ITMI20010904A1 - Dispositivo monouso per analisi immunoenzimatiche e relativo metodo analitico - Google Patents
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Description
Descrizione di un brevetto di invenzione a nome
DESCRIZIONE
La presente invenzione riguarda un dispositivo monouso per eseguire analisi immunochimiche, come pure un metodo analitico che lo utilizza.
Come sanno gli esperti del settore, le analisi immunochimiche si avvalgono generalmente di fasi solide a cui sono legate sostanze utili ai fini analitici. Si possono riportare numerosi esempi applicativi fra cui determinazioni sierologiche in cui alla fase solida sono legate proteine "target" (antigeni) riconosciute dagli anticorpi del campione in esame, oppure determinazioni in cui sulla fase solida sono legati anticorpi in grado di catturare specificamente la proteina (o aptene) da dosare (per esempio ormoni).
Uno dei mezzi più diffusi per preparare fasi solide prevede l'uso di pozzetti di piastre per microtitolazione. Si tratta di piccoli contenitori in materia plastica, in genere polistirolo assemblati in piastre da 48 o 96 determinazioni, molto diffuso in diagnostica immunochimica, prodotti in grandissimo numero da ditte principalmente Nunc, Labsystem, Greiner, Dynatech, Costar .
Le determinazioni condotte con questo tipo di supporto prevedono che ditte specializzate dal punto di vista biochimico preparino industrialmente queste fasi solide, in pratica sfruttando la proprietà delle proteine a legarsi alla plastica. L'utilizzatore finale esegue il test utilizzando un kit che tipicamente contiene oltre alla fase solida una o più piastre da 96 pozzetti frazionabili, i reattivi per l'esecuzione del test (calibratori, tracciante, substrato, diluente e soluzione di lavaggio della fase solida).
Generalmente l'uso del kit avviene mediante strumentazione adattata dagli esperti, a seconda del test da eseguire, al fine di automatizzarne l'esecuzione su tale tipo di piastra. Questo approccio è ideale per routine analitiche medio grandi in cui il lavoro di programmazione e preparazione dei reattivi per la prova è ripartito su molti test.
Per flessibilizzare i metodi immunochimici ed adattarli alle esigenze anche di utilizzatori che hanno un numero di campioni da analizzare piccolo, sono stati lanciati sul mercato i cosiddetti monotest. Si tratta di dispositivi appositamente studiati per poter eseguire un solo test. La determinazione può essere qualitativa con interpretazione soggettiva dell'utilizzatore o quantitativa in quanto il dispositivo viene processato da uno strumento che in base ad una curva memorizzata dose-risposta da un referto numerico oggettivo.
La presente invenzione si colloca in quest'ultimo gruppo.
L'arte nota nella produzione di monotest immunochimici vede realizzati degli oggetti, generalmente di plastica, che contengono i reattivi ed hanno una fase solida appositamente studiata (per essere processata con un apposito strumento prodotto dalla stessa ditta che produce il dispositivo) . Ci sono in commercio esempi di monotest che utilizzano piccole provette, puntali da micropipette, membrane per filtrazione. La limitazione è rappresentata dal fatto che dovendosi concepire una fase solida apposita, occorre che ciascun produttore acquisisca conoscenze approfondite e quindi costose per ciascun analita.
Uno scopo della presente invenzione è di realizzare un dispositivo monouso atto ad accogliere uno dei pozzetti della suddetta piastra da 96 pozzetti in modo da poter svolgere in modo comodo e rapido la relativa analisi immunochimica.
Tale scopo viene raggiunto grazie al dispositivo secondo la presente invenzione, caratterizzato dal fatto di prevedere almeno un alloggiamento per accogliere un pozzetto di una piastra per microtitolazione, un primo incavo per accogliere il campione, e ulteriori incavi per accogliere ciascuno dei reagenti necessari per l'esecuzione dei test.
Ovviamente l'alloggiamento che accoglie il suddetto pozzetto sarà conformato in modo da poter inserire in esso il tipo di pozzetto che interessa, la cui conformazione può variare a seconda del produttore .
Secondo una variante dell'invenzione, gli alloggiamenti sono due, per accogliere un relativo pozzetto della piastra, ciò consentendo l'esecuzione anche di due test diversi sullo stesso campione (normalmente non è di interesse effettuare più di due determinazioni sullo stesso campione), purché ovviamente il tracciante e il rivelatore siano comuni.
Poiché i reagenti da utilizzare sono in genere dispositivo saranno in numero uguale.
In particolare, un dispositivo secondo l'invenzione adatto per svolgere, per esempio, un test ELISA, sarà dotato di due alloggiamenti per accogliere uno o al massimo due pozzetti provenienti da due diverse delle suddette piastre, un incavo per il campione e tre incavi per i tre reagenti che vengono utilizzati, e precisamente uno per il tracciante, che può essere enzimatico, colorimetrico, chemiluminescente o fluorescente, il diluente del campione (se necessario) ed il substrato per il tracciante.
Secondo un ulteriore aspetto dell'invenzione, viene realizzato un metodo analitico che utilizza il dispositivo sopra descritto.
L'invenzione risulterà più facilmente comprensibile dalla seguente descrizione di una forma di realizzazione esemplificativa del dispositivo secondo l'invenzione stessa.
In tale descrizione si farà riferimento ai disegni allegati, in cui:
la fig. 1 è una vista in pianta dall'alto di un dispositivo secondo l'invenzione;
la fig. 2 ne è una sezione longitudinale secondo la traccia 2-2 di fig. 1;
la fig. 3 ne è una sezione trasversale secondo la traccia 3-3 di fig. 2.
Si descriverà ora, con riferimento alle figure, un esempio applicativo relativo al dosaggio monotest di anticorpi IgG anti-Toxoplasma gondii.
Come si vede dalle figure, il dispositivo 10 è realizzato in un sol pezzo di adatta materia plastica. Tale pezzo comprende un manico di presa 12 e una serie di incavi, di cui un primo incavo 14, conformato grossomodo a imbuto chiuso inferiormente, destinato a contenere il campione da analizzare, tre successivi incavi 16, 18 e 20, cilindrici e con il fondo arrotondato, destinati ad accogliere i reagenti necessari, ed un incavo d'estremità 22 di forma cilindrica per l'esecuzione del bianco substrato.
Come si vede, il dispositivo comprende anche due alloggiamenti 24 e 26 (per poter effettuare nel caso specifico due determinazioni sullo stesso campione) atti ad accogliere relativi pozzetti (non mostrati per semplicità) di una piastra per microtitolazione (fase solida) .
Come si nota dalla figura, gli alloggiamenti (24, 26) e gli incavi (14, 16, 18, 20) sono tutti allineati. In particolare l'allineamento è quello dell'asse del manico (12).
La conformazione di tali alloggiamenti dovrà essere ovviamente scelta in modo che sia adatta a ricevere i pozzetti di una determinata ditta.
Come si vede dalle figg. 1 e 2, gli alloggiamenti 24 e 26 sono collegati da una feritoia 28 che consente, grazie all'elasticità della materia plastica di cui è fatto il dispositivo 10, di forzare al loro interno i relativi pozzetti, che restano così saldamente trattenuti nel relativo alloggiamento.
Ovviamente potranno essere previsti altri mezzi per trattenere i pozzetti, per esempio la semplice forzatura.
Nel caso specifico illustrato , nell'alloggiamento 26 verrà disposto un pozzetto di una piastra per microtitolazione su cui sono stati adesi antigeni derivanti dal protozoo Toxoplasma gondii.
Il tracciante utilizzato è costituito da anticorpi monoclonali (anti-IgG umane coniugati a perossidasi di rafano) . La soluzione, a concentrazione ottimale, sarà contenuta sigillata nell'incavo 16, mentre nell'incavo 18 sarà contenuto il diluente del campione e nell'incavo 20 il substrato per la perossidasi (per esempio soluzione di tetrametilbenzidina e idrogeno perossido) .
L'apparato destinato a processare il dispositivo 10 prevede lo spostamento di 120 μΐ di diluente dall'incavo 18 al pozzetto inserito nell'alloggiamento 26 e il trasferimento del campione dall'incavo 14 al pozzetto nell'alloggiamento 26 (12 μΐ). La miscela reagisce con la fase solida che può essere lavata dopo 5 minuti di incubazione. Generalmente si effettuano almeno tre lavaggi con un intervallo di attesa di 30 secondi fra un lavaggio ed il successivo. Successivamente si trasferisce il tracciante anti-IgG umane dall'incavo 16 al pozzetto presente nell'alloggiamento 26 (120 μΐ) e si fa reagire per ulteriori 5 minuti, quindi si ripete il ciclo di lavaggio per eliminare il tracciante che non ha reagito. Infine si trasferisce il substrato (150 μΐ) dall'incavo 20 al pozzetto nell'alloggiamento 26 per la reazione enzimatica.
Il colore che si sviluppa può essere letto fotometricamente (a 620-670 nm) e la densità ottica, ottenuta ad un tempo fisso, confrontata con una curva di calibrazione già in memoria nello strumento. In questo modo si è realizzato un dosaggio quantitativo in Unità Internazionali per mi del singolo campione in esame.
L'inserimento del pozzetto da micropiastra nel relativo alloggiamento del dispositivo 10 è talmente semplice che questa operazione può essere effettuata anche dall'utilizzatore finale. Questo approccio può essere interessante quando su un campione si devono determinare molti parametri con lo stesso tracciante.
In questo caso con un solo tipo di dispositivo che contiene i reattivi comuni il cliente, disponendo dei vari incavi e alloggiamenti che costituiscono le varie fasi solide, può costruirsi il pannello di test che più desidera.
Claims (8)
- RIVENDICAZIONI 1. Dispositivo monouso (10) per eseguire analisi immunochimiche, caratterizzato dal fatto di prevedere almeno un alloggiamento (24, 26) per accogliere un pozzetto di una piastra per microtitolazione, un primo incavo (14) per accogliere il campione, e ulteriori incavi (16, 18, 20) per accogliere ciascuno dei reagenti necessari per l'esecuzione dei test.
- 2. Dispositivo monouso (10) secondo la rivendicazione 1, in cui gli alloggiamenti sono due (24, 26), ciò consentendo di effettuare due determinazioni sullo stesso campione.
- 3. Dispositivo monouso (10) secondo la rivendicazione 1, in cui gli ulteriori incavi (16, 18, 20) sono in numero uguale a quello dei reagenti da utilizzare.
- 4. Dispositivo monouso (10) secondo la rivendicazione 1, in cui è previsto un manico di presa (12).
- 5. Dispositivo monouso (10) secondo la rivendicazione 1, in cui gli alloggiamenti (24, 26) e gli incavi (14, 16, 18, 20) sono allineati.
- 6. Dispositivo monouso (10) secondo le rivendicazioni 4 e 5, in cui l'allineamento è quello dell'asse del manico (12).
- 7. Dispositivo monouso (10) secondo la rivendicazione 1, in cui per la realizzazione dello stesso viene utilizzata un'adatta materia plastica .
- 8. Metodo analitico, caratterizzato dal fatto di comprendere l'utilizzo del dispositivo (10) secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1a7
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