HU226175B1 - Human ob protein suspension, process for producing thereof and use for production of pharmaceutical composition - Google Patents
Human ob protein suspension, process for producing thereof and use for production of pharmaceutical composition Download PDFInfo
- Publication number
- HU226175B1 HU226175B1 HU0002831A HUP0002831A HU226175B1 HU 226175 B1 HU226175 B1 HU 226175B1 HU 0002831 A HU0002831 A HU 0002831A HU P0002831 A HUP0002831 A HU P0002831A HU 226175 B1 HU226175 B1 HU 226175B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- protein
- human
- suspension
- amino acid
- replacing
- Prior art date
Links
- 239000000725 suspension Substances 0.000 title claims description 89
- 101001063991 Homo sapiens Leptin Proteins 0.000 title claims description 53
- 102000049953 human LEP Human genes 0.000 title claims description 53
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 23
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 5
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 claims description 53
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 claims description 53
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 42
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 38
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 38
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 37
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 33
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 17
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 16
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 10
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 10
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 9
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 claims description 9
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 9
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 7
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 6
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims description 5
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 5
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims description 5
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 claims description 4
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 4
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims description 4
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 claims description 3
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 claims description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 claims description 2
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims 1
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 claims 1
- 125000002073 methionyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 49
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 39
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 23
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 20
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 15
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 13
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 10
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 9
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 9
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 9
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 9
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 8
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 8
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 7
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 6
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 6
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 5
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 5
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 5
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 4
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 4
- 108010041872 Islet Amyloid Polypeptide Proteins 0.000 description 3
- 102000036770 Islet Amyloid Polypeptide Human genes 0.000 description 3
- 239000007990 PIPES buffer Substances 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 3
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 3
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 2
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- KUHSEZKIEJYEHN-BXRBKJIMSA-N (2s)-2-amino-3-hydroxypropanoic acid;(2s)-2-aminopropanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O.OC[C@H](N)C(O)=O KUHSEZKIEJYEHN-BXRBKJIMSA-N 0.000 description 1
- RVLOMLVNNBWRSR-KNIFDHDWSA-N (2s)-2-aminopropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O RVLOMLVNNBWRSR-KNIFDHDWSA-N 0.000 description 1
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 description 1
- 108010041397 CD4 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- NSVOVKWEKGEOQB-LURJTMIESA-N Gly-Pro-Gly Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O NSVOVKWEKGEOQB-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108090000189 Neuropeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000003797 Neuropeptides Human genes 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 229940123464 Thiazolidinedione Drugs 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100032100 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 8 Human genes 0.000 description 1
- 101710113414 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 8 Proteins 0.000 description 1
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003409 anti-rejection Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000002830 appetite depressant Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 description 1
- 238000007675 cardiac surgery Methods 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 201000001883 cholelithiasis Diseases 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000002316 cosmetic surgery Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000002934 diuretic Substances 0.000 description 1
- 229940030606 diuretics Drugs 0.000 description 1
- 238000011833 dog model Methods 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 208000001130 gallstones Diseases 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002430 laser surgery Methods 0.000 description 1
- 238000013532 laser treatment Methods 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013116 obese mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000000414 obstructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000006213 oxygenation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 1
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 108020001775 protein parts Proteins 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 235000018770 reduced food intake Nutrition 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 230000000697 serotonin reuptake Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 231100000057 systemic toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 150000001467 thiazolidinediones Chemical class 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003668 tyrosines Chemical class 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004260 weight control Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/5759—Products of obesity genes, e.g. leptin, obese (OB), tub, fat
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Obesity (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
A jelen találmány magas koncentrációjú és fiziológiás vagy annak közelébe eső pH-η stabilis, aktív, humán OB fehérje összetételekre vonatkozik. A találmány az ehhez kapcsolódó összetételekről, eljárásokról és az összetételek felhasználási eljárásairól is gondoskodik.
Annak ellenére, hogy az elhízás molekuláris alapjai nagymértékben ismeretlenek, mégis az „OB gén és a kódolt fehérje („OB fehérje”) azonosítása bizonyos mértékig megvilágította a test zsírlerakódásának szabályozásában megnyilvánuló mechanizmusokat [Zhang és munkatársai: Natúré 372, 425-432 (1994); lásd a cikk helyesbítését: Natúré 374, 479 (1995)]. A PCT WO 96/05309 számú szabadalmi bejelentés, amelyet 1996. február 22-én tettek közzé és melynek címe: „Modulátora of Body Weight, Corresponding Nucleic Acids and Proteins, and Diagnostic and Therapeutic Uses ThereoF, teljes egészében közzéteszi az OB fehérjét és az azzal kapcsolatos összetételeket és eljárásokat (ez a szabadalmi bejelentés a kitanítás részét képezi. A humán OB fehérje aminosavszekvenciáját a WO 96/05309 számú szabadalmi bejelentés (amit itt hivatkozásként építettünk be) 4. és 6. szekvenciaszámokon (a bejelentés 172. és 174. oldalán) teszi közzé, ahol az érett fehérje a 22. helyzetben valinnal kezdődik. Az érett fehérje 146 aminosavból áll [vagy 145-ből, ha a 49. helyzetben a glutamin hiányzik (a szekvencia száma: 6)].
Az OB fehérje mind ob/ob mutáns egerekben (az egerek az OB géntermék termelésének hiánya miatt kövérek), mind normális vad típusú egerekben in vivő aktív. A biológiai aktivitás több más dolgon kívül testtömeg-vesztésben nyilvánul meg [Barinaga: „Obese” Protein Slims Mice, Science 269, 475-476 (1995) és Friedman: „The Alphabet of Weight Control”, Natúré 385, 119-120 (1997)]. Ismeretes például hogy az ob/ob egereknél, az OB fehérje beadása a széruminzulinszint és a szérumglükózszint csökkenéséhez vezet. Az is ismert, hogy az OB fehérje beadása a test zsírtartalmának csökkenését eredményezi. Ezt mind ob/ob mutáns egerekben, mind nem kövér állatoknál megfigyelték [Pelleymounter és munkatársai: Science 269, 540-543 (1995); Halaas és munkatársai: Science 269, 543-546 (1995), valamint Campfield és munkatársai: Science 269, 546-549 (1995)] (az OB fehérje mikrogramm dózisainak perifériás és központi beadásával az ob/ob diétán tartott egerek táplálékfelvétele és testtömege csökken, de a db/db elhízott egereknél ez nem következik be). Ezen beszámolók szerint toxicitás még magas dózisoknál sem figyelhető meg.
Az emberek részére készített gyógyászati készítményeknél azt figyelték meg, hogy fiziológiás körülmények között viszonylag magas koncentrációkban, például 2 mg aktív fehérje/ml mennyiség felett, a humán aminosavszekvencia oldhatatlan. Nagyobb emlősöknél, mint például az embernél, a terápiásán hatásos mennyiség a milligramm fehérje/kg (testtömeg) dózisok nagyságrendjében, mint például 0,5 vagy 1,0 mg/kg/nap, vagy ez alatt előnyös. A nagy térfogatok elkerülése érdekében, ami a beteg számára kényelmetlen vagy lehet, hogy fájdalommal járhat, szükséges a fehérje koncentrációjának növelése.
A rekombináns DNS technológia előrehaladásával a rekombináns fehérjék gyógyszerészeti alkalmazásának elérhetősége a fehérjekiszerelések fejlődését hozta magával. Francis összefoglaló cikkében a fehérje módosításról és a fúziósfehérjékről ír [Francis: Focus on Growth Factors 3, 4-10 (1992)].
Az egyik ilyen módosítás az immunglobulinok Fc régiójának használatán alapul. Az ellenanyagok funkciójukban két egymástól független részből állnak, az antigént kötő „Fab” doménként ismert régióból és az állandó doménként ismert „Fc” régióból, mely utóbbi az effektor funkciókról gondoskodik, mint például a komplementfunkciók vagy a sejtek fagocitotózisának szabályozása. Az immunglobulinok Fc részének életideje a vérplazmában hosszú, ezzel szemben ugyancsak a vérplazmában az Fab rövid életidővel rendelkezik [Capon és munkatársai: Natúré 337, 525-531 (1989)].
A hosszú féléletidőnek vagy a funkciók, mint például az Fc receptor kötés, a protein-A kötés, a komplementfixálás, és a placentális transzfer, beépítésének biztosításához, amely funkciók mind az immunglobulinok Fc részén alapulnak, az Fc dómén felhasználásával terápiás fehérjéket állítottunk össze. Például az lgG1 ellenanyag Fc részét a CD30-L N-terminális részéhez fuzionáltuk, ez utóbbi egy olyan molekula, amely a Hodgkin-féle betegség tumoros sejtjein, az anaplasztikus limfómasejteken, a T-sejtes leukémiás sejteken és más rosszindulatú sejttípusokon expresszált CD30 receptorokhoz kötődik (lásd az 5,480,981 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentést). Az egyik gyulladásgátló és kilökődést megakadályozó szert, az IL-10-et, az egér Főtavai fuzionálták a citokin rövid keringési féléletidejének növelésére [Zheng és munkatársai: The Journal of Immunology 154, 5590-5600 (1995)]. Tanulmányokban kiértékelték a humán IgG 1 Fc részéhez kapcsolt tumornekrózisfaktor-receptor használatát szeptikus sokkos betegeknél [Fisher és munkatársai: N. Engl. J. Med., 334, 1697-1702 (1996); Van Zee és munkatársai: The Journal of Immunology 156, 2222-2230 (1996). Az AIDS kezelésére szolgáló terápiás fehérje létrehozása érdekében az Fc-t a CD4-receptorral is fuzionálták [Capon és munkatársai: Natúré 337, 525-531 (1989)]. Ráadásul, az interleukin-2 N-terminálisát az lgG1 vagy lgG3 Fc részéhez kapcsolták az interleukin-2 rövid életidejének és a szisztémás toxicitásának legyőzése érdekében [Harvill és munkatársai: Immunotechnology 1, 95-105(1995)].
Az inzulinnál szuszpenziós készítményekről számoltak be. De azok a körülmények, amelyek az inzulinnál alkalmazhatók, nem alkalmazhatók olyan fehérjéknél, mint amilyen az OB fehérje. Az inzulin meglehetősen kicsiny fehérje, sajátos fizikai és kémiai jellemvonásokkal rendelkezik; ezek a jellemvonások a kiszerelési feltételek meghatározásában fontosak. Brange inzulinszuszpenziókról ír [Brange: Galenics of Insulin, Springer-Verlag, 36 (1987); lásd ezenkívül: Schlichtkrull és munkatársai: Insulin Preparations with Prolon2
HU 226 175 Β1 ged Effect, 729-777, ami megtalálható: Hassellblatt és munkatársai: Handbook of Experimental Pharmacology New Series, XXXII-1/2, Springer-Verlag Berlin, Heidelburg, New York (1975)].
A mai napig a humán OB fehérje stabilis készítményéről, amely fiziológiás pH-η legalább körülbelül 2 mg/ml koncentrációjú, még nem számoltak be, továbbá az aktív humán OB fehérje legalább körülbelül 50 mg/ml vagy magasabb stabilis koncentrációiról nem született beszámoló. Ezenkívül, a tárolási stabilitás javításának érdekében fagyasztott vagy liofilezett formák használhatók, de ezek kevésbé előnyösek mint az itt leírt felhasználásra kész szuszpenziós formák. A fagyasztott forma állandó fagyasztás! hőmérsékletet igényel, ami a fogyasztói minőségű hűtőszekrények és fagyasztók leolvasztás! ciklusai miatt nem lehetséges. Továbbá a liofilezett formát hígítani és keverni kell, ami kényelmetlen és a beteg együttműködési hajlamát veszélyezteti. Az előállító szempontjából a fagyasztott folyadék gyártása, tárolása és szállítása költséges és sokkal több felügyeletet kíván, mint az azonnal használható kiszerelés. Tehát, a liofilezett kiszerelésekhez a gyártott vagy másképpen biztosított megfelelő hígító az ilyen hígítót nem igénylő kiszereléshez képest sokkal drágábbá és kevésbé hatásossá teszi a terméket. A kis térfogatban injektálással beadható, OB fehérjét tartalmazó, humán gyógyszerészeti összetételek koncentrált formáira igény mutatkozik. A jelen találmány ezeknek az igényeknek felel meg.
A jelen találmány azon a megfigyelésen alapul, hogy bizonyos szuszpenziós kiszerelések fiziológiás pH-η legalább körülbelül 2 mg/ml koncentrációban stabilis fehérjekészítményt biztosítanak. Ahogy itt a „fiziológiás pH-η” szakkifejezést használjuk olyan pH-értékre vonatkozik, amely körülbelül 6,0-tól 8,0-ig terjedő tartományban található. Az ilyen összetételek az OB fehérje viszonylag alacsony terápiás térfogatának beadását teszik lehetővé. Ahogy azt a következőkben közzétesszük, a kicsapószerek használata olyan humán OB fehérjeszuszpenziók elkészítését teszik lehetővé, amelyek jellemzői a következők:
1. Ugyanazon OB fehérjeoldathoz képest fiziológiás pH-η megnövelt stabilitást biztosítanak. Az alábbiakban bemutatott munkapéldákban pH=7,0-en a humán OB fehérjeszuszpenziók koncentrációja 10 mg/ml vagy ennél magasabb, amelyet ha az oldhatóságot biztosító pH-nál magasabb pH-η ugyanolyan koncentrációjú oldathoz hasonlítunk (a humán natív OB fehérjére nézve a pH=4, amely még nem is fiziológiás pH-érték), akkor HPLC-vel (nagynyomású folyadékkromatográfia) jobb profilt kapunk. Az alábbiakban azt is bemutattuk, hogy körülbelül pH=7-en 5 mg/ml koncentrációban az Fc-OB fúziós fehérje szuszpenzióban kevesebb lebomlási termék van, mint az Fc-OB fúziós fehérjeoldatában.
2. A folyamatosan fenntartott injektálás idő-kibocsátási görbéjének összehasonlítása ugyanazzal az oldatban lévő humán OB fehérje görbéjével: Az alábbi munkapéldák bemutatják a folyamatosan fenntartott kibocsátás hatását a nagymértékben koncentrált humán
OB fehérjeszuszpenziók alkalmazásakor. Az ilyen folyamatosan fenntartott kibocsátás abból a szempontból előnyös, hogy az anyag aktivitását viszonylag hosszú ideig fenntartja, és így viszonylag nagyobb a hatása, és az oldatban lévő humán OB fehérjéhez képest kevesebb injekcióra van szükség.
így, a jelen találmány tárgya az aktív humán OB fehérje stabilis készítménye, melynek koncentrációja fiziológiás pH-η legalább 2 mg/ml. Például az aktív humán OB fehérje azon stabilis készítményéről gondoskodtunk, melynek koncentrációja legalább 2,0 mg/ml és pH-ja 7,0. Ahogy azt a munkapéldákban leírtuk, olyan szuszpenziós készítményről gondoskodtunk, melyet ha emberbe beadnak, akkor koncentrációjának felső határa fiziológiás pH-η (azaz pH=6,0 és pH=8,0 között) eléri a 100 mg/ml-t.
A jelen találmány egy másik célkitűzése az aktív humán OB fehérjekészítmény stabilis elkészítésére vonatkozik, melynek koncentrációja legalább 10 mg/ml 6,0 és 8,0 értékek közé eső pH-tartományban.
A jelen találmány még egy másik célkitűzése az aktív humán OB fehérjeszármazék 0,5 mg/ml koncentrációjú, legalább körülbelül 6,0 és 8,0 közötti pH-jú készítményének stabilis elkészítésére vonatkozik, mely az immunglobulin Fc részének hozzákapcsolásával alakítható ki. Részletesebben, az aktív Fc-OB fúziósfehérje körülbelül 7,5 pH-értékű, 5-50 mg/ml-es koncentrációjú, stabilis készítményeiről gondoskodunk.
A jelen találmány még egy másik célkitűzése a stabilis aktív humán OB fehérje 2,0 mg/ml vagy magasabb koncentrációjú, 6,5 és 7,5 közötti pH-jú kiszereléseit biztosítja. Részletesebben, a találmány 20 mg/ml-től 100 mg/ml-ig terjedő koncentrációban, pH=7,0 értéken az aktív humán OB fehérje stabilis kiszereléseiről gondoskodik.
Egy másik szempontból a jelen találmány 10 mg/ml-es vagy magasabb koncentrációjú stabilis, aktív humán OB fehérje kiszerelésekről gondoskodik, melyek pH-ja 5,0 és 8,0 közötti.
Még egy másik szempontból a jelen találmány a humán OB fehérjeszármazék aktív és stabilis, 0,5 mg/ml-es vagy magasabb koncentrációjú, 6,0 és 8,0 közötti pH-jú készítményére vonatkozik, melyet egy immunglobulin Fc részének hozzákapcsolásával alakítottunk ki. Részletesebben, az Fc-OB fúziósfehérje körülbelül 7,5 pH-értékű, 5 mg/ml-től 50 mg/ml-es koncentrációjú, aktív és stabilis készítményeiről gondoskodunk.
A jelen találmány még egy további célkitűzése a fenti gyógyszerészeti összetételeket, az ilyen összetételek gyártási eljárásait és a szóban forgó összetételek alkalmazását gyógyászati készítmények előállításánál, valamint a szóban forgó készítményeket tartalmazó gyógyszerek elkészítésének eljárásait tartalmazza.
Ezután röviden ismertetjük az ábrákat.
Az 1A. és az 1B. ábrák egerekben az 1. példákban szereplő humán OB fehérjeszuszpenzió, illetőleg -oldat dózishatás görbéit mutatják be.
A 2. ábra kutyákban az OB szérumszintek grafikonját mutatja be az 1. példában leírt OB fehér3
HU 226 175 Β1 jeszuszpenzió és a kontroll OB fehérjeoldat vonatkozásában.
A 3. ábra a 37 °C-on hét hétig tárolt humán OB fehérje kiszerelések reverz fázisú, nagynyomású folyadékkromatográffal vizsgált (RPHPLC) nyomon követését mutatja be: a középső vonal az 1. példában leírt humán OB cink-szuszpenziót, a felső vonal az 1. példában leírt kontroll humán OB fehérjeoldatot, míg az alsó vonal a -80 °C-on 56 napig tárolt humán OB fehérjeszuszpenziót képviseli.
A 4. ábra a 19 °C-on 56 napig tárolt humán OB fehérje kiszerelések RP-HPLC-vel vizsgált nyomon követését mutatja be: a felső vonal az 1. példában leírt humán OB oldatot, a középső vonal az 2. példában leírt humán OB fehérje kristályos szuszpenziót, míg az alsó vonal a -80 °C-on 56 napig tárolt humán OB fehérje kristályos szuszpenziót képviseli.
Az 5A-5C. ábrák a humán metFc-OB fehérje aminosavszekvenciáját (a szekvencia száma: 2) és a kódoló DNS-szekvenciáját (a szekvencia száma: 1) mutatják be.
A 6A-6C. ábrák a humán metFc-OB fehérje aminosavszekvenciáját (a szekvencia száma: 4) és a kódoló DNS-szekvenciáját (a szekvencia száma: 3) mutatják be.
A 7. ábra az asp 108-ból (ez a 4. szekvencia számozása szerint megfelel az asp335-nek) az izo-asp képződés mértékét ábrázolja, ahogy azt fordított fázisú HPLC-vel a rekombináns metionil humán Fc-OB fehérjére nézve meghatároztuk.
A jelen stabilis, aktív OB fehérje összetételeket általában olyan szuszpenziókként osztályozzuk, amelyekben a fehérje egy folyadékban kicsapott és szuszpendált. Az összetétel egy aktív OB fehérjét, egy kicsapást okozó szert, egy pH-t változtató szert és egy folyékony hordozót tartalmaz. A jelen OB fehérjék vagy amorf, vagy kristályos formában vannak.
Előnyösen, emberekben terápiás vagy kozmetikai összetételként a natív humán OB fehérjének megfelelő aminosavszekvenciájú OB fehérjét szabadon megválaszthatóan a bakteriális expresszióhoz N-terminális metionincsoporttal együtt használjuk. A szóban forgó, felhasználható, OB fehérjék rekombináns DNS eszközökkel történő elkészítéséhez lásd a WO 96/05309 számú szabadalmi bejelentést, amely a kitanítás részét képezi. A kiválasztott aminosavakban változások tehetők, amíg az a fehérje általános feltekeredését vagy aktivitását megőrzi. Az alábbi 1. táblázat a felhasználható, megőrző jellegű helyettesítéseket a sajátságos tulajdonságok szempontjának megfelelően [bázikus, savas, hidrofób, aromás és méret (kicsi)] ismerteti. Általánosságban lásd a következő szakirodalmat: [Ford és munkatársai: Protein Expression and Purification 2, 95-107 (1991)], amelyet itt hivatkozásként építettünk be. A kisméretű aminoterminális kiterjesztések, mint például egy aminoterminális metioninmaradék, vagy azok a kismértékű meghosszabbítások, amelyek a tisztítást elősegítik, mint például egy polihisztidinfarok, egy antigén epitóp vagy egy kötődőmén, szintén jelen lehetnek.
1. táblázat
Konzervatív aminosav helyettesítések
| Bázikus | arginin lizin hisztidin |
| Savas | glutaminsav aszparaginsav |
| Poláros | glutamin aszparagin |
| Hidrofób | leucin izoleucin valin |
| Aromás | fenil-alanin triptofán tirozin |
| Kicsi | glicin alanin szerin treonin metionin |
Általában, a jelen szuszpenziókban megnövekedett stabilitást mutató humán OB fehérjék azok, amelyek hidrofób régiói fiziológiás pH-η a vizes fázis felé találhatók. Továbbá a jelen szuszpenziókban az immunglobulin Fc régiójával kapcsolt humán OB fehérje származékok OB fehérje része megnövekedett stabilitást mutat.
Általában, az immunglobulin Fc régiója a humán OB fehérjéhez genetikailag vagy kémiailag kapcsolt lehet. Előnyösen, az Fc régió az OB fehérje N-terminális részéhez fuzionált. A tárgykörnek megfelelő előnyben részesített Fc-OB fúziós fehérjéket lásd a következő számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben: 08/770,973, (1996. december 20-án benyújtott amit itt hivatkozásként építettünk be.
Előnyösen, a humán immunglobulin lgG1 nehéz láncának Fc aminosavszekvenciáját használjuk [Ellison és munkatársai: Nucleic Acids Rés., 10, 4071-4079 1982)]. Az előnyben részesített Fc régiót a 2. szekvenciaszámon tettük közzé (lásd 5. ábrát). A 2. számú rekombináns Fc-OB szekvencia az Fc-OB fehérje 378 aminosavát tartalmazza (nem számoltuk bele a metionint). Az 5. ábrán az Fc-OB fehérje első aminosava glutaminsav, amelyre +1-gyel hivatkozunk, míg a metioninra — 1-gyel. Az Fc rész változatai vagy analógjai például az aminosavak vagy bázispárok különböző helyettesítéseivel megalkothatok.
Az Fc szekvenciák diszulfidhidas keresztkötődésének megakadályozására a ciszteincsoportok eltávol íthatók vagy más aminosavakkal kicserélhetők. Neveze4
HU 226 175 Β1 tesen, a 2. szekvencia 5. helyzetében lévő aminosav cisztein. Az 5. helyzetben lévő cisztein eltávolítható vagy egy, vagy több aminosawal helyettesíthető. Például az 5. helyzetben lévő cisztein alaninnal helyettesíthető, ami így az aminosavszekvencia változásával jár. Hasonlóképpen, a 2. szekvencia 5. helyzetű ciszteinje szerinnel vagy más aminosawal helyettesíthető vagy eltávolítható.
Az 1., 2., 3., 4. és 5. pozíciókban található aminosavak eltávolításával is változat vagy analóg állítható elő, így eredményül a 373 aminosavból álló Fc-OB fehérjét kapjuk (a metionint nem számoltuk bele). Ezt a szekvenciát a 4-es számon tettük közzé (lásd a 6. ábrát). Ezen helyek helyettesítései is elkészíthetők, és ezek is a jelen találmány oltalmi körébe tartoznak.
Az Fc receptor kötőhely és a komplementkötőhely (C1q) eltávolítására négy aminosavból álló helyettesítések is tehetők. A 4. szekvencia számozása szerint ezen változatmódosítások közé a következő helyettesítések tartoznak: a 15. helyzetben a leucin glutaminsawal, a 98. helyzetben a glutaminsav alaninnal és a 100. és a 102. helyzetekben lévő lizin alaninnal helyettesíthető.
Hasonlóképpen, egy vagy több tirozin fenil-alaninnal is helyettesíthető. Ahogy azt a fentiekben leírtuk, a kiválasztott aminosavak helyettesíthetők, mindaddig, amíg a fehérje általános feltekeredését vagy aktivitását megőrzi.
Továbbá az Fc régió az Fc-OB fúziós fehérje humán eredetű OB részéhez is hozzákapcsolható különböző hosszúságú kémiai, vagy aminosavakból álló, „kapcsolókkal”. Az ilyen kémiai kapcsolók a szakirodalomban jól ismertek. Az aminosavakból álló kapcsolók szekvenciái, anélkül, hogy erre korlátoznánk magunkat, a következők:
(a) ala, ala, ala;
(b) ala, ala, ala, ala;
(c) ala, ala, ala, ala, ala;
(d) gly, gly;
(e) gly, gly, gly;
(f) giy. giy. gly. gly. gly;
(g) giy. gly. gly. gly. g'y. gly. gly;
(h) gly-pro-gly;
(I) gly. gly. pro, gly, gly; és
Ü) az (a)-(i) részek kombinációi.
A jelen találmányban szereplő kicsapást okozó szerek kationos komponenst tartalmazó sók lehetnek, amelyeket a kalcium, magnézium, cink, nátrium, vas, kobalt, mangán, kálium és nikkel sói közül választhatunk. Előnyösen, a só a gyógyszerészeti összetétellel kompatibilis.
Alternatívaként a kicsapódást biztosító só a következő szerek közül választható, amelyek gyógyszerészetileg elfogadhatók és közismert róluk, hogy a fehérjéket kicsapják: polietilénglikolok vagy más vízben oldódó polimerek, amelyeket a következő bekezdésben közzéteszünk. A használható kicsapószerek neutrális pH-η az OB fehérje kicsapódását indukálják, de ez a kicsapás reverzibilis vagy a csapadék fiziológiásán kompatibilis oldószerekkel újra feloldható. A megfelelő kicsapószer nélkül az OB fehérje neutrális pH-η olyan csapadékká alakul ki, ami fiziológiásán kompatibilis oldószerekkel hígítva többé reverzibilisen nem oldható fel.
A pH-tartomány előnyösen körülbelül pH=4,0-től körülbelül pH=8,0-ig, előnyösebben körülbelül pH=6,5től körülbelül pH=7,5-ig terjed. A gyógyszerészeti összetétel legelőnyösebb pH-ja az, amelyen a felhasznált OB fehérje a kiválasztott fehérjekoncentrációnál megtartja maximális biológiai aktivitását. Nem fiziológiás pH-η a jelen OB fehérje szuszpenziók szintén előnyökkel rendelkezhetnek. 5,0 pH-érték alatt a jelen OB fehérjeszuszpenziók stabilabbak lehetnek (tárolási időtartamukat tekintve) mint azonos pH-η az egyező koncentrációjú OB fehérjeoldatok. Például pH=4,0-en és 50 mg/ml-es koncentrációban a jelen találmány szuszpenziói in vivő beadáskor magasabb biológiai aktivitással rendelkezhetnek, mint az ekvivalens oldatok.
A pufferek azok közül választhatók ki, amelyek a kívánt pH-t elérik, miközben az összetétel kicsapódási jellemzőit nem változtatják meg. Előnyösen, a pufferek a gyógyszerészeti alkalmazásnak megfelelnek. A írisz-, MES és PIPES pufferek mind amorf, mind kristályos formái elfogadhatók. A kristályos formák közül előnyben részesítjük a foszfátot.
Előnyösen a végső szuszpenzió koncentrációja a terápiás beadás megkönnyítésére 5 mg/ml-100 mg/ml között van.
Az alkalmazott módszerek
Terápiás módszerek: A terápiás alkalmazások közé a testtömeg-módosítás, a cukorbaj kezelése vagy megelőzése, a sovány-testtömeg növelése és az inzulinérzékenység növelése tartozik. Továbbá a jelen találmány összetételei a fenti állapotok kezelésére vagy javítására szolgáló egy vagy több gyógyszer elkészítéséhez felhasználhatók. A beadás módszere tipikusan az injektálás, de más módozatok is lehetségesek, mint például a tüdőbejuttatás [például: PCT WO 96/05309 számú szabadalmi bejelentés, mely a kitanítás részét képezi (83. oldaltól)]. A jelen találmány szuszpenziói porlasztva szárítással létrehozott olyan részecskék lehetnek, amelyek átlagmérete kevesebb mint 10 mikron, vagy előnyösebben 0,5-5 mikron.
A testtömeg módosítása
A jelen összetételek és eljárások a testtömeg csökkentésére használhatók. Másképpen nézve, a jelen összetételek a kívánt testtömeg vagy elhízási szint fenntartására felhasználhatók. Ahogy azt az egérfélék modelljeiben demonstrálták (lásd a fentiekben) a jelen OB fehérje beadása testtömegcsökkenést eredményez. A testtömegvesztés elsődlegesen a zsírszövet vagy a zsír vesztésében mutatkozik meg. Az ilyen testtömegvesztés a kísérő állapotok kezelésével, mint például az alábbiakban említettekkel társul, és ezért a terápiás alkalmazás részét képezi. Ráadásul, ha az előnyösebb megjelenés biztosításának egyedüli útja a testtömeg-módosítás, akkor itt a kozmetikai használatot is biztosítjuk.
A cukorbaj kezelése
A jelen találmány összetételei és eljárásai a ll-es típusú diabétesz megelőzésére vagy kezelésére fel5
HU 226 175 Β1 használhatók. Mivel a ll-es típusú diabétesz az elhízással kapcsolatban van, ezért a jelen találmány használata a diabétesz kifejlődését szintén enyhítheti vagy megakadályozhatja a testtömeg csökkentése (vagy a kívánt tömeg fenntartása, vagy az elhízási szint csökkentésére vagy fenntartása) érdekében. Továbbá a jelen találmány összetételei a diabéteszes állapotának javítására még azokban a dózisokban is felhasználhatók, amelyek a testtömegvesztés eléréséhez nem elégségesek.
A vér lipidszintjének módosítása
A jelen találmány összetételei és eljárásai a vér lipidszintjének módosítására felhasználható. Ideálisan, azokban az esetekben, melyekben a vérlipidszint módosítása megkívánt, vagy ahol a vér lipidszintjét fenn kell tartani, a dózis nem elegendő a tömegvesztés eléréséhez. fgy, egy elhízott beteg kezelésének kezdeti szakaszában olyan dózisok adhatók be, amelyekkel a tömegvesztés és a velejáró vérlipidszint-csökkenés egyaránt elérhetők. Ha egyszer már a jelentős súlycsökkentés bekövetkezett, akkor elegendő olyan dózis alkalmazása, amellyel megakadályozható a súlyfelesleg visszaállása, de még elegendő a kívánt vérlipidszint fenntartásához, vagy az itt közzétett állapotok eléréséhez. Ezek a dózisok empirikusan meghatározhatók, mivel az OB fehérje hatásai reverzibilisek [Campfield és munkatársai: Science 269, 546-549 (1995) lásd az 547. oldalt], így, ha a nem kívánt tömegvesztéskor a dózis tömegvesztést okoz, akkor a kívánt vérlipidszintek eléréséhez alacsonyabb dózisok adhatók be, amellyel a kívánt testtömeg még fenntartható (lásd a PCT Publication WO 97/06816 számú szabadalmi bejelentést, amit itt hivatkozásként építettünk be).
A soványtömeg vagy az inzulinérzékenység növelése
Ideálisan, azokban az állapotokban, amelyekben a soványtömeg növelése a kívánt cél, a dózis nem elegendő ahhoz, hogy tömegvesztést eredményezzen. fgy, egy kövér beteg kezelésének kezdetén olyan dózisok adhatók be, amelyekkel a tömegvesztés és az ezzel együttjáró zsírszövet csökkenés/soványtömeg növekedés elérhető. A kielégítő mértékű tömegvesztés eléréséhez olyan dózis adható be, amely a tömegvisszanyerés megakadályozásához elegendő, ugyanakkor a kívánt soványtömeg-növelés fenntartásához (vagy a soványtömeg-kimerítés megakadályozásához) is elegendő. Az egyedi inzulinérzékenység növeléséhez, hasonló, dózisra vonatkozó megfontolások vehetők figyelembe. A cukorbajos betegeknél a soványtömeg növekedése tömegvesztés nélkül kielégítő mértékben elérhető a beadható inzulin (vagy, potenciálisan az amilin, az amilin antagonisták vagy agonisták, vagy tiazolidinedionok, vagy más, a diabétesz kezelésére használt, potenciális gyógyszerek) mennyiségének csökkentésével. Az általános ellenállóképesség növelésére hasonló meggondolások vehetők figyelembe. Az általános ellenállóképesség növelésével járó soványtömeg-növekedés olyan dózisokkal érhetők el, amelyek a tömegvesztés kialakulásához nem elégségesek. A további előnyök tömegvesztés nélkül is elérhetők, mint például a vörösvérsejtek számának növekedése (és a vér oxigénellátottsága) és a csontreszorpció vagy az oszteoporózis csökkenése (lásd a PCT WO 97/18833 számú szabadalmi bejelentést, amit itt hivatkozásként építettünk be).
Kombinációs terápia
A jelen találmány összetételei és eljárásai más terápiákkal együttesen használhatók, mint például a megváltoztatott étrenddel vagy testgyakorlással. További gyógyszerek lehetnek azok például, amelyek a cukorbaj kezelésére szolgálnak (például az inzulin és valószínűleg az amilin és ennek antagonistái vagy agonistái (lásd a PCT WO 98/08512 számú szabadalmi bejelentést, ami a kitanítás részét képezi vagy más, a diabétesz kezelésére szolgáló gyógyszerek) vagy azok, amelyek a koleszterolszint és a vérnyomást csökkentő gyógyszerek közé tartoznak (mint például azok, amelyek a vérlipidszinteket csökkentik vagy más szív- és érrendszeri gyógyszerek), valamint: az aktivitást fokozó gyógyszerek (például amfetaminok), a diuretikumok (testfolyadék eltávolítására) és az étvágycsökkentők (mint például azok a szerek, amelyek a neuropeptid γ-receptorokra hatnak, vagy a szerotonin ismételt felvételének inhibitorai). Az ilyen gyógyszerek adhatók szimultán vagy sorban egymás után. Ráadásul a jelen eljárások felhasználhatók sebészeti eljárásokkal kapcsoltan, ilyen például a kozmetikai sebészet, ami a test teljes kinézetének megváltoztatását célozza (például: a lipidleszívás, a testtömeg csökkentésére tervezett lézeres sebészet, és a testtömeg növelésére tervezett implantációs sebészet). A szívsebészet egészségmegőrző szerepe, mint például a bypass műtétek vagy más műtétek, amelyeket arra terveznek, hogy az elzárást okozó zsírlerakódások, mint például arteriális plakkok, károsító hatásától megszabadítsák a vérpályát, növelhető a találmány szerinti összetételek és eljárások kísérő alkalmazásával. Az epekövek megszüntetésére szolgáló eljárások, mint például az ultrahangos vagy a lézeres kezelések, előtt, közben, vagy akár után szintén alkalmazhatók a jelen terápiás eljárások. Továbbá a találmány szerinti eljárások műtéteknél, a törött csontok, sérült izmok kezelésénél, vagy más terápiánál kiegészítésként alkalmazhatók, ezzel javítható a soványszövettömeg mennyiségi növekedése.
A következő példák a találmány teljesebb bemutatására szolgálnak, de nem úgy épülnek fel, hogy annak oltalmi körét korlátozzák. Az 1. példa egy pH=7,0-en amorf (a kristályossal szemben) 100 mg/ml koncentrációjú humán OB fehérjeszuszpenziót tesz közzé. A 2. példa egy kristályos OB fehérjeszuszpenzió előállítási eljárását mutatja be. A 3. példa az OB fehérjeoldattal szemben a kristályos OB fehérjeszuszpenzió megjavított dózishatását teszi közzé. A 4. példa kutyamodellben a jelen szuszpenzió késleltetett időhatásgörbéjét mutatja be. Az 5. példa egy amorf Fc-OB fehérjeszuszpenzió előállítását teszi közzé. A 6. és 7. példa a jelen szuszpenziók megjavított stabilitását mutatja.
HU 226 175 Β1
Példák
1. példa
Az amorf OB fehérjeszuszpenzió elkészítése
Ez a példa a jelen találmány humán OB fehérjeszuszpenziók elkészítését mutatja be. Az amorf humán OB fehérjeszuszpenziót cinksóval történő kicsapással állítottunk elő. A végső 6,0-8,0 közötti pH-n 100 mg fehérje/ml koncentrációjú folyadékot kaptunk. Egy kontroli-összetételű humán OB fehérjeoldatot is közzétettünk, melynek pH-ja 4,0.
Összetétel:
Fehérje-összetevő: egy olyan rekombináns metionil humán OB fehérje („rmetHu-leptin”), amelyet a WO 96/05309 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben 4-es szekvenciaszámon közzétettek, mely a 22. helyzetben lévő aminosawal (Val) kezdődik és a 167. helyzetben lévő aminosawal fejeződik be, valamint N-terminális metioninnal rendelkezik. Kicsapószer: cink-klorid.
Puffer: Tris, MES és PIPES.
Végső pH: 6,0-8,0.
Elkészítési eljárás:
A rekombináns metionil humán OB fehérje („rmetHuleptin”) oldatot vízben az injektáláshoz 40 mg/ml-re bekoncentráltuk és az oldat pH-ját HCI-lel 3,0-ra lesavanyítottuk. Cink-kloridot adtunk hozzá, és a megfelelő puffer hozzáadásával a szuszpenziót közel semleges pH-ra állítottuk (hozzávetőleg pH=7,0). A Trisz-, MES, PIPES pufferek használata sikeresnek bizonyult. A végső állapot tipikusan a következő összetételű volt: 10-15 mM puffer, 20-1000 μΜ cinksó, pH=6,0-8,0 és 10 mg/ml rmetHu-leptin. A koncentráláshoz a szuszpenziókat 4 °C-on több óráig tartó inkubálással ülepedni hagytuk, majd a felülúszót eltávolítottuk. Ez a folyamat a maximális koncentráció eléréséig többször megismételhető, és a körülbelül 100 mg/ml-es szuszpenziók elkészítéséhez alkalmazható.
A kontrollösszetétel:
Kontrollösszetételként a 20 mg/ml koncentrációjú rekombináns metionil humán OB fehérje (lásd a fentieket) oldat 10 mM acetátot és 5 vegyes% szorbitot tartalmazott.
2. példa
A kristályos OB fehérjeszuszpenzió elkészítése
Ez a példa a jelen találmány kristályos OB fehérjeszuszpenziójának elkészítését mutatja be.
Fehérje-összetevő: egy olyan rekombináns metionil humán OB fehérje, amelyet a fenti 1. példában mutattunk be és használtunk.
Eljárás: Az 1 mM HCI-ben lévő rmetHu-leptint 15 mg/ml-es koncentrációban 1:1 arányban 4 °C-on összekevertük a következőket tartalmazó oldattal: 4 M NaCI, 100 mM Tris, pH=8,5, 2 térfogat% etanol. Több órás lassú hőmérséklet-emeléssel, 14 °C-ról 25 °C-ra, és a végső hőmérséklet nagyságától függően a hőmérséklet legalább 2 óráig történő fenntartásával a kristályok spontán kialakultak. Az „anyalúgot” (azaz azt a folyadékot, amelyben a kristályok nőttek) az injektáláshoz alkalmasabb folyadékkal úgy cseréltük ki, hogy centrifugálással a kristályokat összegyűjtöttük és a megfelelő, kristálystabilitást biztosító oldatban felvettük. Egy megfelelő kicserélőoldat 20-25% polietilénglikolt (melynek molekulatömege körülbelül 4000 daltontól körülbelül 20 000 daltonig terjed, a „körülbelül kifejezés a kereskedelemben kapható PEG hozzávetőleg átlag-molekulatömeget jelenti), megfelelő semleges pH-jú puffért, előnyösen körülbelül pH=6,0-tól körülbelül pH=8,0-ig terjedő tartományban, előnyösen 10 mM foszfátpuffert pH=6,0-től pH=7,5-ig, és 2 térfogat% etanolt tartalmazott. Egy tipikus készítményben bizonyos mennyiségű maradék só, általában kevesebb mint 0,25 M maradhat.
3. példa
Az OB fehérjeoldatokhoz viszonyított OB fehérjeszuszpenziók javított dózishatásai Ez a példa azt szemlélteti, hogy a jelen találmány
OB fehérje szuszpenziói hatásosabbak, mint az OB fehérjeoldatban. Normálisan sovány egereket 5 napon keresztül naponta 1, 10 és 50 mg fehérje/testtömeg-kg dózisokban a jelen OB fehérjeszuszpenziókkal vagy az OB fehérjeoldattal azonos dózisokban injektáltunk. A szuszpenziókkal kezelt egerek az OB fehérje tömegegységéhez viszonyítva több súlyt vesztettek, mint az egyenlő dózisú oldatkiszerelésekkel kezelt egerek. Ezt az 1 A. és 1B. ábrák mutatják be. Az 1 A. ábra az 1. példában előállított szuszpenzió okozta százalékos változást mutatja. Az 1B. ábra az 1. példában előállított kontrolloldat okozta százalékos változást mutatja.
Ez azt szemlélteti, hogy beadáskor a jelen szuszpenzió hatásosabb, mint az azonos dózisú oldat. Bár nem óhajtunk elmélethez kötődni, mégis ez annak köszönhető, hogy az oldathoz képest a szuszpenzió abszorpciós felvétele lassabb. A vérbe történő belépése előtt a szuszpenziónak először fel kell oldódnia és így ez a megnyújtott kibocsátás nagyobb hatékonyságot eredményez. A kiszerelések tömege alapján, a szuszpenzióban történő beadáshoz kevesebb fehérje szükséges, mint az oldatban történő beadáshoz. Továbbá az oldattal történő kezelésnél az 5. napon (ez az utolsó nap) a 10 és az 50 mg/kg dózisok között nincs különbség (lásd az alábbi 2. táblázatot). A szuszpenziós kezelés egy sokkal határozottabb dózishatásgörbét ad, mint az oldatkiszerelésekkel végzett kezelés.
2. táblázat
A százalékos változás a 0. naptól
| Nap | 6 |
| Placebo | 1,4 |
| Szuszpenzió 1 mg/kg | -1,7 |
| Szuszpenzió 10 mg/kg | -5,9 |
| Szuszpenzió 50 mg/kg | -9,5 |
| Oldat 1 mg/kg | -0,7 |
| Oldat 10 mg/kg | -3,0 |
| Oldat 50 mg/kg | -3,5 |
Az adatok kezelésenként 5 egér átlagát adják.
HU 226 175 Β1
Eljárás:
Állatok: normál CD-1 egereket használtunk.
Alaptömeg: körülbelül 20 gramm.
Beadás: Az állatok 5 napon keresztül minden nap azonos helyre kapták az injekciót.
Gondozás: Az állatokat csoportonként tartottuk és ad libitum táplálkozhattak.
összetételek:
Oldat: Az 1. példa szerint előállított rmetHu-leptin-oldatokat 20 mg/ml-es koncentrációban használtuk. Szuszpenzió: Az 1. példa szerint előállított rmetHu-leptin szuszpenziókat pH=7,0-en, 10 mM MES pufferben, 500 mM cinksóban, 20 mg/ml-es koncentrációban használtuk.
PBS: Placebonak foszfáttal puffereit sóoldatot használtuk. (A kontrollok, amelyeket folyékony szuszpenzióban vagy fehérje nélküli oldatban, csak magában, használtunk, dózishatásgörbéi megegyeztek a PBSével, az adatokat nem mutattuk be).
4. példa
Az OB fehérje szérumszintjei kutyákban
Ez a példa a jelen szuszpenziók időben elnyújtott hatását szemlélteti.
Eljárás: A Beagle kutyákat az rmetHu-leptin szuszpenziójával vagy oldatával kezeltük. A szérumot levettük, és az OB fehérjeszinteket a 2. ábrán bemutatott időpontokban megmértük.
3. táblázat
| Az injektálás után eltelt idő (óra) | Szérumkon- centrácíó Oldat | Szérumkon- centráció Szuszpenzió (kristályos) | Szérumkon- centráció Szuszpenzió (cink) |
| 0 | 0 | 0 | 0 |
| 0,5 | 532 | 9,4 | 50,5 |
| 1 | 1047 | 12,9 | 130,4 |
| 2 | 1706 | 51 | 298,5 |
| 4 | 1480 | 87 | 323,5 |
| 8 | 742 | 298 | 247,7 |
| 12 | 301 | 426 | 241,1 |
| 16 | 109 | 389 | 209,6 |
| 24 | 5 | 90 | 57,7 |
összetételek:
Oldat: Az 1. példa szerint előállított oldatot 5 mg/kg/ml-es dózisokban használtuk.
Szuszpenzió: Az 2. példa szerint előállított szuszpenziót használtuk.
Állatok: A 3. táblázatban bemutatott adatok pontonként 3 állat átlagát jelentik. Az állatok normális Beagle kutyák voltak.
Gondozás: Az állatokat egyenként tartottuk és ad libitum táplálkozhattak. Az állatokat a jó gondozási gyakorlat előírásai alapján tartottuk. Vizsgálati módszer: ellenanyagon alapult [Hotta és munkatársai: J. Bioi. Chem., 271, 25 327-25 331 (1996)].
Eredmények: Ahogy az a 2. ábrán látható 1-2 órával a beadás után az oldattal kezelt állatoknál a szérumkoncentráció csúcsot ér el, míg a szuszpenzióval kezelt állatoknál a csúcs csak 10-12 órával később jelenik meg. Ez azt mutatja, hogy a szuszpenzió a minimális hatásos dózist hosszabb ideig fenntartja.
5. példa
Az amorf Fc-OB fehérjeszuszpenzió elkészítése
Ez a példa a jelen találmány humán Fc-OB fehérjeszuszpenziójának elkészítését mutatja be. Az amorf humán Fc-OB fehérjeszuszpenziót cinksóval végzett kicsapással készítettük el. A kontroll humán Fc-OB fehérjeoldat pH=7,0-es összetételét is közzétettük. Összetétel:
A fehérje rész: A 4-es számon közzétett rekombináns metionil humán Fc-OB fehérje („rmetHu-Fc-leptin) egy 373 aminosavból álló fúziós fehérje, melynek Fc része az 1-227. aminosavig, míg a humán OB fehérje része a 228-373. aminosavig tart és N-terminálisán metionin helyezkedik el.
Kicsapószer: cink-klorid.
Puffer: 100 mM Tris.
Végső pH: 7,5.
Elkészítési eljárás:
Az rmetHu-Fc-leptin-oldatot 100 mM Tris-pufferben, pH=5,0, körülbelül 5 mg/ml-re bekoncentráltunk. A szuszpenzió kialakítása érdekében cink-kloridot adtunk hozzá.
A kontrollösszetétel: Kontrollösszetételként 100 mM Tris-pufferben 5 mg/ml-es rmetHu-Fc-leptin-oldatot (lásd a fentieket) használtunk (pH=5,0).
6. példa
A jelen humán OB fehérjeszuszpenziók stabilitása
Ez a példa az szemlélteti, hogy a jelen találmány szuszpenzióinak amorf és kristályos formái gyorsított stabilitási vizsgálati körülmények között stabilabbak, mint oldatban.
A 3. ábra a 37 °C-on hét hétig tárolt humán OB fehérje jelen találmányban leírt szuszpenziós formájának (mint az 1. példában) és oldat formájának (mint az 1. példában) összehasonlítását mutatja be RP-HPLC nyomon követéssel. Ahogy itt látható a jelen szuszpenzió (középső vonal) kevesebb csúcsot mutat (ez a kevesebb lebontási termékre utal) mint az oldat (felső vonal). összehasonlításként a -80 °C-on 56 napig tárolt, cinksóval készített, amorf formát az alsó vonal reprezentálja.
A 4. ábra a 2. példa kristályos szuszpenziós formájának és az 1. példa oldatként elkészített formájának összehasonlítását mutatja be RP-HPLC nyomon követéssel. Az anyagokat 56 napig 19 °C-on tároltuk. (A 37 °C-on történő tárolás nem megfelelő, mivel 37 °C-on a kristályos forma elveszti kristályos felépítését.) A 4. ábra azt mutatja, hogy több csúcs van, amely az oldatban lévő anyag nagyobb mértékű lebomlásra utal (fő csúcs=86%) a szuszpenziós formával szemben (a fő csúcs=94%). Az alsó kontroll vonal a -80 °C-on 56 napig tárolt humán OB fehérje kristályos szuszpen8
HU 226 175 Β1 zióját képviseli. Hasonló eredményeket kaptunk 4 °C-on, bár a lebomlás sokkal lassabb volt.
A fő lebomlási termék aszpartátnak bizonyult (a 108. aminosavból származott) (a PCT WO 96/05309 számú szabadalmi bejelentés 4. szekvenciájának megfelelő számozás, ami az 1-es helyzetben Val-t tüntet fel). A molekula stabilitásának növelése érdekében ebbe a helyzetbe több stabilis kémiai csoport, mint például egy másik aminosav, empirikusan kiválasztható. Mindent egybevetve, a jelen találmány szuszpenziói sokkal stabilabbak, mint az OB fehérjeoldatban.
7. példa
A jelen humán Fc-OB fehérjeszuszpenzió stabilitása
Ez a példa azt mutatja be, hogy a jelen találmány Fc-OB fehérjeszuszpenziói amorf formában a gyorsított stabilitási vizsgálat körülményei között sokkal stabilabbak, mint az anyag oldatban.
A jelen szuszpenzló cinksóval készített amorf formájának (lásd az 5. példát) és oldat formájának stabilitását a szuszpenzió és az oldatformák 4 °C-on, 29 °C-on és 37 °C-on két hétig történő tárolásával vizsgáltuk. Ahogy azt a 7. ábra mutatja, a 29 °C-on és 37 °C-on tárolt Fc-leptin szuszpenziók az OB fehérje 108. aminosavpozíciójában aszpartátra nézve kisebb százalékban mutattak lebomlási terméket, mint az azonos hőmérsékleten tárolt Fc-leptin-oldatok.
Bár a jelen találmányt az előnyben részesített megvalósítási formákra nézve írtuk le, mégis a szakirodalomban jártas szakemberek számára a változtatások és módosítások lehetősége ismeretes. Ezért, a csatolt igénypontok arra szolgálnak, hogy a találmány oltalmi körébe tartozó minden ilyen egyenértékű változtatást átfogjon.
Claims (11)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Humán OB fehérjeszuszpenzió, amelynek pH-ja a 6,0-8,0 tartományba esik és koncentrációja legalább 0,5 mg/ ml, amelyben az OB fehérje az immunglobulin Fc régiójának és az OB fehérje N-terminális részének összekapcsolásával kialakított származéka és amely szuszpenzió egy kicsapószert is tartalmaz.
- 2. Az 1. igénypont szerinti humán OB fehérjeszuszpenzió, amelyben a szóban forgó humán Fc-OB fehérje Fc részét a következő csoport tagjai közül választjuk ki:(a) a 2. és a 4. számú Fc aminosavszekvenciák;(b) az (a) aminosavszekvencia része, melyet a 2. szekvencia számozása szerint a következő helyzetekben különböző aminosavakkal helyettesítettünk vagy abból aminosavak eltávolításával hoztunk létre:(i) egy vagy több cisztein kicserélése alaninra vagy szerinre;(ii) egy vagy több tírozin kicserélése fenil-alaninra;(iii) az 5. helyzetben lévő aminosav kicserélése alaninra;(iv) a 20. helyzetben lévő aminosav kicserélése glutaminsavra;(v) a 103. helyzetben lévő aminosav kicserélése alaninra;(vi) a 105. helyzetben lévő aminosav kicserélése alaninra;(vii) a 107. helyzetben lévő aminosav kicserélése alaninra;(viii) az 1., 2., 3., 4. és 5. helyzetben lévő aminosavak eltávolítása;(ix) az Fc receptorkötő hely megszüntetése érdekében egy vagy több aminosav kicserélése vagy eltávolítása;(x) a komplement kötőhely (C1q) megszüntetése érdekében egy vagy több aminosav kicserélése vagy eltávolítása;(xi) az (i)-(x) alrészek kombinálása;(c) az (a) vagy a (b) alrészek aminosavszekvenciái, melyek N-terminális metionilcsoporttal rendelkeznek.
- 3. Az 1. igénypont szerinti humán OB fehérjeszuszpenzió, ahol a szóban forgó koncentráció legalább 5 mg/ml.
- 4. Az 1. igénypont szerinti humán OB fehérjeszuszpenzió, ahol a szóban forgó koncentráció legalább 5 mg/ml és 50 mg/ml között van.
- 5. Az 1. igénypont szerinti humán OB fehérjeszuszpenzió, ahol a szóban forgó pH=7,0.
- 6. A 2. igénypont szerinti humán OB fehérjeszuszpenzió, ahol a szóban forgó humán OB fehérje az rmetHu-Fc-leptin.
- 7. Az 1. igénypont szerinti humán OB fehérjeszuszpenzió, amely a sók és vízben oldódó polimerek közül választott kicsapószert tartalmaz.
- 8. Az 1. igénypont szerinti humán OB fehérjeszuszpenzió, amely kicsapószerként a következő fémionok közül választott tartalmazhatja: kalcium, magnézium, cink, nátrium, vas, kobalt, mangán, kálium és nikkel.
- 9. Eljárás az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti szuszpenzió előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelő körülmények között egy kicsapószert és egy oldatban lévő humán OB fehérjét kombinálunk, ahol az OB fehérje az immunglobulin Fc régiójának és az OB fehérje N-terminális részének összekapcsolásával kialakított származéka; majd hagyjuk az OB fehérjét kicsapódni; összegyűjtjük a kicsapódott OB fehérjét; és a kapott OB fehérjét egy hígítószerben újraszuszpendáljuk.
- 10. Az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti szuszpenzió, amely terápiás beadásra alkalmas.
- 11. Az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti szuszpenzió alkalmazása az alábbi állapotok bármelyikének kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására:(a) testtömeg-módosítás;(b) elhízottság módosítása;(c) diabétesz;(d) a vér lipidszintjének módosítása;(e) a soványtömeg növelése; és (f) az inzulinérzékenység fokozása.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US84397197A | 1997-04-17 | 1997-04-17 | |
| US09/059,467 US20020019352A1 (en) | 1997-04-17 | 1998-04-14 | Stable, active, human ob protein compositions and methods |
| PCT/US1998/007828 WO1998046257A1 (en) | 1997-04-17 | 1998-04-16 | Compositions comprising conjugates of stable, active, human ob protein with antibody fc chain and methods |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0002831A2 HUP0002831A2 (hu) | 2000-12-28 |
| HUP0002831A3 HUP0002831A3 (en) | 2005-11-28 |
| HU226175B1 true HU226175B1 (en) | 2008-06-30 |
Family
ID=26738785
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0002831A HU226175B1 (en) | 1997-04-17 | 1998-04-16 | Human ob protein suspension, process for producing thereof and use for production of pharmaceutical composition |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0977583B1 (hu) |
| JP (1) | JP4086908B2 (hu) |
| CN (1) | CN1202862C (hu) |
| AT (1) | ATE223229T1 (hu) |
| AU (1) | AU7132798A (hu) |
| CA (1) | CA2286098C (hu) |
| DE (1) | DE69807679T2 (hu) |
| ES (1) | ES2183351T3 (hu) |
| HK (1) | HK1023513A1 (hu) |
| HU (1) | HU226175B1 (hu) |
| IL (1) | IL132380A0 (hu) |
| WO (1) | WO1998046257A1 (hu) |
Families Citing this family (33)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2358862A1 (en) * | 1995-11-22 | 1997-05-29 | Amgen Inc. | Methods of increasing lean tissue mass using ob protein compositions |
| US20030040467A1 (en) | 1998-06-15 | 2003-02-27 | Mary Ann Pelleymounter | Ig/ob fusions and uses thereof. |
| US6936439B2 (en) | 1995-11-22 | 2005-08-30 | Amgen Inc. | OB fusion protein compositions and methods |
| US7488590B2 (en) | 1998-10-23 | 2009-02-10 | Amgen Inc. | Modified peptides as therapeutic agents |
| AU773891C (en) | 1998-10-23 | 2005-02-17 | Kirin-Amgen Inc. | Dimeric thrombopoietin peptide mimetics binding to MP1 receptor and having thrombopoietic activity |
| US6660843B1 (en) | 1998-10-23 | 2003-12-09 | Amgen Inc. | Modified peptides as therapeutic agents |
| EP1128840A1 (en) * | 1998-10-27 | 2001-09-05 | Eli Lilly And Company | Prevention of muscle mass loss with leptin receptor ligands |
| WO2001083525A2 (en) * | 2000-05-03 | 2001-11-08 | Amgen Inc. | Modified peptides, comprising an fc domain, as therapeutic agents |
| US20020090646A1 (en) * | 2000-05-03 | 2002-07-11 | Amgen Inc. | Calcitonin-related molecules |
| MXPA03006294A (es) * | 2001-01-18 | 2003-09-16 | Merck Patent Gmbh | Proteinas de fusion disfuncionales con actividad glucocerebrosidasa. |
| US6992174B2 (en) | 2001-03-30 | 2006-01-31 | Emd Lexigen Research Center Corp. | Reducing the immunogenicity of fusion proteins |
| US7026326B2 (en) | 2002-05-21 | 2006-04-11 | Amgen Inc. | Substituted heterocyclic compounds and methods of use |
| CA2552590A1 (en) | 2004-01-05 | 2005-07-21 | Emd Lexigen Research Center Corp. | Interleukin-12 targeted to oncofoetal fibronectin |
| US8008453B2 (en) | 2005-08-12 | 2011-08-30 | Amgen Inc. | Modified Fc molecules |
| US8227408B2 (en) | 2005-09-07 | 2012-07-24 | Neurotez, Inc. | Leptin as an anti-amyloidogenic biologic and methods for delaying the onset and reducing Alzheimer's disease-like pathology |
| CN107488228A (zh) | 2008-04-11 | 2017-12-19 | 中外制药株式会社 | 与多个分子的抗原反复结合的抗原结合分子 |
| AU2009248914A1 (en) | 2008-05-21 | 2009-11-26 | Neurotez, Inc. | Methods for Treating Neurodegenerative Disorders Related to Neurofibrillary Tangles |
| US8501686B2 (en) | 2008-06-05 | 2013-08-06 | University Of Michigan | Method of treating fatty liver diseases and conditions in non-lipodystrophic subjects |
| CA2742600A1 (en) | 2008-11-04 | 2010-05-14 | Nikolaos Tezapsidis | Leptin compositions and methods for treating progressive cognitive function disorders resulting from accumulation of neurofibrillary tangles and amlyoid beta |
| CN102405230A (zh) | 2009-04-22 | 2012-04-04 | 默克专利有限公司 | 具有修饰的FcRn结合位点的抗体融合蛋白 |
| RU2658504C9 (ru) * | 2010-11-30 | 2018-08-21 | Чугаи Сейяку Кабусики Кайся | Антигенсвязывающая молекула, способная многократно связываться с множеством антигенных молекул |
| KR20230005405A (ko) | 2011-02-25 | 2023-01-09 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | ＦｃγＲＩＩｂ 특이적 Ｆｃ 항체 |
| US20150050269A1 (en) | 2011-09-30 | 2015-02-19 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antigen-binding molecule promoting disappearance of antigens having plurality of biological activities |
| HUE040496T2 (hu) | 2012-09-27 | 2019-03-28 | Childrens Medical Ct Corp | Vegyületek elhízás kezelésére és alkalmazási eljárásaik |
| RS58422B1 (sr) | 2013-11-26 | 2019-04-30 | Childrens Medical Ct Corp | Jedinjenja za tretiranje gojaznosti i postupci za njihovu upotrebu |
| US20170209408A1 (en) | 2014-04-03 | 2017-07-27 | The Children's Medical Center Corporation | Hsp90 inhibitors for the treatment of obesity and methods of use thereof |
| EP3240804A4 (en) | 2014-12-19 | 2019-01-09 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | ANTI-MYOSTATIN ANTIBODIES, POLYPEPTIDES WITH DEVIANT FC REGIONS AND METHOD OF USE |
| WO2016098356A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-23 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Anti-c5 antibodies and methods of use |
| EP3816179A3 (en) | 2015-02-05 | 2021-08-04 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Fc region variant comprising a modified fcrn-binding domain |
| EP3394098A4 (en) | 2015-12-25 | 2019-11-13 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | ANTI-MYOSTATIN ANTIBODIES AND METHODS OF USE |
| KR20230079499A (ko) | 2016-08-05 | 2023-06-07 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | Il-8 관련 질환의 치료용 또는 예방용 조성물 |
| FI3509624T3 (fi) | 2016-09-12 | 2023-10-18 | Amryt Pharmaceuticals Inc | Menetelmiä neutraloivien anti-leptiini -vasta-aineiden havaitsemiseksi |
| WO2018139623A1 (en) | 2017-01-30 | 2018-08-02 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Anti-sclerostin antibodies and methods of use |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5559208A (en) * | 1995-01-31 | 1996-09-24 | Eli Lilly And Company | Anti-obesity proteins |
| GB9511935D0 (en) * | 1995-06-13 | 1995-08-09 | Smithkline Beecham Plc | Novel compound |
| CA2238307A1 (en) * | 1995-12-27 | 1997-07-10 | Genentech, Inc. | Ob protein derivatives having prolonged half-life |
| EP1835030A1 (en) * | 1996-12-20 | 2007-09-19 | Amgen, Inc. | OB fusion protein compositions and methods |
-
1998
- 1998-04-16 IL IL13238098A patent/IL132380A0/xx active IP Right Grant
- 1998-04-16 CN CNB988042258A patent/CN1202862C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-16 HU HU0002831A patent/HU226175B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1998-04-16 JP JP54433898A patent/JP4086908B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-16 WO PCT/US1998/007828 patent/WO1998046257A1/en active IP Right Grant
- 1998-04-16 AU AU71327/98A patent/AU7132798A/en not_active Abandoned
- 1998-04-16 DE DE69807679T patent/DE69807679T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-16 AT AT98918399T patent/ATE223229T1/de active
- 1998-04-16 EP EP98918399A patent/EP0977583B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-16 ES ES98918399T patent/ES2183351T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-16 CA CA002286098A patent/CA2286098C/en not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-05-09 HK HK00102759A patent/HK1023513A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IL132380A0 (en) | 2001-03-19 |
| HK1023513A1 (en) | 2000-09-15 |
| ES2183351T3 (es) | 2003-03-16 |
| JP4086908B2 (ja) | 2008-05-14 |
| EP0977583A1 (en) | 2000-02-09 |
| DE69807679D1 (de) | 2002-10-10 |
| ATE223229T1 (de) | 2002-09-15 |
| DE69807679T2 (de) | 2003-07-31 |
| EP0977583B1 (en) | 2002-09-04 |
| CA2286098A1 (en) | 1998-10-22 |
| WO1998046257A1 (en) | 1998-10-22 |
| AU7132798A (en) | 1998-11-11 |
| CN1202862C (zh) | 2005-05-25 |
| CN1274289A (zh) | 2000-11-22 |
| HUP0002831A2 (hu) | 2000-12-28 |
| HUP0002831A3 (en) | 2005-11-28 |
| JP2002512612A (ja) | 2002-04-23 |
| CA2286098C (en) | 2009-07-07 |
| WO1998046257A8 (en) | 2000-01-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU226175B1 (en) | Human ob protein suspension, process for producing thereof and use for production of pharmaceutical composition | |
| JP4824663B2 (ja) | 安定かつ活性なヒトＯＢタンパク質と抗体Ｆｃ鎖とのコンジュゲートを含む組成物および方法 | |
| TWI593422B (zh) | 新穎之長效升糖素共軛物及包含其用於肥胖預防與治療之醫藥組成物 | |
| DE69737266T2 (de) | Ob-fusionsprotein enthaltende zusammensetzungen und verfahren | |
| JP2020164534A (ja) | インスリン及びｇｌｐ−１／グルカゴン二重アゴニストを含む糖尿病治療用組成物 | |
| IL224966A (en) | Peptibody Dried Medical Compositions | |
| KR20170080522A (ko) | 글루카곤, glp-1 및 gip 수용체 모두에 활성을 갖는 삼중 활성체의 지속형 결합체 | |
| JP2005537232A (ja) | アミリンアゴニストペプチドの製剤 | |
| US7208577B2 (en) | Methods of increasing lean tissue mass using OB protein compositions | |
| CN105229025B (zh) | 位点特异性胰岛素缀合物 | |
| JP2008542364A (ja) | 副甲状腺ホルモン、緩衝液、および安定剤を含んでなる安定化された副甲状腺ホルモン組成物 | |
| HU224591B1 (hu) | Fokozott cinkmegkötő-képességgel rendelkező inzulinszármazékok, azokat tartalmazó komplexek és gyógyszerkészítmények, valamint elővegyületeik | |
| CN108210934A (zh) | 用于制备生理活性多肽复合物的方法 | |
| JP2001500893A (ja) | インスリンｃ―ペプチド | |
| WO2005082941A1 (en) | Bone sialoprotein collagen-binding peptides | |
| PL198190B1 (pl) | Analogi insuliny, sposób ich wytwarzania, prekursory analogów insuliny, sekwencje DNA kodujące te prekursory, wektory ekspresyjne, komórka gospodarza, środek farmaceutyczny, roztwór o aktywności insulinowej, zastosowanie analogów insuliny, kompleksy insuliny z cynkiem i ich zastosowanie | |
| AU2002300605B8 (en) | Compositions Comprising Conjugates of Stable, Active, Human OB Protein with Antibody FC Chain and Methods | |
| US20190388508A1 (en) | Progranulin and progranulin derivatives in treating impaired fracture healing | |
| EP4183794A1 (en) | Peptide, peptide salt, pharmaceutical composition and biological tissue calcification inhibitor | |
| MXPA99009384A (en) | Compositions comprising conjugates of stable, active, human ob protein with antibody fc chain and methods | |
| KR20200078414A (ko) | 인슐린 및 글루카곤을 포함하는 약학 조성물 | |
| WO2008151512A1 (en) | Site-specific pegylated linear salmon calcitonin derivatives | |
| JPH1017487A (ja) | 後発白内障予防薬 | |
| JPH11158200A (ja) | ヒト成長ホルモン・亜鉛複合体及びその用途 | |
| CN111936157A (zh) | 成纤维细胞生长因子类似物及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |