Przedmiotem wynalazku jeat sposób wytwarzania nowego antybiotyku, oznaczonego eyc^o- lem 76-11f przez hodowle mikroorganizmu zdolnego do syntezy tego antybiotyku. Nowy anty¬ biotyk wytwarzany sposobem wedlug wynalazku stanowi substancje o dzialaniu przeoiwkokcy- diozowym, przyspieszajacym wzrost i zwiekszajacym efektywnosc zywienia zwierzat domowych i drobiu* Kokoydioza jest choroba zakazna drobiu wywolywana przez Protozoa rodzaju Bime¬ rla. Przejawia sie ona biegunka, slabym przyswajaniem pozywienia i w koncu powoduje pad¬ niecie drobiu, Oooysta, która jest pierwszym pokoleniem Protozoa, jest wydzielana z kalem, tworzy zarodniki 1 zakaza ptaki. Typowymi Protozoa rodzaju Bimeria sa Bimeria tenella, Bimeria aoervulina, Bimeria neoatriz, Bimeria brunetti, Bimeria mazima itp. Drób zakazony Proto¬ zoa traci wartosc handlowa.* Zapobieganie kokcydiozie ma wiec znaczenie przemyslowe. Do¬ tychczas zaproponowano i szeroko zbadano rózna srodki zapobiegawcze i rózne sposoby le¬ czenia kokoydiozy. Przykladanymi proponowanych ozynników lecznioznych i prewencyjnych sa zwiazki arsenu, nitrofuranu lub bisfenolu, sulfonamidy, pochodna tiazyny, chinoliny, pi¬ rydyny lub guanidyny itd. Jednakze srodki te nie sa dostatecznie skuteczne, a przy tys po¬ jawily sie nowe gatunki Protozoa wykazujace opornosc ?*obec tych srodków. Oczekiwane Jest wiec opracowanie nowego, efektywnego srodka, Poszukujao nowych antybiotyków, z próbek gleby pobranych w róznych miejscach izclcwa- no mikroorganizmy i badano syntezowane przez nie antybiotyki, W wyniku tych badan znale¬ ziono nowy antybiotyk, oznaozony symbolem 76-11, nieznany dotychczas n literaturze. Anty¬ biotyk ten Jest wytwarzany przez nowowyizolowany mikro organizm i jest akuaulowany w jego komórkach i w pozywoe hodowlanej. Poszukiwania srodka przeciw kokcydiozie u drobiu dopro¬ wadzily do ustalenia, za antybiotyk 76-11 Jest wysooe skutecznym czynnikiem przeciwkok :?y- dlozowym.2 131 791 Pewne antybiotyki znalasly szerokie zastosowanie jako dodatki paszowe9 przyspieszaja- oe wzrost zwierzat i drobiu i zwiekszajace nosnosc jaj. Podawanie zwierzetom tych samych antybiotyków co czlowiekowi powoduje pojawianie sie opornych szczepów, co moze miec szkod¬ liwy wplyw na leozenie ludzi. Ponadto istnieje niebezpieczenstwo akumulaoji antybiotyku w ciele zwierzeoia 1 wprowadzania tego antybiotyku do organizmu czlowieka ze spozywanym miesem* Badania nad czynnikami przyspieszajacymi wzrost pozbawionymi wyzej opisanych wad doprowadzily do stwierdzenia! ze podawanie antybiotyku 76-11 zwierzetom domowym i drobiowi przyspiesza produkcje kwasu propionowego w narzadach trawiennych i inhibituje wzrost lepko- soi oieozy zwaozowej. Wiadomo, ze wspólczynnik utylizacji energii w ciele zywego zwierzecia jest dla kwasu propionowego wyzszy niz dla Innyoh lotnych kwasów tluszczowych, takich jak octowy ozy maslowy* 5a podstawie wyzej opisanych faktów wykazano, ze antybiotyk 76-11 moze byc znakomitym czynnikiem przyspieszajacym wzrost zwierzat domowych i drobiu i zwiekszaja- oym efektywnosc zywienia. Powyzsze odkrycia staly sie podstawa wynalazku.Wedlug wynalazku sposób wytwarzania nowego antybiotyku, oznaczonego symbolem 76-11, po¬ zwala na wytwarzanie skuteoznego srodka przeolw kokoydiozie drobiu, przyspieszajacego wzrost zwierzat do mowyoh i drobiu i zwiekszajaoego efektywnosc ich zywienia, który znajduje zasto¬ sowanie równiez jako skladnik paszy drobiowej, skuteoznej w zapobieganiu i leczeniu kokoy- diozy oraz paszy dla zwierzat domowych i drobiu, przyspieszajacej wzrost i zwiekszajacej efektywnosc zywienia.Sposób wytwarzania nowego antybiotyku oznaczonego symbolem 76-11, wedlug wynalazku po¬ lega na tym, ze prowadzi sie fermentacje mikroorganizmu zdolnego do syntetyzowania antybio¬ tyku 76-11, nalezacego do rodzaju Actinomadura o numerze kolekcji miedzynarodowej PERU BP-83 1 nastepnie wyodrebnia sie antybiotyk z brzeozki pofermentacyjnej.Korzystnie wyodrebnianie antybiotyku 76-11 z brzeozki przeprowadza sie zbierajac pozba¬ wiony komórek ekstrakt z brzeozki fermentacyjnej i poddajac go frakcjonowaniu metodami chro¬ matograficznymi .Na rysunku fig. 1 przedstawiono widmo absorpcji it nadfiolecie antybiotyku 76-11 (w po- staoi wolnego kwasu), a na rysunkach fig. 2 i 3 - widma absorpcji r podczerwieni tego anty¬ biotyku (w pastylce KBr), odpowiednio w postaoi soli sodowej i wolnego kwasu.Mikroorganizm stosowany w sposobie wedlug wynalazku nalezy do rodzaju Actinomadura i jest zdolny do wytwarzania antybiotyku 76-11* Mikroorganizmem takim jest Sp. 76-11, który nalezy do rodzaju Actinomadura i ma wlasciwosci mikrobiologiczne opisane ponizej. W sposo¬ bie Wedlug wynalazku mozna takze stosowac wszystkie inne szczepy nalezace do rodzaju Acti¬ nomadura zdolne do wytwarzania antybiotyku 76-11* Szczep Sp* 76-11 zostal zlozony 1 jest dostepny w Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministerstwa Miedzynarodowego Handlu i Przemyslu, Japonia, International Depositary Autho- rity (dalej okreslany jako "PERM") pod numerem FERM BP-83. Mikroorganizm Sp. 76-11 (F3RM BP-83) ma nastepujace wlasoiwosci mikrobiologiczne* Wlasciwosoi Sp* 76-11 (FERM BP-83) na rózny oh pozywkach hodowlanych obserwowano 20 do 30 dni po inokulaoji- Odcienie barw podane w nawiasie zgodne sa z Desorlption Color Hame Diotionaiy.(I) Morfologia* Sp* 76-11 rozwija sie na agarze z maka owsiana i na agarze z ekstraktem slodowym oraz z ekstraktem z drozdzy, leoz nie rozwija sie lub prawie nie rozwija sie na innyoh pozywkach i dlatego obserwowano morfologie na pozywkach agarowych z maka owsiana, z wyoiagiem slodowym i wyciagiem z drozdzy i cieklej 3 % pozywce z maka owsiana* Otrzymano nastepujace wynikli (1) Grzybnia substratowa* Grzybnia w podlozu rozoiaga sie 1 ros^slezia w pozywkach ag«~ rowyoh 1 cieklyoh. Po dlugim okresie hodowli grzybnia substratowa dzieli sie z wytworzeniem eliptyoznyoh zarodników wielkosci 0,8 - 1,2 x 1,5 - 1,7 mikrometra* Grzybnia powietrzna nie powstaje na róznych pozywkach hodowlanych lecz na agarze z maka owsiana po hodowli w tempe¬ raturze 33°C w ciagu ponad 20 dni, czasami formuje sie cienka grzybnia powietrzna, zgieta i w ksztalcie sznura lub peku sznurów, nieco rozgaleziona, nie tworzaca zarodników.131791 3 (2) Grzybnia powietrzna. Nie powstaje na róznych pozywkach hodowlanyoh9 leoz ozasami powstaje na agarze z maka owsiana, przy hodowli w ciagu ponad 30 dni* Uformowana grzybnia powietrzna jest nieregularnie pozginana. Obecnosci zarodników nie stwierdzono pod mikro¬ skopem elektronowym, (II) Sklad komórek, Sp. 76-11 hodowano na pozywce zawierajacej 1 % glukozy, 1 % ekstra¬ ktu z drozdzy i 0,1 % maki owsianej, w temperaturze 33°C, w ciagu 7 dni przy wstrzasaniu.Komórki zebrano i przemyto, otrzymujac próbke do analizy na sklad komórek. Analizowano kwas dwuaminopimelinowy i sklad cukrów. Stwierdzono obecnosc kwasu dwuaminopimelinowego typu me za, galaktoze i maduroze.(III) Wzrost na róznych pozywkach hodowlanych. (a) Agar z sacharoza i azotanem (agar Czapeck*a): Wzrost: bardzo slaby. Nieznaczny wzrost obserwuje sie po 30 dniach hodowli. Kolonia jest przejrzysta. Powierzchnia barwy jasnobrazowej (2 ea), spód barwy jasnej kosci sloniowej (2 ca)? Grzybnia powietrznie ni* powstaje. Rozpuszczalny pigment: nie powstaje. (b) Agar glukozowo-asparaginowy. Nie obserwuje sie wzrostu, (o) Agar glioerynowo-asparaginowy: Nie obserwuje sie wzrostu* (d) Agar z solami nieorganicznymi i skrobia. Wzrost: bardzo slaby. Nieznaozny wzrost obserwuje sie po 30 dniach. Powierzchnia ma barwe jasnozóltobrazowa (3 go) t spód zóltobra- zowa (3 ie). Grzybnia powietrzna: nie powstaje. Rozpuszczalny pigmenti nie powstaje* (e) Agar tyrozynowy* Wzrost: bardzo slaby* Powierzchnia barwy jasnozóltej (3 ca), spód barwy jasnej kosci sloniowej (2 ca). Grzybnia powietrzna: nie powstaja* Rozpuszczalny pig¬ ment: nie powstaje* (f) Agar odzywczy. Wzrost: bardzo slaby. Po 30 dniach powierzchnia i spód barwy jasnej kosoi sloniowej (2 oa)• Grzybnia powietrzna: nie powstaje. Rozpuszczalny pigment: nie powstaje. (g) Agar z ekstraktem z drozdzy i ekstraktem slodowym (ISP No* 2): Wzrost: dobry. Po¬ wierzchnia ma postac bruzdowatej, twardej powloki, zarówno powierzchnia jak 1 spód barwy jasnobrazowej (2 ne), czasami niebieskawej (10 ie)• Rozpuszczalny pigment: nie powstaje.Grzybnia powietrzna: po dlugim okresie hodowli powstaje bialawej barwy grzybnia powietrzna* (h) Agar z maka owsiana (ISP No. 3). Wzrost: dobry. Powierzchnia jest gladka, o charak¬ terze powloki, barwy indygowo-niebieskiej (10 ie), a spód barwy bialej, w koncu indygowo- -niebieskiej (10 ne) • Grzybnia powietrzna: po 30 dniach powstaje grzybnia powietrzna barwy bialej* Rozpuszczalny pigment: nie powstaje. (i) Agar z peptonem, ekstraktem z drozdzy i zelazem (ISP Ho* 6): Nie obserwuje sie wzrostu* (j) Odtluszczone mleko (37°C): Wzrost: powolny* Koagulacja i peptonizacja. (k) Zelatyna z glukoza i peptonem (20°C)t Wzrost: bardzo powolny* Obserwuje sie uplyn¬ nianie* (IV) Wlasoiwosoi fizjologiczne* Optymalna temperatura dla wzrostu: 27 do 37°C, najko¬ rzystniejsza 33 do 37°C. Uplynnianie zelatyny: tak* Hydroliza skrobi: nie. Odtluszczone mleko: koagulacja i slaba peptonizaoja. Powstawanie pigmentu melanino-podobnego: nie. Opor¬ nosc na kwas: oporny na kwas* (V) Utylizaoja róznych zródel wegla: Sp* 76-11 hodowane na agarze Pridhama i Gottlieba (ISP No. 9) (produkcja Difeo Co.) zawierajacym rózne oukry, lecz nie obserwowano wzrostu i dlatego uzyto wyzej opisanej pozywki, do której dodawano 0,1 % ekstraktu z drozdzy.Otrzymano nastepujace wyniki: L-arabinoza - +++; D-ksyloza - +++; D-glukoza - +++t D-fruk- toza - +++; sacharoza - +++| 1-inozyt - ++; L-ramnoza - ++++; rafinoza - ++; mannit - -M-+; kontrola -i.Ooenat ++++ - bardzo dobry wzrost; +++ - dobry wzrost; ++ - wzrost; i - kontrola.Charakterystyka Sp. 76-11* Sp* 76-11 mozna pokrótce scharakteryzowac nastepujaco: (a) Morfologia: Sp* 76-11 na ogól nie tworzy grzybni powietrznej, leoz czasami tworzy ja po dlugim okresie hodowli* Grzybnia substratowa jest pozginana, a w ostatnim okresie ho—4 131 791 dowli dzieli sie, z wytworzeniem eliptycznych zarodników. Grzybnia jest Gram dodatnia i oporna na kwas. (b) Wzrost na róznych pozywkach! Sp. 76-11 nie rozwija sie lub prawie nie rozwija sie na róznyoh pozywkach, poza agarem z ekstraktem z drozdzy i ekstraktem slodowym. Szczep ro¬ zwija sie najlepiej na agarze z maka owsiana i po 3 do A tygodniach hodowli tworzy w ko¬ mórkach nierozpuszczalny w wodzie pigment niebieski-indygo• (o) Wlasciwosci fizjologiozne* Szozep rozwija sie dobrze w temperaturze 33 - 37°C, lek¬ ko uplynnia zolatyne, koaguluje i peptonizuje odtluszczone mleko i nie tworzy pigmentu me- laninowego. (d) Utylizaoja oukru. Szozep utylizuje dobrze L-arabinoze, D-ksyloze, D-glukoze, D-fruk- toze, sacharoze| 1-inozyt, L~ramnoze, rafinoze i mannit na agarze Pridhama i Gottlieba z do¬ datkiem 0,1 % ekstraktu z drozdzy.Jak wyzej opisano, Sp. 76-11 okazuje sie 3zczepem nalezacym do Aotlnomycetes, rodzaju Actinomadura, na podstawie morfologii zarodników i grzybni, wzrostu na róznyoh pozywkach i skladu sciany komórkowej. Jednakze przez porównanie charakterystyki Sp. 76-11 z charakte¬ rystyka opisana w Nonemura H and Y. Ohara: Distribution of Aotinomyoetes in Soil. U. Some New Species of the Genus Actinomadura, Lechevalier i inni J. Ferment. Technol. 49:904-912, 1971, oraz Preobrazhenskaya, T.P.; M.I. Svesbnikoya and L.P. Tarekhova: Key for Identifi- oation of the Species of the Genus Actinomadura* The Bioiogy of the Aotinomycetes and Re- lated Organisme 12: 30-38, 1977, stwierdzono, ze nie opisano nigdzie szczepów produkuja- oych pigment niebieski-indygo w komórkach na agarze z maka owsiana, jak to ma miejsce w przypadku Sp. 76-11• Z powyzszego wynika, ze Sp» 76-11 jest nowym szczepem nalezacym do rodzaju Actinomadura.W wytwarzaniu antybiotyku 76-11, sposobem wedlug wynalazku mikroorganizm wytwarzajacy 76-11, Sp. 76-11 (PERM BP-83) hoduje sie sposobem konwencjonalnym w produkcji antybioty¬ ków. Sposób hodowli nie ma szczególnego znaozenia i mozna hodowle prowadzic w pozywce plyn¬ nej lub stalej. W celu prowadzenia hodowli na skale przemyslowa, korzystnie, zaleca sie przyjac sposób, w którym pozywke hodowlana inokuluje sie zawiesina zarodników lub hodowla mikroorganizmu wytwarzajacego antybiotyk 76-11, a hodowle prowadzic przy napowietrzaniu i mieszaniu.Zródla odzywcze stosowane w sposobie wedlug wynalazku nie maja szczególnie decydujace¬ go znaozenia* Stosuje sie dowolne zródla odzywcze zwykle stosowane do hodowli mikroorgani¬ zmów. Jako zródla wegla stosuje sie skrobie, dekstryne, gliceryne, glukoze, sacharoze, ga- laktoze, inozyt, mannit itp. Jako zródla azotu stosuje sie make owsiana, drozdze, pepton, proszek sojowy, ekstrakt z miesa, otreby ryzowe, otreby pszenne, mooznik, namok kukurydzia¬ ny, sole amonowe, azotany i inne organiczne i nieorganiczne zwiazki azotu. Jezeli to jest pozadane, stosuje sie dodatek innych soli nieorganicznych, jak chlorek sodu, fosforany lub sole potasu, wapnia, cynku, manganu i zelaza. Do pozywki mozna dodawac ewentualnie oleje zwierzece, roslinne lub mineralne. Warunki hodowli takie jak temperature i czas mozna do¬ bierac odpowiednio dla uzyskania maksymalnej produkcji antybiotyku 76-11. Hodowle prowadzi sie w zakresie pH 4 do 9# korzystnie okolo 7, w temperaturze 25 do 35°Ct korzystnie w tem¬ peraturze 28 do 33°C, przez okolo 5 do 20 dni korzystnie 5 do 11 dni# Jednakze nalezy ro¬ zumiec, ze takie warunki hodowli jak sklad pozywki, pH, temperatura, mieszanie mozna odpo¬ wiednio zmieniac, dla uzyskania wyników optymalnych dla danego szczepu i warunków zewne¬ trzny oh« Po zakonczeniu fermentacji brzeczke poddaje sie np. wirowaniu, w cela oddzielenia komórek od roztworu. Wytworzony antybiotyk 76-11 wydziela sie z brzeczki dowolnym konwen¬ cjonalnym sposobem, zwykle stosowanym do wydzielania metabolitu. Przykladowo, stosuje sie, jezeli to jest konieczne wielokrotnie, sposób wykorzystujacy róznice rozpuszczalnosci an¬ tybiotyku 76-11 i zanieczyszczen, róznice ich powinowactwa do adsorpcji lub kombinacje tyoh róznic.Antybiotyk 76-11 wystepuje zarówno w plynie hodowlanym jak i w komórkach 1 moze byc ekstrahowany z plynu hodowlanego za pomoca ootanu etylu lub butylu, chloroformu, butanolu ltp., dzieki róznicy rozpuszczalnosci w srodowisku wodnym 1 organicznym. Komórki ekstrahuje131791 5 sie a o©tonem zawieraJaoym wode, po czym pod zmniejszonym olsnieniem odparowuje sie organi¬ czny rozpuszozalnik, a wodny roztwór ekstrahuje octanem etylu lub podobnym rozpuszczalni¬ kiem* Oba ekstrakty laczy sie 1 odparowuje, otrzymujac surowy ekstrakt antybiotyku 76-11.Poniewaz surowy ekstrakt zawiera duza ilosc zanieczyszczen wydziela sie go dowolnym, kon¬ wencjonalnym sposobem. Korzystnie stosuje sie w tym celu metode chromatografii adsorpcyj- nej na zelu krzemionkowym, tlenku glinu ltp# i tak otrzymany surowy produkt poddaje sie dalszemu oczyszczaniu. Przykladowo, surowy ekstrakt rozpuszczony w malej ilosci benzenu wprowadza sie na kolumne z zelem krzemionkowym, uprzednio kondycjonowana benzenem, Elucje prowadzi sie benzenem o wzrastajacej zawartosci octanu etylu. Eluat frakcjonuje sie przy uzyciu kolektora frakcji. Frakcje wykazujace czynnosc biologiczna zbiera sie i odparowuja, otrzymujac oczyszczony proszek, W celu dalszego oczyszczenia, powtarza sie chromatografie na zelu krzemionkowym. Dal¬ sze oczyezozanie przeprowadza sie za pomoca preparatywnej chromatografii cienkowarstwowej, jezeli to jest konieczne. Odparowanie pod zmniejszonym cisnieniea daje oczyszczony produkt, ktcry rozpuszcza sie w malej ilosci metanolu i ochladza, co powoduje wydzielenie antybio¬ tyku 76-11 w postaci bezbarwnych krysztalów. Krysztaly odsaoza sie 1 suszy, otrzymujac ozy- ety antybiotyk 76-11.Tak otrzymany antybiotyk 76-11 wykazuje nastepujace wlasoiwosci fizykoohemlozne i bio- logiozne.Analiza elementarna? wolny kwas: C; 62,61 %% H; 8,27 %% N? 0 %\ sól sodowa: C; 60,57 %% H; 8,04 %, N; 0 %.Ciezar czasteczkowy: 843 (z miareczkowania); 873 (pomiar metoda spektografii masowej PD)* Temperatura topnienia: Wolny kwas: 108 - 112°C; sól sodowa: 210 - 212°C (z rozkladem), Skrecalnosc wlasoiwa: £dC] ,2^ + 36,6°/ o = 0,382, w roztworze ohloroformowycjt Widmo absorpoji w nadfiolecie: w MeOH i HC1 - MeOH: A mai = 217 n/fi (B \ *n 303), 262 m/p (E 1 *m 182), 301 m/p (B ] *m 68); w zasadowym MeOH: X max = 260 m/jx (B ] £m 87) f 308 m/M (B \ *ffi 50).Widmo absorpoji w podczerwieni: Glówne pasma absorpoji w plytce KBr - wolny kwas: 3450, 2960, 1720, 1640, 1610, 1578* 1446, 1380, 1315t 1292, 1250, 1209, 1151# 1100, 1035» 975t 940 om'1; sól sodowa: 3390, 2960, 1718, 1640, 1609, 1578, 14J0, 1380, 1340, 1316, 1250, 1197, 1152, 1108, 1092, 1060, 1040, 1002, 980, 930 cm"1.Rozpuszczalnosci latwo rozpuszczalny w benzenie, chloroformie, ootanie etylu i acetonie, rozpuszczalny w metanolu, etanolu i dwumetyloformamldzie, bardzo slabo rozpuszozalny w wo¬ dzie i heksanie, Reakoje barwne: Dodatnia reakcja z nadmanganianem potasu, ujemna z kwasem nad jodowym - - benzydyna, Odozyn: substancja kwasowa, pKa 4,6/ w 66,7 % dioksanie/.Barwa: bezbarwne krysztaly.Czynnosc przeciwbakteryjna: Najmniejsze stezenie inhibitujace wzrost mikroorganizmów na agarze z bulionem.Badany mikroorganizm Staphyloooocus aureus 209 P Staphylocoocus aureusy(wielooporny) Baolllus subtllis PC 1219 Bacillus subtllis H 17 Baolllus subtllis H 45 (reo~) Mycobaoterium SP 607 Mycobaoterium pniei Myoobaoterium avium Esoherichia ooli Salmonella typhlmurium najmniejsze stezenie hamujace wzrost (mcg/ml) 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0t4 0,4 0,4 100 1006 131 791 Czynnosc wobeo komórek rakowyoh. Antybiotyk 76-11 wykazuje indukoje róznicowania nobeo bialaczki Prienda i komórek bialaczki szpikowej w stezeniu 1 do 100 mcg/ml.Toksycznosc wobec myszy. Doustne podawanie 50, 100 i 200 mg/kg antybiotyku 76-11 w po- staoi zawiesiny w karboksymetylooelulozie nie wykazalo toksycznosci u myszy.Z porównania fizykochemicznych i biologicznych wlasciwosci antybiotyku 76-11, wyzej opisanych, z wlasciwosciami znanych antybiotyków wynika, ze antybiotyk 76-11 mozna sklasy¬ fikowac jako tzw. antybiotyk polieterowy jonoforowy, poniewaz jest on substancja kwasna, a jego sól sodowa jest rozpuszczalna w oleju; wykazuje silna aktywnosc wobec bakterii Gram- -dodatnich i bakterii odpornych na kwas, nie zawiera azotu w strukturze czasteczkowej itp.Jednakze zadna ze znanych substancji nie wykazuje takioh samych wlasciwosci fizykochemicz¬ nych, zwlaszcza takioh samych pasm absorpcji w nadfiolecie, a wiec antybiotyk 76-11 jest nowym antybiotykiem.Jako ozynnik przeoiwkokoydiozowy, antybiotyk 76-11 mozna podawac zakazonemu drobiowi jako taki lub w postaoi dodatku paszowego. Przykladami materialu paszowego sa maka jecz¬ mienna, maka pszenna, maka zytnia, maka kukurydziana, maczka sojowa, wytloki sojowe, wytlo¬ ki z nasienia kapusty, otreby ryzowe, otreby odolejone, bialy proszek ziemniaczany, proszek z batatów, skrobie innego rodzaju, drozdze, maczka rybna, pozostalosci po fermentacji i po¬ dobne. Antybiotyk 76-11 mozna równiez dodawac do pewnych konwencjonalnych dodatków paszo¬ wych, takich jak rózne witaminy, mineraly, srodki konserwujace, preparaty enzymatyczne, bialka, weglowodany, aminokwasy, srodki przeciwgoraczkowe, czynniki uspakajajace, czynniki przeciwzapalne i srodki mikrobobójcze. Zawartosc substancji czynnej zmienia sie w zalezno¬ sci od rodzaju i stanu choroby, wieku drobiu i zwykle miesci sie w zakresie od okolo 5 do 200 ppm, korzystnie 10 do 100 ppm.Wynalazek zapewnia znakomity czynnik przeciwkokoydlozowy dla drobiu, niewykazujacy tok¬ sycznosci i dzialan ubocznych. Czynnik przyspieszajacy wzrost i efektywnosc zywienia wytwa¬ rzany sposobem wedlug wynalazku w postaoi antybiotyku 76-11 dodaje sie do paszy lub wody pitnej, jako taki lub w postaci zawiesiny lub roztworu w rozcienczalniku lub w postaci pro¬ szku, tabletki, kapsulki, granulki lub pigulki, które mozna wytwarzac przez mieszanie an¬ tybiotyku 76-11 z fizjologicznie nieszkodliwym stalym lub cieklym rozcienczalnikiem. W przy¬ padku dodawania do paszy, korzystnie stosuje sie uprzednio sporzadzona przedmieszke. Przed¬ mie szke mozna wytwarzac przez zmieszanie oczyszczonych lub surowych produktów lub komórek zawierajacych substancje czynna z dopuszozalnym fizjologioznie, stalym lub cieklym nosnikiem* Przykladami nosnika stalego sa maka przenna, maka sojowa, otreby ryzowe, maka kukurydziana, skrobia, glukoza, drozdze, maczka rybna, talk, ziemia okrzemkowa itp., a przykladami nosnika oieklego fizjologiozny roztwór soli, destylowana woda, fizjologicznie dopuszczalne rozpusz¬ czalniki organiczne itp.Antybiotyk wytwarzany sposobem wedlug wynalazku mozna mieszac z innymi odpowiednimi sub¬ stancjami pomooniozymi lub dodatkami, takimi jak czynniki emulgujace, dyspergujaoe, zawie¬ szajace, zwilzajaoe, zatezajaoe lub zelatynizujace, czynniki mikrobobójcze, preparaty enzy¬ matyczne, antybiotyki, preparaty laktobacilli. Zawartosc eubstanoji ozynnej w mieszance wstepnej mozna odpowiednio zmieniac, w zaleznosci od gatunku zwierzecia domowego lub drobiu.Stezenie antybiotyku 76-11 w srodku przyspieszajacym wzrost i efektywnosc zywienia moz¬ na zmieniac w zaleznosci od gatunku i wieku zwierzecia itp. Przykladowo, ptakom domowym, jak kury, przepiórki, indyki, perliczki, kaczki, gesi itp. podaje sie w postaoi paszy za¬ wierajacej antybiotyk 76-11 w ilosoi 5 do 200 ppm, korzystnie 10 do 100 ppm. Zawartosc sub¬ stancji ozynnej w paszy korzystnie wynosi 5 do 200 ppm, a zwlaszcza 10 do 100 ppm w pr^- padku trzody chlewnej, królików itp., a 1 do 100 ppm, zwlaszcza 2 do 50 ppm w prspadku zwierzat przezuwajacych, jak bydlo, owce, kozy itp* Wytwarzany sposobem wedlug wynalazku antybiotyk 76-11 ma niska toksycznosc i te zalete, ze jego podawanie laoznie z Innymi antybiotykiem zwierzetom domowym 1 drobiowi zasadniczo nie wywoluje dzialan uboczny oh. Podawanie antybiotyków polieterowyeh, takich jak Salinomy- oyna 1 Monenoyna, w zwyklej dawoe, laoznie z Trojacetylo-oleandmy cyna lub Pleuromutllina131791 7 w poataoi fumaranu, w zwyklej dawce, zwierzetom domowym lub drobiowi zwykle powoduje cza¬ sowy brak laknienia, paraliz tylnych konczyn Itp* i dlatego nalezy unikac podawania anty¬ biotyku polieterowego równoczesnie lub prawie równoczesnie z tymi substancjami* Natomiast nie ma takiego niebezpieczenstwa w przypadku antybiotyku 76-11, który jest znakomitym czyn¬ nikiem przyspieszajacym wzrost i zwiekszajacym efektywnosc zywienia zwierzat domowych i drobiu* Podawanie antybiotyku wytworzonego sposobem wedlug wynalazku zwierzetom domowym i dro¬ biowi przyspiesza tworzenie kwasu proplonowego w narzadach trawiennych i hamuje wzrost lep¬ kosci cieczy zwaozowej, czego wynikiem jest nie tylko zapobieganie dyzenterii, wzdeciom i ketozie zwierzat, lecz równiez przyspieszanie zdrowego wzrostu zwierzat i drobiu 1 zwiek¬ szenie efektywnosci zywienia.Przy uzyciu przeciwkokoydiozowym i przyspieszajacym wzrost i efektywnosc zywienia, an¬ tybiotyku wytworzonego sposobem wedlug wynalazku substancja czynna czyli antybiotyk moze byc stosowany w postaci produktu oczyszczonego lub surowego, komórek zawierajacych antybio¬ tyk 76-11, fizjologioznie dopuszozalnej soli metalu (jak sodowa, wapniowa itp*), estru orga¬ nicznego kwasu (jak ester kwasu propionowego, ester kwasu walerianowego itp.) lub kompleksu z metalem (np* z cynkiem)* Wynalazek zilustrowano w ponizszym przykladzie* W opisie i zastrzezeniach % i czesci oznaczaja, jezeli nie zaznaczono inaczej, % wagowe 1 czesci wagowe* Przyklad* Wytwarzanie antybiotyku 76-11* Wyzej opisany szczep Sp* 76-11 (FERM BP-83) uprzednio hodowany na skosie inokulowano do pozywki zawierajacej 3 % maki ow¬ sianej, 1,5 % gliceryny i 0,5 % ekstraktu miesnego (pH okolo 6,5)* Fermentacje prowadzono w temperaturze 28°C w ciagu 11 dni, przy wstrzasaniu* Po 3 ml brzeczki inokulowano do swie¬ zej pozywki, zawierajacej te same skladniki i prowadzono fermentacje w ciagu 7ydni* '140 ml otrzymanej brzeozki inokulowano do 18 litrów pozywki o skladzie jak wyzej, w kadzi fermen¬ tacyjnej i prowadzono fermentacje w temperaturze 28°C w oiagu 210 godzin, przy napowietrza¬ niu z szybkoscia 18 litrów na minute i mieszaniu z azybkoscia 330 obrotów na minute.Po fermentacji do brzeozki dodano 400 g ziemi okrzemkowej (Radiolite 700) i brzeczke odwirowano. Sklarowana ciecz (14 litrów, pH 7,8) dwukrotnie ekstrahowano odpowiednio 8 li¬ trami i 5 litrami octanu etylu* Komórki ekstrahowano dwukrotnie odpowiednio 9 litrami i 6 litrami acetonu* Ekstrakty odparowano pod zmniejszonym cisnieniem, otrzymujac 2 litry wodnego roztworu (pH 8), który ekstrahowano dwiema porcjami po 1 litrze octanu etylu* Eks¬ trakty polaczono z ekstraktem sklarowanej cieozy 1 odparowano pod zmniejszonym cisnieniem, otrzymana pozostalosc rozpuszozono w malej ilosci benzenu, a roztwór wprowadzono na kolum¬ ne z zelem krzemionkowym (0 3 xm x 50 om), uprzednio kondyojonowana benzenem* Eluoje prowa¬ dzono kolejno 2 litrami benzenu, 1 litrem mieszaniny benzen-ootan etylu (5:1, objetoscio¬ wo) i 1 litrem mieszaniny benzen-ootan etylu (1 t 1, objetosciowo). Frakcje aktywne, które zostaly wyeluowane mieszanina benzen-octan etylu 1 t 1. zebrano, odparowano pod zmniejszo¬ nym cisnieniem i zadano metanolem, otrzymujac okolo 1 g surowego krysztalu. Po kilku kry¬ stalizacjach z metanolu otrzymano 400 mg czystego krysztalu soli sodowej antybiotyku 76-11* Zastrzezenia patentowe 1* Sposób wytwarzania nowego antybiotyku, oznaczonego symbolem 76-11, znamien¬ ny tym, ze prowadzi sie fermentacje produkujaoego ten antybiotyk mikroorganizmu ro¬ dzaju Aotinomadura Sp. 76-11 (FERM BP-83) 1 wyodrebnia z brzeczki fermentacyjnej antybio¬ tyk 76-11. 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze wyodrebnianie antybioty- ...ku 76-11 z brzeczki fermentacyjnej przeprowadza sie zbierajao pozbawiony komórek ekstrakt z brzeczki fermentacyjnej i frakojonujac ekstrakt sposobem chromatograficznym.131 791 r/% y m&RNOLU i ZMUfóZONYM jn&fMOLU pj fiUlmiCZtfYM MErftNDlU 220 240 260 280 300 320 340 3SO (my) FI S. 1131 791 100r FIG. 2 A{\aX- 10 j i i i_ 360O 2900 2000 1900 1700 1500 1300 1100 900 700 500 UCZ&R FRlOHf)(cm'1)131 791 FIG.3 °' 3600 ' zkoo ' 20001900 ' 1?00 'l500 1300 H0O 900 ' 700 500 l/CZBR FRLOUR (cm1) Pracownia Poligraficzna UP PRL. Naklad 100 egz.Cena 100 zl PL PL PL PL