture furono poste in incubazione a 37°C in incubatore umidificato al 5% di CO2per 18-20 ore. Al termine dell'incubazione i sovranatanti furono raccolti e le citochine pro-infiammatorie quantificate mediante l'uso di kit ELISA a sandwich Diaclone (human TNF-alfa elisa kit cat. N.950.090.096, human IL-6Lelisa kit cat. N.
950.030.096, human IL-8 elisa kit cat N. 850.050.096, human IL1-beta elisa kit cat N:850.006.096). (5)
I risultati evidenziarono che l'estratto cianobatterico non à ̈ in grado di indurre produzione di citochine pro-infiammatorie in THP-1.
In presenza di 1Î1⁄4g/ml di LPS ultrapuro di P. gingivalis (Invivogen LPS-PG) che stimola la produzione di citochine nella linea monocitaria, l'estratto, aggiunto contemporaneamente all'LPS batterico, va ad inibire in modo significativo la produzione di tumor necrosis factor alfa (TNF-alfa), interleuchina 6 (lL-6), interleuchina 1 beta (IL-1 beta), interleuchina 8 (IL-8) in maniera dose/risposta dipendente.
Considerando come 100% la produzione di citochine infiammatorie indotta dall'LPS di P. gingivalis, alla concentrazione di IÎ1⁄4g/ml l'estratto grezzo si dimostrò in grado di inibire la produzione di TNF-alfa del 90% ± 10, la produzione di IL-6 del 92% ± 5, la produzione di IL-8 del 75% ± 10, la produzione di IL-1 beta del 62% ± 8 (le percentuali rappresentano la media di dati in triplicato).
Alla concentrazione di 20pg/ml l'estratto si dimostrò in grado di inibire fortemente la produzione delle citochine pro-infiammatorie saggiate, con un intervallo tra il 95 e il 100% (Fig. 1). Alla concentrazione di 20Î1⁄4g/ml, l'estratto si dimostrò in grado di esercitare i suoi effetti inibitori anche quando aggiunto alcune ore dopo l' LPS di P. gingivalis (Fig. 1 pannelli 1-4, fino a 4 ore dopo).
Esempio 3. Valutazione delia tossicità , della stabilità e della solubilità dell'estratto cianobatterico in miscele composite.
TossicitÃ
L'estratto di Oscillatoria Planktothrix FP1 fu saggiato sia su diverse linee cellulari (THP1, RAW 264.7, SKMEL-28, HEY4, SHSY-5Y) che su cellule mononucleate ottenute dal sangue periferico (PBMC peripheral blood mononuclear cells) in un intervallo di concentrazione compreso tra 1 e 100Î1⁄4g /ml risultando non tossico anche quando utilizzato alla concentrazione più alta (100Î1⁄4g /ml).
Stabilità in soluzione
L'estratto di Oscillatoria Planktothrix FP1 preparato come descritto nell'esempio 1 , fu miscelato con clorexidina digluconato in acqua per 30 min. a temperatura ambiente e successivamente, dopo purificazione per eliminare la clorexidina, venne ritestato per la sua efficacia su colture cellulari monocitarie. I risultati evidenziarono che l'estratto glicolipidico mantiene la sua attività , misurata come capacità di inibire la produzione di TNF-alfa indotta da LPS di P. gingivalis. Le inibizioni furono del 95%, del 96% del 99% in presenza di estratto a concentrazione rispettivamente di 1, 2, 4 Î1⁄4g/ml, analoghe a quanto rilevato in assenza di clorexidina. Nelle medesime colture venne controllata, al termine del periodo di incubazione, la vitalità cellulare che si dimostrò essere del 100% in tutte le colture effettuate.
Stabilità in una matrice solida
L'estratto di Oscillatoria Planktothrix FP1 fu incorporato in una matrice di idrossietilcellulosa e, dopo un mese, testato per l'attività biologica. Anche in questo caso i risultati evidenziarono che l'estratto glicolipidico mantiene la sua attività biologica con inibizioni del 90%, del 93% del 96% rispettivamente alle concentrazioni di 1, 2, 4 Î1⁄4g /ml, in assenza di effetti sulla vitalità cellulare.
Stabilità al calore
L'estratto di Oscillatoria Planktothrix FP1 preparato come descritto nell'Esempio 1, sciolto in acqua, fu portato a 100°C per 5 min. e successivamente testato per l'attività biologica. Anche in questo caso i risultati evidenziarono che l'estratto glicolipidico mantiene l'attività di inibizione della produzione di TNF-alfa indotta da LPS di P. gingivalis, in assenza di effetti sulla vitalità cellulare.
