HU201802B - Pesticide preparation containing bacillus thuringiensis hybrid cells as agent and process for producing hybrid cells - Google Patents

Pesticide preparation containing bacillus thuringiensis hybrid cells as agent and process for producing hybrid cells Download PDF

Info

Publication number
HU201802B
HU201802B HU864519A HU451986A HU201802B HU 201802 B HU201802 B HU 201802B HU 864519 A HU864519 A HU 864519A HU 451986 A HU451986 A HU 451986A HU 201802 B HU201802 B HU 201802B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
bacillus thuringiensis
strain
hybrid
hybrid cells
tenebrionis
Prior art date
Application number
HU864519A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT45557A (en
Inventor
Dimitri Karamata
Jean-Christophe Piot
Original Assignee
Sandoz Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sandoz Ag filed Critical Sandoz Ag
Publication of HUT45557A publication Critical patent/HUT45557A/hu
Publication of HU201802B publication Critical patent/HU201802B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
    • C07K14/325—Bacillus thuringiensis crystal peptides, i.e. delta-endotoxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/22—Bacillus
    • A01N63/23—B. thuringiensis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/075—Bacillus thuringiensis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Description

A találmány tárgya Bacillus thuringiensis (az alábbiakban: B. t.) hibridsejteket tartalmazó peszticid készítmény és eljárás a hatóanyagként alkalmazott B. t. hibridsejtek előállítására. Közelebbről, a találmány olyan B. t. hibridsejtek előállítására vonatkozik, amelyek egy B, t. kurstaki delta-endotoxint kódoló gént hordozó plazmidot és egy B. t. tenebrionis delta-endotoxint kódoló gént horodozó plazmidot tartalmaznak; ezek a hibridsejtek egy endotoxinkristályt termelő B. t. kurstaki törzs és egy endotoxinkristályt termelő B. t. tenebrionis törzs konjugácójával hozhatók létre, és mind a B. t. kurstaki törzsre jellemző delta-endotoxinkrÍstályok, mind a B. t. tenebrionis törzsre jellemző delta-endotoxinkristályok termelésére képesek. A B. t. kurstaki törzsek delta-endotoxinknstályai kettős piramis-alakúak. A B. t. tenebrionis törzsek deltaendotoxinkristályai hasáb (vagy kocka-) alakúak. A találmány szerinti eljárással előállított B. t. hibridek révén lehetővé válik biológiai úton olyan kértevők irtása, amelyek a B. t. kurstaki és a B. t. tenebrionis anyatörzsekkel elpusztíthatok.
A találmány szerint a B. t. hibridsejteket a szokásos módon kaphatjuk úgy, hogy egy delta-endotoxint termelő B. t. kurstaki törzset és egy delta-endotoxint termelő B. t. tenebrionis törzset konjugálunk, s az így kapott B. t. hibridsejteket ismert módon elkülönítjük. A konjugáció technikai megoldásai a géntechnológia területén jól ismertek [lásd például: J. M. Gonzalez és B. C. Carlton: „Plasmid Transfer in Bacillus thuringiensis”, a következő helyen: „Genetic and Cellular Technology”, 1 kötet, 85-95. oldal (A genetikai kicserélődésről), szerk. L. P. Gage, J982j, Marcel Dekker, Inc., New York és Basel)].
A konjugációt előnyösen egy konjugáló plazmiddal valósítjuk meg: célszerűen alkalmazhathatjuk például a Streptococcus faecalis-ból kapott pAMBl plazmidot, amelyet általában β-plazmid néven ismernek. Ez utóbbit ismert módszerrel vezethetjük be egy B. t. törzsbe (lásd például Η. M. Fischer: „Plasmid und Plasmidübertragungbei Bacillus thuringinesis”, PHD Thesis ETH Nr. 7375, Swiss Federal Institute of Technology, ADAG Administration and Drick AG, 1983,83 oldal: valamit Gonzalez és munkatársai fentebb idézett munkája). Az így kapott β-plazmidot tartalmazó B. t. törzs donorként szerepe a kurstaki és tenerbrionis törzsek közötti konjugációban.
A konjugátumok (azaz a találmány szerinti eljárással előállított, hibrid B. t. törzsek) kimutatásának és elkülönítésének megkönnyítésére mind a donor, mind a befogadó (recipiens) sejtet genetikai jelzővel (markerrel) látjuk el. Az ilyen jelzők ismert módon vezethetők be. Ismeretes például, hogy gram-pozitív baktériumokban a β-plazmid eritrimicinnel szemben rezisztenciát hoz létre. Ez a sajátság felhasználható minden olyan törzs kiküszöbölésére, amelyek a konjugáció után ezzel a sajátsággal nem rendelkeznek.
Ha a másik konjugációs partnert is jelezzük, például egy másik antibiotikummal - így tetraciklinnel - szemben megnyilvánuló, indukált vagy spontán rezisztenciával, akkor lehetségessé válik az összes olyan törzsek kiküszöbölése, amelyek nem rendelkeznek mindkét genetikai jelzővel (azaz lehetővé válik a nem konjugált törzsek eltávolítása). Ez úgy érhető el, hogy a mikroorganizmusokat megfelelő, eritromicint és tetraciklint tartalmazó táptalajon szaporítjuk. Ilyen táptalajon csak azok az organizmusok lesznek képesek a szaporodásra, amelyek mindkét genetikai jelzővel - tehát mind az eritromicinnel, mind a tetraciklinnel szemben megnyilvánuló rezisztenciával - rendelkeznek.
A találmány szerinti eljárással előállított B. t. hibrideket ismert módon különíthetjük el például úgy, hogy mind a B. t. kurstaki, mind a B. t. tenebrionis törzsekre jellemző típusú kristályokat tartalmazó tenyészeteket vizuálisan azonosítjuk; vagy pedig az azonosítást ismert módon, biológiai vagy biokémiai módon végezzük. A találmány szerint a B. t. hibridsejtek előállítása céljából előnyösen úgy járunk el, hogy egy B. t. kurstaki törzset egy B. t. tenebrionis törzzsel konjugálunk, aminek során a donortörzs valamilyen konjugáló plazmidot, és mind a donor, mind a befogadó törzs az elkülönítés szempontjából megfelelő genetikai jelzőt tartalmaz. Általában úgy járunk el előnyösen, hogy a találmány szerinti eljárás végrehajtása során a konjugációs folyamatban egy B. t. kurstaki törzset alkalmazunk donorként.
A konjugálást célszerűen valamilyen nitrogénforrást, szénhidrátokat és szaporodást elősegítő anyagokat tartalmazó közegben, 20-40 °C hőmérséídettartományban végezzük.
A kiinduló anyagokat a szokásos módon nyerhetjük úgy, hogy ismert B. t. kurstaki és B. t. tenebrionis törzsekből indulunk ki.
Az inkubálás időtartma általában 4-96 óra, aminek során a cseppfolyós közeget célszerűen levegőztetjük vagy rázatjuk.
A találmány szerinti eljárással előállított B. t. hibrid törzseket az Amerikai Egyesült Államok Földművelésügyi Kutató Szolgálatának Északi Körzeti Kutatási Központjában (NRRL) NRRL β-18011, NRRL B-18012 és NRRL B-18013 számon helyeztünk letétbe.
A találmány szerinti eljárást az alábbi nemkorlátozó jellegű kiviteli példában részletesen ismertetjük. É példában β-plazmidot tartalmazó donorként B. t. kurstaki törzset alkalmazunk; ez a plazmid olyan konjugáló plazmid, amelyjelzőként eritromicin-rezisztenciával rendelkezik. A befogadó B. t. tenerbrionis törzs spontán tetraciklin-rezisztenciával rendelkező mutáns.
Az alábbiakban a hőmérséklet-értékeket Celsius-fokban, a részeket tömegrészben adjuk meg.
Példa
A konjugáció végrehajtása
2,5 ml logaritmikus növekedési szakaszban levő B. t. kurstaki HD-73 (NRRL N-4488) törzstenyészetet, amely a Streptococcus faecalis pAMBl konjugáló fragmentumát tartalmazza, és 2,5 ml logaritmuikus növekedési fázisban levő, spontán tetraciklin-rezisztens B. t. tenebrionis mutáns tenyészetet (Deutsche Sammlung für Mikroorganismen, DSM 2803) (mindkettőből körülbelül 5 x 107 sejt/ml) összekeverünk, majd cellulóz-acetát membránszűrőn (Oxid/Nuflow; 0,45 μιη nyílásnagyság, 25 mm
-2HU 201802 Β átmérővel) szűrjük. Ezután a szűrőt Luria-közeg (a továbbiakban: LA) lemezre helyezzük (1 liter Luria-közeg 15 g agar-agart, 10 g triptont, 5 g élesztőkivonatot, 10 g nátrium-kloridot és 0,02 g timidint tartalmaz vizes oldatban), és 16-24 órán át 37 °C 5 hőmérsékleten inkubáljuk.
Ezután a szűrőt 0,5 ml folyékony LA-közegben (agar-agar nélkül) szuszpendáljuk, erélyesen homogenizáljuk, majd 10° és 10'1 hígításban olyan LA-lemezekre helyezzük, amelyek 50 gg/ml eritro- 10 micint és 5 p-g/ml tetraciklint tartalmaznak. így a nemkonjugált sejtek elkülönülnek.
Az így kapott, eritromicinnel és tetraciklinnel szemben rezisztens konjugált sejteket olyan közegben helyezzük, amely a spóraképzést lehetővé teszi, 15 majd mikroszkóppal ellenőrizzük a delta-endotoxinok jelenlétét és jellegét: a hibrid törzsekben a sporangium felhasadása előtt a B. t. var. kurstaki törzsekre jellemző kettős piramis-alakú kristályt és egy B. t. varr. tenebrionis törzsekre jellemző hasáb- 20 (vagy kocka-) alakú kristályt tartalmaz. Ezeknek a kristályoknak a mérete megközelítőleg 2 gm, és a fáziskontrasztos mikroszkóppal könnyen kivehetők.
Ennek megfelelően a hibridek vizuális azonosí- 25 tás útján könnyen elkülöníthetők. A hibridsejtekből álló tenyészetek (LA-lemezeken, 16 óra elmúltával, ’C hőmérsékleten) alaktani szempontból a B. t. tenebrionis tenyészetekkel azonosak, a kurstaki tenyészetektől azonban az alábbi jellegzetességek 30 alapján könnyen megkülönböztethetők:
A tenyészetek Tenebrionis vagy hibridsejtek Kurstaki sejtek 35
alakja: szabálytalan körkörös
domborzata: kiemelkedő domború
széle: hullámos ép
felülete: durva sima 40
A plazmidok a donortörzsből a befogadó törzsbe történő bevezetése fizikai úton is kimutatható a keletkezekett hibridsejtekből extrahált DNS aga- 45 róz-gélen végzett elektroforézissel. A DNS-molekulákat (plazmidokat) etidium-bromiddal való festés után UV-fénnyel besugrázva tesszük láthatóvá, és lefényképezzük [D. Lereclus és munkatársai:
Mól. Gén. Génét. 191,307 (1983)].
A találmány szerinti eljárással előállított legtöbb hibridsejt - többek között - tartalmazza a befogadó B. t. tenebrionis törzsből származó, jellemző 10 megadaltonos plazmidot és a B. t. kurstaki donortörzsre jellemző 5,6 megadaltonos plazmidot. A B. t. kurstaki és B. t. tenebrionis delta-endotoxinját kódoló gént tartalmazó plazmidok molekulatömege megközelítőleg azonos, s ennek következtében a hibridtörzs plazmidogramjában csak nehezen különböztethető meg.
A találmány szerinti eljárással előállított B. t. hibridek hasznos inszekticid sajátságokkal rendelkeznek: mind a B. t. kurstaki törzsekkel, mind a B. t. tenebrionis törzsekkel szemben érzékeny kártevők ellen hatásosak. Általában a hibridsejtek inszekticid sajátságai az inszekticid hatékonyság vagy a hatásspektrum vagy mindkettőnek a szempontjából előnyösebbek, mint a konjugáló anyatörzsek fizikai keverékének az inszekticid tulajdonságai.
A találmány szerinti eljárással előállított B. t. hibridsejtek meglepő peszticid sajátságait a Trichoplustis ni (káposztahernyó), Spodoptera littoralis (egyiptomi gyapotlevélféreg) és a Phaedon cochleariae (mustárbogár) lárváival szemben mutatott hatásulckal igazoltuk az alábbi biológiai vizsgálattal:
A hatás biológiai mérése
108 spóra/ml koncentrációjú vizes szuszpenziót mikroszórópisztoly segítségével közepes méretű kínai káposztalevélre permetezünk a lecsepegtetés kezdetéig. A permetezésssel rávitt bevonat megszáradása után minden egyes levelet nedves szűrőpapírra helyezünk egy 9 cm átmérőjű műanyag petricsészében. Ezután minden egyes csészébe 10 (második fázisú lárvaállapotban levő) rovart helyezünk; minden egyes rovarfajtához 3 csészét alkalmazunk.
A mérést 25 ’C hőmérsékleten, klimatizált kamrában, 65% viszonylagos páratartalom mellett, 16 órás megvilágítási periódussal végezzük.
E körülmények között a lárvákat öt napon át a kezelt levelekkel etetjük, majd megállapítjuk a lárvák pusztulását, és azt százalékos értékben fejezzük ki.
Eredményeiket az alábbi táblázatban foglaljuk össze.
A pusztulás százalékos értéke 5 nap után
B. t. hibridtörzs Spodotera Trichoplusia Phaedon
L21001 87 100 100
L21004 90 100 100
L21016 97 100 100
L21017 97 100 100
L21019(1) 93 100 100
Kurstaki HD73(1) 3 100 0
Tenebrionis^ 0 0 100
”k + t” tankkeverék^ 0 100 43
-3HU 201802 Β
6 (1) β-plazmiddal (a konjugációs példában való alkalmazás szerint) y' tetraciklin-rezisztens törzs (a konjugációs példában való alkalmazás szerint) ™ Ezt a keveréket úgy állítottuk elő, hogy közvetlenül a permetező kijuttatás előtt kurstakr1) és tenebrionis^2' törzset egyenlő arányban szuszpendáltunk, majd a szuszpenzió összkoncentrááóját 108 spóra/ml értékre állítottuk be.
A fentiekben ismertetett néhány hibridtörzset 1985, október 15-én az, Agricultural Research Culture Collection (NRRL)” gyűjteményben (Peoria, 10 Illinois 61604, USA) letétbe helyeztük. Az L21004, L21017 és L21019 törzsek a B-18011, B-18012, illetve B-18013 NRRL-sorszámot kapták.
A fenti táblázat adatai azt mutatják, hogy az L21001, L21004, L21006, L21017 és L21019 hibri- 15 dek nemcsak azon rovarfajták ellen hatásosak, amelyek az anyatörzsekkel szemben érzékenyek, hanem - meglepő módon - hatásuk olyan rovarfajtákra, például a Spodoptera fajra is kiterjed, amelyek az anyatörzsekkel szemben nem érzékenyek. 20 Ezek az eredmények különösen azért meglepők, mert az anyatörzseket tartalmazó egyszerű keverék kevésbé aktív a Phaedon-nal szemben, mint a tenebrionis törzs önmagában, és Spodoptera-ra hatástalan. 25
A találmány körébe tartozik az a módszer is, amelynek segítségével rovarok leküzdhetők olyan módon, hogy a rovarokra vagy azok tartózkodási helyére egy találmány szerinti eljárással előállított B. t. hibrid inszekticid szempontból hatásos 30 mennyiségét jutatjuk.
A találmány szerinti eljárással előállított B. t. hibrideket célszerűen inszekticid készítmény - például szuszpenziós koncentrátum vagy por - alakjában alkalmazzuk. 35
Az ilyen készítmények célszerűen hígítószereket és előnyösen további, inszekticid hatás szempontból elfogadható adalékokat - például az ultraibolya fénnyel szemben védő szereket, felületaktív szereket, emulgeálószereket - tartalmaznak. Ezeket a 40 készítményeket a szokásos módon készítjük, amint ez a B. t. törzseket tartalmazó, biológiai inszekticid szerek esetében ismeretes.
Az alkalmazott hígítószerek folyékony vagy szilárd, mezőgazdasági szempontból elfogadható 45 anyagok lehetnek, amelyeket a B. t. hibridekhez adhatunk azzal a céllal, hogy azokat könnyebben vagy kedvezőbben kijuttatható alakba hozzuk, illetve a hatóanyagot úgy hígítjuk, hogy a hatás erőssége alkalmas vagy a megkívánt mértékű legyen. 50
Könnyen belátható, hogy a találmány szerint konjugációval kapott B. t. hibridek a továbbiakban gazdaságosabban reprodukálhatók és szaporíthatók nitrogénforrást (például hallisztet), szénhidrátforrást (például keményítőt) és ásványi sókat tártál- 55 mazó, körülbelül 7-es pH-értékű táptalajon végzett fermentációval.
E fermentációt célszerűen 20 és 40 °C közötti hőmérséklet-tartományban, például 30 °C hőmérsékleten végezzük. A fermentáció kedvező időtar- 60 tama 24-72 óra, például 36 óra.
A találmány szerinti eljárással előállított B. t. hibridekből célszerűen úgy készítünk szuszpenziós koncentrátumot, hogy a fermentációs folyadékot a kívánt töménységig bepároljuk, majd kívánt eset- 65 ben a maradékhoz adalékanyagot adunk.
Hasonló módon állíthatunk elő nedvesíthető porkészítményt úgy, hogy a fermentációs folyadékot adott esetben ultraibolya sugárzással szemben védő anyagok, emulgeálószerek és más adalékanyagok hozzáadása után permetszárításnak vetjük alá, majd az így kapott szilárd anyagot porítjuk.
Az így kapott készítmények a hígítószerként alkalmazott tenyésztőközeg komponenseinek jelentős részét tartalmazzák.
Eljárhatunk úgy is, hogy a fermentációs folyadékot centrifugáljuk, így a táptalaj nagyobb méretű részecskéit elkülönítjük, majd a fentiek szerint megfelelő szuszpenziós koncentrátummá vagy nedvesíthető porkészítménnyé alakítjuk. Az előnyös készítmények a formulázott termék 1 mg-jára vagy ml-ére számítva például 1000-40000 NE hatóanyagot tartalmaznak.
Oldható koncentrácum előállítása
Körülbelül 1,86% cukormelaszt, 1,4% olajmentes gyapotmag-fehérjelisztét, 1,7% kukoricalé-szilárdanyagot és 0,1% kalcium-karbonátot tartalmazó vizes táptalajt állítunk elő, a pH értékét 7,2-7,6ra állítjuk be, az így kapott terméket 20-30 percig 121 °C hőmérsékleten sterilizáljuk, majd térfogatára számítva 5% B. t. hibriddel eltoljuk. A tenyésztést keverés közben, 34,5 kPa nyomáson, 30 °C inkubációs hőmérsékleten végezzük. A fermentációs folyadékot ekkor 18-20 °C-ra hűtjük, és a pH értékét tömény kénsavval 5,5-re állítjuk be. Ezután a folyadékot 0,105 lyukbőségű szűrőn átszűrjük, a szűrt tenyészetet centrifugáljuk a szennyezések egy részének az eltávolítása céljából, majd a kívánt koncentrációjú térfogatra töményítjük. A koncentrátumhoz 0,4 tömeg% emulgeálószert [például izooktil-fenil-poli(oxi-etanol)-t] és 0,8 tömeg% ultraibolya fényt elnyerő szert adunk.
Nedvesíthető por előállítása
A fentiekben leírt, bepárolt koncentrátumot permetezve szárítjuk, és az így kapott, technikai minőségű koncentrátumot olyan „vivőanyagkeverékkel” keverjük, amely 10% szilícium-dioxidból és 90% szójababfehérjéből áll. A vivőanyagkeverék mennyisége a technikai koncentrátum hatáserősségétől és a nedvesíthető por kívánt hatáserősségétől függ.
Ehhez a nedvesíthető porhoz 0,4 tömeg% emulgeálószert és 0,8 tömeg% ultraibolya fényt elnyelő szert adhatunk.
A találmány szerinti eljárással előnyösen olyan B. t. hibrideket állíthatunk elő, amelyeket befogadó törzsként B. t. tenebrionis és donortörzsként B. t. kurstaki konjugációval kaptunk.
-4HU 201802 Β
Nedvesíthető por előállítása Az alábbi komponenseket:
tömeg% fagyasztva szárított B. t. hibridek tömeg% acetilén-diol típusú felületaktív anyag tömeg% nedvesítőszer, például nátrium-lauril-szulfát tömeg% diszpergálöszer, például lignin-szulfonát tömeg% őrlést elősegítő anyag, például szilícium-dioxid kontraplex malomban közelítőleg 10000 fordulat/perc sebességgel 20 mikrométernél kisebb méretre őröljük, és a kapott terméket vízzel elegyítjük.
Az aktív hatóanyag koncentrációja 5 x 10° és 5 x 10° spóra/mg határok között változik, és előnyösen 5 x 10' spóra/mg.

Claims (6)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Peszticid készítmény, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként a Bacillus thuringiensis kurstaki delta-endotoxinját kódoló gént és a Bacillus thuringiensis tenebrionis delta-endotoxinját kódoló gént tartalmazó, hibrid Bacillus thuringiensis sejteket 25 tartalmaz 5 x 10° spóra/mg-tól 5 x 10° spóra/mg-ig terjedő koncentrációban.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti peszticid készítmény, azzal jellemezve, hogy a Bacillus thuringiensis kurstaki törzsre jellemző delta-endotoxin kristályok és a Bacillus thuringiensis tenebrionis törzsre jellemző felta-endotoxinkritályok termelésére képes hibrid baktériumsejteket tartalmaz.
  3. 3. Eljárás az 1. igénypont szerinti peszticid készítmény hatóanyagát képező Bacillus thuringiensis hibridsejtek előállítására, azzal jellemezve, hogy
    a) egy Bacillus thuringiensis kurstaki törzset és egy Bacillus thuringiensis tenebrionis törzset konjugálunk, és
    b) az a) szerint előállított hibridsejteket táptalajon fermentációs körülmények között szaporítjuk.
  4. 4. Az 1. igénypont szerinti peszticid készítmény, azzal jellemezve, hogy Bacillus thuringiensis hibridként NRRL B-18011 számon letétbe helyezett törzset tartalmaz.
  5. 5. Az 1. igénypont szerinti peszticid készítmény, azzal jellemezve, hogy Bacillus thuringiensis hibridként NRLL B-18012 számon letétbe helyezett törzset tartalmaz.
  6. 6. Az 1. igénypont szerinti peszticid készítmény, azzal jellemezve, hogy Bacillus thuringiensis hibridként NRRL B-18013 számon letétbe helyezett törzset tartalmaz.
HU864519A 1985-10-30 1986-10-28 Pesticide preparation containing bacillus thuringiensis hybrid cells as agent and process for producing hybrid cells HU201802B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB858526774A GB8526774D0 (en) 1985-10-30 1985-10-30 Bacillus thuringiensis hybrids

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT45557A HUT45557A (en) 1988-07-28
HU201802B true HU201802B (en) 1990-12-28

Family

ID=10587498

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU864519A HU201802B (en) 1985-10-30 1986-10-28 Pesticide preparation containing bacillus thuringiensis hybrid cells as agent and process for producing hybrid cells

Country Status (22)

Country Link
US (1) US4797279A (hu)
EP (1) EP0221024B1 (hu)
JP (1) JPS62107782A (hu)
KR (1) KR870004134A (hu)
CN (1) CN86107242A (hu)
AT (1) ATE73846T1 (hu)
AU (1) AU596125B2 (hu)
BR (1) BR8605301A (hu)
CA (1) CA1325393C (hu)
CS (1) CS270443B2 (hu)
DE (1) DE3684406D1 (hu)
DK (1) DK516386A (hu)
ES (1) ES2035823T3 (hu)
GB (1) GB8526774D0 (hu)
GR (1) GR3004102T3 (hu)
HU (1) HU201802B (hu)
IE (1) IE59560B1 (hu)
IL (1) IL80441A0 (hu)
NZ (1) NZ218078A (hu)
PL (1) PL153465B1 (hu)
PT (1) PT83634B (hu)
ZA (1) ZA868281B (hu)

Families Citing this family (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4889918A (en) * 1983-12-21 1989-12-26 Boehringer Mannheim Gmbh Protein tokin from bacillus thiringiensis which is toxic to coleoptera
US5024837A (en) * 1987-05-06 1991-06-18 Donovan William P Coleopteran active microorganisms, related insecticide compositions and methods for their production and use
US5080897A (en) * 1987-05-08 1992-01-14 Ecogen Inc. Novel bacillus thuringiensis strains, and related insecticidal compositions
US4910016A (en) * 1987-08-03 1990-03-20 Mycogen Corporation Novel Bacillus thuringiensis isolate
US4902507A (en) * 1987-08-14 1990-02-20 Canadian Patents & Development Ltd. Toxic strains of the bacterium Bacillus thuringiensis for control of the bertha armyworm Mamestra configurata
US5147640A (en) * 1988-11-07 1992-09-15 Ecogen Inc. Strains of bacillus thuringiensis insecticidal compositions containing the same
BR9007159A (pt) 1989-02-24 1991-12-10 Monsanto Co Genes sinteticos de plantas e processo para a preparacao dos mesmos
US6855873B1 (en) 1989-05-31 2005-02-15 Bayer Bioscience, N.V. Recombinant plant expressing non-competitively binding Bt insecticidal cryatal proteins
US5908970A (en) * 1989-05-31 1999-06-01 Plant Genetic Systems N.V. Recombinant plant expressing non-competitively binding Bt insecticidal crystal proteins
EP0400246A1 (en) * 1989-05-31 1990-12-05 Plant Genetic Systems, N.V. Prevention of Bt resistance development
US5874289A (en) * 1989-11-17 1999-02-23 Abbott Laboratories Bacillus thuringiensis mutants which produce high yields of crystal delta-endotoxin
US5279962A (en) * 1989-11-17 1994-01-18 Novo Nordisk A/S Mutants or variants of Bacillus thuringiensis producing high yields of delta endotoxin
US5187091A (en) * 1990-03-20 1993-02-16 Ecogen Inc. Bacillus thuringiensis cryiiic gene encoding toxic to coleopteran insects
US5698440A (en) 1990-11-14 1997-12-16 Abbott Laboratories Bacillus thuringiensis mutants which produce high yelds of crystal delta-endotoxin
US5264364A (en) * 1991-01-31 1993-11-23 Ecogen Inc. Bacillus thuringiensis cryIIIc(B) toxin gene and protein toxic to coleopteran insects
US5461032A (en) * 1991-03-01 1995-10-24 Fmc Corporation Insecticidally effective peptides
WO1993003619A1 (en) * 1991-08-19 1993-03-04 Research Corporation Technologies, Inc. Multi-targeted bacillus thuringiensis bioinsecticide
IL104419A0 (en) * 1992-01-24 1993-05-13 Fmc Corp Insecticidally effective peptides
EP0582541A3 (en) * 1992-05-01 1995-04-19 Sandoz Ltd Process for the creation of Bacillus thuringiensis strains capable of conjugation.
US5457178A (en) * 1993-07-07 1995-10-10 Fmc Corporation Insecticidally effective spider toxin
US5756459A (en) * 1995-06-07 1998-05-26 Fmc Corporation Insecticidally effective peptides isolatable from phidippus spider venom
US6270785B1 (en) 1996-04-30 2001-08-07 Universidad Nacional Autonoma De Mexico Primary sequence and cDNA of insecticidally effective toxins from scorpions of the genus centruroides
US6063756A (en) 1996-09-24 2000-05-16 Monsanto Company Bacillus thuringiensis cryET33 and cryET34 compositions and uses therefor
US5942664A (en) 1996-11-27 1999-08-24 Ecogen, Inc. Bacillus thuringiensis Cry1C compositions toxic to lepidopteran insects and methods for making Cry1C mutants
US6023013A (en) * 1997-12-18 2000-02-08 Monsanto Company Insect-resistant transgenic plants
US6060594A (en) * 1997-12-18 2000-05-09 Ecogen, Inc. Nucleic acid segments encoding modified bacillus thuringiensis coleopteran-toxic crystal proteins
US6077824A (en) * 1997-12-18 2000-06-20 Ecogen, Inc. Methods for improving the activity of δ-endotoxins against insect pests
US6063597A (en) * 1997-12-18 2000-05-16 Monsanto Company Polypeptide compositions toxic to coleopteran insects
DK1040192T3 (da) 1997-12-18 2006-12-18 Monsanto Technology Llc Insekt-resistente transgene planter og fremgangsmåder til forbedring af delta-endotoksin-aktivitet mod insekter
US7232918B2 (en) * 2001-11-06 2007-06-19 Shell Oil Company Catalyst composition
US7232786B2 (en) 1998-09-14 2007-06-19 Shell Oil Company Catalyst composition
TR200100748T2 (tr) * 1998-09-14 2001-08-21 Shell Internationale Research Maatschappij B.V. Katalitik özelliklerin geliştirilmesi amacıyla katalizör yüzeyinden iyonlaşabilir türlerin çıkarılması için bir işlem
AU757735B2 (en) * 1998-09-14 2003-03-06 Shell Internationale Research Maatschappij B.V. Epoxidation catalyst carrier, preparation and use thereof
US7504525B2 (en) * 1998-09-14 2009-03-17 Shell Oil Company Catalyst composition
US6501009B1 (en) 1999-08-19 2002-12-31 Monsanto Technology Llc Expression of Cry3B insecticidal protein in plants
US6593273B2 (en) 2000-10-06 2003-07-15 Monsanto Technology Llc Method for reducing pest damage to corn by treating transgenic corn seeds with pesticide
US6586365B2 (en) 2000-10-06 2003-07-01 Monsanto Technology, Llc Method for reducing pest damage to corn by treating transgenic corn seeds with clothianidin pesticide
US9816104B2 (en) * 2000-10-06 2017-11-14 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for deploying a transgenic refuge as a seed blend
US8080496B2 (en) 2000-10-06 2011-12-20 Syngenta Crop Protection, Inc. Method for reducing pest damage to corn by treating transgenic corn seeds with thiamethoxam pesticide
US7705216B2 (en) * 2002-07-29 2010-04-27 Monsanto Technology Llc Corn event PV-ZMIR13 (MON863) plants and compositions and methods for detection thereof
US20040224841A1 (en) * 2003-05-07 2004-11-11 Marek Matusz Silver-containing catalysts, the manufacture of such silver-containing catalysts, and the use thereof
US20040225138A1 (en) * 2003-05-07 2004-11-11 Mcallister Paul Michael Reactor system and process for the manufacture of ethylene oxide
MX260863B (es) 2003-05-07 2008-09-26 Shell Int Research Catalizadores que contienen plata, su elaboracion y uso de los mismos.
TW200613056A (en) * 2004-04-01 2006-05-01 Shell Int Research A process for preparing a silver catalyst, the catalyst, and a use of the catalyst for olefin oxidation
TW200602123A (en) * 2004-04-01 2006-01-16 Shell Int Research Process for preparing a catalyst, the catalyst, and a use of the catalyst
TW200600190A (en) * 2004-04-01 2006-01-01 Shell Int Research Process for preparing a silver catalyst, the catalyst, and use thereof in olefin oxidation
KR20070057974A (ko) * 2004-09-24 2007-06-07 셀 인터나쵸나아레 레사아치 마아츠샤피 비이부이 성형 입자의 선택방법, 시스템 설치방법, 이러한시스템에서 기체성 공급원료를 반응시키는 방법, 컴퓨터프로그램 제품 및 컴퓨터 시스템
EP2125202A2 (en) 2006-11-20 2009-12-02 Shell Internationale Research Maatschappij B.V. A process for treating a carrier, a process for preparing a catalyst, the catalyst, and use of the catalyst
US10036036B1 (en) 2007-03-15 2018-07-31 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for deploying a transgenic refuge as a seed blend
CA2760697C (en) 2009-05-03 2017-10-17 Monsanto Technology Llc Systems and processes for combining different types of seeds
MX2013012709A (es) 2011-05-02 2013-12-06 Pioneer Hi Bred Int Estrategia de analisis de arnm bacteriano para descubrir nuevas moleculas de acido nucleico codificante de pesticidas.
WO2014182473A1 (en) 2013-05-08 2014-11-13 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for deploying a transgenic refuge seed blend
CN103497907B (zh) * 2013-08-02 2015-11-18 国家海洋局第三海洋研究所 高空芽孢杆菌在对虾养殖中的应用
CN103805535B (zh) * 2013-11-28 2016-06-22 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 一种同温层芽胞杆菌及微生物菌剂和它们的应用
KR101725048B1 (ko) * 2015-02-16 2017-04-11 건국대학교 산학협력단 음식물 쓰레기에서의 탄수화물 및 단백질 분리 공정
WO2023156906A1 (en) 2022-02-15 2023-08-24 Futuragene Israel Ltd A bacillus thuringiensis pesticidal protein (bt pp) combination useful for plant protection

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4259474A (en) * 1979-09-25 1981-03-31 Gaf Corporation Sulfur-containing polyoxyalkylenes
DE3346138A1 (de) * 1983-12-21 1985-07-11 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Bacillus thuringiensis var. tenebrionis sowie ein insektizid wirkendes, hieraus erhaeltliches praeparat bzw. toxin sowie deren verwendung zur bekaempfung von coleoptera
GB8425487D0 (en) * 1984-10-09 1984-11-14 Agricultural Genetics Co Strain of bacillus thuringiensis

Also Published As

Publication number Publication date
BR8605301A (pt) 1987-07-28
ZA868281B (en) 1988-06-29
CA1325393C (en) 1993-12-21
DE3684406D1 (de) 1992-04-23
US4797279A (en) 1989-01-10
CS782986A2 (en) 1989-11-14
PT83634A (en) 1986-11-01
KR870004134A (ko) 1987-05-07
DK516386D0 (da) 1986-10-28
IL80441A0 (en) 1987-01-30
EP0221024A2 (en) 1987-05-06
GR3004102T3 (hu) 1993-03-31
IE59560B1 (en) 1994-03-09
AU596125B2 (en) 1990-04-26
AU6450986A (en) 1987-05-07
DK516386A (da) 1987-05-01
CN86107242A (zh) 1987-05-13
ATE73846T1 (de) 1992-04-15
CS270443B2 (en) 1990-06-13
PL262107A1 (en) 1987-12-28
PL153465B1 (en) 1991-04-30
EP0221024A3 (en) 1988-06-01
EP0221024B1 (en) 1992-03-18
IE862830L (en) 1987-04-30
ES2035823T3 (es) 1993-05-01
PT83634B (pt) 1989-05-31
HUT45557A (en) 1988-07-28
NZ218078A (en) 1989-08-29
GB8526774D0 (en) 1985-12-04
JPS62107782A (ja) 1987-05-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU201802B (en) Pesticide preparation containing bacillus thuringiensis hybrid cells as agent and process for producing hybrid cells
TWI280976B (en) A novel strain of bacillus for controlling plant diseases and uses thereof
US5968503A (en) Use of streptomyces bacteria to control plant pathogens and degrade turf thatch
SU1448995A3 (ru) Штамм бактерий BacILLUS тнURINGIеNSIS VaR.теNевRIоNSIS дл производства инсектицидного препарата против насекомых СоLеортеRа Spp.
DK175186B1 (da) Fremgangsmåde til fremstilling af bakteriestammer
CA2216794C (en) Use of streptomyces bacteria to control plant pathogens and degrade turf thatch
JP2571842B2 (ja) 新規なバチルス・スリンギエンシス菌株、それらの分離方法および関連する組成物
KR0133924B1 (ko) 바실루스 투린지엔시스 형질전환 방법
US4133716A (en) Method for the biosynthesis of a microbial insecticide
KR19990069306A (ko) 바실러스 투린지엔시스 엔티 0423 균주의 내독소 단백질 및 이를 이용한 미생물 살충제
EP0411582B1 (en) Bacillus thuringiensis var. donegani and preparation or toxin obtained therefrom, endowed with insecticidal activity against coleoptera
RU1483941C (ru) Штамм бактерий bacillus thuringiensis var. thuringiensis для получения энтомопатогенного препарата
IL86242A (en) Transconjugant bacillus thuringiensis strains, insecticidal compositions containing them and method for their use

Legal Events

Date Code Title Description
HPC4 Succession in title of patentee

Owner name: ECOGEN INC., US

HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee