IT201800006725A1 - Composizioni comprendenti aminoacidi per l'uso nella prevenzione e nel trattamento di malattie epatiche - Google Patents

Composizioni comprendenti aminoacidi per l'uso nella prevenzione e nel trattamento di malattie epatiche Download PDF

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Description

Descrizione dell’invenzione industriale dal titolo:
“Composizioni comprendenti aminoacidi per l’uso nella prevenzione e nel trattamento di malattie epatiche”
TESTO DELLA DESCRIZIONE
Campo dell’invenzione
La presente descrizione si riferisce in generale a composizioni comprendenti aminoacidi. Più in particolare, la descrizione si riferisce a composizioni comprendenti aminoacidi per l’uso nella prevenzione e/o nel trattamento di malattie epatiche.
Sfondo
Le malattie epatiche sono tra le malattie che si manifestano più frequentemente causate da varie condizioni ambientali sfavorevoli, come per esempio parassiti e virus, farmaci, sostanze tossiche, alcolismo e fumo. Esse sono frequentemente malattie croniche con sviluppo di caratteristiche cliniche destinate ad aggravarsi. Le malattie epatiche croniche sono caratterizzate da una graduale distruzione del parenchima epatico nel tempo, con risposte infiammatorie e accumulo di grasso, con danni fibrotici e attivazione di trasformazioni cellulari che portano in molti casi allo sviluppo del cancro. Pertanto, le malattie epatiche possono includere steatosi, fibrosi, cirrosi e carcinoma epatocellulare come disordini clinici progressivi del fegato. La cirrosi è la conseguenza di una malattia epatica acuta e cronica ed è caratterizzata dalla sostituzione del tessuto epatico con tessuto cicatriziale fibrotico e noduli rigenerativi con conseguente progressiva perdita della funzionalità epatica. La fibrosi e la rigenerazione nodulare determinano la perdita della normale architettura lobulare microscopica del fegato. La fibrosi rappresenta la crescita di tessuto cicatriziale risultante, per esempio, da infezione, infiammazione, lesione e anche guarigione. Nel corso del tempo, il tessuto cicatriziale fibrotico sostituisce lentamente il normale tessuto epatico funzionale provocando una diminuzione della portata di sangue al fegato, lasciando il fegato incapace di trasformare pienamente i nutrienti, gli ormoni, i farmaci e sostanze tossiche che si trovano nel flusso sanguigno. Le cause più comuni di cirrosi includono alcolismo, infezioni virali da epatite C, ingestione di tossine ed esistono anche molte altre possibili cause. Come accennato in seguito, il disturbo epidemiologico più importante che si evolve in cirrosi e probabilmente in cancro è l’aumento di grasso corporeo e l’accumulo di grasso epatico correlato. Questo accumulo di grasso può essere dovuto a due principali condizioni cliniche: abuso di alcol e obesità.
Un consumo eccessivo e cronico di alcol può causare la malattia epatica alcolica (ALD), un grave problema di salute a livello mondiale. Le caratteristiche patologiche della ALD, tra cui la steatosi epatica, la steatoepatite, la cirrosi fino al cancro, si sviluppano in periodi a lungo termine.
Più fattori contribuiscono alla patogenesi da etanolo. Eventi precoci, come danneggiamento mitocondriale, generazione di specie reattive dell’ossigeno (ROS) e accumulo di grasso sembrano essere risultati diretti del metabolismo dell’etanolo e sono caratteristiche condivise tra ALD e malattia epatica non alcolica o NAFLD (vedi sotto) (Mantena et al.2008).
I meccanismi di difesa cellulare contro gli effetti dannosi dell’alcol non sono ben compresi. È stato suggerito che l’autofagia, che è un importante percorso cellulare degradativo che digerisce organelli e proteine cellulari per ottenere energia o eliminare strutture cellulari danneggiate, ricopre un ruolo nell’ALD, anche se la comprensione di questi meccanismi è ancora frammentaria (Lin et al.2015). L’autofagia sembra svolgere funzioni critiche sia negli epatociti che nelle cellule non parenchimali (cioè macrofagi e cellule staminali epatiche), influenzando la sensibilità all’insulina, l’accumulo di lipidi, il danneggiamento epatocellulare e la risposta immunitaria innata.
Recenti studi su topi e modelli cellulari hanno dimostrato che l’ingestione acuta di etanolo attiva l’autofagia nel fegato (Ding et al.2010; Ni et al.2013; Lin et al.2013).
Al contrario, l’intossicazione cronica da etanolo sembra sopprimere l’autofagia epatica (Thomes et al.2015; Cho et al.2014). L’inibizione dell’autofagia ha dimostrato di peggiorare la steatosi e il danneggiamento epatico indotti dall’etanolo nei topi (Ding et al.2010; Ni et al.2013; Lin et al.2013).
Al contrario, la promozione farmacologica dell’autofagia sembra alleviare la steatosi epatica e il danneggiamento epatico indotti dall’etanolo (Lin et al. 2013). Di conseguenza, l’autofagia è considerata un meccanismo di protezione contro gli effetti citotossici dell’etanolo ed è emersa come bersaglio per lo sviluppo di agenti terapeutici per l’ALD.
Come accennato prima, la seconda causa principale di disturbo epatico è l’obesità, ampiamente diffusa nei paesi sviluppati e in aumento epidemiologico anche nei paesi in via di sviluppo, e che causa la cosiddetta malattia del fegato grasso non alcolica o NAFLD. La progressione verso la steatoepatite, la cirrosi e l’epatocarcinoma rappresenta un’emergenza crescente in tutto il mondo. I meccanismi biochimici e molecolari coinvolti in questa condizione sono sovrapponibili a quelli tipicamente descritti per la ALD.
Essendo un metabolismo degli aminoacidi alterato una caratteristica delle malattie epatiche, legata al consumo di alcol e allo sviluppo dell’obesità, specificamente caratterizzata da livelli ridotti di aminoacidi a catena ramificata (BCAA) in circolazione (Charlton, 2006), vi è un crescente interesse per lo sviluppo di nuovi approcci terapeutici basati sull’integrazione di aminoacidi come terapia per malattie epatiche.
Sintesi dell’invenzione
La presente descrizione ha lo scopo di fornire nuove composizioni a base di aminoacidi efficaci nella prevenzione e nel trattamento di malattie epatiche.
Secondo la presente descrizione, il suddetto scopo viene raggiunto grazie all’oggetto specificamente richiamato nelle rivendicazioni che seguono, che sono intese come parte integrante della presente descrizione.
Una forma di realizzazione della presente descrizione fornisce una composizione per l’uso nel trattamento di una malattia epatica in un mammifero, la composizione comprendendo un agente attivo, detto agente attivo contenendo gli aminoacidi leucina, isoleucina, valina, treonina, lisina e gli acidi carbossilici acido citrico, acido succinico, acido malico.
In una o più forme di realizzazione, l’agente attivo della composizione contiene inoltre uno o più aminoacidi scelti nel gruppo costituito da istidina, fenilalanina, metionina, triptofano, cisteina e tirosina.
In una forma di realizzazione preferita, la malattia epatica può essere scelta nel gruppo costituito da malattia epatica alcolica (ADL), malattia epatica non alcolica (NAFDL), lipodistrofia, epatite, cirrosi, carcinoma epatocellulare (HCC).
Un’ulteriore forma di realizzazione della presente descrizione fornisce un procedimento di trattamento di malattie epatiche nei mammiferi, il procedimento comprendendo la selezione di una composizione comprendente un agente attivo, detto agente attivo contenendo gli aminoacidi leucina, isoleucina, valina, treonina, lisina e gli acidi carbossilici acido citrico, acido succinico e acido malico, somministrando la composizione per il trattamento di una malattia epatica in mammiferi.
Breve descrizione dei disegni
L’invenzione verrà ora descritta, solo a titolo di esempio, con riferimento alle figure allegate, in cui:
- la Figura 1 mostra l’espressione genica mostrata come livelli di mRNA in cellule HepG2 trattate con diverse composizioni a base di aminoacidi ed etanolo (EtOH) per 9 giorni (*valore P < 0,05 e **P < 0,01 vs cellule CTRL).
- La Figura 2 mostra il livello di proteina p62 in cellule HepG2 trattate con diverse composizioni a base di aminoacidi ed EtOH per 9 giorni (*valore P < 0,05 e **P < 0,01 vs cellule CTRL; valore #P < 0,05 vs cellule trattate con EtOH).
Descrizione dettagliata di forme di realizzazione preferite
Nella seguente descrizione, vengono forniti numerosi dettagli specifici per permettere una comprensione approfondita delle forme di realizzazione. Le forme di realizzazione possono essere messe in pratica senza uno o più dei dettagli specifici, o con altri procedimenti, componenti, materiali, ecc. In altri casi, strutture, materiali o operazioni ben noti non sono mostrati o descritti in dettaglio per evitare di confondere aspetti delle forme di realizzazione.
Il riferimento in tutta la presente descrizione a “una (aggettivo numerale) forma di realizzazione” o “una (articolo indeterminativo) forma di realizzazione” indica che una particolare funzionalità, struttura o caratteristica descritta in relazione alla forma di realizzazione è inclusa in almeno una forma di realizzazione. Pertanto, le forme delle espressioni “in una (aggettivo numerale) forma di realizzazione” o “in una (articolo indeterminativo) forma di realizzazione” in vari punti in tutta la presente descrizione non sono necessariamente tutte riferite alla stessa forma di realizzazione. Inoltre, le particolari funzionalità, strutture o caratteristiche possono essere combinate in qualsiasi modo adatto in una o più forme di realizzazione. Le intestazioni qui fornite sono solo per comodità e non interpretano l’ambito o lo scopo delle forme di realizzazione.
La malattia epatica alcolica (ALD) e la malattia del fegato grasso non alcolica (NAFLD) rappresentano un grave problema di salute a livello mondiale, caratterizzate da sviluppo di caratteristiche patologiche nel corso di periodi a lungo termine, tra cui steatosi epatica, steatoepatite, cirrosi, fino al cancro.
Gli eventi precoci nella patogenesi da etanolo come per esempio danneggiamento mitocondriale, generazione di specie reattive dell’ossigeno (ROS), e accumulo di grasso sono caratteristiche condivise tra ALD e NAFLD.
Inoltre, un alterato metabolismo degli aminoacidi ha dimostrato di essere una caratteristica distintiva della malattia epatica, caratterizzata da bassi livelli di aminoacidi a catena ramificata (BCAA) in circolazione, e l’integrazione con BCAA sembra essere associata a una diminuzione della frequenza di complicanze della cirrosi, se prescritta come terapia di mantenimento (Charlton 2006).
L’inventore della presente domanda ha rilevato che aggiungendo acidi carbossilici specifici a una composizione comprendente una combinazione di leucina, isoleucina, valina, treonina e lisina si può ottenere un’efficacia elevata nel contrastare malattie epatiche, come per esempio ALD e NAFLD.
È stato dimostrato che la composizione qui descritta - comprendente come agente attivo gli aminoacidi leucina, isoleucina, valina, treonina, lisina in combinazione con tre acidi carbossilici, che sono substrati del ciclo degli acidi tricarbossilici, includenti acido citrico, acido succinico e acido malico in quantità specifiche - ripristina il metabolismo degli aminoacidi alterato indotto dall’etanolo e, di conseguenza, previene l’autofagia. Il ciclo degli acidi tricarbossilici (ciclo TCA), chiamato anche ciclo di Krebs e ciclo dell’acido citrico, che viene eseguito nella matrice dei mitocondri, è il secondo stadio della respirazione cellulare, il processo in tre fasi mediante il quale le cellule viventi scompongono le molecole di combustibile organico in presenza di ossigeno per raccogliere l’energia di cui hanno bisogno per crescere e dividersi.
Composizioni comprendenti l’agente attivo sopra indicato nonché composizioni comprendenti l’agente attivo sopra indicato inclusi inoltre aminoacidi specifici (elencati nella seguente Tabella 1) sono significativamente più efficaci di una composizione di aminoacidi simili priva di tali acidi carbossilici specifici.
In una o più forme di realizzazione, nella composizione qui descritta il rapporto in peso tra la quantità totale di acido citrico, acido succinico e acido malico e la quantità totale degli aminoacidi leucina, isoleucina, valina, treonina, lisina è compreso tra 0,05 e 0,3, preferibilmente tra 0,1 e 0,25.
In una o più forme di realizzazione, l’agente attivo può inoltre comprendere uno o più aminoacidi scelti nel gruppo costituito da istidina, fenilalanina, metionina, triptofano, cisteina e tirosina.
In una o più forme di realizzazione, gli acidi carbossilici contenuti nella composizione sono acido citrico, acido succinico e acido malico.
In un’ulteriore forma di realizzazione, l’agente attivo della composizione qui descritta può anche includere acido aspartico e/o ornitina L-alfa-chetoglutarato (OKG).
Secondo una forma di realizzazione, la composizione comprende un agente attivo, l’agente attivo essendo costituito da leucina, isoleucina, valina, treonina, lisina, istidina, fenilalanina, metionina, triptofano, cisteina e opzionalmente tirosina, nonché acido citrico, acido succinico, e acido malico, detti aminoacidi essendo gli unici aminoacidi contenuti nella composizione. L’acido citrico, l’acido succinico e l’acido malico possono essere gli unici acidi carbossilici contenuti nella composizione.
In un’ulteriore forma di realizzazione, la composizione può comprendere gli aminoacidi isoleucina, leucina e valina in una quantità compresa tra il 35% e il 65% in peso, preferibilmente tra il 42% e il 56% in peso, rispetto al peso dell’agente attivo.
In una o più forme di realizzazione, il rapporto in peso tra leucina e acido citrico è compreso tra 5 e 1, preferibilmente tra 2,50 e 3,50.
In un’ulteriore forma di realizzazione, la quantità molare o in peso di acido citrico è superiore alla quantità molare o in peso di ciascuno degli acidi acido malico e acido succinico. Preferibilmente, la quantità molare o in peso di acido citrico è superiore alla quantità molare o in peso totale di acido malico più acido succinico. In un’ulteriore forma di realizzazione, il rapporto in peso tra acido citrico e la somma di acido malico e acido succinico è compreso tra 1,0 e 4,0, preferibilmente tra 1,5 e 2,5. In una forma di realizzazione preferita, il rapporto in peso acido citrico:acido malico:acido succinico è compreso tra 10:1:1 e 2:1,5:1,5, preferibilmente tra 7:1:1 e 1,5:1:1, più preferibilmente tra 5:1:1 e 3:1:1. In una forma di realizzazione preferita il rapporto in peso acido citrico:acido malico:acido succinico è 4:1:1.
Secondo alcune forme di realizzazione della presente descrizione, il rapporto molare preferito isoleucina:leucina è compreso nel range 0,2-0,7, preferibilmente nel range 0,30-0,60 e/o il rapporto in peso preferito valina:leucina è compreso nel range 0,2-0,70, preferibilmente nel range 0,30-0,65.
In un’ulteriore forma di realizzazione, il rapporto molare treonina:leucina è compreso nel range 0,10-0,90, preferibilmente nel range 0,20-0,70 e/o il rapporto in peso lisina:leucina è compreso nel range 0,20-1,00, preferibilmente nel range 0,40-0,90.
In una forma di realizzazione preferita, il rapporto tra la quantità molare totale di acido citrico, acido malico, acido succinico e la quantità molare totale di metionina, fenilalanina, istidina e triptofano è superiore a 1,35.
In una o più forme di realizzazione, il rapporto in peso tra la somma di acido citrico, acido malico, acido succinico e la somma degli aminoacidi a catena ramificata leucina, isoleucina, valina è compreso tra 0,1 e 0,4, preferibilmente tra 0,15 e 0,35.
In un’ulteriore forma di realizzazione, la quantità in peso totale degli aminoacidi a catena ramificata, leucina, isoleucina, valina più treonina e lisina è superiore alla quantità in peso totale di tre acidi carbossilici, come acido citrico, acido malico e acido succinico. Preferibilmente, la quantità in peso del singolo acido carbossilico (acido citrico, acido succinico o acido malico) è inferiore alla quantità in peso di ciascuno dei singoli aminoacidi leucina, isoleucina, valina, treonina e lisina.
In un’ulteriore forma di realizzazione, la quantità molare totale di lisina e treonina è superiore alla quantità molare totale dei tre acidi carbossilici acido citrico, acido succinico, acido malico. Preferibilmente, il rapporto tra la quantità molare totale dei tre acidi carbossilici acido citrico, acido succinico, acido malico e la quantità molare totale di lisina e treonina è compreso tra 0,1 e 0,7, preferibilmente tra 0,15 e 0,55.
In una o più forme di realizzazione, la composizione qui descritta comprende inoltre vitamine, preferibilmente scelte nel gruppo di vitamine B, come vitamina B1 e/o vitamina B6.
In un’ulteriore forma di realizzazione della presente descrizione, la composizione può comprendere carboidrati, additivi e/o sostanze aromatizzanti.
In una forma di realizzazione preferita, la composizione è indirizzata alla prevenzione e/o al trattamento di una malattia epatica scelta nel gruppo costituito da malattia del fegato grasso, lipodistrofia, epatite, cirrosi, carcinoma epatocellulare (HCC).
In una o più forme di realizzazione, la malattia epatica è una malattia del fegato grasso. La malattia del fegato grasso può essere causata dal consumo di alcol (malattia del fegato grasso alcolica, ALD).
In una o più forme di realizzazione, la malattia del fegato grasso è una malattia del fegato grasso non alcolica (NFLD).
In una o più forme di realizzazione, la malattia del fegato grasso può essere dovuta a farmaci o tossine, come per esempio amiodarone, metotrexato, diltiazem, terapia antiretrovirale altamente attiva, glucocorticoidi, tamoxifene, avvelenamento da funghi.
Inoltre, in particolare quando si preparano le composizioni secondo la presente descrizione, e specificamente l’agente attivo, l’aminoacido arginina viene preferibilmente evitato. Inoltre, ulteriori aminoacidi preferibilmente evitati dalla composizione qui descritta possono essere serina, prolina, alanina. Tali aminoacidi possono essere controproducenti o addirittura dannosi in alcune concentrazioni o rapporti stechiometrici all’interno della composizione.
Gli aminoacidi descritti nella presente domanda possono essere sostituiti da rispettivi derivati farmaceuticamente accettabili, cioè sali.
Come emergerà chiaramente in seguito, la somministrazione delle composizioni secondo la presente descrizione è particolarmente efficace nella prevenzione e/o nel trattamento di malattie epatiche.
In una forma di realizzazione preferita, le composizioni descritte possono essere utilizzate nel trattamento della malattia epatica alcolica (ALD).
Secondo un’ulteriore forma di realizzazione, le composizioni di aminoacidi possono comprendere eccipienti farmaceuticamente accettabili, come per esempio proteine, vitamine, carboidrati, dolcificanti naturali e artificiali e/o sostanze aromatizzanti. In una forma di realizzazione preferita, gli eccipienti farmaceuticamente accettabili possono essere scelti tra proteine del siero del latte, maltodestrine, fruttosio, caseinato di calcio, olio di pesce, sucralosio, esteri di saccarosio, vitamina D3, vitamine del gruppo B.
Per uso orale, le composizioni secondo la descrizione possono essere sotto forma di compresse, capsule, granuli, gel, polvere gelificabile o polvere.
Ulteriori specificazioni, in termini di quantità e rapporti tra i vari aminoacidi previste dalle composizioni sono contenute nelle rivendicazioni allegate, che formano parte integrante dell’insegnamento tecnico qui fornito riguardo all’invenzione.
ESEMPI
La Tabella 1 mostra due diverse composizioni a base di aminoacidi testate in vitro su epatociti (cellule HepG2) e in vivo su ratti a cui è stato somministrato etanolo, come descritto di seguito.
La composizione denominata “BCAAem” comprende un agente attivo contenente gli aminoacidi leucina, lisina, isoleucina, valina, treonina, cisteina, istidina, fenilalanina, metionina, tirosina, triptofano.
La composizione denominata “alfa 5m (α5m)” comprende un agente attivo contenente gli stessi aminoacidi più acido citrico, acido succinico e acido malico.
Tabella 1
Le composizioni della precedente Tabella 1 possono essere preparate setacciando in primo luogo tutti i componenti con un vaglio da 0,8 mesh. Per ottenere una pre-miscela, ciascun ingrediente (in una quantità <10% in peso della quantità totale) viene messo in una busta di polietilene assieme ad una porzione di L-lisina HCl in modo da ottenere il 10% del peso della composizione totale. La busta viene quindi sbattuta manualmente per 5 minuti. La pre-miscela viene quindi caricata in un miscelatore (Planetaria) insieme al resto degli ingredienti e miscelata per un periodo di 15 minuti a 120 giri al minuto per ottenere una composizione finale omogenea.
PROCEDIMENTI
Animali e trattamenti
Il protocollo sperimentale è stato approvato e condotto secondo la Direttiva del Consiglio della Comunità Europea del 24 novembre 1986 (86/609/CEE), e il Ministero Italiano della Sanità, ed era conforme alle Linee Guida Nazionali sulla Protezione degli Animali.
Ratti Wistar di sesso maschile (3 mesi) dalla Charles River (Calco, Como, Italia) sono stati utilizzati per l’analisi sperimentale descritta qui di seguito.
Gli animali sono stati alloggiati separatamente in gabbie di polipropilene pulite e divisi in sei gruppi:
1) il gruppo pair-fed (sottoposto alla tecnica del pair-feeding cioè consumo equivalente) (pair-fed CTRL, n = 6) è stato alimentato con una dieta liquida di controllo, in cui l’etanolo (EtOH) è stato sostituito con maltosio destrano isocalorico;
2) il gruppo EtOH (EtOH, n = 7) è stato alimentato con una dieta liquida Lieber-DeCarli contenente EtOH ad libitum [quantità gradualmente crescente di EtOH, che raggiunge il 36% dell’apporto calorico dopo 1 settimana, che corrisponde ad una concentrazione finale del 6,2% (volume/volume)];
3) il gruppo BCAAem (BCAAem, n = 6) alimentato con una dieta liquida di controllo, in cui l’EtOH è stato sostituito con maltosio destrano isocalorico, e integrata con la composizione di aminoacidi a catena ramificata (“BCAAem” nella Tabella 1) che ha fornito 1,5 g/kg/giorno di BCAAem;
4) il gruppo alfa 5 ( α5m, n = 6) alimentato con una dieta liquida di controllo, in cui l’EtOH è stato sostituito con maltosio destrano isocalorico, e integrata con la composizione di aminoacidi (“ α5m” nella Tabella 1) che ha fornito 1,5 g/kg/giorno;
5) il gruppo EtOH più BCAAem (EtOH BCAAem, n = 7) alimentato con una dieta liquida Lieber-DeCarli contenente EtOH e composizione BCAAem ad libitum; e 6) il gruppo EtOH più α5m (EtOH α5m, n = 7), alimentato con una dieta liquida Lieber-DeCarli contenente EtOH e composizione α5m ad libitum.
Preparazione dei campioni
Il fegato (n = 4 animali/gruppo) è stato pesato, omogeneizzato in metanolo freddo:acqua (volume/volume, 1:1) ed estratto secondo quanto descritto in Want et al. (Want et al.2013). I campioni essiccati sotto vuoto sono stati sospesi in 120 μl/50 mg di tessuto di metanolo:TDFHA 1 mM = 1:1 e centrifugati a 16.000 g per 10 minuti a 4°C. Due μl di supernatante sono stati caricati direttamente sullo spettrometro di massa-UPLC e analizzati come riportato di seguito. Sono stati eseguiti quattro replicati tecnici per ciascun campione utilizzando i tre diversi procedimenti.
Cromatografia e quantificazione degli aminoacidi nel fegato
Aminoacidi standard sono stati acquistati dalla Sigma (Milano, Italia). Soluzioni madre di ciascun aminoacido sono state preparate a 1 mg/ml in acqua, diluite alla concentrazione finale di 3 pmol/ μl, e direttamente infuse mediante siringa a 10 μl/min nello spettrometro di massa TripleTOF 5600+ (AB Sciex, Milano, Italia). Pertanto, il potenziale di declustering (PD) e l’energia di collisione (EC) sono stati ottimizzati per ciascun aminoacido.
Successivamente, sono state preparate tre miscele di aminoacidi sulla base dei valori di PD ed EC: MISCELA 1, contenente treonina, asparagina, tirosina e serina e analizzata con PD: 30 V, EC: 15 V; MISCELA 2, contenente glicina, alanina, leucina, isoleucina, valina, prolina, istidina, metionina, acido aspartico, glutammina e fenilalanina, e analizzata con PD: 40 V, EC: 15 V; e MISCELA 3, contenente acido glutammico, lisina, arginina e triptofano e analizzata con PD: 80 V, EC: 18 V.
I parametri di partenza erano: gas 1: 33 psi, gas 2: 58 psi, cortina di gas: 25 psi, temperatura: 500°C e ISVF (IonSpray Voltage Floating (Fluttuazione di Tensione della Nebulizzazione Ionica)): 5500 V.
Per ottenere le curve di calibrazione, i quadruplicati tecnici di diverse quantità (10, 33, 50, 100, 200, 400 pmol) delle tre miscele sono stati iniettati nello spettrometro di massa con separazione UPLC, utilizzando l’UPLC 1290 (Agilent Technologies Italia, Cernusco sul Naviglio, Milano, Italia). La colonna cromatografica era della Waters, Acquity HSS T3 C18 2,1 x 100 mm, 1,7 μm, mentre la fase mobile era A: TDFHA 1 mM (acido tridecafluoroeptanoico) in acqua; B: TDFHA 1 mM in acetonitrile. Un gradiente di B dal 12,5% al 26,5% in 4 min, seguito da ramping dal 26,5 al 92% in 3,5 min è stato utilizzato per separare tutti gli aminoacidi, con una portata di 0,35 ml/min e una temperatura della colonna di 65°C come descritto (Le et al., 2014).
L’autocampionatore era impostato a 4°C. Le curve di calibrazione sono state tracciate utilizzando aree di picco cromatografico e una regressione ponderata (1/x per tutti i composti ad eccezione di asparagina, tirosina, valina e acido glutammico, che sono stati interpolati a 1/x2) mediante il software MultiQuant versione 2.1 (SCIEX). I valori quantitativi per ciascun aminoacido (pmol) nei campioni di fegato di ratto sono stati ottenuti correlando le aree di picco cromatografico con quelle derivate da standard di calibrazione eseguita esternamente e sono stati normalizzati rispetto al tessuto (mg).
Coltura cellulare e trattamento
Cellule HepG2 HCC umane sono state acquistate dall’American Type Culture Collection (HB-8065; ATCC, Manassas, VA). Le cellule sono state ordinariamente coltivate in terreno RPMI-1640, integrato con siero bovino fetale al 10%, penicillina (100 U/ml) e streptomicina (100 μg/ml), in un’atmosfera con il 5% di CO2 a 37°C. Due milioni di cellule HepG2 sono state inseminate per pallone da 75 cm<2 >(Corning Inc., Corning, NY).
Sei ore dopo l’inseminazione, EtOH 75 mM (0,34%) e l’1% di BCAAem o α5m sono stati aggiunti, da soli o in combinazione. Le cellule non trattate sono state piastrate come controlli. Ogni 24 h, i terreni sono stati sostituiti nei flaconi di controllo e di trattamento, con mezzi freschi, rispettivamente con o senza EtOH e BCAAem o α5m. Quattro giorni dopo l’inseminazione, le cellule sono state tripsinizzate e inseminate in nuovi palloni, a 2 milioni di cellule vitali per pallone, con sostituzioni giornaliere dei terreni, come descritto in precedenza (Pochareddy et al. 2012). Cinque giorni dopo il processo di suddivisione (un totale di 9 giorni con o senza EtOH, BCAAem o α5m, o EtOH più BCAAem o α5m), le cellule sono state raccolte come riportato di seguito per i diversi saggi.
Analisi RT-PCR quantitativa
Le reazioni RT-PCR quantitative sono state realizzate come descritto (Tedesco et al. 2008) ed eseguite con iQ SybrGreenI SuperMix (Bio-Rad; Segrate, Italia) su un sistema di rivelazione di PCR in tempo reale iCycler iQ (Bio-Rad).
In breve, l’RNA è stato isolato da tessuto utilizzando il kit RNeasy® Tissue Mini Kit (Qiagen, Milano, Italia). Il cDNA è stato sintetizzato utilizzando il kit per sintesi di cDNA iScriptTM (Bio-Rad Laboratories, Segrate, Italia).
I primer sono stati progettati utilizzando il software Beacon Designer 2.6 della Premier Biosoft International (le sequenze sono riportate nella seguente Tabella 2). Il numero di cicli al quale sono stati rilevati i vari trascritti (ciclo soglia, CT) è stato confrontato con quello di TBP, indicato come ΔCT. I livelli relativi di geni sono stati espressi come 2-( Δ ΔCT), in cui Δ ΔCT è uguale a ΔCT di ratto trattato con miscela di EtOH o BCAAem o CAA (o cellule HepG2 trattate) meno ΔCT del ratto di controllo (o cellule HepG2 non trattate).
Tabella 2
Ta temperatura di annealing (°C); Numero di accesso PGC-1 α: NM_013261; Numero di accesso Tfam: NM_009360.4; Numero di accesso NRF1: NM_005011; Numero di accesso Cytc: JF919224.1; Numero di accesso TBP: NG_051572 è stato utilizzato per normalizzare l’espressione genica.
Analisi Western Blot
Estratti di proteine sono stati ottenuti da fegato con Reagente di Estrazione di Proteine di Mammifero T-PER (Pierce, ThermoScientific, Rockford, USA) come descritto dal produttore, in presenza di cocktail di inibitori di proteasi e fosfatasi (Sigma Aldrich, Milano, Italia). Il contenuto di proteine è stato misurato mediante il saggio su proteine all’acido bicinconinico (BCA, Pierce, Euroclone, Milano, Italia) e 50 μg di proteine sono state fatte migrare su SDS-PAGE in condizioni riducenti. Le proteine separate sono state quindi trasferite elettroforeticamente a una membrana di nitrocellulosa (Bio-Rad Laboratories, Segrate, Italia). Le proteine di interesse sono state rivelate con anticorpi specifici: anti-p62 e anti- α-actina (tutti dalla Cell Signaling, Euroclone, Milano, Italia), con diluizione 1:1000 ciascuna. L’immunocolorazione è stata rivelata usando immunoglobulina anti-coniglio o anti-topo coniugata con perossidasi di rafano per 1 h a temperatura ambiente. La quantità di proteina è stata misurata usando il substrato SuperSignal Substrate (Pierce, Euroclone, Milano, Italia) e quantificata mediante densitometria con il software analizzatore di immagini IMAGEJ.
Analisi statistica
Per tutti i dati di espressione genica, sono stati utilizzati test t su campioni appaiati bilaterali per confrontare i valori tra cellule di controllo e cellule trattate. Un valore P < 0,05 è stato considerato statisticamente significativo.
RISULTATI
La composizione α5m è più efficace della composizione BCAAem per ripristinare la biogenesi e la funzione mitocondriale epatica compromessa dal consumo di EtOH
È stata valutata la capacità delle composizioni BCAAem e α5m di migliorare la compromissione della biogenesi e della funzione mitocondriale dovuta all’esposizione a EtOH. Per studiare i meccanismi molecolari coinvolti negli effetti esercitati dalle composizioni BCAAem e α5m è stato utilizzato un modello in vitro di tossicità epatica da EtOH.
A tal fine, cellule HepG2 epatiche sono state esposte a EtOH 75 mM, con o senza composizioni BCAAem o α5m, per 9 giorni. I livelli di mRNA di coattivatore del recettore � attivato da proliferatore 1 α (Peroxisome Proliferator – Activated Receptor Gamma Coactivator 1 alpha, PGC-1 α), fattore respiratorio nucleare-1 (NRF-1), fattore di trascrizione di DNA mitocondriale A (Tfam), e cyt c erano invariati o leggermente inferiori nelle cellule HepG2 esposte a EtOH 75 mM per 9 giorni, rispetto alle cellule di controllo non trattate (Fig.1).
Tuttavia, la somministrazione di composizione BCAAem e α5m per 9 giorni ha aumentato i livelli di mRNA di PGC-1 α e Tfam rispetto alle cellule trattate con EtOH e non trattate (Figura 1).
In particolare, l’efficacia della composizione α5m per migliorare i marcatori di biogenesi mitocondriale epatica era statisticamente superiore a quella di BCAAem.
Analisi dell’autofagia
Il flusso autofagico può essere dedotto combinando diversi marcatori, inclusi i livelli proteici di p62/SQSTM1 oltre al rapporto LC3II/LC3I, Beclin1, e Atg7, e fosforilazione di 4EBP1 (Klionsky et al., 2016). È stato dimostrato che P62/SQSTM1 sono incorporate negli autofagosomi e degradate negli autolisosomi. Quindi, un livello ridotto di proteine p62/SQSTM1 è indicativo di una aumentata autofagia (Klionsky et al. 2016).
Come mostrato in Fig. 2 della presente domanda, il livello di proteina p62 era inferiore nelle cellule HepG2 esposte a EtOH 75 mM per 9 giorni rispetto a cellule di controllo non trattate.
Tuttavia, dopo 9 giorni di somministrazione delle composizioni BCAAem o α5m, il livello di proteina p62 era più alto rispetto al livello di p62 delle cellule trattate con EtOH e non trattate.
Anche in questo caso, l’efficacia della composizione α5m era statisticamente superiore a quella della composizione BCAAem.
Quantificazione degli aminoacidi nel fegato
Come sopra descritto, è stato dimostrato che un metabolismo alterato degli aminoacidi - specificamente bassi livelli di BCAA in circolazione - è una caratteristica distintiva della malattia epatica alcolica (Charlton, 2006).
I dati forniti nel seguito si riferiscono agli effetti delle composizioni BCAAem o α5m sul metabolismo degli aminoacidi nel fegato di ratti a cui è stato somministrato cronicamente EtOH.
A tal fine, i livelli di aminoacidi liberi sono stati misurati utilizzando l’analisi cromatografica del tessuto epatico di ratti a cui è stato somministrato EtOH da solo o in combinazione con le composizioni testate.
Come riportato nella Tabella 3, l’integrazione delle composizioni BCAAem e α5m è stata inefficace sul livello di Arginina, Leucina e Triptofano. Al contrario, il consumo di EtOH ha portato ad una riduzione dei livelli di questi aminoacidi nel fegato.
È interessante notare che la somministrazione delle composizioni BCAAem e α5m nei ratti a cui è stato somministrato EtOH ha prevenuto la riduzione di Arginina, Leucina e Triptofano.
Inoltre, le concentrazioni di Isoleucina, Serina, Tirosina e Valina erano inferiori nel fegato di topi esposti a dieta contenente EtOH.
Se l’integrazione di BCAAem non sia stata in grado di prevenirne la diminuzione, l’integrazione di α5m al contrario è stata inoltre efficace nel prevenire la riduzione indotta da EtOH di isoleucina e valina.
Le concentrazioni degli aminoacidi rimanenti non erano statisticamente differenti tra i gruppi.
Questi risultati sono coerenti con la capacità specifica della composizione α5m rispetto alla composizione BCAAem nel rinormalizzare i livelli di BCAA in campioni di fegato di ratti a cui è stato somministrato EtOH.
Tabella 3
I valori sono riportati come medie ± SD (pmol/mg di tessuto), n = 4 animali/gruppo; *P < 0,05 vs gruppo CTRL; Valore <#>P < 0,05 vs gruppo EtOH.
In sintesi, i risultati in vitro e in vivo dimostrano che l’integrazione alimentare con una composizione comprendente un agente attivo, l’agente attivo contenendo una combinazione di leucina, isoleucina, valina, treonina, lisina, acido citrico, acido succinico e acido malico è significativamente efficace nel prevenire il danneggiamento mitocondriale degli epatociti esposti a EtOH.
Questo effetto è anche accompagnato dalla riduzione dell’autofagia (cioè l’aumento dei livelli di proteina p62) che è aumentata (cioè diminuzione dei livelli di proteina p62) per effetto dell’esposizione a EtOH.
L’EtOH di per sé può aumentare l’autofagia per compensare la tossicità dell’EtOH e, in particolare, il danneggiamento mitocondriale che è evidente negli epatociti esposti all’alcol e nel fegato degli animali a cui è stato somministrato alcol.
In realtà, l’autofagia è un meccanismo cellulare volto a eliminare gli organelli malfunzionanti, inclusi i mitocondri. Quando gli epatociti sono esposti all’alcol e la funzione mitocondriale è ridotta, un’aumentata autofagia, come anche descritto nella presente domanda, è utile per eliminare i mitocondri malfunzionanti.
Le composizioni di aminoacidi qui descritte, comprendenti una combinazione di leucina, isoleucina, valina, treonina, lisina, con acido citrico, acido succinico e acido malico, sono in grado di prevenire il danneggiamento mitocondriale, cosicché la cellula non ha bisogno dell’autofagia per mantenere la sua funzione energetica. Di conseguenza, l’autofagia diminuisce (come dimostrato dall’aumento del livello di proteina p62, mostrato nella presente domanda).
Inoltre, e soprattutto, le composizioni descritte sono risultate molto efficaci nel ripristinare le concentrazioni di BCAA liberi, Arginina e Triptofano nel fegato dei ratti a cui è stato somministrato EtOH.
In particolare, i risultati preliminari suggeriscono che le composizioni di aminoacidi qui descritte che comprendono una combinazione di leucina, isoleucina, valina, treonina, lisina, acido citrico, acido succinico e acido malico sono anche in grado di ridurre il diametro delle goccioline lipidiche negli epatociti dei topi esposti per 6 mesi a una dieta ad alto contenuto di grassi (HFD, 60% delle calorie da grassi), un modello murino di NAFLD ampiamente utilizzato. Complessivamente questi risultati supportano fortemente la nozione che le composizioni di aminoacidi qui descritte e attive nella tossicità epatica dipendente dall’alcol possono essere salutari nella prevenzione dello sviluppo e del peggioramento della NAFLD.
Da quanto precede, emerge chiaramente come le composizioni secondo la presente descrizione siano utili per la prevenzione e/o il trattamento di malattie epatiche che colpiscono in tutto il mondo una grande parte della popolazione adulta, con crescenti costi per la comunità.
RIFERIMENTI
Charlton M. (2006) Branched-Chain Amino Acid Enriched Supplements as Therapy for Liver Disease. J Nutr 136: 295S-298S.
Cho HI, Choi JW, Lee SM (2014) Impairment of autophagosome-lysosome fusion contributes to chronic ethanol-induced liver injury. Alcohol 48:717–725.
Cooper GM e Hausman RE (2009) La cellula. Un approccio molecolare. Bioenergetica e metabolismo. Mitocondri, cloroplasti e perossisomi. Piccin 11: 432-468.
Ding WX, Li M, Chen X, Ni HM, Lin CW, Gao W, Lu B, Stolz DB, Clemens DL, Yin XM (2010) Autophagy reduces acute ethanol-induced hepatotoxicity and steatosis in mice. Gastroenterology 139:1740–1752.
Jung CH, Ro S-H, Cao J, Otto NM, Kim D-H (2010) mTOR regulation of autophagy. FEBS Lett 584:1287–1295.
Klionsky DJ et al (2016) Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy (3rd edition). Autophagy 12:1–222.
Lin CW, Zhang H, Li M, Xiong X, Chen X, Chen X, Dong XC, Yin XM (2013) Pharmacological promotion of autophagy alleviates steatosis and injury in alcoholic and non-alcoholic fatty liver conditions in mice. J Hepatol 58:993–999.
Lin Wang, Bilon Khambu, Hao Zhang, Xiao-Ming Yin (2015) Autophagy in alcoholic liver disease, self-eating triggered by drinking. Clinics and research in hepatology and gastroenterology 39, S2-S6.
Le A, Ng A, Kwan T, Cusmano-Ozog K, Cowan TM. (2014) A rapid, sensitive method for quantitative analysis of underivatized amino acids by liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 944: 166-174.
Mantena SK, King AL, Andringa KK, Eccleston HB e Bailey SM (2008) Mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the pathogenesis of alcohol- and obesity-induced fatty liver diseases. Free Radical Biology and Medicine 44: 1259-1272.
Ni H-M, Du K, You M, Ding W-X (2013) Critical role of FoxO3a in alcoholinduced autophagy and hepatotoxicity. Am J Pathol 183:1815–1825.
Pochareddy S, Edenberg HJ. (2012) Chronic alcohol exposure alters gene expression in HepG2 cells. Alcohol Clin Exp Res 36: 1021-1033.
Tedesco L, Valerio A, Cervino C, Cardile A, Pagano C, Vettor R, Pasquali R, Carruba MO, Marsicano G, Lutz B, Pagotto U, e Nisoli E. (2008) Cannabinoid type 1 receptor blockade promotes mitochondrial biogenesis through endothelial nitric oxide synthase expression in white adipocytes. Diabetes 57: 2028-2036.
Thomes PG, Trambly CS, Fox HS, Tuma DJ, Donohue TM Jr (2015) Acute and chronic ethanol administration differentially modulate hepatic autophagy and transcription factor EB. Alcohol Clin Exp Res 39:2354–2363. https:// doi.org/10.1111/acer.12904.
Valerio A, D’Antona G, Nisoli E. (2011) Branched-chain amino acids, mitochondrial biogenesis, and healthspan: an evolutionary perspective. Aging 3: 464-478.
Want EJ, Masson P, Michopoulos F, Wilson ID, Theodoridis G, Plumb RS, Shockcor J, Loftus N, Holmes E, Nicholson JK. (2013) Global metabolic profiling of animal and human tissues via UPLC-MS. Nat Protoc 8: 17-32.

Claims (14)

  1. RIVENDICAZIONI 1. Composizione per l’uso nella prevenzione e/o nel trattamento di una malattia epatica in un mammifero, la composizione comprendendo un agente attivo, detto agente attivo contenendo gli aminoacidi leucina, isoleucina, valina, treonina, lisina e gli acidi carbossilici acido citrico, acido succinico, acido malico.
  2. 2. Composizione per l’uso secondo la rivendicazione 1, in cui il rapporto in peso tra la quantità totale di acido citrico, acido malico, acido succinico e la quantità totale di leucina, isoleucina, valina, lisina, treonina è compreso tra 0,05 e 0,3, preferibilmente tra 0,1 e 0,25.
  3. 3. Composizione per l’uso secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui il rapporto in peso tra la quantità totale di acido citrico, acido malico, acido succinico e la quantità totale di leucina, isoleucina, valina è compreso tra 0,1 e 0,4, preferibilmente tra 0,15 e 0,35.
  4. 4. Composizione per l’uso secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui il rapporto in peso tra acido citrico e la somma di acido malico e acido succinico è compreso tra 1,0 e 4,0, preferibilmente tra 1,5 e 2,5.
  5. 5. Composizione per l’uso secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui il rapporto in peso acido citrico:acido malico:acido succinico è compreso tra 10:1:1 e 2:1,5:1,5, preferibilmente tra 7:1:1 e 1,5:1:1, più preferibilmente tra 5:1:1 e 3:1:1.
  6. 6. Composizione per l’uso secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui detto agente attivo comprende inoltre almeno un aminoacido scelto nel gruppo costituito da istidina, fenilalanina, metionina, triptofano, tirosina, cisteina.
  7. 7. Composizione per l’uso secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui detto agente attivo comprende inoltre istidina, fenilalanina, metionina, triptofano, cisteina ed opzionalmente tirosina.
  8. 8. Composizione per l’uso secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui il rapporto tra la quantità molare totale di acido citrico, acido malico, acido succinico e la quantità molare totale di metionina, fenilalanina, istidina e triptofano è superiore a 1,35.
  9. 9. Composizione per l’uso secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui il rapporto tra la quantità molare totale dei tre acidi carbossilici acido citrico, acido succinico, acido malico e la quantità molare totale di lisina e treonina è compreso tra 0,10 e 0,70 preferibilmente tra 0,15 e 0,55.
  10. 10. Composizione per l’uso secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui la quantità molare o in peso di acido citrico è superiore alla quantità molare o in peso totale di acido malico e di acido succinico.
  11. 11. Composizione per l’uso secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui il rapporto in peso tra leucina e acido citrico è compreso tra 5 e 1, preferibilmente tra 2,50 e 3,50.
  12. 12. Composizione per l’uso secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui la composizione comprende inoltre una o più vitamine, preferibilmente scelte nel gruppo di vitamine B, più preferibilmente vitamina B1 e/o vitamina B6.
  13. 13. Composizione per l’uso secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 12, in cui la malattia epatica è scelta nel gruppo costituito da malattia da fegato grasso, lipodistrofia, epatite, cirrosi, carcinoma epatocellulare (HCC).
  14. 14. Composizione per l’uso secondo la rivendicazione 13, in cui la malattia epatica è scelta tra malattia epatica alcolica (ALD) e malattia del fegato grasso non alcolica (NAFLD).
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DK19166892.0T DK3586837T3 (da) 2018-06-27 2019-04-02 Sammensætninger omfattende aminosyrer til anvendelse ved forebyggelse og behandling af leversygdomme
SG11202012297XA SG11202012297XA (en) 2018-06-27 2019-04-02 Compositions comprising amino acids for use in the prevention and treatment of liver diseases
KR1020217002459A KR20210025611A (ko) 2018-06-27 2019-04-02 간 질환의 예방 및 치료에 사용하기 위한 아미노산을 포함하는 조성물(compositions comprising amino acids for use in the prevention and treatment of liver diseases)
RS20210318A RS61613B1 (sr) 2018-06-27 2019-04-02 Kompozicije koje sadrže aminokiseline za upotrebu u prevenciji i lečenju bolesti jetre
ES19166892T ES2858355T3 (es) 2018-06-27 2019-04-02 Composiciones que comprenden aminoácidos para su uso en la prevención y el tratamiento de enfermedades hepáticas
AU2019293293A AU2019293293A1 (en) 2018-06-27 2019-04-02 Compositions comprising amino acids for use in the prevention and treatment of liver diseases
MX2020013471A MX2020013471A (es) 2018-06-27 2019-04-02 Composicion de aminoacidos para su uso en la prevencion y tratamiento de enfermedades hepaticas.
US17/255,887 US20210260011A1 (en) 2018-06-27 2019-04-02 Compositions comprising amino acids for use in the prevention and treatment of liver diseases
LTEP19166892.0T LT3586837T (lt) 2018-06-27 2019-04-02 Kompozicijos, apimančios aminorūgštis, skirtos panaudoti kepenų ligų prevencijai ir gydymui
JP2020568462A JP7347744B2 (ja) 2018-06-27 2019-04-02 肝疾患の予防および治療に使用されるアミノ酸を含む組成物
CA3104839A CA3104839A1 (en) 2018-06-27 2019-04-02 Compositions comprising amino acids for use in the prevention and treatment of liver diseases
PCT/IB2019/052694 WO2020003013A1 (en) 2018-06-27 2019-04-02 Compositions comprising amino acids for use in the prevention and treatment of liver diseases
BR112020026431-8A BR112020026431A2 (pt) 2018-06-27 2019-04-02 Composição para uso na prevenção e/ou no tratamento de uma doença hepática.
PL19166892T PL3586837T3 (pl) 2018-06-27 2019-04-02 Kompozycje zawierające aminokwasy do stosowania w zapobieganiu i leczeniu chorób wątroby
CL2020003209A CL2020003209A1 (es) 2018-06-27 2020-12-10 Composición de aminoácidos para su uso en la prevención y tratamiento de enfermedades hepáticas
ZA2020/07834A ZA202007834B (en) 2018-06-27 2020-12-15 Compositions comprising amino acids for use in the prevention and treatment of liver diseases
PH12020552254A PH12020552254A1 (en) 2018-06-27 2020-12-22 Compositions comprising amino acids for use in the prevention and treatment of liver diseases
CY20211100249T CY1124030T1 (el) 2018-06-27 2021-03-22 Συνθεσεις που περιλαμβανουν αμινοξεα για χρηση στην προληψη και θεραπεια ηπατικων νοσων

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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT201700087376A1 (it) 2017-07-28 2019-01-28 Professional Dietetics Spa Composizioni comprendenti amino acidi per l'uso nel trattamento di malattie associate a disfunzione mitocondriale
IT201700087359A1 (it) 2017-07-28 2019-01-28 Professional Dietetics Spa Composizioni comprendenti amino acidi per l'uso nel trattamento di malattie associate a disfunzione mitocondriale
IT202000000454A1 (it) * 2020-01-13 2021-07-13 Professional Dietetics Spa Composizioni comprendenti amino acidi per la prevenzione e il trattamento del cancro
WO2022266480A1 (en) * 2021-06-17 2022-12-22 Axcella Health Inc. Methods of predicting liver fat content and uses thereof

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007049818A1 (ja) * 2005-10-27 2007-05-03 Ajinomoto Co., Inc. 抗脂肪肝、抗肥満及び抗高脂血症用組成物
WO2016179657A1 (en) * 2015-05-11 2016-11-17 Newcastle Innovation Limited Amino acid supplementation

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001521002A (ja) * 1997-10-24 2001-11-06 コーネル リサーチ ファンデーション インク． 脳の代謝機能不全のための栄養補充剤
JP2007161642A (ja) * 2005-12-14 2007-06-28 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd アルコール性肝障害抑制剤
US20130084378A1 (en) * 2011-09-30 2013-04-04 Daesang Corporation Amino acid seasoning compositions comprising l-glutamic acid and l-lysine
US9597367B2 (en) * 2013-04-19 2017-03-21 Bioventures, Llc Methods for improving muscle and heart function
JP6013670B1 (ja) * 2014-12-09 2016-10-25 株式会社日本自然発酵 老化抑制剤

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007049818A1 (ja) * 2005-10-27 2007-05-03 Ajinomoto Co., Inc. 抗脂肪肝、抗肥満及び抗高脂血症用組成物
WO2016179657A1 (en) * 2015-05-11 2016-11-17 Newcastle Innovation Limited Amino acid supplementation

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DATABASE WPI Week 200744, 3 May 2007 Derwent World Patents Index; AN 2007-458974, XP002788927 *

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