SolubilitÃ
L'estratto di Oscillatoria Planktothrix FP1 preparato nell'esempio 1, fu dissolto in acqua a diverse concentrazioni fino a 100 volte superiori alla concentrazione ottimale, valutata nell'esperimento descritto nell'esempio 2.
In tabella 1 sono riportati i dati di solubilità in acqua e in dimetilsolfossido (DMSO). Tabella 1: solubilità estratto glicolipidico
RIFERIMENTI BIBLIOGRAFICI
1. Teng Y-TA. 2006. Protective and destructive immunity in the periodontum:
part 1- Innate and humoral immunity and the periodontum. J. Dent. Res.
85:198-208.
2. Bodet C, Chandad F, Grenier D. 2006. Inflammatory responses of a macrophage/epithelial cell co-culture model to mono and mixed infections with Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola, and Tannerella forsythia. Microbes Infection 8:27-35.
3. Bodet C, Chandad F, Grenier D. 2005. Porphyromonas gingivalis-induced inflammatory mediator profile in an ex vivo human whole blood model. Clin. Exp. Immunol. 143:50-57.
4. Wang P-L, Ohura K. 2002. Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide signaling in gingival fibroblasts-CD14 and toll-like receptors. Crit. Rev. Orai. Biol. Med. 13:132:142.
5. Shapira L, Champagne C, Van Dyke TE, Amar S. 1998. Strain-dependent action of monocytes and inflammatory macrophages by lipopolysaccharide of Porphyromonas gingivalis. Infect. Immunity 66:2736-2742.
6. Saba JA, McComb ME, Potts DL, Costello CE, Amar S. 2007. Proteomic mapping of stimulus-specific signalling pathways involved in THP-1 cells exposed to Porphyromonas gingivalis or its purified components. J. Proteome Res. 6:2211-2221.
7. Werts C, et al. 2001. Leptospiral lipopolysaccharide activates cells through a TLR-2 dependent mechanism. Nature 2:346-352.
8. Darveau RP, et al. 2004. Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide contains multiple lipid A species that functionally interact with both toll-like receptors 2 and 4. Infect. Immunity 72:5041-5051.
9. Zhou Q, Amar S. 2007. Identification of signaling pathways in macrophage exposed to Porphyromonas gingivalis or to its purified cell wall components. J. Immunol. 179:7777-7790.
10. Macagno A., et al. 2006. A cyanobacterial LPS antagonist prevents endotoxin shock and blocks sustained TLR4 stimulation required for cytokine expression. J. Exp. Med. 203:1481-92.
11. Yi EC, Hackett M. 2000. Rapid isolation method for lipopolysaccharide and lipid Afrom gram-negative bacteria. Analyst 125:651-656.
12. Pomati et al., 2000. The freshwater Cyanobacterium Planctothrix SP. FP1:
Molecular Identification and Detection of Paralytic Shellfish Poisoning Toxins J. Phycol, 36:553-562 (2000).
13. Chomczynski P. and Mackey "Modification of the tri-reagent procedure for isolation of RNA from polysaccharide- and proteoglycan-rich sources†19: 924 (1995).
Claims (10)
- RIVENDICAZIONI 1. Frazione glicolipidica di Oscillatoria Planktothrix sp., per il trattamento e/o la prevenzione delle affezioni gengivali ad eziologia batterica, avente una contaminazione proteica inferiore o uguale al 2% ed una contaminazione da acidi nucleici inferiore o uguale al 5%.
- 2. Frazione secondo la rivendicazione 1 dove l'agente eziologico à ̈ selezionato nel gruppo di batteri anaerobi consistente di: Actinobacillum actinomycetemconcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola.
- 3. Frazione secondo la rivendicazione 2 dove l'agente eziologico à ̈ Porphyromonas gingivalis.
- 4. Frazione secondo le rivendicazioni 1-3 dove tali affezioni gengivali sono la gengivite, la parodontite (piorrea).
- 5. Composizione dentistica comprendente quale principio attivo la frazione secondo le rivendicazioni 1-4 e quali eccipienti e/o diluenti, e/o stabilizzanti, e/o additivi, composti adatti per la somministrazione orale ed opzionalmente uno o più principi attivi diversi.
- 6. Composizione dentistica secondo la rivendicazione 5 in cui la frazione secondo le rivendicazioni 1-4 à ̈ in quantità compresa tra 0.1 e 100 Î1⁄4g/ml, preferibilmente tra 1 e 50 pg/ml, più preferibilmente 4-20 pg/ml o ancor più preferibilmente 1-5 pg /ml.
- 7. Composizione secondo le rivendicazioni 5-6 in forma di colluttorio, di gel o di pasta semisolida.
- 8. Composizione secondo le rivendicazioni 5-6 in forma di caramella, pastiglia, chewing-gum, confetto.
- 9. Un metodo per l'ottenimento della frazione glicolipica da Oscillatoria Planktothrix sp. secondo le rivendicazioni 1-4, che consiste dei seguenti passaggi: a) risospensione di un concentrato cianobatterico di Oscillatoria Planktothrix sp. con una soluzione acquosa in rapporto volumetrico preferibilmente compreso tra 1:1 a 1:2; b) miscelazione della sospensione cianobatterica con 2-4 volumi, preferibilmente circa 3, di una soluzione denaturante comprendente un agente caotropico, un solvente organico polare pratico, preferibilmente fenolo ed un solvente organico aprotico, quale il cloroformio; c) incubazione per un tempo inferiore a 60'; d) centrifugazione e raccolta della fase liquida, detta sovranatante; e) precipitazione della frazione glicolipidica mediante aggiunta di un sale e di un solvente organico, preferibilmente acetone, al sovranatante e lavaggio del precipitato (o fondello) con etanolo diluito con acqua; f) risospensione del precipitato in una soluzione acquosa, preferibilmente tamponata; g) trattamento con nucleasi, preferibilmente endo- e/o eso-nucleasi e successivamente con una proteasi, preferibilmente proteinasi K; h) ulteriore precipitazione della fase glicolipidica mediante aggiunta di un sale e di un solvente organico, preferibilmente acetone; i) opzionale lavaggio del fondello come in f) e sua risospensione in acqua o soluzione tamponata; j) separazione molecolare con un dispositivo con taglio (cut-off) a 30 k Dalton; k) recupero della frazione glicolipidica trattenuta con acqua o con soluzione acquosa tamponata e verifica del livello di contaminazione da acidi nucleici o da proteine.
- 10. Uso della frazione glicolipidica secondo le rivendicazioni 1-4 per la preparazione di presidi orali per il trattamento e/o la prevenzione delle affezioni gengivali ad eziologia batterica.
Priority Applications (9)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ITMI2008A001370A IT1390968B1 (it) | 2008-07-25 | 2008-07-25 | Frazione glicolipidica di cianobatterio per il trattamento delle affezioni del cavo orale |
| JP2011519183A JP5660731B2 (ja) | 2008-07-25 | 2009-07-24 | 口腔の疾病を治療するためのシアノバクテリアからの糖脂質画分 |
| PCT/EP2009/059565 WO2010010172A2 (en) | 2008-07-25 | 2009-07-24 | Glycolipid fraction from cyanobacteria for treatment of diseases of the oral cavity |
| US13/054,788 US8734871B2 (en) | 2008-07-25 | 2009-07-24 | Glycolipid fraction from cyanobacteria for treatment of diseases of the oral cavity |
| CN200980128982XA CN102105158B (zh) | 2008-07-25 | 2009-07-24 | 用于治疗口腔疾病的来自蓝细菌的糖脂级分 |
| AU2009273215A AU2009273215B2 (en) | 2008-07-25 | 2009-07-24 | Glycolipid fraction from cyanobacteria for treatment of diseases of the oral cavity |
| ES09781039.4T ES2488540T3 (es) | 2008-07-25 | 2009-07-24 | Fracción de glicolípido procedente de cianobacterias para el tratamiento de enfermedades de la cavidad oral |
| EP09781039.4A EP2323674B1 (en) | 2008-07-25 | 2009-07-24 | Glycolipid fraction from cyanobacteria for treatment of diseases of the oral cavity |
| CA2731500A CA2731500A1 (en) | 2008-07-25 | 2009-07-24 | Glycolipid fraction from cyanobacteria for treatment of diseases of the oral cavity |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ITMI2008A001370A IT1390968B1 (it) | 2008-07-25 | 2008-07-25 | Frazione glicolipidica di cianobatterio per il trattamento delle affezioni del cavo orale |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ITMI20081370A1 true ITMI20081370A1 (it) | 2010-01-26 |
| IT1390968B1 IT1390968B1 (it) | 2011-10-27 |
Family
ID=40580908
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ITMI2008A001370A IT1390968B1 (it) | 2008-07-25 | 2008-07-25 | Frazione glicolipidica di cianobatterio per il trattamento delle affezioni del cavo orale |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8734871B2 (it) |
| EP (1) | EP2323674B1 (it) |
| JP (1) | JP5660731B2 (it) |
| CN (1) | CN102105158B (it) |
| AU (1) | AU2009273215B2 (it) |
| CA (1) | CA2731500A1 (it) |
| ES (1) | ES2488540T3 (it) |
| IT (1) | IT1390968B1 (it) |
| WO (1) | WO2010010172A2 (it) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1393093B1 (it) * | 2009-02-18 | 2012-04-11 | Bluegreen Biotech S R L | Miscela glicolipidica da oscillatoria planktothrix con attivita' immunomodulante ed antiinfiammatoria |
| IT1401909B1 (it) * | 2010-08-04 | 2013-08-28 | Bluegreen Biotech S R L | Glicolipide per il trattamento dell'infiammazione associata a ischemia e riperfusione. |
| EP2641607A1 (en) * | 2012-03-21 | 2013-09-25 | Sanofi | A mixture of polar glycolipids for use in the treatment of pain and COPD |
| US20150086592A1 (en) * | 2013-09-25 | 2015-03-26 | Sequoia Sciences, Inc | Compositions of vaccines and adjuvants and methods for the treatment of urinary tract infections |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1895842A4 (en) * | 2005-06-17 | 2009-06-03 | Univ Rochester | METHODS AND COMPOSITIONS FOR ENHANCING IMMUNE MEMORY BY BLOCKING INTRAHEPATIC ERASURE OF ACTIVE T CELLS |
| BRPI0717474A2 (pt) * | 2006-10-20 | 2014-03-11 | Arizona Board Of Regentes For And On Behalf Of Arizona State University | Cianobactéria modificada |
| IT1393093B1 (it) * | 2009-02-18 | 2012-04-11 | Bluegreen Biotech S R L | Miscela glicolipidica da oscillatoria planktothrix con attivita' immunomodulante ed antiinfiammatoria |
| WO2012087676A2 (en) * | 2010-12-23 | 2012-06-28 | Exxonmobil Research And Enginnering Company | Production of fatty acids and fatty acid derivatives by recombinant microorganisms expressing polypeptides having lipolytic activity |
-
2008
- 2008-07-25 IT ITMI2008A001370A patent/IT1390968B1/it active
-
2009
- 2009-07-24 ES ES09781039.4T patent/ES2488540T3/es active Active
- 2009-07-24 CN CN200980128982XA patent/CN102105158B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2009-07-24 AU AU2009273215A patent/AU2009273215B2/en not_active Ceased
- 2009-07-24 CA CA2731500A patent/CA2731500A1/en not_active Abandoned
- 2009-07-24 US US13/054,788 patent/US8734871B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2009-07-24 JP JP2011519183A patent/JP5660731B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2009-07-24 EP EP09781039.4A patent/EP2323674B1/en not_active Not-in-force
- 2009-07-24 WO PCT/EP2009/059565 patent/WO2010010172A2/en active Application Filing
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| JEMMETT KIM ET AL: "A cyanobacterial lipopolysaccharide antagonist inhibits cytokine production induced by Neisseria meningitidis in a human whole-blood model of septicemia.", INFECTION AND IMMUNITY JUL 2008, vol. 76, no. 7, 28 April 2008 (2008-04-28), pages 3156 - 3163, XP002527314, ISSN: 1098-5522 * |
| MACAGNO ANNALISA ET AL: "A cyanobacterial LPS antagonist prevents endotoxin shock and blocks sustained TLR4 stimulation required for cytokine expression.", THE JOURNAL OF EXPERIMENTAL MEDICINE 12 JUN 2006, vol. 203, no. 6, 12 June 2006 (2006-06-12), pages 1481 - 1492, XP002527315, ISSN: 0022-1007 * |
| PRATI M ET AL: "Biological effect of the Planktothrix sp. FP1 cyanobacterial extract.", TOXICON : OFFICIAL JOURNAL OF THE INTERNATIONAL SOCIETY ON TOXINOLOGY MAR 2002, vol. 40, no. 3, March 2002 (2002-03-01), pages 267 - 272, XP002527318, ISSN: 0041-0101 * |
| THORGERSEN E B ET AL: "Cyanobacterial LPS antagonist (CyP)-A novel and efficient inhibitor of Escherichia coli LPS-induced cytokine response in the pig", MOLECULAR IMMUNOLOGY, PERGAMON, GB, vol. 45, no. 13, 20 June 2008 (2008-06-20), pages 3553 - 3557, XP022849589, ISSN: 0161-5890, [retrieved on 20080620] * |
| YI E C ET AL: "Rapid isolation method for lipopolysaccharide and lipid A from gram-negative bacteria.", THE ANALYST APR 2000, vol. 125, no. 4, April 2000 (2000-04-01), pages 651 - 656, XP002527316, ISSN: 0003-2654 * |
| ZHOU QINGDE ET AL: "Identification of signaling pathways in macrophage exposed to Porphyromonas gingivalis or to its purified cell wall components", JOURNAL OF IMMUNOLOGY, vol. 179, no. 11, December 2007 (2007-12-01), pages 7777 - 7790, XP002527317, ISSN: 0022-1767 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2009273215A1 (en) | 2010-01-28 |
| CN102105158B (zh) | 2013-12-11 |
| AU2009273215B2 (en) | 2014-02-20 |
| IT1390968B1 (it) | 2011-10-27 |
| EP2323674A2 (en) | 2011-05-25 |
| JP2011529030A (ja) | 2011-12-01 |
| WO2010010172A3 (en) | 2010-03-18 |
| CA2731500A1 (en) | 2010-01-28 |
| US8734871B2 (en) | 2014-05-27 |
| US20110130351A1 (en) | 2011-06-02 |
| CN102105158A (zh) | 2011-06-22 |
| WO2010010172A2 (en) | 2010-01-28 |
| EP2323674B1 (en) | 2014-05-07 |
| ES2488540T3 (es) | 2014-08-27 |
| JP5660731B2 (ja) | 2015-01-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN100506847C (zh) | 用于防治口腔疾病的IgY制备方法以及基于该IgY的牙膏 | |
| JP2019131605A (ja) | キトサン誘導体化合物を用いる口腔ケア方法および組成物 | |
| AI et al. | Etiology and microbiology of periodontal diseases: A review | |
| CN105148253A (zh) | 皮肤粘膜抗菌组合物 | |
| CN113679632B (zh) | 抗菌肽化合物DM80Bu20在制备抑菌牙膏中的应用 | |
| JP2001240604A (ja) | 歯周疾患予防・治療用口腔用組成物 | |
| Neto et al. | Dose-response evaluation of propolis dental varnish in children: a randomized control study | |
| ES2635169T3 (es) | Polisacárido de semillas de tamarindo y extracto de Ferula hermonis para uso en el tratamiento de enfermedades inflamatorias | |
| CN113244250A (zh) | 增强抗炎及杀菌力的用于预防或改善牙周病的组合物 | |
| ITMI20081370A1 (it) | Frazione glicolipidica di cianobatterio per il trattamento delle affezioni del cavo orale | |
| JP2011063556A (ja) | 口腔内細菌の共凝集阻害剤及びそれを配合した口腔用組成物 | |
| Badiyani et al. | Chocolate disinfectant: effectiveness of cocoa bean husk extract on Streptococcus mutans in used toothbrushes | |
| KR101951024B1 (ko) | D-갈락토오스를 포함하는 쿼럼센싱 저해제 | |
| CN106456525B (zh) | 用于个人护理组合物的芦荟提取物 | |
| CN104491840B (zh) | 一种抗辐射防龋消炎的口腔药物组合物及其制剂 | |
| KR20160061852A (ko) | 금속이온 봉쇄제와 이소프로필메틸페놀을 함유하는 구강 조성물 | |
| Susanto et al. | Efficacy of Aloe vera Hydrogel in Inhibition The Growth of Campylobacter rectus and Provetella intermedia Bacteria | |
| IT202000007675A1 (it) | Ivermectina e sue composizioni per uso nel trattamento di infezioni da coronavirus principalmente a carico dell’apparato respiratorio | |
| JP2007099638A (ja) | ヤナギ科ヤナギ属植物の抽出成分を配合した歯周病用剤 | |
| JP2006282562A (ja) | セイヨウトチノキの抽出成分を配合した歯周病用剤 | |
| BR102012032648B1 (pt) | composição contendo vestitol e neovestitol e seus usos | |
| EP3363440A1 (en) | Inhibition of oral microbial growth by a compound of pistacia lentiscus | |
| DE2205882B2 (de) | Arzneimittel gegen die Erkrankungen der Mundhöhle und der Zähne | |
| KR20150051699A (ko) | 누에 유래 혈림프를 포함하는 구강 위생 조성물 |