HUE029328T2 - Ellenanyag/fehérje-teljesítmény és -expresszió egyidejû, integrált szelekciója és evolúciója termelõ gazdában - Google Patents

Claims (6)

1. Sseabadáitnl igénypontok

   1. Eljárás ellenanyag evolválására és expressziújára termelő eukarléta gazdasejthen, amely eljárás tartalmazza a következőket: a) terápiát ellenanyag kiválasztása. b) a tempft dlsnanyag evoiváiása, ezáltal maíártödieaasf^-Msdet előállításának lehetővé: tétele a . termelő énkariota gazdasejtekben, c) a mutáns ellenanyagok szkrktelsse legalább egy, előre nmglrajikozoit tulajdonságra, jellemzőre vagy aktivitásra. ó) «æeÉ: liatásó -«0ίϊ®*·»11ίβ8ί«^ΐίίϊν^ΐΜ2*ΐ5« a mutáns ellenanyagok készletéből a legalább egy előre meghatározott tulajdonság, jellemző vagy akti vitás optimalizálása alapján, a tetnpíá? ellenanyag azonos taiaj#sssá|áboz, jellemzőjéhez vagy aktivMsához képest és e j a fokozott hatásé nmiáns ellenanyag expresszálása ugyanabban & termelő #«Ä gazdasejíbea, mint sí (b) lépésben, bármilyen kereskedelmi léptékben. I, M: 1 :,: igénypont szerinti éprás, ahol az (a) szelekciós lépés tartalmazza a következőket: iaj) anti-sntigén ellenanyag könyvtár előállítása termelő eukariófet gazdasejtben sejtfelszíni béinbtátássál 0Æ s0am a3j á könyvtár szkrlnelésé legalább egy, eaktivitásra* és a3> tempiát ellenanyag kiválásztása a könyvtárból
2. 3. Az 1, igénypont szerinti egát-ás, :8hől a termelő enkaríála gazdsséjh n kővetkezők közöl van kiválasztva: SfjtOI szíriaí hörcsög fidroblászísejk &ÉDCK, kutya epttéliábs s^t, Béla barnán epielíabs sep> Mi patkánykenguru: eghebáhs sejt, &P1S1 egér plaztnasejt ás blSö egér plazmasejt, BEK. 293 barnán embrionális vesesejk CX5S majotb vesesejt, 0:1% €tiö-S kínai hörcsög: pefofoszéhnejt, KI egér embrionális sejt, Ε1Ό egér· etsbrionális sejt, Ml botnán embrionális ssgt, M9 humán embrionális seit, PER £Xö humán ernbrinnál is sejt, Su eete vislae é lesztőseit és Píéina éiesztösejt 4,&. 3, igénypont szerinti: «prés, ahol az enkarlots termelő gazdas# CHÖ vagy MEK293,

