HU207103B - Process for producing anticoagulant peptides and pharmaceutical compositions comprising same - Google Patents
Process for producing anticoagulant peptides and pharmaceutical compositions comprising same Download PDFInfo
- Publication number
- HU207103B HU207103B HU906270A HU627090A HU207103B HU 207103 B HU207103 B HU 207103B HU 906270 A HU906270 A HU 906270A HU 627090 A HU627090 A HU 627090A HU 207103 B HU207103 B HU 207103B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- glu
- pro
- ile
- tyr
- asp
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/81—Protease inhibitors
- C07K14/815—Protease inhibitors from leeches, e.g. hirudin, eglin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás új (1) általános képletű véralvadásgátló hatású peptidek, valamint ezeket a peptideket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására.
A véralvadásgátló szerek fontos gyógyszerészeti hatóanyagok például akut mélyvénás thrombosis, tüdőembólia, akut végtag artéria embólia, szívizom infarktus, és eloszlott éredényen belüli koaguláció kezelésére. A véralvadásgátlók megelőző alkalmazása megelőzi az embólia kialakulását olyan betegekben, akik reumás, vagy érelmeszesedéses szívbetegségben szenvednek, és megelőz bizonyos thrombo-embóliás komplikációkat operációk során, A véralvadásgátlók alkalmazása ugyancsak alkalmas artéria és agyér betegségek kezelésére. Az artéria thrombosis különösen a szívizmot és az agyat ellátó artériákban halálhoz vezet.
A 65 aminosav egységből álló hirudin polipeptidet pióca nyálmirigyéből izolálták [Markwardt, E and Walsmann, P. (1976), Hoppe-Seyler’s Z. Physiol. Chem. 348, 1381-1386 (1976)]. A peptid teljes aminosav szekvenciáját Dodi, J. et al. FEBS Lett 165, 180-183 (1984) ismertette. Továbbá azt is leírták, hogy a hirudin C-terminális részén kell lenni a fntos kötődési helyeknek [Chang, J. FEBS Lett. 164, 307 (1983)].
A Hirudin thrombin specifikus inhibitor és ennélfogva alkalmazható véralvadásgátló szerként. Klinikai alkalmazása azonban nehézségekbe ütközik, mivel piócákból extrahálva nem elég nagy mennyiségben áll rendelkezésre, valamint költséges az előállítása, és sok esetben ilyen nagyméretű fehérjék adagolása esetében a szervezetben alllergiás reakciók fejlődnek ki.
Vizsgálataink kezdetén felfedeztük a hirudin egy specifikus fragmensét, amely - legalább részben - hordozza a véralvadásgátló tulajdonságot. Ezt a peptid fragmenst (amely az 55-65 aminosav egységek közötti peptid fragmens a hirudinban) kémiailag szintetizáltuk és kimutattuk hogy a thrombin felismerési receptorhoz kötődik, a kötődési receptor egység térbelileg jelentősen eltér az enzim hasítási helytől. Kimutatható, hogy a szintetikus peptidek kötődése versengőén megakadályozza a thrombin felismerési receptorhoz való fibrinogén kötődését, amely alapvető feltétele a fibrin képződésnek és a vérrög kialakulásnak, ennélfogva ezek potenciális véralvadásgátlókként alkalmazhatók.
A későbbiek során előállítottuk a fentiekben említett pepiid-származékokat az eredeti szekvenciából egyes aminosavak elhagyásával. Részletesebben a különböző aminosavak elhagyásával létrejött sorozat alkalmas arra, hogy meghatározza a peptid tulajdonságainak szekvencia függését helyzetileg és összetételben is, és az alapját képezi a hatóanyag tervezésnek. Sok ilyen peptid analóg az alap peptid jellemzőivel rendelkezik és ennélfogva tudományosan, valamint terápiásán hasznos véralvadásgátlásban alkalmazható vegyület, Ezen túlmenően az aminosav analógok önmagukban olyan javított jellemzőt hordozhatnak, ami a hatás megnövelt ideig való kifejtését biztosítja.
A találmány tárgya eljárás az X-A,-A2-A3-A4A5-A7-Ag-A9-A10-Y (1) általános képletű peptidek előállítására, ahol az általános képletben
X jelentése amino-végcsoport, amely lehet hidrogénatom, kétértékű 2-8 szénatomoszámú alkanoil-, benziloxi karbonil- vagy t-butoxi-karbonicsoport;
A| jelentése Gly-Asp, Tyr-Pro-Ile-Pro, Tyr-Glu-ProTiq, Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro, Tyr-Glu-Ile-Pro, NpaPro-Ile Pro, Tyr-Glu-Pro-Pro, Tyr-Glu-Pro-Ile, PheGlu-Pro-Ile-Pro vagy Glu-Pro-Ile-Pro;
Aj jelentése Phe, SubPhe, pChloroPhe, D-Phe, NMePhe vagy egy kötés;
A3 jelentése Glu vagy Asp;
A4 jelentése Glu, Asp, Alá vagy egy kötés;
A5 jelentése Ile, Val, Leu, Nle, Alá, D-Leu vagy egy kötés;
A7 jelentése Glu, Asp vagy egy kötés;
Ag jelentése Glu, Asp vagy egy kötés;
A9 Jelentése Tyr, Ι-Tyr, D-Tyr, Cha vagy egy kötés;
A]0 jelentése Asp, D-Asp, Asn, Glu, D-Glu vagy Gin;
Y jelentése hidroxil- vagy aminocsoport.
Az alábbiakban rövidítések értelmezését adjuk meg: (1) aminosavak és betű rövidítésük; (2) módosított és szokatlan aminosavak; (3) terminális aminocsoport és karboxilcsoport szubsztituensek, amelyeket a leírás során alkalmazunk;
(I) Aminosavak és hárombetűs jelölésük
L-aminosavak | D-aminosavak |
Alá - (vagy A) alanin Arg - (vagy R) arginin Asn - (vagy N) szaparagin Asp - (vagy D) aszparaginsav | D-Asp (vagy d)D-aszparaginsav |
Cys - (vagy C) cisztein Gly - (vagy G) glicin Glu - (vagy E) glutaminsav | D-Glu (vagy e)- D-glutaminsav |
Val - (vagy V) valin Gin - (vagy Q) glutamin Ile - (vagy I) izoleucin Leu - (vagy L) leucin | D-Leu (vagy 1)D-leucin |
Lys - (vagy K) lizin Phe - (vagy F) fenil-alanin | D-Phe (vagy f)D-fenil-alanin |
Met - (vagy M) metionin Pro - (vagy P) prolin Ser - (vagy S) szerin Thr- (vagy T) treonin Tyr - (vagy Y) tirozin | D-Tyr (vagy y)- |
D-tirozin (2) Módosított és szokatlan aminosavak pClPhe - p-klór-fenil-alanin Cha - ciklohexil-alanin NMePhe - N-metil-fenil-alanin Npa - béta-naftil-alanin
SubPhe - ο-, m- vagy p- mono, di-szubsztituált fenil-alanin
Tiq - tetrahidro-izokinolin-3-karboxilát
HU 207 103 B
Aminocsoport és karboxilcsoport terminális szubsztituensek
Ac - acetil-csoport,
Azt - azetidin-2-karboxilát-csoport,
Cin - cinnamoil-csoport,
DhCin - 3,4-dihidro-cinnamoil-csoport,
Glt - glutaril-csoport,
Mai - maleil-csoport,
Oac - 8-amino-oktánsav
Oct - oktil-csoport Suc - szukcinil-csoport,
Glt - glutaril-csoport,
Tfa - trifluor-acetil-csoport, # - C-terminális-amid-csoport.
Az alábbiakban bemutatjuk az ismert, természetesen előforduló hirudin aminosav szekvenciát.
A hirudin aminosav szekvencia:
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 |
Val | Val | Tyr | Thr | Asp | Cys | Thr | Glu | Ser | Gly | Gin | Asn | Leu | Cys |
He | Thr | ||||||||||||
15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 |
Leu | Cys | Glu | Gly | Ser | Asn | Val | Cys | Gly | Gin | Gly | Asn | Lys | Cys |
Lys | |||||||||||||
29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 |
He | Leu | Gly | Ser | Asp | Gly | Glu | Lys | Asn | Gin | Cys | Val | Thr | Gly |
Asn | Lys | Gly | |||||||||||
Gin | Asp | ||||||||||||
43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 |
Glu | Gly | Thr | Pro | Lys | Pro | Glx | Ser | His | Asn | Asp | Gly | Asp | Phe |
Asn | Glu | ||||||||||||
57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 | |||||
Glu | Glu | He | Pro | Glu | Glu | Tyr | Leu | Gin | |||||
Pro | Asp | Asp | Glu | ||||||||||
(Alá | 63 Tyr | 64 Leu/Asp64 | Glu65) |
A természetben előforduló aminosavak a glicin kivételével szimmetrikus királis szénatomot tartalmaznak. Amennyiben másképp nem jelöljük, a leírásban közölt optikailag aktív aminosavak L-konfigurációjúak. Például A] vagy A10 csoport lehet D- vagy Lkonfigurációjú. A szokásos szakirodalmi leírásnak megfelelően a peptideket úgy ábrázoljuk, hogy amino-terminális csoportjuk a bal oldalon és karboxilterminális csoportjuk a jobb oldalon található.
Az (1) általános képletű polipeptidek nemtoxikus szervetlen, vagy szerves savakkal gyógyszerészetileg elfogadható sókat képeznek. Ilyen alkalmas szervetlen savak például a sósav, a hidrogénbromid, a kénsav és a foszforsav, valamint a sav fémsók, mint például nátriumhidrogénortofoszfát és káliumhidrogénszulfát. Alkalmazható szerves savak például a mono- di vagy tri-karbonsavak. Ilyen savak például az ecetsav, a glikolsav, a tejsav, a piruvinsav, a malonsav, a borostyánkősav, a glutánsav, a fumársav, az almasav, a borkősav, a citromsav, az aszkorbinsav, a maleinsav, a hidroxi-maleinsav, a benzoesav, a hidroxibenoesav, a fenil-ecetsav, a fahéjsav, a szalicilsav, a 2-fenoxi-benzoesav, és a szulfonsavak, mint például a metánszulfonsav, és a 2-hidroxi-etánszulfonsav. A karboxil-terminális csoport karbonsav sói lehetnek bármely nemtoxikus karbonsav sók, amelyeket szervetlen, vagy szerves bázisokkal képezünk. Ilyen sók lehetnek például alkálifém sók, például nátriumsó, káliumsó, alkáliföldfém sók, például kalciumsó, magnéziumsó;(IIIA) csoporthoz tartozó könnyűfém sók, például alumíniumsó; szerves elsőrendű, másodrendű és harmadrendű aminnal képzett sók, például trialkil-aminnal, például trietilaminnal, prokainnal, dibenzil-aminnal, 1-eténaminnal, Ν,Ν’-dibenzil-etiléndiaminnal, dihidro-abietilaminnal, N-kis szénatomoszámú alkil-piperidinnel és más alkalmas aminnal képzett sók.
Előállítási eljárás:
A találmány szerinti peptidek számos, a szakirodalomban jártas szakember által ismert eljárással előállíthatók. Ilyen eljárások lehetnek oldat fázisú pepiid szintézis, szilárd fázisú sorrendi és blokk szintézis, gén klónozás és ezek kombinációja. A szilárd fázisú eljárást, amely szekvenciális megoldású, kidolgozott automatizált eljárásokkal végezhetjük és például automata peptid szintetizátort alkalmazhatunk. Az eljárásban a gyantán kötött pepiidet C-terminálís aminocsoporton védett aminosav csoportja révén kötjük a gyantához. Az alkalmazott gyanta hordozó lehet
HU 207 103 B bármely szokásosan a szilárd fázisú polipeptid előállításban alkalmazott gyanta, előnyösen lehet polisztiriol gyanta, amelyet körülbelül 0,5-3 százalék divinil-benzol-hálósítással látunk el. A gyanta vagy klór metilezett, vagy hidroxi-metiiezett származék, amely biztosítja a kezdetben kötött védett alfa-aminosavval való reagáltáthatóságát. A C-terminális amidok esetében dimetil-benzhidril-amin-gyantát alkalmazhatunk. Miután a peptid szekvencia kapcsolását befejeztük, vagy a bal oldali Boc védőcsoportot eltávolítjuk, vagy a helyen hagyjuk vagy eltávolítjuk és az N-terminális aminocsoportot acilezzük. A védett fragmens gyantáról történő lehasítását a megfelelő amino-alkohol segítségével végezhetjük.
Például hidroxi-metil-gyantát írt le Bodanszky és munkatársai a Chem. Ind (London) 38, 1597-98 (1966) közleményben. Klór-metil-gyanta a kereskedelemben kapható Bio Rád Laboratories, Richmond, California terméke, Az ilyen gyanta előállítási eljárását Stewart és munkatársai „Solid Phase Peptide Synthesis” (Freeman and Co., San Francisco, 1969) közleményükben leírták (1. fejezet, 1-6 old.) A védett aminosavat a gyantához Gisin, Helv. Chem. Acta, 56, 1476 (1973) közleménye szerinti eljárással kapcsolhatjuk. Számos gyantához kötött aminosav kereskedelemben kapható. Például egy olyan esetben, amikor a karboxi-terminális végcsoport yMeGlu, egy t-butoxi-karbonil-csoporttal (Boc) védett yMeGlu egységet kapcsolunk a benzilezett, hidroxi-metiiezett fenil-acetamido-metíl (PAM) gyantához.
Miután az aminocsoporton védett aminosavat a gyantához kapcsoltuk, a védőcsoportot bármely alkalmas eljárással, például trifluor-ecetsav diklórmetánban történő alkalmazásával, vagy trifluorecelsav önmagában történő alkalmazásával, vagy sósavas dioxánnal eltávolítjuk. A védőcsoport eltávolítását körülbelül 0 °C-szobahőmérsék!et közötti hőmérsékleten hajtjuk végre. Más standard specifikus alfa-aminocsoport védőcsoport eltávolítási eljárásokat is alkalmazhatunk. Miután az alfa-aminocsoport védőcsoportot eltávolítottuk, más aminocsoporton védett aminocsoportok kapcsolását végezhetjük lépésenként a kívánt sorrendben. Más esetben több aminosavból álló blokk kapcsolása is elvégezhető, amely blokkot előzetesen oldatban kapcsolunk össze.
Az egyes polipeptid szekvenciába beépített aminosavakban alkalmazott alfa-aminocsoport védőcsoport lehet bármely a szakirodalomban ismert ilyen védőcsoport. Ilyen alfa-amino-csoport védőcsoportok lehetnek (1) aciltípusú védőcsoportok, mint például formil-csoport, trifluor-acetil-csoport, ftalil-csoport, toluolszulfonil-csoport (tozil-csoport), benzolszulfonilcsoport, nitro-fenil-szulfenil-csoport, tritil-szulfenilcsoport, o-nitro-fenoxi-aceti 1-csoport és alfa-klór-butiril-csoport; (2) aromás karbamid típusú védőcsoportok, mint például benziloxi-karbonil-csoport, és szubsztituált benziloxi-karbonil-csoport, mint például p-klórbenziloxi-karbonil-csoport, p-nitro-benziloxi-karbonilcsoport, p-bróm-benziloxi-karbonil-csoport, p-metoxibenziloxi-karbonil-csoport, l-(p-bifenil)- 1-metil-etoxikarbonil-csoport, alfa, alfa-dimetil-3,5-dimétoxibenziloxi-karbonil-csoport, és benzdihidriloxi-karbonil-csoport; (3) alifás karbamid típusú védőcsoport, mint például t-butoxi-karbonil-csoport (Boc), diizopropil-metoxi-karbonil-csoport, izopiOpiloxi-karbonilcsoport, etoxi-karbonil-csoport, és alliloxi-karbonilcsoport; (4) cikloalkil-karbamid típusú védőcsoport, mint például ciklopentiloxi-karbonil-csoport, adamantiloxi-karbonil-csoport, és ciklohexiloxi-karbonil-csoport; (5) tiokarbamid típusú védőcsoport, mint például, feniltio-karbonil-csoport; (6) alakil típusú védőcsoport, mint például trifenil-metil-csoport (tritilcsoport) vagy benzil-csoport. Előnyösen alkalmazható alfa-aminocsoport védőcsoport a t-butoxi-karbonilcsoport.
Mint a szilárd fázisú peptid szintézis szakirodalmából ismert, számos aminosav olyan funkciós csoportokkal rendelkezik, amelyek a láncképzés reakciói során védőcsoportok bevezetését igénylik. A megfelelő védőcsoportok kiválasztása a szakember számára nyilvánvaló és függ attól, hogy milyen szekvenciát kívánunk előállítani, valamint, hogy milyen más védett aminosavak találhatók a pepiidben. A védőcsoportok megválasztása döntő befolyású amiatt, hogy ezeknek az oldalláncokon lévő védőcsoportoknak nem szabad lehasadniuk, amikor az alfa-aminocsoport védőcsoportot eltávolítjuk. Például alkalmas oldallánc védőcsoport lizin esetében a benziloxi-karbonil-csoport és a szubsztituált benziloxi-karbonil-csoport, ahol a szubsztituens lehet halogénatom (például klóratom, brómatom, fluoratom), és nitrocsoport (például 2-klórbenziloxi-karbonil-csoport, p-nitro-benziloxi-karbonilcsoport, 3,4-diklór-benziloxi-karbonil-csoport), tozilcsoport, t-amiloxi-karbonil-csoport, t-butoxi-karbonilcsoport és diizopropil-metil-karbonil-csoport. A treonin és szerin alkoholos hidroxilcsoportja esetében alkalmazható védőcsoport lehet acetil-csoport, benzoilcsoport, t-butil-csoport, tritil-csoport, benzil-csoport, 2,6-diklór-benzil-csoport, vagy benziloxi-karbonil-csoport. Előnyösen alkalmazható védőcsoport a benzilcsoport.
A megfelelő kapcsoló reagens kiválasztása a szakember előtt világos. Különösen akalmas kapcsoló reagens, amennyiben Gin, Asn vagy Arg aminosavat kapcsolunk a Ν,Ν’-diizopropil-karbodiimid és az 1hidroxi-benzotriazol. A reagensek alkalmazása megakadályozza a nitril és a laktám képződést Más alkalmazható kapcsoló reagensek (1) a karbodiimidek (például Ν,Ν’-diciklohexiI-karbodiimid, és az N-etilN’-(gamma-dimetil-amino-propil)-karbodiimid); (2) a ciánamidok (például az N,N-dibenzil-ciánamid; (3) a keténimidek; (4) az izoxazolínium sók (például a N-etil-5-fenil-izoxalínium-3’-szulfonát); (5) a monociklusos nitrogéntartalmú aromás jellegű heterociklusos amidok, amelyek a gyűrűben 1-4 nitrogénatomot tartalmaznak (mint például imidazolidek, pirazolidek és 1,2,4-triazolidek). Specifikusan alkalmazható heterociklusos amidok például az N,N’-karbonildiimidazol, és az N,N-karboníl-si-l,2,4-triazol; (6) alkoxilezett acetilének (például etoxi-acetilén); (7) az aminosav karboxilcsoportjával vegyes anhidridet ké4
HU 207 103 Β pező reagensek (például etil-klór-formiát, és izobutilklór-formiát), vagy a kapcsolásba viendő aminosav szimmetrikus anhidridjei (például Boc-Ala-O-AlaBoc), (8) a gyűrű nitrogénatomján hidroxilcsoportot tartalmazó nitrogéntartalmú heterociklusos vegyületek (például N-hidroxi-ftálimid, N-hidroxi-szukcinimid, és 1-hidroxi-benzo-triazol), és (9) Castro-reagens (BOP). Más aktiválós szereket és alkalmazásukat írta le Kapoor J. Pharm. Sci., 59, 1-27 (1970) közleményében. A feltalálók előnyösnek találják a szimmetrikus anhidrid alkalmazását valamennyi aminosav esetében, kivéve az Arg, Asn és Gin aminosavakat.
Valamennyi védett aminosavat, vagy védett aminosav szekvenciát körülbelül négyszeres felesleg mennyiségben vezetünk be a szilárd fázisú reaktorba és a kapcsolást dimetil-formamid-diklórmetán (1:1) oldószerelegyben, vagy dimetil-formamidban, vagy előnyösen diklórmetánban hajtjuk végre. Amennyiben nem teljes kapcsolás történik, a kapcsolási reakciót a védőcsoport eltávolítása előtt megismételjük a következő aminosav kapcsoló reaktorba való bevezetése előtt. A kapcsolási reakció sikerességét a szintézis minden egyes lépésében E. Kaiser Analyt. Biochem. 34, 595 (1970) közleményében leírt eljárással ellenőrizhetjük.
Az alfa-aminocsoporton védett aminosav gyanta hordozóra való kapcsolása után a védőcsoportot bármely alkalmas eljárással, mint például trifluor-ecetsav diklórmetánban történő alkalmazásával, trifluorecetsav egyedüli alkalmazásával, vagy sósavasd dioxán alkalmazásával eltávolítjuk. A védőcsoport eltávolítását körülbelül 0 °C-szobahőmérséklet közötti hőmérékleten végezzük. Más specifikus alfa-aminocsoport védőcsoportok eltávolítására alkalmas eljárást is alkalmazhatunk. Miután az alfa-aminocsoport védőcsoportot eltávolítottuk, a kívánt sorrendben más aminocsoporton védett aminocsoportot kapcsolhatunk. Más esetben több aminosav egységet kapcsolhatunk oldószerben végzett eljárással és ezt kapcsolhatjuk a gyantára felvitt szekvenciához.
Miután a kívánt aminosav szekvenciát előállítottuk, a peptidet a gyantáról lehasítjuk és védőcsoportjait eltávolítjuk. Ezt a reakciót hidrolízissel, mint például a gyanta-polipeptid termék vízmentes folyékony hidrogénfluoriddal savkötőszer (például anizol) jelenlétében végzett reagáltatásával végezhetjük. Jellemzően a védőcsoport eltávolítást azután végezzük, miután a peptid lánc szintézise befejeződött, de a védőcsoportok bármely alkalmas ponton is eltávolíthatók.
A védőcsoport mentesített peptid tisztítása és analízise számos ismert eljárással végezhető. A megfelelő tisztítási és analitikai eljárásokat a szakember könnyen kiválaszthatja. Alkalmas tisztítási eljárás a preparatív nagynyomású folyadék kromatográfia. A tisztított peptidek analízisét analitikai nagynyomású folyadékkromatográfia, aminosav analízis, gyors atom bombázásos tömegspektroszkópia, és más alkalmas módszerek segítségével végezhetjük.
Terápiás alkalmazás:
A találmány szerinti peptid származék terápiásán hatásos dózisa 0,2 mg/kg testtömeg/nap - 250 mg/kg testtömeg/nap érték - attól függően, hogy a kezelendő beteg betegsége milyen és milyen állapotú. Az alkalmas hatásos dózis könnyen megállapítható. Előnyösen 1-4 napi dózist adagolunk, amely jellemzően 5 mg100 mg aktív hatóanyagot tartalmaz dózisonként.
A találmány szerinti eljárással előállított peptid mennyisége, mely meggátolja a véralvadást testen kívüli közegben, például miközben a vért tárolják, a szakember által könnyen meghatározható.
A véralvadásgátló terápia számos trombózisos megbetegedés kezelésére alkalmas. Például alkalmas szívkoszorúér trombózis, agytrombózis kezelésére. A szakember felismeri, hogy melyek azok a körülmények, amikor véralvadásgátló terápia alkalmazása szükséges. A „beteg” elnevezés alatt főemlősöket, az embert is beleértve, valamint az emlősöket mint birkát, lovat, marhát, disznót, kutyát, macskát, patkányt és egeret értünk. A véralvadásgátló terápia nemcsak a trombózisos betegek kezelésére alkalmas, hanem minden esetben alkalmazható, amikor a vér koagulálása nemkívánatos. Például alkalmazható tárolt teljes vér esetében, valamint analitikai vizsgálatra vett tárolt vérminták esetében is.
Habár bizonyos peptid származékok túlélik a nyelőcsövön való áthaladást- orális adagolás esetében is, a feltalálók előnyösnek találják a nem orális adagolás alkalmazását. Például alkalmazható beültetett injekció forma; beültetett preparátum forma; vagy nyálkahártyán keresztül adagolt forma, mint például orr, torok vagy hörgő adagolású forma, például aeroszol forma, amely a találmány szerinti peptid származékot száraz por formában tartalmazza.
A parenterális adagolás esetében a találmány szerinti vegyületek adagolhatok injektálható formált oldat vagy szuszpenzió formában. Ebben az esetben a hatóanyagot gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyaggal, mint például steril folyadékkal, például vízzel és olajokkal, amelyek ilyen készítményben alkalmazhatók, például állati, növényi vagy szintetikus eredetű olajjal, például mogyoróolajjal, szójaolajjal, és ásványi olajjal, petrolátummal elegyítve formáljuk. Általában víz, fiziológiás sóoldat, vizes dextróz oldat és hasonló cukor oldat, etanol és glikol, mint például propilénglikol vagy polietilén-glikol oldat alkalmazható előnyös hordozó anyagként az adott injektálható formált alakokban.
A találmány szerinti vegyületek adagolhatok beültetett injekció vagy preparátum formában, amelyet olyan módon állítunk elő, hogy lehetővé tegye a hatóanyag késleltetett, lassú kibocsátását. Az aktív hatóanyag labdacsokká préselhető, vagy kis hengeres formára préselhető és szubkután, vagy intramuszkulárisan a szervezetbe ültethető, mint beültetett formált alak. A beültetett anyagokban különféle hordozóanyagokat, mint például biológiailag lebontható polimereket, vagy szintetikus szilikonokat például Silastic szilikongumit alkalmazhatunk, ami utóbbi a DowComing Corp. terméke.
HU 207 103 B
A találmány szerinti eljárást az alábbi példákon részletesen bemutatjuk.
7. példa
A pepiidet szilárd fázisú eljárással állítjuk elő, amelyben 8,3 mmól 0,56 mmól/g Boc D-Glu(Bzl) Merrified gyantát alkalmazunk Vega félautomata peptid szintetizátorban. Az egyes szimmetrikus anhidrid kapcsolásokat 18,3 mmól Nallíl-Boc-aminosavakkal (Peptides International) hajtjuk végre, kivéve a BocCha kapcsolást, amely két kapcsolási reakciót igényelt ahhoz, hogy negatív Kaíser-féle tesztvizsgálati eredményt szolgáltasson. A peptid gyanta aliquot részeit (0,7-1,5 g) a 3-8. lépések során különválasztva tároljuk, a des-Glu57 számára 1,36 g (0,50 mmól) Boc-ProIle-Pro-Glu(Bzl)-Glz(Blz)-Ala-Cha-D-Glz(Bzl)-Merri field gyanta mintát teszünk félre, a 8. ciklus után. A védett peptid fragmenset Biosystems reakcióedénybe helyezzük, ahol Boc-Tyr(2-BrZ) vegyületet kapcsolunk hozzá kétszeres szimmetrikus anhidrid kapcsolási reakcióban, amelyben 0,2 mmól aminosavat alkalmazunk. Az Nalfa-Boc védőcsoportot 50% trifluorecetsav diklórmetános oldattal eltávolítjuk, majd a reakcióelegyet 10%-os diizopropil-etil-aminnal történő mosással diklőmietánban semlegesítjük. Ezután háromszor diklónmetánnal mossuk, majd nitrogénáramban megszárítjuk. A pepiidet Nalfa-szukcinil-csoporttal látjuk el, kétszeres borostyánkősav anhidriddel dimetil-formamidban végzett kapcsolás segítségével, majd háromszor dimetil-formamiddal mossuk, kétszer 10%-os diklórmetános diizopropil-etil-aminnal történő mosással semlegesítjük és végül vákuumban szárítjuk. A pepiidről a védőcsoportot eltávolítjuk és a pepiidet a gyantáról lehasítjuk vízmentes hidrogénafluorid alkalmazásával, amely 5% anizolt tartalmaz. A hasítási reakciót 60 percig 5 °C-on végezzük. A hidrogénfluoridot vákuumban 0 °C-on elpárologtatjuk, majd a pepiidet a gyantáról 25% vizes acetonitrillel extraháljuk, fagyasztjuk és liofilizáljuk.
C18 Beckman, 50,8x150 mm oszlopon preparatív nagynyomású folyadékkromatográfiás elválasztást végzünk lineáris gradiensen 29-6-31,6% acetonitril 0,1% vizes trifluorecetsavban képzett eluenssel 15 percig 80 ml/perc áramlási sebesség alkalmazásával. A fő csúcsot (kijelezve 280 nm értéknél) gyűjtjük és liofilizáljuk. 281 mg kívánt terméket kapunk. A termék homogenitását nagynyomású folyadékkromatográfia segítségével határozzuk meg: Vydac 218TP54 (4,6x250 mm) C18 oszlop; 2,0 ml/perc; t0= 1,5 perc, elúciós idő 15-40% acetonitril lineáris gradiens akalmazásával 25 perc az oldat 0,1% trifluorecetsav alapú, majd 17,1 perc 0,1% trifluorecetsavas oldat eluens alkalmazása.
A tisztított jelzett peptidek analízise FAB-MS analízisben kívánt molekulaiont szolgáltat és aminosav analízisben a kívánt pepiidet mutatja. Az alábbi módon a következő peptideket vizsgáltuk, amik az alábbi fizikai jellemzőkkel rendelkeznek.
A mintákat thrombin bevezetéssel indukált fibrin rög képződési kísérletben ihibiálás vizsgálatnak vetjük alá.
Valamennyi a vizsgálatban alkalmazott oldatot 0,12 mól nátriumkloridot, 0,01 mól nátriumfoszfátot, 0,01% nátriumazidot és 0,1% marha szérumalbumint tartalmazó pH 7,4 pufferrel készítünk. A marhaszérum thrombin koncentrációt megfelelő értékre állítjuk be, hogy a fibrin rög képződést miktotitráló lemez kijelző segítségével (Bio-Tek EL 309) követhessük 60 perc időtartamon belül 405 nm mellett. A thrombin oldatot (50 mikro 1; 0,2 pmól) a mikrotitráló lemez edényeihez adjuk, amelyek a tesztelt peptid 50 mikro 1 mennyiségét tartalmazták. 1 perc keverés és 10 perc 24 °C-on történt inkubálás után 100 mikro 1 hígított plazma (1:1) 0,1 %-os EDTA oldatban készült elegyét adjuk a keverékhez és örvénykeverésnek vetjük alá 20 mp-ig. Az oldat turbiditását inhibitort nem tartalmazó oldathoz hasonlítottuk és feljegyeztük. Az oldat turbiditását 5 percenként automatikus leolvasón leolvassuk. Az eredményekből IC50 értéket számolunk, ami a peptid azon koncentrációja, ami ahhoz szükséges, hogy az inhibitort nem tartalmazó minta turbiditásának 50%-os csökkenését érjük el. Ez ekvivalens a fibrin rög képződési idő kétszeresre való növekedésével.
A kísérletekben, amelyekben emberi, vagy marha thrombint alkalmaztunk, ennek koncentrációját úgy állítottuk meg, hogy 30 perc időtartam alatt ugyanolyan sebességű rögképződést mutassanak. Ezen az értékelési alapn a + jelzett peptidek 25 mikromól-200 mikromól, közötti és a ++ jelzett peptidek kisebb mint 25 mikromól IC értéket mutatnak.
1. Suc-Tyr-Pro-IIe-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-D-GluOH
MW 1200 FAB-MS (MH)+ 1201 Z(3) Pro(2) Ile(l) Tyr(l) Ala(l)
3,08 1,97 0,96 0,99 0,99
In vitro aktivitása
2. H-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Glu-Glu-Tyr-LeuGln-OH
MW 1370 FAB-M;S (MH)+ 1371 Z(5) Ile(l) Tyr(l) Gly(l)B(l) Phe(I)Leu(l) 4,93 0,85 0,95 1,09 1,10 1,08 0,99
In vitro aktivitás: +
3. Suc-Tyr-Glu-Pro-Tiq-Glu-Glu-Ala-Cha-D-GluOH
MW 1278 FAB-MS (MH)+ 1279
Z(4) Pro(l) Ile(l) Tyr(l) Ala(l) Cha(l)
4,05 0,93 0,96 0,95 1,03 1,03
In vitro aktivitás: ++
4) Suc-Tyr-Glu-Pro-IIe-Pro-Glu-Glu-Aia-Gln-NHj
MW 1158 FAB-MS (MH)+ 1175 Z(4) Pro(2) Ilet(l) Tyr(l) Ala(l)
4,15 1,94 0,96 1,01 0,95
In vitro aktivitás: ++
5. Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Cha-Gln-NH2
MW 1256 FAB-MS (MH)+ 1257 Z(4) Pro(2) Ile(I) Tyr(l) Ala(l)
4,15 1,98 0,91 0,97 1,05
In vitro aktivitás: ++
6. Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Ala-Cha-Asn-OH MW 1184 FAB-MS (MH)4 1185
B(l) Z(2) Prö(2) Ile(l) Tyr(l) Ala(l)
1,02 2,09 1,98 0,93 1,01 0,97
HU 207 103 B
In vitro aktivitás: ++
7. Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Asn-OH MW 1161 FAB-MS (MH)+ 1162
Z(3) Pro(2) Ile(l) Tyr(l) Ala(l) B(l)
3,14 1,95 0,95 1,00 0,96 1,01
In vitro aktivitás: ++
8. Mal-Tyer-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-D-GluOH
MW 1198 FAB-MS (MH)+ 1198 Z(3) Pro(2) Ile(l) Tyr(l) Ala(l)
3,06 2,01 0,95 0,99 1,01
In vitro aktivitás: +
9. Sulc-Nap-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-D-GluOH
MW 1234 FAB-MS (MH)+ 1234 Z(3) Pro(2) Ile(l) Ala(l)
3,08 2,00 0,94 0,97 In vitro aktivitás: ++ lO.Suc-Tyr-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-D-GluOH
MW 1232 FAB-MS (MH)+ 1233 Z(4) Pro(l) Ile(l) Tyr(l) Ala(l)
4,07 0,99 0,96 0,98 0,99 In vitro aktivitás: +
11. Suc-Tyr-Glu-Pro-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-D-GluOH
NW 1216 FAB-MS (MH)+ 1217 Z(4) Pro(2) Tyr(l) Ala(l)
4,05 1,97 0,98 1,00
In vitro aktivitás: +
12.Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Glu-Glu-Ala-Cha-D-GluOH
MW 1232 FAB-MS (MH)+ 1233 Z(4) Pro(l) Ile(l) Tyr(l) Ala(l)
4,10 1,0 0,94 0,96 0,99
In vitro aktivitás: ++ l3.Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Ala-Cha-D-GluOH
MW 1200 FAB-MS (MH)+ 1201 Z(3) Pro(2) Ile(l) Tyr(l)Ala(l)
3,16 1,97 0,93 0,96 0,98
In vitro aktivitás: ++
14. Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-D-GluOH
MW 1176 FAB-MS (MH)+ 1177 Z(4) Pro(2) lle(l) Tyr(l) Ala(l)
4,08 1,97 0,96 099 1,00
In vitro akvitás: ++
15.Suc-Tyr-Glu-Pro-IIe-Pro-Glu-Glu-Cha-D-GluOH
MW 1258 FAB-MS (MH)+ 1259 Z(4) Pro(2) Ile(l) Tyr(l)
4.10 2,01 0,91 0,98 In vitro aktivitás: ++
16. Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-GlnOH
MW 1175 FAB-MS (MH)+ 1175 Z(4) Pro(2) Ile(l) Tyr(l) Ala(l)
4.11 1,98 0,93 1,01 0,97 In vitro aktivitás: ++
17.Suc-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Gln-NH2M W 1158 FAB-MS (MH)+ 1159 Z(4) Pro(2) Ile(l) Ala(l)Phe(l)
4.10 2,05 0,93 0,96 0,97 In vitro aktivitás: +
18. Suc-Tyr-Glu-Pro-lle-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-OH MW 1200-FAB MS (MH)+ 1201 Glx(3)Pro(2) Ile(l) Tyr(l) Ala(l)
3.10 1,94 0,98 0,99 0,99 In vitro aktivitás: ++
19. Suc-Glu-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-D-Glu-OH MW 1166 FAB-MS (MH)+ 1167 Glx(4)Pro(2) Ile(l) Ala(l)
4,12 1,95 0,96 0,98
In vitro aktivitás: +
Claims (10)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOKEljárás X—A |—A 2—A3—A4—A3—A 7—Ag—A9—A |θ—Y (1) általános képletű peptidek, vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóik előállítására, ahol az általános képletbenX jelentése amino-végcsoport, amely lehet hidrogénatom, kétértékű 2-8 szénatomszámú alkanoil-, benziloxi-karbonil vagy t-butoxi-karbonilcsoport;A! jelentése Gly-Asp, Tyr-Pro-Ile-Pro, Tyr-Glu-ProTiq, Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro, Tyr-Glu-Ile-Pro, NpaPro-Ile-Pro, Tyr-Glu-Pro-Pro, Tyr-Glu-Pro-Ile, PheGlu-Pro-Ile-Pro, vagy Glu-Pro-Ile-Pro;A2 jelentése Phe, SubPhe, pChloroPhe, D-Phe, NMePhe vagy egy kötés;A3 jelentése Glu vagy Asp;A4 Glu, Asp, Alá vagy egy kötés;As jelentése Ile, Val, Leu, Nle, Alá, D-Leu vagy egy kötés;A7 jelentése Glu, Asp vagy egy kötés;Ag jelentése Glu, Asp vagy egy kötés;A9 jelentése Tyr, Ι-Tyr, D-Tyr, Cha vagy egy kötés; Árjelentése Asp, D-Asp, Asn, Glu, D-Glu vagy Gin;Y jelentése hidroxil- vagy aminocsoport azzal jellemezve, hogyi) a C-terminális védett A,o aminosavat egy gyantához kötjük, majd ii) sorrendben hozzákötjük az A9-A, csoportnak megfelelő védett aminosavakat, majd iii) a védőcsoportat eltávolítjuk és kívánt esetben a kapott pepiidet tisztítjuk.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, olyan (1) általános képletű vegyületek előállítására, ahol az általános képletben A2 jelentése Phe, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
- 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, olyan (1) általános képletű vegyületek előállítására,, ahol az általános képletben A3 jelentése Glu, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
- 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, olyan (1) általános képletű vegyületek előállítására, ahol az általánosHU 207 103 Β képletben A5 jelentése Ile, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
- 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, olyan (1) általános képletű vegyület előállítására, ahol az általános képletben A7 jelentése Glu, azzal jellemezve, hogy a megfelelően szubsztituált kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
- 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás, olyan (1) általános képletű vegyület előállítására, ahol az általános képletben A8 jelentése Glu vagy Asp, azzal jellemezve, 10 hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
- 7. Az I. igénypont szerinti eljárás, olyan (1) általános képletű vegyületek előállítására, ahol az általános képletben A9 jelentése Cha, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
- 8. Az 1. igénypont szerinti eljárás, olyan (1) általános képletű vegyületek előállítására, ahol az általános képletben A10 jelentése D-Glu, vagy Asn, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkal5 mázzuk.
- 9. Az 1. igénypont szerinti eljárás, olyan (1) általános képletű vegyületek előállítására, ahol az általános képletben X jelenetése hidrogénatom, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
- 10. Eljárás véralvadásgátló gyógyszerkészítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti eljárással előállított (1) képletű peptidet, melynél X, Y, A|-A10 jelentése az 1. igénypontban megadott, gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyaggal összekeverve gyógyszerkészítménnyé alakítjuk.Kiadja az Országos Találmányi Hivatal, Budapest A kiadásért felel: dr. Szvoboda Gabriella osztályvezető
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US41633689A | 1989-10-03 | 1989-10-03 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HU906270D0 HU906270D0 (en) | 1991-03-28 |
HUT55800A HUT55800A (en) | 1991-06-28 |
HU207103B true HU207103B (en) | 1993-03-01 |
Family
ID=23649539
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU906270A HU207103B (en) | 1989-10-03 | 1990-09-28 | Process for producing anticoagulant peptides and pharmaceutical compositions comprising same |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0421367B1 (hu) |
JP (1) | JP2899391B2 (hu) |
KR (1) | KR0154528B1 (hu) |
CN (1) | CN1050720A (hu) |
AT (1) | ATE165369T1 (hu) |
AU (1) | AU634280B2 (hu) |
CA (1) | CA2026376C (hu) |
DE (1) | DE69032258T2 (hu) |
ES (1) | ES2117624T3 (hu) |
FI (1) | FI904852A0 (hu) |
HU (1) | HU207103B (hu) |
IE (1) | IE903532A1 (hu) |
IL (1) | IL95863A0 (hu) |
NO (1) | NO904292L (hu) |
NZ (1) | NZ235497A (hu) |
PT (1) | PT95486A (hu) |
ZA (1) | ZA907742B (hu) |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU633128B2 (en) * | 1987-01-23 | 1993-01-21 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Anticoagulant peptides |
EP0540574B1 (en) * | 1990-07-24 | 1996-09-11 | Merrell Pharmaceuticals Inc. | Anticoagulant peptides |
ZA915658B (en) * | 1990-07-24 | 1992-05-27 | Merrell Dow Pharma | Analogs of hirudin having antiplatelet activity |
US5574012A (en) * | 1990-07-24 | 1996-11-12 | Merrell Pharmaceuticals Inc. | Analogs of hirudin having anti-platelet activity |
WO1992015610A1 (fr) * | 1991-03-05 | 1992-09-17 | Nippon Mining Company Limited | Analogue d'hirudine ou sel de ce compose, sa production, et anticoagulant le contenant en tant qu'ingredient actif |
IT1250689B (it) * | 1991-07-22 | 1995-04-21 | Marco Gerna | Analoghi dell'irudina e procedimento per la loro preparazione |
WO1993004082A1 (en) * | 1991-08-20 | 1993-03-04 | Baxter International Inc. | Analogs of hirudin |
ATE246203T1 (de) * | 1993-06-11 | 2003-08-15 | Merrell Pharma Inc | Trifunktionelle antithrombin-und antiplättchenpeptide |
TWI315494B (en) | 2006-06-06 | 2009-10-01 | Silicon Motion Inc | Memory module with display functions and display unit thereof |
CN104193809B (zh) * | 2014-09-28 | 2016-08-17 | 顾玉奎 | 一种凝血酶抑制及其制备方法、应用 |
CN110981953B (zh) * | 2019-12-13 | 2021-10-08 | 首都医科大学 | 一种多肽和多肽的应用及包含多肽的组合物 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA1341032C (en) * | 1987-01-23 | 2000-06-20 | John L. Krstenansky | Anticoagulant peptides |
AU633128B2 (en) * | 1987-01-23 | 1993-01-21 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Anticoagulant peptides |
EP0333356A3 (en) * | 1988-03-04 | 1990-12-19 | Biogen, Inc. | Hirudin peptides |
ZA899247B (en) * | 1988-12-07 | 1990-09-26 | Merrell Dow Pharma | Anticoagulant peptides |
FR2667071A1 (fr) * | 1990-09-26 | 1992-03-27 | Adir | Nouveaux derives de peptides et de pseudopeptides therapeutiquement actifs dans la cascade de coagulation sanguine, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent. |
-
1990
- 1990-09-27 ZA ZA907742A patent/ZA907742B/xx unknown
- 1990-09-27 CA CA002026376A patent/CA2026376C/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-09-28 NZ NZ235497A patent/NZ235497A/xx unknown
- 1990-09-28 HU HU906270A patent/HU207103B/hu not_active IP Right Cessation
- 1990-09-29 KR KR1019900015868A patent/KR0154528B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1990-09-30 CN CN90108049A patent/CN1050720A/zh active Pending
- 1990-10-01 AU AU63688/90A patent/AU634280B2/en not_active Ceased
- 1990-10-01 IL IL95863A patent/IL95863A0/xx unknown
- 1990-10-02 PT PT95486A patent/PT95486A/pt not_active Application Discontinuation
- 1990-10-02 IE IE353290A patent/IE903532A1/en unknown
- 1990-10-02 NO NO90904292A patent/NO904292L/no unknown
- 1990-10-02 JP JP2263234A patent/JP2899391B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1990-10-02 FI FI904852A patent/FI904852A0/fi not_active IP Right Cessation
- 1990-10-03 DE DE69032258T patent/DE69032258T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-10-03 AT AT90118903T patent/ATE165369T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-10-03 EP EP90118903A patent/EP0421367B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-10-03 ES ES90118903T patent/ES2117624T3/es not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0421367A1 (en) | 1991-04-10 |
AU6368890A (en) | 1991-04-11 |
PT95486A (pt) | 1991-07-05 |
FI904852A0 (fi) | 1990-10-02 |
NZ235497A (en) | 1993-05-26 |
DE69032258D1 (de) | 1998-05-28 |
JP2899391B2 (ja) | 1999-06-02 |
JPH03120297A (ja) | 1991-05-22 |
ATE165369T1 (de) | 1998-05-15 |
CN1050720A (zh) | 1991-04-17 |
AU634280B2 (en) | 1993-02-18 |
IE903532A1 (en) | 1991-04-10 |
CA2026376A1 (en) | 1991-04-04 |
DE69032258T2 (de) | 1999-03-11 |
ES2117624T3 (es) | 1998-08-16 |
HUT55800A (en) | 1991-06-28 |
KR0154528B1 (ko) | 1998-10-15 |
NO904292D0 (no) | 1990-10-02 |
ZA907742B (en) | 1991-07-31 |
IL95863A0 (en) | 1991-07-18 |
HU906270D0 (en) | 1991-03-28 |
CA2026376C (en) | 2002-01-01 |
NO904292L (no) | 1991-04-04 |
KR910007960A (ko) | 1991-05-30 |
EP0421367B1 (en) | 1998-04-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0276014B1 (en) | Anticoagulant peptides | |
EP0421366B1 (en) | Radiolabeled anticoagulant peptides | |
AU618118B2 (en) | Neuropeptide agonists | |
EP0291982B1 (en) | Cyclic anticoagulant peptides | |
EP0291981B1 (en) | Cyclic anticoagulant peptides | |
HU207103B (en) | Process for producing anticoagulant peptides and pharmaceutical compositions comprising same | |
US5192747A (en) | Anticoagulant peptides | |
EP0341607B1 (en) | Anticoagulant peptide alcohols | |
EP0443429B1 (en) | Stabilized sulfonate and sulfate derivatives of hirudin | |
AU630132B2 (en) | Anticoagulant peptides | |
CA2086243C (en) | Anticoagulant peptides | |
AU640502B2 (en) | Analogs of hirudin having antiplatelet activity | |
AU685470B2 (en) | Trifunctional antithrombin and antiplatelet peptides | |
US4971953A (en) | Anticoagulant peptide alcohols | |
US5789540A (en) | Anticoagulant peptides | |
US5232912A (en) | Anticoagulant peptides | |
US5574012A (en) | Analogs of hirudin having anti-platelet activity |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |