HU219268B - Transgenic organism resistante to fungi - Google Patents

Transgenic organism resistante to fungi Download PDF

Info

Publication number
HU219268B
HU219268B HU9302851A HU9302851A HU219268B HU 219268 B HU219268 B HU 219268B HU 9302851 A HU9302851 A HU 9302851A HU 9302851 A HU9302851 A HU 9302851A HU 219268 B HU219268 B HU 219268B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
protein
amino acid
plant
fungal
gly
Prior art date
Application number
HU9302851A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT68236A (en
HU9302851D0 (en
Inventor
Ilan Chet
Eckes Peter Dr
Birgit Goernhardt
Guido Jach
Logemann Juergen Dr
Mundy John Dr
Jeff Schell
Original Assignee
Max Planck Gesellschaft
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Max Planck Gesellschaft filed Critical Max Planck Gesellschaft
Publication of HU9302851D0 publication Critical patent/HU9302851D0/hu
Publication of HUT68236A publication Critical patent/HUT68236A/hu
Publication of HU219268B publication Critical patent/HU219268B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/37—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
    • C12N15/8282—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for fungal resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2442—Chitinase (3.2.1.14)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01014—Chitinase (3.2.1.14)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S47/00—Plant husbandry
    • Y10S47/01—Methods of plant-breeding and including chromosome multiplication

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Mushroom Cultivation (AREA)

Abstract

A találmány transzgenikus gombarezisztens növényre és annakelőállítására vonatkozik. A növény genomja legalább két különböző,gombagátló hatású proteint kódoló, növényekben aktív promoterekellenőrzése alatt álló génszekvenciát tartalmaz. A növényre jellemző,hogy a két DNS-szekvencia az alábbiakat kódolja: (a) legalább egyproteint az alábbi csoportból: egy ChiG-protein, amely az ID NO. 4szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza; egy GluG-protein,amely az ID NO. 5 szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza;egy PSI-protein, amely az ID. NO. 2 szerinti B-szekvenciáttartalmazza; és egy AFP-protein, amely az ID NO. 1 A’-szekvenciáttartalmazza, valamint (b) egy ChiS-proteint, amely az ID NO. 3szerinti szekvencia géntermékének aminosavszekvenciáját tartalmazza. ŕ

Description

A találmány transzgenikus gombarezisztens növényre és annak előállítására vonatkozik.
A technika állásából ismert, hogy ha patogének megtámadnak egy növényt, ez számos reakciót válthat ki. Például megváltozik a sejtfal szerkezete, mikroorganizmusok ellen hatékony fitoalexinvegyületek keletkeznek, úgynevezett PR-proteinek („Pathogenesis-related”), proteázinhibitorok és hidrolizáló hatású enzimek halmozódnak fel [Hahlbrock és Grisebach, Ann. Rév. Plánt. Physiol., 30, (1979), 105-130],
Számos patogén (gombák és rovarok) a sejtfalakban kitint tartalmaz. Néhány esetben bebizonyosodott, hogy patogéntámadás után a növények fokozottan termelnek kitinázenzimeket. A kitinázenzimek a hidrolizáló hatású enzimekhez tartoznak, a kitin lebontását katalizálják. Ki lehetett mutatni, hogy a kitinázt termelő növény patogénekkel szembeni ellenálló képessége megnövekedett.
Ismert továbbá árpanövényből származó olyan gén alkalmazása, amely egy, a gombák proteinszintézisét gátló inhibitort kódol. A megfelelő inhibitorgén beépítése után a transzgenikus növény jobban rezisztens gombákkal szemben.
Végül ismertté vált, hogy egy, Aspergillus giganteusból származó polipeptid fúngicid hatású, és védi a növényeket a gombák ellen.
Bojsen és munkatársai („Genetic transformation of Nicotiana benthamiana with chitinase and beta-l,3-glucanase genes írom Béta vulgáris”. Dev. Plánt. Pathol. 2, 449. oldal) leírták, hogy két, különböző enzimet - egy kinázt és egy glükanázt - kódoló génnel való transzformálásával a rezisztencia előnyösen növelhető.
A technika állásán túlmenően azonban igény állott fenn további transzgenikus, patogénrezisztens növények létrehozására. Ezen belül különösen olyan növények kívánatosak, amelyek az ismert patogén szervezetekkel szemben megnövelt rezisztenciájúak, vagy a lehetséges patogének nagyobb számával szemben bírnak rezisztenciával.
A feladatot úgy oldottuk meg, hogy a növényt két különböző génszekvenciával transzformáljuk, és ezeket a minél nagyobb rezisztencia szempontjának megfelelően választjuk ki.
A találmány azon a felismerésen alapul, hogy legalább két gondosan kiválasztott, különböző, a patogén hatásokat gátló gén, ha beépül egy növény genomjába, e növénynek a patogén behatásokkal szembeni rezisztenciáját oly mértékben növeli, hogy ez messze meghaladja a gének külön-külön hatásának összegét.
A fentiek alapján tehát a találmány tárgya transzgenikus gombarezisztens növény, amelynek genomja legalább két különböző, gombagátló hatású proteint kódoló, növényekben aktív promoterek ellenőrzése alatt álló génszekvenciát tartalmaz, és amelyre jellemző, hogy a két DNS-szekvencia az alábbiakat kódolja:
(a) legalább egy proteint az alábbi csoportból: egy ChiG-protein, amely az ID NO. 4 szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza; egy GluG-protein, amely az ID NO. 5 szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza; egy PSI-protein, amely az ID.
NO. 2 szerinti B-szekvenciát tartalmazza; és egy AFPprotein, amely az ID NO. 1 A’-szekvenciát tartalmazza, valamint (b) egy ChiS-proteint, amely az ID NO. 3 szerinti szekvencia géntermékének aminosavszekvenciáját tartalmazza, vagy pedig (a) legalább egy proteint az alábbi csoportból: egy ChiG-protein, amely az ID NO. 4 szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza; egy GluG-protein, amely az ID NO. 5 szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza; egy PSI-protein, amely az ID NO. 2 B-szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza; és egy ChiS-protein, amely az ID NO. 3 szekvencia szerinti géntermék aminosavszekvenciáját tartalmazza; és (b) egy AFP-proteint, amely az ID. NO. 1 A’-szekvenciának megfelelő aminosavszekvenciát tartalmazza.
A gének olyan génterméket kódolhatnak, amely a gombák életerejét csökkenti. A gének származhatnak gombából, baktériumból, állatból vagy növényből vagy vírusból. Előnyös, ha a géntermék a gombákkal szembeni rezisztenciát növeli. A géntermékek: kitináz (ChiS, ChiG), glükanáz (GluG), proteinszintézis-inhibitorok (PSI) és gomba ellen hatékony protein (AFP; antifungal protein).
A transzgenikus, patogénrezisztens növény előnyösen lehet dohány-, burgonya-, eper-, kukorica-, repcevagy paradicsomnövény.
A találmány megvalósításában DNS-átvivő vektorokat használunk, amelyeket majd jelen leírásban részletesen leírunk.
A találmány tárgyához eljárás is tartozik az itt leírt gombarezisztens növények létrehozására. Az eljárásra jellemző, hogy egy növény genomjába legalább egy,, gombagátló hatású proteint kódoló gént transzferálunk, és a kapott gombarezisztens növényt (a) egy, adott esetben transzgenikus, legalább egy másik, más gombagátló hatású proteint kódoló gént tartalmazó növénnyel keresztezzük, majd szelektálást végzünk, vagy (b) legalább egy másik, más gombagátló hatású proteint kódoló génnel transzformáljuk.
Az eljárás során DNS-átvivő vektorokat alkalmazunk, amelyek a patogén hatásokat gátló génnek megfelelő DNS-szekvenciát tartalmaznak beépítve.
A rezisztencianövelő hatás különösen erősen jelentkezik az olyan transzgenikus, patogénrezisztens növény esetében, amelyet az A-E jelű szekvenciájú proteint kódoló génnel transzformáltunk vagy transzferáltunk.
ChiS:
Serratia marcescens talajbaktériumból 1,8 kb méretű DNS-fragmenst izoláltunk; ez a fragmens egy kitinázenzimet (ChiS-nek nevezzük) kódol. Tisztított ChiS-proteinnel in vitro vizsgálatok azt mutatták, hogy már kis koncentrációban a gombák növekedését hatékonyan gátolja. Ennek oka, hogy a ChiS-protein kitinázaktivitással rendelkezik, amellyel a gomba hifáinak csúcsait tönkreteheti, így a gomba nem tud tovább nőni.
HU 219 268 Β
PSI:
A PSI-gén árpából származik, és olyan proteint kódol, amely a gombák proteinszintézisét gátolja. In vitro tesztek azt mutatták, hogy a PSI-protein már kis koncentrációban számos gombát, például Rhizoctonia solani növekedését gátolja.
AFP:
Aspergillus giganteus fermentációs levéből olyan polipeptid izolálható, majd szekvenciálható, amely gombaölő hatású. Ez a polipeptid gomba elleni szerként, például permetezőszerként, továbbá műszaki termékek, élelmiszer- és takarmányanyagok tartósítására alkalmazható. A polipeptid egyéb peszticidekkel, műtrágyával vagy növekedésszabályozó anyagokkal kombinálható. A gomba elleni hatást egyebek között különböző Aspergillus-, Fusarium-, Phytophthora- és Trichophyton-fajták esetén figyeltük meg.
ChiG és GluG:
Bizonyos árpafajtákból két gén izolálható, mely gén kitináz- (ChiG), illetve glükanáz- (GluG) enzimet kódol. Tisztított ChiG- vagy GluG-protein in vitro számos, növényre patogén gomba - egyebek között Rhizoctonia solani - növekedését gátolja (R. Leah és munkatársai, Journal of Biological Chemistry, Vol. 266, 3. szám 1991,1564-1573. oldal).
A jelen találmány azon a meglepő felismerésen alapul, hogy ha PSI, APF, ChiS, ChiG és GluG közül legalább kettőt úgy kombinálunk, hogy ki is fejeződjék, a transzgénikus növény szerzett rezisztenciájában szinergista hatás tapasztalható, azaz a kombinációban kifejtett hatás erősebb, mint a két részhatás összege. Ez a Rhizoctonia solani, Sclerotinia és Botrytis elleni rezisztenciában mutatkozik meg.
Az alábbi találmány szerinti (DNS és/vagy polipeptid) kettős kombinációk:
ChiS, GluG; ChiS, PSI; ChiS, ChiG; ChiS, APF; GluG, PSI; GluG, ChiG; GluG, AFP; PSI, ChiG; PSI, AFP;
hármas kombinációk:
ChiS, GluG, PSI; ChiS, GluG, ChiG; ChiS, GluG, AFP; GluG, PSI, ChiG; GluG, PSI, AFP; PSI, ChiG, AFP; ChiG, AFP, GluG;
négyes kombinációk:
ChiS, GluG, PSI, AFP; ChiS, GluG, PSI, ChiG; ötös kombináció:
ChiS, GluG, PSI, AFP, ChiG.
A találmány értelmében a patogéngátló proteineket előnyösen ChiS, PSI, AFP, ChiG és GluG kombináltan alkalmazzuk a patogénbehatások ellen. A kombinált alkalmazáson itt azt is értjük, hogy a növény legalább egy patogéngátló anyagot maga kifejezi és legalább egy további patogéngátló anyagot kívülről viszünk be a növénybe.
A találmány tárgyához az olyan patogénrezisztens növény is tartozik, amelynek genomja az A-E jelű szekvenciák közül legalább kettőt tartalmaz növényekben aktív promoter ellenőrzése alatt.
A találmány tárgyához olyan növények is tartoznak, amelyek a fent említett rekombináns DNS-molekulával transzformáltak. A transzgénikus, patogénrezisztens növények létrehozása során közbenső gazdaszervezetként előnyösen baktériumtörzset, különösen előnyösen úgynevezett agrobaktériumokat alkalmazunk.
A találmány tárgyát továbbá az új eljárással előállított transzgénikus patogénrezisztens növények, előnyösen dohány-, burgonya-, kukorica-, zöldborsó-, repceés paradicsomnövények képezik.
A találmány szerinti DNS-szekvenciákat általában promoterrel együtt transzferáljuk. A növényi leírószerkezet felismeri a promoterszekvenciát, így sor kerül a vele összekötött gén lényegi kifejezésére. A promoter lehet azonban patogén hatással és/vagy sérüléssel (WUN1) és/vagy szövetfajlagosan és/vagy fejlődésfajlagosan indukálható is.
A találmány megvalósításához szükséges géntechnológiai műveletek, például a gén kifejezése növényekben általánosan ismertek, például Maniatis és munkatársai „Molecular cloning: A laboratory manual” című könyvéből (Cold Spring Harbour 1982).
A találmányt az alábbi példákkal közelebbről ismertetjük.
A molekulabiológiai műveleteket - ha mást nem adunk meg forrásul -Maniatis fent említett könyve szerint végeztük.
Az A-E jelű aminosavszekvenciákat kódoló DNS-t először ismert módon klónoztuk, majd konjugálással [van Haute és munkatársai, EMBO J., 2, 411-418 (1983)] az A. tumefaciens LBA 4404 (A. Hoekema és munkatársai, Natúré 303, 179180) agrobaktériumba vittük át.
Azt, hogy az agrobaktériumba történt DNS-bevitel eredményes volt-e, úgy ellenőriztük, hogy az agrobaktérium DNS-t Ebért és munkatársai módszerével [Proc. Natl. Acad. Sci. Amerikai Egyesült Államok 84, 5745-5749 (1987)] elkülönítettük, restrikciós enzimmel vágtuk, Hybond-N-membránra (Amersham) vittük és radioaktív jelölésű szondával hibridizáltuk: a DNS beépült az agrobaktériumba.
A transzformált agrobaktériummal dohány-, repce-, eper-, paradicsom- és burgonyanövényeket transzformáltunk.
A fertőzéshez szükséges LBH 4404 számú agrobaktériumokat szelektív antibiotikumos közegben tenyésztettük [P. Zambrisky és munkatársai, EMBO J., 1,147-152 (1983)], lecentrifugáljuk és antibiotikummentes YEB-közegben mossuk (YEB=0,5% húskivonat, 0,2% élesztőkivonat, 0,5% pepton, 0,5% szacharóz, 2 mmol MgSO4). Ismételt centrifugálás és magnézium-szulfátoldatban történő szuszpendálás után a baktériumok felhasználhatók voltak fertőzésre.
A fertőzésre az úgynevezett levélszeletmódszert alkalmaztuk.
Steril levelekből mintegy 1 cm méretű levéldarabkákat vágtunk, ezeket a leírt agrobaktériumos szuszpenzióba mártottuk, majd 3MS-közegre helyeztük [T. Murashige és F. Skoot szerinti közeg, Physiol. Plánt., 15, 473-497 (1962); 3MS=3% szacharóz], A levéldarabkákat 25-27 °C-on, 16 órás napi világítás mellett 2 napig inkubáltuk, utána MSC16-közegre vittük át [T. Murashige, mint fent; MSC16=MS+0,5 pg/ml BAP+0,1 pg/ NÁA+100 pg/ml kanamicin-szulfát+500 pg/ml kla3
HU 219 268 Β forán. A 4-6 hét elteltével megjelenő hajtásokat levágtuk és MSC15-közegre telepítettük (T. Murashige, mint fent; MSC15=MS+2% szacharóz, 500 pg/ml klaforán+100 pg/ml kanamicin-szulfát). A gyökérképző hajtásokat tovább figyeltük.
Protoplasztok útján végzett közvetlen géntranszfer módszerével főleg egyszikű növényeket (például kukorica), de kétszikű növényeket is transzformáltunk. A protoplasztokat utána teljes növénnyé regeneráltuk (példa: J. Potrykus, Biotechnology 8,1990, 535. oldal).
A kapott transzgenikus növényeket kísérleti célból a Rhizoctonia solani gombával megfertőztük oly módon, hogy a gombatenyészetet alaposan szabvány földdel összekevertük, a földdel tálcát töltöttünk, és a vizsgálni kívánt növényeket beleültettük.
Kiértékeléskor minden növény 0, 1, 2 vagy 3 bonitálási értéket kapott, az értékek összegéből minden növény vonal indexe adódott. A bonitálási értékek jelentése az alábbi volt:
= nincs tünet (egészséges) = kissé csökkent méret (a nem fertőzött kontrolihoz viszonyítva); látható fertőzés nincs vagy alig, = erősen csökkent méret, súlyos, látható fertőzés = elpusztult.
A kiértékelés az ültetés után 14 nappal történt.
1. példa
Kombinált proteinek gátló hatása gombákra
Annak kimutatására, hogy a találmány szerinti proteinek kombináltan szinergista hatást fejtenek ki, a gombák növekedését in vitro vizsgáltuk.
Mikrotiterlemez lyukaiba Rhizoctonia solani micélium definiált mennyiségét és 100 pl burgonyadextrózoldatot tettünk, és a lemezeket 25 °C-on inkubáltuk. A gomba növekedése és a 405 nanométernél mért optikai sűrűség között lineáris korreláció áll fenn, és amennyiben az optikai sűrűség lassabban növekszik, valami gátolja a gomba növekedését.
R. solani süllyesztett tenyészetéből 2-3 micéliumlabdácskát kivettünk, Eppendorf-edényben 100 pl KGB-közeget adtunk hozzá és üvegmozsárral óvatosan homogenizáltuk. A szuszpenziót 10 ml KGB-közeggel feltöltöttük és 100 pm-es szitán keresztül szűrtük. A kapott, micéliumtöredékeket tartalmazó szuszpenzió 405 nm-nél mért optikai sűrűségét közeg adagolásával 0,06 és 0,07 közötti értékre állítottuk. Mikrotiterlemezen 100-100 pl-hez a vizsgálni kívánt proteineket adtuk. Minden kísérlet 7 ismétlésben készült. A kontrolihoz protein helyett megfelelő mennyiségű puffért adtunk. A lemezeket 25 °C-on sötétben 48 órán át inkubáltuk, az optikai sűrűséget szabályos időközönként mértük.
Azt, hogy a gomba növekedésének gátlásában két protein additív, szinergista vagy antagonista módon hat, a mért adatokból az általánosan alkalmazott Colby-képlettel számíthatjuk ki [S. R. Colby in Wheeds, 15 (1967), 20-22],
Ennek során először az additív hatás esetén várható E növekedésgátlást (várható hatásfok) számítjuk ki a következő képlettel:
E=W1+W2-(W1 xW2)/100 ahol W1 és W2 az egyes proteinek hatásfoka, azaz a növekedő görbe százalékos eltérése protein jelenlétében, a kezeletlen kontrolihoz viszonyítva. Egy-egy protein hatásfoka (a növekedési görbe adott időpontján) az alábbi:
W1 =(OD/K/-OD/P/>/(OD/K/) x 100)%
Itt OD(K) a kezeletlen kontroll optikai sűrűsége és OD(P) a proteinnel kezelt tenyészet optikai sűrűsége.
Két protein kombinált alkalmazása esetén tehát két eset lehetséges: a kísérletileg mért G hatásfok lehet azonos az E várt hatásfokkal, akkor a hatás additív; amenynyiben G nagyobb E-nél, a hatás szinergista.
A fenti vizsgálati modellt alapul véve meglepő módon a példában alkalmazott ChiS, PSI, AFP, ChiG és GluG proteinek számos gomba növekedését szinergista módon gátolják. Ez a hatás két protein kombinálásával, de több protein egyidejű alkalmazásával is elérhető.
Például ChiS- és PSI-protein, illetve AFP- és PSIprotein kombinációját a Rhizoctonia solani gomba ellen alkalmazva az alábbi értékeket mértük (két különböző ChiS- és AFP-koncentráció, de azonos gombakoncentráció mellett)
ChiS+PSI:
várt értékek: El =29,9% és E2=44,5% mért értékek: Gl=60,4%ésG2=64,l%
A ChiS- és a PSI-protein tehát R. solani növekedésének gátlásában szinergista módon erősítik egymás hatását.
Az 1. ábrán a proteinek kombinálásával, illetve külön-külön történő alkalmazásával kapott eredményeket mutatjuk be. A ChiS-koncentráció különböző volt (0,5 pg/ml, illetve 0,05 pg/ml), míg a PSI-protein koncentrációja azonos maradt (1,0 pg/ml)
AFP+PSI:
várt értékek: El =39,9% és E2=41,9% mért értékek: Gl=57,7%ésG2=65,4%
Tehát az AFP- és PSI-protein kombinációja szintén szinergista hatású a R. solani gomba növekedésgátlásában. A 2. ábra a különböző AFP-koncentráció (0,4 pg, illetve 0,04 pg/ml) és azonos PSI-proteinkoncentráció (1,0 pg/ml) alkalmazásával kapott eredményeket mutatja.
2. példa
Transzgenikus növények
A szinergista módon együtt ható DNS-szekvenciákat tartalmazó találmány szerinti növények létrehozása során először olyan növényt hozunk létre, amely a szinergista gének közül legalább egyet tartalmaz.
ChiS protein transzgenikus növényben
Első lépésként ChiS-gént növényi szabályozószekvenciával fozionáltatunk.
1,8 kb méretű ChiS-gént szintetikus oligonukleotidek alkalmazásával a Sanger-féle didezoximódszerrel [Sanger és munkatársai, Proc Natl. Acad. Sci. Amerikai Egyesült Államok, 74 (1977), 5463-5467] szekvenálunk.
A karfíol-mozaikvírusból (CamV) származó 35Spromotert [Töpfer és munkatársai - Nucl. Acid. Rés., 15 (1987), 5890 - szerint 400 bp] transzkripciós mód4
HU 219 268 Β szer segítségével a ChiS-génnel fúzionáltatjuk. A ChiSgéntől 3’-irányban a CamV 35S-génjének körülbelül 0,2 kb méretű terminátorszekvenciáját alkalmazzuk, amelyről közismert, hogy kétszikűekben működik. A 35S-ChiS génkimérát pLS034 jelű vektorba klónozzuk, az Agrobaktérium tumefaciens transzformáló rendszerével dohány- és burgonyanövényekbe juttatjuk és kanamicinnel szemben rezisztens növényeket regenerálunk. A kapott növényekben mind a ChiS-gén, mind a megfelelő mRNS és a géntermék kimutatható.
PSl-protein transzgenikus növényekben
Érett árpamagvakból (Hordeum vulgare L. cv. Piggy) PolyA+-RNS-t izolálunk és cDNS-génbankban, λ-gt-ll-fágokban tároljuk. Az eljárás részletei lásd R. Lea, Plánt Bioi. 12 (1989), 673-682. Monofajlagos PSI-antitestek segítségével cDNS-klónokat azonosítunk.
Ezt követően a PSI-pozitív λ-gt-ll-fágokat izoláljuk, továbbklónozzuk és a fent megadott didezoximódszerrel (Sanger és munkatársai) szekvenáljuk. Az E. coliban klónozott DNS-t ezt követően a fentiekben leírt módon, konjugálással az A. tumefaciens LBA4404 agrobaktériumba átvisszük. A megfelelő transzgenikus dohány-, burgonya-, repce-, eper- és paradicsomnövényekben mind a transzferált gént, mind az mRNS-t és a génterméket ki lehetett mutatni.
AFP-protein transzgenikus növényekben
Vektorban történő klónozás céljából a gomba ellen hatásos peptid cDNS-szekvenciáját olyan végekkel látjuk el, amelyek BamHI- és Sáli-vágóhelyekbe ligálhatók. Klónozó vektorként pDH51 [Pietrzak és munkatársai, Nucl. Acids Rés. 14 (1986), 5857] kerül alkalmazásra. A pDH51 jelű vektort BamHI és Sáli restrikciós enzimekkel a promoter és a terminátor között nyitjuk. Ez a vektor: pUC18-származék, amely a karfiol-mozaikvírusból származó 35S transzkriptumnak a promoter- és terminátorszekvenciáját tartalmazza. Ezeket a szekvenciákat a növényi transzkripciós rendszer felismeri, ami a velük összekötött gén erős kifejezéséhez vezet.
A gomba ellen hatásos peptid DNS-ét a BamHI- és a Sáli-vágóhely közé a vektorba klónozzuk.
Végül az átírási egységet - promoter, gén és terminátor együttesét -EcoRI restrikciós enzimmel kivágjuk a vektorból és növényekbe történő transzformálásra alkalmas vektorban klónozzuk. Alkalmas vektorok például az alábbiak és származékaik:
pOCA18 [Olszewski és munkatársai, Nucl. Acids Rés., 16(1988), 10765];
pPCV310 [Koncz és Shell, MGG 204 (1986), 383]; pBinl9 (Bevan és munkatársai Nucl. Acids Rés.
12(1984), 8711. Miután az átírási egységet a vektor EcoRI-vágóhelyébe klónoztuk, a kapott szerkezetet az MP90RK agrobaktériumtörzsbe (Koncz és Shell, lásd fent) vagy IHA101 törzsbe [Hood és munkatársai, J. Bacteriol. 168(1986), 1291] konjugáljuk.
Transzgenikus dohány-, burgonya-, eper-, repceés dohánynövényeket a fentiekben leírtak szerint transzformálunk. A transzformált hajtásokat - a szintén átvitt kanamicinrezisztencia alapján - kanamicinantibiotikummal szelektáljuk. DNS-elemzéssel (Southern Blotting), RNS-elemzéssel (Northern Blotting) és fajlagos antitestekkel végzett proteinelemzéssel ellenőriztük és bebizonyítottuk, hogy a transzformált haszonnövényekben a gomba ellen hatásos protein kifejeződik.
ChiG és GluG transzgenikus növényekben
A fentiekben leírtakhoz analóg módon ChiG- és GluG-transzgenikus növényeket állítunk elő, amelyek Southern-, Northern- és Westem-pozitívek.
ChiS, PSI, AFP, ChiG, GluG transzgenikus egyszikű növényekben
A fenti géneket közvetlen géntranszfer útján integráltuk egyszikű növények, például kukorica genomjába. A kapott transzgenikus növények Southern-, Northern- és Westem-pozitívek.
Gombarezisztenciát biztosító különböző gének kombinálása transzgenikus növényekben
A fentiek szerint kapott dohány-, kukorica-, repce-, eper-, burgonya- és paradicsomnövényeket kereszteztük egymással, és a mindkét szülő rezisztenciagénjét örökölt növényeket szelektáltuk. Kombináltan transzgenikus növényeket úgy is előállíthatunk, hogy az először egy génnel transzformált növényeket egy vagy több további génnel transzformáljuk. Végül olyan vektorral is transzformáltunk növényeket, amely különböző rezisztenciagéneket tartalmazott. A kapott növényanyaggal rezisztenciateszteket végeztünk. Meglepő módon mindegyik esetben nemcsak additív, hanem szinergista hatás volt tapasztalható.
így például a ChiS- és PSI-enzimet kifejező dohánynövény Rhizoctonia elleni rezisztenciája lényegesen erősebb, mint a vagy ChiS-t, vagy PSI-t kifejező növényeké, de erősebb az additív ellenálló képességnél is. PSI-t és AFP-t kombináltan kifejező dohánynövények Rhizoctonia solani ellen szinergista gátló aktivitást mutatnak. A két vagy több különböző gének (ChiS, RIP, AFP, ChiG és GluG) kombinációi a különböző transzgenikus növényeket számos gomba ellen szinergista módon ellenállóvá teszik.
Míg a vad típusú növények 20 magonccal végzett tesztkiértékelése 38 és 46 közötti pontszámot adott, a találmány szerinti transzgenikus dohány Rhizoctonia solani jelenlétében ugyanolyan jól nő, mint a Rhizoctonia-mentes talajban nevelt kontroll (pontszám 10-12). A-, illetve A'-szekvencialeírás (AFP)
Szekvenciaazonosító szám: Seq. ID. NO. 1 (A)
A szekvencia fajtája: teljes nukleotidszekvencia a megfelelő proteinnel, amely nyitott olvasókereten át kódolva hatásos protein (A’)
A szekvencia hosszúsága: 51 aminosav (A’)
Topológia: lineáris
Molekula fajtája: aminosav
Eredeti eredet: Aspergillus giganteus fermentációs leve
Név: AFP (anti fungus peptid)
Ismérvek (A):
gomba elleni ágens, főleg Rhizoctonia solani, valamint különböző Aspergillus, Fusarium, és Trichophyton fajok ellen
HU 219 268 Β
SEQ ID KfO: 1
Alá Thr Tyr Asn Gly Lys Cys Tyr Lys Lys Asp Asn. Ile Cys Lys Tyr
1 5 10 15
Lys Alá Gin Ser Gly Lys Thr Alá Ile Cys Lys Cys Tyr Val Lys Lys
20 25 30
Cys Pro Arg Asp Gly Alá Lys Cys Glu Phe Asp Ser Tyr Lys Gly Lys
35 40 45
Cys Tyr Cys - 50
B-, illetve B ’-szekvencialeirás
Szekvenciaazonosító szám: 2 (A)
A szekvencia fajtája: nukleotid megfelelő proteinnel A szekvencia hosszúsága: 1078 bázispár (B’=nem teljes PSI-cDNS-klón Szálforma: egyszálú Topológia: lineáris Molekula fajtája: komplementer DNS Eredeti eredet: árpamag (Hordeum vulgare L. cv.
Piggy), kísérleti anyag eredete: λ-gt-ll-fágokban létesített cDNS-génbank
Név: PSI (protein szintézis inhibitor)
Ismérvek:
bázispámyi hosszú, 5’-nemfordító régió, 843 bázispár nyitott olvasókerete (a stopkodont csillaggal * jelöltük)
193 bázispámyi hosszú, 3’-nemfordító vég, a poliadenilezés lehetséges jeleit aláhúztuk.
Tulajdonságok: gomba ellen, főleg Trichoderma reesii, Fusarium sporotrichoides és Rhizoctonia solani spórái ellen hatásos
SEQ ID NO:2
CTTAATAGCA CATCTTGTCC GTCTTAGCTT TGCATTACAT CC ATG GCG GCA AAG 54
Met Alá Alá Lys
-1 1
ATG GCG AAG AAC GTG GAC AAG CCG CTC TTC ACC GCG ACG TTC AAC GTC 102
Met Alá Lys Asn Val Asp Lys 10 Pro Leu Phe Thr Alá IS Thr Phe Asn Val
5
CAG GCC AGC TCC GCC GAC TAC GCC ACC TTC ATC GCC GGC ATC CGC AAC ISO
Gin Alá Ser Ser Alá Asp Tyr Alá Thr Phe Ile Alá Gly Ile Arg Asn
20 25 30 35
AAG CTC CGC AAC CCG GCG CAC TTC TCC CAC AAC CGC CCC GTG CTG CCG 198
Lys Leu Arg Asn Pro Alá His Phe Ser His Asn Arg Pro Val Leu Pro
40 45 50
CCG GTC GAG CCC AAC GTC CCG CCG AGC AGG TGG TTC CAC GTC GTG CTC 246
Pro Val Glu Pro Asn Val Pro Pro Ser Arg Trp Phe His Val Val Leu
55 60 65
AAG GCC TCG CCG ACC AGC GCC GGG CTC ACG CTG GCC ATT CGG GCG GAC 294
Lys Alá Ser Pro Thr Ser Alá Gly Leu Thr Leu Alá Ile Arg Alá ASp
70 75 80
AAC ATC TAC CTG GAG GGC TTC AAG AGC AGC GAC GGC ACC TGG TGG GAG 342
Asn He Tyr Leu Glu Gly Phe Lys Ser Ser λβρ Gly Thr Trp Trp Glu
85 90 95
CTC ACC CCG GGC CTC ATC CCC GGC GCC ACC TAC GTC GGG TTC GGC GGC 390
Leu Thr Pro Gly Leu Ile Pro Gly Alá Thr Tyr Val Gly Phe Gly Gly
100 105 110 US
ACC TAC CGC GAC CTC CTC GGC GAC ACC GAC AAG CTG ACC AAC GTC GCT 438
Thr Tyr Arg Asp Leu Leu Gly Asp Thr Asp Lys Leu Thr Asn val Alá
120 125 130
HU 219 268 Β
CTC GGC CGG CAG CAG CTG GCG GAC GCG GTG ACC GCC CTC CAC GGG CGC 436
Leu Gly Arg Gin Gin Leu Alá Asp Alá Val Thr Alá Leu His Gly Arg
135 140 14S
ACC Thr· AAG GCC GAC AAG CCG TCC GGC CCG AAG CAG CAG CAG GCG AGG GAG 534
Lys Alá 150 Asp Lys Pro Ser Gly 155 Pro Lys Gin Gin Gin 160 Alá Arg Glu
GCG GTG ACG ACG CTG CTC CTC ATG GTG AAC GAG GCC ACG CGG TTC CAG 582
Alá Val Thr Thr Leu Leu Leu Met val Asn Glu Alá Thr Arg Phe Gin
165 170 175
ACG GTG TCT GGG TTC GTG GCC GGG TTG CTG CAC CCC AAG GCG GTG GAG 630
Thr Val Ser Gly Phe Val Alá Gly Leu Leu His Pro Lys Alá Val Glu
180 185 190 195
AAG AAG AGC GGG AAG ATC GGC AAT GAG ATG AAG GCC CAG GTG AAC GGG 678
Lys Lys Ser Gly Lys Ile Gly Asn Glu Met Lys Alá Gin Val Asn Gly
200 205 210
TGG CAG GAC CTG TCC GCG GCG CTG CTG AAG ACG GAC GTG AAG CCT CCG 726
Trp Gin Asp Leu Ser Alá Alá Leu Leu Lys Thr Asp Val Lys Pro Pro
215 220 225
CCG GGA AAG TCG CCA GCG AAG TTC GCG CCG ATC GAG AAG ATG GGC GTG 774
Pro Gly Lys Ser Pro Alá Lys Phe Alá Pro Ile Glu Lys Met Gly val
230 235 240
AGG ACG GCT GTA CAG GCC GCC AAC ACG CTG GGG ATC CTG CTG TTC GTG 822
Arg Thr Alá Val Gin Alá Alá Asn Thr Leu Gly Ile Leu Leu Phe val
245 250 255
GAG GTG CCG GGT GGG TTG ACG GTG GCC AAG GCG CTG GAG CTG TTC CAT 870
Glu Val Pro Gly Gly Leu Thr Val Alá Lys Alá Leu Glu Leu Phe. His
260 265 270 275
GCG AGT GGT GGG AAA TAGGTAGTTT TCCAGGTATA CCTGCATGGG TAGTGTAAAA 925
Alá Ser Gly Gly Lys
280
GTCGAATAAA CATGTCACAG AGTGACGGAC TGATATAAAT AAATAAATAA ACGTGTCACA 985
GAGTTACATA TAAACAAATA AATAAATAAT TAAAAATGTC CAGTTTA 1032
C-szekvencialeírás (ChiS) A kísérleti anyag eredete: pLChiS jelű plazmid az
Szekvenciaazonosító szám: SEQ. ID. NO. 3 E. coli. A 5187 számú törzsből
A szekvencia fajtája: nukleotid Eredeti eredet: kosmid Serratia Marcescensből
Szálforma: egyszálú (az aktivált szál: kétszálú) Név: ChiS-protein (kitináz)
Topológia: lineáris 50 Tulajdonságok: exo-kitináz
A molekula fajtája: cDNS
SEQ ID NO: 3
CAGGGCGTTG TCAATAATGA CAACACCCTG GCTGAAGAGT GTGGTGCAAT ACTGATAAAT 60
ATTTATCTTT CCTTAATAGA AAATTCACTA TCCTTATTTG TCATGTTTTC TTTTATTTAT 120
ATGAAAATAA ATTCACGCTT GCTGAATAAA ACCCAGTTGA TAGCGCTCTT GTTTTTGCGC 180
CTTTTTTATT TATAGTACTG AATGTACGCG GTGGGAATGA TTATTTCGCC ACGTGGAAAG 240
HU 219 268 Β
acgctgttgt TATTTATTGA TTTTAACCTT CGCGGATTAT TGCGGAATTT TTTCGCTTCG 300
GCAATGCATC GCGACGATTA actcttttat GTTTATCCTC TCGGAATAAA GGAATCAGTT 360
ATGCGCAAAT TTAATAAACC GCTGTTGGCG CTGTTGATCG GCAGCACGCT GTGTTCCGCG 420
GCGCAGGCCG CCGCGCCGGG CAAGCCGACC ATCGCCTGGG GCAACACCAA GTTCGCCATC 480
GTTGAAGTTG ACCAGGCGGC TACCGCTTAT aataatttgg TGAAGGTAAA AAATGCCGCC 540
GKTGTTTCCG TCTCCTGGAA TTTATGGAAT GGCGACACCG GCACGACGGC AAAAGTTTTA 600
TTAAATGGCA AAGAGGCGTG GAGTGGTCCT TCAACCGGAT CTTCCGGTAC GGCGAATTTT 660
AAAGTGAATA AAGGCGGCCG TTATCAAATG CAGGTGGCAC TGTGCAATGC CGACGGCTGC 720
ACCGCCAGTG ACGCCACCGA aattctggta GCCGACACCG ACGGCAGCCA TTTGGCGCCG 780
TTGAAAGAGC CGCTGCTGGA AAAGAATAAA CCGTATAAAC AGAACTCCGG CAAAGTGGTC 840
GGTTCTTATT TCGTCGAGTG GGGCGTTTAC GGGCGCAATT TCACCGTCGA CAAGATCCCG 900
GCGCAAAACC TGACCCACCT GCTGTACGGC TTTATCCCGA TCTGCGGCGG CAATGGCATC 960
AACGACAGCC TGAAAGAGAT TGAAGGCAGC TTCCAGGCGT TGCAGCGCTC CTGCCAGGGC 1020
CGCGAGGACT TCAAAGTCTC GATCCACGAT CCGTTCGCCC CGCTGCAAAA AGCGCAGAAG 1080
GGCGTGACCG CCTGGGATGA CCCCTACAAG GGCAACTTCG GCCAGCTGAT GGCGCTGAAG 1140
CAGGCGCATC CTGACCTGAA AATCCTGCCG TCGATCGGCG GCTGGACGCT GTCCGACCCG 1200
TTCTTCTTCA TGGGCGACAA GGTGAAGCGC gatcgcttcg TCGGTTCGGT GAAAGAGTTC 1260
CTGCAGACCT GGAAGTTCTT CGACGGCGTG GATATCGACT GGGAGTTCCC GGGCGGCAAA 1320
GGCGCCAACC CTAACCTGGG CAGCCCGCAA GACGGGGAAA CCTATGTGCT GCTGATGAAG 1380
GAGCTGCGGG CGATGCTGGA TCAGCTGTCG GTGGAAACCG GCCGCAAGTA TGAGCTGACC 1440
TCCGCCATCA GCGCCGGTAA GGACAAGATC GACAAGGTGG CTTACAACGT TGCGCAGAAC 1500
TCGATGGATC ACATCTTCCT GATGAGCTAC GACTTCTATG gcgccttcga TCTGAAGAAC 1560
CTGGGGCATC AGACCGCGCT GAATGCGCCG GCCTGGAAAC CGGACACCGC CTACACCACG 1620
GTGAACGGCG TCAATGCGCT GCTGGCGCAG GGCGTCAAGC CGGGCAAAAT CGTCGTCGGC 1680
ACCGCCATGT ATGGCCGCGG CTGGACCGGG GTGAACGGCT ACCAGAACAA TATTCCGTTC 1740
ACCGGCACCG CCACCGGGCC GGTTAAAGGC ACCTGGGAGA ACGGTATCGT GGACTACCGC 1800
CAAATCGCCG GCCAGTTCAT GAGCGGCGAG TGGCAGTATA CCTACGACGC CACGGCGGAA 1860
GCGCCTTACG TGTTCAAACC TTCCACCGGC GATCTGATCA CCTTCGACGA TGCCCGCTCG 1920
GTGCAGGCTA AAGGCAAGTA CGTGTTGGAT aagcagctgg GCGGCCTGTT CTCCTGGGAG 1980
ATCGACGCGG ATAACGGCGA TATTCTCAAC AGCATGAACG CCAGCCTGGG CAACAGCGCC 2040
GGCGTTCAAT AATCGGTTGC AGTGGTTGCC GGGGGATATC CTTTCGCCCC CGGCTTTTTC 2100
GCCGACGAAA gtttttttac GCCGCACAGA TTGTGGCTCT GCCCCGAGCA AAACGCGCTC 2160
ATCGGACTCA CCCTTTTGGG TAATCCTTCA , GCATTTCCTC CTGTCTTTAA , CGGCGATCAC 2220
HU 219 268 Β
AAAAATAACC GTTCAGATAT TCATCATTCA GCAACAAAGT TTTGGCGTTT TTTAACGGAG 2280
TTAAAAACCA GTAAGTTTGT GAGGGTCAGA CCAATGCGCT AAAAATGGG 2329
D-szekvencialeirás (ChiG) 5
Szekvenciaazonosító szám: SEQ. ID. NO. 4
A szekvencia fajtája: nukleotid A szekvencia hossza: 1013 nukleotid A molekula fajtája: cDNS
Eredeti eredete: árpamagvak (Hordeum vulgare L.) 10 Név: ChiG (G-kitináz)
Ismérvek:
bp-nyi hosszú, 5’-nem fordító kezdeti régió,
798 bp-nyi nyitott olvasókeret, 152 bp-nyi 3’-nem fordított vég, a leolvasást megállító kodonokat csillaggal * jelöltük, a valószínű jelzőpeptid-szekvenciák aláhúzva, 26 kD-os kitináz-preprotein levezetett, 266 aminosavból álló szekvenciáját a nukleotidszekvencia alatt tüntettük fel. Az aláhúzott, AT-ban gazdag szekvencia a 905. hely közelében valószínűleg poliadenilezési jel.
Tulajdonságok: gombák, főleg Trichoderma reesii, Fusarium sporotrichoides és Rhizoctonia solani, valamint Botrytis cinerea ellen hatásos.
SEQ ZO NO-. 4
CCTACGACAG TAGCGTAACG GTAAACACCG AGTACGGTAC TCTGTGCTTT GTTGGCTCGC 60
ACA ATG Met -23 AGA Arg TCG Ser CTC Leu -20 GCG Alá GTG Val GTG Val GTG Val GCC Alá -15 GTG Val GTA Val GCC Alá ACG Thr GTG Val -10 GCC Alá 108
ATG GCC ATC GGC ACG GCG CGC GGC AGC GTG TCC TCC ATC GTC TCG CGC 156
Met Alá Ile Gly -5 Thr Alá Arg Gly Ser 1 Val Ser Ser Ile 5 Val Ser Arg
GCA CAG TTT GAC CGC ATG CTT CTC CAC CGC AAC GAC GGC GCC TGC CAG 204
Alá Gin 10 Phe Asp Arg Met Leu 15 Leu HÍS Arg Asn Asp 20 Gly Alá Cys Gin
GCC AAG GGC TTC TAC ACC TAC GAC GCC TTC GTC GCC GCC GCA GCC GCC 252
Alá 25 Lys Gly Phe Tyr Thr 30 Tyr Asp Alá Phe Val 35 Alá Alá Alá Alá Alá 40
TTC CCG GGC TTC GGC ACC ACC GGC AGC GCC GAC GCC CAG AAG CGC GAG 300
Phe Pro Gly Phe Gly 45 Thr Thr Gly Ser Alá 50 Asp Alá Gin Lys Arg 55 Glu
GTG GCC GCC TTC CTA GCA CAG ACC TCC CAC GAG ACC ACC GGC GGG TGG 348
val Alá Alá Phe 60 Leu Alá Gin Thr Ser 65 His Glu Thr Thr Gly 70 Gly Trp
GCG ACT GCA CCG GAC GGG GCC TTC GCC TGG GGC TAC TGC TTC AAG CAG 396
Alá Thr Alá 75 Pro Asp Gly Alá Phe 80 Alá Trp Gly Tyr Cys 85 Phe Lys Gin
GAA CGT GGC GCC TCC TCC GAC TAC TGC ACC CCG AGC GCA CAA TGG CCG 444
Glu Arg 90 Gly Alá Ser Ser Asp 95 Tyr Cys Thr Pro Ser 100 Alá Gin Trp Pro
TGC GCC CCC GGG AAG CGC TAC TAC GGC CGC GGG CCA ATC CAG CTC TCC 492
Cys 105 Alá Pro Gly Lys Arg 110 Tyr Tyr Gly Arg Gly 115 Pro Ile Gin Leu Ser 12 0
CAC AAC TAC AAC TAT GGA CCT GCC GGC CGG GCC ATC GGG GTC GAT CTG 540
His Asn Tyr Asn Tyr 125 Gly Pro Alá Gly Arg 130 Alá Ile Gly val Asp 135 Leu
CTG GCC AAC CCG GAC CTG GTG GCC ACG GAC GCC ACT GTG GGC TIT AAG 588
Leu Alá Asn Pro 140 Asp Leu Val Alá Thr 145 Asp Alá Thr Val Gly 150 Phe Lys
ACG GCC ATC TGG TTC TGG ATG ACG GCG CAG CCG CCC AAG CCA TCG AGC 636
Thr Alá Ile Trp Phe Trp Met Thr Alá Gin Pro Pro Lys Pro Ser Ser
1SS 160 165
HU 219 268 Β
CAT GCT GTG ATC GCC GGC CAG TGG AGC CCG TCA GGG GCT GAC CGG GCC 684
His Ala 170 Val Ile Ala Gly Gin 175 Trp Ser Pro Ser Gly 180 Ala Asp Arg Ala
GCA GGC CGG GTG CCC GGG TTT GGT GTG ATC ACC AAC ATC ATC AAC GGC 732
Ala Gly Arg Val Pro Gly Phe Gly Val Ile Thr Asn Ile Ile Asn Gly
185 190 195 200
GGG ATC GAG TGC GGT CAC GGG CAG GAC AGC CGC GTC GCC GAT CGA ATC 780
Gly Ile Glu Cys Gly His Gly Gin Asp Ser Arg Val Ala Asp Arg Ile
205 210 215
GGG TTT TAC AAG CGC TAC TGT GAC ATC CTC GGC GTT GGC TAC GGC AAC 828
Gly Phe Tyr Lys Arg Tyr Cys Asp Ile Leu Gly Val Gly Tyr Gly Asn
220 225 230
AAC CTC GAT TGC TAC AGC CAG AGA CCC TTC GCC TAATTAATTA GTCATGTATT 881
Asn Leu Asp Cys Tyr Ser Gin Arg Pro Phe Ala
235 240
AATCTTGGCC CTCCATAAAA TACAATAAGA GCATCGTCTC CTATCTACAT GCTGTAAGAT 941
GTAACTATGG TAACCTTTTA TGGGGAACAT AACAAAGGCA TCTCGTATAG ATGCTTTGCT 1001
A 1002
E-szekvencialeirás (GluG)
Szekvenciaazonosító szám: SEQ. ID. NO. 5 25
A szekvencia fajtája: nukleotid a megfelelő proteinnel
Szekvencia hossza: 1249 nukleotid A molekula fajtája: cDNS Eredeti eredet: árpamagvak (Hordeum vulgare L.)
SEQ
Név: GluG (glükanáz)
Ismérvek: 48 bp-nyi hosszúságú, 5’-nemfordító kezdeti régió, 1002 bp-nyi nyitott olvasókeret, 199 bp-nyi 3’-nemfordított vég. A 1083. és 1210. helyen található, AT-ben gazdag, aláhúzott szekvencia valószínűleg poliadenilezési jel. A 334 aminosavból álló kódolt prepro30 tein szekvenciáját a nukleotidek alatt tüntettük fel.
ID HO: 5
GGCAGCATTG CATAGCATTT GAGCACCAGA TACTCCGTGT GTGCACCA ATG GCT AGA 57
Met Ala Arg -28
AAA Lys -25 GAT GTT GCC Ala TCC ATG TTT GCA GTT GCT CTC TTC ATT GGA GCA TTC 105
Asp val Ser Met Phe -20 Ala Val Ala Leu -15 Phe Ile Gly Ala Phe -10
GCT GCT GTT CCT ACG AGT GTG CAG TCC ATC GGC GTA TGC TAC GGC GTG 153
Ala Ala Val Pro Thr Ser Val Gin Ser Ile Gly Val Cys Tyr Gly Val
-5 1 5
ATC GGC AAC AAC CTC CCC TCC CGG AGC GAC GTG GTG CAG CTC TAC AGG 201
Ile Gly Asn Asn Leu Pro Ser Arg Ser Asp Val Val Gin Leu Tyr Arg
10 15 20
TCC AAG GGC ATC AAC GGC ATG CGC ATC TAC TTC GCC GAC GGG CAG GCC 249
Ser Lys Gly Ile Asn Gly Met Arg Ile Tyr Phe Ala Asp Gly Gin Ala
25 30 35
CTC TCG GCC GTC CGC AAC TCC GGC ATC GGC CTC ATC CTC GAC ATC GGC 297
Leu Ser Ala Val Arg Asn Ser Gly Ile Gly Leu Ile Leu Asp Ile Gly
40 45 50 55
AAC GAC CAG CTC GCC AAC ATC GCC GCC AGC ACC TCC AAC GCG GCC TCC 345
Asn Asp Gin Leu Ala Asn Ile Ala Ala Ser Thr Ser Asn Ala Ala Ser
60 65 70
TGG GTC CAG AAC AAC GTG CGG CCC TAC TAC CCT GCC GTG AAC ATC AAG 393
Trp Val Gin Asn Asn Val Arg Pro Tyr Tyr Pro Ala Val Asn Ile Lys
75 80 85
HU 219 268 Β
TAC ATC GCC GCC GGC AAC GAG GTG CAG GGC GGC GCC ACG CAG AGC ATC 441
Tyr Ile Alá Alá Gly Asn Glu Val Gin Gly Gly Alá Thr Gin Ser Ile
95 100
CTG CCG GCC ATG CGC AAC CTC AAC GCG GCC CTC TCC GCG GCG GGG CTC 489
Leu Pro Alá Hét Arg Asn Leu Asn Alá Alá Leu Ser Alá Alá Gly Leu
105 110 115
GGC GCC ATC AAG GTG TCC ACC TCC ATC CGG TTC GAC GAG GTG GCC AAC 537
Gly Alá Ile Lys Val Ser Thr Ser Ile Arg Phe Asp Glu Val Alá Asn
120 125 130 135
TCC TTC CCG CCC TCC GCC GGC GTG TTC AAG AAC GCC TAC ATG ACG GAC 585
Ser Phe Pro Pro Ser Alá Gly Val Phe Lys Aen Alá Tyr Met Thr Asp
140 145 150
GTG GCC CGG CTC CTG GCG AGC ACC GGC GCG CCG CTG CTC GCC AAC GTC 633
Val Alá Arg Leu Leu Alá Ser Thr Gly Alá Pro Leu Leu Alá Asn Val
155 160 165
TAC CCC TAC TTC GCG TAC CGT GAC AAC CCC GGG AGC ATC AGC CTG AAC 681
Tyr Pro Tyr Phe Alá Tyr Arg Asp Asn Pro Gly ser Ile Ser Leu Asn
170 175 180
TAC GCG ACG TTC CAG CCG GGC ACC ACC GTG CGT GAC CAG AAC AAC GGG 729
Tyr Alá Thr Phe Gin Pro Gly Thr Thr Val Arg Asp Gin Asn Asn Gly
185 190 195
CTG ACC TAC ACG TCC CTG TTC GAC GCG ATG GTG GAC GCC GTG TAC GCG 777
Leu Thr Tyr Thr Ser Leu Phe Asp Alá Met Val Asp Alá Val Tyr Alá
200 205 210 215
GCG CTG GAG AAG GCC GGC GCG CCG GCG GTG AAG GTG GTG GTG TCG GAG 825
Alá Leu Glu Lys Alá Gly Alá Pro Alá Val Lys Val Val Val Ser Glu
220 225 230
AGC GGG TGG CCG TCG GCG GGC GGG TTT GCG GCG TCG GCC GGC AAT GCG 873
Ser Gly Trp Pro Ser Alá Gly Gly Phe Alá Alá Ser Alá Gly Asn Alá
235 240 245
CGG ACG TAC AAC CAG GGG CTG ATC AAC CAC GTC GGC GGG GGC ACG CCC 921
Arg Thr Tyr Asn Gin Gly Leu Ile Asn His Val Gly Gly Gly Thr Pro
250 255 260
AAG AAG CGG GAG GCG CTG GAG ACG TAC ATC TTC GCC ATG TTC AAC GAG . 969
Lys Lys Arg Glu Alá Leu Glu Thr Tyr Ile Phe Alá Met Phe Asn Glu
265 270 275
AAC CAG AAG ACC GGG GAC GCC ACG GAG AGG AGC TTC GGG CTC TTC AAC 1017
Asn Gin Lys Thr Gly Asp Alá Thr Glu Arg Ser Phe Gly Leu Phe Asn
280 285 290 295
CCG GAC AAG TCG CCG GCA TAC AAC ATC CAG TTC TAGTACGTGT AGCTACCTAG 1070
Pro Asp Lys Ser Pro Alá Tyr Asn He Gin Phe
300 305
CTCACATACC TAAATAAATA AGCTGCACGT ACGTACGTAA TGCGGCATCC AAGTGTAACG 1130
TAGACACGTA CATTCATCCA TGGAAGAGTG CAACCAAGCA TGCGTTAACT TCCTGGTGAT 1190
GATACATCAT CATGGTATGA ATAAAAGATA TGGAAGATGT TATGA 1235

Claims (7)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Transzgenikus gombarezisztens növény, amelynek genomja legalább két különböző, gombagátló hatású proteint kódoló, növényekben aktív promoterek ellenőrzése alatt álló génszekvenciát tartalmaz, azzal jellemezve, hogy a két DNS-szekvencia az alábbiakat kódolja:
    (a) legalább egy proteint az alábbi csoportból: egy ChiG-protein, amely az ID NO. 4 szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza; egy GluG-protein, amely az ID NO. 5 szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza; egy PSI-protein, amely az ID. NO. 2 szerinti B-szekvenciát tartalmazza; és egy AFPprotein, amely az ID NO. 1 A’-szekvenciát tartalmazza; valamint (b) egy ChiS-proteint, amely az ID NO. 3 szerinti szekvencia géntermékének aminosavszekvenciáját tartalmazza.
  2. 2. Transzgenikus gombarezisztens növény, amelynek genomja legalább két különböző, gombagátló hatású proteint kódoló, növényekben aktív promoterek ellenőrzése alatt álló génszekvenciát tartalmaz, azzal jellemezve, hogy a két DNS-szekvencia az alábbiakat kódolja:
    (a) legalább egy proteint az alábbi csoportból: egy ChiG-protein, amely az ID NO. 4 szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza; egy GluG-protein, amely az ID NO. 5 szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza; egy PSI-protein, amely az ID NO. 2 B-szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza; és egy ChiS-protein, amely az ID NO. 3 szekvencia szerinti géntermék aminosavszekvenciáját tartalmazza; és (b) egy AFP-proteint, amely az ID. NO. 1 A’-szekvenciának megfelelő aminosavszekvenciát tartalmazza.
  3. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti gombarezisztens növény, amely úgy lett előállítva, hogy egy növény genomjába legalább egy, gombagátló hatású proteint kódoló gént transzferáltunk, majd a gombarezisztens növényt (a) egy másik, adott esetben transzgenikus, legalább egy másik, más gombagátló hatású proteint kódoló gént tartalmazó növénnyel kereszteztük, utána szelektáltuk vagy (b) legalább egy másik, más gombagátló hatású proteint kódoló génnel transzformáltuk.
  4. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti növény, azzal jellemezve, hogy dohány-, burgonya-, foldieper-, kukorica-, repce- vagy paradicsomnövény.
  5. 5. Eljárás az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti gombarezisztens növény előállítására, azzal jellemezve, hogy egy növény genomjába legalább egy, gombagátló hatású proteint kódoló gént transzferálunk, és a kapott gombarezisztens növényt (a) egy, adott esetben transzgenikus, legalább egy másik, más gombagátló hatású proteint kódoló gént tartalmazó növénnyel keresztezzük, majd szelektálást végzünk, vagy (b) legalább egy másik, más gombagátló hatású proteint kódoló génnel transzformáljuk.
  6. 6. Eljárás javított gombarezisztenciájú növény előállítására, amely eljárás során egy növényt legalább két különböző, gombagátló hatású proteineket kódoló, növényekben aktív promoter ellenőrzése alatt álló génszekvenciával transzformálunk, azzal a megkötéssel, hogy a két DNS-szekvencia az alábbiakat kódolja:
    (a) legalább egy proteint az alábbi csoportból: egy ChiGprotein, amely az ID NO. 4 szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza; egy GluG-protein, amely az ID NO. 5 szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza; egy PSI-protein, amely az ID. NO. 2 szerinti Bszekvenciát tartalmazza; és egy AFP-protein, amely az ID NO. 1 A-szekvenciát tartalmazza, valamint (b) egy ChiS-proteint, amely az ID NO. 3 szerinti szekvencia géntermékének aminosavszekvenciáját tartalmazza.
  7. 7. Eljárás javított gombarezisztenciájú növény előállítására, amely eljárás során egy növényt legalább két különböző, gombagátló hatású proteineket kódoló, aktív promoter ellenőrzése alatt álló génszekvenciával transzformálunk azzal a megkötéssel, hogy a két DNSszekvencia az alábbiakat kódolja:
    (a) legalább egy proteint az alábbi csoportból: egy ChiGprotein, amely az ID NO. 4 szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza; egy GluG-protein, amely az ID NO. 5 szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza; egy PSI-protein, amely az ID NO. 2 B-szekvencia szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza; és egy ChiS-protein, amely az ID NO. 3 szekvencia szerinti géntermék aminosavszekvenciáját tartalmazza, és (b) egy AFP-proteint, amely az ID. NO. 1 A’-szekvenciának megfelelő aminosavszekvenciát tartalmazza.
HU9302851A 1992-10-09 1993-10-08 Transgenic organism resistante to fungi HU219268B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE4234131A DE4234131C2 (de) 1992-10-09 1992-10-09 Transgener pathogen-resistenter Organismus

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9302851D0 HU9302851D0 (en) 1994-01-28
HUT68236A HUT68236A (en) 1995-06-28
HU219268B true HU219268B (en) 2001-03-28

Family

ID=6470118

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9302851A HU219268B (en) 1992-10-09 1993-10-08 Transgenic organism resistante to fungi

Country Status (11)

Country Link
US (4) US5689045A (hu)
EP (1) EP0616035B1 (hu)
JP (1) JPH06197651A (hu)
AT (1) ATE243258T1 (hu)
AU (1) AU671669B2 (hu)
CA (1) CA2108112A1 (hu)
DE (2) DE4234131C2 (hu)
ES (1) ES2201053T3 (hu)
HU (1) HU219268B (hu)
MX (1) MX9306300A (hu)
ZA (1) ZA937202B (hu)

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5521153A (en) * 1987-10-02 1996-05-28 Ciba-Geigy Corporation Synergistic antifungal protein and compositions containing same
US6414222B1 (en) 1993-02-05 2002-07-02 Regents Of The University Of Minnesota Gene combinations for herbicide tolerance in corn
US6222099B1 (en) 1993-02-05 2001-04-24 Regents Of The University Of Minnesota Transgenic plants expressing maize acetyl COA carboxylase gene and method of altering oil content
US6069298A (en) * 1993-02-05 2000-05-30 Regents Of The University Of Minnesota Methods and an acetyl CoA carboxylase gene for conferring herbicide tolerance and an alteration in oil content of plants
US5530187A (en) * 1993-07-16 1996-06-25 The Salk Institute For Biological Studies Transgenic plants containing multiple disease resistance genes
DE4423022C1 (de) * 1994-06-30 1995-05-24 Lutz Prof Dr Heide Transgene Pflanzen mit erhöhtem Gehalt an Sekundärstoffen
CN1235640A (zh) * 1996-06-25 1999-11-17 Gsf环境与健康研究中心有限公司 臭氧诱导的植物基因表达
JP4324656B2 (ja) 1996-07-29 2009-09-02 ケイヘン ナームロゼ フェンノートシャップ 植物の防御応答を調節するポリヌクレオチドおよびそれの使用
US6121436A (en) * 1996-12-13 2000-09-19 Monsanto Company Antifungal polypeptide and methods for controlling plant pathogenic fungi
US7087420B1 (en) 1997-07-17 2006-08-08 Cambia Microbial β-glucuronidase genes, gene products and uses thereof
GB9827152D0 (en) * 1998-07-03 1999-02-03 Devgen Nv Characterisation of gene function using double stranded rna inhibition
CN1125179C (zh) * 1999-01-28 2003-10-22 中国农业科学院生物技术研究所 胞内或胞外协同表达两种抗真菌病基因培育抗病作物
US6521435B1 (en) 1999-08-30 2003-02-18 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Nucleic acid sequences encoding cell wall-degrading enzymes and use to engineer resistance to Fusarium and other pathogens
AU783767B2 (en) 1999-10-14 2005-12-01 Takara Bio Usa, Inc. Anthozoa derived chromophores/fluorophores and methods for using the same
TWI265974B (en) * 2001-11-20 2006-11-11 Univ Hong Kong Genetically modified plants with enhanced resistance to fungal diseases and a method of production thereof
RU2330067C2 (ru) * 2001-12-19 2008-07-27 Дзе Юниверсити Оф Чикаго Полинуклеотид, кодирующий хромо- или флуоресцирующий мутантный полипептид, вектор экспрессии, клетка, способ получения хромо- или флуоресцирующего полипептида, набор для получения хромо- или флуоресцирующего полипептида, применение полипептида и применение полинуклеотида
DE03779067T1 (de) 2002-11-12 2006-06-22 Zakrytoe Aktsionernoe Obschestvo "Evrogen" Fluoreszenzproteine und chromoproteine aus nicht-aequorea-hydrozoa-spezies sowie verfahren zur verwendung davon
JP4755174B2 (ja) 2004-04-07 2011-08-24 ザ ユニヴァーシティー オヴ シカゴ 単量体赤色蛍光タンパク質
BR122015026849C8 (pt) 2004-07-02 2017-06-20 Du Pont cassete de expressão, microorganismo transformado, método para indução de resistência a patógeno de planta em uma planta, composição anti-patogênica e método para proteção de uma planta contra um patógeno de planta
ES2444001T3 (es) 2004-10-21 2014-02-21 Venganza Inc. Procedimientos y materiales para conferir resistencia a plagas y patógenos de plantas
ATE526398T1 (de) * 2005-08-19 2011-10-15 Commw Scient Ind Res Org Arachnocampa-luciferasen
US7417131B2 (en) * 2005-11-04 2008-08-26 Evrogen Joint Stock Company Modified green fluorescent proteins and methods for using same
ATE483018T1 (de) 2006-01-25 2010-10-15 Evrogen Ip Neue fluoreszenzproteine und verfahren zur verwendung davon
US8563703B2 (en) 2006-01-25 2013-10-22 Evrogen IP Joint Stock Company Fluorescent proteins and methods for using same
US8680235B2 (en) * 2006-09-22 2014-03-25 Stowers Institute For Medical Research Branchiostoma derived fluorescent proteins
US8679749B2 (en) * 2007-11-01 2014-03-25 The University Of Chicago Red fluorescent proteins with enhanced bacterial expression, increased brightness and reduced aggregation
US20100257634A1 (en) * 2009-04-03 2010-10-07 Venganza Inc. Bioassay for gene silencing constructs
CN101613685B (zh) * 2009-05-20 2011-04-13 广东省昆虫研究所 具有杀狄斯瓦螨活性的组合几丁质酶及其应用
RU2730038C2 (ru) 2018-06-28 2020-08-14 Общество с ограниченной ответственностью "ПЛАНТА" Ферменты биосинтеза люциферина и их применение

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4940840A (en) * 1984-03-26 1990-07-10 Dna Plant Technology Corporation Novel chitinase-producing bacteria and plants
EP0675960A1 (en) * 1987-11-02 1995-10-11 Louisiana State University and Agricultural and Mechanical College Plants genetically enhanced for disease resistance
DE3810286A1 (de) * 1988-03-25 1989-10-12 Max Planck Gesellschaft Transgene pflanze mit modifizierter physiologie, morphologie und modifiziertem hormonmetabolismus, gewebekulturen dieser pflanze und verfahren zu ihrer herstellung
US4970168A (en) * 1989-01-27 1990-11-13 Monsanto Company Virus-resistant plants
IL97020A (en) * 1990-01-30 2000-12-06 Mogen Int Recombinant polynucleotides comprising a chitinase gene and a glucanase gene
US5421839A (en) * 1990-06-15 1995-06-06 Hoechst Aktiengesellschaft Antifungal polypeptide and process for its production
DE4040954C2 (de) * 1990-12-20 2001-05-17 Max Planck Gesellschaft Verfahren zur Erzeugung von pathogen-resistenten Pflanzen
FR2674538B1 (fr) * 1991-03-25 1994-11-18 Sanofi Elf Adn recombinant codant pour une nouvelle proteine a activite beta 1,3-glucanase bacteries contenant cet adn, cellules vegetales et plantes transformees.
DK61691D0 (da) * 1991-04-08 1991-04-08 Danisco Genetiske konstruktioner
CA2145984A1 (en) * 1992-10-05 1994-04-14 Leo Sjoerd Melchers Antifungal chitin binding proteins and dna coding therefor

Also Published As

Publication number Publication date
US6271438B1 (en) 2001-08-07
DE4234131A1 (de) 1994-04-21
HUT68236A (en) 1995-06-28
ES2201053T3 (es) 2004-03-16
US20010020300A1 (en) 2001-09-06
ATE243258T1 (de) 2003-07-15
EP0616035B1 (de) 2003-06-18
US5689045A (en) 1997-11-18
CA2108112A1 (en) 1994-04-10
JPH06197651A (ja) 1994-07-19
EP0616035A3 (de) 1995-02-15
AU4872093A (en) 1994-04-28
DE4234131C2 (de) 1995-08-24
MX9306300A (es) 1994-04-29
US5804184A (en) 1998-09-08
DE59310345D1 (de) 2003-07-24
EP0616035A2 (de) 1994-09-21
ZA937202B (en) 1994-04-20
HU9302851D0 (en) 1994-01-28
AU671669B2 (en) 1996-09-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU219268B (en) Transgenic organism resistante to fungi
AU7330394A (en) Transgenic plants containing multiple disease resistance genes
US5597801A (en) Biocidal proteins
HU217789B (hu) Eljárás növényekből patogénellenes hatású fehérjék izolálására, ezek rekombináns úton történő előállítására, valamint ezeket tartalmazó készítmények és transzgén növények előállítására
BG61614B1 (bg) Новоохарактеризирана оксалатоксидаза и нейното приложение
Fukuta et al. Transgenic tobacco plants expressing antimicrobial peptide bovine lactoferricin show enhanced resistance to phytopathogens
MXPA00002115A (es) Uso de un productor de respuesta hipersensitiva de bacterias gram positivas.
AU718274B2 (en) Antifungal proteins, DNA coding therefore, and hosts incorporating same
US5994625A (en) Antifungal chitin binding proteins and DNA coding therefor
US5861480A (en) Antimicrobial proteins from aralia and impatiens
Chen et al. Combined overexpression of chitinase and defensin genesin transgenic tomato enhances resistance to Botrytis cinerea
EP0593501B1 (en) Biocidal proteins
US6271442B1 (en) Method of producing pathogen-resistant plants
AU656907B2 (en) Recombinant gene coding for a protein having an endochitinase activity
USRE39238E1 (en) Transgenic pathogen-resistant organism
KR20040003855A (ko) 고추 한별 품종 (Ｃａｐｓｉｃｕｍ ａｎｎｕｕｍ Ｌ.ｃｖ. Ｈａｎｂｙｕｌ)으로부터 유래한리피드트랜스퍼단백질 ＣＡＬＴＰ Ⅰ·ＣＡＬＴＰⅡ·ＣＡＬＴＰⅢ을 코딩하는 유전자 및 마커로서의 활용
Atnaseo Expression of antimicrobial peptides in plants
EP0667905A1 (en) Antifungal chitin binding proteins and dna coding therefor
HU219505B (hu) Eljárás növényből származó intracelluláris fehérjék extracelluláris térbe való irányítására és patogénellenes hatásuk fokozására

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees