FR3115694A3

FR3115694A3 - Principe actif constitué d’un extrait de pomme amère activant des récepteurs à l’amertume Tas2Rs présents sur la peau humaine et utilisations cosmétiques et dermato-cosmétiques correspondantes.

Info

Publication number: FR3115694A3
Application number: FR2011170A
Authority: FR
Inventors: Antoine Gedouin; Romuald Vallee; Pierre-Yves Morvan
Original assignee: Societe de Courtage et de Diffusion SAS CODIF International
Current assignee: Societe de Courtage et de Diffusion SAS CODIF International
Priority date: 2020-10-30
Filing date: 2020-10-30
Publication date: 2022-05-06
Anticipated expiration: 2030-10-30
Also published as: FR3115694B3; FR3115695B1; FR3115695A1

Abstract

La présente invention concerne un principe actif caractérisé en ce qu’il est constitué d’un extrait de pomme amère activant des récepteurs à l’amertume Tas2Rs présents sur la peau humaine, des compositions contenant ce principe actif et l’utilisation de ces compositions en application sur la peau pour des applications cosmétiques ou dermato-cosmétiques. Figure pour l’abrégé : [Figure 1]

Description

Principe actif constitué d’un extrait de pomme amère activant des récepteurs à l’amertume Tas2Rs présents sur la peau humaine et utilisations cosmétiques et dermato-cosmétiques correspondantes.

La présente invention concerne un principe actif qui peut être utilisé dans les domaines de la cosmétique et de la dermato-cosmétique.

Plus particulièrement, l’invention concerne un extrait obtenu à partir de pommes amères en tant que principe actif, les compositions le comprenant, ainsi que les utilisations cosmétiques ou dermo-cosmétiques de telles compositions, de préférence pour améliorer l’hydratation de la peau, pour prévenir ou atténuer les effets du vieillissement naturel de la peau, pour éclaircir le teint, pour améliorer la barrière cutanée ou encore apaiser la peau superficiellement irritée.

Arrière-plan technologique

Le cerveau humain perçoit le toucher, la vue, l’odorat, l’ouïe, le gout grâce à des récepteurs spécifiques localisés sur des organes dédiés.

Ainsi, pour le gout, les récepteurs en question sont principalement situés sur les cellules épithéliales de la langue. Ils sont constitués de récepteurs distincts qui permettent la détection de cinq sensations différentes : salée, sucrée, acide, «unami» et amer.

Les récepteurs responsables de la sensation «unami» ont été découverts récemment. Ce terme japonais correspond à sensation du savoureux. Les récepteurs correspondants seraient capables de détecter certains lipides.

Les récepteurs à l’amertume sont les récepteurs Tas2Rs. Ils possèdent sept unités transmembranaires couplés à la protéine G (G protein-coupled receptorsou GPCR en anglais) et sont capables d’activer des signaux intracellulaires via notamment la mobilisation du calcium intracellulaire. Vingt-cinq gènes codant pour des Tas2Rs ont été identifiées, localisés sur les chromosomes 5, 7 et 12.

Certains de ces récepteurs Tas2Rs reconnaissent un nombre important de molécules amères, tandis que d’autres reconnaissent un nombre restreint de celles-ci

On connaît de très nombreuses molécules amères. Pour certains d’entre elles, des études ont permis d’établir quel(s) récepteur(s)s Tas2R étai(en)t activé(s) par celles-ci.

Ainsi, la caféine est capable d’activer les récepteurs Tas2R7, Tas2R10, Tas2R14, Tas2R43, Tas2R46 ; l’humulone, présente dans le houblon utilisé dans la cadre de la fabrication de la bière, est capable d’activer les récepteurs Tas2R1, Tas2R14 et Tas2R40.

Parmi les molécules amères, on peut aussi citer de nombreux composés chimiques, tels que le diphénidol qui active les récepteurs Tas2R13, Tas2R16, Tas2R39 et Tas2R49, le dénatonium benzoate qui active les récepteurs Tas2R13 et Tas2R39, l’amarogentine et l’aziathioprine qui activent le récepteur Tas2R39, la cycloheximide qui active le récepteur Tas2R5, la cromolyne qui active le récepteur Tas2R49, le phébylthiocarbamide qui active le récepteur Tas2R38, les β-glucopyranosides qui activent le récepteur Tas2R38, l’acésulfame K qui active les récepteurs Tas2R43 et TasR44, la chloroquine qui active le récepteur Tas2R3, la 1,10-phénanthroline qui active le récepteur Tas2R5.

La détection de ces substances amères permet de prévenir contre le risque d’intoxication, la plupart de ces substances étant en effet toxiques, à tout le moins à hautes doses.

Présents sur les cellules épithéliales de la langue, les récepteurs à l’amertume Tas2Rs ont aussi été trouvés sur les cellules épithéliales du colon, et de l’estomac. Ils ont aussi été localisés sur des cellules des voies respiratoires supérieures laissant envisager de nouvelles possibilités de traitement de l’asthme (Deshpande DAet al. 2010)

Des études récentes ont aussi montré que ces récepteurs Tas2Rs de l’amertume existaient aussi sur la peau.

Ainsi Reszkaet al.(2015) ont recherché la présence des récepteurs Tas2RS sur des cellules de peau du visage provenant d’un panel de donneurs. Leurs études ont démontré l’expressionin vitrode nombreux de ces récepteurs de l’amertume, les récepteurs Tas2R4, 5, 30, 31, 41, 43 étant les plus exprimés.

Wölfleet al (2015) se sont intéressés à la présence de ces récepteurs de l’amertume dans les cellules épithéliales cornées de la peau et ont montré que les récepteurs Tas2R1, Tas2R38 étaient exprimés dans les kératinocytes humains.

Lauren Shawet al. (2018) ont étudié la présence des récepteurs TasR2s sur des échantillons de peau provenant de donneurs et de cadavres et ont montré que beaucoup de TasR2s, mais pas tous, étaient présents sur ces échantillons. Ils ont aussi constaté des disparités de présence de ces récepteurs selon le degré d’exposition au soleil, du sexe et de l’âge des personnes dont provenaient ces échantillons.

Ces récentes études ont conduit les inventeurs à s’intéresser à la possibilité de stimuler l’expression de ces récepteurs de l’amertume présents sur la peau en vue d’en tirer des effets bénéfiques pour celles-ci.

En effet, il n’a été publié à ce jour, à la connaissance de la Demanderesse, aucun principe actif permettant de stimuler les récepteurs TasR2s présents sur la peau.

Les recherches effectuées par les inventeurs ont abouti à la présente invention qui concerne, en un premier objet, un principe actif caractérisé en ce qu’il est constitué d’un extrait de pomme amère activant des récepteurs à l’amertume Tas2Rs présents dans la peau humaine.

Avantageusement, ladite pomme amère est une variété de pomme à cidre choisi parmi le groupe constitué par les variétésChevalier jaune, Domaine, Doux évêque, Fréquin rouge , Kermerrien , Marie Ménard , Tardive de la Sarthe.

Un deuxième objet de l’invention concerne une composition comprenant un tel principe actif et un milieu physiologiquement acceptable.

Préférentiellement, ledit extrait de pomme amère est alors présent à une concentration comprise entre 0,01% et 10% en poids par rapport au poids total de ladite composition, de préférence entre 0,1% et 1% en poids par rapport au poids total de ladite composition.

Un troisième objet de la présente invention concerne l’utilisation d’un principe actif tel que décrit ci-dessus en tant qu’ingrédient actif cosmétique ou dermato-cosmétique.

Un quatrième objet de la présente invention concerne l’utilisation d’une composition telle que décrite ci-dessus en tant que composition cosmétique ou dermato-cosmétique destinée à être appliquée sur la peau saine.

On entend par utilisation dermato-cosmétique une utilisation qui vise un effet purement cosmétique, mais aussi à améliorer, notamment pour des raisons de confort, encore la santé d’une peau déjà saine. Il ne s’agit donc pas d’utilisations thérapeutiques.

Selon un mode de réalisation, une telle utilisation vise à prévenir la déshydratation de la peau.

Selon un autre mode de réalisation, une telle utilisation vise à prévenir et/ou à atténuer des signes de vieillissements de la peau.

Selon encore un autre mode de réalisation, une telle utilisation a pour objectif d’éclaircir le teint.

Selon encore un autre mode de réalisation, une telle utilisation a pour objectif d’améliorer la barrière cutanée.

Selon encore un autre mode de réalisation, une telle utilisation a pour objectif de stimuler l’immunité cutanée et les défenses antimicrobiennes de la peau saine, notamment en stimulant la production de peptides antimicrobiens ou de composés toxiques pour les bactéries comme l’oxyde d’azote (NO).

Selon encore un autre mode de réalisation, une telle utilisation a pour objectif d’apaiser la peau superficiellement irritée.

Description détaillée de l’invention

E xtrait selon l’invention

Selon un premier aspect de l’invention, un extrait de pomme amère est utilisé pour activer des récepteurs à l’amertume Tas2Rs présents sur la peau humaine.

Les pommes amères sont des pommes présentant une teneur en tanins et une acidité élevées. Elles sont essentiellement utilisées pour la fabrication du cidre.

On distingue dans l’industrie du cidre quatre familles de pommes à cidre :

les pommes douces, parfumées et sucrées, qui ont une teneur en tanins inférieure à 0,2 % en poids de fruit frais et une teneur en composés acides inférieure à 0,45 % en poids de fruit frais ;

les pommes douces amères, parfumées aussi, qui ont une teneur en tanins supérieur à 0,2 % en poids de fruit frais et une teneur en composés acides inférieure à 0,45 % en poids de fruit frais ;

les pommes amères, souvent utilisées en quantité dominante dans la fabrication du cidre, qui ont une teneur en tanins supérieure à 0,2 % en poids de fruit frais et une teneur en composés acides supérieure à 0,45 % en poids de fruit frais. Elles donnent du corps et une couleur intense au cidre ;

les pommes acidulées, qui apportent la fraicheur, ont une teneur en tanins inférieure à 0,2 % en poids de fruit frais et une teneur une teneur en composés acides supérieure à 0,45%.

Ainsi, on entend dans la présente description le terme « pomme amère » comme définissant une pomme qui présente à la fois une teneur en tanins supérieure à 0,2 % en poids de fruit frais et une teneur en composés acides supérieure à 0,45 % en poids de fruit frais.

Les pommes utilisées pour fabriquer l’extrait selon la présent invention seront préférentiellement des pommes des variétésChevalier jaune, Domaine, Doux évêque, Fréquin rouge , Kermerrien , Marie Ménard , Tardive de la Sarthe. Ces variétés de pommes sont connues à la fois pour être acides et pour présenter une forte teneur en tannins.

Procédé d’obtention d’un extrait de pommes amères

L’extrait selon la présente invention pourra être obtenu selon différents procédés connus de l’homme de l’art permettant d’obtenir des fractions très enrichies en composés responsables de l’amertume et notamment en tanins.

Selon une variante, l’extrait est un extrait de marc de pomme amère. On entend par « marc » le mélange de peau, de pulpe et de pépins qui résulte après l’extraction du jus par pressage.

Selon une variante, l’extrait de pomme amère pourra ainsi être obtenu par hydro-distillation, en particulier par hydro-distillation assistée par micro-ondes (technique connue sous le terme anglophone VMHD qui signifieVacuum Microwave HydroDistillation). Des procédés d’hydro-distillation convenant à l’obtention d’un tel extrait sont connus, et sont décrits par exemple dans le document EP0698076A1.

Selon une autre variante, l’extrait de pomme amère selon l’invention pourra être obtenu par un procédé d’extraction mettant en œuvre un fluide, tel que le CO₂ _, à l’état supercritique

Composition selon l’invention

Un deuxième objet de l’invention est une composition comprenant un principe actif tel que décrit ci-dessus et un milieu physiologiquement acceptable.

On entend par milieu physiologiquement acceptable tout milieu convenant à un usage cosmétique ou dermatologique, en particulier pour une application sur la peau. Par exemple, un milieu physiologiquement acceptable pourra être choisi parmi ou comprendre de l’eau ou un solvant organique hydrosoluble, des agents de texture, notamment un agent gélifiant, des parfums, des conservateurs, ou des mélanges de ceux-ci. Une eau convenant à l'invention peut être une eau thermale et/ou minérale, notamment choisie parmi l'eau de Vittel, les eaux du bassin de Vichy et l'eau de la Roche Posay. Un agent gélifiant convenant à l’invention peut être choisi parmi la pectine, la gomme de guar, la cellulose, la dextrine, la maltodextrine, l'amidon, la gomme de Tara, la gomme de Caroube, l'inuline,la gomme d'acacia, la gomme d'arabique, les polymères riches en fucose, les carraghénanes, la gomme de Konjac, la gomme de xanthane, le dextrane, le chitosane, la gomme Adragante, la gomme de Ghatti, la gomme de Karaya, la gomme de tamarin, l'agar-agar, l'alginate, la gomme de Gellane, et leurs mélanges.

Une composition selon l'invention peut se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées pour une application topique sur la peau. Elle peut alors prendre la forme d’une solution aqueuse ou huileuse, d’une lotion, d’un sérum, d'une émulsion, de lait, de crème, de gel, de microcapsules ou de micro -particules. Ces compositions peuvent être préparées selon les méthodes connues de l’art.

Préférentiellement, le principe actif de l’invention est présent à une concentration comprise entre 0,01% et 10% en poids par rapport au poids total de ladite composition, de préférence entre 0,1% et 1% en poids par rapport au poids total de ladite composition.

Utilisation de l’ e xtrait selon l’invention

Un troisième objet de la présente invention concerne l’utilisation d’un principe actif tel que décrit ci-dessus en tant qu’ingrédient actif cosmétique.

L’extrait de pomme amère selon l’invention présente une amertume très élevée.

En appliquant cet extrait sur la peau, celle-ci réagit en enclenchant des mécanismes visant à la protéger de substances potentiellement toxiques. Ces mécanismes de protection se traduisent par des effets bénéfiques sur la peau.

Cet extrait est donc adapté à la réalisation de compositions cosmétiques et dermato-cosmétiques pour la peau.

Utilisation d ’une composition comprenant l’extrait selon l’invention

Les compositions intégrant l’extrait de pomme selon l’invention peuvent être des compositions purement cosmétiques. Elles peuvent être utilisées pour prévenir la déshydratation de la peau, pour prévenir et/ou atténuer des signes de vieillissement de la peau, pour éclaircir le teint, pour équilibrer le microbiote cutané, ou encore pour améliorer la barrière cutanée.

Les compositions intégrant l’extrait de pomme amères selon l’invention peuvent être aussi des composition dermo-cosmétiques, c’est-à-dire des compositions qui pourront être appliquées sur des peaux superficiellement irritées afin de les apaiser.

De telles compositions peuvent être utilisées sur le visage, les mains, les pieds ou le corps. Ainsi, l’invention concerne également une utilisation cosmétique ou dermato-cosmétique d’une telle composition sur la peau. L’utilisation de la composition selon l’invention pourra être quotidienne ou biquotidienne. Elle pourra être moins fréquente, comme par exemple une fois par semaine, deux fois par semaine, trois fois par semaine, quatre fois par semaine, cinq fois par semaine ou six fois par semaine. Selon un mode de réalisation, l’utilisation de la composition selon l’invention permet de prévenir la déshydratation de la peau, prévenir et/ou atténuer des signes de vieillissements de la peau, éclaircir le teint, améliorer la barrière cutanée, et stimuler l’immunité cutanée.

Ainsi, la fréquence d’utilisation de la composition selon l’invention pourra être adaptée en fonction de l’amélioration de l’aspect de la peau.

Brève description des figures

regroupe trois photographies de coupes histologiques d’un épiderme reconstitué jeune à différents stades de son développement (de haut en bas au jour 5, au jour 10 et au jour 18) ;

est un graphe montrant l’expression des différents gènes de l’amertume codant pour TasR2s dans des échantillons d’épiderme humain reconstitué jeune au cours de la différenciation (J5, J10 et J18) ;

regroupe trois photographies de coupes histologiques d’un épiderme reconstitué vieilli à différents stades de son développement (de haut en bas au jour 5, au jour 10 et au jour 18);

est un graphe montrant l’expression des différents gènes de l’amertume codant pour TasR2s dans des échantillons d’épiderme humain reconstitué vieilli au cours de la différenciation (J5, J10 et J18) ;

est un graphe montrant l’expression de gènes codant pour différents récepteurs de l’amertume TasR2s dans des échantillons d’épidermes humains reconstitués jeunes et vieillis ;

est un graphe montrant l’expression des gènes Tas2Rs dans des fibroblastes provenant de donneurs d’âges différents ;

est un graphe montrant l’expression de gènes codant pour différents récepteurs de l’amertume TasR2s dans des fibroblastes de différentes parties du corps humains.

Tests sur épidermes reconstitués

Afin de testerin vitrol’expression des gènes codant pour l’expression des vingt-cinq récepteurs de l’amertume TasR2s dans la peau, les inventeurs ont utilisé des échantillons d’épiderme humain reconstitués produits par CODIF à partir de fibroblastes et de kératinocytes humains.

Afin de disposer d’échantillons de peau correspondant à une peau âgée, les inventeurs ont utilisés des kératinocytes ayant subi cinq repiquages successifs.

Afin de disposer d’échantillons de peau reconstitué correspondant à une peau jeune, ils ont utilisé des kératinocytes ayant subi seulement trois repiquages successifs.

La méthode utilisée pour quantifier l’expression des gènes codant pour les récepteurs TasR2S dans ces différents échantillons de peau reconstituée a été une méthode classique mettant en œuvre des étapes :

d’extraction de l’ARNm avec un kit TriPure Isolation Reagent ® ;
d’amplification de l’ARNm extrait avec un kit GeneChip 3IVT Express d’Affymetrix ® ;
d’hybridation sur plaques U219 (3000) d’Affymetrix ®.

Résultats sur épiderme jeune

La regroupe des photographies de coupes histologiques des épidermes reconstitués jeunes à différents stades de développement, plus précisément aux 5ème, 10ème et 18ème jour de celui-ci.

Des mesures de l’expression des gènes codant pour les différents récepteurs de l’amertume Tas2Rs ont été effectuées au cours de ces différents stades de développement. Ces mesures ont été répétées trois fois.

En référence à la , les résultats de ces expériences montrent que l’expression de cinq récepteurs Tas2Rs (dont les références sont encadrées sur la ) peuvent être considérée comme correcte. Parmi les cinq récepteurs Tas2Rs concernés, le récepteur Tas2R4 a été moins produit au 10ème jour de développement de l’épiderme qu’au 5ème jour, les récepteurs Tas2R3, Tas2R5 et Tas2R20 ont été plus produits au 10ème jour qu’au 5ème jour mais moins au 18ème jour et le récepteur Tas2R60 a été plus produit au 18ème jour qu’au 5ème et qu’au 10ème jour.

Résultat s sur épiderme vieilli

En référence à la , les résultats de ces expériences montrent que l’expression de cinq récepteurs Tas2Rs (dont les références sont encadrées sur la ) pouvait être considérée comme correcte. Ces cinq récepteurs correspondent à ceux dont l’expression a été estimée correcte dans les échantillons de peau jeune. Parmi les cinq récepteurs Tas2Rs concernés, les récepteurs Tas2R2, Tas2R4 et Tas2R5 ont été moins produit au 10ème jour et au 18ème jour tandis que le récepteur Tas2R60 a été plus produit au 18ème jour qu’au 5ème et qu’au 10ème jour.

Comparaison des résultats sur les échantillons d’épiderme jeune et vieilli au 10 ^ème jour de différenciation

En référence à la , la comparaison des résultats des expériences menées sur les épidermes reconstitués de peaux jeunes et vieillies montre que, au dixième jour de différenciation, la production des récepteurs Tas2R20, Tas2R40, Tas2R46 et Tas2R60 augmente avec l’âge des kératinocytes tandis que celle des récepteurs TaS2R14, Tas2R19, Tas2R30, Tas2R31, Tas2R4, Tas2R41, Tas2R42, Tas2R43, Tas2R5, Tas2R50, Tas2R7 and Tas2R38 baisse avec celui-ci.

Présence des récepteurs de l’amertume dans les fibroblastes

Les inventeurs ont ensuite mesuré l’expression de l’ensemble des récepteurs à l’amertume Tas2Rs dans des fibroblastes humains.

Pour ce faire, ils ont utilisé des fibroblastes produits par Codif isolés du derme provenant de trois donneurs âgés de 30, 51 et 70 ans.

La méthode utilisée pour quantifier l’expression des gènes codant pour les récepteurs TasR2S a été une méthode classique mettant en œuvre les étapes suivantes :

extraction de l’ARN total avec un mini kit RNeasy Plus de Quiagen ® ;
mesure de la quantité de l’ARN extrait avec un kit Qubit RAN BR d’Invitragen ® ;
mesure de la qualité de l’ARN extrait sur nanochips ARN et le Bioanalyser 2100 d’Agilent Technologies ® ;
Reverse Transcription avec le protocole SuperScript IV de Thermofisher scientific ®;
Amplification qPCR sur plaque Custom RT PCR (Clash33636), avec une plaque contenant plusieurs Tas2Rs (1 cycle de 10 minutes à 95°C, 40 cycles de 15 minutes à 95 ° C et un cycle d’une minute à 60 °C)

En référence à la , Tas2R1 and Tas2R38 n’ont pas été détectés dans les fibroblastes étudiés mais treize autres Tas2Rs ont été détectés (Tas2R3, Tas2R4, Tas2R5, Tas2R10, Tas2R13, Tas2R14, Tas2R19, Tas2R20, Tas2R30, Tas2R31, Tas2R42, Tas2R46 and Tas2R50) dans ceux-ci.

Ces expériences permettent de constater que certains Tas2Rs tendent à augmenter avec l’âge des fibroblastes (Tas2R3, Tas2R4, Tas2R10, Tas2R19, Tas2R20, Tas2R30) tandis que d’autres tendent à baisser avec celui-ci (Tas2R5, Tas2R42).

Dans des expériences complémentaires, les récepteurs Tas2Rs ont été recherchés dans des fibroblastes provenant d’échantillons de peau prélevés sur différentes parties du corps humain, à avoir le visage, les lèvres et l’abdomen.

En référence à la , les résultats indiquent que certains de ces récepteurs sont davantage présents sur les fibroblastes issus de lèvres que sur les fibroblastes issus des autres parties du corps testées, particulièrement Tas2R3, R4, R5, R10, R13, R19, R20, R30, R42, R46 and R50

Références

Deshpande DAet al. Bitter taste receptors on airway smooth muscle bronchodilate by localized calcium signaling and reverse obstruction. Nat Med 2010, 16: 1299-1304.
Ute Wölfleet al.Expression and Functionnal Activity of the Bitter Taste Receptor Tas2R1 an Tas2R38 in human keratinocytes. Skin Pharmacol Physiol 2015, 28: 137-147; doi 10.1159/000367631
Edyta Reszkaet al.Expression of Bitter Taste Receptors in the Human Skin in vitro. J Clinic Res Bioeth 2015, 6:2; doi 10.4172/2155-9627.1000218
Lauren Shawet al.Personalized expression of bitter Taste Receptors in human skin. PLos One, 2018, 13(10): E0205322; doi 10/1371/journal.pone 0205322

Claims

Principe actif caractérisé en ce qu’il est constitué d’un extrait de pomme amère activant des récepteurs à l’amertume Tas2Rs présents sur la peau humaine.
Principe actif selon la revendication 1 caractérisé en ce que ladite pomme amère est une variété de pomme choisi parmi le groupe constitué par les variétésChevalier jaune, Domaine, Doux évêque, Fréquin rouge , Kermerrien , Marie Ménard , Tardive de la Sarthe.
Composition comprenant un principe actif selon l’une quelconque des revendications 1 ou 2 et un milieu physiologiquement acceptable.
Composition selon la revendication 3, caractérisée en ce ledit extrait est présent à une concentration comprise entre 0,01% et 10% en poids par rapport au poids total de ladite composition, de préférence entre 0,1% et 1% en poids par rapport au poids total de ladite composition.
Utilisation d’un principe actif selon l’une quelconque des revendications 1 ou 2 en tant qu’ingrédient actif cosmétique ou dermato-cosmétique.
Utilisation d’une composition selon la revendication 3 ou 4 en tant que composition cosmétique ou dermato-cosmétique destinée à être appliquée sur la peau saine.
Utilisation selon la revendication 6 pour prévenir la déshydratation de la peau.
Utilisation selon la revendication 6 pour la prévention et/ou le traitement des signes de vieillissements de la peau.
Utilisation selon la revendication 6 pour éclaircir le teint.
Utilisation selon la revendication 6 pour améliorer la barrière cutanée.
Utilisation selon la revendication 6 pour stimuler l’immunité cutanée et les défenses antimicrobiennes de la peau saine.
Utilisation selon la revendication 6 pour apaiser la peau superficiellement irritée.