HU192989B - Process for production of phisiologically active hormone preparatives - Google Patents

Process for production of phisiologically active hormone preparatives Download PDF

Info

Publication number
HU192989B
HU192989B HU843112A HU311284A HU192989B HU 192989 B HU192989 B HU 192989B HU 843112 A HU843112 A HU 843112A HU 311284 A HU311284 A HU 311284A HU 192989 B HU192989 B HU 192989B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
hormone
hgh
antibody
fragment
antibodies
Prior art date
Application number
HU843112A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT35529A (en
Inventor
Roger Aston
Gyoergy Ivanyi
Andrew T Holder
Original Assignee
Wellcome Found
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26286770&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU192989(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from GB838322115A external-priority patent/GB8322115D0/en
Priority claimed from GB838322826A external-priority patent/GB8322826D0/en
Application filed by Wellcome Found filed Critical Wellcome Found
Publication of HUT35529A publication Critical patent/HUT35529A/hu
Publication of HU192989B publication Critical patent/HU192989B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/26—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against hormones ; against hormone releasing or inhibiting factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/61—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
    • C07K14/615—Extraction from natural sources
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Szabadalmas: (73)
The Wellcome Foundation Ltd., London, GB (54) El__IÁRÁS FIZIOLÓGIAILAG AKTÍV HORMONKÉSZÍT MENYEK ELŐÁLLÍTÁSÁRA (57) KIVONAT
A találmány fokozott GH, PRL, CS vagy TSH hatású készítmények előállítási eljárására vonatkozik.
A találmány szerinti eljárással nyert készítmények, amelyek specifikus, hormon elleni monoklón antitesteket tartalmaznak, gerinceseknél az adott hormonnal együtt vagy anélkül adagolva, képesek a hormonok biológiai hatását fokozni. Amennyiben hormonként növekedési hormont alkalmazunk, a találmány szerinti készítményekkel, iparilag fontos állatok növekedését gyorsíthatjuk.
A találmány fiziológiailag aktív hormonkészítmények előállítására vonatkozik.
.Hormon megnevezés alatt általában olyan anyagokat értünk, amelyek a szervezet egyik részén felszabadulva, a szervezet egy másik, távolabbi részén szelektíve hatnak. Az ilyen anyagok egy része az endocrln mirigyekből választódik ki, igy például a növekedési hormon az agyfüggelék-mirigy (hypophlsls) szekréciós terméke. Egy adott célszövet szelektivitását a szövetben jelenlévő receptorok (vagy a receptorok hiánya) biztosítják, amelyek képesek specifikusan megkötni ezeket az anyagokat. Fehérje hormonok esetében - ilyen például az inzulin - a receptorok a sejtek felületén vannak. Az interferon az emlősök sejtjeinek vírusokkal szembeni védelmére szolgál. Ez azonban nem egy endocrln mirigy szekréciós terméke, és nem specifikus valamely célszövetre, mint például a növekedési hormon, hanem egy glükozilált óriás fehérjemolekula, amely bizonyos sejtek felületi receptoraihoz kötődik. Ezenkívül vannak még bizonyos anyagok, amelyek azáltal befolyásolják a sejtek hatásosságát, hogy a sejtek felületén levő specifikus receptorokhoz kötődnek, ilyenek például a tumor necrosis factor és a lymphokine, például az interleukinok. A továbbiakban a leírás során .hormon megnevezés alatt mindig olyan anyagokat értünk, amelyek peptidek vagy polipeptidek, adott esetben glükozilált polipeptidek, és felületi receptorokkal rendelkeznek.
Kimutatták, hogy bizonyos inzulin és epidermális növekedési hormon elleni antitestek növelik vagy utánozzák ezen hormonok in vitro aktivitását [Y. Schechter et al.: Proc. Nat. Acad. Sci. 76(6), 1979, 2720; és Y. Schechter et. al.: Natúré 278, 835, 1979]. Feltételezték, hogy ez a hatás jön létre, hogy a két értékű antitest a hormon receptorok aggregációját hozza létre a sejtek felületén, amely aggregációnak szerepe van a sejten belüli második messenger aktiválásában. Egyértékű antitest F ab fragmensek ilyen aktiváló (fokozó) vagy szimuláló hatást nem mutatnak. Ezek a tanulmányok kizárólag az inzulin és az EGF receptorok, és ezen belül a hormonok hatásmechanizmusának jellemzésével foglalkoznak. Továbbá nem mindegyikben állapítottak meg ilyen aktiváló hatást [de Plrro et al.: Diabetologia 19, 1980, 118. és Schechter et al.: Proc. Nat. Acad. Sci., 75(12), 1978, 5788], és nem történt utalás arra sem, hogy Ilyen aktiváló hatás in vivő Is bekövetkezik vagy hogy e jelenség szélesebb körben is alkalmazható. Az Inzulin és más hormonok elleni antitestekről azt tartották, hogy In vivő kedvezőtlen hatásúak, mivel a hormon-antitest komplexeket a test Immunrendszere tisztítja, és messze nem aktiválás, hanem gátlás megy végbe a növekedési hormon [Schwartz J.: Endocrinology, 107(4), 877; Fraiser: Endocrin Rewiews 4(2),
155 és Gause et al.: Endocrinology 112(5), 1559], valamint a luteinizáló hormon [Blake and Kelch: Endocrinology 109(6), 2175] esetében.
Meglepetésre azt találtuk, hogy bizonyos, hormonok elleni specifikus antitestek képesek e hormonok hatását növelni vagy utánozni, feltéve, hogy az antitestek epitóp specificitását megfelelően megválasztjuk.
A találmány szerinti eljárással előállított készítmények felhasználásával - amelyek hormonok, így pl. növekedési hormon (GH), prolactin (PRL), chorionic somatomamotropin (CS) vagy thyroid stimuláló hormon (TSH) elleni antitesteket vagy az adott hormonból és e hormon elleni antitestből képzett komplexeket tartalmaznak - lehetőség van .normál gerinceseknél a hormonadagolás hatásának növelésére vagy utánzására. A találmány értemében .normál gerincesek megnevezése alatt értünk minden olyan egyedet, amelyek hormonjai elegendő mennyiségű endogént tartalmaznak a hormon által szabályozott szövetek működéséhez.
A találmány szerinti eljárással előállított készítmények továbbá előnyösen alkalmazhatók humán egyedek és gerincesek kezelésére, amelyek hormon-szabályozásű szöveti funkciója abnormális alacsony.
A találmány értelmében különösen a növekedési hormon, és a pajzsmirigy stimuláló hormon adagolásával elérhető hatás növelése vagy utánzása jelentős.
Egy adott hormon hiányából adódó megbetegedések általában ismertek, így nem szükséges Ismertetni őket. Néhányat példaként azért megemlítünk. Ilyenek például a növekedési hormon hiányából eredő hypophisis törpeség, valamint a thyroid stimuláló hormon hiányából eredő kreténizmus, golyva és myxedema.
Egy adott hormon .elleni antitest kifejezés alatt azt értjük, hogy az antitest a hormonhoz képes kötődni. így nem szükséges, hogy az antitest az adott hormonban választ hozzon létre. így például növekedési hormon (GH) ellen kitermelt különböző antitestek keresztreakcióba lépnek a chorionic somatomammotropin (CS) hormonnal is, mivel e két hormonnak azonos szekvenciái vannak. Lehetséges továbbá antitesteket kitermelni szintetikus analógok vagy hormonok egy része ellen is.
Meg kell jegyezni, hogy nem kell, hogy az antitestek szükségszerűen azon faj specifikus hormonjai elleni antitestek legyenek, amely fajoknál a találmány szerinti készítményt vagy eljárást alkalmazzuk, de előnyös, ha azonos. Azt találtuk, hogy nem minden antitest növeli vagy utánozza az adott hormonadagolásának hatását. Az antitesteknek ez a találmány szerinti képessége függ bizonyos epecifikus determinánsoktól (azaz antigén-helyzetektől). így könnyen belátható, hogy poli klón antitestek (ezek antitestek cso-24 portjai, amelyek egy sor determináns speclficitással rendelkeznek) kevésbé alkalmasak a találmány szerinti készítmények vagy eljárás céljaira, mint a monoklón antitestek. E találmányi leírás segítségével a területen jártas szakember könnyedén ki tudja választani rutinjellegű kísérletek segítségével az alkalmas monoklón antitesteket. Bizonyos esetekben az alkalmas monoklón antitestek keverékét alkalmazzuk. Mindazonáltal ismert immunlzációs folyamatok során termelt emberi vagy állati antiszérumok is felhasználhatók, ha rendelkeznek az antitestek leírt epitóp spéci fitásával. Különösen előnyös monoklón antitestek a növekedési hormon (GH) és a chorionic somatomammotropln (CS) elleni EBO1 és EB02 monoklón antitestek. A QB01 antitest prolactin esetében előnyös.
Azt találtuk, hogy a leírt hatás eléréséhez, ha az antitesteket csak magukban adagoljuk, szükséges a hormonok jelenléte az állatokban. így például .normál egyedek esetében a kiválasztott antitest egyedüli adagolása is a megkívánt hatást eredményezi, de például olyan egyedek esetében, amelyeknél nincs endogén GH - így például hypophlsls törpe gyermekek esetében - szükséges a GH-t külön, de nem szükséges az antitesttel egyidőben, adagolni.
A megfelelő tulajdonságú antitesteket nemcsak az egyedeken kívül, hanem úgy is előállíthatjuk, hogy beinjekciózzuk az egyedbe a megfelelő növekedési hormon molekula egy kiválasztott fragmensét alkalmas hordozóanyaggal elkeverve. A fragmenst úgy választjuk meg, hogy csak azt az epitópot vagy epitópokat foglalja magában, amelyre a hormon hatását fokozó antitest specifikus, és a hormon molekula alkalmas hasításával vagy a peptld-fragmens (vagy a megfelelő analóg) szintetizálásval állítjuk elő.
Ha a hormonnak olyan részét választjuk, amely sok hidrofil gyököt tartalmaz, ezek egyike valószínűleg kialakít vagy kiválaszt egy fragmenst (egy .antigén determinánst), amely a teljes hormonmolekula felületén van és amely így keresztreakcióba lép a teljes hormonmolekulával. Ugyanígy, ha a fragmens nem tartalmazna olyan hormonhelyeket, amelyek a sejt felületen levő receptorokhoz kötődnek, sem bármilyen olyan helyet, amely egy harmadik anyagot megkötve alaki változással ilyet létrehoz, a receptorkötés gátolttá válik. Másszóval, a képződött antitestek inkább gátolják, mint növelik a hormonok hatását. A fenti típusú sikeres immunizációkor az állatokban szűk specifitású poliklón antitestkollekció képződik, és lehetővé válik a kevésbé gyakori injekciózás, amely egyébként az antitesteket kívülről való passzív adagolásakor szükséges. Belátható, hogy tényleges fragmens helyett funkcionális fragmens Is alkalmazható, amelyben a nem kívánatos epltopok bár jelen vannak, de az antitestekhez való hozzáférhetőségük valamilyen módon gátolt. A leírásban tényleges és funkcionális fragmenseket egyaránt értünk a .fragmens megnevezés alatt.
A fentieknek megfelelően a találmány értelmében gerinceseknél növelhetjük a hormonszabályozott választ olyan készítmények adagolásával is, amelyek a megfelelő hormonnak legalább egy, előzőek szerint definiált, kiválasztott .fragmensét tartalmazzák alkalmas hordozóanyaggal elkeverve.
A találmány szerinti készítmények előállításánál a vakcinákban az antigén immunogenitását fokozó immunológiai hordozóanyagokat alkalmazunk így például keyhole limpet organizmusból származó haemocyanint Sigma Chemical Co. vagy tetanus toxoidot. Továbbá, az immunrendszer stimulálására szolgáló adjuvánsokat Is alkalmazunk, így például alumínium-hidroxidot, saponint vagy muramil-dipeptidet. Az egységdózis általában 0,001-10 pmól, előnyösen 0,01-0,05 pmól antigént tartalmaz, de a szakember megítélésétől függően ettől a mennyiségtől el is lehet térni.
Az antitestek passzív adagolása esetében azokat KM-IO7, előnyösen 105-10® ABTso egységnyi mennyiségben adagoljuk alkalmas steril hordozóanyag 0,01-10 ml-es, előnyösen 0,5 ml-es mennyiségében elkeverve.
Csak a három következő hormont (GH, CS és PRL) figyelembevéve a találmány szerinti készítmények és eljárások a következő területeken hasznosíthatók:
a) a teljes kifejlett nagyság elérésének gyorsítása iparilag fontos tenyészállatok, így például szarvasmarhák, sertések, baromfik esetében, vagy e nagyság elérése kevesebb táplálékkal,
b) ezen állatok esetében a növekedés fokozása a normális maximum fölé,
c) tejelválasztás időtartamának és mértékének növelése emlősök esetében, így például szarvasmarhák esetében nagyobb tej hozam biztosítása, vagy humán alkalmazási területen a gyermekek szoptatásának biztosítása,
d) hús/zsír aránya növelése tenéyszállatok esetében,
e) gyapjú, szőrme, vagy más hasonló állati termék hozamának növelése, például birkák esetében,
f) GH-károsult egyedek, például törpe gyermekek normális növekedésének biztosítása.
A fenti esetek mindegyikében a találmány szerinti eljárások alkalmazásával jelentős költség és munkamegtakarítás érhető el ahhoz képest, mintha csak tisztán hormonkezelést alkalmazunk,· továbbá a kívánt hatást kevesebb mennyiség felhasználásával érhetjük el. Ez utóbbi azt Is jelenti, hogy az állatok tejében és húsában csökken az esetlegesen káros anyagok mennyisége. Végül, igen előnyös, hogy a találmány szerinti készítményeket az állatoknak egyébként rutinszerűen adagolt más készítményekkel, igy például a száj és körömfájás elleni vakcinákkal együtt adagolhatjuk.
A találmány szerinti eljárásokat a következő nem korlátozó példákon keresztül mutatjuk be részletesen.
A példákban alkalmazott rövidítések Je-
lentése:
hGH humán növekedési hormon
hCS humán chorionic somatomammotropin
hPRL humán prolactin
bGH szarvasmarha növekedési hormon
MAB monoklonális antitest
PBS foszfáttal pufferolt sóoldat
PMSF fenil-metil-szulfonil-fluorid
ig immunoglobulin
MHC fő hlstocompatibilis komplex
SPRIA szilárd fázisú radioimmunovizsgálat
Wtn súly 0 időpontban
SDS-PAGE SDS poliakrllamid gél elektroforézis
EDTA etilén-diamin tetraecetsav
RIA radioimmuni vizsgálat
Statisztikai kiértékelések:
A számtani középértékeket és standard deviációt az ismert módszerek alapján számítottuk. Az egyes csoportok közötti különbségeket az Ismert Student-féle páratlan vizsgálattal határoztuk meg.
Az ábrák leírása:
1. ábra az A példára vonatkozik és a törpe egereknél a találmány szerinti készítménnyel elért súlytöbbletet mutatja;
2. ábra a C példára vonatkozik és a normál egereknél elért súlytöbbletet mutatja;
3. ábra a D példára vonatkozik és a galamb-begy súlytöbbletet mutatja;
4. ábra az E példára vonatkozik és a selyemmajom esetében mért súlytöbbletet mutatja.
Készítmény előállítási példák
1. példa
Humán növekedési hormon (hGH) elleni monoklón antitest előállítása
A kísérletnél alkalmazott antitesteket igen kiterjedten jellemezték [Iványi J.: Monoclon Hybridoma Antibodies, Techniques and Appliecations, (ed. Hussel, J.G.R.) CRC Press, Cleveland, Ohio, 1982, 59-79; és Iványi J.: Mól. Immunoi. 19, 1982, 1611-1618] és a következő helyen beszerezhetők: Wellcome Diagnostics, Temple HŰI, Dartford, Kent, UK. (Dr.C. Milsteln, MTC Laboratory of Mól. Blol. Hills Road, Cambridge, UK)
BALB (c egérlép sejteket NSI myeloma sejtekkel) egyesítettünk és ismert eljárások szerint klónoztuk (Iványi J. és Davis P.: Mól. Immunoi. 17, 1982, 287-290, és Protides of the Bioi. Fluids 29, Colloqulum, 1981). A kapott antitestek mindegyike IgGi izotípusú, és nem precipitálódnak, amikor kettős diffúzióval vizsgáljuk agaron. A kompetiticiós vizsgálattal négy determinánst határoztunk meg hGH-η (QA68, NA71, EBO1 és EB02), amelyek közül kettő teljesen részt vesz a hCS-hormonban is. Egyik antitest sem lép keresztreakcióba a prolactinnal. Az antitestek koncentrációját ABT50 értékben fejeztük ki, amely reciprok értéke annak az antitest koncentráció értéknek, amely a 125J-hGH 50%-os megkötéséhez szükséges [RIA-eljárással meghatározva, Iványi J.: Monoclonal Hybridoma Antibodies, Techniques and Applications (ed. by Hussell, J.G.R.) CRC Press, Cleveland, Ohio (1982) 59-79]. A kötési tulajdonságokat protelitikusan módosított formájú hGH-val vizsgálva, megállapítottuk, hogy mind a négy determináns az EB01 determinánssal együtt az első 1-139 gyökön helyezkedik el, a még megtalálható a 146-191 szekvencia szakaszban is. (Aston, R és Iványi J.: The EMBO Journal 2, 493-497, 1983).
2. példa
EB01 F ab’ fragmensének előállítása
EB01 ascites globulinját (5 mg/ml) affinitásosan tisztítottuk, CNB-aktivált Sepharose-n immobilizált 100 mg hGH-on. A megkötött anyagot glicin-sósav pufferrel (pH 2,3) eluáltuk és a csövekben levő fehérjeanyag pH értékét rögtön 7,5-es értékre állítottuk be 1 mólos NaOH-dal. A tisztított antitesteket ezután 20 mg/ml koncentrációra (2 ml) betöményítettük és 0,01 mól ciszteint és 0,002 mól EDTA-t tartalmazó 0,5 mólos, 8,0-as pH-jú nátrium-foszfáttal szemben dializáltuk.
Az így kapott anyagot 4 órán át 37 °C-on 0,4 mg papainnal emésztettük, majd a cisztein és az EDTA eltávolítására PBS-sal szemben dializáltuk. Ezt követően a diallzátumot DEAE töltetű oszlopon (20 cm x 1,2 cm) k romatografáltuk, eluálószerként lineáris gradiensű nátrium-foszfát puffért (0,005 mól-0,3 mól, pH 8,0) alkalmazva. Az oszlopról levett első csúcs nem tartalmaz antitest nehéz láncot (heavy chain) (SDS-PAGE eljárással meghatározva), és aktivitása 10-3 x ABTso.
3. példa
Hormonok
Az Injekciózás céljára alkalmazott humán növekedési hormont lejárt klinikai minőségű anagokból nyertük (Institute of Child Health, London), a hormon tisztasága 99%. A hGH beszerezhető: RIA(UK)Ltd., Washington, Co.
Durham U.K. A hGH radioaktív jódozósát laktoperoxldázzal végeztük, 80 x 10® cpm/g töménységig (Llnde et. al: Anal. Biochem 107, 1980, 165-176). Az Ultrogel töltetű (LKB Ltd., Cambridge, UK) oszlopos kromatográfiás vizsgálat előtt a monomer 125J-hGH-t elválasztottuk az aggregéit anyagtól. Az antitest-hormon komplexeket 1 órával az állatoknak való beadagolás előtt, az oldatok összekeverésével állítottuk elő. Azoknál a kísérleteknél, amelyeknél az injekciózást több héten keresztül végeztük, a komplexeket 1 hétre szükséges mennyiségben, egy tételben készítettük.
Oldható extraktumot selyemmajom hypophlsisböl készítettünk, a szövetet 0,05 mól nátrium-hidrogén-karbonátot tartalmazó 2 mmólos 8,6 pH-jú PMSF oldattal elkeverve, majd a kapott homogén!zátumot 10 000 g-vel 20 percig centrifugálva. A 20 ml-nyi felülúszót használtuk a vizsgálatokhoz.
Biológiai vizsgálatok
A) példa hGH-EBOl komplexszel kezelt törpe egerek kumulatív súlygyarapodása
Törpe egereket tenyésztettünk normál állatokból, amelyek dw génjükben heterozigóták, valamint heterozigóta nőstényegerekből és homozigóta, thyroxinnal kezelt törpe egerekből. A törpe egereket (súlyuk 9,1 + 0,4 g) randomizáltan hat állatot tartalmazó vizsgálati csoportokba osztottuk és egy-egy csoportot kis ketrecekben helyeztünk el, majd 0,1 ml mennyiségű hormoninjekciókkal, szubkután, különböző időközönként kezeltük őket. A súlyukat megmértük a kezelés megkezdésekor, majd a későbbiekben különböző időközönként. A súlygyarapodást a rövididejű, ill. a kumulatív súlygyarapodást a több napon át tartó kísérleteknél a kezdeti súlyhoz viszonyított relatív értékkel (X) ill. a tiszta súlyértékkel (g) fejeztük ki. A farok hosszát Hughes és Tanner (Anatomy 106, 1970, 349-370) módszere szerint határoztuk meg.
Három hetes kísérleti periódus alatt, a kontroll csak PBS-sel kezelt egerek relatív súlygyarapodása kb. 15X volt, míg a 10 pg hGH-val kezelt állatoknál ez az érték ugyanilyen idő alatt 22X volt, ugyanakkor a hGH-EB01 komplex-szel (amely 10 pg EB01 tartalmú) kezelt állatok kumulatív súlygyarapodása 34% volt, ami megfelel a csak hGH-val kezelt egereknél mért értékekhez viszonyított további 12%-os növekedésnek.
Ha a komplexben a hGH mennyiségét 10 pg-ról 160 pg-ra emeltük, a súlygyarapodás 44%-ra növekedett. Az 1. ábrából látható, hogy a kezelt és kontroll csoport közötti különbség a 21 napos periódus alatt progreszszíven emelkedik. Míg a hGH-MAB komplexszel kezelt állatoknál jelentős emelkedés mutatható ki 48 óra altt, a csak hGH-val kezelt csoport és a kontrollcsoport között 7 napig nem jelentkezett különbség.
B) példa
Növekedés fokozása EB01 F ab’ fragmenssel
Annak érdekében, hogy meghatározzuk, hogy az EB01 antitest két értékűsége előfeltétele-e a növekedésfokozásnak, vizsgálatokat végeztünk EB01-F ab’ - hGH komplexek 35SO4z_ felvételre kifejtett hatására, törpe egereknél.
Viszonylag szűk súlyhatárok között (7-10 g) törpe egereket véletlenszerűen elosztottunk [Fisher, R.A. és Yates F. (ED): Statistical tables fór biological, agricultural and medlcal research Olivér, Boyd, 1975], majd 24 órával az utolsó hormoninjekció után [Herbai G.: Acta Physiol. Scandinavica, 80, (1970), 470-491], 0,5 Ci/g testsúly mennyiségben 35SO42'-et adagoltunk injekció formájában. 20 óra elteltével az egereket megöltük, a bordavázat eltávolítottuk, 20 percre fövő vízbe helyeztük, egy éjszakán át telített nátrium-szulfáton szárítottuk, majd 2 órán át folyóvízben, majd 1 órán ót desztillált vízben mostuk. Ezután a bordók csontos részeit a közeli porcok 1 mm-es rétegével levágtuk, meghagyva a sternumhoz kőtödő bordái porcokat. Az összes lágy szövet eltávolítása után, az öt leghosszabb bordaporcot, amely közvetlenül a sternumhoz kötődik, mindkét oldalon elválasztottuk és állatonként külön összeraktuk. Az így kapott tíz bordaporc-készletet ezután szobahőmérsékleten egy éjszakán át szárítottuk, mértük, majd elvégeztük a 3sSO·»2 meghatározás. A 35SO42- felvételt hasadás/perc/mg borda egységben fejeztük ki.
A szulfát-felvétel szintje EBQ1-el vagy EB01-F ab’-vel kezelt porcoknál nem különbözött jelentősen, összehasonlítva az azonos ΑΒΤ» mennyiségű antitestek és fragmensek alkalmazásával (1. táblázat). A csak hGH jelenlétében mutatott növekedés azonban jelentősen kisebb volt, mint F ab’ - hGH esetében. Az F ab’ fragmens értékének növelésével azonban [egy .második·, akár monoklón antitest (TC187) akár egy poliklón anti-egér lg antitest bevonásával] nem változott jelentősen a ^SCu2 felvétel. Továbbá, a F ab’ fragmensek nem gátolják kompetitiven az EB01 antitest potencírozó hatását. Ekvlmoláris mennyiségű hGH és hCS hormonokkal és EB01 antitesttel készített komplexek szintén nem csökkentik az EB01 antitestek potencírozó hatásának mértékét. Ezek a komplexek feltehetőleg főleg hGH - EB01 - hCS fajtákat tartalmaznak, amelyek esetében várható volna az aktivitás csökkenése, ha a kétértéküség szükséges, mivel a hCS szomatotrop hatása csak 10%-a a hGH hatásának. Ez utóbbinak
-510 megfelelően az EB01 - hCS komplexek eseté- meg, mint a hasonló hGH komplexeknél, ben jelentősen kisebb aktivitást határoztunk
í. Táblázat
Antitest F ab fragmens - hGH komplex hatása a szulfát-fel vétel re
Antitest (pg)
Hormon (pg) EB01 Anti-egér lg “SCU2 felvétel dpm/mg ± SD
hGH (160) - - 1640 ± 160
hGH (160) lg (200) - 4280 ± 300
hGH (160) lg (20) - 2500 ± 400
hGH (160) F ab (20) - 2700 ± 120*
hGH (160) F ab (20) TC 187 (12) 2300 ± 100
hGH (160) F ab (20) R-Poly (5) 2000 ± 100
hGH (160) F ab (20)+Ig (200) - 4880 ± 190
hCS (160) lg (200) - 1200 ± 70
hGH (80)+hCS (80) lg (200) - 3820 ± 250
hGH (80)+hCS (80) lg (200) R-Poly (5) 4250 ± 500
PBS 600 ± 75
Törpe egerekbe (n = 6) kétszer hor- véletlenszerűen elrendeztük és az előző-
mon + antitest komplexeket tartalmazó készít- 25 ekben, a törpe egereknél leírt módon kezel-
ményt injekcióztunk (0 és 24 óra), majd 48 tűk. A súlyukat hetente háromszor mértük.
óra elteltével “SO^'-ot. A kiértékelést 72 Az 1-es csoport a kísérletek ideje alatt vé-
óra elteltével végeztük. gig hetente kétszer PBS-t, a 2-es csoport
TC187 = patkány monoklón anti-egér L- egy héten át heti három alkalommal 160 pg
-lánc; R-Poly = nyúl pliklón anti-egér lg.
* p < 0,001 összehasonlítva csak hGH-val.
C) példa hGH-t, a 3-as csoport 4 héten keresztül heti három alkalommal ugyanilyen mennyiségű F’BS-t, a 4-es és 5-ös csoport illetve a 4 héten keresztül heti három alkalommal 160 pg hGH/200 pg EB01 komplexet kapott és a 6-os
Növekedés fokozása fiatal BALB/c egereknél
Mivel a növekedés fokozása törpe egerek esetében igen alacsony aktivitású hátérrel mutatkozott, érdekesnek mutatkozott megvizsgálni, hogy az antitestek által közvetített fokozó hatás kimutatható-e normál, azaz gyorsan növekvő fiatal egerek esetében. Háromhetes BALB/c, 7-10 g súlyú egereket csoport ugyanezt a komplexet kapta 4 héten keresztül minden nap. Az 5-ös és 6-os csoportnál 31 illetve 37%-os súlygyarapodást mértünk a kontrollcsoporthoz viszonyítva (2. ábra). A hGH-EB01 komplex jelentősebb hatá40 sa az adagolást kővető 48 órában jelentkezett legkorábban (2. táblázat). Azok az állatok, amelyek EB01 jelenlétében 10, 40 illetve 160 pg hGH-t kaptak, jelentős súlygyarapodást mutattak a csak hGH-val kezelt állatokhoz viszonyítva.
2. Táblázat hGH - EB01 komplexszel kezelt fiatal BALB/c egerek súlygyarapodásának rövididejű vizsgálata
hGH pg hGH-EB01 komplex (1600/200 pg) Relatív súlygyarapodás % ± SD P
- - 13.0 ± 11.0
10 - 16.0 ± 12.0
+ 27.0 ± 6.0 < 0.050
40 - ie.o ± 11.0
+ 2S.0 ± 8.0 < 0,050
160 - 13.0 ± 13.0
2S.0 ±11.0 < 0.025
Háromhetes egereket (Wtp = 8 ± 1,0) 0 és 24. órában kezeltünk. A %-ban kifejezett testsúly gyarapodást a 48. órában határoztuk meg.
-612
D) példa
Tejelválasztás fokozás a hGH-nal
A humán növekedési hormon jelentékenyen fokozza a tejelválasztást. Ezt galamb-begyen és emlőszöveten in vivő végzett vizsgálatainkkal határoztuk meg, illetve azzal jellemeztük, hogy a hormon képes a mirigy receptoraihoz kötődő 135I-4-PRL helyettesítésére. A galamb-begy vizsgálati eljárással a hormonok tejelválasztó aktivitását határozzuk meg azonosan más, patkányok vagy egerek emlőmirigyére vagy corpus luteumára vonatkozó vizsgálati eljárással. A hormonokat, a komplexeket és a kontroll oldatokat 0,1 ml-es mennyiségben intradermálisan adagoltuk mindkét fél-begybe az öt vizsgálati állatból álló csoportnál. Az injekciózást vagy az első napon egyszer 2X10* ABTso mennyiségben, vagy 36 órai időtartam alatt háromszor (mindig 2X103 ABTso mennyiségben), vagy a második napon beadott további két injekcióval kombinálva végeztük, majd a madarakat megöltük, meghatároztuk a 2,5 cm átmérőjű begy súlyát (Nicoll C.S.: Endocrinology, 80, 1967, 641-655). Azáltal, hogy a komplexek vagy a szabad hormonok beínjekciózását egymáshoz közel, a két fél-begybe végeztük, olyan körülményeket teremtettünk amely kizárta a szisztémás hormon-eloszlást. A begy nyálkahártya súlya 100 pg hGH három részletben való adagolása után 100 mg, mig a kontroll esetekben (PBS vagy csak antitest adagolása után) 10-13 mg volt (3. ábra).
ug hormon adagolása esetén a nyálkahártya súlya 48 mg volt, de EB01 vagy EB02 egyidejű adagolásakor ezen érték 108 illetve 80 mg-ra növekedett. A törpe egereknél végzett kísérletekhez hasonlóan az NA71 hatástalan volt, míg a QA68 jelentékenyen visszaszorította a nyálkahártya szekréciót. EB01 adagolása esetén a tejelválasztás fokozása arányosan, azons módon növekedett attól függően, hogy a hormont egy vagy három részletben adagoltuk. Az EB01 adagolása azonban nem fokozta a tejelválasztást telítő mennyiségű hGH dózisok esetében. Mivel a EB01 a hCS-hez Is kötődik, megvizsgáltuk a tejelválasztásra kifejtett hatását a hormonnak Is. Az eredmények azt mutatták, hogy 10 jug hCS hormonnal képzett antitest komplex esetében a begyek súlya kétszeres azon értékeknek, amelyek a csak hormonnal kezelt kontrolloknál lettek meghatározva.
E) példa
Növekedés fokozása selyemmajmok esetében
Akár patkányféléknél, akár a galamb-begy reakciók vizsgálatánál, a fokozó hatás mértéke függvénye volt a külső hGH adagolásnak, mivel az említett antitestek egyike sem lép keresztreakcióba a rágcsálók növekedés hormonjával. Felismertük azonban, hogy az immunoblot vizsgálat Towbin, H. és mtársal szerinti módszer, Prox. Natl. Acad. Sci. USA, (1979/76, 4350-54) során az EB01 antitest kötődik selyemmajmok növekedési hormonjához. E megfigyelés alapján megvizsgáltuk az EB01 selyemmajmokra kifejtett növekedésfokozó hatását valamilyen külső hormonadagolás esetén (4. ábra). Vizsgálatainknál véletlenszerűen kiválasztott súlyú állatokat négyszer 4-es csoportokba osztottuk, és rendre 0,4 mg hGH-t, 0,4 mg hGH + 2 mg EB01-et, 2 mg EB01-et ill csak PBS-t adagoltunk heti három alkalommal. Két testvérállatot a kísérlet megkezdése után egy héttel el kellett távolítanunk súlycsökkenésük miatt. A 44 napon át PBS-sel kezelt állatok súlygyarapodása 68 mg volt, az EB01-el kezelt állatoké 103 g volt. A csak hormonnal ill. komplex-szel kezelt állatok súlya között helyezkedett el. A relatív súlynövekedés (a kezdeti értékhez viszonyított %-os növekedés) az antitestekkel való kezelés esetén 89%-os, mig a kontroll állatoknál 61%-os volt. Az antitestek 6 héten át való folyamatos adagolása ellenére sem volt kimutatható esetleges anaphilaktikus eredetű mellékhatás selyemmajmok esetében.
F) példa
Galamb-begyre vonatkozó további vizsgálatok
A D) példánál leírt vizsgálatokat ismételtük meg úgy, hogy 1 jug nagytisztaságú (L készítmény) vagy 3 jug QB01 - MAB affinitással tisztított (R készítmény) hPRL-et adagoltunk önmagukban, vagy állandó, 2500 ABTso mennyiségű monoklonális antitesttel készített komplex formájában. A QB01 antitest előállítás analóg volt az 1. pédában leírt módszerrel, amelyet már korábban publikáltak (Iványi és P. Davis: Protides of the Biological Fluids 29th Colloquium, 1981). A 3. táblázatban öszszefoglalt eredmények erőteljes fokozó hatást
-714
Antitest
Begy súlya (mg) mutatnak QB01 antitestek esetében, mindkét hat csoportnál kapott eredmények átlagát je hPRL készítménnyel kapcsolatban. Az adatok lentik, az átlagtól való eltéréssel kiegészítve.
3. Táblázat
L készítmény
R készítmény
QB01
A kontroll (hPRL egyedül) B kontroll (Injekció nélkül)
68.0 ± 30.5 75.0 ± 18.0
22.5 ± 14.5 22.0 ±11.0
19.5 ± 5.0
G) példa
Törpe egereknél meghatározott nővekedés/fejlődés
Törpe egereket 18-asával 3 csoportra osztottunk és a szokásos adag 100%, 75% illetve 50%-ának megfelelő mennyiségű táplálékkal tápláltuk őket 10 napon át. Mindegyik étrend esetében hat egeret sóoldattal, hat 25 egeret 40 mi Hegység hGH-nal és hatot hGH/EB01 (IO4 ABTso antitest) komplex-szel kezeltünk. Az egereknél meghatároztuk az átlagos növekedést (35SO< felvétel a bordaközi porcokon, szulfátadagolás a 9. napon), a zsírtartalmat, a súlyváltozást és a farokhosszat. A kapott eredményeket a következő
4-7. táblázatokban foglaljuk össze.
Az eredményekből megállapíthatjuk, hogy a hormon/antitest komplex adagolásával kompenzálhatjuk a csökkent mértékű táplálásból adódó súlycsökkentést, valamint elősegíthetjük az izomzat fejlődését a zsír rovására, és ez utóbbi, csökkentett táplálás esetén még markánsabban jelentkezik.
4. Táblázat
Szulfátfelvétel bordaközi porcokon
Táplálék
100% 75% 50%
Kezelés módja
Sóoldat 2393 ±315 235 ± 76 540 ± 57
hGH 5569 ± 209 4432 ±317 2958 ± 202
hGH + EB01 7956 ± 865 5531 ± 691 4840 ± 668
Az eredmények dard eltérés) hasadás/perc/mg szöveg egységben vannak kifejezve (átlagérték ± stan-
5. Táblázat
Zsírtartalom
Táplálék
100% 75% 50%
Sóoldat 2533 ± 83 1502 ± 304 1082 ± 89
hGH 1857 ± 130 1173 ± 127 631 ± 152
hGH + EB01 1164 ± 99 733 ± 51 347 ± 91
A számok mg zsírt jelentenek
-816
6. Táblázat
Súly változás x-ban kifejezve és a kezdeti súlyhoz viszonyítva (kezdeti súly = 100X)
Táplálék
100% 75% 50%
Sóoldat 104,67 ± 0,95 94,5 ± 1,63 87,83 ±1,14
hGH 119,67 ± 1,94 107,5 + 1,61 91,67 ± 0,8
hGH + EB01 127,17 ± 2,12 111,67 ± 0,88 95,2 ± 2,52
A számok középérték ± standard eltérést jelentenek
7. Táblázat
Farok I hosszirányú növekedése (mm)
Táplálék
100% 75% 50%
Sóoldat 0,96 ± 0,24 0,5 ± 0,19 0,71 ± 0,36
hGH 3,33 ± 0,3 3,29 ± 0,47 2,04 ± 0,28
hGH 5,21 + 0,39 4,96 ± 0,31 4,05 ±0,16
A számok kőzépérték ± standard eltérést jelentenek
H) példa sóoldattal vagy 100 pg hGH-nal vagy
Növekedés normál egereknél
A C) példánál leírt kísérleteket ismételtük meg, de a kiértékelést nem súlygyarapodás méréssel, hanem a bordaközi porcokon mért ^SOí felvétellel végeztük. 4 hetes 10 g súlyú, 6 hetes 14 g súlyú és 9 hetes 19 g súlyú egereket szubkután 0,1 ml mennyiségű
100 pg/1O*ABT5o mennyiségű hGH-EB01 komplex-szel kezeltünk két nappal a 35SOí
4° adagolás előtt. A porcokat 24 óra után távolítottuk el. Az eredmények, amelyeket a 8. táblázatban foglaltunk össze, jellegzetes növekedésre utalnak a komplexek adagolása esetén (p < 0,0005 a legidősebb egerek ese45 tében).
8. Táblázat
Egerek kora
4 hét 6 hét 9 hét
Kezelés módja Sóoldat 1686 ± 282 1176 ± 85 505 ± 32
hGH 1621 ± 158 1330 ± 83 605 ± 54
hGH/EB01 2431 ± 307 1738 ± 191 1071 ± 85
-918
Egység: beütés/perc/mg porc
I) példa
Csökkent specifitású poliklón antitestek alkalmazása
Subtilisin alkalmazásával C-terminális hGH-ról 7K (7000 Dalion) fragmenst hasítottunk, majd denaturáló körülmények között (Aston R. és Iványi J.: The EMBO Journal 2, 1983, 493-497) kromatografáltuk. 50 yl fragmenst Freund féle komplett adjuvánssal emulgeáltunk és hordozóanyag nélkül 2 egérbe beinjekcióztuk, majd 21 nap elteltével további 50 Mg fragmenst adagolunk adjuváns nélkül. E második adagolás után 10 nappal vettük le a szérumot, 10 pg hGH-val komplexet képeztünk belőle és a kapott anyagot törpe egerekbe injekcióztuk. A nővedés mértékét a “SOi felvétel meghatározásával kö10 vettük. A kapott eredmények, amelyeket a következő 9. táblázatban foglaltunk össze, a poliklón antiszérum növekedésgyorsitó hatását mutatják.
9. Táblázat
Kezelés ^04 felvétel (c.p.m./mg. porc)
Sóoldat 500 ± 50
hGH (10 Mg) 1365 ± 146
hGH + antiszérum I 4425 ± 703
hGH + antiszérum II 3272 ±471
J) példa
Juh növekedési hormon hatásának fokozása
Az 1. példában leírtak szerint juh (pl.
birka) nővekedéshormon elleni monoklón an- 35 titestet állítottunk eló, mely a következő helyen szerezhető be: Department of Experimental Immunobiology, Wellcome Research Laboratories, Langley Court, Beckenham, Kent,
BR3 3BS, UK.
10.
Törpe egereket, amelyeket oGH-nal 30 reagálni képesek, hatos csoportokba osztottunk és két egymást kővető napon, a 35SO« adagolását megelőzően 50 ug hormonnal, illetve a fenti antitesttel komplexbe vitt hormonnal kezeltük őket. A bordaporcokat 24 óra múlva távolítottuk el, hangyasavban feloldottuk és meghatároztuk a radioaktivitását. Az eredményeket a következő 10. táblázatban foglaltuk össze.
Táblázat
Kezelés MAB konc. 35SO4 felvétel (középérték ± eltérés; cpm/mg szövet)
oGH egyedül - 1411 + 261
oGH + 1D11 H9 1X10-* 5871 + 1339
oGH + 4B62 D9 3,2x1ο-4 4323 ± 671
OGH + 2B11 4,2X10-3 3408 ± 642
oGH + 3B11 5,6X10-z 3434 + 719
Sóoldat - 557 ± 79
K) példa
Növekedés fokozása birkák esetében
Két birkából álló csoportokat (átlagsúly 17 kg) különböző mennyiségű oGH elleni antitesttel (2B11, lásd a J) példában) és kontrollként egér globullnnal kezeltünk két egy55 mást követő napon át az intraperitonálisan adagolt 35SOx-et (146 Mg Ci/kg) megelőzően.
A négy porcmintát 24 óra elteltével választottuk el és a fentiek szerint vizsgáltuk. A kapott eredményeket a következő 11. táblá60 zatban foglaltuk össze.
-1020
11. Táblázat
Kezelés “SO4 felvétel (középérték ± eltérés; cpm/mg szövet)
108 A BT 50 2B11 0,2X10® ΑΒΤϋΟ 2B11 0,04X10« ABTüo 2B11 kontroll
3094 ± 630 5168 + 24 2373 ± 183 2084 + 771
A kapott eredményekből megállapítható, D példa hogy a találmány szerinti készítmények képesek az iparilag fontos állatok esetében az Növekedés fokozása birkák esetében endogén GH hatásának fokozására. 15
A K) példában leírt kísérleteket ismételtük meg más monoklón antitest (1D11H9) alkalmazásával, öt állatból álló csoportokkal. A kapott eredményeket a kővetkező, 12. táblázatban foglaltuk össze.
12. Táblázat
Kezelés 35SO4 felvétel (középérték + eltérés; cpm/mg szövet)
8,8X10® ΑΒΤϋΟ 2B11 2X10« ABTüo 1D11 H9 kontroll immunoglobulin
3315 + 560 2818 ± 343 1908 ± 299
Jellegzetes növekedés a MAB-vel kezelt csoportoknál mutatható ki p < 0,05.
M) példa
Thyroid stimuláló hormon (TSH) hatásának növelése
A TSH egy agyfüggelék mirigy által termelt glukoproteln, amely gerincesek esetében fokozza a pajzsmlrlgy működését. TSH hiány esetében pajzsmirigy visszafejlődés és epithellum tompulás következik be. Emberek esetében ez a hiány felelős a kretenlzmusért, a golyváért és egy sor, összefoglalóan myxedemaként ismert megbetegedésekért. A beteségeket jódvegyületekkel vagy pajzsmirigy extraktumokkal kezelik. Törpe egerek esetében csökkent agyfüggelék-mirlgy működés és pajzsmirigy visszafejlődés áll fent. TSH-val való kezelésűkkor növekedik a T4 szérum T4 szintje és bizonyos pajzsmirigy szöveti rege35 nerálódás megy végbe.
GC73, TSH elleni monoklón antitestet állítottunk eló az 1 példában leírtak szerint, amely a J) példában leírt helyen szerezhető be. A GC73 a TSH β-láncára specifikus. Törpe egereket véletlenszerűen ötös csoportokba osztottunk, és a 13. táblázatban felsoroltak szerint öt napon át kezeltünk, majd radioimmun vizsgálattal meghatároztuk a T4 szérum T4 szintet és mik rósz kópikusan pajzsmlrlgy szöveti vizsgálatot végeztünk. A vizsgálatnál a szövetet 10%-os formaiin tartalmú sóoldatban rögzítettük, majd gyantába vagy műanyagba ágyaztuk. A kapott eredményeket a
13. táblázatban foglaltuk össze. A mért T4 szérum T4 szinteket a mikroszkópos vizsgálatok is Igazolták.
13. Táblázat
Kezelés
T4 szint (átlag ± eltérés)
0,1 nemzetközi egység TSH
0,05 egység TSH
0,1 egység TSH + 1O*ABTsoGC73
0,05 egység TSH + 1O4ABTsoGC73 sóoldat
1O4ABTsoGC73 csak
62,8 ± 3,7 36,4 ± 6,3 116,2 ± 5,3 72,2 ± 11,75 kevesebb mint 5 kevesebb mint 5
-1122
Gyógyszerkészítmény előállítási példa
Az alábbi összetevőket elkeverjük, fagyasztva szárítjuk, majd felhasználás előtt ml steril vízzel hígítjuk.
Növekedési hormon
0,2%
Monoklonális antitest
0,8%
Nótrium-hidrogén-karbonát
0,25%
Laktóz
0,2%
Mannit
0,2%
Bromopol (2-bróm-2-nit
ropropán-1,3-diol)
0,05%

Claims (6)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Eljárás fokozott GH, PRL, CS vagy
    TSH hatású készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az adott hormon elleni korlatozott specifitású antitesteket készítünk, meghatározzuk, hogy a kapott antitest vagy fragmense fokozza-e vagy utánozza-e a hormon hatását, és ha Igen, az így kiválasztott antitestet vagy fragmenst vagy az antitest vagy fragmens és az adott hormon komplexét gyógyászatilag elfogadható hordozóanyaggal elkeverjük.
    Elsőbbsége: 1983. augusztus 25.
  2. 2. Eljárás fokozott GH, PRL vagy CS hatású készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az adott hormon elleni korlátozott specifitású antitesteket készítünk, meghatározzuk, hogy a kapott antitest 5 vagy fragmense fokozza-e vagy utánozza-e a hormon hatását, és ha igen, az igy kiválasztott antitestet vagy fragmenst vagy az antitest vagy fragmens és az adott hormon komplexét gyógyászatilag elfogadható hordozóanyaggal elkeverjük.
    Elsőbbsége: 1983. augusztus 17.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy monoklonális antitesteket al15 kalmazunk. Elsőbbsége: 1983. augusztus 25.
  4. 4. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy monoklonális antitestet alkalmazunk. Elsőbbsége: 1983. augusztus 17.
  5. 5. A 2. vagy 4. igénypont szerinti eljá20 rás, azzal jellemezve, hogy hGH elleni, előnyösen az ΈΒ01 és EBO2 antitestekkel megegyező specifitású antitestet vagy fragmensót vagy ezeknek az adott hormonnal képzett komplexét alkalmazzuk. Elsőbbsége: 1983.
    augusztus 17.
  6. 6. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy juh GH (oGH) elleni antitestet vagy fragmensét vagy ezeknek az adott hormonnal képzett komplexét alkalmazzuk. El30 sőbbsége: 1983. augusztus 17.
    rajz
    A kiadósért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója
    88.571.66-4 Alföldi Nyomda Debrecen - Felelős vezető: Benkő István vezérigazgató
    -12192989
    Nemzetközi osztályozás:
    A 61 K 39/44
    A 61 K 37/24 x-x
    0-0 • Súlynövekedés /kezdeti súly %-ában/
    Injekció utáni napok száma
    PBS hGH hGH-EBOl (10jig/200jig) (160pg/200jig)
    -13192989
    Nemzetközi osztályozás:
    A 61 K 39/44
    A 61 K 37/24
    Súlynövekedés /kezdeti súly %-ában
    -14192989
    Nemzetközi osztályozás:
    A 61 K 39/44
    A 61 K 37/24
    -15192989
    Nemzetközi osztályozás:
    A 61 K 39/44
    A 61 K 37/24
    Kumulatív sül
    Első injekció utáni napok szárba
    PBS o — o 4. ÁBRA hGH °—D hGH-EBOl — ·
    EB01 · —·
HU843112A 1983-08-17 1984-08-16 Process for production of phisiologically active hormone preparatives HU192989B (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB838322115A GB8322115D0 (en) 1983-08-17 1983-08-17 Physiologically active compositions
GB838322826A GB8322826D0 (en) 1983-08-25 1983-08-25 Physiologically active compositions

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT35529A HUT35529A (en) 1985-07-29
HU192989B true HU192989B (en) 1987-08-28

Family

ID=26286770

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU843112A HU192989B (en) 1983-08-17 1984-08-16 Process for production of phisiologically active hormone preparatives

Country Status (9)

Country Link
EP (1) EP0137234B1 (hu)
JP (1) JPH06293661A (hu)
CA (1) CA1259923A (hu)
DE (1) DE3483385D1 (hu)
DK (1) DK173435B1 (hu)
HU (1) HU192989B (hu)
IE (1) IE57497B1 (hu)
NZ (1) NZ209246A (hu)
PH (1) PH26708A (hu)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0467416A1 (en) * 1983-09-01 1992-01-22 Hybritech Incorporated Antibody compositions of therapeutic agents having an extended serum half-life
GB2148299B (en) * 1983-09-01 1988-01-06 Hybritech Inc Antibody compositions of therapeutic agents having an extended serum half-life
EP0153871A3 (en) * 1984-03-01 1987-07-01 Centocor, Inc. Antibody enhancement of immunogenicity of antigen
US5210180A (en) * 1989-10-27 1993-05-11 American Cyanamid Company Enhancement of porcine somatotropin activity
US6165465A (en) * 1990-05-15 2000-12-26 American Cyanamid Company Immunologic enhancement of the somatogenic effect of somatotropin with an antibody
AU5654998A (en) * 1996-12-06 1998-06-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Muteins of obese protein
US6197582B1 (en) 1998-03-18 2001-03-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Development of human monoclonal antibodies and uses thereof
US7060802B1 (en) 2000-09-18 2006-06-13 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Tumor-associated marker
ES2267945T3 (es) * 2001-05-31 2007-03-16 Pfizer Products Inc. Uso medico de compuestos tiromimeticos para tratar la perdida del cabello y composiciones.
CN101495155A (zh) 2006-07-07 2009-07-29 诺沃-诺迪斯克保健股份有限公司 新的蛋白结合物及其制备方法
FR2967676B1 (fr) * 2010-11-19 2014-09-19 Agronomique Inst Nat Rech Ligand d'hormone luteinisante et complexe ligand-gonadotrophine

Also Published As

Publication number Publication date
IE842114L (en) 1985-02-17
DK394084A (da) 1985-02-18
AU564783B2 (en) 1987-08-27
JPH06293661A (ja) 1994-10-21
DK394084D0 (da) 1984-08-16
PH26708A (en) 1992-09-15
AU3200084A (en) 1985-02-28
DE3483385D1 (de) 1990-11-15
EP0137234A2 (en) 1985-04-17
HUT35529A (en) 1985-07-29
IE57497B1 (en) 1993-03-24
EP0137234A3 (en) 1987-08-19
NZ209246A (en) 1989-04-26
CA1259923A (en) 1989-09-26
DK173435B1 (da) 2000-10-23
EP0137234B1 (en) 1990-10-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4599229A (en) Method of promoting animal growth using antibodies against somatostatin
HU192989B (en) Process for production of phisiologically active hormone preparatives
CA1330420C (en) Compositions containing growth hormone peptide fragments
Pell et al. Principles of immunomodulation
JPH04503663A (ja) 避妊方法とその組成物
WO1989000166A2 (en) Growth hormone related peptide
EP0303488B1 (en) Biologically active molecules
CA1288341C (en) Physiologically active compositions
JPS63214667A (ja) 成長促進に有効なモノクローナル抗体
NZ196125A (en) Increasing fecundity of sheep or goats
US5401829A (en) Biologically active molecules
JP2000508293A (ja) Ｆｓｈ作用の促進に有用な新規なペプチド
Wang et al. Immunological effect of a synthetic growth hormone peptide on the growth performance in swine
KR100298858B1 (ko) 포유류수컷의불임치료를위한조성물
CA2028517A1 (en) Enhancement of porcine somatotropin activity
US6723556B1 (en) Nucleic acid encoding a fragment of bovine luteinizing hormone/chorionic gonadotropin receptor
JPS60120824A (ja) ホルモン活性処方物
JPH05252985A (ja) 成長増強ポリペプチドに対する抗体に対してレイズされた抗イデイオタイプ抗体を使用する成長の刺激
US6165465A (en) Immunologic enhancement of the somatogenic effect of somatotropin with an antibody
JPH11502844A (ja) 成長促進特性を持つペプチド
Beattie et al. Immunological manipulation of body composition

Legal Events

Date Code Title Description
HU90 Patent valid on 900628