JPS63214667A - 成長促進に有効なモノクローナル抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は畜産、特に家畜の成長または生産性を刺激する
方法に関する。特定すると２本発明は選択されたモノク
ローナル抗体調製物を、これら動物の成長調節に用いる
ことに関する。

（従来の技術） 脊椎動物における成長の調節は、成長ホルモンの放出機
構が、１４−アミノ酸ペプチドであるソマトスタチンま
たはその種々の別形態のものと相互作用することを伴う
と考えられている。インビボにおけるソマトスタチンの
少なくとも１つの機能は、おそらく成長ホルモン放出系
との相互作用によって成長を抑制することである。

従って、ソマトスタチンとの反応性を有する抗体は、ソ
マトスタチンの成長調節系への作用を抑制することによ
って、成長を刺激し得るはずであると示唆され、そして
抗ソマトスタチン抗血清を投与されたラットが成長ホル
モンのレベルを上昇させること、特にストレスに応答し
て通常観察される成長ホルモンレベルの低下を和らげる
ことが知られている（Ｃｈｉｈａｒａ、　Ｋ、　　ら、
　Ｅｎｄｏｃｒｊｎ（１９７８）１０３：１９１６；　
　八ｒｉｍｕｒａら、　　Ｅｎｄｏｃｒｉｎ（１９７６
）９８：５４０）　　。

従って、免疫系を利用してソマトスタチン活性を抑制さ
せる試みがなされている。５ｐｅｎｃｅｒら（＾ｎｉ　
ａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　（１９８１）３１：３７
６；　勘圏旦皿ｎＲｅｃｏｒｄ　（１９８４年５月２２
日Ｌｐ、４８４）は、担体タンパクに結合させたソマト
スタチンを注射された子ヒツジが、この複合体に対する
抗体を生じさせて体重増加を促進させることを示してい
る。Ｖａｒｎｅｒら（伽ｄｏｃｒｉｎｏｌｏ　　（１９
８０）　１０６：１０２７）は、”ｌ／７トスタチンに
対して自己免疫された子ヒツジでは、血清中の成長ホル
モン濃度が対照よりも高いが、これら動物において成長
は促進されなかったことを報告している。この系を用い
て成長を促進させるか、あるいは成長ホルモンレベルの
上昇を例証する試みに関する他の報告には、　Ｌｏｖｉ
ｎｇｅｒ＋　Ｒ，ら。

Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ（１９７４）９５ニア４３；Ｋａ
ｔｏ、　Ｙ、、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ　（１９７４）郭
：１６０８．が含まれる。

ソマトスタチンと成長ホルモン系との相互作用は、ソマ
トスタチンのレベルを直接調節することによっても例証
されている。Ｃｏｗａｎ、　Ｊ、Ｓ、（Ｃａｎａｄｉａ
ｎ」）ｂ１匡Ｉ　Ｐｈμ耳埠ｏ１　（１９８４）匹：１
９９−２０７）は、イヌにおいてソマトスタチンの使用
を中止すると急激な成長ホルモン分泌が起こることを示
した。ソマトスタチンのレベルが低い場合にのみ、成長
ホルモン放出因子（ＧＲＦ　）が成長ホルモンの濃度を
上昇させることも示されている（Ｃｏｗａｎ、　Ｊ、Ｓ
、　　ら。

ハ眩申匪エバＬ泣Ｌ１す五旦（１９８５）卵：ＡＩＸ　
（要約））。

ソマトスタチンとの免疫反応性を有するモノクローナル
抗体の生産が報告されている。Ｂｕｃｈａｎ　。

Ａ、Ｍ、Ｊ、ら（Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒ　　（１
９８５）８３：１７５−１８０）　　は。

ソマトスタチンとの免疫反応性によって初めてスクリー
ニングされた抗体の生産について述べている。これら抗
体を生産するためには、カルボジイミドを用いて、ソマ
トスタチン−１４（環状）をキーホールリンペットヘモ
シアニン（ＫＬＨ）　　（ＣａｔＢｉｏｃｈｅｍ）と複
合させ、４°Ｃにて１晩透析された。

透析された調製物を用いて、　ＢＩＯ，ＢＲ５ｇＳｎマ
ウス（Ｊａｃｋｓｏｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｔｅｓ、　
Ｂａｒ　Ｈａｒｂｏｒ、　ＭＥ）が免疫された。該マウ
スは、　３０ｎＭの複合体を３回注射され、　ＥＬＩＳ
Ａ分析を用いて、その血清の抗ソマトスタチン抗体価が
測定された。最高の抗体応答を示したマウスの肺細胞が
ＮＳＩ細胞と融合された。該融合は、　Ｆａｚｅｋａｓ
　ｄｅ　Ｓｔ、　Ｇｒｏｔｈら（Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ　
Ｍｅｔｈ（１９８０）　３５　：１−２１）によって修
正された。　ＫｏｈｌｅｒおよびＭｔｌｓｔｅｉｎ　（
Ｅｕｒ　Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ　（１９７６）　６　：５
１１−５２１）の方法、およびＯ４，Ｖ、Ｔ、　　ら（
Ｓｅｌｅｃｔｅｄ　Ｍｅｔｈｏｄ−ｓ　１ｎＣｅｌｌｕ
ｌａｒ　ｒｍｍｕ吐オ１Ｌ（１９８０）、　Ｍｉｃｈｅ
ｌ、　Ｂ、Ｂ、ら編。

Ｗ、ｔ（、Ｆｒｅｅｍａｎ、　Ｓａｎ　Ｆｒａｎｃｉｓ
ｃｏ）の方法によって行われた。

クローンは、　Ｂｏｌｌｅｒ、Ａ、　　ら（Ｂｕｌｌ　
ＷＨＯ（１９７６）５３：５５−６５）のＥＬＩＳＡ法
を用いてスクリーニングされた。

試験で陽性となったクローンを成育させ、そしてソマト
スタチン、　　ＫＬＩ＋、および無関連抗原であるフェ
レドキシンに対する特異性について、上清をＥＬＩＳＡ
で再試験した。

ソマトスタチンに対して正確な特異性を示した４つのハ
イブリッドは、希釈を５回に制限することによってクロ
ーン化して取り出し、照射された非近交系マウスの腹水
腫瘍として成育させた。抗体は、　５０％硫酸アンモニ
ウムで沈澱させることによって腹水から部分的に精製さ
れ８次いで透析して凍結乾燥された。

これら４つの抗体は、神経系および消化器系に関連する
数多くの細胞と免疫細胞化学的に反応することが示され
た。これら抗体の組織化学的活性については、上で参照
したＢｕｃｈａｎらの論文、およびＶｉｎｃｅｎｔ、Ｓ
、Ｒ，らによる報告（Ｊ　Ｃｏｍ　ａｒ　Ｎｅｕｒｏｌ
−（１９８５）　２井：１６９−１８６）に記載されて
いる。

米国特許第４，５９９，２２９号には、ソマトスタチン
に対するポリクローナル抗血清、およびモノクローナル
抗体の両方を用いて成長を促進させる方法が開示されて
いる。該モノクローナル抗体は、免疫感作動物からのリ
ンパ球を用いた細胞融合によって形成されたハイブリド
ーマから調製された。

この開示内容によると、ハイブリドーマの上清をソマト
スタチンそれ自体に対してスクリーニングすることが提
案されている。しかしながら、このようにスクリーニン
グされた抗体の両分だけが。

実際に成長を促進させるのに有効であることは開示され
ていない。

（発明の要旨） ソマトスタチンとの免疫反応性を有し、インシュリン放
出に対するソマトスタチンの効果を特異的に抑制する抗
体だけが、成長系に対するソマトスタチンの効果を調節
するのに有効であることが。

予期せず見い出されている。従って２本発明は。

成長促進調製物に有効なこれら抗体を同定するために、
モノクローナル抗体調製物をスクリーニングし得る方法
を提供する。該方法は、従来の技術とは異なり、動物の
成長を調節するためにモノクローナル抗体を有効に使用
することを可能にする。

従って、ある局面では１本発明は成長を促進させるのに
有効なモノクローナル抗体を同定する方法に関する。該
方法はインビトロにおける膵臓組織によるインシュリン
放出に効果を及ぼすモノクローナル抗体調製物の能力を
分析することを包含する。ソマトスタチンは、消化管抑
制ポリペプチド（ＧＩＰ）によって刺激された膵臓試料
からのインシュリン放出を抑制する。ソマトスタチンの
存在下でインシュリン放出を回復させ得るモノクローナ
ル抗体調製物は、この分析で陽性であると試験される。

これらの同一抗体は、標準的な方法を用いて投与した場
合に、動物の成長をも促進させ得る。膵臓からのインシ
ュリン放出を回復させない抗体は、成長を刺激し得ない
。従って２本発明の方法は、消化管抑制ポリペプチド（
ＧＩＰ）によって刺激された膵臓からのインシュリン放
出を分析に用いて抗体調製物をスクリーニングすること
を包含する。

別の局面では１本発明は上述のように同定された抗体の
有効量を動物に投与することによって該動物の成長を促
進させる方法に関する。

ソマトスタチンとの免疫反応性を有し、脊椎動物におけ
る成長ホルモン放出を刺激するのに有効なモノクローナ
ル抗体調製物を同定する本発明の方法は、消化管抑制ポ
リペプチド（ＧＩＰ）によって刺激されたインシュリン
放出をソマトスタチンが抑制することを阻害するモノク
ローナル抗体を同定することを包含する。

ソマトスタチンとの免疫反応性を有するモノクローナル
抗体試験調製物が脊椎動物における成長ホルモン放出を
刺激するのに有効であるかどうかを予測する本発明の方
法は、消化管抑制ポリペプチド（ＧＩＰ＞　によって刺
激されたインシュリン放出をソマトスタチンが抑制する
ことを阻害する標準調製物との交差反応性について該試
験調製物を試験することを包含する。

脊椎動物の被験体において成長を刺激するが。

あるいは成長ホルモンによって調節される他の代謝また
は発達の結果に効果を及ぼす本発明の方法は、該被験体
に有効量のモノクローナル抗体または免疫学的に反応性
を有するそれらのフラグメントを投与することを包含す
る。該抗体は、消化管抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）によ
って刺激された膵臓のインシュリン放出をソマトスタチ
ンが抑制することをも阻害し得る。

（発明の構成） 二瓜剪旦１ ここで用いられているように、″免疫学的反応性を有す
る”とは、免疫グロブリンまたはそのフラグメントが抗
原と特異的に反応する能力を意味する。本発明の情況下
では、ソマトスタチンとの“免疫学的反応性を有する種
は、ソマトスタチンと複合体を形成し、他のタンパクを
排除する。

免疫学的な反応種は、いずれのクラスの完全な免疫グロ
ブリン（例えば、　　ＩｇＧ、　ＩｇＭなど）、または
可変領域を有する免疫グロブリン個々のフラグメントで
あり得る。このようなフラグメントを調製する方法は、
当該分野でよ（理解されている。最も一般的に用いられ
るフラグメントには、パパイン分解によって得られるＦ
ａｂフラグメントペプシン分解によって得られるＦ（ａ
ｂ’）ｚフラグメントおよびこれらのフラグメントを還
元することによって得られるＦａｂ’フラグメントがあ
る。完全な免疫グロブリンよりむしろフラグメントを用
いることは、近縁種における投与にいくつかの利点があ
る。なぜなら、これらフラグメントは、非相同種におい
ては完全な抗体よりも免疫性が小さいからである。

ここに開示されているスクリーニング試験は。

インシュリンの放出を調節する際のソマトスタチンとＧ
ＩＰとの反応を包含する。この効果および相互作用を定
量する特別な分析法が述べられている。

しかしながら、他の類似のプロトコルも当業者の都合に
よって用い得る。潅流された膵臓よりむしろ１例えば単
離して培養されたランゲルハンス島細胞を被験体として
用い得る。さらに、ここに開示の発見から明らかなよう
に、インシュリン放出反応および成長系の調節に同一の
薬剤活性部分（ｐｈａｒｍａｃｏｐｈｏｒｅ）が用いら
れるので、“二段”分析法は、適当なモノクローナル調
製物を選択する基準として用いられ得る。該分析法では
１問題の抗体調製物は、インシュリン放出に対するスク
リーニングで陽性であることが判明している抗体との交
差反応性について試験される。試験によって陽性となっ
た抗体と交差反応する抗体は成長を促進させる。

“交差反応性”抗体は、同じエピトープと反応する抗体
である。交差反応性は、一般に拮抗分析法を用いて測定
される。該分析法では２例えば標識された抗体Ａが抗原
に結合する能力が、交差反応性を有する抗体Ｂのレベル
の上昇によって減少するか；あるいは９例えば標識され
た抗原が抗体Ａを含有する固体担体に結合する量が、抗
体Ｂの存在によって減少する。

一般的に、以下に述べられている分析方法によってスク
リーニングされたモノクローナル抗体は。

脊椎動物の被験体の成長を促進するのに有用である。こ
のような成長の促進は、おそらく成長ホルモンの放出の
原因となる系に対してソマトスタチンが及ぼす効果を妨
げることによって行われる。

しかしながら２本発明の抗体の投与結果は、成長の刺激
に限定されない；実際、成長ホルモンは付加的に代謝お
よび発達に影響を及ぼすことが知られている。従って１
例えばウシの系では２本発明の方法は牛乳生産を刺激す
るために用いられ得る；魚類では、該方法は免疫系の発
達を刺激するために用いられ得る。

本発明の方法は、一般に哺乳類を含む脊椎動物。

特に家畜、鳥類、（必要に応じて）爬虫類、および魚類
において成功している。以下に述べるように、もちろん
投与方法および投与量は、脊椎動物の被験体の性質およ
び所望の結果に依存する。

従来の研究の大部分は、哺乳類の被験体を用いて行われ
ている。しかしながら、鳥類の被験体も同様に１本発明
のモノクローナル抗体を用い得ることが有益である。鳥
類の被験体へ適用することが経済的に非常に重要である
ことは明らかである。

例えば、北米では、ニワトリが工場形式で飼育され、毎
日１０万羽のニワトリが市場に送られている。

成長期間が短縮されることによって、明らかに利益が増
加する。

さらに２本発明のモノクローナル抗体は、魚類の養殖産
業における経済性を高めるために、太平洋および大西洋
の両方のサケ種の成長速度を上昇させるのに有用である
。成長速度が上昇すると。

淡水を維持する必要のある期間が減少するだけでなく、
免疫獲得を達成する時間が短縮される。淡水を維持する
経費は海水よりも高くなる。免疫獲得は重量に依存する
；サケの重量が約１．０ｇの時に開始して２重量が約３
．０ｇになる時点までに完了する。もちろん、この処理
法は、収穫される魚の大きさも増加させ得る。さらに、
塩水に移す直前のスモルト（二年子のサケ）に投与した
場合には、成長ホルモンの分泌が増加することにより。

淡水から塩水への移動を助ける仲介機能を果たし得る。

分Ｊ２１ｉｎ汰 最初のスクリーニングの好ましい分析方法は。

インシュリン放出に対するＧｒＰとソマトスタチン間の
相互作用を利用する（Ｍｃｌｎｔｏｓｈ、　Ｃ，Ｈ，Ｓ
、　ら１Ｇｕｔ　Ｐｅ　ｔｉｄｅｓ（１９７９）、　Ｍ
ｉｙｏｓｈｉ、　Ａ、編、　ＫｏｄａｎｓｈａおよびＥ
ｌｓｅｖｉｅｒ、　Ｔｏｋｙｏ／八−ｓｔｅｒｄａｍ＋
　ｐ、１００；Ｍｃｌｎｔｏｓｈ。

Ｃ，Ｈ，Ｓ、ら、　Ｃａｎａｄｉａｎ　Ｊ　Ｐ時ｓｉｏ
ｌＰｈａｒｍａＣｏＩ（１９８１）５９　：　４６８）
、特に、ソマトスタチンは、イヌにおいてＧＩＰによっ
て刺激されたインシュリン放出を抑制することが示され
ている（Ｐｅｄｅｒｓｏｎ、　Ｒ，Ａ、ら。

Ｃａｎａｄｉａ　　Ｊ　Ｐｈ　５ｉｏｌ　Ｐｈａｒｍ　
ｃｏｌ（１９７５）５３：１２００）。

ＧＩＰがソマトスタチン放出を刺激することも示されて
いる（Ｉｐｐ、　Ｅ、　ら、　Ｊ　Ｃ１１ｎ　Ｉｎｖｅ
ｓｔ　（１９７７）６０　：１２１６）ので、インシュ
リン放出とその抑制物質であるソマトスタチンの放出を
急激にＧＩＰが同時に刺激することによって、この系は
自己調節しているという仮説がある。

この分析では、　Ｇｒｏｄｓｋｙらの方法（Ｇｒｏｄｓ
ｋｙ、　Ｇ、Ｍ。

ら、　Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ（１９６７）　：旦：２２
２）に従って、ラットの膵臓組織が単離され、そして潅
流される。−晩断食させ、麻酔をかけたラットから膵臓
組織を取り出し、３％デキストラン（臨床用）と０．２
％ウシアルブミン（ＲＩＡ用）を含む、修正Ｋｒｅｂｓ
／Ｒｉｎｇｅｒ重炭酸緩衝液を用いて潅流する。潅流液
を３７℃に加温し、９５％酸素：５％ＣＯ２で気体処理
してｐＨ７，４とする。カニユーレを挿入された門脈か
らの流出液を流出速度４ｄ／分で１分間隔で採集する。

実験時間零の前に、この膵臓は、　　４．４ＸＩＯ−’
Ｍのグルコースを含む緩衝液で１０分間潅流される。実
験は、　　８．８Ｘ１０−’Ｍのグルコースによる潅流
の間に。

インシュリン放出が定常的に達した後で行われる。

分析では、ブタのＧＩＰがサイドアーム付属装置によっ
て、３０分間で潅流レベルが２　Ｘｌ０−’Ｍとなるよ
うに計算された濃度で注入される。ソマトスタチンは、
最終濃度が６．２５　Ｘ　１０−　’Ｍになるように注
入される。試験されるべきモノクローナル抗体は、最終
濃度が１ｇｇ／ｒｔｄｌになるように投与される。

（１０ｎｇのソマトスタチンは３００ｎＨのモノクロー
ナル抗体（Ｍａｂ）で中和し得るというＥＬＩＳＡ測定
に基づ（。） 抗体は、ブタのＧＩＰおよびソマトスタチンを導入する
前に２時間零で過剰に投与される。

グルコースだけを投与すると、インシュリンの分泌をい
くらか刺激する。２ｎＭＧＩＰの注入は、１２分に開始
して３０分間続けることにより、インシュリン放出を急
速に増加させる。インシュリン放出は１本来、二相性で
ある。第１図の四角形で示されるように、急激な応答に
続いて刺激を表す台形部分が存在する。しかしながら、
この応答は、第１図の丸印で示されるように、ソマトス
タチンが導入される場合には劇的に変化する。環状ソマ
トスタチン１４は９時間２２分において潅流緩衝液中に
１０分間導入される。ソマトスタチンの注入を導入する
と、　　ＧＩＰによって刺激されたインシュリン放出が
直ちに抑制され２次いで潅流を続行した場合の以前のソ
マトスタチンレベルに急速に、上昇した。

この試験における負の結果は、第１図において黒丸によ
って示される変化しないパターンを与える（ソマトスタ
チンは図に示したように導入された）。しかしながら、
この抑制において重要な薬剤活性部分と反応するモノク
ローナル抗体調製物を用いた場合には、ソマトスタチン
の効果は、第２図（黒丸）に示したように、阻害される
。得られたパターンは、第１図の黒い四角形のパターン
と似ている；ソマトスタチンが導入されても、高いイン
シュリンレベルが維持される。

Ｂｕｃｈａｎ、八、Ｍ、Ｊ、ら（前出）によって述べら
れた。

４つのモノクローナル抗体調製物がこの分析で試験され
た。ＳＯＭ＾−１０と名付けられたモノクローナル抗体
調製物だけが完全な阻害を示した。ＳＯＭ八〜へ８では
部分的な阻害が観察された。他方、２つの抗ソマトスク
チン　モノクローナル抗体調製物、すなわちＳＯＭ＾−
０３およびＳＯＭＡ−２０は、この分析では不活性であ
った。この発見は、ソマトスタチンの“実質的な薬剤活
性部分”が中間領域の配列Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔ
ｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒであるという文
献（Ｖｅｂｅｒ、Ｄ、Ｆ、ら、　Ｎａｔｕｒｅ（１９７
９）　２８０：５１２）中の提案を考慮すると、特に驚
くべきことである。インシュリン放出分析において不活
性なＳＯＭＡ−２０は。

このペプチドとの反応性は有したが、この分析で活性な
ＳＯＭＡ−１０は、このペプチドとの反応性は有さなか
った。

モノクロ−ルー　の８．１Ｔ ソマトスタチンとの反応性を有し１本発明に有用な抗体
調製物は、　Ｂｕｃｈａｎらによって開示された方法に
加えて様々な方法で調製し得る。別の永久増殖化技術、
および正常に抗体を分泌する腫瘍細胞も起源として用い
得る。抗体分泌細胞の調製方法には、大体標準的なアプ
ローチにおいて免疫された動物に由来する融合相手を用
いるにｏｈｌｅｒ／Ｍｉｌｓｔｅｉｎの方法が含まれる
。あるいは、これら融合可能な相手は、ウィルス遺伝子
を導入するような他の手段によって永久増殖化され得る
。さらに。

抗ソマトスタチン抗体を本来分泌する細胞を見い出し得
る。これら細胞は、腫瘍性である場合にそれら自身が永
久増殖性であり得るか、あるいは形質転換によって永久
増殖性とされ得る。

抗ソマトスクチン抗体を分泌するいかなる細胞系統も本
発明の方法に用いて、成長促進に有効な免疫グロブリン
をスクリーニ・ングし得る。

スクリーニング量 モノクローナル抗体調製物は、上述のようにインシュリ
ン放出に効果を及ぼす能力によってスクリーニングし、
ラットの潅流された膵臓による分析によって例証し得る
。しかしながら、別のスクリーニングであって、おそら
くより簡便に行われるスクリーニングは、既に膵臓の潅
流スクリーニングに合格している抗体と試験抗体との交
差反応性を包含する。このような試験には、標準的な拮
抗ＥＬＩＳ＾、　ＲＩＡ、または他の拮抗免疫分析技術
が用いられ得る。これらの方法では、プロトコルに依存
するが、インシュリン放出分析におけるソマトスタチン
活性に対して標準的な抗体に、試験抗体が交差反応する
能力が評価されうる。これは２例えば標識された抗体と
の拮抗を調べることによって行われるか、あるいは標識
されたソマトスタチンが永久増殖化された標準的な抗体
に結合することを、試験抗体が妨害する能力を用い得る
。このような拮抗分析に対する種々様々なプロトコルは
。

当該分野に公知であり、当業者に明らかである。

准のための７ 本発明のモノクローナル抗体調製物は９種々の脊椎動物
に投与されるが、その方法は、投与される活性成分の性
質、被験体の脊椎動物の性質、および所望の成長パター
ンにおける個々の変化に対して適当なものである。一般
的には、処置が施される同種のものに由来のモノクロー
ナル抗体を利用するのがより簡単である。同種起源のモ
ノクローナル抗体を用いることによって、免疫原性と副
作用の問題を最小限に抑えることができる。同系のモノ
クローナル抗体を用いる場合には、これらの問題を軽減
するために特別の予防措置をとる必要はないようである
。

しかしながら２本発明のモノクローナル抗体は。

それらが投与される種とは異なる種に由来するものであ
り得る。近縁種の免疫感受性を克服し得る数多くの方法
が利用できる。あるアプローチでは。

抗体をポリエチレングリコールに結合させることによっ
て、その免疫原性を低減させ得る。このような結合方法
は１例えば米国特許第４，２６１，９７３号および英国
特許第１．５７８，３４８号に開示されている。

別のアプローチでは、　ＦａｂまたはＦａｂ’フラグメ
ントだけが用いられる。さらに別のアプローチでは。

自己の免疫系が成熟する以前の幼年期の動物にモノクロ
ーナル抗体が投与される。

本発明のモノクローナル抗体を哺乳類の被験体に投与す
るためには、タンパク物質を投与するのに適当な方法で
行われる。このような投与は、直接の注射、静脈内投与
、または緩徐放出性組成物による投与によって行われる
。投与されるべき抗体の量は、もちろん投与の様式、所
望の成長促進または発達促進の程度、および動物の代謝
に従って変化する。しかしながら、一般的には、投与さ
れるべき抗体の量は、′＃１験体動物の体重に対して１
０〜５００μｇ／ｋｇの範囲である。

鳥類および魚類の被験体については、もちろん投与の方
法は、哺乳類の被験体に適当なものとは異なる。しかし
ながら１体重１ｋｇを基準とした投与量は大体同じであ
る。家禽に対する最も実際的な投与方法は、飼料中に抗
体調製物を処方することである。抗体または糖タンパク
として、処方物は消化器系におけるタンパクの分解を減
少させ。

調製物の活性成分を血流中へ確実に移動させるようなも
のでなければならない。魚類に投与するには、これら魚
類を取り囲んでいる水性媒体に抗体を含有させるのが一
般的に適当である。なぜなら。

これら被験体は、えらの構造を通して活性成分を直接に
摂取し得るからである。これらの被験的には９分解また
は摂取不足という問題はほとんどないが、希釈によって
適当なレベルの注入が妨げられないほど十分型さな体積
に魚類を一時的に閉じ込めなければならない。

投与プロトコルも変更し得る。上記の投与量範囲は、数
日間にわたる緩慢な放出形態で投与するか、あるいは全
投与量を分割して一連の注射によって投与し得る。

本発明の投与用組成物は、タンパク投与に対して当該分
野における従来のものであり、液体賦形剤を含む。この
ような液体賦形剤には２例えば食塩水、またはデキスト
ロースを含有する食塩水溶液、あるいは液体中に懸濁さ
せると注射可能な組成物とし得る凍結乾燥組成物などが
ある。安定性を向上させたり、　ｐＨを維持したり、あ
るいは乳濁液を形成するように意図された付加的な成分
も用いられ得る。適当な処方物は１例えばレミントンｑ
、　Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｆｈｉｎｇ　Ｃｏ、、　Ｅａｓ
ｔｏｎ、　ＰＡ＋最新版に見い出し得る。

タンパクは、粘膜を通して物質が移動するのを促進させ
る物質によって経皮的に投与することもできる。このよ
うな経皮的組成物の数多くは、当該分野で開示されてお
り７例えばステロイド誘導体および種々の界面活性剤組
成物が含まれる。

（実施例） 本発明を以下の実施例について説明するが、これら実施
例は本発明を限定するものではない。

五至ｌ放班■訓皿 ここで例示する測定には、５匹のイヌを用いた。

これらのイヌにヒト脳下垂体成長ホルモン放出因子（ｈ
ｐＧｌ？Ｆ（アミノ酸１−４４））を何組かの静脈内注
射を行うことによって投与した。各組の注射は、最初に
０．５μｇ／ｋｇのｈｐＧＲＦ、　　２度目に２μｇ／
ｋｇのｈｐＧＲＦを注射することを含む。最初の組は、
対照としての期間に投与され、続いて次の２組がソマト
スタチン注入の期間に９次の１組が別の対照としての期
間に投与され、そして最後の組は、１２〜２４μｇ／−
のモノクローナル抗体の静脈内注射に続いて投与される
。このように、各動物には合計して１０回の注射、すな
わちソマトスタチン注入の間に４回。

対照としての期間に４回、そして抗体投与に続いて２回
の注射が施された。各注射は４０分間隔で行われた。ソ
マトスタチンの注入は、　０．１５μｇ／ｋｇ／分の割
合であったが、この割合は自然の成長ホルモン（ＧＨ）
の急激な分泌を阻害するのに最小限であることを示した
。

上記動物は、続いて５分毎、または必要に応じてより短
期間に、放射免疫分析法を用いて血液試料を成長ホルモ
ンについて３回分析された。血漿のグルココルチコイド
を測定することによって。

これら動物がストレスを受けていないことがＶａ認され
た。ＧＲＦは、対照期間におけるＧＨの血清レベルを上
昇させ２分泌の増加は１５〜３８分間続いたが。

ＧＲＰをソマトスタチン注入の間に注射した場合には、
このようなＧＭの急激な分泌は起こらなかった。

３匹のイヌでは、ソマトスタチンの注入を中止すると、
　ＧＲＦを投与した場合のＧＨ分泌のパターンを回復し
た。

５匹のイヌのうち４匹では、　　ＳＯＭＡ−１０の投与
によって、直ちに非常に急激なＧＨ放出（２０〜２８分
間続く）が喚起され、そして第２のＧＲＦ注射は対照期
間と同様のＧＨ応答を喚起した。基本的なＧＨは。

一般的に上昇した。

従って、明らかにソマトスタチンはＧＲＦの効果を相殺
し得るが、この効果は今度は適当な抗体によって除去さ
れる。ＳＯＭＡ−２０およびＳＯＭＡ−０３（これらは
インシュリン放出分析において不活性であった）を用い
た対照実験では、　ＧＨの急激な分泌は観察されなかっ
た。ＳＯＭＡ−０８（これはインシュリン放出分析にお
いて部分的な活性を示した）は。

中程度の結果を与えた。

（発明の要約） 消化管抑制ポリペプチド（ＧＴＰ）によって刺激された
。インビトロにおける膵臓からのインシュリン放出に対
するソマトスタチンの抑制作用を阻害する抗体の能力と
、インビボで成長を刺激する能力との間の相関が例証さ
れている。ＧＩＰによって刺激されたインシュリン放出
の分析で同定された抗体は、インビボにおける成長ホル
モンのレベルをも上昇させ得る。

４　　゛　　の　　　なｉ′ａ 第１図は、抗体を加えない場合に、消化管抑制ポリペプ
チド（ＧＩＰ）によって刺激され、そしてソマトスタチ
ンによって抑制されるインシュリン放出を示す。

第２図は、様々な有効性を有する抗ソマトスタチン抗体
を加えた場合における。第１図のインシュリン放出パタ
ーンに対する効果を示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ソマトスタチンとの免疫反応性を有し、脊椎動物に
   おける成長ホルモン放出を刺激するのに有効なモノクロ
   ーナル抗体調製物を同定する方法であって、 消化管抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）によって刺激された
   インシュリン放出をソマトスタチンが抑制することを阻
   害するモノクローナル抗体を同定することを包含する方
   法。 ２、前記同定が、単離され、潅流された膵臓で行われる
   特許請求の範囲第１項に記載の方法。 ３、ソマトスタチンとの免疫反応性を有するモノクロー
   ナル抗体試験調製物が脊椎動物における成長ホルモン放
   出を刺激するのに有効であるかどうかを予測する方法で
   あって、 消化管抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）によって刺激された
   インシュリン放出をソマトスタチンが抑制することを阻
   害する標準調製物との交差反応性について該試験調製物
   を試験することを包含する方法。 ４、標識された標準調製物にソマトスタチンが結合する
   ことを試験調製物が抑制するのを測定することを包含す
   る特許請求の範囲第３項に記載の方法。 ５、標識されたソマトスタチンが固定化標準調製物に結
   合することを試験調製物が抑制するのを測定することを
   包含する特許請求の範囲第３項に記載の方法。 ６、脊椎動物の被験体において成長を刺激するか、ある
   いは成長ホルモンによって調節される他の代謝または発
   達の結果に効果を及ぼす方法であって、 該被験体に有効量のモノクローナル抗体または免疫学的
   に反応性を有するそれらのフラグメントを投与すること
   を包含し、 該抗体が、消化管抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）によって
   刺激された膵臓のインシュリン放出をソマトスタチンが
   抑制することをも阻害し得る、方法。 ７、前記脊椎動物がウシであって、牛乳生産を増加させ
   ることを目的とするか、あるいは前記脊椎動物が魚であ
   る特許請求の範囲第６項に記載の方法。 ８、前記抗体の完全抗体またはフラグメントが投与され
   る特許請求の範囲第６項に記載の方法。 ９、前記抗体が、成長促進量の該抗体を緩徐放出供給デ
   バイス中に充填し、該デバイスを免疫されるべき動物に
   体内移植すること；あるいは成長促進量の該抗体を含有
   する溶液を該動物に注射すること；によって投与される
   特許請求の範囲第６項に記載の方法。