   3, Az L igényfamt szerinti eljárás, ahol a szkrmelö lépések taddmazsak inoreszcesteia-akiivált sejtválegatást {FACS}. ő. Az I, igényt»!: szerinti eljárás, ahol az evoitklós lépés tattalmazza a tsmplst ellenanyagból képzett matáns ellenanyagok készletének előállítását, melyeknek m kr^pieméktsritM mét^alározé régiója |€OR) van, ahol m 1 és ő közödi egész szám, ahol: mindegyik CÖR n ambmsavat tMtdroaz, és aholoz eljárás tartalmazza a) m x m különálló ellenanyagkészlér előállítását, ahol mindegyik készlet tartalmaz a. CÖR egyetiéh dósé. «íegMi&óztki: pösdótőJS^«. JÄmö kbfoaböző, efe megha&rosfoii Äli^ÄÄrtaj««20 ellenanyaga!,; és ahol itlid^É elienanyagkészleí különbözik az. egyetlen, előre meghatározott pozícióban, és az előállított különböző ellenanyagok száma ?» z « ,r ,K
3. 7. AM, igénypont szedőt! eljárás, %olnt érteke 6,
4. 8. Az L igénypont szerinti eljárás* also! a mmptit ellenanyag « köv#aezök közül kiválasztott vlîes<my ag tiniivzh,tit,:y tdívv. variábilis dornen, konstans Ittpervadábills régid, 1-és i *9äw -r Ksoa /» a komplementaritást meghatározd régiói (CDRI}. 2-es feomplemsntaritást meghatározd régió (CDR2) és 3-as régié (CDR3).
5. 9. Az 1, igénypont szerinti epres. ahol: a (1) evöiaeiós lépés íarfoima?.za a kóretkézökeé:; h) tí~1 khlörtáid mutssspölipeptíd-kssgfeí előállítása a terápiát el kőanyagból, ahol mindegyik készlet olym polípeptideket tartalmaz, melyek X szánni kdlönbözö, előre meghatározott atoinesavat tartalmaznak á geföpsptU egyete, elére meghatározott pozfoiöpfean, ahol ««adegyik fraiipepítdMszM Rälöafeözlk az egyetlen, elÓreraeghatáröZött; pozícióban és: a® elóálllíotí MüÉaíMzS polipeptídék száma /e~ 1/ x,X és. ahol a |eá szlrfoeiö lépés tartapsszzs a következeket: i> pndégyik polipeptid vizsgálata legalább: egy, elére meghatározott ííbkgttessápa,jellemzőre vagy aktivitásra. j) a témplát ellenanyaghoz képest a poiips|yíid:hen található bármely változás azonosítása a aktivitásban, k) funkcionális térkép előállítása, ahol á fonkeiodális térképét áííéptptál polpeptidhéz képest a mutáns: polrpspridhen íokoaó bátásö mutációt és/vagy esépdes mutációt eredtpaÿé# pozíciók és matáeiök azonosítására alkalmazzák,: ló, á 9,1|énypostí szerinti eljárás, ahol Xértéke 19. I I, á/1:9,: ||áeypom szerinti eljárás, ahol a.?, előállítási lépés sartaimaa/a a következőkét;: i) a iamplát: ellenanyagot kódoló, kodont tartalmazó poümtkieoiM alávetése ppikoerá® alapé ampliikátásnák mindegy ík ntulsgenizálandó kodon esetén ''ól-szeresen dégénérait ohgomtkleotid slkakratzásával, ahol mindegyik: Sd-saereáek dégéris oijgonuhleoíid egy dégénérât triplet szekvenciából áll, ezáltal származtatott plïrkÉsloîid készlet eliatlMsa és itf a száreraztaíotí pöiinukelotid késztét alávetése Möéális amptilkáliásöak oly hiédöó, hegy a száettí^álott; pdlísakeiaíRlek állal kódolt ISÄ« poiipepdek gypessaalóclBak.
6. 12. Áz I. Igénypoot szsrióii eljái'ás, ahol a® elére meghatározok tulajdonság, jéllemaé vagy aktivitás: a következők közli vast kiválasztva: eilsnanyag-fohérié aggregáciö csökkenése, eltesanya^-stabilírás: fokozása, ellenanyag óMhaiáságának növekedése, gllkozifáciös helyek beépítése, konjugációs helyek beépítése, mmtanogenltás csökkenése, foluhp-eypresszid tokozása, aníígémtíSniiás növekedése, aâligéha&amp;kàs: csökkenése, kötési aíímltás változása, Inmtadógéítíiás válfozáss és spéclteMs növelésé, 1:3, ,A 2. igénypont szerinti eljárás:, :<ÉoÍ m átfokthiigén ellenanyag könyvtár höBiaoizálí atki-anrigén eiertanyag kdny vtéa, 1:4. á® 1. ig&amp;rypö:nt:sze:rhtd eljárás, :áho| a:í|di szelekéiÖs lépés tartaltnazza. a követkegöt;: a fokozott hatása mutáns éllepápyag kivilsSKlasa á tsmpllt ólifeó»i|réghöz képed: javított expresszié alapján és ahol a® (e) expresszié« lépés tartalmazza a fokozott hatású eMiMsákti|yiaii^J%?ö a termelő eakarióta gazdasej tbety minta#) evoláosös lépésben, 15, tyz I, igényjxínt szerinti ept'ás, ahol a #) cvoláeiós lépés tartalmazza a következők bármelyikét: kóípprehenzly pozicíonáhs évoileib l'klRE|,: konrpí'elienzív pözklöháls: Jeszareiös. evolúció (Cklj, komprehsoziv· p®gki08S:l&amp; .Udecio* evolúció (Cípp)i komprelumzív pozfclmMis evolúció f.CPPl amelpí fcombfeatorifas i&amp;éiÂÂy.is ÍCPS) köve*, komprekenidv pozidonális deledés evolúció (CPD),; »©ípi fea^felflä^köS-'Äiies^ö^is (OPS) fcspí vagy koaspekeady pi>xíckí»áli§; ÉsM&amp;iÓs evolúció (CPD% üfflélfeá ÎÎS3HbÂiôrâ6»Â^Jë^âôifete (CPS) kóveí;.: