HU191310B - Improved process for the cleavage of peptides containing thiol groups with bromcyanide - Google Patents
Improved process for the cleavage of peptides containing thiol groups with bromcyanide Download PDFInfo
- Publication number
- HU191310B HU191310B HU841747A HU174784A HU191310B HU 191310 B HU191310 B HU 191310B HU 841747 A HU841747 A HU 841747A HU 174784 A HU174784 A HU 174784A HU 191310 B HU191310 B HU 191310B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- cleavage
- cyanobromide
- thiosulfate
- thiol
- peptide
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/808—Materials and products related to genetic engineering or hybrid or fused cell technology, e.g. hybridoma, monoclonal products
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
(57) KIVONAT
A találmány tárgya javított eljárás tiolcsoporto(ka)t (—SH) tartalmazó peptidekben a metionin karboxilcsoportjánál levő peptidkötés cianobromiddal végzett hasítására.
Az eljárás során a hasítást a pepiidben levő tiolcsoport(ok)hoz képest feleslegben levő tioszulfát ion jelenlétében végezzük.
Ily módon gátolhatok a jelenlevő tiolcsoportok nicllékrcakciói.
191 310
A találmány olyan javított eljárás, amely a tiolcsoportot (—SH) tartalmazó peptidek cianobromidos hasításánál gátolja a nem-kívánatos tiol-reakciókal.
A rekombináns DNS metodika megjelenése magával hozta egész sereg eljárási paraméter fejlesztésének szükségességét a termék előállításában, visszanyerésében és tisztításában. A rekombináns DNS eljárásokkal kapott termékeket szokás szerint „génfúziós termékek”-ként nyerik, azaz olyan aminosav szekvenciákként, ^melyek egy vezető szekvenciát és/vagy egy követő szekvenciát tartalmaznak, mely a kívánt termék aminosav szekvenciájához kapcsolódik. Alapvetőnek mutatkozott, hogy a kívánt peptidnek bármely idegen pepiidtől való hasítására metodikát dolgozzanak ki. Ho és munkatársai [Syntlietic Coinm., 3, 317-320 (1973)] a cianobromidot (CNBr) használják egy pepiidben levő metionin karboxil-végénél levő peptidkötés hasítására. Amennyiben a metionin a kívánt termék amiiio-láncvégéhez kapcsolódik, és az idegen peptid karboxi-láncvégét képezi, ugyanakkor a kívánt termékben nincsenek hozzáférhető inctioninmaradékok, a cianobromidos hasítás igen hasznos módszer a rekombináns DNS eljárások termékének preparálásakor.
Mindemellett a cianobromid használata az említett hasítás kivitelezésére hátrányokkal is rendelkezik. Egy ilyen hátrány jelentkezik az olyan peptidek alkalmazása esetén, amelyeknek tioltartalmú aminosavmaradékaik vannak, ismeretes, hogy a cianobromid elősegíti a tiolok diszulfidokká való átalakulását, és ezáltal a cianobromidos hasítás során nem-kívánatos melléktermékekhez is vezet. Ho és munkatársai [Synthetic Communications, 3, 317-320 (1973)] írják le a cianobromid reakcióját alkil- és aril-nátrium-tiolátokkal, amelyek során a megfelelő diszulfidok keletkeznek. Abe és munkatársai [J. Org. Chem., 39, 253255 (1974)] homocisztin és 2-merkapto-etanol reakcióját írják le, melynek során homocisztcin és a liöinocisztein és 2-incrkapto-etanol vegyes diszulfidja keletkezik. A reakció cianobromid jelenlétében és távollétében egyaránt lejátszódik. A vegyes diszulfid menynyisége a cianobromid jelenlétében nagymértékben megnő, a homoclsztein mennyiségének arányos csökkenése mellett.
Sekita és munkatársai ]Keio J. Med., 24, 203-210 (1975)] az urcáz és a foszforiláz cianobromidos hasítását írják 1c. Vizsgálataikból kitűnik, hogy 2-nicrkapto-etanol hozzáadásával növelhető a hasítás hatásfoka; minden esetre azonban e hatás okára nézve nincs feltételezésük. Azt is leírják továbbá, hogy e hatás nem érhető el, ha ditiotreitet vagy tiodiglikolt használnak.
Azt találtuk, hogy a cianobromid által okozott nem-kívánatos diszulfid átalakulás és az irreverzibilis cisztein módosulás a rekombináns DNS eljárás során nyert, fermentációs termékekben csökkenthető vagy kiküszöbölhető, ha a reakcióelegynek cianobromidos hasítást megelőzően csekély mennyiségű tioszulfát iont adunk. A tiol-tartalmú peptidek rekombináns DNS eljárásokkal való előállítása rendszerint a rekombináns szervezetek fermentációját, a fermentléből a szilárd anyagok kinyerését, a génfúziós termék cianobromidos hasítását és a hasított termék szulfitolizisét 2 öleli fel. így olyan S-szulfonált pepiidet nyerünk, amely egy függetlenül nyert S-szulfonált peptiddel kombinálható vagy önmagával kapcsolva adja a kívánt diszulfid tartalmú terméket. A termékek így nyert keverékének szulfitolizise során megfigyeltük, hogy a cianobromid hatása a tiol-tartalmú anyagokra olyan jelentős mennyiségű irreverzibilisen módosított származékok keletkezéséhez vezet, ami bonyolítja a kromatográfiás tisztítás műveleteit és csökkenti a .kitermelést. Ily módon mind termékveszteség, mind pedig kromatográfiásan hasonló szennyezések állnak elő. E hátrányok közül — felismerésünk szerint — mindkettő számottevően csökkenthető vagy kiküszöbölhető a tioszulfát ion jelenlétével.
Azt találtuk továbbá, hogy a tioszulfát ion használata tiolcsoportokat tartalmazó peptidek cianobromidos hasításánál további előnyökkel is jár. Az eljárás során egy közbenső termék, feltehetően a szulfenil-Sszulfonát keletkezik, amely megkönnyíti a szokás szerint soron következő szulfitolízis-reakciót. A szulfitolízis hagyományosan abból áll, hogy a tiol-tartalmú pepiidet nátrium-szulfittal kezeljük oxidálószer jelenlétében, amelyek közül a legelőnyösebbnek a nátriumtetrationát mutatkozott. A cianobromidos hasitás alatt a tioszulfát jelenléte következtében keletkező közbenső termék a költséges nátrium-tetrationát nélkül is könnyen szulfitolizált termékké alakítható nátrium-sziilfitos kezeléssel.
Ily módon jelen találmány tárgya egy olyan hasítási eljárás, amelynek során a tiolcsoportot (—SH) tartalmazó peptidek cianobromidos metionil-hasítását tioszulfát ion jelenlétében végezzük.
A találmány szerinti reakcióelegy egy peptidet, cianobromidot és tioszulfát iont tartalmaz. A peptid legalább egy cianobromiddal megtámadható és karboxil-végénél hasítandó metionint és legalább egy tiolcsoportot tartalmazó aminosavat tartalmaz. Azokra a peptidekre, amelyek fentebbi követelményeknek eleget lesznek, példaként szolgálnak; a növekedési hormonok, a proinzuliiiok, az inzulin A-lánca és az inzulin B-lánca.
A találmány szerinti hasítási reakciót vizes-savas oldószerben vitelezzük ki. A használható jellegzetes savak: trifluor-ecetsav, ecetsav, sósav, kénsav, foszforsav, hangyasav és hasonlók. A hangyasav használata különösen előnyös. Bár más, nem vizes és nem savas oldószereket is tartalmazhat az oldószer-elegy, különösen előnyös, ha a sav arányát a vízhez gondosan ellenőrizzük. Akár tartalmaz az oldószer-elegy nemsavas, nem-vizes alkotórészeket, akár nem, célszerűen a jelenlevő sav a vízhez képest mólfeleslegben van. A hangyasav esetében az előnyös sav-víz elegy a 67,5%-os (térfogat) hangyasav-tartalmú oldat.
A cianobromidból az elegyben célszerűen olyan mennyiség van jelen, ami legalább 1—1 mólnyit biztosít a peptid kiindulóanyagban levő minden metioninmaradékra vonatkozóan. A cianobromidból nagy felesleg minden káros kihatás nélkül alkalmazható; ezért általában a cianobromid a pepiidben levő összes iiictloitil-iuurndékhoz képest 6—10-szcrcs mólarányban kerül alkalmazásra. Amennyiben cianobromidból nem használnánk annyit, amennyi normális körülmények között fölöslegnek számítana, e találmány értel-23
191 310 méhen további olyan mennyiségű cianobromidot kell az elegyhez adni, amely az elegyben levő tioszulfát ionhoz képest az egyenlő mólarányt biztosítja. Mindenesetre legalább annyi cianobromidot kell alkalmazni, hogy a metionin-maradékra és a tioszulfátra vonatkoztatva ezek mólösszegét jóval meghaladó i felesleget alkalmazunk.
; A találmány szerinti eljárás lényege a tioszulfát ion hozzáadása. A tioszulfátot jellegzetesen szervetlen sójának alakjában adagoljuk, általában alkálifémsó, például nátrium-tioszulfát, kálium-tioszulfát és hasonlók formájában. Előnyös a nátrium-tioszulfát.
A használt tioszulfát mennyisége közvetlenül az elegyben levő tiol mennyiségének függvénye. Legalább egy mól tioszulfátot kell egy mól tioíra alkalmazni, és amennyiben a reakcióelegyben nukleofil i vegyűletek is jelen vannak, további megfelelő lio' szulfát mennyiség szükséges ezek miatt és semlegesítésükre. Ezért célszerűen tioszulfát felesleg alkalmazható például a tiol-tartalomra vonatkoztatva egészen a tízszeres mennyiségig, káros hatás nélkül. Noha az eljárásban alkalmazható tioszulfát mennyiségnek nincs felső határa, mégis — miután a tioszulfát cianobromidot fogyaszt — túlzott feleslege a normál feltételek melletti cianobroinid szükségletet messze nieghaladó mennyiséget igényel. A tioszulfát mennyiségét ezért előnyösen úgy választjuk meg, hogy a cianoi bromid felesleges felhasználását elkerüljük.
I A találmány szerinti eljárással a hasítási reakciót 15 °C-tól a cianobroinid forráspontjáig (35 °C körül) terjedő hőmérsékleten vitelezzük ki. A reakciót előnyösen 15 °C és 30 °C közötti, és leginkább előnyösen • 20 C és 25 °C közötti hőmérsékleten vitelezzük ki.
A reakciót a hasítás tökéletes végrehajtásáig szükséges ideig végezzük, általában 12 óráig terjedően. Normális körülmények között a reakció 6 óra elteltével tökéletesen lezajlik.
A hasítás teljes lezajlása után a reakcióelegyet általában 25 °C körüli hőmérsékleten, csökkentett nyomáson csaknem szárazra pároljuk. A maradékot vízben oldjuk az eredeti töménység kétszeresének mértékéig, és az oldatot liofilizáljuk. Λ liofilizált nyers, : szilárd maradék szulfitolízisét általában 50 g/l termék 7 mól karbamid oldatban való oldása esetén 0,1 mól nátrium-szulfit, 1 mmól cisztein és 0,1 mól etiléndiamin jelenlétében 8,5 pH-értéken, 22 °C-on, 8 órán keresztül végezzük.
A következő példák arra hivatottak, hogy a találmány szerinti eljárást szemléltessék. Mindezek a találmány széles terjedelmet nem szándékoznak korlátozni.
A példákban használt kiindulási anyagok minden esetben egy változó hosszúságú peptid-láncot tartalmaznak, melynek C-terminális aminosava Met. A metionin karboxilcsoportjához kapcsolódik peptidköléssel a kívánt peptid-szckvencia, mely a következő:
' Inzulin A-lánc:
Gly-lle-Val-Glu-Gln-Cys-Cys-Thr-Ser-Uc-Cys-Ser-LcuTyr-Gln-Leu-Gln-Asn-Tyr-Cys-Asn
Inzlin B-lánc:
NHj-Phe-Val-Asn-Gln-His-Leu-Cys-Gly-Ser-His-LeuVal-Gln-Ala-Leii-Tyr-Leu-Val-Cys-Gly-Gln-Arg-GlyPhe-Phc-Try-Thr-Pro-Lys-Thr
Humán proinzulin:
Inzulin B lánc (1—30) -Arg-Arg-Glu-Ala-GJu Asp-LeuGln-V al-Gly-Gln-V al-Glu-Leu-Gly-Gly-Gly Pro-Gly-AlaGly-Ser-Leu-Gln-Pro-Leu-Ala-Leu-Gln-Gly-Ser-Leu-GlnLys-Arg-Inzulin A-lánc.
1. példa
Inzulin A-kínca hasított gén fúziós termékének előállítására
Az inzulin A-lánc liofilizált fermentlé [előállítását lásd: Goeddel és munkatársai, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 76, 106-110 (1979)] 500 mg-jához 10 ml
67,5 %-os (tf/tf) hangyasavat adunk. Ehhez 15 perces keverés után 15 mg (3%-ot súly/súly arányban a liofilizált fermentlére számítva) nátrium-tioszulfát-pentahidrátot adunk. A nátrium-tioszulfát feloldódását követően 0,05 mól (53 mg) koncentrációig cianobromidot adunk hozzá. A reakció 22 °C-on 12 óra alatt teljesen lezajlott. Az anyagot vákuumban bepároljuk, eredeti töménységéhez képest kétszeres mennyiségű vízzel okijuk és liofilizáljuk.
2. példa
Inzulin B-lánca hasított génfiiziós termékének előállítása
A B-lánc (előállítását lásd a fenti cikkben) liofillzált fermentlé 900 mg-jához 67,5 %-os (tf/tf) hangyasavat adunk. Ehhez 15 perces keverés után 27 mg (3% súly/súly arányban a szilárd fermentlére számítva) nátriuni-tioszulfát-pcntahidrátot adunk. A nátriumtioszulfát feloldódását követően 0,10 mól koncentrációig (106 mg) cianobromidot adunk hozzá. A reakció 22 °C-on 12 óra leforgása alatt tökéletesen lejátszódott. A mintát vákuumban bepároljuk, vizzel eredeti töménységének kétszeresére hígítjuk és liofilizáljuk.
3. példa
Proinzulin hasított génfúziós termék előállítása
A proinzulin liofilizált fermentlé (előállítását lásd a 4 430 266 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban) 1 g-jához 10 ml 67,5%-os (tf/tf) hangyasavat adunk. 15 perces keverés után 30 mg (a nyers szilárd fermentlé 3 súly/súly%-a) nátriumtioszulfát-pentahidrátot adunk hozzá. A nátriumtioszulfát feloldódása után 0,10 mól koncentrációig (106 mg) cianobromidot adunk hozzá. A reakció
191 310 °C-on 12 óra alatt tökéletesen lezajlott. A mintát vákuumban bepároljuk, vízzel eredeti koncentrációjának kétszeresére hígítjuk és liofilizáljuk.
4. példa
Hasított génfúziós termékek szulfitolizise
Az ,1-3. példák szerint nyert hasított génfúziós W termékeket a következő eljárás szerinti szulfitolízisnek vetünk alá:
500 mg éianobromiddal hasított fcrmcnlációs anyagot pH 8,5 értéknél 10 ml 0,1 mól etilén-diainiii'7 mól ionmentesitett karbamid oldatban oldjuk ts 0,1 mól koncentrációig nátrium-szulfátot és 1 m.iól koncentrációig cisztelnt adunk hozzá. A feloldódást követően a reakció 22 °C-on 8 óra alatt tökéletesen lejátszódik.
Az 1-3. példákban leírt termékek szulfítolízisét összehasonlítottuk olyan anyag szulfitolizisével, melyet cianobromiddal azonban nátrium-tioszulfát nélkül hasítottunk. Amint azt a következő táblázat bemutatja, a nátrium-tioszulfát jelenléte a cianobromidos hasításban lényegesen megnöveli a szulfitolízishez rendelkezésre álló termék mennyiségét és a szulfitolízis eredményezte termék arányát a szilárd maradék százalékában.
Táblázat
A szulfitolízis kiinduló anyaga | Na2SSO, a cianobromid hasításban | Na2S„O6 a szulfitolízisben | Kitermelés, mg/g szilárd anyag a reakció lefutásának adott órájában | ||
2 | 6 | 24 | |||
Inzulin A-lánc | nem | nem | 1,8 | 5,0 | _ |
Inzulin A-lánc | igen | nem | 7.1 | 6,8 | - |
Inzulin A-lánc | nem | igen | 6,5 | - | - |
Inzulin B-lánc | nem | nem | 8,4 | 9,6 | — |
Inzulin B-lánc | igen | nem | 11,5 | 12,4 | — |
Inzulin B-lánc | nem | igen | 9,4 | - | - |
Proinzulin | nem | nem | 0.8 | 3,0 | 4,1 |
Proinzulin | igen | nem | 7.8 | 9,4 | 9,1 |
Proinzulin | nem | igen | 5,4 | — | — |
SZABADALMI IGÉNYPONTOK
Claims (5)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás tiol-csoporlo(ka)t tartalmazó peptidekben a metionin karboxilcsoportjánál levő peptidkötés cianobromiddal végzett hasítására, azzal jellemezve, hogy a hasítást a pepiidben levő tiolcsoport(ok)hoz képest feleslegben levő tioszulfát ion jelenlétében végezzük.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hasítási reakcióelegyben a tioszulfát iont alkálifémsójaként alkalmazzuk.
- 3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az alkálifémsóként nátrium-tioszulfátot alkalmazunk.40
- 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hasítást 15 °C és 35 C közötti hőmérsékleten végezzük.
- 5. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hasítást 20 °C és 25 °C közötti hőmérsékleten45 végezzük.Rajz nélkülKiadja az Országos Találmányi Hivatni A kiadásért felel: Himer Zoltán osztályvezető Megjelent a Műszaki Könyvkiadó gondozásábanCOPYLUX Nyomdaipari és Sokszorosító Kisszövetkezet
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US06/519,169 US4451396A (en) | 1983-08-01 | 1983-08-01 | Process for inhibiting undesired thiol reactions during cyanogen bromide cleavage of peptides |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HUT37441A HUT37441A (en) | 1985-12-28 |
HU191310B true HU191310B (en) | 1987-02-27 |
Family
ID=24067162
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU841747A HU191310B (en) | 1983-08-01 | 1984-05-04 | Improved process for the cleavage of peptides containing thiol groups with bromcyanide |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4451396A (hu) |
EP (1) | EP0134070B1 (hu) |
JP (1) | JPS6042395A (hu) |
AU (1) | AU575562B2 (hu) |
CA (1) | CA1251899A (hu) |
DE (1) | DE3473278D1 (hu) |
DK (1) | DK171440B1 (hu) |
FI (1) | FI841726A (hu) |
GB (1) | GB2144429B (hu) |
GR (1) | GR82069B (hu) |
HU (1) | HU191310B (hu) |
IE (1) | IE57353B1 (hu) |
IL (1) | IL71736A (hu) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3625378A1 (de) * | 1986-07-26 | 1988-02-04 | Hoechst Ag | Verfahren zur entfernung von halogencyanen und phosgen aus abgasen |
DE3709432A1 (de) * | 1987-03-21 | 1988-10-06 | Fresenius Ag | Kapillarfilteranordnung zur sterilisation von fluessigen medien |
US5986070A (en) * | 1990-04-06 | 1999-11-16 | Amgen Inc. | Production of biologically active NGF proteins |
US5606031A (en) * | 1990-04-06 | 1997-02-25 | Lile; Jack | Production and purification of biologically active recombinant neurotrophic protein in bacteria |
EP0596969A1 (en) * | 1991-07-29 | 1994-05-18 | British Bio-Technology Limited | Igf-ii analogues |
KR100253916B1 (ko) * | 1997-12-29 | 2000-05-01 | 김충환 | 사람 인슐린 전구체의 제조방법 |
AU4380599A (en) * | 1998-06-26 | 2000-01-17 | Ppl Therapeutics (Scotland) Limited | Methods for production of recombinant polypeptides |
PL213309B1 (pl) | 2006-02-09 | 2013-02-28 | Polska Akademia Nauk Inst Biochemii I Biofizyki | Sposób hydrolizy wiazania peptydowego |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2253327A1 (de) * | 1972-10-31 | 1974-05-09 | Hoechst Ag | Verfahren zur herstellung von insulin, insulin-analogen und -derivaten |
YU76981A (en) * | 1980-03-27 | 1983-09-30 | Lilly Co Eli | Process for bonding the a-chain of insulin or insulin analogues and the b-chain of insulin or insulin analogues in order to obtain insulin or insulin analogues |
-
1983
- 1983-08-01 US US06/519,169 patent/US4451396A/en not_active Expired - Lifetime
-
1984
- 1984-05-01 CA CA000453215A patent/CA1251899A/en not_active Expired
- 1984-05-02 FI FI841726A patent/FI841726A/fi not_active Application Discontinuation
- 1984-05-02 IL IL71736A patent/IL71736A/xx not_active IP Right Cessation
- 1984-05-02 IE IE1089/84A patent/IE57353B1/en not_active IP Right Cessation
- 1984-05-03 GR GR74578A patent/GR82069B/el unknown
- 1984-05-03 DE DE8484302980T patent/DE3473278D1/de not_active Expired
- 1984-05-03 AU AU27641/84A patent/AU575562B2/en not_active Ceased
- 1984-05-03 DK DK219684A patent/DK171440B1/da not_active IP Right Cessation
- 1984-05-03 GB GB08411367A patent/GB2144429B/en not_active Expired
- 1984-05-03 EP EP84302980A patent/EP0134070B1/en not_active Expired
- 1984-05-04 HU HU841747A patent/HU191310B/hu not_active IP Right Cessation
- 1984-05-04 JP JP59090057A patent/JPS6042395A/ja active Granted
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0542439B2 (hu) | 1993-06-28 |
GB2144429B (en) | 1987-05-13 |
HUT37441A (en) | 1985-12-28 |
GB8411367D0 (en) | 1984-06-06 |
EP0134070A2 (en) | 1985-03-13 |
EP0134070B1 (en) | 1988-08-10 |
AU2764184A (en) | 1985-02-07 |
EP0134070A3 (en) | 1987-04-08 |
IL71736A0 (en) | 1984-09-30 |
FI841726A (fi) | 1985-02-02 |
JPS6042395A (ja) | 1985-03-06 |
IL71736A (en) | 1986-12-31 |
AU575562B2 (en) | 1988-08-04 |
IE57353B1 (en) | 1992-08-12 |
GB2144429A (en) | 1985-03-06 |
US4451396A (en) | 1984-05-29 |
DK219684D0 (da) | 1984-05-03 |
DK171440B1 (da) | 1996-10-28 |
FI841726A0 (fi) | 1984-05-02 |
DK219684A (da) | 1985-02-02 |
CA1251899A (en) | 1989-03-28 |
DE3473278D1 (en) | 1988-09-15 |
IE841089L (en) | 1985-02-01 |
GR82069B (hu) | 1984-12-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5986048A (en) | Process for obtaining insulin precursors having correctly bonded cystine bridges | |
US5352769A (en) | Enzymatic removal of a protein amino-terminal sequence | |
KR100823463B1 (ko) | 인슐린 및 인슐린 동족체의 개량된 생산을 위한 c-펩티드 | |
FI77876B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av humaninsulin eller en treoninb30-ester av humaninsulin eller ett salt eller komplex daerav. | |
CA1246478A (en) | Process for the preparation of insulin derivatives, the b chain of which is lengthened c-terminally, novel insulin derivatives modified by bases, agents containing these derivatives and their use | |
CA2464616C (en) | Process for preparing insulin compounds | |
US4430266A (en) | Process for producing an insulin precursor | |
HU191310B (en) | Improved process for the cleavage of peptides containing thiol groups with bromcyanide | |
KR920008710B1 (ko) | 인슐린 유도체의 제조방법 | |
DK154573B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af insuliner ud fra tilsvarende praeproinsulinanaloge | |
GB2073204A (en) | Process for producing an insulin precursor | |
EP0037256B1 (en) | Process for producing an insulin | |
DE3687702T2 (de) | Schutz von methionin in einer polypeptid-kette von irreversibler oxydation. | |
FI73239C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av ett insulinderivat. | |
HU208704B (en) | Process for producing insuline precurzor | |
HU207526B (en) | Process for renaturating false recombinants of insuline precursors | |
US20030143663A1 (en) | Process for preparing insulin compounds | |
JPS60258159A (ja) | システイン誘導体の製造法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HU90 | Patent valid on 900628 | ||
HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |