HUT72597A - New peptide, pharmaceutical compositions containing them and process for producing them - Google Patents

New peptide, pharmaceutical compositions containing them and process for producing them Download PDF

Info

Publication number
HUT72597A
HUT72597A HU9502041A HU9502041A HUT72597A HU T72597 A HUT72597 A HU T72597A HU 9502041 A HU9502041 A HU 9502041A HU 9502041 A HU9502041 A HU 9502041A HU T72597 A HUT72597 A HU T72597A
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
phe
tic
tyr
hydrogen
formula
Prior art date
Application number
HU9502041A
Other languages
English (en)
Other versions
HU9502041D0 (en
Inventor
Peter Schiller
Original Assignee
Astra Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Astra Ab filed Critical Astra Ab
Publication of HU9502041D0 publication Critical patent/HU9502041D0/hu
Publication of HUT72597A publication Critical patent/HUT72597A/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/665—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
    • C07K14/70—Enkephalins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0207—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)4-C(=0), e.g. 'isosters', replacing two amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1016—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

A találmány új, (I) általános képletű opioid peptid analógokra, szintézisükre, gyógyszerkészítményeikre, valamint fájdalomcsillapító és immunszuppresszív vegyületekként történő felhasználásukra vonatkozik. Az (I) általános képletben
R]_ hidrogénatom, CH3(CH2)n-, fenetil-, ciklopropil-metil-, allil- vagy arginilcsoport;
R2 hidrogénatom, CH3(CH2)n-, ciklopropil-metil- vagy allilcsoport;
R3, R4, R5 és Rg hidrogénatom, vagy
R4 és R5 hidrogénatom, és
R3 és Rg alkilcsoport, vagy
R3, R5 és Rg jelentése hidrogénatom, és
R4 fluor-, klór-, brómatom, hidroxi-, amino-, nitrocsoport;
R7 karbonil- vagy metiléncsoport;
. - 2 -
R8 hidrogénatom vagy alkilcsoport;
Rg (a), (g) általános képletű vagy (b) , (c) , (d) , (e) , (f) képletű csoport;
R10 hidrogén-, fluor-, klór-, bróm- vagy jódatom, és
Rn hidroxi-, aminocsoport vagy (h) általános képletű csoport;
R12 hidrogén-, fluor-, klór-, bróm-, jódatom, nitrocsoport,
R13 karboxi-, karbamoil-, hidroxi-metil-csoport, egy aminosavvagy peptidszegmens, vagy (i) általános képletű csoport;
R14 karboxi-, karbamoil-, hidroxi-metil-csoport, egy aminosavvagy peptidszegmens;
m értéke 0, 1 vagy 2,
n értéke 0-12,
kivéve azokat a vegyületeket, amelyek képletében Rlz R2, R3, R4, R5, Rg és Rg hidrogénatom; R7 jelentése karbonilcsoport; R9 jelentése (j) képletű csoport; és Rlx jelentése hidroxi-fenil-, amino-fenil-, hidroxi- vagy aminocsoport.
4 /
V S.B.G. & K. Nemzetközi Szabadalmi Iroda
< H-1062 Budapest, Andrássy út 113.
Telefon: 34-24-950, Fax: 34-24-323
60.850/ΒΕ
KÖZZÉTÉTELI PÉLDÁNY
Új peptidek, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és eljárás előállításukra
ASTRA AKTIEBOLAGET, SÖDERTALJE, SE
Feltaláló:
SCHILLER Peter, MONTREAL, Quebec, CA
A bejelentés napja: 1993. 12. 20.
Elsőbbsége: 1993. 01. 05. (9300012-3) SE
A nemzetközi bejelentés száma: PCT/SE93/010909
A nemzetközi közzététel száma: WO 94/15959
- 2 A találmány az opioid peptid analógok új, opioid δ-receptor antagonista osztályára, szintézisükre, valamint fájdalomcsillapító és immunszuppressziv vegyületekként történő felhasználásukra vonatkozik.
Az egyik ismert, nempeptid opioid δ-antagonista a Portohese által ismertetett naltrindole [P. S. Portoghese et al., J. Med. Chem., 31, 281-282 (1988)]. A naltrindole a jelen találmány szerinti vegyületekéhez hasonló δ-antagonista hatékonysággal, de azokénál lényegesen kisebb δ-szelektivitással rendelkezik. Ezen túlmenően a noltrindole-nak meglehetősen magas μ opiμ óid receptor affinitása van (K^ = 12 nM) a receptor kötési vizsgálatban, valamint jelentős antagonista tulajdonságokat mutat (Ke = 29 nM) a tengeri malac ileum (guinea pig ileum; GPI) tesztben is [P. S. Portoghese et al., J. Med. Chem., 34, 1757-1762 (1991)].
Egy másik ismert δ-antagonista a Cotton által ismertetett enkefalin analóg, az N, N-diallil-Tyr-Aib-Aib-Ph-Leu-OH (ICI 174864) [R. Cotton et al., Eur. J. Pharmacol., 97, 331-332 (1984)] . A jelen leírásban ismertetett δ-antagonistákkal összehasonlítva az ICI 174864 δ-szelektivitása lényegesen kisebb (10-300-szor kisebb), és az MVD vizsgálatban is sokkal kisebb (40-1000-szer kisebb) antagonista hatáserősséget mutat.
A közelmúltban Schiller és munkatársai hatásos δ-antagonista tetrapeptideket ismertettek a következő helyeken: P. W. Schiller et al., FASEB J., 6 (4), A 1575 (1992); International Narcotics Resarch Conference (INRC) Meeting, Keystone, CO, USA, June 24-29 (1992); és 2nd Japan Symposium on Peptide Chemistry,
- 3 - .......
Shizuoka, Japan, Nov. 9-13 (1992).
Meglepő módon azt találtuk, az alábbi (I) általános képletű vegyületek a δ-receptorral szemben rendkívül szelektívek, δ-antagonistaként igen hatásosak, teljes mértékben nélkülözik a μ-antagonista tulajdonságokat, néhány esetben kevert μ-agonista/δ-antagonista tulajdonságokat mutatnak (TIPP analógok egy C-terminális karbamoilcsoporttal).
A találmány szerinti vegyületek közé tartoznak az olyan (I) általános képletü vegyületek, amelyek képletében
R·! jelentése hidrogénatom, CH3(CH2)n- általános képletü csoport, amelyben n értéke 0-12, fenetil-, ciklopropil-metil-, allil- vagy arginilcsoport;
R2 jelentése hidrogénatom, CH3(CH2)n- általános képletü csoport, amelyben n értéke 0-12, ciklopropil-metil- vagy allilcsoport;
R3, R4, R5 és Rg jelentése hidrogénatom, vagy
R4 és R5 jelentése hidrogénatom, és
R3 és Rg jelentése rövid szénláncú alkilcsoport, vagy
R3, R5 és Rg jelentése hidrogénatom, és
R4 jelentése fluor-, klór-, brómatom, hidroxi-, amino- vágyni trocsoport;
R7 jelentése karbonil- vagy metiléncsoport;
Rg jelentése hidrogénatom vagy rövid szénláncú alkilcsoport;
Rg jelentése (a) általános képletű csoport, amelyben m értéke 0, 1 vagy 2, (b), (c), (d), (e) , (f) képletű csoport vagy (g) általános képletű csoport, amelyben
R10 jelentése hidrogén-, fluor-, klór-, bróm- vagy jódatom, és m értéke 0, 1 vagy 2;
R1X jelentése hidroxi-, aminocsoport vagy (h) általános képletű csoport, amelyben R12 jelentése hidrogénatom, nitrocsoport, fluor-, klór-, bróm- vagy jódatom, m értéke 0, 1 vagy 2,
R13 jelentése karboxi-, karbamoil-, hidroxi-metil-csoport vagy bármely további aminosav- vagy peptidszegmens, vagy (i) általános képletű csoport, amelyben r14 jelentése karboxi-, karbamoil-, hidroxi-metil-csoport vagy bármely további aminosav- vagy peptidszegmens;
kivéve azokat a vegyületeket, amelyek képletében
Rlr R2, R3, R4, R5, Rg és Rg mindegyikének jelentése hidrogénatom;
R7 jelentése karbonilcsoport;
Rg jelentése (j) képletű csoport; és
R14 jelentése hidroxi-fenil-, amino-fenil-, hidroxi- vagy aminocsoport .
A jelen leírásban a rövid szénláncú alkilcsoport kifejezés
1-6 szénatomos alkilcsoportra vonatkozik.
A találmány szerinti vegyületek közül különösen előnyösek azok, amelyek képletében R7 jelenlétében metiléncsoport (egy redukált peptidkötés részeként). Egy redukált peptidkötés jelenléte nagyobb δ-antagonista hatékonyságot, fokozott Ő-szelektivitást, szerves oldószerekben nagyobb stabilitást és az enzimes lebontással szembeni nagyobb ellenálló képességet biztosít a vegyületnek.
Ugyancsak előnyösek az olyan találmány szerinti vegyületek, amelyek képletében R4 és R5 jelentése hidrogénatom, valamint R3 és Rg mindegyikének jelentése metilcsoport.
Szintézis
A peptidszintézisekben alkalmazott legtöbb Boc-aminosav-származék kereskedelmi termék. A 2,6-dimetil-tirozint (Dmt) Dygos módszere [J. H. Digos et al., Synthesis, No 8, 741-743 (1992)] szerint, míg a 2-amino-2-tetralinkarbonsavat Schiller eljárásának [P. W. Schiller et al., J. Med. Chem., 34, 3125-3132 (1991)] megfelelően állítottuk elő.
Valamennyi peptidet szilárd fázisú eljárások útján állítottuk elő. A szabad C-terminális karboxilcsoporttal rndelkező peptidek szilárd fázisú szintéziséhez a szokásos polisztirol/(divinil-benzol)-gyantát alkalmaztuk, míg a peptidamidokat p-metil-benzhidril-amin-gyanta felhasználásával szintetizáltuk. Valamennyi peptid előállítása során az aminocsoportot terc-butoxi-karbonil-csoporttal (Boc) védtük. A szintéziseket a laboratóriumunkban hosszabb ideje általánosan alkalmazott előírá soknak [P. W. Schiller et al., Biochemistry, 16, 1831-1832 (1977)] megfelelően hajtottuk végre. A kapcsolásokat metilén-dikloridban vagy N, N-dimetil-formamidban, diciklohexil-karbodiimid/l-hidroxi-benzo-triazol (DCC/HOBt) kapcsolószer alkalmazásával végeztük. A kapcsolási reakciók teljes végbemenetelét a ninhidrines szinvizsgálat segítségével minden egyes kapcsolási lépés után gondosan ellenőriztük. A teljesen összeállított peptidláncot 0 °C hőmérsékleten anizol védőanyag jelenlétében cseppfolyós hidrogén-fluoriddal 60-90 percen keresztül végzett reakcióval lehasitottuk a gyantáról és eltávolítottuk az összes védőcsoportot.
A -CH2NH- peptidkötés izosztert tartalmazó analógokat a Sasaki és Coy által kifejlesztett eljárásnak megfelelő szilárd fázisú szintézissel állítottuk elő [Y. Sasaki and D. H. Coy, Peptides, 8y 119-121 (1987)]. Ezzel az eljárással, megsavanyitott N, N-dimetil-formamidban nátrium-[ciano-trihidrido-borát](1—)-ot alkalmazva, egy Boc-aminosavaldehid és a gyantán kötött peptid egy aminocsoportja közti reduktív alkilezési reakcióval közvetlenül bevihető a -CH2NH- peptidkötés. Az eljárás alkalmazásakor észrevehető mértékű racemizációt nem tapasztaltunk. A Boc-Tic aldehidet a megfelelő Boc-Tic W-metoxi-N-metil-amidon keresztül, a racemizációmentesként ismertetett lítium-alumínium-hidrides redukciós módszerrel [J. A. Fehrentz and B. Castro, Synthesis, 676-678 (1983)] szintetizáltuk. A redukált peptidkötéseket tartalmazó peptideket lehasitottuk a gyantáról, majd a fentiekben ismertetett hidrogén-fluorid/anizol eljárással eltávolitottuk a védőcsoportokat.
A szilárd fázisú peptidszintézisből nyert nyers termékeket különféle kromatográfiás eljárásokkal vagy más módszerekkel meg kellett tisztítani. A hidrogén-fluoridos hasítás és a gyanta extrakciója után minden esetben Sephadex (G15 vagy G25) gélszűrést végeztünk. Az ezt követő tisztítási különféle lépések magukban foglalták — egyebek mellett — a következőket: változó összetételű butanol/ecetsav/piridin/víz kétfázisú rendszerek alkalmazásával Sephadex G25 gélen végzett megoszlásos kromatográfia; ioncserés kromatográfia (DEAE-Sephadex, SP-Sephadex és CM-cellulóz); valamint oktadekaszilil-szilikagél oszlopon, 1 %os trifluor-ecetsavban kialakított lineáris metanol gradienssel végrehajtott (alacsony nyomású) reverz fázisú kromatográfia. Szükséges esetben a homogenitás eléréséhez a végső tisztítást félpreparatív HPLC útján végeztük. Ennek során félpreparatív μ-Bondapak C-18 kolonnákat (Waters, 0,7 χ 25 cm) alkalmaztunk, amelyek az adott elválasztási problémától függően sarzsonként
2-20 mg peptidanyag tisztítását tették lehetővé. Az előállított peptidek homogenitásának igazolására és szerkezetük alátámasztására többféle nagy érzékenységű és nagy hatékonyságú analitikai módszert alkalmaztunk. A tisztaság igazolására legalább két, egynmástól eltérő oldószerrendszerben végrehajtott vékonyréteg-kromatográfiát használtunk. Ezen túlmenően a laboratóriumban rutinszerűen alkalmaztuk, mint igen érzékeny tisztasági tesztet a két vagy három különböző oldószerrendszerrel végrehajtott HPLC-t. A peptidstruktúra megerősítését általában az aminosav-analízis és a gyorsatombombázásos tömegspektrometria (FAB-MS) alapján végeztük. Az aminosav-analízisek során a pép·· ··
- 8 ν tideket légmentesített csövekben, kis mennyiségű fenolt tartalmazó 6 M sósavoldatban 24 órán keresztül 110 °C hőmérsékleten hidrolizáltuk (az aminosav-degradálódás figyelembevételével a hidrolízis ideje néhány esetben 12 óra vagy 48 óra volt). A hidrolizátumokat egy AA rendszerű számítógépes integrátorral felszerelt Beckman Model 121 C aminosav-analizátorral elemeztük. A peptidek korrekt molekulatömegének a megállapítására FAB tömegspektrometriát alkalmaztunk.
AZ EGYEDI ANALÓGOK PÉLDÁI
1. PÉLDA
H-Tyr-Tic-Hfe-Phe-OH g Boc-Phe-O-gyantát (0,61 mmol Boc-Phe/g gyanta; Peninsula, Belmont, Kalifornia, Amerikai Egyesült Államok) a következő sorrendben a következő reagensekkel mostunk: metilén-diklorid (3x1 perc), 50 térfogati metilén-dikloridos trifluor-ecetsav-oldat (30 perc), metilén-diklorid (5x1 perc), 10 térfogati metilén-dikloridos diizopropil-etil-amin-oldat (DIEA) (2x5 perc), metilén-diklorid (5x1 perc). Ezt követően 205 mg (1,52 mmol) 1-hidroxi-benzo-triazol (HOBt) és 313 mg (1,52 mmol) diciklokarbo-diimid (DCC) alkalmazásával 3:1 térfogatarányú metilén-diklorid/N, N-dimetil-formamid oldószerelegyben 17 órán keresztül 425 mg (1,52 mmol) Boc-Hfe-OH-t kapcsoltunk a gyantához. A gyantát metilén-dikloriddal (3x1 perc), etanollal (1 perc) és metilén-dikloriddal (3x1 perc) mostuk. A mosásokat és a reakciókat ugyanebben a sorrendben ismételtük minden egyes csoport hozzáadásakor, kivéve a következő módosításokat.
• · · ·
A Boc-Tic-OH kapcsolása után a gyantát háromszor 3:1 térfogatarányú metilén-diklorid/N, N-dimetil-formamid oldószereleggyel mostuk, majd ugyanolyan mennyiségű Boc-Tic-OH, HOBt és DCC alkalmazásával, metilén-diklorid/N,N-dimetil-formamid oldószerelegyben további 17 órán keresztül egy ismételt kapcsolási lépést hajtottunk végre. Ugyanezt az ismételt kapcsolási lépést elvégeztük a Boc-Tyr(Boc)-OH kapcsolásakor is. A védőcsoportok 50 térfogata metilén-dikloridos trifluor-ecetsavval végzett eltávolítása (30 perc) után a gyantát metilén-dikloriddal (3x1 perc) és etanollal (3x1 perc) mostuk, majd exszikkátorban szárítottuk. A száraz gyantát 20 ml hidrogén-fluorid és 1 ml anizol elegyével először 90 percen keresztül 0 °C hőmérsékleten, majd 15 percen át szobahőmérsékleten reagáltattuk. A hidrogén-fluorid lepárlása után a gyantát háromszor dietil-éterrel, majd ezt követően három alkalommal 7 % ecetsavoldattal extraháltuk. Az egyesített ecetsavas extraktumokat liofilizáltuk, és így szilárd formában nyertük a nyers peptidet.
A peptidet Sephadex G25 oszlopon, 0,5 M ecetsavoldatban végzett gélszűréssel, ezt követően oktadekaszilil-szilikagéloszlopon, 1 % trifluor-ecetsav-oldatban kialakított 0-80 % lineáris metanol gradienssel végzett reverz fázisú kromatográfiával tisztítottuk. Az oldószer lepárlása után a tiszta peptidet feloldottuk tömény ecetsavban, majd liofilizálást követően szilárd formában nyertük.
Kihozatal: 45 mg.
FAB-MS:MH+ = 648.
VRK (szilikagél): Rf 0,75 (4:1:5 térfogatarányú butanol/ecet•·♦·· •· •· · ·
- 10 sav/víz, szerves fázis); Rf 0,70 (15:10:3:12 térfogatarányú butanol/piridin/ecetsav/viz).
Aminosav-analizis: Tyr 0,96, Hfe 1,03, Phe 1,00.
2. PÉLDA
H-Tyr-ΤίοΨ [CH2-NH] Phe-Phe-OH
Ennek a pepiidnek a szintézisét ugyanazzal a gyantával, ugyanúgy végeztük, ahogyan azt az 1. Példában ismertettük, ki-
3 véve azt, hogy egy redukált peptidkötésnek a Tic és Phe csoport közé történő bevezetése miatt szükségessé vált egy reduktív alkilezési reakció a Boc-Tic-aldehid és a gyantához kötött H-Phe-Phe dipeptid aminocsoportja között.
Az N-(terc-butoxi-karbonil)-L-l,2,3, 4-tetrahidroizokinolin-3-aldehid (Boc-Tic aldehid) előállítása N-(terc-butoxi-karbonil)-L-l, 2,3, 4-tetrahidroizokinolin-3-(N-metil-N-metoxi-amid)on keresztül
2,8 g (10 mmol) Boc-Tic-OH és 1,33 ml (10 mmol) trietil-amin metilén-dikloriddal készített oldatához kevertetés közben hozzáadtunk 3,48 g (10 mmol) BOP reagenst {BOP = [(1-benzo-triazolil)-oxi]-trisz(dimetil-amino)-foszfónium—(hexafluoro-foszfát)}. Öt perc elteltével 1,2 g (12 mmol) NzN-dimetil-hidroxil-amin—hidrokloridot és 1,68 ml (12 mmol) trietil-amint adtunk az oldathoz. A reakciót 17 órán keresztül folytattuk. Ezt követően a reakciókeveréket metilén-dikloriddal meghígítottuk, majd 3 M sósavoldattal, telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mostuk. A szerves oldatot vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk, ···« ····
- 11 majd az oldószert lepároltuk. Az így kapott nyers N-(terc-butoxi-karbonil)-l-1,2,3, 4-tetrahidroizokinolin-3-(N-metil-N-metoxi-amid) terméket 1:2 térfogatarányú etil-acetát/hexán eluenssel szilikagélen kromatografálva tisztítottuk.
Kihozatal: 2,1 g (65 %), olaj.
VRK (szilikagél): Rf 0,57 (1:1 térfogatarányú etil-acetát/hexán); Rf 0,30 (1:2 térfogatarányú etil-acetát/hexán).
1H-NMR (CDC13) : δ 1,45 (9H, terc-butil), 3,00 (2H, H-4), 3,18 (3H, NCH3), 3,8 (3H, OCH3) , 4,42-4, 90 (3H, 2H-1 és 1H-3), 7,17 (4H, aromások).
1,2 g (4 mmol) N-(terc-butoxi-karbonil)-L-l,2,3, 4-tetrahidroizokinolin-3-(W-metil-N-metoxi-amid) 30 ml dietil-éterrel készített oldatához kevertetés közben 190 mg (5 mmol) lítium-alumínium-hidridet adtunk. A redukciós reakciót egy órán keresztül végeztük, majd a reakciókeveréket 954 mg (7 mmol) kálium-hidrogén-szulfát 20 ml vízzel készített oldatával hidrolizáltuk. Ezt követően a vizes fázist elválasztottuk, majd háromszor 50 ml dietil-éterrel extraháltuk. A négy szerves fázist egyesítettük, 3 M sósavoldattal, telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mostuk, végül vízmentes magnézium-szulfát felett szárítottuk. Az oldószer lepárlása után az aldehidet olajként, tiszta formában nyertük.
Kihozatal: 635 mg (60 %), olaj.
VRK (szilikagél): Rf 0,84 (1:1 térfogatarányú etil-acetát/hexán), Rf 0,57 (1:2 térfogatarányú etil-acetát/hexán).
1H-NMR (CDCI3) : δ 1,5 (9H, terc-butil) , 3,0-3,27 (2H, H-4), ·<··«
4,4-4,8 (3Η, 2Η-1 és 1H-3), 7,0-7,2 (4H, aromások), 9,43 (1H,
CHO) .
Reduktív alkilezési reakció a Boc-Tic aldehid és a H-Phe-Phe-Ogyanta között
A gyantát kétszer 1 percig N, N-dimetil-formamiddal mostuk, majd a gyantához hozzáadtuk 392 mg (1,52 mmol) Boc-Tic aldehid 1 % ecetsavat tartalmazó N, N-dimetil-formamiddal készített oldatát. Ezt követően részletekben, körülbelül 40 perc alatt 115 mg (18,83 mmol) nátrium-[ciano-trihidrido-borát](1—)-ot adtunk a keverékhez, majd a reakciót 3 órán keresztül folytattuk.
Az N-terminális tirozilcsoport kapcsolása és a védőcsoportok eltávolítása után a peptidet az 1. Példában ismertetetteknek megfelelően lehasítottuk a gyantáról, tisztítottuk és liofilizáltuk.
Kihozatal·: 180 mg.
FAB-MS:MH+ = 633.
VRK (szilikagél): Rf 0,73 (4:1:5 térfogatarányú butanol/ecetsav/viz, szerves fázis); Rf 0,69 (15:10:3:12 térfogatarányú butanol/piridin/ecetsav/víz).
Aminosav-analízis: Tyr 0,95, Phe 1,00.
Az alábbiakban felsorolt találmány szerinti vegyületeket szintetizáltuk és teszteltük, mint δ-antagonistákat.
Az opioid δ-antagonisták in vitro farmakológiai vizsgálata
A biológiai vizsgálatok az egér ondóelvezető (mouse vas deferens, MVD) és a tengeri malac csípőbél (guinea pig ileum,
GPI) elektromosan kiváltott kontrakcióinak gátlásán alapultak.
···»
- 13 A GPI tesztekben az opioid hatást elsődlegesen az opioid μ-receptorok közvetítik, míg az MVD vizsgálatokban a kontrakciók gátlása leginkább az opioid δ-receptorokkal történő kölcsönhatás következménye. Ezekben a vizsgálatokban az antagonista hatékonyságot az úgynevezett Ke értékek formájában fejezzük ki [H. W. Kosterlitz and A. J. Watt, Br. J. Pharmacol., 33, 266-276 (1968)]. Az agonista hatékonyságot IC50 értékek formájában adjuk meg (az IC50 az agonista azon koncentrációját jelenti, amely 50 %-os mértékben gátolja az elektromos úton indukált kontrakciókat).
Izolált szervpreparátumokkal végzett biológiai vizsgálatok
A GPI és az MVD biológiai vizsgálatokat a következő szakirodalmi helyeken ismertetetteknek megfelelően hajtottuk végre: P. W. Schiller et al., Biochem. Biophys. Rés. Commun., 85, 1332-1338 (1978); és J. Di Maio et al. , J. Med. Chem., 25, 1432-1438 (1982). A lóg dózis-válasz görbéket valamennyi ileum és vas preparátum esetén [Leu ]enkefalin standard alkalmazásával határoztuk meg, míg a tesztelt vegyületek IC50 értékeit Waterfield szerint normalizáltuk [A. A. Waterfield et al., Eur. J. Pharmacol., 58, 11-18 (1979)]. A TIPP-pel rokon antagonisták esetén a Ke értékeket egy rögzített antagonista koncentráció (a) jelenlétében vagy hiányában nyert IC5Q értékek (DR) arányából határoztuk meg [Ke = a/(DR-l)] [H. W. Kosterlitz and A. J.
Watt, Br. J. Pharmacol., 33, 266-276 (1968)]. A meghatározásokat az MVD teszttel végeztük, amelynek során a következő három δ-szelektív agonistát alkalmaztuk: [Leu5]enkefalin, DPDPE és [D-Ala2]deltorfin I.
- 14 A kapott eredményeket az 1. táblázatban foglaljuk össze.
1. táblázat
A TIP(P) rokon peptidek Ke-értékei az MVD vizsgálatban {Antagonista hatékonyság a [Leu Jenkefalin, a [D-Pen ,D-Pen5]enkefalin (DPDPE) és a [D-Ala2] deltorfin I.
Ő-agonistákkal szemben} [A korábban már ismert vegyületeket (P) jelzéssel láttuk el]
Ke (nM)a
Vegyület [Leu5]- enkefalin DPDPE [D-Ala2] deltorfin I.
H-Tyr-Tic-Phe- Phe-OH(P)(TIPP) 5,86 ± 0,33 4,80 ± 0,20 2,96 ± 0,02
H-Tyr-Tic-Phe- Phe-NH2(Ρ)(TIPP- NH2)b 15,7 ± 2,4 18,0 ±2,0 14,4 ±2,2
H-Tyr-Tic-Phe- OH(P)(TIP) 11,7 ± 1,8 16,1 ± 1,9 12, 6 ± 1, 8
H-Tyr-Tic-Phe- NH2(P)(TIP-NH2) 43,9 ± 8,9 96, 8 ± 14,1 58,9 ± 7,7
Tyr(NaMe)-Tic- Phe-Phe-OH 1,01 ± 0,15 1,22 ± 0,17 0,436 ± 0,071
Tyr(NaCpm)-Tic- Phe-Phe-OH 29, 6 ± 4,4 28,2 ± 0,5 32,5 ± 1,3
Tyr(NaHex) -Tic- Phe-Phe-OH 9,37 ± 1,18 4,28 ± 0,56 10,6 ± 1,9
Tyr(NaEt2) -Tic- Phe-Phe-OH 3,39 ± 0,16 0,893 ± 0,112 2,30 ± 0,18
··
- 15 • *· « • · » • · .
1. táblázat (folytatás)
Ke (nM)a
Vegyület [Leu5]- enkefalin DPDPE [D-Ala2]- deltorfin I.
H-Dmt-Tic-Phe- Phe-OH 0,169 ± 0,015 0,196 ± 0, 022 0,130 ± 0,017
H-Dmt-Tic-Phe- Phe-NH2 b 0,221 ± 0,028 0,209 ± 0,037 0,260 ± 0,064
H-Tyr(3-F)-Tic- Phe-Phe-OH 5,88 ± 0,72 13,0 ± 0,7 8,73 ± 1,21
H-Tyr(3-C1)-Tic- Phe-Phe-OH 18, 0 ± 2,2 20, 4 ± 1, 5 19, 9 ± 1,7
H-Tyr(3-Br)-Tic- Phe-Phe-OH 18,2 ± 2,7 31,3 ± 4,2 23, 9 ± 2,7
H-Tyr-Tic-Ψ [CH2- NH]-Phe-OH 9, 12 ± 1,57 9, 06 ± 0,70 8,24 ± 1,12
H-Tyr-Tic-Ψ [CH2- NH]-Phe-Phe-OH 2,46 ± 0,35 2,89 ± 0,23 2, 85 ± 0,13
H-Dmt-Tic-Ψ [CH2- NH]-Phe-Phe-OH 0,259 ± 0,043 0,196 ± 0, 033 0,157 ± 0,028
H-Dmt-Tic-Ψ [CH2- NH]-Phe-Phe-NH2 b 0,470 ± 0,078 0,420 ± 0,049 0,486 ± 0,058
H-Tyr-Tic-Ψ [CH2-NCH3]-Phe-Phe-OH 6,28 ± 0, 14 4,76 ± 0,48 2,89 ± 0,31
H-Tyr-Tic-Ψ [CH2- NH]-Hfe-Phe-OH 2,22 ± 0,31 2, 64 ± 0,47 1, 90 ± 0,17
H-Tyr-Tic-Hfe-Phe-OH 1,23 ± 0,18 0, 609 ± 0,043 0,408 ± 0,039
Tyr (NMe) -ΤίοΨ [CH2-NH]Hfe-Phe-OH 0,780 ±0,082 0,902 ± 0,135 0,418 ± 0,098
H-Tyr-Tic-Phg-Phe-OH 13,8 ± 1,2 21,5 ± 2,9 8,31 ± 1,75
- 16 1. táblázat (folytatás)
Ke (nM)a
Vegyület [Leu5]- enkefalin DPDPE [D-Ala2] - deltorfin I.
H-Tyr-Tic-Trp-OH 10,6 ± 2,1 6,23 ± 0,79 5,36 ± 0,77
H-Tyr-Tic-Trp-Phe- OH(P) 2,37 ± 0,54 2,56 ± 0,21 1,65 ± 0,18
H-Tyr-Tic-Trp-Phe- NH2(P) 3,24 ± 0,43 4, 65 ± 0, 92 2,31 ± 0,17
H-Tyr-Tic-His-Phe-OH 20,1 ± 1,8 18,2 ±1,6 18,7 ±0,7
H-Tyr-Tic-2-Nal-Phe- OH 2,64 ± 0,17 4, 41 ± 0, 65 4,17 ± 0,58
H-Tyr-Tic-Atc-Phe-OH 1,63 ± 0, 14 1,85 ± 0,16 0,927 ± 0,142
H-Tyr-Tic-Phe- Phe(pNO2)-OH 3,62 ± 0,46 3,30 ± 0,35 2,79 ± 0,46
H-Tyr-Tic-Trp- Phe(pNO2)-OH 1,83 ± 0, 10 4,40 ± 0,55 2,27 ± 0,14
H-Tyr-Tic-Phe-Trpnh2 49,5 ± 4,6 41,3 ± 5,2 38,6 ± 3,3
H-Tyr-Tic-Phe-Phe- Val-Val-Gly-NH2 6,48 ± 0,59 6,36 ± 1,32 4,96 ± 0,77
H-Tyr-Tic-Phe-Phe- Tyr-Pro-Ser-NH2 4,78 ± 0,80 4,63 ± 0,43 3,90 ± 0,63
H-Tyr-Tic-Trp-Phe- Tyr-Pro-Ser-NH2 4,20 ± 1,13 3, 65 ± 0,94 3,65 ± 0,14
H-Tyr-Tic-Trp- Phe(pNO2)-Tyr-Pro- Ser-NH2 3,68 ± 0,79 2,48 ± 0,34 3,91 ± 0,38
H-Tyr-Tic-Phe-Phe- Leu-Nle-Asp-NH2 21,4 ± 1,0 10,4 ± 2,3 10,8 ± 3,1
• · ·
- 17 1. táblázat (folytatás)
Ke (nM)a
Vegyület [Leu5]- enkefalin DPDPE [D-Ala2] - deltorfin I.
Naltrindole(P) 0,850 ± 0,221 0, 632 ± 0, 161 0,636 ±0,105
: az értékek jelentése = 3-8 meghatározás ± középérték szórása (standard error of mean, SEM) l_ : a H-Tyr-Tic-Phe-Phe-NH2, a H-Dmt-Tic-Phe-Phe-NH2 és a H-Dmt-Tic1? [CH2-NH] Phe-Phe-NH2 a tengeri malac ileum (GPI) tesztben — az előbbi sorrendnek megfelelően — 1700 ± 220 nM, 18,2 ± 1,8 nM és 7,71 ± 0,32 nM IC50 értéket mutató kevert μ-agonista/δ-antagonista
Megállapítások
A TIPP-rokon δ-antagonisták μ-antagonista vagy μ-agonista viselkedése a GPI tesztben még 10 μΜ koncentráció mellett sem mutatott egyetlen vegyület sem μ-antagonista aktivitást;
az olyan TIPP-rokon peptidek, amelyek egy szabad C-terminális karboxilcsoporttal rendelkeztek, a GPI tesztben nagyon gyenge μ-agonista hatást (IC50 > 10 μΜ) mutattak.
Másrészről azonban a C-terminális karboxamidocsoporttal rendelkező TIPP-rokon peptidek (például a H-Dmt-Tic-Phe-Phe-NH2) tökéletes μ-agonista hatást mutattak a GPI tesztben (az említett esetben az IC50 értéke 18,2 ± 1,8 volt a GPI vizsgálatban).
- 18 Opioid receptorkötési vizsgálatok
A vegyületek opioid μ- és δ-receptorkötési állandóit (Κ£μ, g
Kj_ ) viszonylag szelektív μ- és δ-radioliganoknak a patkányagymembrán preparátumokban lévő kötőhelyekről történő elmozdulása útján határoztuk meg {az értékeket a mért IC50 értékekből a Cheng és Prusoff egyenlet alapján számítottuk ki [Y. C. Cheng and W. H. Prusoff, Biochem. Pharmacol., 22, 3099-3102 (1973)]}.
Az opioid receptorkötési vizsgálatok eredményeit a követg kező, 2. táblázatban foglaljuk össze. A Κ-^/Κ^ hányados a δ-szelektivitás kvantitatív mérőszámát adja meg. A nagyobb értég kű arány jobb δ-szelektivitást jelent.
Opioid receptorkötési vizsgálatok
Az új analógok opioid μ-, δ- és κ-receptor affinitásait kötési vizsgálatokban, a μ-, δ- és κ-szelektiv radioligandoknak a patkányagymembrán kötőhelyekről történő elmozdulása alapján határoztuk meg. A κ-ligandok esetén tengerimalacagy-homogenizátumokat alkalmaztunk, mivel a κ-kötőhelyek relatív aránya nagyobb a tengerimalacagyban, mint a patkányagyban. A laboratóriumunkban alkalmazott kísérleti eljárás a Paternak és munkatársai által leírt kötési vizsgálatnak egy módosított változata volt [Pasternak et al., Mól. Pharmacol., 11, 340-351 (1975)]. A Canadian Breeding Laboratories-ból származó, 300-350 g testtömegű hím Sprague-Dawley patkányokat lefejeztük, majd a kisagy eltávolítása után az agyakat 30-szoros mennyiségű jéghideg standard pufferben (50 mM Tris—HC1, pH 7,7) homogenizáltuk. A homogenizátumot 30 000 χ g érték mellett 4 °C hőmérsékleten 30 percen keresztül centrifugáltuk, majd a kötött endogén ligandok
felszabadítása érdekében a membránokat a standard puffer eredeti mennyiségében felvettük és 30 percen keresztül 37 °C hőmérsékleten inkubáltuk. Az ezt követő centrifugálás után a pelletet a friss standard puffer kezdeti mennyiségében felszuszpendáltuk, és így a végső membránszuszpenziót nyertük. A membránpreparátum 2 ml-es részleteit 1 ml olyan standard pufferrel inkubáltuk 1-2 órán keresztül 25 °C hőmérsékleten, amely puffer a vizsgálandó peptidet és a megadott koncentrációban a következő radioligandok egyikét tartalmazta: [ H]DAMGO, μ-szelektív, 0,7 nM; [3H]DSLET, [3H]DPDPE vagy [3H]TIPP, δ-szelketív, 1,0 nM; és [3H]U69,563, K-szelektív, 0,5 nM. Az inkubálás végén 4 °C hőmérsékleten vákuum alatti szűrést végeztünk Whatman GF/B szűrőkön keresztül. A szűrőket kétszer 5 ml jéghideg standard pufferrel mostuk, majd a szűrőket szcintillációs fiolákba helyeztük és 30 percen keresztül 1 ml Protosollal (New England Nuclear) reagáltattuk, ezt követően pedig 0,5 ml ecetsavat és 10 ml Aquasolt (New England Nuclear) adtunk hozzá. A fiolákat 30 percen keresztül rázattuk, majd 40-45 %-os teljesítmény mellett számlálást végeztünk. Valamennyi kísérletet két párhuzamossal és legalább háromszor megismételve hajtottuk végre. A három radioligand mindegyikének fajlagos kötését úgy határoztuk meg, hogy 1 mM hideg DAMGO, DSLET és U69,563 jelenlétében inkubálást végeztünk. A fajlagos kötések maximális gátlásának félértékeit (IC50) a féllogaritmikus diagramokból grafikus úton határoztuk meg. A mért IC50 értékekből a kötésgátlási állandók (K^) értékeit a Cheng és Prusoff egyenlet alapján számítottuk ki [Y. C. Cheng and W. H. Prusoff, Biochem. Pharmacol., 22, 3099-3102
- 20 (1973)]. Α μ-, δ- és κ-reprezentativ kötési vizsgálatokban az Kj_ értékek arányai a vizsgálat alatt álló vegyület receptorszelektivitásának a mérőszámai (például a Kj^/Ki jelzi a δ-receptorokkal szembeni szelektivitást a μ-receptorok ellenében). A találmány szerinti vegyületek egyike sem rendelkezett jelentős affinitással a κ-receptorok iránt.
2. táblázat
Az opioid peptid analógok receptorkötési adatai3
Vegyület Κ± μ [nM] Kj8 [nM] k//KíS
H-Tyr-Tic-Phe- Phe-OH(P)(TIPP) 1720 ± 50 1,22 ± 0,07 1410
H-Tyr-Tic-Phe- Phe-NH2(P)(TIPP-NH2) 78,8 ± 7,1 3, 00 ± 0,15 26, 3
H-Tyr-Tic-Phe- OH(P) (TIP) 1280 ± 140 9, 07 ± 1,02 141
H-Tyr-Tic-Phe- NH2(P)(TIP-NH2) 624 ± 79 12,0 ± 1,3 52,0
Tyr(NaMe)-Tic- Phe-Phe-OH 13400 ± 600 1,29 ± 0, 36 10400
Tyr(NaHex)-Tic- Phe-Phe-OH 1080 ± 80 0, 951 ± 0,123 1140
H-Dmt-Tic-Phe- Phe-OH 141 ± 0,24 0, 248 ± 0,046 569
H-Dmt-Tic-Phe- Phe-NH2 1,19 ± 0,11 0,118 ± 0,016 10,1
H-Tyr-Tic-Ψ [CH2- NH]-Phe-Phe-OH 3228 ± 439 0,308 ± 0,060 10500
I » ·· ·
2. táblázat (folytatás)
Az opioid peptid analógok receptorkötési adatai3
Vegyület Κ± μ [nM] Κ4 0 [nM] Κιμ/Κίδ
H-Tyr-Tic-Hfe-Phe-OH 1990 ± 170 0,277 ± 0,001 7180
H-Tyr-Tic-Phg-Phe-OH 29000 ± 7200 3, 01 ± 0,54 9630
H-Tyr-Tic-Trp-Phe- NH2(P) 176 ± 21 0,248 ± 0,009 709
H-Tyr-Tic-Trp-Phe- OH (P) 1790 ± 380 0,301 ± 0,042 5950
H-Tyr-Tic-His-Phe-OH 17000 ± 3700 1,48 ± 0,22 11500
H-Tyr-Tic-l-Nal-Phe- OH 1120 ± 130 1,14 ± 0,17 982
H-Tyr-Tic-2-Nal-Phe- OH 6330 ± 130 1,31 ± 0,03 4830
H-Tyr-Tic-Phe- Phe(pNO2)-OH(P) 2890 ± 660 0,703 ± 0,099 4110
H-Tyr-Tic-Trp- Phe(pNO2)-OH(P) 1520 ± 42 0,330 ± 0,004 4610
H-Tyr-Tic-Phe-Trp- NH2(P) 312 ± 75 1,21 ± 0,19 258
H-Tyr-Tic-Phe-Phe- Val-Val-Gly-NH2 3290 ± 520 1,43 ± 0,25 2300
H-Tyr-Tic-Phe-Phe- Tyr-Pro-Ser-NH2 658 ± 136 0,900 ± 0,196 731
Naltrindole(P) 0, 850 ± 0,221 0,632 ± 0,161 0, 636 ±0, 105
(standard error of mean, SEM) az értékek jelentése = 3 meghatározás ± középérték szórása
I
- 22 • · • ·· · • · ·
Felhasználási lehetőségek
Amint az Abdelhamid és munkatársai eredményei alapján várható, a tiszta δ-antagonistákat μ-agonista típusú fájdalomcsillapítókkal (például morfinnal) kombinálva felhasználhatjuk a tolerancia és a dependencia kifejlődésének megelőzésére [E. E. Abdelhamid et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 258, 299-303 (1991)]. Az említett hivatkozás utal arra is, hogy a kevert μ-agonista/ö-antagonista tulajdonságokkal rendelkező vegyületek gyógyászatilag alkalmazhatók olyan fájdalomcsillapítókként, amelyek nem eredményeznek toleranciát és függőséget. A jelen leírásban bemutatott, C-terminális karboxamidocsoporttal rendelkező TIPP-rokon peptidek az első ismert kevert μ-agonista/ö-antagonisták.
A jelen leírásban ismertetett δ-antagonisták immunszuppressziv hatóanyagokként gyógyászati félhasználást nyerhetnek. A kevésbé δ-szelektív és kisebb mértékben tiszta naltrindol immunszuppressziv hatásait a korábbiakban Arakawa és munkatársai már leírták [K. Arakawa et al., Transplantation Proc., 24, 696697 (1992); Transplantation, 53, 951-953 (1992)].
Rövidítések
Aib = α-amino-izovajsav [α-metil-alanin];
Atc = 2-amino-2-tetralinkarbonsav;
Boc = terc-butoxi-karbonil-csoport;
Cpm = ciklopropil-metil-csoport;
DAM.GQ = H-Tyr.-D-Ala-Gly-Phe (NaMe)-Gly-ol;
DCC = diciklohexil-karbodiimid;
DIEA = diizopropil-etil-amin;
I
- 23 • · · · • ·
Dint = 2, β-dimetil-tirozin;
I 2 I 5
DPDPE = [D-Pen ,D-Pen ]enkefalin;
DSLET = H-Tyr-o-Ser-Gly-Phe-Leu-Thr-OH;
Et = etilcsoport;
FAB-MS = gyorsatombombázásos tömegspektrometria;
GPI = tengeri malac ileum
Hex = hexilcsoport;
Hfe = homofenil-alanin;
HOBt = 1-hidroxi-benzo-triazol;
MVD = egér vas deferens;
1- Nal = 3-(1’-naftil)-alanin;
2- Nal = 3-(2’-naftil)-alanin;
Phe(pNO2) = 4-nitro-fenil-alanin;
Phg = fenil-glicin;
Tic = 1,2,3,4-tetrahidroizokinolin-3-karbonsav;
TIP = H-Tyr-Tic-Phe-OH;
TIP-NH2 = H-Tyr-Tic-Phe-NH2;
ΤΙΡ(Ψ) = H-Tyr-Tic'P [CH2-NH] Phe-OH;
TIPP = H-Tyr-Tic-Phe-Phe-OH;
TIPP-NH2 = H-Tyr-Tic-Phe-Phe-NH2;
ΤΙΡΡ(Ψ) = H-Tyr-TicT [CH2-NH] Phe-Phe-OH;
Tyr(3-Br) = 3-bróm-tirozin;
Tyr(3-Cl) = 3-klór-tirozin;
Tyr(3-F) = 3-fluor-tirozin;
TyríN^íe) = N^-metil-tirozin;
U69,593 = (5α,7α,8β)-(-)-N-metil-[7-(1-pirrolidinil)-1-oxa-spiro[4,5]dec-8-il]-benzolacetamid.
····
- 24 SZABADALMI IGÉNYPONTOK

Claims (8)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Egy (I) általános képletű vegyület, amelynek képletében
    R]_ jelentése hidrogénatom, CH3(CH2)n- általános képletű csoport, amelyben n értéke 0-12, fenetil-, ciklopropil-metil-, allil- vagy arginilcsoport;
    R2 jelentése hidrogénatom, CH3(CH2)n- általános képletű csoport, amelyben n értéke 0-12, ciklopropil-metil- vagy allilcsoport;
    R3, R4, R5 és R6 jelentése hidrogénatom, vagy
    R4 és R5 jelentése hidrogénatom, és
    R3 és R6 jelentése rövid szénláncú alkilcsoport, vagy
    R3, R5 és R6 jelentése hidrogénatom, és
    R4 jelentése fluor-, klór-, brómatom, hidroxi-, amino- vagy nitrocsoport;
    R7 jelentése karbonil- vagy metiléncsoport;
    Rg jelentése hidrogénatom vagy rövid szénláncú alkilcsoport;
    R9 jelentése (a) általános képletű csoport, amelyben m értéke 0, 1 vagy 2, (b), (c), (d), (e), (f) képletű csoport vagy (g) általános képletű csoport, amelyben
    R10 jelentése hidrogén-, fluor-, klór-, bróm- vagy jódatom, és m értéke 0, 1 vagy 2;
    R14 jelentése hidroxi-, aminocsoport vagy (h) általános képletű csoport, amelyben
    I »
    R12 jelentése hidrogénatom, nitrocsoport, fluor-, klór-, bróm- vagy jódatom, m értéke 0, 1 vagy 2,
    R13 jelentése karboxi-, karbamoil-, hidroxi-metil-csoport vagy bármely további aminosav- vagy peptidszegmens, vagy (i) általános képletü csoport, amelyben
    R14 jelentése karboxi-, karbamoil-, hidroxi-metil-csoport vagy bármely további aminosav- vagy peptidszegmens; kivéve azokat a vegyületeket, amelyek képletében
    Rp R2, R3, R4, R5, R6 és Rq mindegyikének jelentése hidrogénatom;
    R7 jelentése karbonilcsoport;
    R9 jelentése (j) képletü csoport; és
    Rn jelentése hidroxi-fenil-, amino-feni1-, hidroxi- vagy aminocsoport .
  2. 2. Egy 1. igénypont szerinti (I) általános képletü vegyület, amelynek képletében R7 egy redukált peptidkötés része.
  3. 3. Egy 1. igénypont szerinti (I) általános képletü vegyület, amelynek képletében R4 és R5 jelentése hidrogénatom, valamint R3 és Rg mindegyikének jelentése metilcsoport.
  4. 4. Egy 1. igénypont szerinti vegyület gyógyászati felhasználásra .
  5. 5. Egy 1. igénypont szerinti vegyület fájdalomcsillapítóként történő felhasználásra.
  6. 6. Egy 1. igénypont szerinti vegyület immunszuppresszív hatóanyagként történő felhasználásra.
    • · <·
    I
  7. 7. Eljárás az 1. igénypont szerinti peptidek előállítására, azzal jellemezve, hogy szilárd fázisú szintézist alkalmazunk .
  8. 8. A 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy egy további, ismételt kapcsolási lépésben Boc-Tic-OH csoportot kapcsolunk a dipeptidgyantához, valamint egy további, ismételt kapcsolási lépésben Boc-Tyr(Boc)-OH csoportot kapcsolunk a peptidgyantához.
HU9502041A 1993-01-05 1993-12-20 New peptide, pharmaceutical compositions containing them and process for producing them HUT72597A (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE9300012A SE9300012D0 (sv) 1993-01-05 1993-01-05 New peptides

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HU9502041D0 HU9502041D0 (en) 1995-09-28
HUT72597A true HUT72597A (en) 1996-05-28

Family

ID=20388466

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9502041A HUT72597A (en) 1993-01-05 1993-12-20 New peptide, pharmaceutical compositions containing them and process for producing them

Country Status (25)

Country Link
US (1) US5602099A (hu)
EP (1) EP0678099A1 (hu)
JP (1) JPH08505386A (hu)
KR (1) KR960700269A (hu)
CN (1) CN1096515A (hu)
AP (1) AP508A (hu)
AU (1) AU681372B2 (hu)
CA (1) CA2152380A1 (hu)
CZ (1) CZ171195A3 (hu)
EE (1) EE9400326A (hu)
FI (1) FI953302A (hu)
HU (1) HUT72597A (hu)
IL (1) IL108169A0 (hu)
IS (1) IS4115A (hu)
LV (1) LV10962B (hu)
MX (1) MX9400255A (hu)
NO (1) NO952650L (hu)
NZ (1) NZ259597A (hu)
PL (1) PL309778A1 (hu)
SE (1) SE9300012D0 (hu)
SI (1) SI9400005A (hu)
SK (1) SK83995A3 (hu)
WO (1) WO1994015959A1 (hu)
YU (1) YU394A (hu)
ZA (1) ZA9455B (hu)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE69427650T2 (de) * 1993-12-23 2001-11-22 Novo Nordisk A/S, Bagsvaerd Verbindungen mit wachstumshormon-freisetzenden eigenschaften
IS4261A (is) * 1994-02-21 1995-08-22 Astra Aktiebolag Nýir peptíð-ópíóíðar til meðhöndlunar á verkjum og notkun þeirra
IL114046A0 (en) * 1994-06-20 1995-10-31 Astra Ab New opioid peptide antagonists
RU2067000C1 (ru) * 1994-06-29 1996-09-27 Владислав Исакович Дейгин Пептид и способ его получения
US6184208B1 (en) 1994-06-29 2001-02-06 Immunotech Developments Inc. Peptide, a method for its preparation and a pharmaceutical composition containing the peptide
SE9402880D0 (sv) * 1994-08-30 1994-08-30 Astra Ab New peptide derivatives
US5780589A (en) * 1994-11-30 1998-07-14 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Ultraselective opioidmimetic peptides and pharmacological and therapeutic uses thereof
CA2216532A1 (en) * 1995-03-29 1996-10-31 S. Jane Desolms Inhibitors of farnesyl-protein transferase
EP0837857A4 (en) * 1995-03-29 1998-08-05 Merck & Co Inc FARNESYL-PROTEIN TRANSFERASE INHIBITORS
DE19512484A1 (de) 1995-04-04 1996-10-17 Bayer Ag Kohlenhydratmodifizierte Cytostatika
SE9600769D0 (sv) * 1996-02-28 1996-02-28 Astra Ab Compounds useful as analgesic
JP2002512625A (ja) * 1997-05-29 2002-04-23 メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド 細胞接着阻害薬としての複素環アミド化合物
US6903075B1 (en) 1997-05-29 2005-06-07 Merck & Co., Inc. Heterocyclic amide compounds as cell adhesion inhibitors
US6703381B1 (en) * 1998-08-14 2004-03-09 Nobex Corporation Methods for delivery therapeutic compounds across the blood-brain barrier
US6306576B1 (en) * 1999-02-19 2001-10-23 Cleveland Clinic Foundation Diagnostic methods for asthma
US7601739B2 (en) 2003-08-08 2009-10-13 Virgina Commonwealth University Compounds having antiestrogenic and tissue selective estrogenic properties, and compounds with anti-androgenic properties for treatment of prostate cancer and androgen receptor dependent diseases
CA2571710A1 (en) 2004-06-24 2006-11-02 Nicholas Valiante Small molecule immunopotentiators and assays for their detection
CN101065014A (zh) * 2004-09-23 2007-10-31 亚历山大·米哈洛 通过诱导逆适应调节神经递质系统的方法
US20080045610A1 (en) * 2004-09-23 2008-02-21 Alexander Michalow Methods for regulating neurotransmitter systems by inducing counteradaptations
WO2015200828A1 (en) * 2014-06-27 2015-12-30 H. Lee Moffit Cancer Center And Research Institute, Inc. Conjugates for immunotherapy

Also Published As

Publication number Publication date
FI953302A0 (fi) 1995-07-04
AP508A (en) 1996-07-22
HU9502041D0 (en) 1995-09-28
SK83995A3 (en) 1996-09-04
PL309778A1 (en) 1995-11-13
CN1096515A (zh) 1994-12-21
IS4115A (is) 1994-07-06
SI9400005A (en) 1994-12-31
NO952650D0 (no) 1995-07-04
WO1994015959A1 (en) 1994-07-21
JPH08505386A (ja) 1996-06-11
AU5844894A (en) 1994-08-15
FI953302A (fi) 1995-07-04
ZA9455B (en) 1994-07-05
EE9400326A (et) 1996-04-15
AP9400605A0 (en) 1994-01-31
YU394A (sh) 1997-07-31
CA2152380A1 (en) 1994-07-21
EP0678099A1 (en) 1995-10-25
AU681372B2 (en) 1997-08-28
MX9400255A (es) 1994-07-29
IL108169A0 (en) 1994-04-12
KR960700269A (ko) 1996-01-19
CZ171195A3 (en) 1996-09-11
LV10962A (lv) 1995-12-20
SE9300012D0 (sv) 1993-01-05
US5602099A (en) 1997-02-11
LV10962B (en) 1997-04-20
NZ259597A (en) 1996-07-26
NO952650L (no) 1995-08-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HUT72597A (en) New peptide, pharmaceutical compositions containing them and process for producing them
US5811400A (en) Peptide derivatives with δ opioid receptor antagonist or mixed μ agδ antagonist effects
US5455230A (en) Delta opioid receptor antagonists and their use as analgesic agents
US4705778A (en) Orally active LHRH analogs
US4103005A (en) Novel-enkephalin analogs
HU185229B (en) Process for preparing pharmaceutically active peptides and acetates thereof
US5733881A (en) Opioid peptide antagonists
US5786447A (en) Opioid peptide analogs
EP0423236A1 (en) Peptides with extraordinary opioid receptor selectivity
AU691630C (en) New opioid peptide antagonists
SCHOELKENS et al. 1, 8-Disubstituted Analogues of [Ile5] and [Val5] Angiotensin II: Difference in Potency and Specificity of Angiotensin II-Antagonistic Activity
US6150335A (en) Tic-containing opioid dipeptide derivatives useful as analgesics
Lavielle et al. Binding affinities to rat brain synaptosomes–synthesis of biotinylated analogues of Substance P
Procházka et al. Analogs of Deamino Carba Oxytocin with Inhibitory Properties; Synthesis and Biological Activities
EP0777682A1 (en) New opioid peptide antagonists
MAEDA et al. Amino acids and peptides. XXIII. Leu-enkephalin analogs containing a fluorinated amino acid at position 2, 4 or 5

Legal Events

Date Code Title Description
DFA9 Temporary protection cancelled due to abandonment