HU190809B

HU190809B - Process for preparing new antibiotic 76-11

Info

Publication number: HU190809B
Application number: HU822498A
Authority: HU
Inventors: Kiyoshi Isono; Goto Nakamura; Shiego Fujita
Original assignee: Rikagaku Kenkyusho,Jp; Kaken, Chemical Co,Ltd,Jp
Priority date: 1981-08-04
Filing date: 1982-08-03
Publication date: 1986-11-28
Also published as: NZ201243A; PL131791B1; DE3264771D1; EP0071970A1; PL237754A1; CA1183789A; AU552328B2; US4517178A; EP0071970B1

Description

A találmány tárgya eljárás egy új antibiotikum, az antibiotikumot tartalmazó kokcidiózis elleni szer, valamint hatékony komponensként az antibiotikumot tartalmazó, haszonállatok növekedését gyorsító és táplálék hasznosítását fokozó szer előállítására. Közelebbről: a találmány tárgya eljárás az új 76—11 jelű antibiotikum előállítására - amely abból áll, hogy az Actinomadura sp. 76-11 jelű, a 76-11 jelű antibiotikumot termelő mikroorganizmust tenyésztjük, majd az antibiotikumot elkülönítjük; eljárás egy kokcidiózis elleni szer előállítására, amely hatékony komponensként az antibiotikumot tartalmazza; eljárás haszonállatok növekedését gyorsító és táplálék-hasznosítását elősegítő szer előállítására, amely hatékony komponensként az antibiotikumot tartalmazza; és eljárás az antibiotikumot tartalmazó takarmány előállítására.

A találmány kidolgozása során új és hasznos antibiotikumok előállítására irányuló kutatás keretében különböző helyekről összegyűjtött talajokból elkülönítettünk egy mikroorganizmust és tanulmányoztuk az ezen mikroorganizmus által termelt antibiotikumot. Ennek eredményeként azt találtuk, hogy egy, az Actinomadura genushoz tartozó mikroorganizmus egy új - általunk 76-11 jellel ellátott - antibiotikumot termel - amely a szakirodalomban nem ismert és ez az antibiotikum felhalmozódik a sejtekben és a fermentlében.

Másrészt: a kokcidiózis a házi szárnyasok fertőző megbetegedése, amelyet az Eimeria genushoz tartozó Protozoa félék idéznek elő, amely hasmenést és rossz táplálék-hasznosítást, végül ezek elhullását eredményezi.

A Protozoa-félék első generációja, az oociszta, az ürülékkel kerül ki a szervezetből, spórákat képez és egymás után megfertőzi a szárnyasokat. Tipikus ilyen Protozoa-félék pl. a következők: Eimeria tanella, Eimeria acervulina, Eimeria necatrix, Eimeria brunetti, Eimeria maxima stb. A Protozoafélékkel megfertőzött szárnyasok elveszítik kereskedelmi értéküket. Ezért a kokcidiózis megelőzése ipari fontosságú érdek. Ennek megfelelően már korábban javasoltak és széles körben tanulmányoztak különböző megelőző és gyógyító módszereket. Néhány példa a javasolt szerekre: arzén, nitrofurán vagy biszfenol vegyületek, szulfamid gyógyszerek, tiazin, kinolin, piridin vagy guanidin származékok, stb. Ezek a szerek azonban nem eléggé hatékonyak, továbbá: új Protozoa-félék jelennek meg, amelyek rezisztensek ezekre a szerekre. Ennek megfelelően egy új, hatékony szer kidolgozása érdeklődésre tarthat számot.

Ilyen körülmények között vizsgálatokat végeztünk a házi szárnyasok kokcidiózisa elleni, hatásos gyógyszer felkutatása céljából és azt találtuk, hogy a 76—11 antibiotikum rendkívül hatékony házi szárnyasok kokcidiózisával szemben.

Másrészt: széles körben elterjedt az a gyakorlat, hogy háziállatok, ill. szárnyasok növekedésének gyorsítására, ill. tojáshozamának növelésére a táplálékhoz bizonyos antibiotikumokat adagolunk. Annak eredményeként azonban, hogy állatoknak az ember és állatok esetében használatos antibiotikumokat adagolnak, rezisztens törzsek jelennek meg, és ez bizonyos káros hatásokra vezethet az

809 ember gyógykezelésében. Továbbá: aggályos az a körülmény, hogy a hús vagy állati termékek fogyasztása során az állatoknak adagolt és szervezetükben felhalmozódott antibiotikumot visszük be ’ az emberi szervezetbe.

Tanulmányoztunk olyan növekedést gyorsító szereket, amelyek mentesek a fent leírt hátrányos tulajdonságoktól és azt találtuk, hogy a 76-11 antibiotikum háziállatokba (ezen belül szárnyasokba) való bevitele gyorsítja a propionsav képződését az emésztőszervekben és gátolja a bendő-folyadék viszkozitásának növekedését. Másrészt ismeretes, hogy a propionsav az ecetsavnál vagy a vajsavnál hatékonyabb, ami az illékony zsírsav energia-hasz⁵ nosítási együtthatóját - az élő állati szervezetben illeti. A fent leírt tények alapján kimutatható volt, hogy a 76-11 antibiotikum kiváló szer lenne, amely képes a háziállatok (ezen belül szárnyasok) növekedésének gyorsítására és táplálékhasznosításuk hatékonyságának növelésére.

A találmány alapját az előbbiekben feltárt felismerések képezik.

A találmány tárgya a 76-11 új antibiotikum előállítása.

²⁵ Ugyancsak a találmány tárgya egy hatékony szer kidolgozása házi szárnyasok kokcidiózisa ellen.

A találmány tárgya továbbá: nagyhatékonyságú szer kidolgozása háziállatok és szárnyasok növekedésének gyorsítására és tápanyag-hasznosításuk hatékonyságának növelésére.

A találmány továbbá olyan tápanyag előállítására irányul - házi szárnyasok etetésére amely hatékony a kokcidiózis megelőzésében és kezelésében.

Egyben a találmány tárgya olyan tápanyag előállítása - háziállatok és szárnyasok számára amely képes a növekedés gyorsítására és a tápanyag-hasznosítás hatásfokának növelésére.

Ezek a találmány szerinti célkitűzések a 76-11 új antibiotikum segítségével érhetők el, amelyet úgy állítunk elő, hogy egy, a 76-11 antibiotikum termelésére képes mikroorganizmust, az Actinomadura 76-11 genushoz tartozó (a továbbiakban: „Sp. 76-11”) mikroorganizmust tenyésztjük és a fermentléből elkülönítjük a 76-11 antibiotikumot.

A 76-11 antibiotikum UV abszorpciós spektrumát (szabad sav) az 1. ábra mutatja be.

A 2., ill. 3. ábra a 76-11 antibiotikum Na-só, ill. szabad sav (KBr lemezben) IR abszorpciós spektrumát szemlélteti.

Az alábbiakban részletesen leírjuk a 76-11 új antibiotikumot és az előállítására irányuló eljárást.

A találmány szerinti eljárásban alkalmazott mikroorganizmus az Actinomadura genushoz tartozik és jellemzője, hogy képes a 76-11 antibiotikum előállítására. Ez az Sp. 76-11 jelű mikroorganizmus. Az Sp. 76-11-et a Fermentation Research Institute-nél (Ipari Tudományos és Technológiai Hivatal, Nemzetközi Kereskedelmi és Ipari Minisztérium, Japán; nemzetközi letéteményes szerv, a továbbiakban „FERM”) helyeztük letétbe, BP-83 számon és ez a FERM-ben abban a részlegben áll megőrzés alatt, amely a tenyészetekhez teljes, korlátozás nélküli hozzájutást biztosít. A FERM-BP-83 törzs letétbe helyezését, a korlá-21

190 809 •2 tozás nélküli formában, a szabadalom oltalmi ideje lejártáig - amennyiben a bejelentés alapján szabadalmat engedélyeznek - fenn kívánjuk tartani, ily módon az említett mikroorganizmus törzs harmadik felek számára bármikor hozzáférhető lesz, a bejelentés alapján engedélyezett szabadalom teljes oltalmi ideje alatt. Az Sp. 76-11 a következő mikrobiológiai tulajdonságokkal rendelkezik.

Az Sp. 76-11 tulajdonságait, különböző táptalajokon, 20-30 nappal a beoltás után figyeltük meg. A zárójelben megadott színárnyalatok a szinmegjelölési leíró szótáron alapulnak.

(I.) Morfológia

Az Sp. 76-11 növekedést mutat zabliszt agaron és malátakivonat-élesztőkivonat agaron, de nem vagy alig nő más táptalajokon, ezért a morfológiát zabliszt agaron, malátakivonat-élesztőkivonat agaron, 3% zablisztet tartalmazó folyékony táptalajon figyeltük meg. Az eredmények a következők:

(i) Szubsztrát-micélium

A szubsztrát-micélium mind az agaron, mind a folyékony táptalajon terjed és elágazásokat képez. Hosszabb időtartamú tenyésztés után a szubsztrátmicélium osztódni kezd és elliptikus spórákat képez, amelyek mérete 0,8-1,2 x 1,5-1,6 μ. Légmicélium nem képződik a különböző táptalajokon, de zabliszt agaron, 33 °C-on több, mint 20 napon át tartó tenyésztés után olykor vékony, fehér légmicélium képződik - amely hajlított, szalagszerű vagy köteges, kissé elágazó - és nem képez spórát.

(ii) Légmicélium

Számos különböző táptalajon nem képződik, de zabliszt agar táptalajon, több, mint 20 napon át tartó tenyésztés után olykor megfigyelhető. A képződött légmicélium szabálytalanul hajlott. Elektronmikroszkóppal nem figyelhető meg spóra.

(II.) Sejt-alkotók

Az Sp. 76-11 -et 1 % glükózt, 1 % élesztőkivonatot és 0,1% zablisztet tartalmazó táptalajon 33 °C-on 7 napig tenyésztjük, rázatás mellett. A sejteket öszszegyűjtjük és mossuk abból a célból, hogy mintát vehessünk a sejt összetételének meghatározására. Meghatározzuk a diamino-pimelinsavat és a cukor-összetételt. Mezo-diamino-pimelinsav, galaktóz és maduróz mutatható ki.

(III.) Növekedés különböző táptalajokon (i) Szacharóz-nitrát agar (Czapek agar) tenyészet:

Növekedés: nagyon gyenge. 30 napos tenyésztés után gyenge növekedés figyelhető meg. A telep átlátszó. A felület világosbarna (2 ea), a fonák oldal világos elefántcsont színű (2 ca).

Légmicélium: nem képződik.

Oldható pigment: nem képződik.

(ii) Glükóz-aszparagin agar tenyészet

Növekedés nem figyelhető meg.

(fii) Glicerin-aszparagin agar tenyészet

Növekedés nem figyelhető meg.

(iv) Szervetlen só-keményítő agar tenyészet:

Növekedés: nagyon gyenge. Gyenge növekedés figyelhető meg 30 napos tenyésztés után. A felület világos sárgás-barna (3 gc) és a fonák oldal sárgásbarna (3 ie).

Légmicélium: nem képződik.

Oldható pigment: nem képződik.

(v) Tirozin agar tenyészet

Növekedés: nagyon gyenge. A felület világossárga (3 ca), a fonák oldal pedig világos elefántcsont színű (2 ca).

Légmicélium: nem képződik.

Oldható pigment: nem képződik.

(vi) Tápagar tenyészet:

Növekedés: nagyon gyenge. 30 nap után mind a felszín, mind a fonák oldal világos elefántcsont színű (2 ca).

Légmicélium: nem képződik.

Oldható pigment: nem képződik.

(vii) Élesztőkivonat-malátakivonat agar tenyészet (ISP 2.)

Növekedés: jó. A felület barázdált, vastagon bevont ; mind a felület, mind a fonák oldal világosbarna (2 e), olykor kékes (10 ie).

Légmicélium: hosszú tenyésztési idő után olykor fehéres színű légmicélium képződik.

Oldható pigment: nem képződik.

(viii) Zabliszt agar tenyészet (ISP 3.):

Növekedés: jó. A felület sima, mintegy festékkel bevont és indigókék színű (10 ie), a fonák oldal pedig fehér, végül indigókék (10 ne).

Légmicélium: 30 nap után olykor fehér légmicélium képződik.

Oldható pigment: nem képződik.

(ix) Pepton-élesztőkivonat-vas agar tenyészet (ISP 6.):

Növekedés nem figyelhető meg.

(x) Lefölözött tej (37 °C):

Növekedés: lassú. Koaguláció és peptonizáció.

(xi) Glükóz pepton zselatin tenyészet (20 °C):

Növekedés: nagyon lassú. Elfolyósítás figyelhető meg.

(IV.) Fiziológiai jellemzők (i) Optimális növekedési hőmérséklet:

27-37 °C, előnyösen 33-37 C’.

(ii) Zselatin folyósítás: igen.

(ifi) Keményítő hidrolízis: nem.

(iv) Lefölözött tej: koaguláció, enyhe peptonizáció.

(v) Melamin-szerű pigment termelése: nem.

(vi) Savállóság: saválló.

(V.) Különböző szénforrások hasznosítása:

Az Sp. 76-11-et különböző cukrokat tartalmazó

Pridham-Gottlieb agaron (ISP 9.) tenyésztettük, de növekedés nem volt megfigyelhető. Ezért ehelyett a fent leírt táptalajt alkalmaztuk, 0,1% élesztőkivonat hozzáadása mellett. A kapott eredmények a következők: L-arabinóz D-xilóz D-glükóz D-fruktóz szacharóz

1-inozit L-ramnóz raffinóz mannit + kontroll (cukor nélkül) Jelölés: + + + + + + + + + ±

+ + + + + + + + + + + + + + + + + + ±

nagyon jó növekedés jó növekedés növekedés kontroll

190 809

Az Sp. 76-11 röviden a következőkkel jellemezhető:

(i) Morfológia:

Az Sp. 76-11 általában nem képez légmicéliumot, de olykor, hosszú tenyésztési idő után megfigyelhető légmicélium. A szubsztrát-micélium hajlott, és a tenyésztés végső időszakában osztódik, ellipszis alakú spórák képződése mellett. A micélium Gram-pozitív és saválló.

(ii) Növekedés különböző táptalajokon:

Az Sp. 76-11 számos különböző agar táptalajon nem vagy alig növekszik, a zabliszt agar és az élesztőkivonat-malátakivonat agar kivételével.

A törzs legjobban zabliszt agar táptalajon nő és

3-4 heti tenyésztés után a sejtekben indigókék, vízoldható pigment képződik.

(iii) Fiziológiai tulajdonságok:

A törzs 33-37 °C-on jó növekedést mutat, a zselatint enyhén elfolyósítja, a lefölözött tejet koagulálja és peptonizálja és nem képez melamin pigmentet.

(iv) Cukor-hasznosítás :

A törzs jól hasznosítja az L-arabinózt, D-xilózt, D-glükózt, D-fruktózt, szacharózt, 1-inozitot, Lramnózt, raffinózt és mannitot olyan Pridham— Gottlieb agar táptalajon, amelyhez 0,1% élesztőkivonatot adagoltunk.

Mint fent leírtuk, az Sp. 76-11 az Actinomycetales rend Actinomadura genusához tartozó törzsnek látszik, a spórák és a micélium morfológiája, a különböző táptalajokon való növekedés és a sejtfal-összetétel alapján. Ha azonban, összehasonlítjuk az Sp. 76-11 jellemzőit a következő helyeken leírt, az Actinomadura genushoz tartozó törzsek tulajdonságaival:

H. Nonomura, Y. O|iara: Az Actinomyces-ek eloszlása a talajban. XI. Néhány új species az Actinomadura, genusban, Lechevalier et al., J. Ferment. Technoi. 49, 904-912, 1971;

T. P. Preobrazhenskaya, M. A. Sveshnikova, L. P, Terekhova: Az Actinomadura genushoz tartozó speciesek azonosítási kulcsa. The Biology of the Actinomycetes and Related Organisms 12, 30-38, 1977;

azt találjuk, hogy ezek nem ismertetnek olyan törzseket, amelyek zabliszt agar táptalajon indigókék sejt-pigmentet képeznek, amint ezt az Sp. 76-11 teszi. Ennek megfelelően azt a következtetést vontuk le, hogy az Sp. 76-11 új, az Actinomadura genushoz tartozó törzs.

Az említett 76-11 antibiotikum előállítása során a 76-11 antibiotikumot termelő törzset az antibiotikum-termelésben alkalmazott hagyományos módszerek szerint tenyészthetünk, A tenyésztési mód nem különösebben kritikus, és folyékony vagy szilárd tenyésztést egyaránt alkalmazhatunk. A tenyésztés nagyüzemi méretekben és előnyös körülmények között való végzése érdekében ajánlatos olyan módszerek alkalmazása, amelyek szerint a táptalajt a 76-11 antibiotikumot termelő mikroorganizmus spóraszuszpenziójával vagy tenyészfolyadékával oltjuk be és a tenyésztést levegőztetés és keverés mellett végezzük.

A találmány szerint alkalmazott tápanyag-forrás nem különösen kritikus; a mikroorganizmusok te4 nyésztésére szokásosan alkalmazott bármilyen tápanyag-forrás felhasználható. Szénforrásként keményítő, dextrin, glicerin, glükóz, szacharóz, galaktóz, inozit, mannit stb., nitrogénforrásként pedig zabliszt, élesztő, pepton, szójaliszt, húskivonat, rizskorpa, búzakorpa, karbamid, kukoricalekvár, ammóniumsók, nitrátok és egyéb szerves vagy szervetlen nitrogén-vegyületek alkalmazhatók. Kívánt esetben más szervetlen sókat, így nátriumkloridot, foszfátokat, kálium-, kálcium-, cink-, mangán-, vas-sókat adagolhatunk. Szükség esetén a táptalaj tartalmazhat állati-, növényi- vagy ásvány-olajokat is. A tenyésztési körülményeket - pl. a hőmérsékletet és az időt - a 76-11 antibiotikum maximális termelése szempontjának megfelelően választhatjuk meg. A tenyésztést pH 4-9 értéken végezzük, előnyösen pH 7 körül, 25-35 ’C-on, előnyösen 28-33 ’C-on, kb. 5-20 napon - előnyösen kb. 5-11 napon - át. Magától értetődően azonban az olyan tenyésztési körülmények, mint a táptalaj összetétele, a pH, hőmérséklet, kevertetés megfelelően változtatható, annak érdekében, hogy az alkalmazott törzs és a külső körülmények figyelembevételével optimális eredményt érjünk el. A tenyésztés befejezése után a fermentlevet pl. centrifugáljuk, a sejteknek az oldatból való elkülönítésére. Az így előállított 76-11 antibiotikum a metabolitok elkülönítésére szokásosan alkalmazott bármilyen hagyományos módszerrel elkülöníthető a fermentléből. Megemlíthető pl. az a módszer, amely a 76-11 antibiotikum és a szennyezések oldhatóságkülönbségét használja fel; az a módszer, amely ezek abszorpciós affinitása különbözőségén alapul, vagy ezek kombinációja és szükséges esetben ismételt alkalmazása. A 76-11 antibiotikumra jellemző, hogy mind a tenyészfolyadékban, mind a sejtekben jelen van és az oldhatóság-különbség alapján a tenyészfolyadékból etil- vagy butilacetáttal, kloroformmal, butanollal vagy hasonló oldószerekkel extrahálható. A sejteket vizes acetonnal vagy vizes metanollal extraháljuk, a szerves oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk és az így kapott vizes oldatot etilacetáttal vagy hasonló oldószerrel extraháljuk. Az extrahált oldatokat egyesítjük és bepároljuk; így a 76-11 antibiotikumot tartalmazó nyers kivonatot kapunk. Mivel a nyers kivonat nagymennyiségű szennyezést tartalmaz, abszorpciós kromatográfiás kezelésnek vetjük alá szilikagél, alumjniumoxid stb. felhasználásával, majd tisztítjuk. így pl. a nyers kivonatot kismennyiségű benzolban oldhatjuk és felvihetjük benzollal előzetesen egyensúlyba hozott szilikagél oszlopra. Ezt követően az eluálást benzollal, majd olyan benzol-etilacetát eleggyel végezzük, amelynek etilacetát tartalmát fokozatosan növeljük. Az eluátumot frakciógyűjtővel frakcionáljuk. A biológiai aktivitást mutató frakciókat összegyűjtjük és betöményítjük, egy tisztított por előállítására. A további tisztítás érdekében megismételjük a szilikagél-kromatográfiás eljárást. Ezen túlmenően végezhetünk még újabb tisztítást, preparatív vékonyrétegkromatográfia segítségével, ha szükséges. Az ezt követő, csökkentett nyomáson való bepárlás tisztított terméket eredményez, amelyet kismennyiségű metanolban oldunk és lehűtünk. A 76-11 antibiotikum színtelen kristá-41 . 190 809 lyok alakjában válik ki. A kristályokat szűréssel elkülönítjük és szárítjuk; így a tiszta 76-11 antibiotikumot kapjuk.

Az ily módon előállított 76-11 antibiotikum a következő fizikokémiai és biológiai tulajdonságokat mutatja.

A 76-11 antibiotikum fizikokémiai és biológiái tulajdonságai (1) Elem-analízis:

szabad sav: C 62,61% H 8,27% N 0%

Na só: C 60,57% H 8,04% N 0% (2) Molekulasúly:

843 (titrálásos módszerrel mérve)

873 (FD tömegspektrometriás módszerrel mérve) (3) Olvadáspont: szabad sav: 108-112 °C

Na só: 210-212 “C (bomlik) (4) Fajlagos forgatóképesség:

[alfaJo + 36,6° (c=0,382, kloroformos oldatban) (UV/5) UV abszorpciós spektrum:

A maximális abszorpció sávjai:

CHjOH-ban és HCl-CH₃OH-ban: larnbda_mM = 217 mg (Ej^, 303)

262 mg (EJ^ 182)

301 mg (EJ^, 68) lúgos metanolban: larnbda_m„ = 260 mg (Ej^, 87)

308 mg (E^50) (6) IR abszorpciós spektrum:

A specifikus abszorpció fő sávjai KBr pasztillában:

szabad sav: 3450, 2960, 1720, 1640, 1610, 1578, 1446, 1380, 1315, 1292, 1250, 1209, 1151, 1100, 1035 975 940 cm^-1.

Na só: 3390, 2960, 1718, 1640, 1609, 1578, 1450, 1380, 1340, 1316, 1250, 1197, 1152, 1108, 1092, 1060, 1040, 1002, 980, 930 cm¹.

(7) Oldhatóság különböző oldószerekben:

Jól oldható benzolban, kloroformban, etilacetátban és acetonban; oldható metanolban és etanolban, valamint dimetilformamidban, és rosszul oldódik vízben és hexánban.

(8) Színreakciók:

A káliumpermanganát reakció pozitív, de a perjódsav-benzidin reakció negatív.

(9) Lúgosság, savasság vagy semlegesség:

Savas anyag; pKs' 4,6 (66,7%-os dioxánban).

(10) Szín:

Színtelen kristályok.

(11) Antimikrobiális aktivitás:

A különböző mikroorganizmusok bouillon-agar táptalajban való növekedése gátlásához szükséges minimális koncentrációkat az alábbiakban mutatjuk be:

Vizsgált mikroorganizmus	A növekedés gátlásához szükséges minimális koncentráció (mcg/ml)
Staphylococcus aureus
209 P	0,4
Staphylococcus aureus
(multírezisztens)	0,4
Bacillus subtilis PC 1219	0,4
Bacillus subtilis H 17	0,4
Bacillus subtilis M 45 (rec~)	0,4
Mycobacterium SP 607	0,4
Mycobacterium phlei	0,4
Mycobacterium avium	0,4
Escherichia coli	100 felett
Salmonella typhimurium	100 felett

(12) Aktivitás daganat-sejtekkel szemben:

A 76-11 antibiotikum 1—100 mcg/ml koncentrációban differenciálási képességet mutat a Friend leukémia és a mieloid leukémia sejtek vonatkozásában.

(13) Toxicitás egérben:

A 76-11 antibiotikum 50, 100 és 200 mg/kg koncentrációban, CMC szuszpenzió formájában a hasüregbe való bevitele egérben nem mutat toxicitást.

Ha a 76-11 antibiotikum fent leírt fizikokémiai és biológiai tulajdonságait összehasonlítjuk ismert antibiotikumok tulajdonságaival, azt találjuk, hogy a 76-11 antibiotikum az ún. poliéter ionofór antibiotikumok közé sorolható, amennyiben savas jellegű anyag és Na sója olajban oldható; erős aktivitást mutat Gram-pozitív baktériumokkal és saválló baktériumokkal szemben; nem tartalmaz nitrogént, stb. Egyik anyag sem mutatja azonban ugyanazokat a fizikokémiai tulajdonságokat, különösen a 76-11 antibiotikum fent leírt specifikus UV abszorpciós sávjait, ezért a 76-11 antibiotikumot új antibiotikumnak tekintjük és a fenti módon jelöltük meg.

A következőkben a találmány szerinti kokcidiózis elleni szert írjuk le. Ha a 76-11 antibiotikumot alkalmazzuk kokcidiózis elleni szerként, ezt a megbetegedett szárnyasoknak eredeti alakjában vagy tápanyag-adalékként adhatjuk be. Néhány példa a tápokra: árpaliszt, búzaliszt, rizsliszt, kukoricaliszt, szójaliszt, szójapogácsa, káposztarepce-pogácsa, rzskorpa, olajmentesített korpa, fehér burgonyapor, édesgyökér-por, különböző keményítők, tofu korpa, élesztő, halliszt, fermentációs maradék stb. A 76-11 antibiotikum másrészt hozzáadható olyan hagyományos tápanyag-adalékhoz, amilyenek a különböző vitaminok, ásványi eredetű anyagok, tartósítószerek, enzim-készítmények, fehérjék, szénhidrátok, aminosavak, lázcsillapítók, nyugtatok, gyulladásgátlók és mikrobicid anyagok.

A komponens hatékony koncentrációja attól függően változik, hogy milyen természetű és menynyire előrehaladott a megbetegedés, milyen korúak a házi szárnyasok; általában a kb. 5-200 ppm, előnyösen a 10-100 ppm tartományban helyezkedik el.

A találmány szerinti eljárással kiváló kokcidiózis

-5190 809 elleni szer állítható elő, amely rendkívül hatékony házi szárnyasok kokcidiózisa ellen és nem toxikus, ezenkívül nem mutat mellékhatásokat.

A következőkben leírjuk a találmány szerinti, háziállatok növekedésének gyorsítására és tápanyag-hasznosítása hatásfokának növelésére alkalmas szert.

A találmány szerinti, növekedést gyorsító és tápanyag-hasznosítást növelő szer úgy állítható elő, hogy a 76-11 antibiotikumot önmagában, vagy egy hígítóval elkészített diszperzió vagy oldat alakjában hozzáadjuk háziállatok táplálékához vagy ivóvizéhez. A szer azonban alkalmazható por, tabletta, kapszula, granulátum vagy pilula alakjában is, amelyek úgy állíthatók elő, hogy a 76-11 antibiotikumot adott esetben fiziológiásán ártalmatlan szilárd vagy folyékony hígítószerekkel elegyítjük. A táplálékhoz való adagolás esetén előnyösen egy előzetesen elkészített premixet alkalmazunk. A premix úgy állítható elő, hogy a tisztított vagy nyers termékeket vagy a hatásos komponenst tartalmazó sejteket fiziológiailag elfogadható szilárd vagy folyékony vivőanyaggal keverjük össze. Szilárd vivőanyagként a következőket említhetjük meg: búzaliszt, szójaliszt, rizskorpa, kukoricaliszt, keményítő, glükóz, élesztő, halliszt, talkum, diatómaföld stb., és példák a folyékony vivőanyagokra: fiziológiás sóoldat, desztillált víz, fiziológiailag elfogadható szerves oldószerek stb.

A találmány szerinti szerhez hozzákeverhetők más megfelelő segédanyagok és adalékanyagok, pl. emulgeáló, diszpergáló, szuszpendáló, nedvesítő, töményítő vagy kocsonyásító anyagok, mikrobicid anyagok, tartósítószerek, enzim-készítmények, antibiotikumok, Lactobacillus készítmények stb. is.

A hatásos komponens koncentrációja a premixben megfelelően változtatható, a háziállatok állapotától függően.

A 76-11 antibiotikum koncentrációja a találmány szerinti, növekedést gyorsító és tápanyaghasznosítást fokozó szerben a fajta, kor és egyéb tényezők függvényében változtatható. A házi szárnyasoknak, amilyen a csirke, fúrj, pulyka, gyöngytyúk, kacsa, liba stb. olyan táplálékot adagolhatunk, amely a 76-11 antibiotikumot 5-200 ppm, előnyösen 10-100 ppm koncentrációban tartalmazza. A malac, nyúl stb. esetében olyan táplálék használható, amely a hatásos komponenst 5-200 ppm, előnyösen 10-100 ppm mennyiségben tartalmazza. Kérődzők - pl. a szarvasmarha, birka, kecske stb. - esetében a hatásos komponens koncentrációja 1 100 ppm, előnyösen 2-50 ppm lehet.

A találmány szerinti eljárással előállított 76-11 antibiotikumot alacsony toxicitás jellemzi és előnye az, hogy a 76-11 antibiotikum más antibiotikumokkal együtt való bevitele háziállatokba lényegében nem mutat mellékhatásokat. Egyes poliéter antibiotikumok, pl. a szalinomicin és a monenzin (szokásos dózisban) triacetil-oleandomicinnel vagy pleuromutilin-fumaráttal (a szokásos dózisban) együtt háziállatokba való bevitele általában átmeneti étvágycsökkenést vagy étvágytalanságot, hátsóláb-bénulást és hasonló tüneteket idéz elő, ezért kerülendő a poliéter antibiotikumok és az utóbbi anyagok együttes vagy egymáshoz közeli időpont6 bán való adagolása. A 76-11 antibiotikum esetében viszont ilyen aggodalomra nincs ok; ez egy kiváló szer, amely háziállatok és szárnyasok növekedésgyorsításának és tápanyag-hasznosítása hatásfoka növelésének elérésére egyaránt alkalmas.

A találmány szerinti szer bevitele háziállatokba és szárnyasokba gyorsítja propionsav képződését az állatok emésztőszerveiben és gátolja a bendőfolyadék viszkozitásának növekedését, ami nemcsak az állatok hasmenése, puffadása és ketózisa megelőzését eredményezi, hanem gyorsítja az állatok és szárnyasok egészséges növekedését és a tápanyag-hasznosítás hatásfokának növekedésére vezet.

A találmány szerinti kokcidiózis elleni szerben és növekedést gyorsító és tápanyag-hasznosítási hatásfokot növelő szerben a hatásos komponens, a 76-11 antibiotikum a következő alakban alkalmazható: tisztított vagy nyers termékek; a 76-11 antibiotikumot tartalmazó sejtek; fiziológiailag elfogadható fémsó (pl. nátrium, kalcium stb. só); szerves savval (pl. propionsawal, valeriánsawal stb.) képezett észter, vagy fémkomplex (pl. cink-komplex).

A találmány szerinti eljárásokat a következő példákban és vizsgálati példákban - amelyek a találmány oltalmi körét nem korlátozzák - részletesen írjuk le.

Ha másként nem tüntetjük fel, a leírásban és az igénypontokban a „%” és a „rész” jelölés „súly%”ra és „súlyrész”-re vonatkozik.

A következő példa eljárást mutat be a 76-11 antibiotikum előállítására.

1. példa

A 76-11 antibiotikum előállítása

Az említett Sp. 76-11 (FERM BP-83) törzs ferde agar tenyészetével beoltunk egy táptalajt, amely 3% zablisztet, 1,5% glicerint és 0,5% húskivonatot tartalmaz (pH kb. 6,5) és a tenyésztést 11 napon át folytatjuk 28 °C-on, rázatás közben. A fermentlé 3 ml-nyi mennyiségével azonos összetételű friss táptalajt oltunk be és a tenyésztést 7 napon át folytatjuk.

140 ml így kapott fermentlével 18 liter ugyanilyen összetételű táptalajt oltunk be - megfelelő fermentorban - és 28 °C-on 210 órán át végezzük a tenyésztést, 181/perc levegőztetési sebesség és 330 ford./perc kevertetési sebesség mellett.

A tenyésztés befejezése után 400 g diatómaföldet (Radiolite 700) adunk a fermentléhez és az oldatot centrifugáljuk. A kapott felülüszót (141, pH 7,8) kétszer extraháljuk, 81, ill. 51 etilacetáttal. A sejteket viszont 9 I és 6 1 acetonnal extraháljuk. Az extrahált oldatot vákuumban betöményítjük; igy 21 térfogatú vizes oldatot (pH 8) kapunk, amelyet kétszer extrahálunk, 1-11 etilacetáttal. Az utóbbi, etilacetáttal extrahált oldatot egyesítjük a felülúszóból kapott előbbi oldattal és vákuumban betöményítjük. Az így kapott maradékot kismennyiségű benzolban oldjuk és az oldatot előzetesen benzollal egyensúlyba hozott szilikagél oszlopra (0 3 cm x 50 cm) visszük fel. Az eluálást rendre 21 . 190 809 benzollal, 11 (5 : 1 térf. arányú) benzol-etilacetát eleggyel, 11 (1 : 1 térf. arányú) benzol-etilacetát eleggyel végezzük. Az aktív frakciókat (1:1 térf. arányú) benzol-etilacetát eleggyel extraháljuk, öszszegyűjtjük, vákuumban betöményítjük és nátrium-hidroxidos metanollal kezeljük; kb.l g nyers kristályt kapunk. Metanolból végzett többszöri átkristályosítással 400 mg 76-11 antibiotikumnátriumsót kapunk, tiszta kristályok alakjában. Olvadáspontja 210-212’C (bomlik).

A következőkben egy kísérleti példát mutatunk . be a találmány szerinti kokcidiózis elleni szerre vonatkozóan.

1. sz. kísérleti példa Kokcidiózis elleni szer

Vizsgált anyagok:

A kísérlet során felhasznált hatékony komponenseket homogén elegy keletkezéséig összekeverjük, egy adott koncentráció eléréséig, egy kokcidiózis elleni szert nem tartalmazó teljes kombinált csirke-táppal (ennek összetételét az 1. táblázatban mutatjuk be; az Orientál Yeast Co. gyártmánya). Az így kapott tápokat ad libitum adagoljuk csirkéknek, az oocisztákkal való fertőzést megelőzően 2 nappal kezdve az etetést, a kísérlet végéig (a fertőzés után 8 nappal bezáróan). Kontrollként szalinomicint alkalmazunk.

1. táblázat %

kukorica	61,2
búzaliszt	5,13
szójababolaj	3,07
szójababliszt	15,4
halliszt	10,3
lucemaliszt	3,07
kálciumkarbonát	0,3
NaCl	0,5
vitaminkeverék	1,03

A felhasznált csirkék:

Shaver Starcross típusú egészséges, 7 napos (azaz a fertőzés időpontjában 9 napos) kakasokat használunk, amelyeket előzetesen a kokcidiózis-fertőzéstől teljesen mentes körülmények között tartottunk. Az egyes csoportok 5-5 csirkéből állnak:

Bevitt oociszták és az inokulum mennyisége:

A fertőzéshez használt oociszta az Eimeria tenella egy érzékeny törzséből származik. Az egyes csirkék begyébe - orálisan, fémszonda alkalmazásával

- teljesen kifejlett oocisztákat (5 x 10*) viszünk be.

Az eredmények kiértékelése:

A szerek hatását az antikokcidiózis index (ACI) alapján értékeljük, amelyet a következőképpen határozunk meg:

ACI = (relatív súlynövekedés + túlélési arány)- (oociszta érték + megbetegedési érték) (i) Relatív súlynövekedés

A vizsgált csirkék súlyát mértük a kísérlet kezdetekor (az inokulálás előtt 2 nappal vagy a -2. napon), az inokulálás napján (0. nap), majd az inokulálás után 2, 4, 5, 6, 7 és 8 nappal. A kísérlet befejezésekor meghatározzuk mindegyik kísérleti csoport súlynövekedését és a relatív súlynövekedést a kontroll csoport súlya alapján számítjuk ki, ezt 100-nak tekintve, amelyet a kokcidiózis elleni szertől mentes táppal etetünk és nem inokulálunk.

(ii) Oociszta érték

A fertőzés utáni 8. napon meghatározzuk az oociszták számát a vakbélben, a bélcsatoma homogenizálása segítségével. Az oociszta értéket a következők szerint határozzuk meg:

A bélcsatomában talált oociszták száma	Az oociszta érték
0,0-0,1 x 10⁶	0
0,1-1,0 x 10«	1
1,0-5,0x10®	10
5,0-11,0x10®	20
ll,0x 10« felett	40

(iii) A bélcsatorna megbetegedési indexe

A kísérlet végén (a fertőzés utáni 8. napon) a csirkéket felboncoljuk és szemmel megvizsgáljuk a bélcsatomát, a megbetegedési index meghatározására. A megbetegedési indexet a következőképpen definiáljuk, és a megbetegedési értéket a megbetegedési index tízszeresének tekintjük:

(-) ... A vakbél teljesen normális. Ha vérző foltot találunk, a (-) jelet ( + )-ra változtatjuk.

( + ) ... A vakbél alakja normális. Tartalma kissé folyós és sárgás. A vakbél nyálkahártya membránja egy részén enyhe duzzadás található, amely megfehéredik.

( + + ) ... A vakbél alakja általában normális. A nyálkahártya membrán teljes felülete duzzadt. Tartalmában vérnyomok nem találhatók. A nyálka enyhén sárgás és halvány. A nyálkahártyán néhány fehér foltszerű elhalás vagy vérző folt található.

(+ + +)... A vakbél nyilvánvalóan sorvadt és alakja megváltozott; a végbélnél kissé hosszabb. Tartalma teljesen rendellenes: gyakran koagulált vér vagy fehéres-drapp színű, sajtszerű bomlott anyag tölti meg. A vakbél fala nyilvánvalóan duzzadt, kissé megtört és olykor még visszamaradnak vérző foltok. A károsodott szakasz eléri a vakbél alját, de a végbelet nem.

4(+ + + +).,.A vakbél elsorvadása és deformációja feltűnő mértékű. A vakbél kolbász alakú és a végbélnél nem hosszabb. A károsodás eléri a végbél ló-át vagy 14-ét. Az egyéb észleletek a 3 szerintiekkel megegyeznek.

(iv) Táplálékigény

Az egyes vizsgált csoportok táplálékigényét az átlagos súlynövekedés és a kísérlet teljes időtartama (10 nap) alatt elfogyasztott táplálék teljes mennyisége alapján határozzuk meg:

T' ITIt’ ' = felvett táplálék mennyisége ® ^y súlynövekedés

Az eredményeket a 2. és 3. táblázatban adjuk meg.

. 190 809

2. táblázat

Csoport	Felvett táplálék mennyisége	Súlynövekedés (g)	Táplálék- igény- index
	(g)

Kontroll: fertőzés 0 antibiotikum-

adagolás 0	177,2	96,4	1,84
Kontroll: fertőzés antibiotikumadagolás 0	177,4	87,0	2,04
50 ppm 76-11 antibiotikum	179,3	90,4	1,98
100 ppm 76-11 antibiotikum	174,4	80,4	2,17
50 ppm szalinomicin	170,6	91,8	1,86

3. táblázat

Csoport	Kontroll fertőzés 0 adagolás 0	Kontroll fertőzés*¹’ adagolás 0
súlyváltozás az	egymást követő napokon (g)
-2.	63,6 ±1,56	63,0 ±1,18
0.	81,6 ±3,12	79,6 ±2,14
2.	100,8 ±4,42	100,6 ±2,96
4.	119,0 ±4,76	122,2 ±4,99
5.	129,4 ±5,20	125,6 ±4,82
6.	137,4 ±5,14	133,4 ±5,22
7.	147,2 ±5,40	141,6 ±6,24
8.	160,0 ±5,74	150,0 ±6,14
Súlynövekedés Relatív	78,4	70,4
súlynövekedés	100	89,8

Véres ürülék és elhullás, az egymást követő napo-

kon:
4.	—	+ ± +
5.	-	± +
6.	-	± +
7.	-	±
8.	-	—
Túlélés	100	100
A bélcsatornában
talált oociszták száma	0	2,381 x 10⁷
Oociszta érték	0	40

Megbetegedés a bélcsatomában, db

+ ± ± ±	0	3
+ + -+-	0	2
± ±	0	0
±	0	0
	5	0
Megbetegedési érték	0	36
Antikokcidiózis index	200	114

Csoport	76-11 antibiotikum	Szalinomicin
50 ppm	100 ppm	50 ppm
Súlyváltozás (g) az egymást követő napokon:
-2.	63,4	63,4	63,6
0.	±0,98 78,0	±1,78 79,6	±1,08 78,4
2.	±2,98 96,0	±1,91 96,0	±1,21 98,8
4.	±4,00 113,8	±2,77 113,4	±1,52 118,8
5.	±4,99 120,5	±3,11 121,6	±1,96 . 127,8
6.	±6,41 131,5	±4,31 127,4	±2,65 145,8
7.	±6,33 143,0	±4,61 136,1	±2,96 145,8
8.	±7,29 153,8	±5,06 143,8	±4,00 155,4
Súlynövekedés	±7,76 75,8	±6,28 64,2	±4,74 77,0
Relatív súlynövekedés	96,7	81,9	98,2

Véres ürülék*³* és elhullás*⁴* az egymást követő na-

pokon:
4.	+ + ±	—	±
5.	±	-	+ +
6.	±	-	±
7.	-	—	—
8.	—	—	—
Túlélés	80	100	100

A bélcsatomában talált oociszták száma

	8,86 χ 10⁶	5,52 x 10⁵	6,91 x 10®
Oociszta érték	20	1	20
Megbetegedés a bélcsatomában, db
+ + + +	1	0	1
+ + ±	1	0	1
+ ±	3	0	0
+	0	4	3
-	0	1	0
Megbetegedési érték	26	8	20
Antikokcidiózis index	131	173	158

Jelmagyarázat:

^(l) Fertőzés: 5 χ 10⁴ Eimarie teneila oociszta/csirke *²⁾ ± : standard hiba *³’ A véres ürülék mértéke:

- : 0; ± : 10%-nál kevesebb; + + : 10-30%; + + + : 30-50%;+ + + +: 50% felett ’⁴’ A zárójelben szereplő számértékek az elhullott csirkék számát jelzik.

A találmány szerinti kokcidiózis elleni szer bevitele tehát jelentős javulást mutat, a véres ürülék, a vakbél károsodása és a bélcsatomában kimutatott oociszták száma tekintetében, a kontroll csoport-81 _ 190 809 hoz viszonyítva, amelyet megfertőztünk, de amelynek gyógyszert nem adagoltunk.

Továbbá: azt tapasztaljuk, hogy azok a csirkék, amelyeknek a találmány szerinti kokcidiózis elleni szert adagoljuk, nem mutatnak kokcidiózis tüneteket még fertőzés után sem, azaz az Eimeria tenella oociszták növekedése jelentősen gátolt, tehát a találmány szerinti 76—1-1 antibiotikum rendkívül hasznos, kokcidiózis elleni szerként.

A találmány szerinti, növekedést gyorsító és tápanyag hasznosítást növelő szert a következő kiszerelési és kísérleti példákban írjuk le.

1. kiszerelési példa

76-11 antibiotikum 1% kukoricakeményítő 99%

A két anyagot porítjuk és homogénen összekeverjük olyan premix előállítására, amely 1% 76-11 antibiotikumot tartalmaz.

2. kiszerelési példa

76-11 antibiotikum (nyers,

40% tisztaságú) 2,5% búzakorpa 97,5%

A két anyagot porítjuk és homogénen összekeverjük olyan premix előállítására, amely 1 % 76-11 antibiotikumot tartalmaz.

3. kiszerelési példa

1000 g száraz sejtet, amely 0,96% 76-11 antibiotikumot tartalmaz, pontunk és ily módon felhasználható premixet állítunk elő.

2. kísérleti példa db 1 napos broiler kakast (Shaver Star törzs) 3 csoportba osztunk szét oly módon, hogy az egyes csoportok átlagos súlya azonos legyen. Hét egymást követő héten át az első és a második csoportnak olyan tápot adagolunk, amelyhez az 1. kiszerelési példa szerint előállított premixet adagoltuk - és amely a 76-11 antibiotikumot 25 ppm, ill. 50 ppm koncentrációban tartalmazza -, míg a harmadik csoport olyan tápot kapott, amelyhez premixet nem adagoltunk. Mértük a súlynövekedést és az ezen időtartam alatt elfogyasztott táplálék összmennyiségét, az egyes csoportok táplálékigény indexének kiszámítására. Az eredményeket a 4. táblázatban mutatjuk be.

A kísérlet megkezdésétől 21 napos korig „első félidei” tápot, ezt követően pedig „második félidei tápot” alkalmazunk; mindkét táp broiler-táp, amely antibiotikumot nem tartalmaz, és amelynek tápanyag-összetétele a következő:

	„első félidei” táp	„második félidei” táp
⁵ nyers fehérje	23,4%	20,4%
nyers zsír	5,5%	6,1%
nyers rost	3,9%	2,8%
nyers hamu	5,3%	5,5%
metabolizálható	12 623	12 958
10 energia	J/kg	J/kg

4. táblázat

Csoport	Adalék	Súly (g)	Súlynö- vekedés (g)
elején	végén
1.	76-11 antibiotikum, 25 ppm	47 (100)	1861 (105,9)	1814 (106,1)
2.	76-11 antibiotikum, 50 ppm	47 (100)	1879 (106,1)	1832 (107,1)
3.	kontroll (adagolás nélkül)	47 (100)	1757 (100)	1710 (100)

Megjegyzés: A zárójelben álló értékek a kont· rollhoz viszonyított %-os arányt mutatják.

Csoport 35	Adalék	Felvett táplálék (g)	Táplá- lék- igény- index
1.	76-11 antibiotikum,	3140	1,731
	25 ppm	(99,8)	(94,1)
40	76-11 antibiotikum,	3120	1,703
	50 ppm	(99,2)	(92,6)
3.	kontroll (adagolás	3145	1,839
	nélkül)	(100)	(100)

Megjegyzés: A zárójelben álló értékek a kont45 rollhoz viszonyított %-os arányt mutatják.

Táplálékigény-index = felvett táplálék mennyisége súlynövekedes ⁵⁰ Mint a fent leírt eredmények alapján látható, a 76-11 antibiotikum 25 és 50% koncentrációban való bevitele a növekedést 6,1, ill. 7,1%-kal gyorsítja, és a táplálék hatékonyságát 5,9, ill. 7,4%-kal növeli.

Azt találtuk, hogy a 76-11 antibiotikum növényevő állatoknak való beadagolása növeli a propionsavnak az ecetsavhoz és a vajsavhoz viszonyított mennyiségét, amely savak a kérődzők - pl. a szarvasmarha, juh és kecske - bendőjében, vagy az egyszerű gyomrú állatok - pl. a nyúl és a sertés belében képződnek. Másrészt ismeretes, hogy a propionsav hatékonyabb az ecetsavnál vagy a vajsavnál, ami az illékony zsírsav energiaforrásként való felhasználását illeti. Ennek megfelelően azt tételezzük fel, hogy a 76-11 antibiotikum bevitele

190 809 gyorsítja a propionsavnak az emésztőszervekben való képződését, ez viszont gyorsítja az állatok növekedését és növeli az etetés hatásfokát. A 76-11 antibiotikum bevitele ezenkívül nemcsak megelőzheti a felfúvódás vagy a ketózis fellépését - amely betegségek gyakran előfordulnak szarvasmarhákban, ha ezek nagymennyiségű koncentrált takarmányt fogyasztanak el -, hanem meg is képes gyógyítani azokat az állatokat, amelyek ilyen betegségekben szenvednek. A kérődzőkben való alkalmazásra a következő példát mutatjuk be, amely szerint egy olyan tápot, amelyhez 76-11 antibiotikumot adagoltunk és ezt homogénen elkevertük, szarvasmarháknak adagolunk be.

3. kísérleti példa kasztrált, Holstein fajtájú szarvasmarhát, amelyek súlya kb. 330 kg (kilenc hónaposak), 2 csoportba osztunk. Az első csoportnak olyan takarmányt adunk, amely a 76-11 antibiotikumot 30 ppm koncentrációban tartalmazza, a másik csoportot pedig 76-11 antibiotikumot nem tartalmazó táppal etetjük, folyamatosan 16 héten át. Ezen időtartam alatt mérjük a súlynövekedést és a felvett táplálék össz-mennyiségét, annak érdekében, hogy kiszámíthassuk az egyes csoportok táplálékigény indexét. Az eredményeket az 5. táblázatban mutatjuk be. A kísérlet megkezdése előtt közvetlenül és befejezése után mérjük a bendőfolyadék viszkozitását és illékony zsírsav tartalmát (ezt az orron át, katéterrel vesszük le), a propionsav/ecetsav mólarány kiszámítására. Az eredményeket a 6. táblázatban mutatjuk be.

Az állatokkal egy „Kumiai New King Beef második félidei” szarvasmarha tápot (gyártja a Zenno cég, Japán) - ad libitum - és szárított rizsnövényt (3 kg/nap, állat) etetünk. A „Kumiai New King Beef második félidei” táp tápanyag-összetétele a következő:

nyers protein 11,5% nyers zsír 2,0% nyers rost 9,0% nyers hamu 9,0% emészthető nyers fehérje 9,0% összes emészthető tápanyag 72,0%

Mint az 5. táblázatból látható, a 76-11 antibiotikum 30 ppm koncentrációban való bevitele a táplálékigény indexet 15%-kal csökkenti.

5. táblázat

Csoport	Adalék	Súly (kg)	Súlynö- vekedés (kg)
elején	végén
1.	30 ppm 76-11	332	457	125
	antibiotikum	(99)	(101)	(108)
2.	kontroll	335	451	116
	(adagolás nélkül)	(100)	(100)	(100)

Csoport	Adalék	Felvett táplálék (kg)	Táplá- lék- igény- index
I.	30 ppm 76-11	880	7,04
	antibiotikum	(91)	(85)
2.	kontroll (adagolás	965	8,32
	nélkül)	(100)	(100)

Megjegyzés: A zárójelekben szereplő számértékek a kontrolihoz viszonyított %-os arányt mutatják.

6. táblázat

Csoport	Adalék	A kísérlet előtt
viszko- zitás (CP)	pro- pion- sav/ecet- sav
1.	30 ppm 76-11	4,1	0,54
	antibiotikum	(114)	(98)
2.	kontroll (adagolás	3,6	0,55
	nélkül)	(100)	(100)

Csoport	Adalék	A kísérlet után
viszko- zitás (CP)	pro- pion- sav/ecet- sav
1.	30 ppm	3,2	0,81
	76-11 antibiotikum	(43)	(180)
2.	kontroll (adagolás	7,5	0,45
	nélkül)	(100)	(100)

Mint a 6. táblázatból látható , a 76-11 antibiotikum 30 ppm koncentrációban való bevitele gátolja a bendő-folyadék viszkozitásának növekedését, és ez hatásos a felfúvódás megelőzésében. Továbbá: a 76-11 antibiotikum feltevésünk szerint hatásos a ketózis megelőzésében, mivel adagolása növeli a termelt propionsav hányadát.

A következőkben - a növényevő egyszerű gyomrú állatokra való alkalmazás példájaként - egy olyan tápot mutatunk be, amelyhez 76-11 antibiotikumot adunk, ezt egyenletesen elkevertük és malacoknak adagoltunk.

-101

190 809

4. kísérleti példa db (kéthónapos) randrace malacot - amelyek vérvonala teljesen azonos 2, öt-öt malacot tartalmazó csoportra osztunk oly módon, hogy a csoportok azonos átlag-súlyt és ivar-arányt mutassanak. Az első csoportnak olyan tápot adagolunk, amelyhez 50 ppm koncentráció eléréséig 76-11 antibiotikumot adagoltunk, míg a második csoport 76-11 antibiotikumot nem tartalmazó tápot kapott, 10 egymást követő héten át. Mérjük a súlynövekedést és az ezen időtartam alatt felvett táplálék összes mennyiségét, az egyes csoportok táplálékigény indexének kiszámítására. Az eredményeket a 7. táblázatban mutatjuk be. Ezenkívül a kísérlet végén mérjük az ürülék illékony zsírsav tartalmát (VFA). Az eredményeket a 8. táblázatban mutatjuk be.

Az antibiotikumot nem tartalmazó malac-táp összetétele a következő: gabonafélék (kukorica, milo, búza) 78% szójaolaj-pogácsa 13% halliszt 5% egyéb (nátriumklorid, kalciumkarbonát, kálciumfoszfát stb.) 4%

7. táblázat
Csoport	Adalék	Súly (kg)
az elején	a végén
1.	50 ppm 76-11 antibiotikum	14,7 (100)	53,18 (112)
2.	kontroll (antibiotikum nélkül)	14,8% (100)	47,53 (100)

Csoport Adalék Súlynö- Felvett Táplá15 vekedés táplálék lékigény

	(kg)	(kg)	index
1.	50 ppm 76-11	39,11	96,37	2,464
	antibiotikum	(Π7)	(106)	(91)
2.	kontroll	33,45	90,75	2,713
	(antibiotikum nélkül)	(100)	(100)	(100)

Megjegyzés: A zárójelben álló számértékek a kontrolihoz viszonyított %-os arányt mutatják.

Mint a 7. táblázatból látható, a 76-11 antibiotikum 50 ppm koncentrációban való adagolása 17%kal gyorsítja a növekedést és 9%-kal csökkenti a táplálékigény indexet.

8. táblázat

Az egyes zsírsavak mólaránya a VFA össz-mennyiségéhez viszonyítva

Csoport	Adalék	A VFA összmennyisége, mmól/g	Propionsav	Ecetsav	Vaj sav
1.	50 ppm 76-11 antibiotikum	0,176	32,7	39,9	15,3
	(96)	(11,8)	(96)	(84)
2.	kontroll (antibiotikum	0,183	27,8	41,7	18,3
	nélkül)	(100)	(100)	(100)	(100)

Ismeretes, hogy a malac bélcsatornája által abszorbeált illékony zsírsav (VFA) mennyisége nem változik a zsírsav minőségétől függően. Ennek megfelelően feltételezzük, hogy az ürülékben található propionsav mennyiségének a 76-11 antibiotikum 50 ppm koncentrációban való bevitele hatására bekövetkező növekedése arra mutat, hogy fokozódik a bélcsatomában a propionsav-termelés.

Claims

1. Eljárás a 76-11 jelű antibiotikum és sói előállítására, amely a következő fizikokémiai és biológiai tulajdonságokkal rendelkezik:

a) (1) elemanalízis:

szabad sav: C 62,61% H 8,27% N 0%,

Na-só: C 60,57% H 8,04% N 0%.

b) (2) molekulasúly:

843 (titrálásos módszerrel mérve),

873 (FD tömegspektrometriás módszerrel mérve),

c) (3) olvadáspont: szabad sav: 108-112 °C,

50 Na-só: 210-212 ’C (bomlás);

d) (4) fajlagos forgatóképesség:

(alfa)n = + 36,6’ (c=0,382, kloroformos oldatban);

e) (5) UV abszorpciós spektrum:

⁵⁵ a maximális abszorpciós sávok:

metanolban, illetve sósav és metanol elegyében: larnda_m„ = 217 mp (Ej*_m 303)

262 mp (E}*_m 182) θθ 301 mp (Ejt, 68), lúgos metanolban:

'amda^, = 260 mp (Ej87)

308 mp (E^ 50);

(6) IR abszorpciós spektrum;

65 a főbb abszorpciós sávok Kbr pasztillában:

-111

190 809 szabad sav: 3450, 2960, 1720, 1640, 1610, 1578, 1446, 1380, 1315, 1292, 1250, 1209, 1151, 1100, 1035, 975, 940 cm^-1,

Na-só: 3390, 2960,1718, 1640, 1609, 1578, 1450, 1380, 1340, 1316, 1250, 1197, 1152, 1108, 1092, 1060, 1040, 1002, 980, 930, cm'¹;

(7) oldhatóság oldószerekben:

jól oldható benzolban, kloroformban, etilacetátban és acetonban, oldható metanolban, etanolban és dimetil-formamidban, és nehezen oldható vízben és hexánban;

(8) színreakciók:

pozitív káliumpermanganát reakció, de negatív perjódsav-benzidin reakció;

(9) lúgosság, savasság vagy semlegesség: savas anyag, pKs' 4,6 (66,7% dioxánban);

(10) szín:

színtelen kristályok;

(11) antimikrobiális aktivitás: növekedés-gátló hatást mutat Gram-pozitív kokkuszokkal, bacillusokkal és saválló baktériumokkal szemben, 0,4 mcg/ml koncentrációban, azzal jellemezve, hogy az Actinomadura sp. 76—11 mikroorganizmust (típustörzsének letétbehelyezési száma FERM BP-83) aerob körülmények között tenyésztjük, majd a 76—11 jelű antibiotikumot elkülönítjük, kívánt esetben sójává átalakítjuk. (Elsőbbsége: 1981. 12. 22.)

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy az elkülönítést úgy végezzük, hogy a fermentléből kinyerjük a sejtmentes kivonatot és ezt a kivonatot kromatográfiás módszerrel frakcionáljuk. (Elsőbbsége: 1981. 12. 22.)

3. Eljárás kokcidiózis elleni szer előállítására azzaljellemezve, hogy hatóanyagként az 1. igénypont szerinti eljárással előállított 76-11 jelű antibiotikumot vagy sóját az állatgyógyászati készítmények ⁵ szokásos segédanyagaival együtt összekeverve szerré feldolgozzuk. (Elsőbbsége: 1981. 08. 04.)

4. Eljárás növekedés-gyorsító és tápanyag-hasznosítást fokozó szer előállítására haszonállatok számára azzal jellemezve, hogy hatóanyagként az 1.

⁰ igénypont szerinti eljárással előállított 76-11 jelű antibiotikumot vagy sóját a haszonállatok takarmányadalékjaival együtt összekeverve szerré feldolgozzuk. (Elsőbbsége: 1981. 12. 22.)

5. Eljárás kokcidiózis elleni tápszer előállítására ⁵ házi szárnyasok számára azzal jellemezve, hogy az

1. igénypont szerinti eljárással előállított 76-11 jelű antibiotikumot vagy sóját a szárnyasok tápszereinek szokásos alkotórészeivel összekeverve táppá ₍ feldolgozzuk. (Elsőbbsége: 1981. 08. 04.) ^!0

6. Az 5. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a 76-11 jelű antibiotikumot vagy sóját

5-200 ppm koncentrációban alkalmazzuk. (Elsőbbsége: 1981. 08. 04.)

7. Eljárás növelt hatékonyságú takarmány előál^!S lítására haszonállatok számára azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti eljárással előállított 76-11 jelű antibiotikumot vagy sóját a haszonállatok takarmányához keverjük. (Elsőbbsége: 1981.

12. 22.) ¹⁰ 8. A 7. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a 76-11 jelű antibiotikumot vagy sóját

1-200 ppm koncentrációban alkalmazzuk. (Elsőbbsége: 1981. 12. 22.)