FR3110166A1 - Nouvelles compositions immunogenes et leur application pour la preparation de vaccins contre l’hepatite c et l’hepatite b - Google Patents
Nouvelles compositions immunogenes et leur application pour la preparation de vaccins contre l’hepatite c et l’hepatite b Download PDFInfo
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Abstract
TITRE : NOUVELLES COMPOSITIONS IMMUNOGENES ET LEUR APPLICATION POUR LA PREPARATION DE VACCINS CONTRE L’HEPATITE C ET L’HEPATITE B L’invention a pour objet de nouvelles compositions immunogènes comprenant un mélange de particules d’enveloppes sous-virales chimères entre les protéines d’enveloppe du virus de l’hépatite B (HBV, pour Hepatitis B virus) et du virus de l’hépatite C (HCV, pour Hepatitis C virus). L’invention a également pour objet l’utilisation de ces nouvelles compositions immunogènes, en tant que vaccin, pour la prévention et/ou le traitement prophylactique et/ou thérapeutique de l’hépatite C, ou pour la prévention et/ou le traitement prophylactique et/ou thérapeutique de l’hépatite B, ou pour la prévention et/ou le traitement prophylactique et/ou thérapeutique de l’hépatite C et de l’hépatite B. Pas de figure
Description
DOMAINE DE L’INVENTION
L’invention a pour objet de nouvelles compositions immunogènes comprenant un mélange de particules d’enveloppes sous-virales chimères entre les protéines d’enveloppe du virus de l’hépatite B (HBV, pourHepatitis B virus) et du virus de l’hépatite C (HCV, pourHepatitis C virus). L’invention a également pour objet l’utilisation de ces nouvelles compositions immunogènes, en tant que vaccin, pour la prévention et/ou le traitement prophylactique et/ou thérapeutique de l’hépatite C, ou pour la prévention et/ou le traitement prophylactique et/ou thérapeutique de l’hépatite B, ou pour la prévention et/ou le traitement prophylactique et/ou thérapeutique de l’hépatite C et de l’hépatite B.
CONTEXTE DE L’INVENTION
Le virus de l’hépatite C (HCV), identifié en 1989, puis cloné et séquencé, représente encore à l’heure actuelle un réel problème de santé publique du fait de sa large répartition à travers le monde et de l’évolution fréquente de la maladie vers la chronicité, laquelle peut évoluer vers la cirrhose voire le carcinome hépatocellulaire.
En 2000, L’Organisation mondiale de la santé (OMS) estimait qu’environ 3% de la population mondiale, soit environ 170 millions de personnes, était infectée par le virus HCV. Depuis, l’OMS a estimé que l’infection par le virus de l’hépatite C (HCV) pourrait être éradiquée d’ici 2030 si l’épidémie du virus HCV dans le monde diminue (c’est-à-dire si le nombre de patients guéris par des AAD dépasse constamment et sensiblement le nombre de nouvelles infections) d’au moins 7% par an. Seulement, des études récentes ont montré que la régression annuelle nette mondiale, estimée à seulement 0,4%, est loin d’atteindre cet objectif (Hill AM, Nath S, Simmons B.The road to elimination of hepatitis C: analysis of cures versus new infections in 91 countries. J Virus Erad 2017;3:117-123.).
Pour l’atteindre, il faudrait améliorer la sécurité du sang et le contrôle des infections, ainsi que développer ou créer des services pour les utilisateurs de drogues par voie intraveineuse, et procéder à un dépistage et un traitement à grande échelle, dont le coût a été estimé par l’OMS est d’au moins 12 milliards de dollars américains (Wiktor S.How feasible is the global elimination of HCV infection?Lancet 2019;393:1265-1267.). En outre, bien que les médicaments antiviraux soient très efficaces pour contrôler l’infection, ils ne peuvent empêcher la réinfection par le virus HCV, une situation qui devient de plus en plus courante chez les toxicomanes dans les pays industrialisés (Midgard H, Weir A, Palmateer N,et al.HCV epidemiology in high-risk groups and the risk of reinfection. J Hepatol 2016;65:S33-S45).
De tels efforts sont de nos jours impossibles et malgré l’existence de vaccins candidats dans l’art antérieur, le développement d’un vaccin prophylactique efficace anti-HCV pour lutter contre l’épidémie du virus HCV reste un objectif majeur. En effet, dans la population mondiale, plusieurs génotypes du virus HCV circulent (e.g.1a, 1b, 3a, etc.) et à ce jour, aucun vaccin s’est révélé capable d’induire une réponse immunitaire efficace contre tous.
Par exemple, il peut être cité un vaccin basé sur des glycoprotéines d’enveloppe E1 ou E2 du virus HCV fusionnées à la protéine d’enveloppe S (HBsAg) du virus de l’hépatite B (HBV) hétérologue a été mis au point (Demande internationale No. PCT/FR2009/051142 déposée le 16 juin 2009). Seulement celui-ci ne permet pas une réponse immunitaire et la production d’anticorps avec un haut potentiel de neutralisation croisée contre différents génotypes du virus HCV.
BREF APERÇU DE L’INVENTION
En réponse à ce besoin sanitaire pressant et pour pallier aux inconvénients de l’art antérieur, la présente invention a pour but de fournir de nouvelles compositions immunogènes comprenant un mélange de particules d’enveloppes sous-virales chimères entre les protéines d’enveloppe du virus de l’hépatite B (HBV, pourHepatitis B virus) et du virus de l’hépatite C (HCV, pourHepatitis C virus). L’invention a également pour but l’utilisation de ces nouvelles compositions immunogènes, en tant que vaccin, pour la prévention et/ou le traitement prophylactique et/ou thérapeutique de l’hépatite C et/ou de l’hépatite B. A cet égard, l’invention a comme avantage qu’elle peut aisément s’adapter aux chaines existantes de production industrielles des vaccins contre l’hépatite B actuellement commercialisés.
DESCRIPTION DETAILLEE
Dans son aspect le plus général, l’Invention a pour objet une composition immunogène comprenant un mélange de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable,
dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence d’au moins deux particules choisies parmi les particules caractérisées par la présence :
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétée,
laquelle, comme l’ont démontré les inventeurs, permet de répondre à l’ensemble des problématiques soulevées précédemment (i.e.lutter efficacement contre l’épidémie, diminué les coûts relatifs à la gestion de celle-ci,etc.).
En effet et ce, de manière inattendue et surprenante, l’emploi d’un mélange multivalent de différents génotypes du virus HCV et/ou un mélange des protéines E1 et/ou E2 d’un ou plusieurs génotypes permet d’induire une réponse immunitaire stable et efficace. Se faisant, la composition immunogène de l’invention (vaccin bivalent HBV/HCV) représente une avancée majeure pouvant être utilisée, selon diverses stratégies de combinaison, pour induire une large protection neutralisante contre différents génotypes du virus HCV (i.e.anticorps neutralisant « à large spectre ») ou pour fournir une protection contre la prévalence d’un génotype particulier dans une région donnée.
Par « composition immunogène », on entend une composition susceptible d’être administrée à l’Homme ou à l’animal afin d’induire une réponse immunitaire. Ladite réponse immunitaire peut être une réponse immunitaire humorale,i.e.une réponse immunitaire qui se traduit par une production d’anticorps neutralisants, ou une réponse immunitaire cellulaire cytotoxique,i.e.une réponse immunitaire qui se traduit par une activation de certaines cellules, notamment les cellules présentatrices d’antigènes (par exemple les cellules dendritiques), les lymphocytes T, les lymphocytes B, les lymphocytes NK (pour «Natural Killer» en anglais). Les compositions immunogènes de l’invention s’apparentent donc à des compositions pharmaceutiques ou à des vaccins, lesquels sont appropriés pour l’administration orale, sublinguale, sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, topique, locale, intra-trachéale, intra-nasale, transdermique, rectale, intraoculaire, intra-auliculaire, pulmonaire.
Par « particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses », abrégée « particules d’enveloppe sous-virales », on entend toute particule filamenteuse ou sphérique, résultant de l’assemblage de la protéine S sauvage du virus HBV et/ou de la protéine S délétée de son domaine transmembranaire N-terminal, ladite particule étant dépourvue du génome viral, et notamment synthétisée et sécrétée en très large excès, et qui peut être analysée par tout protocole permettant de mettre en évidence l’absence de fragments nucléotidiques spécifiques des virus HBV ou HCV, tel que notamment, par l’amplification par PCR (Polymerase Chain Reaction) antérieurement décrite,e.g.:
# en ce qui concerne le virus HCV, par Halfon P, Bourlière M, Ouzan D, Sène D, Saadoun D, Khiri H, Pénaranda G, Martineau A, Oulès V, Cacoub P.OccultHCV infection revisited with ultra-sensitive real-time PCR assay. J. Clin. Microbiol. 2008 Apr 30 ; et
# en ce qui concerne le virus HCV, par Thibault V, Pichoud C, Mullen C, Rhoads J, Smith JB, Bitbol A, Thamm S, Zoulim F.Characterization of a new sensitive PCR assay for quantification of viral DNA isolated from patients with hepatitis B virus infections. J. Clin. Microbiol. 2007 Dec. 45(12):3948-53,
et dont le résultat est négatif.
Par « particule d’enveloppe sous-virale chimère », on entend toute particule d’enveloppe sous-virale comprenant au moins la protéine S sauvage du virus HBV et une protéine de fusion immunogène susmentionnée résultant de l’auto-assemblage de la protéine S sauvage, ou de l’assemblage d’une protéine de fusion susmentionnée, en présence de la protéine S sauvage.
Par « mélange de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses », on entend que ce mélange constitue le principe actif de la composition immunogène de l’Invention. Celui-ci comprend un mélange d’au moins deux particules choisies parmi six particules A, B, C, D, E et F. Autrement dit, il peut s’agir d’un mélange de deux, trois, quatre, cinq ou six particules, si bien que l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, dans laquelle ledit mélange de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses est choisi parmi :
# le mélange desdites particules A et B ; le mélange desdites particules A et C ; A et D ; le mélange desdites particules A et E ; le mélange desdites particules A et F ; le mélange desdites particules B et C ; le mélange desdites particules B et D ; le mélange desdites particules B et E ; le mélange desdites particules B et F ; le mélange desdites particules C et D ; le mélange desdites particules C et E ; le mélange desdites particules C et F ; le mélange desdites particules D et E ; le mélange desdites particules D et F ; le mélange desdites particules E et F ;
# le mélange desdites particules A, B et C ; le mélange desdites particules A, B et D ; le mélange desdites particules A, B et E ; le mélange desdites particules A, B et F ; le mélange desdites particules A, C et D ; le mélange desdites particules A, C et E ; le mélange desdites particules A, C et F ; le mélange desdites particules A, D et E ; le mélange desdites particules A, D et F ; le mélange desdites particules A, E et F ; le mélange desdites particules B, C et D ; le mélange desdites particules B, C et E ; le mélange desdites particules B, C et F ; le mélange desdites particules B, D et E ; le mélange desdites particules B, D et F ; le mélange desdites particules B, E et F ; le mélange desdites particules C, D et E ; le mélange desdites particules C, D et F ; le mélange desdites particules C, E et F ; le mélange desdites particules D, E et F ;
# le mélange desdites particules A, B, C et D ; le mélange desdites particules A, B, C et E ; le mélange desdites particules A, B, C et F ; le mélange desdites particules A, B, D et E ; le mélange desdites particules A, B, D et F ; le mélange desdites particules A, B, E et F ; le mélange desdites particules A, C, D et E ; le mélange desdites particules A, C, D et F ; le mélange desdites particules A, C, E et F ; le mélange desdites particules A, D, E et F ; le mélange desdites particules B, C, D et E ; le mélange desdites particules B, C, D et F ; le mélange desdites particules B, C, E et F ; le mélange desdites particules B, D, E et F ; le mélange desdites particules C, D, E et F ;
# le mélange desdites particules A, B, C, D et E ; le mélange desdites particules A, B, C, D et F ; le mélange desdites particules A, B, C, E et F ; le mélange desdites particules A, B, D, E et F ; le mélange desdites particules A, B, D, E et F ; le mélange desdites particules A, C, D, E et F ; le mélange desdites particules B, C, D, E et F ; et
# le mélange desdites particules A, B, C, D, E et F.
Avantageusement, ce mélange ou principe actif peut être administréviala composition immunogène de l’invention sous forme unitaire d’administration. Ladite composition immunogène de l’invention sous forme unitaire d’administration peuvent être par exemple un comprimé, une gélule, un granule, une poudre, une solution injectable ou suspension orale, un timbre transdermique (patch), une forme d’administration sublinguale, buccale, intra-trachéale, intraoculaire, intra-nasale, intra-auriculaire, par inhalation, une forme d’administration topique, transdermique, sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse, une forme d’administration rectale ou un implant. Pour l’administration topique, on peut notamment envisager des crèmes, gels, pommades, lotions ou collyres.
Pour aboutir à ces diverses formes galéniques, un véhicule pharmaceutiquement acceptable est ajouté à la composition immunogène de l’invention. Par « véhicule pharmaceutiquement acceptable », on entend un matériel non toxique qui est compatible avec un système biologique tel qu’une cellule, une culture cellulaire, un tissu ou un organisme animal ou humain. Il s’agit donc un véhicule pharmaceutiquement approprié dont l’Homme du métier déterminera facilement la nature et la quantité à utiliser en fonction de paramètres usuels et des constituants de la composition immunogène de l’invention, sa forme pharmaceutique et le mode d’administration souhaité. Par exemple, il peut s’agir de solutés cristalloïdes (e.g.chlorure de sodium, bicarbonate, glucose), de lipides cationiques, de composés peptidiques, de surfactants (e.g.polysorbates). Dans tous les cas et ce, quel que soit la formulation choisie, la composition immunogène de l’invention doit être stérile, stable dans les conditions de fabrication et de stockage, et doit impérativement être préservée de toute contamination par des micro-organismes, tels que les bactéries et les champignons.
Selon un autre mode de réalisation, l’Invention a pour objet la composition immunogène comprenant un mélange de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable telle que décrite ci-dessus,
dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence d’au moins deux particules choisies parmi les particules caractérisées par la présence :
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétée,
l’une au moins desdites au moins deux particules présentant soit une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée(A) soit une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée(B).
Par « l’une au moins desdites au moins deux particules présentant soit une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée(A) soit une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée(B) », on entend que le mélange doit contenir soit une particule caractérisée par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée, soit une particule caractérisée par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée. Autrement dit, et selon cet autre mode de réalisation, on comprend que l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, dans laquelle ledit mélange de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses est choisi parmi :
# le mélange desdites particules A et B ; le mélange desdites particules A et C ; A et D ; le mélange desdites particules A et E ; le mélange desdites particules A et F ; le mélange desdites particules B et C ; le mélange desdites particules B et D ; le mélange desdites particules B et E ; le mélange desdites particules B et F ;
# le mélange desdites particules A, B et C ; le mélange desdites particules A, B et D ; le mélange desdites particules A, B et E ; le mélange desdites particules A, B et F ; le mélange desdites particules A, C et D ; le mélange desdites particules A, C et E ; le mélange desdites particules A, C et F ; le mélange desdites particules A, D et E ; le mélange desdites particules A, D et F ; le mélange desdites particules A, E et F ; le mélange desdites particules B, C et D ; le mélange desdites particules B, C et E ; le mélange desdites particules B, C et F ; le mélange desdites particules B, D et E ; le mélange desdites particules B, D et F ; le mélange desdites particules B, E et F ;
# le mélange desdites particules A, B, C et D ; le mélange desdites particules A, B, C et E ; le mélange desdites particules A, B, C et F ; le mélange desdites particules A, B, D et E ; le mélange desdites particules A, B, D et F ; le mélange desdites particules A, B, E et F ; le mélange desdites particules A, C, D et E ; le mélange desdites particules A, C, D et F ; le mélange desdites particules A, C, E et F ; le mélange desdites particules A, D, E et F ; le mélange desdites particules B, C, D et E ; le mélange desdites particules B, C, D et F ; le mélange desdites particules B, C, E et F ; le mélange desdites particules B, D, E et F ;
# le mélange desdites particules A, B, C, D et E ; le mélange desdites particules A, B, C, D et F ; le mélange desdites particules A, B, C, E et F ; le mélange desdites particules A, B, D, E et F ; le mélange desdites particules A, B, D, E et F ; le mélange desdites particules A, C, D, E et F ; le mélange desdites particules B, C, D, E et F ; et
# le mélange desdites particules A, B, C, D, E et F.
Selon un autre mode de réalisation, l’Invention a pour objet la composition immunogène comprenant un mélange de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable telle que décrite ci-dessus,
dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence d’au moins deux particules choisies parmi les particules caractérisées par la présence :
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée,
l’une au moins desdites au moins deux particules présentant soit une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée(A) soit une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée(B).
En particulier et selon cet autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition immunogène comprenant un mélange de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable telle que décrite ci-dessus,
dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence d’au moins deux particules choisies parmi les particules caractérisées par la présence :
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée,
l’une au moins desdites au moins deux particules présentant soit une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée(A) soit une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée(B),
ladite protéine native SHBVétant la protéine S sauvage de l’antigène de surface d’un isolat du virus de l’hépatite B (HBV), et
lesdites protéines fusion E1HCV 4a– SHBV délétée, E2HCV 4a– SHBV délétée, E2HCV 1a– SHBV délétéeet E2HCV 3a– SHBV délétéeétant des protéines de fusion immunogènes comprenant au moins les deux peptides suivants :
# ducôté C-terminal, un premier peptide constitué :
- de la séquence d’acides aminés de la protéine S d’un isolat du virus humain de l’hépatite B, laquelle protéine S est délétée de son domaine transmembranaire situé à son extrémité N-terminale ; ou
- d’une séquence d’acides aminés présentant un pourcentage d’identité d’au moins 91%, notamment d’au moins 93%, particulièrement d’au moins 95%, et plus particulièrement d’au moins 97%, avec ladite séquence d’acides aminés de la protéine S délétée en N-terminal, sous réserve que ladite séquence d’acides aminés conserve la capacité à former des particules d’enveloppe sous-virales non infectieuses, immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite B ; ou
- de la séquence d’acides aminés d’un variant naturel issue d’un autre isolat du virus HBV ou d’un variant synthétique dérivée de ladite séquence d’acides aminés de la protéine S délétée en N-terminal, sous réserve que ladite séquence d’acides aminés conserve la capacité à former des particules d’enveloppe sous-virales non infectieuses, immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite B, et
# ducôté N-terminal, un second peptide constitué :
- de la séquence d’acides aminés du domaine transmembranaire et de l’ectodomaine d’une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C (HCV) ; ou
- d’une séquence d’acides aminés présentant un pourcentage d’identité d’au moins 78%, notamment d’au moins 80%, particulièrement d’au moins 85%, et plus particulièrement d’au moins 90%, avec ladite séquence d’acides aminés du domaine transmembranaire et de l’ectodomaine d’une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C, sous réserve que ladite séquence d’acides aminés conserve la capacité à former des particules d’enveloppe sous-virales non infectieuses, immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite C ; ou
- de la séquence d’acides aminés d’un variant naturel issue d’un isolat du virus HCV, ou d’un variant synthétique dérivée de ladite séquence d’acides aminés du domaine transmembranaire et de l’ectodomaine d’une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C, sous réserve que ladite séquence d’acides aminés conserve les propriétés immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite C,
ladite protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C étant choisie parmi la protéine E1 du virus HCV de génotype 4a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 4a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 1a et la protéine E2 du virus HCV de génotype 3a.
Au sens de l’invention, lesdites protéines de fusion peuvent également être définies comme comprenant au moins :
# d’une part la protéine S de HBV délétée (SHBV délétée), essentiellement constitué de ses trois domaines transmembranaires situés à l’extrémité C-terminale, ladite protéine S délétée conservant la capacité d’assemblage en particules d’enveloppe sous-virales, et conservant les propriétés immunogènes contre le virus HBV ; et
# d’autre part la quasi-intégralité de la séquence d’une des protéines E1 et E2 (E1HCV 4a, E2HCV 4a, E2HCV 1a, E2HCV 3a, E1HCV 1aou E1HCV 3a), conservant également les propriétés immunogènes contre le virus HCV,
de sorte que lesdites protéines de fusion soient capables de s’assembler en particules d’enveloppe sous-virales, en présence de la protéine S sauvage (SHBV), et soient susceptibles d’induire une immunisation contre les virus HBV et/ou HCV, et notamment d’induire une double immunisation contre les virus HBV et HCV.
En outre, il est entendu que lesdites protéines de fusion immunogènes peuvent être des protéine ayant une séquence d’acides aminés présentant un pourcentage d’identité d’au moins 83%, notamment d’au moins 85%, particulièrement d’au moins 90%, et plus particulièrement d’au moins 95%, avec la séquence d’acides aminés constituée de la protéine S délétée de son domaine transmembranaire N-terminal (SHBV délétée), du domaine transmembranaire et de l’ectodomaine d’une protéine E1 ou E2 d’un isolat du virus de l’hépatite C de génotype 1a, 3a ou 4a (E1HCV 4a, E2HCV 4a, E2HCV 1a, E2HCV 3a, E1HCV 1aou E1HCV 3a).
Selon cet autre mode de réalisation, on comprend également que l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, dans laquelle ledit mélange de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses est choisi parmi :
# le mélange desdites particules A et B ; le mélange desdites particules A et C ; A et D ; le mélange desdites particules B et C ; le mélange desdites particules B et D ;
# le mélange desdites particules A, B et C ; le mélange desdites particules A, B et D ; le mélange desdites particules A, C et D ; le mélange desdites particules B, C et D ; et
# le mélange desdites particules A, B, C et D.
En particulier, l’Invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence des particules caractérisées par la présence :
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée; et
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée.
En particulier, l’Invention a également pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence des particules caractérisées par la présence :
B. d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée;
C. d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée; et
D. d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée.
Par « isolat du virus de l’hépatite B », tout isolat membre de la famille desHepadnaviridaeet appartenant au genreOrthohepadnavirus, ou tout isolat classifié par l’International Committee for the Taxonomy of Viruses(ICTV) comme étant apparenté au virus HBV (Schaefer S.Hepatitis B virus taxonomy and hepatitis B virus genotypes. World J Gastroenterol. 2007 Jan 7: 13(1):14-21).
Par « protéine native SHBV», on entend la protéine S sauvage de l’antigène de surface d’un isolat du virus de l’hépatite B, c’est-à-dire :
# la protéine d’enveloppe d’un isolat du virus HBV comprenant notamment 226 acides aminés et comportant quatre domaines transmembranaires, et notamment la protéine d’enveloppe de l’isolat HBV de sérotypeadw; ou
# le variant naturel issu d’un isolat du virus HBV ; ou
# le variant synthétique de la protéine susmentionnée.
En particulier, l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, dans laquelle ladite protéine native SHBVest choisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 2, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 2. L’invention a également pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, dans laquelle ladite protéine native SHBVest de séquence SEQ ID NO : 2, laquelle est codée par la séquence d’acide nucléiques SEQ ID NO : 1. Cette dernière peut, par exemple, être obtenue à l’aide du plasmide pHR’hph-S de séquence SEQ ID NO : 30, lequel comporte le gènehphde resistance à l’hygromycine et dans lequel a été cloné la séquence codant la protéine S sauvage (SHBV) au niveau du site de restriction enzymatique unique BamHI GGATCC (SEQ ID NO : 38) localisé dans le site de multi-clonage du vecteur.
Par « protéine de fusion » ou « protéine fusion », on entend toute protéine comprenant au moins la protéine S délétée de son domaine transmembranaire situé à son extrémité N-terminale d’un isolat du virus HBV (SHBV délétée), et la quasi-intégralité d’une protéine d’enveloppe E1 et/ou E2 d’un isolat du virus HCV, dont le domaine transmembranaire se substitue à celui délété en N-terminal de la protéine S du virus HBV.
Par « protéine (de fusion) immunogène », on entend toute protéine, notamment toute protéine de fusion selon l’invention ainsi que tout fragment de toute protéine de fusion décrit ici, dotée de propriétés antigéniques et capable d’induire une réaction ou une réponse immunitaire. En particulier, une protéine est considérée comme immunogène envers HCV et/ou HBV, si elle induit respectivement après immunisation une réponse humorale anti-E1, anti-E2 et/ou anti-S, détectée par exemple selon un protocole décrit :
# en ce qui concerne le virus HBV (Huzly D, Schenk T, Jilg W, Neumann-Haefelin D.Comparison of nine commercially available assays for quantification of antibody response to hepatitis B virus surface antigen. J Clin Microbiol. 2008 Apr, 46(4):1298-306) ; ou
# en ce qui concerne le virus HCV (Hamed MR, Tarr AW, McClure CP, Ball JK, Hickling TP, Irving WL.Association of antibodies to hepatitis C virus glycoproteins 1 and 2 (anti-E1E2) with HCV disease. J Viral Hepat. 2008 May, 15(5):339-45).
Par « protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée», on entend toute protéine comprenant au moins la protéine S délétée de son domaine transmembranaire situé à son extrémité N-terminale d’un isolat du virus HBV (SHBV délétée), et la quasi-intégralité d’une protéine d’enveloppe E1 d’un isolat du virus HCV de génotype 4a (E1HCV 4a), dont le domaine transmembranaire se substitue à celui délété en N-terminal de la protéine S du virus HBV. Par « protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée», on entend toute protéine comprenant au moins la protéine S délétée de son domaine transmembranaire situé à son extrémité N-terminale d’un isolat du virus HBV (SHBV délétée), et la quasi-intégralité d’une protéine d’enveloppe E2 d’un isolat du virus HCV de génotype 4a (E2HCV 4a), dont le domaine transmembranaire se substitue à celui délété en N-terminal de la protéine S du virus HBV. Par « protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée», on entend toute protéine comprenant au moins la protéine S délétée de son domaine transmembranaire situé à son extrémité N-terminale d’un isolat du virus HBV (SHBV délétée), et la quasi-intégralité d’une protéine d’enveloppe E2 d’un isolat du virus HCV de génotype 1a (E2HCV 1a), dont le domaine transmembranaire se substitue à celui délété en N-terminal de la protéine S du virus HBV. Par « protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée», on entend toute protéine comprenant au moins la protéine S délétée de son domaine transmembranaire situé à son extrémité N-terminale d’un isolat du virus HBV (SHBV délétée), et la quasi-intégralité d’une protéine d’enveloppe E2 d’un isolat du virus HCV de génotype 3a (E2HCV 3a), dont le domaine transmembranaire se substitue à celui délété en N-terminal de la protéine S du virus HBV. Par « protéine fusion E1HCV 1a– SHBV délétée», on entend toute protéine comprenant au moins la protéine S délétée de son domaine transmembranaire situé à son extrémité N-terminale d’un isolat du virus HBV (SHBV délétée), et la quasi-intégralité d’une protéine d’enveloppe E1 d’un isolat du virus HCV de génotype 1a (E1HCV 1a), dont le domaine transmembranaire se substitue à celui délété en N-terminal de la protéine S du virus HBV. Par « protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétée», on entend toute protéine comprenant au moins la protéine S délétée de son domaine transmembranaire situé à son extrémité N-terminale d’un isolat du virus HBV (SHBV délétée), et la quasi-intégralité d’une protéine d’enveloppe E1 d’un isolat du virus HCV de génotype 3a (E1HCV 3a), dont le domaine transmembranaire se substitue à celui délété en N-terminal de la protéine S du virus HBV.
Avantageusement, un peptide de liaison relie le premier et le second peptide constituant lesdites protéines de fusion susmentionnées, ledit peptide de liaison étant constitué d’un acide aminé, ou de deux acides aminés, ou de trois acides aminés, ou de quatre acides aminés, ou de cinq acides aminés ; sous réserve que lesdites protéines de fusion immunogènes conservent la capacité à s’assembler en particules d’enveloppe sous-virales, en présence de la protéine S sauvage, et les propriétés immunogènes vis-à-vis du virus HCV, ou du virus HBV, ou, des virus HCV et HBV soient conservées.
Par « protéine S est délétée de son domaine transmembranaire situé à son extrémité N-terminale » ou par « protéine S délétée en N-terminal » ou par « SHBV délétée», on entend :
# la protéine S susdéfinie, délétée de la région comprise de l’acide aminé en position 1 à celui en position 19, ou en position 1 à celui en position 20, ou en position 1 à celui en position 21, et préférentiellement en position 1 à celui en position 22 de la protéine S d’un isolat du virus HBV ; ou
# la protéine S susmentionnée présentant un pourcentage d’identité d’au moins 91%, notamment d’au moins 93%, particulièrement d’au moins 95%, et plus particulièrement d’au moins 97%, avec ladite région de la protéine S délétée ; ou
# le « variant naturel » issu d’un isolat du virus HBV ; ou
# le « variant synthétique » de la protéine S délétée susmentionnée.
En particulier, par « SHBV délétée», on entend la protéine de séquence SEQ ID NO : 4, laquelle est codée par la séquence d’acides nucléiques SEQ ID NO : 3.
Par « capacité à former des particules d’enveloppe sous-virales », on entend l’aptitude de toute protéine, notamment la protéine S du virus HBV, particulièrement de la protéine S délétée de son domaine transmembranaire N-terminal, et plus particulièrement d’une protéine de fusion de l’invention comprenant la protéine S délétée en N-terminal, à s’assembler en présence de la protéine S sauvage ou, le cas échéant, à s’auto-assembler, en particules d’enveloppe sous-virales filamenteuses ou sphériques ; ladite capacité à former des particules d’enveloppe sous-virales pouvant au moins être mise en évidence par observation selon notamment une analyse en microscopie électronique connu de l’Homme du métier (Demande internationale No. PCT/FR2009/051142 déposée le 16 juin 2009,cf.exemples 1 et 2).
Par « assemblage », « s’assembler », on entend la capacité d’une protéine à former des particules d’enveloppe sous-virales en s’associant à la protéine S sauvage (SHBV). Par « auto-assemblage », on entend la capacité d’une protéine à former par elle-même des particules d’enveloppe sous-virales.
Par « isolat du virus HCV », on entend tout isolat membre de la famille desFlaviviridaeet appartenant au genreHepaciviruset constitué d’une polyprotéine de plus de 3 000 acides aminés du virus HCV (Choo, Q. L., Kuo, G., Weiner, A. J., Overby, L. R., Bradley, D. W., and Houghton, M (1989).Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis genome. Science 244(4902), 359-362 ; Chooet al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1991) v88:2451-2455 ; Hanet al.Characterization of the terminal regions of hepatitis C viral RNA: identification of conserved sequences in the 5’ untranslated region and poly(A) tails at the 3’ end. Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1991) 88:1711-1715), ou tout isolat classifié parl’International Committee for the Taxonomy of Viruses(ICTV) comme étant apparenté au HCV.
Par « génotype du virus HCV », on entend une identification de l’isolat par un classement dans l’un des 7 génotypes majeurs du virus HCV (numérotés de 1 à 7, eux même subdivisés en sous-types). Cette classification est basée sur la conservation nucléotidique entre les différentes souches. Les isolats partageant 65 à 70% d’identité de séquence appartiennent à des génotypes distincts, alors que des isolats possédant une conservation nucléotidique de 75 à 85% sont classés dans des sous-types différents au sein d’un même génotype (Simmonds, P., P. Becher, M. S. Collett, E. A. Gould, F. X. Heinz, G. Meyers, T. Monath, A. Pletnev, C. M. Rice, K. Stiasny, H. J. Thiel, A. Weiner, and J. Bukh. 2012. Family Flaviviridae, p. 1003-1020. In M. Q. K. Andrew, L. Elliot, J. A. Michael, and E. B. Carstens (ed.), Virus Taxonomy. Elsevier, San Diego).
Par « protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C », on entend, la quasi-intégralité de l’une des deux protéines E1 et E2, constituées de leur ectodomaine et de leur domaine transmembranaire et correspondant :
# aux fragments peptidiques de la polyprotéine du virus HCV, et notamment de l’isolat HCV-1a du virus HCV (SEQ ID NO : 51), localisés dans les régions comprises :
- de l’acide aminé en position 192 à celui en position 383, ou notamment de l’acide aminé en position 192 à celui en position 380, en ce qui concerne la protéine E1, et
- de l’acide aminé en position 384 à celui en position 746, ou notamment de l’acide aminé en position 384 à celui en position 743, en ce qui concerne la protéine E2 ; ou
# aux fragments peptidiques de la polyprotéine du virus HCV, et notamment de l’isolat HCV-3a du virus HCV (SEQ ID NO : 52), localisés dans les régions comprises :
- de l’acide aminé en position 192 à celui en position 383, ou notamment de l’acide aminé en position 192 à celui en position 380, en ce qui concerne la protéine E1, et
- de l’acide aminé en position 384 à celui en position 746, ou notamment de l’acide aminé en position 384 à celui en position 743, en ce qui concerne la protéine E2 ; ou
# aux fragments peptidiques de la polyprotéine du virus HCV, et notamment de l’isolat HCV-4a du virus HCV (SEQ ID NO : 53), localisés dans les régions comprises :
- de l’acide aminé en position 192 à celui en position 383, ou notamment de l’acide aminé en position 192 à celui en position 380, en ce qui concerne la protéine E1, et
- de l’acide aminé en position 384 à celui en position 746, ou notamment de l’acide aminé en position 384 à celui en position 743, en ce qui concerne la protéine E2 ; ou
# aux fragments présentant un pourcentage d’identité d’au moins 75%, notamment d’au moins 80%, particulièrement d’au moins 85%, et plus particulièrement d’au moins 90%, avec lesdites régions E1 susmentionnées ; ou
# aux fragments présentant un pourcentage d’identité d’au moins 78%, notamment d’au moins 80%, particulièrement d’au moins 85%, et plus particulièrement d’au moins 90%, avec lesdites régions E2 susmentionnées ; ou
# à des variants naturels ou à des variants synthétiques de la polyprotéine desdits isolats du virus HCV de génotype 1a, 3a ou 4a.
Par « ectodomaine des protéines d’enveloppe du virus de l’hépatite C », on entend :
# les parties de fragments peptidiques de E1 ou E2, issues de la polyprotéine du virus HCV, et notamment de l’isolat HCV-1a du virus HCV (SEQ ID NO : 51), localisés dans les régions comprises :
- de l’acide aminé en position 192 à celui en position 352, ou notamment de l’acide aminé en position 192 à celui en position 352, en ce qui concerne l’ectodomaine de la protéine E1, et
- de l’acide aminé en position 384 à celui en position 717, ou notamment de l’acide aminé en position 384 à celui en position 717, en ce qui concerne l’ectodomaine de la protéine E2 ; ou
# les parties de fragments peptidiques de E1 ou E2, issues de la polyprotéine du virus HCV, et notamment de l’isolat HCV-3a du virus HCV (SEQ ID NO : 52), localisés dans les régions comprises :
- de l’acide aminé en position 192 à celui en position 352, ou notamment de l’acide aminé en position 192 à celui en position 352, en ce qui concerne l’ectodomaine de la protéine E1, et
- de l’acide aminé en position 384 à celui en position 717, ou notamment de l’acide aminé en position 384 à celui en position 717, en ce qui concerne l’ectodomaine de la protéine E2 ; ou
# les parties de fragments peptidiques de E1 ou E2, issues de la polyprotéine du virus HCV, et notamment de l’isolat HCV-4a du virus HCV (SEQ ID NO : 53), localisés dans les régions comprises :
- de l’acide aminé en position 192 à celui en position 352, ou notamment de l’acide aminé en position 192 à celui en position 352, en ce qui concerne l’ectodomaine de la protéine E1, et
- de l’acide aminé en position 384 à celui en position 717, ou notamment de l’acide aminé en position 384 à celui en position 717, en ce qui concerne l’ectodomaine de la protéine E2 ; ou
# les fragments présentant un pourcentage d’identité d’au moins 75%, notamment d’au moins 80%, particulièrement d’au moins 85%, et plus particulièrement d’au moins 90%, avec lesdites régions E1 susmentionnées ; ou
# les fragments présentant un pourcentage d’identité d’au moins 78%, notamment d’au moins 80%, particulièrement d’au moins 85%, et plus particulièrement d’au moins 90%, avec lesdites régions E2 susmentionnées ; ou
# à des variants naturels ou à des variants synthétiques de la polyprotéine d’un isolat du virus HCV de génotype 1a, 3a ou 4a.
Par « domaines transmembranaires des protéines d’enveloppe du virus de l’hépatite C », on entend :
# les parties de fragments peptidiques de E1 ou E2, issues de la polyprotéine du virus HCV, et notamment de l’isolat HCV-1a du virus HCV (SEQ ID NO : 51), localisés dans les régions comprises :
- de l’acide aminé en position 353 à celui en position 383, et avantageusement de l’acide aminé en position 353 à celui en position 380, en ce qui concerne le domaine transmembranaire de la protéine E1, et
- de l’acide aminé en position 718 à celui en position 746 et avantageusement de l’acide aminé en position 718 à celui en position 743, en ce qui concerne le domaine transmembranaire de la protéine E2 ; ou
# les parties de fragments peptidiques de E1 ou E2, issues de la polyprotéine du virus HCV, et notamment de l’isolat HCV-3a du virus HCV (SEQ ID NO : 52), localisés dans les régions comprises :
- de l’acide aminé en position 353 à celui en position 383, et avantageusement de l’acide aminé en position 353 à celui en position 380, en ce qui concerne le domaine transmembranaire de la protéine E1, et
- de l’acide aminé en position 718 à celui en position 746 et avantageusement de l’acide aminé en position 718 à celui en position 743, en ce qui concerne le domaine transmembranaire de la protéine E2 ; ou
# les parties de fragments peptidiques de E1 ou E2, issues de la polyprotéine du virus HCV, et notamment de l’isolat HCV-4a du virus HCV (SEQ ID NO : 53), localisés dans les régions comprises :
- de l’acide aminé en position 353 à celui en position 383, et avantageusement de l’acide aminé en position 353 à celui en position 380, en ce qui concerne le domaine transmembranaire de la protéine E1, et
- de l’acide aminé en position 718 à celui en position 746 et avantageusement de l’acide aminé en position 718 à celui en position 743, en ce qui concerne le domaine transmembranaire de la protéine E2 ; ou
# les fragments présentant un pourcentage d’identité d’au moins 75%, notamment d’au moins 80%, particulièrement d’au moins 85%, et plus particulièrement d’au moins 90%, avec lesdites régions E1 susmentionnées ; ou
# les fragments présentant un pourcentage d’identité d’au moins 78%, notamment d’au moins 80%, particulièrement d’au moins 85%, et plus particulièrement d’au moins 90%, avec lesdites régions E2 susmentionnées ; ou
# les variants naturels ou variants synthétiques de la polyprotéine d’un isolat du virus HCV de génotype 1a, 3a ou 4a.
Avantageusement, il convient de noter que les domaines transmembranaires de E1 et/ou de E2, et constituant une partie de la protéine de fusion, sont délétés d’au moins l’un des trois derniers acides aminés, et notamment des trois derniers acides aminés, situés en position C-terminale, de sorte que lesdits domaines transmembranaires délétés de E1 et/ou de E2 présentent un pourcentage d’identité avec les domaines transmembranaires de E1 et/ou E2 sauvages, d’au moins 91%, en ce qui concerne E1 et d’au moins 90% en ce qui concerne E2. Ladite délétion d’au moins l’un des trois acides aminés, et notamment des trois derniers acides aminés, en position C-terminale présente l’avantage d’inactiver le site de clivage des peptidases qui est nécessaire à la maturation de la polyprotéine du HCV, mais qui est indésirable dans le cadre des constructions chimériques de la présente invention. De plus, il convient de noter qu’aux fins de l’invention, les protéines E1HCV 4a, E2HCV 4a, E2HCV 1a, E2HCV 3a, E1HCV 1aet E1HCV 3ade référence sont respectivement les protéines de séquence SEQ ID NOs : 6, 8, 10, 12, 14 et 16, lesquelles sont respectivement codées par les séquences d’acides nucléiques SEQ ID NOs : 5, 7, 9, 11, 13 et 15.
Par « pourcentage d’identité », on entend le pourcentage déterminé par comparaison directe de deux séquences de molécules polypeptidiques, en déterminant le nombre de résidus d’acides aminés identiques entre les deux séquences, puis en le divisant par le nombre de résidus d’acides aminées de la séquence la plus longue des deux, et en multipliant le résultat par 100. Par « au moins 78% », on entend également au moins 80%, au moins 82%, au moins 84%, au moins 85%, au moins 86%, au moins 88%, au moins 90%, au moins 91%, au moins 92%, au moins 93%, au moins 94%, au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98% ou au moins 99%. A cet égard, il convient de noter que cette définition s’applique à tous les modes de réalisation de l’invention.
Par « variant naturel », il est fait référence à toute variabilité, tout polymorphisme, toute diversité, d’une séquence d’ADN, d’un allèle, ou d’une séquence de protéine, entre isolats d’une même espèce ou d’une même population. On détermine le « pourcentage de variabilité naturelle » par comparaison directe de deux molécules polypeptidiques, ou polynucléotidiques, dérivée d’une molécule de référence sauvage et dotées de propriétés biologiques d’intérêt, telles que des propriétés immunogènes et/ou la capacité à former des particules d’enveloppe sous-virales. Il se quantifie en déterminant le nombre exact de résidus d’acides aminés, ou d’acides nucléiques, identiques entre les deux séquences, puis en les divisant par le nombre de résidus d’acides aminés, ou d’acides nucléiques, de la séquence la plus longue des deux, et en multipliant le résultat par 100. Ledit pourcentage de variabilité entre deux séquences est particulièrement versatile car il dépend notamment du virus considéré, du génotype considéré, du fragment de séquence considéré – la région de l’ectodomaine du virus HCV étant par exemple plus variable que la région du domaine transmembranaire –,etc. Ainsi, le pourcentage de variabilité des protéines E1 et E2 du HCV, est de 88% en nucléotide, et de 90% en acides aminés, entre souches d’un même génotype. Mais elle tombe à 55% en nucléotide, et à 59% en acides aminés, entre souches de différents génotypes. De plus, le virus HBV étant un virus à ADN, il est beaucoup moins variable que le virus HCV (Zhang M, Gaschen B, Blay W, Foley B, Haigwood N, Kuiken C, Korber B.Tracking global patterns of N-linked glycosylation site variation in highly variable viral glycoproteins: HIV, SIV, and HCV envelopes and influenza hemagglutinin. Glycobiology. 2004 Dec. 14(12):1229-46).
Par « variant synthétique », il est fait référence à toute molécule polypeptidique, ou polynucléotidique selon l’invention, ou tout fragment de molécule polypeptidique, ou polynucléotidique décrit ici, dérivée par recombinaison d’une molécule sauvage de référence, soit par adition, délétion, substitution, à ladite molécule sauvage de référence, sous réserve qu’elle conserve les propriétés biologiques d’intérêt, telles que des propriétés immunogènes et/ou la capacité à former des particules d’enveloppe sous-virales. On détermine le « pourcentage de variabilité synthétique » par comparaison directe de ladite molécule dérivée à ladite molécule sauvage de référence, et en déterminant le nombre exact de résidus d’acides aminés, ou d’acides nucléiques, identiques entre les deux séquences, au regard de leur position et de leur nature, puis en les divisant par le nombre de résidus d’acides aminés, ou d’acides nucléiques, de la séquence la plus longue des deux, et en multipliant le résultat par 100.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, dans laquelle :
# ladite protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétéeest choisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 18, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 18 ;
# ladite protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétéeest choisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 20, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 20 ;
# ladite protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétéeest choisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 22, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 22 ;
# ladite protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétéeest choisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 24, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 24 ;
# ladite protéine fusion E1HCV 1a– SHBV délétéeest choisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 26, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 26 ; et
# ladite protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétéeest choisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 28, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 28.
En particulier, l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, dans laquelle :
# ladite protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétéeest de séquence SEQ ID NO : 18, laquelle peut, par exemple, être obtenue à l’aide du plasmide pHR’pac-G4a E1-S de séquence SEQ ID NO : 32, lequel comporte le gènepacde resistance à la puromycine et dans lequel a été cloné la séquence codant la protéine E1HCV 4a– SHBV délétéeau niveau du site de restriction enzymatique unique BamHI GGATCC (SEQ ID NO : 38) localisé dans le site de multi-clonage du vecteur ;
# ladite protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétéeest de séquence SEQ ID NO : 20, laquelle peut, par exemple, être obtenue à l’aide du plasmide pHR’pac-G4a E2-S de séquence SEQ ID NO : 33, lequel comporte le gènepacde resistance à la puromycine et dans lequel a été cloné la séquence codant la protéine E2HCV 4a– SHBV délétéeau niveau du site de restriction enzymatique unique BamHI GGATCC (SEQ ID NO : 38) localisé dans le site de multi-clonage du vecteur ;
# ladite protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétéeest de séquence SEQ ID NO : 22, laquelle peut, par exemple, être obtenue à l’aide du plasmide pHR’pac-G1a E2-S de séquence SEQ ID NO : 34, lequel comporte le gènepacde resistance à la puromycine et dans lequel a été cloné la séquence codant la protéine E2HCV 1a– SHBV délétéeau niveau du site de restriction enzymatique unique BamHI GGATCC (SEQ ID NO : 38) localisé dans le site de multi-clonage du vecteur ;
# ladite protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétéeest de séquence SEQ ID NO : 24, laquelle peut, par exemple, être obtenue à l’aide du plasmide pHR’pac-G3a E2-S de séquence SEQ ID NO : 35, lequel comporte le gènepacde resistance à la puromycine et dans lequel a été cloné la séquence codant la protéine E2HCV 3a– SHBV délétéeau niveau du site de restriction enzymatique unique BamHI GGATCC (SEQ ID NO : 38) localisé dans le site de multi-clonage du vecteur ;
# ladite protéine fusion E1HCV 1a– SHBV délétéeest de séquence SEQ ID NO : 26, laquelle peut, par exemple, être obtenue à l’aide du plasmide pHR’pac-G1a E1-S de séquence SEQ ID NO : 36, lequel comporte le gènepacde resistance à la puromycine et dans lequel a été cloné la séquence codant la protéine E1HCV 1a– SHBV délétéeau niveau du site de restriction enzymatique unique BamHI GGATCC (SEQ ID NO : 38) localisé dans le site de multi-clonage du vecteur ; et
# ladite protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétéeest de séquence SEQ ID NO : 28, laquelle peut, par exemple, être obtenue à l’aide du plasmide pHR’pac-G3a E1-S de séquence SEQ ID NO : 37, lequel comporte le gènepacde resistance à la puromycine et dans lequel a été cloné la séquence codant la protéine E1HCV 3a– SHBV délétéeau niveau du site de restriction enzymatique unique BamHI GGATCC (SEQ ID NO : 38) localisé dans le site de multi-clonage du vecteur.
En particulier, l’invention a également pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, dans laquelle :
# ladite protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétéeest choisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 18, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 18 ;
# ladite protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétéeest choisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 20, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 20 ;
# ladite protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétéeest choisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 22, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 22 ; et
# ladite protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétéeest choisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 24, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 24.
En particulier, l’invention a également pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, dans laquelle :
# ladite protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétéeest de séquence SEQ ID NO : 18 ;
# ladite protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétéeest de séquence SEQ ID NO : 20 ;
# ladite protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétéeest de séquence SEQ ID NO : 22 ; et
# ladite protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétéeest de séquence SEQ ID NO : 24.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition immunogène comprenant un mélange de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable telle que décrite ci-dessus,
dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence d’au moins deux particules choisies parmi les particules caractérisées par la présence :
- d’une protéine native SHBVchoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 2, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 2 et d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétéechoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 18, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 18 ; ou
- d’une protéine native SHBVchoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 2, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 2 et d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétéechoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 20, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 20 ; ou
- d’une protéine native SHBVchoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 2, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 2 et d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétéechoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 22, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 22 ; ou
- d’une protéine native SHBVchoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 2, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 2 et d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétéechoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 24, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 24 ; ou
- d’une protéine native SHBVchoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 2, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 2 et d’une protéine fusion E1HCV 1a– SHBV délétéechoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 26, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 26 ; ou
- d’une protéine native SHBVchoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 2, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 2 et d’une protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétéechoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 28, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 28.
de préférence, l’une au moins desdites au moins deux particules présentant soit une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée(A) soit une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée(B).
En particulier, l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, dans laquelle ledit mélange est caractérisé :
# par la présence des particules caractérisées par la présence :
- d’une protéine native SHBVde séquence SEQ ID NO : 2 et d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 18 ; et
- d’une protéine native SHBVde séquence SEQ ID NO : 2 et d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 20,
ou par la présence :
# des particules caractérisées par la présence :
B. d’une protéine native SHBVde séquence SEQ ID NO : 2 et d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 20 ;
C. d’une protéine native SHBVde séquence SEQ ID NO : 2 et d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 22 ; et
D. d’une protéine native SHBVde séquence SEQ ID NO : 2 et d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 24.
De manière intéressante, lesdites protéines de fusion immunogènes susmentionnées, en particulier celles de séquences SEQ ID NOs : 18 (E1HCV 4a), 20 (E2HCV 4a), 22 (E2HCV 1a), 24 (E2HCV 3a), 26 (E1HCV 1a) et 28 (E1HCV 3a), comprennent à leur extrémité N-terminale un peptide d’initiation de transfert (PIT) d’un isolat du virus de l’hépatite C (e.g.de génotype 1a, 3a ou 4a). Par « peptide d’initiation de transfert » d’une protéine E1 ou E2 (respectivement PIT1 et PIT2) ou d’une protéine de fusion selon l’invention, on entend :
# le fragment peptidique de la polyprotéine du virus HCV, et notamment de l’isolat HCV-1a (SEQ ID NO : 51), localisé dans la région comprise :
- de l’acide aminé en position 166 à celui en position 191 en ce qui concerne la protéine E1 (PIT11ade séquence SEQ ID NO : 48) ; et
- de l’acide aminé en position 366 à celui en position 383 en ce qui concerne la protéine E2 (PIT21ade séquence SEQ ID NO : 44) ; ou
# le fragment peptidique de la polyprotéine du virus HCV, et notamment de l’isolat HCV-3a (SEQ ID NO : 52), localisé dans la région comprise :
- de l’acide aminé en position 166 à celui en position 191 en ce qui concerne la protéine E1 (PIT13ade séquence SEQ ID NO : 50) ; et
- de l’acide aminé en position 366 à celui en position 383 en ce qui concerne la protéine E2 (PIT23ade séquence SEQ ID NO : 46) ; ou
# le fragment peptidique de la polyprotéine du virus HCV, et notamment de l’isolat HCV-4a (SEQ ID NO : 53), localisé dans la région comprise :
- de l’acide aminé en position 166 à celui en position 191 en ce qui concerne la protéine E1 (PIT14ade séquence SEQ ID NO : 40) ; et
- de l’acide aminé en position 366 à celui en position 383 en ce qui concerne la protéine E2 (PIT24ade séquence SEQ ID NO : 42) ; ou
# le variant naturel issu d’un isolat du virus HCV, ou le variant synthétique dudit fragment peptidique susmentionné ; ou
# tout fragment peptidique greffé en N-terminal dudit second peptide,
sous réserve que ledit fragment peptidique, quand il constitue une partie de la protéine de fusion, conserve la capacité à adresser, après traduction, ladite protéine de fusion au réticulum endoplasmique de sorte qu’elle soit correctement glycosylée et que sa conformation tridimensionnelle, et/ou que ses qualités antigéniques, soient au mieux préservées au regard des protéines sauvages.
Avantageusement, ces peptides d’initiation de transfert peuvent être interchangés (e.g.PIT14aen N-terminale de la protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétéepeut être remplacé par PIT11a, PIT13a, PIT21a,etc.; PIT24aen N-terminale de la protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétéepeut être remplacé par PIT11a, PIT13a, PIT21a,etc.;ETC.). Avantageusement, ces peptides d’initiation de transfert peuvent être remplacés par d’autres PIT provenante.g.d’isolat du virus HCV de génotype 2, 5, 6 ou 7, voire remplacés par des peptides d’origine virale, bactérienne ou eucaryote sous réserve que l’ensemble de ces peptides, quand il constitue une partie de la protéine de fusion, conserve la capacité à adresser, après traduction, ladite protéine de fusion au réticulum endoplasmique de sorte qu’elle soit correctement glycosylée et que sa conformation tridimensionnelle, et/ou que ses qualités antigéniques, soient au mieux préservées au regard des protéines sauvages.
A cet égard, c’est en partie en raison de cette flexibilité à l’extrémité N-terminale des composantes E1 ou E2 côté N-terminal des protéines fusion de l’Invention que dans son aspect le plus général, lesdites composantes E1 ou E2 côté N-terminal desdites protéines fusion de l’invention sont définies comme étant :
# la séquence d’acides aminés du domaine transmembranaire et de l’ectodomaine d’une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C (HCV), laquelle n’inclut pas le peptide d’initiation de transfert (PIT) ; ou
# la séquence d’acides aminés présentant un pourcentage d’identité d’au moins 78% avec ladite séquence d’acides aminés du domaine transmembranaire et de l’ectodomaine d’une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C, sous réserve que ladite séquence d’acides aminés conserve la capacité à former des particules d’enveloppe sous-virales non infectieuses, immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite C ; ou
# la séquence d’acides aminés d’un variant naturel issue d’un isolat du virus HCV, ou d’un variant synthétique dérivée de ladite séquence d’acides aminés du domaine transmembranaire et de l’ectodomaine d’une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C, sous réserve que ladite séquence d’acides aminés conserve les propriétés immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite C,
ladite protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C étant choisie parmi la protéine E1 du virus HCV de génotype 4a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 4a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 1a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 3a, la protéine E1 du virus HCV de génotype 1a et la protéine E1 du virus HCV de génotype 3a. C’est également en raison de cette flexibilité à l’extrémité N-terminale que les protéines fusion de l’Invention sont définies comme étant :
# une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétéechoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 18, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 18 ;
# une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétéechoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 20, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 20 ;
# une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétéechoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 22, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 22 ;
# une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétéechoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 24, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 24 ;
# une protéine fusion E1HCV 1a– SHBV délétéechoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 26, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 26 ; et
# une protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétéechoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 28, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 28.
de sorte à inclure préférentiellement, par le biais des pourcentage d’identité, cette flexibilité au niveau du fragment peptidique PIT à l’extrémité N-terminale desdites protéines fusion. En effet et par exemple, si au sein de la protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétéeest utilisé non pas le peptide PIT14a(SEQ ID NO : 40) mais le peptide PIT24a(SEQ ID NO : 42), la séquence résultante de 412 acides aminés a 93,81% ((394/420) x 100) d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 18 de 420 acides aminés, le nombre de résidus d’acides aminés identiques entre les deux séquences étant de 394.Etc.
Selon un autre mode de réalisation, on comprend donc que l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, dans laquelle lesdites protéines fusion comprennent à l’extrémité N-terminale dudit second peptide E1 ou E2 (e.g.E1HCV 4a, E2HCV 4a, E2HCV 1a, E2HCV 3a, E1HCV 1aou E1HCV 3a), un troisième peptide constitué de la séquence d’acide aminés d’un peptide d’initiation de transfert (PIT) d’un isolat du virus de l’hépatite C (e.g.de génotype 1a, 3a ou 4a). En particulier, ledit troisième peptide est un peptide choisi parmi : PIT14ade séquence SEQ ID NO : 40, PIT24ade séquence SEQ ID NO : 42, PIT21ade séquence SEQ ID NO : 44, PIT23ade séquence SEQ ID NO : 46, PIT11ade séquence SEQ ID NO : 48, PIT13ade séquence SEQ ID NO : 50 et les séquences ayant au moins 80% d’identité avec les séquences SEQ ID NOs : 40, 42, 44, 46, 48 et 50.
Alternativement, on comprend également qu’un autre aspect général de l’invention concerne une composition immunogène comprenant un mélange de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable,
dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence d’au moins deux particules choisies parmi les particules caractérisées par la présence :
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion PIT – E1HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion PIT – E2HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion PIT – E2HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion PIT – E2HCV 3a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion PIT – E1HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion PIT – E1HCV 3a– SHBV délétée,
ladite protéine native SHBVétant la protéine S sauvage de l’antigène de surface d’un isolat du virus de l’hépatite B (HBV), et
lesdites protéines fusion PIT – E1HCV 4a– SHBV délétée, PIT – E2HCV 4a– SHBV délétée, PIT – E2HCV 1a– SHBV délétée, PIT – E2HCV 3a– SHBV délétée, PIT – E1HCV 1a– SHBV délétéeet PIT – E1HCV 3a– SHBV délétéeétant des protéines de fusion immunogènes comprenant de l’extrémité N-terminale à l’extrémité C-terminale au moins les trois peptides suivants :
# unpremier peptide, dit peptide d’initiation de transfert (PIT), constitué :
- d’une séquence choisie parmi : PIT14ade séquence SEQ ID NO : 40, PIT24ade séquence SEQ ID NO : 42, PIT21ade séquence SEQ ID NO : 44, PIT23ade séquence SEQ ID NO : 46, PIT11ade séquence SEQ ID NO : 48, PIT13ade séquence SEQ ID NO : 50 et les séquences ayant au moins 80% d’identité avec les séquences SEQ ID NOs : 40, 42, 44, 46, 48 et 50 ; ou
- d’un fragment peptidique PIT provenant d’isolat du virus HCV de génotype 2, 5, 6 ou 7 ; ou
- d’un fragment peptidique d’origine virale, bactérienne ou eucaryote semblable (équivalent) à un peptide d’initiation de transfert sous réserve que l’ensemble de ces peptides, quand il constitue une partie de la protéine de fusion, conserve la capacité à adresser, après traduction, ladite protéine de fusion au réticulum endoplasmique de sorte qu’elle soit correctement glycosylée et que sa conformation tridimensionnelle, et/ou que ses qualités antigéniques, soient au mieux préservées au regard des protéines sauvages,
# undeuxième peptideconstitué :
- de la séquence d’acides aminés du domaine transmembranaire et de l’ectodomaine d’une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C (HCV) ; ou
- d’une séquence d’acides aminés présentant un pourcentage d’identité d’au moins 78%, notamment d’au moins 80%, particulièrement d’au moins 85%, et plus particulièrement d’au moins 90%, avec ladite séquence d’acides aminés du domaine transmembranaire et de l’ectodomaine d’une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C, sous réserve que ladite séquence d’acides aminés conserve la capacité à former des particules d’enveloppe sous-virales non infectieuses, immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite C ; ou
- de la séquence d’acides aminés d’un variant naturel issue d’un isolat du virus HCV, ou d’un variant synthétique dérivée de ladite séquence d’acides aminés du domaine transmembranaire et de l’ectodomaine d’une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C, sous réserve que ladite séquence d’acides aminés conserve les propriétés immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite C,
ladite protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C étant choisie parmi la protéine E1 du virus HCV de génotype 4a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 4a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 1a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 3a, la protéine E1 du virus HCV de génotype 1a et la protéine E1 du virus HCV de génotype 3a, et
# untroisième peptideconstitué :
- de la séquence d’acides aminés de la protéine S d’un isolat du virus humain de l’hépatite B, laquelle protéine S est délétée de son domaine transmembranaire situé à son extrémité N-terminale ; ou
- d’une séquence d’acides aminés présentant un pourcentage d’identité d’au moins 91%, notamment d’au moins 93%, particulièrement d’au moins 95%, et plus particulièrement d’au moins 97%, avec ladite séquence d’acides aminés de la protéine S délétée en N-terminal, sous réserve que ladite séquence d’acides aminés conserve la capacité à former des particules d’enveloppe sous-virales non infectieuses, immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite B ; ou
- de la séquence d’acides aminés d’un variant naturel issue d’un autre isolat du virus HBV ou d’un variant synthétique dérivée de ladite séquence d’acides aminés de la protéine S délétée en N-terminal, sous réserve que ladite séquence d’acides aminés conserve la capacité à former des particules d’enveloppe sous-virales non infectieuses, immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite B.
Selon cet autre mode de réalisation, l’invention a également pour objet la composition immunogène comprenant un mélange de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable telle que décrite ci-dessus,
dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence d’au moins deux particules choisies parmi les particules caractérisées par la présence :
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion PIT – E1HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion PIT – E2HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion PIT – E2HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion PIT – E2HCV 3a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion PIT – E1HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion PIT – E1HCV 3a– SHBV délétée,
l’une au moins desdites au moins deux particules présentant soit une protéine fusion PIT – E1HCV 4a– SHBV délétée(A) soit une protéine fusion PIT – E2HCV 4a– SHBV délétée(B).
Selon cet autre mode de réalisation, l’invention a également pour objet la composition immunogène comprenant un mélange de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable telle que décrite ci-dessus,
dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence d’au moins deux particules choisies parmi les particules caractérisées par la présence :
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion PIT – E1HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion PIT – E2HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion PIT – E2HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion PIT – E2HCV 3a– SHBV délétée,
l’une au moins desdites au moins deux particules présentant soit une protéine fusion PIT – E1HCV 4a– SHBV délétée(A) soit une protéine fusion PIT – E2HCV 4a– SHBV délétée(B).
Selon cet autre mode de réalisation, l’invention a également pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus,
ledit premier peptide, dit peptide d’initiation de transfert (PIT), desdites protéines fusion étant un peptide choisi parmi : PIT14ade séquence SEQ ID NO : 40, PIT24ade séquence SEQ ID NO : 42, PIT21ade séquence SEQ ID NO : 44, PIT23ade séquence SEQ ID NO : 46, PIT11ade séquence SEQ ID NO : 48, PIT13ade séquence SEQ ID NO : 50 et les séquences ayant au moins 80% d’identité avec les séquences SEQ ID NOs : 40, 42, 44, 46, 48 et 50.
Selon ces autres modes de réalisation, il convient de noter que lesdites protéines fusion sont en particulier :
# la protéine fusion PIT14a– E1HCV 4a– SHBV délétéechoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 18, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 18, et est de préférence la séquence SEQ ID NO : 18 ;
# la protéine fusion PIT24a– E2HCV 4a– SHBV délétéechoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 20, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 20 et est de préférence la séquence SEQ ID NO : 20 ;
# la protéine fusion PIT21a– E2HCV 1a– SHBV délétéechoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 22, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 22 et est de préférence la séquence SEQ ID NO : 22 ;
# la protéine fusion PIT23a– E2HCV 3a– SHBV délétéechoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 24, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 24 et est de préférence la séquence SEQ ID NO : 24 ;
# la protéine fusion PIT11a– E1HCV 1a– SHBV délétéechoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 26, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 26 et est de préférence la séquence SEQ ID NO : 26 ; et
# la protéine fusion PIT13a– E1HCV 3a– SHBV délétéechoisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 28, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 28 et est de préférence la séquence SEQ ID NO : 28.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, ladite composition comprenant de 5 µg à 50 µg, de préférence de 10 µg à 20 µg, dudit mélange de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses.
Par « de 5 µg à 50 µg dudit mélange de particules d’enveloppe sous-virales », on entend que la somme des différentes doses de particules d’enveloppe sous-virales constituant le mélange est comprise de 5 µg à 50 µg. Cette dose de 5 µg à 50 µg peut être définie comme la dose unitaire. En particulier, celle-ci, qu’elle soit une dose unitaire ou non, peut être comprise de 10 µg à 50 µg, de 15 g à 50 µg, de 20 µg à 50 µg, de 25 µg à 50 µg, de 30 µg à 50 µg, de 35 µg à 50 µg, de 40 µg à 50 µg, de 45 µg à 50 µg, de 5 µg à 10 µg, de 5 µg à 15 µg, de 5 µg à 20 µg, de 5 µg à 25 µg, de 5 µg à 30 µg, de 5 µg à 35 µg, de 5 µg à 40 µg, de 5 µg à 45 µg, de 10 µg à 20 µg, de 20 µg à 30 µg, de 30 µg à 40 µg, de 40 µg à 50 µg, ceci s’appliquant à tous les aspects ou modes de réalisation de l’invention. Elle peut également être de 5 µg, de 10 µg, de 15 µg, de 20 µg, de 25 µg, de 30 µg, de 35 µg, de 40 µg, de 45 µg ou de 50 µg, ceci s’appliquant à tous les aspects ou modes de réalisation de l’invention.
Avantageusement, le mélange peut comprendre soit une proportion/quantité égale de chaque particule d’enveloppe sous-virale, soit une proportion/quantité différente de chaque particule d’enveloppe sous-virale dont la somme des proportions/quantités est comprise de 5 µg à 50 µg. Par « quantité/proportion égale », on entend que chaque particule d’enveloppe sous-virale est à la même quantité/proportion, ceci s’appliquant à tous les aspects ou modes de réalisation de l’invention. Par exemple, pour un mélange de 30 µg, celui-ci peut comprend :
# 15 µg d’une première particule d’enveloppe sous-virale et 15 µg d’un dseconde particule d’enveloppe sous-virale ; ou
# 10 µg d’une première particule d’enveloppe sous-virale, 10 µg d’une deuxième particule d’enveloppe sous-virale et 10 µg d’une troisième particule d’enveloppe sous-virale ; ou
# 7,5 µg d’une première particule d’enveloppe sous-virale, 7,5 µg d’une deuxième particule d’enveloppe sous-virale, 7,5 µg d’une troisème particule d’enveloppe sous-virale et 7,5 µg d’une quatrième particule d’enveloppe sous-virale ; ou
# etc.
Par « quantité/proportion différente », on entend que chaque particule d’enveloppe sous-virale est à une quantité/proportion distincte des autres, ceci s’appliquant à tous les aspects ou modes de réalisation de l’invention. Par exemple, pour un mélange de 30 µg, celui-ci peut comprendre :
# 20 µg d’une première particule d’enveloppe sous-virale et 5 µg d’une seconde particule d’enveloppe sous-virale ; ou
# 5 µg d’une première particule d’enveloppe sous-virale, 10 µg d’une deuxième particule d’enveloppe sous-virale et 15 µg d’une troisième particule d’enveloppe sous-virale ; ou
# 7,5 µg d’une première particule d’enveloppe sous-virale, 17,5 µg d’une deuxième particule d’enveloppe sous-virale, 1 µg d’une troisième particule d’enveloppe sous-virale et 4 µg d’une quatrième particule d’enveloppe sous-virale ; ou
# etc.
Avantageusement, et lorsque le mélange comprend au moins trois particules d’enveloppe sous-virales, pour certaines, elles peuvent être mélangées en quantité/proportion égale et pour les autres, elles peuvent être mélangées en quantité/proportion différente ou en quantité/proportion égale mais différente de la première susdite quantité/proportion égale, ceci s’appliquant à tous les aspects ou modes de réalisation de l’invention. Par exemple, pour un mélange de 30 µg, celui-ci peut comprendre :
# 5 µg d’une première particule d’enveloppe sous-virale, 5 µg d’une deuxième particule d’enveloppe sous-virale et 20 µg d’une troisième particule d’enveloppe sous-virale ; ou
# 7,5 µg d’une première particule d’enveloppe sous-virale, 7,5 µg d’une deuxième particule d’enveloppe sous-virale, 10 µg d’une troisième particule d’enveloppe sous-virale et 5 µg d’une quatrième particule d’enveloppe sous-virale ; ou
# 5 µg d’une première particule d’enveloppe sous-virale, 5 µg d’une deuxième particule d’enveloppe sous-virale, 10 µg d’une troisième particule d’enveloppe sous-virale et 10 µg d’une quatrième particule d’enveloppe sous-virale ; ou
# etc.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, ladite composition étant formulée pour être administrée par l’une des voies suivantes : sublinguale, buccale, intra-trachéale, intraoculaire, intra-nasale, pulmonaire intra-auriculaire, parentérale, rectale, topique, transdermique, sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse. En particulier, ladite composition est formulée pour être administrée par l’une des voies suivantes : sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, ladite composition comprenant en outre un adjuvant. Par « adjuvant », on entend un produit ajouté à un autre (ici, le mélande de particules d’enveloppe sous-virales) pour renforcer ou compléter son action. Il s’agit donc d’un agent pharmacologique ou immunologique qui modifie l’effet d’autres agents. En particulier, ces derniers peuvent être ajoutés à un vaccin pour stimuler la réponse immunitaire afin de produire plus d’anticorps et une immunité plus durable, minimisant ainsi la dose d’antigène nécessaire. Au sens de l’invention, celui-ci peut être choisi parmi :
# les adjuvants à base d’émulsions huile dans eau ou eau dans huile (e.g.type squalène, MF59) ;
# les adjuvants basés sur les sels minéraux (e.g.hydoxyde et phosphate d’aluminium, phosphate de calcium) ;
# les adjuvants dérivés microbiens (ie.g. type lipopolysaccharides, CpG, flagelline,etc.) ;
# les adjuvants à base de saponine ; et
# les adjuvants agonistes des récepteurs de l’immunité innée (i.e.lesPattern recognition receptors– PRR).
Selon un deuxième aspect de l’invention, celle-ci a pour objet les lignées cellulaires qui expriment les particules d’enveloppe sous-virales chimères, immunogènes et non infectieuses de l’invention, lesquelles permettent entre autre de les purifier et de préparer le mélange (i.e.le principe actif) de la composition immunogène de l’invention précédemment décrite.
A titre d’exemple de microorganismes qui conviennent aux fins de l’invention, on peut citer les levures, telles que celles des familles suivantes :Saccharomyces,Schizosaccharomyces,Kluveromyces,Pichia,Hanseluna,Yarowia,Schwaniomyces,Zygosaccharomyces,Saccharomyces cerevisiae,Saccharomyces carlsbergensisetKluveromyces lactisétant préférées ; et les bactéries, telles queE. coliet celles des familles suivantes :Lactobacillus,Lactococcus,Salmonella,Streptococcus,BacillusetStreptomyces.
A titre d’exemple de cellules eucaryotes qui conviennent aux fins de l’invention, on peut citer les cellules provenant d’animaux tels que les mammifères, les reptiles, les insectes et équivalent. Les cellules eucaryotes préférées sont les cellules provenant du hamster chinois (cellules CHO), du singe (cellules COS et Vero), du rein de hamster nain (cellules BHK), du rein de cochon (cellules PK 15) et du rein de lapin (cellules RK13, les lignées cellulaires humaines de l’ostéosacorme (cellules 143 B), les lignées cellulaires humaines HeLa et les lignées cellulaires humaines de l’hépatome (du type cellules Hep G2), ainsi que les lignées cellulaires d’insecte (par exemple deSpodoptera frugiperda).
Avantageusement il est choisi la lignée d’ovaire de hamster chinois nommée CHO (Michel ML, Pontisso P, Sobczak E, Malpièce Y, Streeck RE, Tiollais P.Synthesis in animal cells of hepatitis B surface antigen particles carrying a receptor for polymerized human serum albumin. Proc Natl Acad Sci U S A. 1984 Dec;81(24):7708-12) ; ou la levureSaccharomyces cerevisae; ou la lignée cellulaire de rein de hamster nouveau-né (BHK), en particulier la lignée cellulaire de rein de hamster nouveau-né (BHK-21) (Goldman RD, Follett EA.Birefringent filamentous organelle in BHK-21 cells and its possible role in cell spreading and motility. Science. 1970 Jul 17;169(942):286-8).
Aux fins de l’invention, les susdites lignées cellulaires sont manipulées, transduites, mises en culture,etc.par des techniques connues de l’Homme du métier et permettent ainsi de produire et de purifier chacune des particules d’enveloppe sous-virales de l’invention décrites précédemment. De manière générale et pour chacune desdites particules d’enveloppe sous-virales, l’invention comprend une méthode de production des particules d’enveloppe sous-virales chimères, immunogènes non infectieuses susmentionnées, à partir d’une lignée cellulaire susmentionnée, comprenant les étapes suivantes :
- une étape de transduction des cellules de la lignée cellulaire avec un vecteur lentiviral comprenant une séquence d’acides nucléiques codant pour la protéine S sauvage (SHBV) d’un isolat du virus de l’hépatite B ;
- une étape de culture desdites cellules afin de produire une lignée cellulaire capable d’exprimer les particules d’enveloppe sous-virales d’enveloppe sauvage du virus de l’hépatite B ;
- une étape de sélection d’un clone présentant une sécrétion optimale de particules d’enveloppe sous-virales d’enveloppe sauvage du virus de l’hépatite B ;
- une étape de sur-transduction dudit clone avec un second vecteur codant pour l’une desdites protéines fusion E1HCV 4a– SHBV délétée, E2HCV 4a– SHBV délétée, E2HCV 1a– SHBV délétéeou E2HCV 3a– SHBV délétée;
- une étape de culture desdites cellules afin de produire une lignée cellulaire capable d’exprimer les particules d’enveloppe sous-virales chimères, immunogènes non infectieuses susmentionnées (i.e.les particules A, B, C, D, E ou F) ;
- une étape de sélection desdites cellules capables de secréter de manière optimale les particules d’enveloppe sous-virales chimères, immunogènes non infectieuses susmentionnées (i.e.les particules A, B, C, D, E ou F) ;
- une étape de culture dudit clone pour la production des particules d’enveloppe sous-virales chimères, immunogènes non infectieuses susmentionnées (i.e.les particules A, B, C, D, E ou F) ; et
- une étape de purification des particules d’enveloppe sous-virales à partir du milieu de culture collecté (centrifugation, utltracentrifugation sur gradients, collecte des fractions positives pour les particules d’enveloppe sous-virales chimères, dyalise).
En particulier etin fine, la mise en œuvre de cette méthode permet à l’Homme du métier de disposer, par exemple, de :
A. la lignée cellulaire (e.g.CHO) transduite avec le plasmide pHR’hph-S de séquence SEQ ID NO : 30, lequel code pour la protéine S sauvage (SHBV) de séquence SEQ ID NO : 2 ; et sur-transduite avec le plasmide pHR’pac-G4a E1-S de séquence SEQ ID NO : 32, lequel code pour la protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 18,
ladite lignée cellulaire permettant de produire et de purifier les particules d’enveloppe sous-virales caractérisée par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée;
B. la lignée cellulaire (e.g.CHO) transduite avec le plasmide pHR’hph-S de séquence SEQ ID NO : 30, lequel code pour la protéine S sauvage (SHBV) de séquence SEQ ID NO : 2 ; et sur-transduite avec le plasmide pHR’pac-G4a E2-S de séquence SEQ ID NO : 33, lequel code pour la protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 20,
ladite lignée cellulaire permettant de produire et de purifier les particules d’enveloppe sous-virales caractérisée par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée;
C. la lignée cellulaire (e.g.CHO) transduite avec le plasmide pHR’hph-S de séquence SEQ ID NO : 30, lequel code pour la protéine S sauvage (SHBV) de séquence SEQ ID NO : 2 ; et sur-transduite avec le plasmide pHR’pac-G1a E2-S de séquence SEQ ID NO : 34, lequel code pour la protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 22,
ladite lignée cellulaire permettant de produire et de purifier les particules d’enveloppe sous-virales caractérisée par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée;
D. la lignée cellulaire (e.g.CHO) transduite avec le plasmide pHR’hph-S de séquence SEQ ID NO : 30, lequel code pour la protéine S sauvage (SHBV) de séquence SEQ ID NO : 2 ; et sur-transduite avec le plasmide pHR’pac-G3a E2-S de séquence SEQ ID NO : 35, lequel code pour la protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 24,
ladite lignée cellulaire permettant de produire et de purifier les particules d’enveloppe sous-virales caractérisée par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée;
E. la lignée cellulaire (e.g.CHO) transduite avec le plasmide pHR’hph-S de séquence SEQ ID NO : 30, lequel code pour la protéine S sauvage (SHBV) de séquence SEQ ID NO : 2 ; et sur-transduite avec le plasmide pHR’pac-G1a E1-S de séquence SEQ ID NO : 36, lequel code pour la protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 26,
ladite lignée cellulaire permettant de produire et de purifier les particules d’enveloppe sous-virales caractérisée par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 1a– SHBV délétée; et
F. la lignée cellulaire (e.g.CHO) transduite avec le plasmide pHR’hph-S de séquence SEQ ID NO : 30, lequel code pour la protéine S sauvage (SHBV) de séquence SEQ ID NO : 2 ; et sur-transduite avec le plasmide pHR’pac-G3a E1-S de séquence SEQ ID NO : 37, lequel code pour la protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 28,
ladite lignée cellulaire permettant de produire et de purifier les particules d’enveloppe sous-virales caractérisée par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétée.
A cet égard, on comprend également qu’un troisième aspect de l’invention concerne une méthode de préparation de la composition immunogène de l’invention. En particulier, celle-ci a pour objet une méthode de préparation de la composition immunogène telle que décrite ci-dessus comprenant au moins les étapes suivantes :
i. optionnellement, une étape de production d’au moins deux lignées cellulaires choisies parmi :
- une lignée cellulaire capable de sécréter des particules d’enveloppe sous-virales caractérisées par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée;
- une lignée cellulaire capable de sécréter des particules d’enveloppe sous-virales caractérisées par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée;
- une lignée cellulaire capable de sécréter des particules d’enveloppe sous-virales caractérisées par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée;
- une lignée cellulaire capable de sécréter des particules d’enveloppe sous-virales caractérisées par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée;
- une lignée cellulaire capable de sécréter des particules d’enveloppe sous-virales caractérisées par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 1a– SHBV délétée; et
- une lignée cellulaire capable de sécréter des particules d’enveloppe sous-virales caractérisées par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétée,
(par exemple, à l’aide de la méthode décrite ci-dessus) ;
ii. une étape de culture desdites au moins deux lignées cellulaires d’intérêt pour la production des particules d’enveloppe sous-virales chimères, immunogènes non infectieuses d’intérêt susmentionnées (i.e.les particules A, B, C, D, E ou F) ;
iii. une étape de purification des particules d’enveloppe sous-virales d’intérêt à partir du milieu de culture collecté (centrifugation, utltracentrifugation sur gradients, collecte des fractions positives pour les particules d’enveloppe sous-virales chimères, dyalise) pour obtenir une solution de chacune desdites particules d’enveloppe sous-virales d’intérêt ; et
iv. optionnellement, une étape de mélange desdites solutions de chacune desdites particules d’enveloppe sous-virales d’intérêt pour obtenir la composition immunogène telle que décrites ci-dessus.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la méthode de préparation telle que définie ci-dessus comprenant au moins les étapes suivantes :
i. optionnellement, une étape de production d’au moins deux lignées cellulaires choisies parmi :
- une lignée cellulaire capable de sécréter des particules d’enveloppe sous-virales caractérisées par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée;
- une lignée cellulaire capable de sécréter des particules d’enveloppe sous-virales caractérisées par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée;
- une lignée cellulaire capable de sécréter des particules d’enveloppe sous-virales caractérisées par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée;
- une lignée cellulaire capable de sécréter des particules d’enveloppe sous-virales caractérisées par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée;
- une lignée cellulaire capable de sécréter des particules d’enveloppe sous-virales caractérisées par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 1a– SHBV délétée; et
- une lignée cellulaire capable de sécréter des particules d’enveloppe sous-virales caractérisées par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétée,
(par exemple, à l’aide de la méthode décrite ci-dessus) ;
l’une au moins desdites au moins deux lignées cellulaires sécrétant soit une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétéesoit une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée;
ii. une étape de culture desdites au moins deux lignées cellulaires d’intérêt pour la production des particules d’enveloppe sous-virales chimères, immunogènes non infectieuses d’intérêt susmentionnées (i.e.les particules A et/ou B, et/ou C, D, E ou F) ;
iii. une étape de purification des particules d’enveloppe sous-virales d’intérêt à partir du milieu de culture collecté (centrifugation, utltracentrifugation sur gradients, collecte des fractions positives pour les particules d’enveloppe sous-virales chimères, dyalise) pour obtenir une solution de chacune desdites particules d’enveloppe sous-virales d’intérêt ; et
iv. optionnellement, une étape de mélange desdites solutions de chacune desdites particules d’enveloppe sous-virales d’intérêt pour obtenir la composition immunogène telle que décrites ci-dessus.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la méthode de préparation telle que définie ci-dessus comprenant au moins les étapes suivantes :
i. optionnellement, une étape de production d’au moins deux lignées cellulaires choisies parmi :
- une lignée cellulaire capable de sécréter des particules d’enveloppe sous-virales caractérisées par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée;
- une lignée cellulaire capable de sécréter des particules d’enveloppe sous-virales caractérisées par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée;
- une lignée cellulaire capable de sécréter des particules d’enveloppe sous-virales caractérisées par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée; et
- une lignée cellulaire capable de sécréter des particules d’enveloppe sous-virales caractérisées par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée;
(par exemple, à l’aide de la méthode décrite ci-dessus) :
l’une au moins desdites au moins deux lignées cellulaires sécrétant soit une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétéesoit une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée;
ii. une étape de culture desdites au moins deux lignées cellulaires d’intérêt pour la production des particules d’enveloppe sous-virales chimères, immunogènes non infectieuses d’intérêt susmentionnées (i.e.les particules A et/ou B, et/ou C et/ou D) ;
iii. une étape de purification des particules d’enveloppe sous-virales d’intérêt à partir du milieu de culture collecté (centrifugation, utltracentrifugation sur gradients, collecte des fractions positives pour les particules d’enveloppe sous-virales chimères, dyalise) pour obtenir une solution de chacune desdites particules d’enveloppe sous-virales d’intérêt ; et
iv. optionnellement, une étape de mélange desdites solutions de chacune desdites particules d’enveloppe sous-virales d’intérêt pour obtenir la composition immunogène telle que décrites ci-dessus.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la méthode de préparation telle que définie ci-dessus comprenant ladite étape i. Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la méthode de préparation telle que définie ci-dessus comprenant ladite étape iv. Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la méthode de préparation telle que définie ci-dessus comprenant lesdites étapes i et iv. En particulier, et lorsque l’étape iv est présente, il convient de noter que la réalisation du mélange desdites au moins deux particules d’enveloppe sous-virales d’intérêt (i.e.au moins deux choisies parmi six, ou au moins deux choisies parmi six dont l’une au moins est A ou B, ou au moins deux choisies parmi quatre dont l’une au moins est A ou B) peut être fait :
# soit en mélangeant en quantité/proportion égale les particules d’enveloppe sous-virales d’intérêt (i.e.mélange équimolaire) ;
# soit en mélangeant en quantité/proportion différente les particules d’enveloppe sous-virales d’intérêt.
Avantageusement, il convient également de noter que le caractère optionnelle de l’étape iv permet, entre autre, de permettre la préparation d’une composition ditekit-of-parts. De cette manière, on comprend que l’invention a également pour objet une composition immunogène comprenant au moins deux préparations de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable,
dans laquelle chaque préparation est caractérisée par la présence d’une particule choisie parmi les particules caractérisées par la présence :
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétée,
lesdites au moins deux préparations étant différentes, et lesdites préparations étant soit sous forme de préparations combinées soit sous forme de préparations séparées.
En particulier, l’invention a également pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus comprenant au moins deux préparations de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable,
dans laquelle chaque préparation est caractérisée par la présence d’une particule choisie parmi les particules caractérisées par la présence :
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétée,
lesdites au moins deux préparations étant différentes, l’une au moins présentant soit une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée(A) soit une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée(B), et lesdites préparations étant soit sous forme de préparations combinées soit sous forme de préparations séparées.
En particulier, l’invention a également pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus comprenant au moins deux préparations de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable,
dans laquelle chaque préparation est caractérisée par la présence d’une particule choisie parmi les particules caractérisées par la présence :
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée,
lesdites au moins deux préparations étant différentes, l’une au moins présentant soit une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée(A) soit une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée(B), et lesdites préparations étant soit sous forme de préparations combinées soit sous forme de préparations séparées.
Selon un quatrième aspect de l’invention, l’invention a pour objet une composition immunogène comprenant un mélange d’acides nucléiques en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable,
dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence d’un acide nucléique codant une protéine native SHBVet d’au moins deux acides nucléiques choisis parmi :
- un acide nucléique codant une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée;
- un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée;
- un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée;
- un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée;
- un acide nucléique codant une protéine fusion E1HCV 1a– SHBV délétée; et
- un acide nucléique codant une protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétée.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet une composition immunogène comprenant un mélange d’acides nucléiques en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable,
dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence d’un acide nucléique codant une protéine native SHBVet d’au moins deux acides nucléiques choisis parmi :
- un acide nucléique codant une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée;
- un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée;
- un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée;
- un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée;
- un acide nucléique codant une protéine fusion E1HCV 1a– SHBV délétée; et
- un acide nucléique codant une protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétée,
l’un au moins desdits au moins deux acides nucléiques codant soit une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée(A) soit une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée(B).
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet une composition immunogène comprenant un mélange d’acides nucléiques en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable,
dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence d’un acide nucléique codant une protéine native SHBVet d’au moins deux acides nucléiques choisis parmi :
- un acide nucléique codant une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée;
- un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée;
- un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée; et
- un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée,
l’un au moins desdits au moins deux acides nucléiques codant soit une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée(A) soit une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée(B).
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet une composition immunogène telle que décrite ci-dessus, dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence :
# d’un acide nucléique codant une protéine native SHBV;
# d’un acide nucléique codant une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée; et
# d’un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet une composition immunogène telle que décrite ci-dessus, dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence :
# d’un acide nucléique codant une protéine native SHBV;
# d’un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée;
# d’un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée; et
# d’un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée.
Par « acide nucléique codant une protéine native SHBV», on entend une séquence nucléique codant la protéine S sauvage de l’antigène de surface d’un isolat du virus de l’hépatite B telle que définie ci-dessus. En particulier, il s’agit d’un acide nucléique choisi parmi les séquences ayant une homologie d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 1 (codant la protéine native SHBVde séquence SEQ ID NO : 2), de préférence d’au moins 90% avec la séquence SEQ ID NO : 1. En particulier, il s’agit d’un acide nucléique de séquence SEQ ID NO : 1.
Par « pourcentage d’homologie », on entend le pourcentage déterminé par comparaison directe de deux séquences de molécules polynucléotidiques, en déterminant le nombre de résidus d’acides nucléiques identiques entre les deux séquences, puis en le divisant par le nombre de résidus d’acides nucléiques de la séquence la plus longue des deux, et en multipliant le résultat par 100. Par « au moins 78% », on entend également au moins 80%, au moins 82%, au moins 84%, au moins 85%, au moins 86%, au moins 88%, au moins 90%, au moins 91%, au moins 92%, au moins 93%, au moins 94%, au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98% ou au moins 99%. A cet égard, il convient de noter que cette définition s’applique à tous les modes de réalisation de l’invention.
Par « acide nucléique codant une protéine fusion », on entend une séquence nucléique codant une protéine fusion (e.g.E1HCV 4a– SHBV délétée, E2HCV 4a– SHBV délétée, E2HCV 1a– SHBV délétée, E2HCV 3a– SHBV délétée, E1HCV 1a– SHBV délétéeet E1HCV 3a– SHBV délétée) telle que définie ci-dessus. C’est-à-dire que celui-ci comprend au moins deux séquences, l’une côté 3’ codant pour la protéine S délétée de son domaine transmembranaire situé à son extrémité N-terminale d’un isolat du virus HBV (SHBV délétée) et l’autre côté 5’ codant pour la quasi-intégralité d’une protéine d’enveloppe E1 ou E2 d’un isolat du virus HCV de génotype 4a, 1a ou 3a (E1HCV 4a, E2HCV 4a, E2HCV 1a, E2HCV 3a, E1HCV 1aet E1HCV 3a), dont le domaine transmembranaire se substitue à celui délété en N-terminal de la protéine S du virus HBV. Par « quasi-intégralité », on entend au moins le domaine transmembranaire et l’ectodomaine d’une protéine d’enveloppe E1 ou E2 d’un isolat du virus de l’hépatite C (HCV). Avantageusement, on entend également un acide nucléique codant pour une protéine de fusion définie ci-dessus, comprenant au moins les deux séquences d’acides nucléiques suivantes :
#du côté 3’,
- une première séquence d’acides nucléiques codant pour la protéine S délétée de son domaine transmembranaire situé à son extrémité N-terminale, d’un isolat du virus de l’hépatite B ; ou
- d’une séquence d’acides nucléiques présentant une homologie d’au moins 91%, notamment d’au moins 93%, particulièrement d’au moins 95%, et plus particulièrement d’au moins 97%, avec ladite séquence d’acides nucléiques de la protéine S délétée en N-terminal, sous réserve que la protéine codée par ladite séquence d’acides nucléiques conserve la capacité à former des particules sous-virales non infectieuses, immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite B ; ou
- de la séquence d’acides nucléiques d’un variant naturel issue d’un autre isolat du virus HBV, ou d’un variant synthétique, dérivée d’une séquence d’acides nucléiques de ladite protéine S délétée en N-terminal, sous réserve que la protéine codée par ladite séquence d’acides nucléiques conserve la capacité à former des particules sous-virales non infectieuses, immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite B, et,
#du côté 5’ de la première séquence,
- une seconde séquence d’acides nucléiques codant pour le domaine transmembranaire et l’ectodomaine d’au moins une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C ; ou
- d’une séquence d’acides nucléiques présentant une homologie d’au moins 78%, notamment d’au moins 80%, particulièrement d’au moins 85%, et plus particulièrement d’au moins 90%, avec ladite séquence d’acides nucléiques codant pour le domaine transmembranaire et l’ectodomaine d’au moins une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C, sous réserve que la protéine codée par ladite séquence d’acides nucléiques conserve les propriétés immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite C ; ou
- de la séquence d’acides nucléiques d’un variant naturel issue d’un isolat du virus HCV, ou d’un variant synthétique, dérivée de ladite séquence d’acides nucléiques codant pour le domaine transmembranaire et l’ectodomaine d’au moins une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C, sous réserve que la protéine codée par ladite séquence d’acides nucléiques conserve les propriétés immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite C,
ladite protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C étant choisie parmi les séquences codant la protéine E1 du virus HCV de génotype 4a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 4a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 1a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 3a, la protéine E1 du virus HCV de génotype 1a et la protéine E1 du virus HCV de génotype 3a.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour donc objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus comprenant un mélange d’acides nucléiques en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable,
dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence d’un acide nucléique codant une protéine native SHBVet d’au moins deux acides nucléiques choisis parmi :
- un acide nucléique codant une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée;
- un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée;
- un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée; et
- un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée,
l’un au moins desdits au moins deux acides nucléiques codant soit une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée(A) soit une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée(B),
ladite protéine native SHBVétant la protéine S sauvage de l’antigène de surface d’un isolat du virus de l’hépatite B (HBV), et
lesdites protéines fusion E1HCV 4a– SHBV délétée, E2HCV 4a– SHBV délétée, E2HCV 1a– SHBV délétéeet E2HCV 3a– SHBV délétéeétant des protéines de fusion immunogènes chacune codée par un acide nucléique comprenant au moins les deux séquences suivantes :
#du côté 3’,
- une première séquence d’acides nucléiques codant pour la protéine S délétée de son domaine transmembranaire situé à son extrémité N-terminale, d’un isolat du virus de l’hépatite B ; ou
- d’une séquence d’acides nucléiques présentant une homologie d’au moins 91%, notamment d’au moins 93%, particulièrement d’au moins 95%, et plus particulièrement d’au moins 97%, avec ladite séquence d’acides nucléiques de la protéine S délétée en N-terminal, sous réserve que la protéine codée par ladite séquence d’acides nucléiques conserve la capacité à former des particules sous-virales non infectieuses, immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite B ; ou
- de la séquence d’acides nucléiques d’un variant naturel issue d’un autre isolat du virus HBV, ou d’un variant synthétique, dérivée d’une séquence d’acides nucléiques de ladite protéine S délétée en N-terminal, sous réserve que la protéine codée par ladite séquence d’acides nucléiques conserve la capacité à former des particules sous-virales non infectieuses, immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite B, et,
#du côté 5’ de la première séquence,
- une seconde séquence d’acides nucléiques codant pour le domaine transmembranaire et l’ectodomaine d’au moins une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C ; ou
- d’une séquence d’acides nucléiques présentant une homologie d’au moins 78%, notamment d’au moins 80%, particulièrement d’au moins 85%, et plus particulièrement d’au moins 90%, avec ladite séquence d’acides nucléiques codant pour le domaine transmembranaire et l’ectodomaine d’au moins une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C, sous réserve que la protéine codée par ladite séquence d’acides nucléiques conserve les propriétés immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite C ; ou
- de la séquence d’acides nucléiques d’un variant naturel issue d’un isolat du virus HCV, ou d’un variant synthétique, dérivée de ladite séquence d’acides nucléiques codant pour le domaine transmembranaire et l’ectodomaine d’au moins une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C, sous réserve que la protéine codée par ladite séquence d’acides nucléiques conserve les propriétés immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite C,
ladite protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C étant choisie parmi les séquences codant la protéine E1 du virus HCV de génotype 4a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 4a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 1a et la protéine E2 du virus HCV de génotype 3a.
Avantageusement, ledit acide nucléique codant une protéine fusion comprend également une séquence codant un peptide d’initiation de transfert (PIT) tel que définie ci-dessus. C’est-à-dire que celui-ci comprend au moins trois séquences, lesquelles, de l’extrémité 5’ à l’extrémité 3’, sont :
# une séquence codant un peptide d’initiation de transfert (e.g.PIT11a, PIT13a, PIT14a, PIT21a, PIT23aou PIT24a) ;
# une séquence codant pour la quasi-intégralité d’une protéine d’enveloppe E1 ou E2 d’un isolat du virus HCV de génotype 4a, 1a ou 3a (E1HCV 4a, E2HCV 4a, E2HCV 1a, E2HCV 3a, E1HCV 1aet E1HCV 3a), dont le domaine transmembranaire se substitue à celui délété en N-terminal de la protéine S du virus HBV ; et
# une séquence codant pour la protéine S délétée de son domaine transmembranaire situé à son extrémité N-terminale d’un isolat du virus HBV (SHBV délétée).
Avantageusement, on entend également un acide nucléique codant pour une protéine de fusion définie ci-dessus, comprenant au moins les trois séquences d’acides nucléiques suivantes :
#du côté 3’,
- une première séquence d’acides nucléiques codant pour la protéine S délétée de son domaine transmembranaire situé à son extrémité N-terminale, d’un isolat du virus de l’hépatite B ; ou
- d’une séquence d’acides nucléiques présentant une homologie d’au moins 91%, notamment d’au moins 93%, particulièrement d’au moins 95%, et plus particulièrement d’au moins 97%, avec ladite séquence d’acides nucléiques de la protéine S délétée en N-terminal, sous réserve que la protéine codée par ladite séquence d’acides nucléiques conserve la capacité à former des particules sous-virales non infectieuses, immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite B ; ou
- de la séquence d’acides nucléiques d’un variant naturel issue d’un autre isolat du virus HBV, ou d’un variant synthétique, dérivée d’une séquence d’acides nucléiques de ladite protéine S délétée en N-terminal, sous réserve que la protéine codée par ladite séquence d’acides nucléiques conserve la capacité à former des particules sous-virales non infectieuses, immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite B,
#du côté 5’ de la première séquence,
- une seconde séquence d’acides nucléiques codant pour le domaine transmembranaire et l’ectodomaine d’au moins une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C ; ou
- d’une séquence d’acides nucléiques présentant une homologie d’au moins 78%, notamment d’au moins 80%, particulièrement d’au moins 85%, et plus particulièrement d’au moins 90%, avec ladite séquence d’acides nucléiques codant pour le domaine transmembranaire et l’ectodomaine d’au moins une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C, sous réserve que la protéine codée par ladite séquence d’acides nucléiques conserve les propriétés immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite C ; ou
- de la séquence d’acides nucléiques d’un variant naturel issue d’un isolat du virus HCV, ou d’un variant synthétique, dérivée de ladite séquence d’acides nucléiques codant pour le domaine transmembranaire et l’ectodomaine d’au moins une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C, sous réserve que la protéine codée par ladite séquence d’acides nucléiques conserve les propriétés immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite C,
ladite protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C étant choisie parmi les séquences codant la protéine E1 du virus HCV de génotype 4a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 4a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 1a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 3a, la protéine E1 du virus HCV de génotype 1a et la protéine E1 du virus HCV de génotype 3a, et
#du côté 5’ de la seconde séquence,
- une troisième séquence d’acides nucléiques codant pour un peptide d’initiation de transfert d’une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C (PIT) ; ou
- une séquence d’acides nucléiques d’un variant naturel issue d’un isolat du virus HCV, ou d’un variant synthétique, dérivée de ladite la séquence d’acides nucléiques de la protéine codant pour un peptide d’initiation de transfert (PIT), sous réserve que le peptide d’initiation de transfert codé par ladite la séquence d’acides nucléiques, conserve la capacité à adresser, après traduction, ladite protéine de fusion au réticulum endoplasmique de sorte qu’elle soit correctement glycosylée et que sa conformation tridimensionnelle présente le moins d’altération possible, et/ou que ses qualité antigéniques soient au mieux préservées au regard des protéines sauvages ; ou
- toute séquence d’acides nucléiques codant pour un peptide capable d’adresser, après traduction, ladite protéine de fusion au réticulum endoplasmique de sorte qu’elle soit correctement glycosylée et que sa conformation tridimensionnelle présente le moins d’altérations possibles, et/ou que ses qualités antigéniques soient au mieux préservées au regard des protéines sauvages,
ladite protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C étant choisie parmi les séquences codant la protéine E1 du virus HCV de génotype 4a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 4a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 1a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 3a, la protéine E1 du virus HCV de génotype 1a et la protéine E1 du virus HCV de génotype 3a.
Avantageusement, une séquence d’acides nucléiques codant un peptide de liaison relie le premier et le second acides nucléiques constituant lesdites protéines de fusion susmentionnées, ladite séquence d’acides nucléiques codant un peptide de liaison étant constitué de 3 acides nucléiques, ou de 6 acides nucléiques, ou de 9 acides nucléiques, ou de 12 acides nucléiques, ou de 15 acides nucléiques, ou de toute séquence nucléotidique codant pour tout peptide de liaison ; sous réserve que lesdites protéines de fusion immunogènes codée par lesdites séquences d’acides nucléiques et qui comprend ledit peptide de liaison conservent la capacité à s’assembler en particules d’enveloppe sous-virales, en présence de la protéine S sauvage, et les propriétés immunogènes vis-à-vis du virus HCV, ou du virus HBV, ou, des virus HCV et HBV soient conservées.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, dans laquelle lesdits au moins deux acides nucléiques codant pour une protéine fusion sont choisis parmi :
# l’acide nucléique codant une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée(également appelée PIT14a– E1HCV 4a– SHBV délétée) choisi parmi les séquences ayant une homologie d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 17, de préférence d’au moins 90% avec la séquence SEQ ID NO : 17 ;
# l’acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée(également appelée PIT24a– E2HCV 4a– SHBV délétée) choisi parmi les séquences ayant une homologie d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 19, de préférence d’au moins 90% avec la séquence SEQ ID NO : 19 ;
# l’acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée(également appelée PIT21a– E2HCV 1a– SHBV délétée) choisi parmi les séquences ayant une homologie d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 21, de préférence d’au moins 90% avec la séquence SEQ ID NO : 21 ;
# l’acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée(également appelée PIT23a– E1HCV 3a– SHBV délétée) choisi parmi les séquences ayant une homologie d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 23, de préférence d’au moins 90% avec la séquence SEQ ID NO : 23 ;
# l’acide nucléique codant une protéine fusion E1HCV 1a– SHBV délétée(également appelée PIT11a– E1HCV 1a– SHBV délétée) choisi parmi les séquences ayant une homologie d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 25, de préférence d’au moins 90% avec la séquence SEQ ID NO : 25 ; et
# l’acide nucléique codant une protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétée(également appelée PIT13a– E1HCV 3a– SHBV délétée) choisi parmi les séquences ayant une homologie d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 27, de préférence d’au moins 90% avec la séquence SEQ ID NO : 27.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, dans laquelle lesdits au moins deux acides nucléiques codant pour une protéine fusion sont choisis parmi :
# l’acide nucléique codant une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 17 ;
# l’acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 19 ;
# l’acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 21 ;
# l’acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 23 ;
# l’acide nucléique codant une protéine fusion E1HCV 1a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 25 ; et
# l’acide nucléique codant une protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 27.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet une composition immunogène comprenant un mélange d’acides nucléiques en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable,
dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence :
# d’un acide nucléique codant une protéine native SHBVchoisi parmi les séquences ayant une homologie d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 1, de préférence d’au moins 90% avec la séquence SEQ ID NO : 1, et est de préférence de séquence SEQ ID NO : 1 ; et
# d’au moins deux acides nucléiques choisis parmi :
- un acide nucléique codant une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétéechoisi parmi les séquences ayant une homologie d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 17, de préférence d’au moins 90% avec la séquence SEQ ID NO : 17, et est de préférence de séquence SEQ ID NO : 17 ;
- un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétéechoisi parmi les séquences ayant une homologie d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 19, de préférence d’au moins 90% avec la séquence SEQ ID NO : 19, et est de préférence de séquence SEQ ID NO : 19 ;
- un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétéechoisi parmi les séquences ayant une homologie d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 21, de préférence d’au moins 90% avec la séquence SEQ ID NO : 21, et est de préférence de séquence SEQ ID NO : 21 ; et
- un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétéechoisi parmi les séquences ayant une homologie d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 23, de préférence d’au moins 90% avec la séquence SEQ ID NO : 23, et est de préférence de séquence SEQ ID NO : 23,
l’un au moins desdits au moins deux acides nucléiques codant soit une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée(A) soit une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée(B).
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet une composition immunogène telle que décrite ci-dessus, dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence :
# d’un acide nucléique codant une protéine native SHBVchoisi parmi les séquences ayant une homologie d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 1, de préférence d’au moins 90% avec la séquence SEQ ID NO : 1, et est de préférence de séquence SEQ ID NO : 1 ;
# d’un acide nucléique codant une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétéechoisi parmi les séquences ayant une homologie d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 17, de préférence d’au moins 90% avec la séquence SEQ ID NO : 17, et est de préférence de séquence SEQ ID NO : 17 ; et
# d’un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétéechoisi parmi les séquences ayant une homologie d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 19, de préférence d’au moins 90% avec la séquence SEQ ID NO : 19, et est de préférence de séquence SEQ ID NO : 19.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet une composition immunogène telle que décrite ci-dessus, dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence :
# d’un acide nucléique codant une protéine native SHBVchoisi parmi les séquences ayant une homologie d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 1, de préférence d’au moins 90% avec la séquence SEQ ID NO : 1, et est de préférence de séquence SEQ ID NO : 1 ;
# d’un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétéechoisi parmi les séquences ayant une homologie d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 19, de préférence d’au moins 90% avec la séquence SEQ ID NO : 19, et est de préférence de séquence SEQ ID NO : 19 ;
# d’un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétéechoisi parmi les séquences ayant une homologie d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 21, de préférence d’au moins 90% avec la séquence SEQ ID NO : 21, et est de préférence de séquence SEQ ID NO : 21 ; et
# d’un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétéechoisi parmi les séquences ayant une homologie d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 23, de préférence d’au moins 90% avec la séquence SEQ ID NO : 23, et est de préférence de séquence SEQ ID NO : 23.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention concerne la composition immunogène telle que décrite ci-dessus comprenant non seulement le mélange desdits acides nucléiques mais également les vecteurs comprenant au moins lesdits acides nucléiques et les moyens nécessaires à l’expression des protéines (i.e.protéine S native et les protéines fusion telles que définies ci-dessus) codées par ces derniers, lesdits moyens y étant liés de façon opérationnelle. A titre de vecteurs d’expression qui conviennent aux fins de l’invention, on peut citer par exemple les plasmides, les vecteurs viraux type lentiviraux, Semliki, adenovirus, poxvirus, virus de la vaccine, baculovirus, les vecteurs bactériens du type salmonelle, BCG. Par « moyens nécessaires à l’expression » d’une protéine (le terme protéine étant utilisé pour toute molécule d’acides aminés, telle que protéine, protéine de fusion, fragment de protéine, peptide, polyprotéine, polypeptide,etc.), on entend tous moyens qui permettent d’obtenir la protéine, tel que notamment un promoteur, un terminateur de transcription, une origine de réplication et de préférence un marqueur de sélection. Ces derniers peuvent être des moyens homologues, c’est-à-dire inclus dans le génome du vecteur utilisé, ou bien être hétérologues. Dans ce dernier cas, lesdits moyens sont clonés avec la protéine d’intérêt à exprimer. En outre, les moyens nécessaires à l’expression d’une protéine sont liés de façon opérationnelle à la séquence d’acide nucléique codant pour le peptide d’intérêt. C’est-à-dire que les éléments nécessaires à l’expression et ceux du gène (de l’acide nucléique) codant la protéine d’intérêt sont juxtaposés de manière séparée ou contiguë et sont en relation de sorte que le gène puisse être correctement transcrit par la machinerie cellulaire. Par exemple, il peut exister des bases supplémentaires entre le promoteur et le gène d’intérêt tant que leur relation fonctionnelle est préservée.
En particulier et selon cet autre mode de réalisation, l’invention concerne la composition immunogène telle que décrite ci-dessus comprenant un mélange de vecteurs en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable,
dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence d’un vecteur codant une protéine native SHBVet d’au moins deux vecteurs choisis parmi :
- un vecteur codant une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée;
- un vecteur codant une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée;
- un vecteur codant une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée;
- un vecteur codant une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée;
- un vecteur codant une protéine fusion E1HCV 1a– SHBV délétée; et
- un vecteur codant une protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétée.
En particulier et selon cet autre mode de réalisation, l’invention concerne également la composition immunogène telle que décrite ci-dessus comprenant un mélange de vecteurs en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable,
dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence d’un vecteur codant une protéine native SHBVde séquence SEQ ID NO : 30 (plasmide pHR’hph-S) et d’au moins deux vecteurs choisis parmi :
- un vecteur codant une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 32 (plasmide pHR’pac-G4a E1-S) ;
- un vecteur codant une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 33 (plasmide pHR’pac-G4a E2-S) ;
- un vecteur codant une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 34 (plasmide pHR’pac-G1a E2-S) ;
- un vecteur codant une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 35 (plasmide pHR’pac-G3a E2-S) ;
- un vecteur codant une protéine fusion E1HCV 1a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 36 (plasmide pHR’pac-G1a E1-S) ; et
- un vecteur codant une protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 37 (plasmide pHR’pac-G3a E1-S).
En particulier et selon cet autre mode de réalisation, l’invention concerne également la composition immunogène telle que décrite ci-dessus comprenant un mélange de vecteurs en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable,
dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence d’un vecteur codant une protéine native SHBVde séquence SEQ ID NO : 30 (plasmide pHR’hph-S) et d’au moins deux vecteurs choisis parmi :
- un vecteur codant une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 32 (plasmide pHR’pac-G4a E1-S) ;
- un vecteur codant une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 33 (plasmide pHR’pac-G4a E2-S) ;
- un vecteur codant une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 34 (plasmide pHR’pac-G1a E2-S) ;
- un vecteur codant une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 35 (plasmide pHR’pac-G3a E2-S) ;
- un vecteur codant une protéine fusion E1HCV 1a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 36 (plasmide pHR’pac-G1a E1-S) ; et
- un vecteur codant une protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 37 (plasmide pHR’pac-G3a E1-S),
l’un au moins desdits au moins deux vecteurs codant soit une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée(A) soit une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée(B).
En particulier et selon cet autre mode de réalisation, l’invention concerne également la composition immunogène telle que décrite ci-dessus comprenant un mélange de vecteurs en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable,
dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence d’un vecteur codant une protéine native SHBVde séquence SEQ ID NO : 30 (plasmide pHR’hph-S) et d’au moins deux vecteurs choisis parmi :
- un vecteur codant une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 32 (plasmide pHR’pac-G4a E1-S) ;
- un vecteur codant une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 33 (plasmide pHR’pac-G4a E2-S) ;
- un vecteur codant une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 34 (plasmide pHR’pac-G1a E2-S) ; et
- un vecteur codant une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 35 (plasmide pHR’pac-G3a E2-S),
l’un au moins desdits au moins deux vecteurs codant soit une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée(A) soit une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée(B).
Selon un cinquième aspect de l’invention, celle-ci a pour objet l’utilisation de la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, notamment l’utilisation en tant que vaccin préventif, prophylactique et/ou thérapeutique d’une infection au virus HVC ou au virus HBV ou aux virus HCV et HBV. A ce titre, l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus pour son utilisation dans le traitement prophylactique et/ou thérapeutique, et/ou dans la prévention de l’hépatite C. Elle a également pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus pour son utilisation dans le traitement prophylactique et/ou thérapeutique, et/ou dans la prévention de l’hépatite B. En particulier, l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus pour son utilisation dans le traitement prophylactique et/ou thérapeutique, et/ou dans la prévention de l’hépatite c et de l’hépatite B.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus pour son utilisation dans le traitement prophylactique de l’hépatite C et/ou l’hépatite B.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus pour son utilisation dans le traitement thérapeutique de l’hépatite C et/ou de l’hépatite B.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus pour son utilisation dans le traitement prophylactique et thérapeutique de l’hépatite C et/ou de l’hépatite B.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus pour son utilisation dans la prévention de l’hépatite C et/ou de l’hépatite B
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition pour son utilisation telle que décrite ci-dessus, ladite composition comprenant de 5 µg à 50 µg, de préférence de 10 µg à 20 µg, dudit mélange de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition pour son utilisation telle que décrite ci-dessus, ladite composition étant formulée pour être administrée (ou ladite composition étant administrée) par l’une des voies suivantes : sublinguale, buccale, intra-trachéale, intraoculaire, intra-nasale, pulmonaire intra-auriculaire, parentérale, rectale, topique, transdermique, sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse. En particulier, l’invention a pour objet la composition pour son utilisation telle que décrite ci-dessus, ladite composition étant formulée pour être administrée (ou ladite composition étant administrée) par l’une des voies suivantes : sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition pour son utilisation telle que décrite ci-dessus, ladite composition étant administrée une fois ou plusieurs fois espacées dans le temps. Par « plusieurs fois espacées dans le temps », on entend que la composition immunogène est administrée au moins deux fois au patient qui en a besoin, lesdites administrations pouvant être espacées de quelques heures, quelques jours, quelques mois voire quelques années selon le schéma vaccinal recommandé que l’Homme du métier est à même de déterminer. Par « au moins deux fois », on entend que la composition immunogène peut être administrée au patient qui en a besoin deux fois, trois fois voire quatre fois selon le schéma vaccinal recommandé que l’Homme du métier est à même de déterminer. Par « patient qui en a besoin », on entend un mammifère, tel que l’Homme (homme, femme et/ou enfant), lequel nécessite des soins préventif (vaccination) pour éviter de développer une infection au virus HCV et/ou HBV ou qui nécessite des soins en vue de sa guérison après une infection au virus HCV et/ou HBV.
Alternativement, la susdite utilisation peut être décrite comme une méthode de traitement prophylactique et/ou thérapeutique, et/ou de prévention de l’hépatite C et/ou de l’hépatite B. A ce titre, l’invention a pour objet une méthode de traitement prophylactique et/ou thérapeutique, et/ou de prévention de l’hépatite C comprenant l’administration à un patient qui en besoin de la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, ladite composition comprenant de 5 µg à 50 µg, de préférence de 10 µg à 20 µg, dudit mélange de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses. Elle peut également être décrite comme une méthode de traitement prophylactique et/ou thérapeutique, et/ou de prévention de l’hépatite B comprenant l’administration à un patient qui en besoin de la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, ladite composition comprenant de 5 µg à 50 µg, de préférence de 10 µg à 20 µg, dudit mélange de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses.
Selon un autre mode de réalisation alternatif, l’invention a pour objet la méthode de traitement prophylactique et/ou thérapeutique, et/ou de prévention de l’hépatite C telle que définie ci-dessus comprenant l’administration à un patient qui en besoin de la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, ladite composition étant formulée pour être administrée (ou ladite composition étant administrée) par l’une des voies suivantes : sublinguale, buccale, intra-trachéale, intraoculaire, intra-nasale, pulmonaire intra-auriculaire, parentérale, rectale, topique, transdermique, sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse. L’invention a également pour objet la méthode de traitement prophylactique et/ou thérapeutique, et/ou de prévention de l’hépatite B telle que définie ci-dessus comprenant l’administration à un patient qui en besoin de la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, ladite composition étant formulée pour être administrée (ou ladite composition étant administrée) par l’une des voies suivantes : sublinguale, buccale, intra-trachéale, intraoculaire, intra-nasale, pulmonaire intra-auriculaire, parentérale, rectale, topique, transdermique, sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse.
Selon un autre mode de réalisation alternatif, l’invention a pour objet la méthode de traitement prophylactique et/ou thérapeutique, et/ou de prévention de l’hépatite C telle que définie ci-dessus comprenant l’administration à un patient qui en besoin de la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, ladite composition étant administrée une fois ou plusieurs fois espacées dans le temps. L’invention a également pour objet la méthode de traitement prophylactique et/ou thérapeutique, et/ou de prévention de l’hépatite B telle que définie ci-dessus comprenant l’administration à un patient qui en besoin de la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, ladite composition étant administrée une fois ou plusieurs fois espacées dans le temps.
Selon un autre mode de réalisation alternatif, l’invention a pour objet la méthode traitement prophylactique de l’hépatite C et/ou l’hépatite B telle que décrite ci-dessus.
Selon un autre mode de réalisation alternatif, l’invention a pour objet la méthode traitement thérapeutique de l’hépatite C et/ou l’hépatite B telle que décrite ci-dessus.
Selon un autre mode de réalisation alternatif, l’invention a pour objet la méthode traitement prophylactique et thérapeutique de l’hépatite C et/ou l’hépatite B telle que décrite ci-dessus.
Selon un autre mode de réalisation alternatif, l’invention a pour objet la méthode de prévention de l’hépatite C et/ou l’hépatite B telle que décrite ci-dessus.
Selon un autre aspect de l’invention, celle-ci a pour objet l’utilisation de la composition immunogène telle que décrite ci-dessus, notamment l’utilisation en tant que vaccin préventif, prophylactique et/ou thérapeutique de l’hépatite C et/ou de l’hépatite B, dans laquelle chacun des constituants du mélange de particules d’enveloppe sous-virales est administré simultanément, séparément ou étalé (graduellement/séquentiellement) dans le temps (kit-of-parts). Selon cet aspect, l’invention concerne l’utilisation :
# d’au moins deux particules d’enveloppe sous-virales choisies parmi six ; ou
# d’au moins deux particules d’enveloppe sous-virales choisies parmi six dont l’une au moins est A ou B ; ou
# d’au moins deux particules d’enveloppe sous-virales choisies parmi quatre dont l’une au moins est A ou B,
que ce soit sous forme de préparations combinées contenant l’ensemble desdites particules d’enveloppe sous-virales d’intérêt (i.e.le mélange), ou sous forme de préparations séparées pour l’administration combinée simultanée, séparée ou séquentielle de certaines préparations.
Autrement dit, l’invention a pour objet une composition immunogène comprenant au moins deux préparations de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable,
dans laquelle chaque préparation est caractérisée par la présence d’une particule choisie parmi les particules caractérisées par la présence :
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétée,
lesdites au moins deux préparations étant différentes, et lesdites préparations étant soit sous forme de préparations combinées soit sous forme de préparations séparées,
pour son utilisation dans le traitement prophylactique et/ou thérapeutique, et/ou dans la prévention de l’hépatite C et/ou de l’hépatite B, dans laquelle lesdites au moins deux préparations sont administrés simultanément, séparément ou séquentiellement dans le temps.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus comprenant au moins deux préparations de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable,
dans laquelle chaque préparation est caractérisée par la présence d’une particule choisie parmi les particules caractérisées par la présence :
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétée,
lesdites au moins deux préparations étant différentes, l’une au moins présentant soit une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée(A) soit une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée(B), et lesdites préparations étant soit sous forme de préparations combinées soit sous forme de préparations séparées,
pour son utilisation dans le traitement prophylactique et/ou thérapeutique, et/ou dans la prévention de l’hépatite C et/ou de l’hépatite B, dans laquelle lesdites au moins deux préparations sont administrés simultanément, séquentiellement ou séparément dans le temps.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus comprenant au moins deux préparations de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable,
dans laquelle chaque préparation est caractérisée par la présence d’une particule choisie parmi les particules caractérisées par la présence :
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée,
lesdites au moins deux préparations étant différentes, l’une au moins présentant soit une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée(A) soit une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée(B), et lesdites préparations étant soit sous forme de préparations combinées soit sous forme de préparations séparées,
pour son utilisation dans le traitement prophylactique et/ou thérapeutique, et/ou dans la prévention de l’hépatite C et/ou de l’hépatite B, dans laquelle lesdites au moins deux préparations sont administrés simultanément, séparément ou séquentiellement dans le temps.
Par « administrés simultanément », on entend que les susdites au moins deux préparations sont co-administrées en même temps au patient qui en a besoin. Avantageusement, ce mode de réalisation permet que les susdites au moins deux préparations soient sous forme de préparation combinée (= composition immunogène comprenant un mélange telle que précédemment décrite). Par « administrés séparément ou séquentiellement dans le temps », on entend que les susdites au moins deux préparations sont administrées à au moins deux moments différents. Ce mode de réalisation est en particulier mis en œuvre lorsque les susdites au moins deux préparations sont sous forme de préparations séparées.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition pour son utilisation telle que décrite ci-dessus, ladite composition comprenant trois préparations de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable,
dans laquelle chaque préparation est caractérisée par la présence d’une particule choisie parmi les particules caractérisées par la présence :
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée,
lesdites trois préparations étant différentes, l’une au moins présentant soit une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée(A) soit une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée(B), et lesdites préparations étant sous forme de préparations séparées,
pour son utilisation dans le traitement prophylactique et/ou thérapeutique, et/ou dans la prévention de l’hépatite C et/ou de l’hépatite B, dans laquelle lesdites trois préparations sont administrés séparément ou séquentiellement dans le temps. En particulier, l’invention a pour objet la composition immunogène pour son utilisation telle que décrite ci-dessus, dans laquelle :
# la première préparation est administrée au jour 0 ;
# la deuxième préparation est administrée au jour 14 ; et
# la troisième préparation est administrée au jour 28.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition pour son utilisation telle que décrite ci-dessus, dans laquelle lesdites préparations sont sous forme de préparations séparées et chacune desdites préparations comprend de 1 µg à 25 µg d’une particule d’enveloppe sous-virale. Par « de 1 µg à 25 µg d’une particule d’enveloppe sous-virale », on entend que la dose à laquelle est comprise ladite particule d’enveloppe sous-virale dans une préparation selon l’invention peut être comprise de 1 µg à 5 µg, de 1 µg à 10 µg, de 1 µg à 15 µg, de 1 µg à 20 µg, de 1 µg à 25 µg, de 5 µg à 25 µg, de 10 µg à 25 µg, de 15 µg à 25 µg, de 20 µg à 25 µg, de 5 µg à 15 µg ou de 10 µg à 20 µg. On entend également que cette dose, laquelle peut être considérée comme une dose unitaire, peut être égale à 1 µg, 2 µg, 3 µg, 4 µg, 5 µg, 6 µg, 7 µg, 8 µg, 9 µg, 10 µg, 11 µg, 12 µg, 13 µg, 14 µg, 15 µg, 16 µg, 17 µg, 18 µg, 19 µg, 20 µg, 21 µg, 22 µg, 23 µg 24 µg ou 25 µg.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition pour son utilisation telle que décrite ci-dessus, dans laquelle lesdites préparations sont sous forme préparation combinée, ladite préparation combinée comprenant de 5 µg à 50 µg, de préférence de 10 µg à 20 µg, du mélange des particules d’enveloppe sous-virales.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition pour son utilisation telle que décrite ci-dessus, dans laquelle lesdites préparations sont formulées pour être administrées (ou sont administrées) par l’une des voies suivantes : sublinguale, buccale, intra-trachéale, intraoculaire, intra-nasale, pulmonaire intra-auriculaire, parentérale, rectale, topique, transdermique, sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus pour son utilisation dans le traitement prophylactique de l’hépatite C et/ou l’hépatite B.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus pour son utilisation dans le traitement thérapeutique de l’hépatite C et/ou de l’hépatite B.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus pour son utilisation dans le traitement prophylactique et thérapeutique de l’hépatite C et/ou de l’hépatite B.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition immunogène telle que décrite ci-dessus pour son utilisation dans la prévention de l’hépatite C et/ou de l’hépatite B.
A tout égard, il convient de noter que les différents aspects de l’invention, tout comme les différents modes de réalisation de celle-ci sont interdépendants. Ces derniers peuvent donc être combinés entre eux à foison pour obtenir des aspects et/ou des modes de réalisation préférés de l’invention non explicitement décrits. Ceci est également valable pour l’ensemble des définitions fourni dans la présente description, lequel s’applique à tous les aspects de l’invention et ses modes de réalisation.
LISTE DES FIGURES
Les figures suivantes illustrent l’invention, sans pour autant en limiter sa portée.
La représente le protocole d’immunisation qui a été mis en place avec les différentes stratégies de vaccination.
Des groupes de douze lapins ont été immunisés trois fois par voie sous-cutanée avec des particules d’enveloppe sous-virales chimériques d’enveloppe du HBV-HCV avec l’adjuvant AddaVaxTM, présentant une glycoprotéine d’enveloppe E2 de génotype 1a (15 µg) ou avec différents mélanges constitués de quantités égales de particules chimériques présentant des glycoprotéines d’enveloppe E1 ou E2 de génotype 1a, 3a et 4a du virus HCV, aux jours 0, 14 et 28. Des groupes de six lapins ont été immunisés avec l’adjuvant AddaVaxTMseul ou avec l’EngerixTM, un vaccin contre le virus HBV disponible dans le commerce (15 μg), lesquels ont été utilisés comme témoins négatifs et positifs, respectivement. Des échantillons de sérum ont été prélevés sur des lapins à différents moments (jours 0, 14, 28, 42 et 56), pour la caractérisation des réponses des anticorps et l’évaluation du potentiel de neutralisation des anticorps induits par la vaccination.
La représente l’analyse des réponses humorales induites par les différentes stratégies de vaccination.
Les réponses spécifiques anti-E1/anti-E2 et anti-HBsAg ont été évaluées dans des sérums de lapin à l’aide de tests ELISA internes et d’un test immunologique de routine (AbbottTMLaboratories), respectivement. Les résultats sont exprimés sous forme de différence de densité optique (anti-E1- ou anti-E2-β-Gal) et de titre anti-HBsAg (mUI/mL), respectivement.
La représente le potentiel de neutralisation des anticorps induits par les différentes stratégies de vaccination.
Les propriétés de neutralisation croisée contre les HCVcc des anticorps anti-HCV induits par les différentes stratégies de vaccination ont été évaluées sur les six échantillons de sérum de lapin présentant les plus fortes réponses humorales à la vaccination dans chaque groupe. Des dilutions quintuples d’échantillons de sérum de lapin prélevés aux jours 0 et 56 ont d’abord été incubées avec des glycoprotéines d’enveloppe du HCVcc dérivées d’isolats de génotypes 1a, 1b, 2a, 3a et 4a pendant 1 heure à 37°C, et ont ensuite été utilisées pour infecter des cellules Huh7.5 pendant 6 heures. Les niveaux d’infection ont été déterminés après 48 heures d’incubation à 37°C, dans un test de coloration FFU8. Les FFU ont été comptés au microscope, et le pourcentage de neutralisation en présence du sérum post-immun (jour 56) a été comparé à celui en présence du sérum pré-immun (jour 0) du même lapin. Le test a été effectué en trois exemplaires, et les résultats sont exprimés sous forme de valeurs moyennes. Des analyses statistiques ont été effectuées avec des tests non paramétriques de Mann-Whitney. * p<0,05 ; ** p<0,005 ; *** p<0,005 ; ns = non significatif.
L’exemple suivant illustre l’invention, sans pour autant en limiter sa portée.
EXEMPLE 1 – LE MELANGE DE PARTICULES DE DIFFERENTS GENOTYPES DU VIRUS HCV AUGMENTE LA CAPACITE DU VACCIN HBV-HCV A INDUIRE LA PRODUCTION MASSIVE D’ANTICORPS NEUTRALISANTS
CROSS
-REACTIFS
MATERIELS ET METHODES
Production des particules vaccinales
Des particules d’enveloppe chimériques HBV (sous-typeadw) – HCV (génotype 1a) portant les protéines E1 (particules E11aS) ou E2 (particules E21aS) du virus HCV sur toute leur longueur ont été produites et purifiées comme décrit précédemment (Demande internationale No. PCT/FR2009/051142 déposée le 16 juin 2009). En utilisant la même stratégie, il a été conçu, produit et purifié de nouvelles particules de vaccin portant les glycoprotéines E1 ou E2 du virus HCV de génotype 3a ou 4a nommées E13aS, E23aS, E14aS et E24aS.
En lien avec la Description ci-dessus, il convient de noter que les particules d’enveloppe chimériques E14aS, E24aS, E21aS, E23aS, E13aS et E11aS correspondent respectivement aux particules d’enveloppe chimériques caractérisée par la présence :
- d’une protéine native SHBVde séquence SEQ ID NO : 2 et d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 18 ;
- d’une protéine native SHBVde séquence SEQ ID NO : 2 et d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 20
- d’une protéine native SHBVde séquence SEQ ID NO : 2 et d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 22 ;
- d’une protéine native SHBVde séquence SEQ ID NO : 2 et d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 24 ;
- d’une protéine native SHBVde séquence SEQ ID NO : 2 et d’une protéine fusion E1HCV 1a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 26 ; et
- d’une protéine native SHBVde séquence SEQ ID NO : 2 et d’une protéine fusion E1HCV 3a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 28.
Immunisation de lapins
New Zealand
Quatre groupes de 12 lapins ont été vaccinés par voie sous-cutanée aux jours 0, 14 et 28, avec 15 µg d’adjuvant immunogènes AddaVaxTM(InvivogenTM), quantifiés par ELISA HBsAg, comme suit : (i) uniquement des particules E21aS ; (ii) des quantités égales de particules E21aS, E23aS et E24aS (5 µg de chaque particule) ; (iii) des quantités égales de particules E11aS, E21aS, E13aS, E23aS, E14aS et E24aS (2,5 µg de chaque particule) ; (iv) ou des quantités égales de particules E14aS et E24aS (7,5 µg de chaque particule). Des groupes de six lapins immunisés avec l’adjuvant AddaVaxTMseul ou avec EngerixTM(produit GSKTM), un vaccin contre le virus HBV disponible dans le commerce, ont été utilisés comme témoins négatifs et positifs, respectivement. Des échantillons de sérum ont été prélevés sur des lapins à différents moments (jours 0, 14, 28, 42 et 56) pour la caractérisation des réponses humorales. Les vaccinations ont été réalisées par Agro-Bio (La Ferté-Saint-Aubin, France), une société accréditée par les autorités françaises pour la réalisation de protocoles sur les animaux de laboratoire conformément à la directive européenne 2010/63/UE. Le protocole a été approuvé par le Comité d’éthique d’Agro-Bio C2A-99 (Ministère de la recherche, accord B45-146-01).
Analyse des réponses humorales anti-HBsAg et Anti-E1/E2
Des tests anti-HBsAg et anti-E1/E2 ont été effectués et analysés comme décrit en détail précédemment (Demande internationale No. PCT/FR2009/051142 déposée le 16 juin 2009). Brièvement, les anticorps anti-HBsAg ont été quantifiés avec le système ARCHITECTTM(AbbottTMLaboratories). Les réponses anti-E1 et anti-E2 ont été évaluées à l’aide d’ELISA internes basés sur l’utilisation de phases solides constituées de lysats (ou de mélanges de lysats) appropriés de cellules de rein de bébé hamster (BHK-21) exprimant les mêmes protéines E1 ou E2 du HCV de génotypes 1a, 3a et 4a que celles exposées à la surface des particules de vaccin, qui ont été comparées à des cellules témoins exprimant la β-galactosidase (β-gal). Pour chaque échantillon de sérum testé, la valeur de la densité optique (DO) obtenue pour les puits avec capture par la protéine β-gal a été soustraite de celle obtenue pour les puits avec capture par les protéines E1 ou E2.
Test de neutralisation du virus HVC en culture cellulaire
Du virus HCV en culture cellulaire (HCVcc) hébergeant des glycoprotéines d’enveloppe du HCV dérivées des isolats de génotype 1a (JFH1/H77), 1b (JFH1/J4), 2a (JFH1), 3a (JFH1/S52) et 4a (JFH1/ED43) a été utilisé pour évaluer et comparer le potentiel de neutralisation des anticorps anti-protéines d’enveloppe du virus HCV présents dans les échantillons de sérum de lapins avant et après la vaccination. Les niveaux d’infection ont été déterminés à l’aide d’un test de coloration des unités formatrices de foyer (FFU). Les différences observées dans la capacité d’induction des anticorps neutralisants entre les stratégies de vaccination pour un génotype donné ont été analysées statistiquement avec des tests non paramétriques de Mann-Whitney. Une valeur p < 0,05 a été considérée comme statistiquement significative.
RESULTATS
Toutes les particules du vaccin HBV-HCV (qu’elles soient utilisées seules ou dans des cocktails, ) ont induit des réponses anticorps spécifiques contre les protéines d’enveloppe des virus HCV et HBV ( ). Après l’évaluation des niveaux d’anticorps anti-HBsAg, anti-E1 et anti-E2 chez les animaux immunisés ( ), il a été étudié les propriétés neutralisantes des six sérums de lapin induisant les plus fortes réponses humorales à la vaccination dans chaque groupe (les lapins présentant les niveaux les plus élevés d’anticorps anti-HBsAg étaient également ceux présentant les niveaux les plus élevés d’anticorps anti-E1 et anti-E2). Les tests de neutralisation du virus HCV ont été effectués avec des glycoprotéines d’enveloppe du virus HCV hébergeant des glycoprotéines dérivées de différentes souches hétérologues de génotype 1a, 1b, 2a 3a et 4a ( ). Ces expériences ont démontré que l’immunisation avec un cocktail de particules E2S portant les glycoprotéines d’enveloppe E2 du virus HCV de génotypes 1a, 3a et 4a augmentait significativement l’induction d’anticorps aux propriétés neutralisantes larges (valeurs p = 0,026 et 0,005 pour la neutralisation des génotypes 3 et 4 du virus HCV, respectivement, par rapport à celles des animaux immunisés avec un cocktail de particules E21aS + E23aS + E24aS et des animaux immunisés avec des particules E21aS uniquement) ( ). Cela a été confirmé par des essais de neutralisation supplémentaires utilisant des dilutions en série de sérums de lapin, montrant que ces larges propriétés neutralisantes des anticorps induits ont également été observées pour des dilutions sériques élevées (non montrés). Par ailleurs, et c’est important, l’utilisation d’un cocktail de particules E21aS + E23aS + E24aS n’a pas réduit de manière significative la capacité du vaccin à induire des anticorps neutralisants contre les génotypes 1a et 1b du virus HCV, par rapport au vaccin prototype E21aS. Néanmoins, un cocktail de seulement deux types de particules, portant séparément les glycoprotéines E1 et E2 du génotype 4a du virus HCV, a été identifié comme le meilleur candidat vaccin pour la protection contre ce génotype particulier. Il a clairement donné la meilleure protection dans les comparaisons entre les animaux immunisés avec le cocktail de particules E14aS + E24aS et les animaux immunisés avec le vaccin prototype E21aS (valeur p = 0,005, ). Cependant, même si la valeur médiane de neutralisation obtenue chez les animaux immunisés avec le cocktail de particules E14aS + E24aS était supérieure à celle des animaux immunisés avec le cocktail de particules E21aS + E23aS + E24aS (81,5% contre 70,5%, ), la différence n’était pas significative, probablement en raison du petit nombre d’animaux.
Ces données ont finalement démontré qu’un vaccin bivalent HBV/HCV à base de particules d’enveloppe sous-virales présentant des glycoprotéines d’enveloppe du virus HCV du même ou de différents génotypes peut être utilisé, selon diverses stratégies de combinaison, pour induire une large protection neutralisante contre différents génotypes du virus HCV (i.e.au moins contre les génotypes 1a, 1b, 2a, 3a et 4a du virus HCV) ou pour fournir une protection contre la prévalence d’un génotype particulier dans une région donnée.
En conclusion, le mélange de différentes particules d’enveloppe sous-virales à base de protéines d’enveloppe peut être utilisé pour optimiser le vaccin prophylactique bivalent HBV-HCV, notamment en cas d’exposition potentielle à différents génotypes du virus HCV, surtout que ce vaccin est simple à produire. En effet, il peut être traité par des procédures industrielles adaptées à celles établies pour le vaccin contre le virus HBV, et il peut ainsi contribuer à contrôler l’épidémie mondiale d’hépatite C.
Claims (12)
- Composition immunogène comprenant un mélange de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable,
dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence d’au moins deux particules choisies parmi les particules caractérisées par la présence :- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée; ou
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée,
ladite protéine native SHBVétant la protéine S sauvage de l’antigène de surface d’un isolat du virus de l’hépatite B (HBV), et
lesdites protéines fusion E1HCV 4a– SHBV délétée, E2HCV 4a– SHBV délétée, E2HCV 1a– SHBV délétéeet E2HCV 3a– SHBV délétéeétant des protéines de fusion immunogènes comprenant au moins les deux peptides suivants :
# ducôté C-terminal, un premier peptide constitué :
- de la séquence d’acides aminés de la protéine S d’un isolat du virus humain de l’hépatite B, laquelle protéine S est délétée de son domaine transmembranaire situé à son extrémité N-terminale ; ou
- d’une séquence d’acides aminés présentant un pourcentage d’identité d’au moins 91%, notamment d’au moins 93%, particulièrement d’au moins 95%, et plus particulièrement d’au moins 97%, avec ladite séquence d’acides aminés de la protéine S délétée en N-terminal, sous réserve que ladite séquence d’acides aminés conserve la capacité à former des particules d’enveloppe sous-virales non infectieuses, immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite B ; ou
- de la séquence d’acides aminés d’un variant naturel issue d’un autre isolat du virus HBV ou d’un variant synthétique dérivée de ladite séquence d’acides aminés de la protéine S délétée en N-terminal, sous réserve que ladite séquence d’acides aminés conserve la capacité à former des particules d’enveloppe sous-virales non infectieuses, immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite B, et
# ducôté N-terminal, un second peptide constitué :
- de la séquence d’acides aminés du domaine transmembranaire et de l’ectodomaine d’une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C (HCV) ; ou
- d’une séquence d’acides aminés présentant un pourcentage d’identité d’au moins 78%, notamment d’au moins 80%, particulièrement d’au moins 85%, et plus particulièrement d’au moins 90%, avec ladite séquence d’acides aminés du domaine transmembranaire et de l’ectodomaine d’une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C, sous réserve que ladite séquence d’acides aminés conserve la capacité à former des particules d’enveloppe sous-virales non infectieuses, immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite C ; ou
- de la séquence d’acides aminés d’un variant naturel issue d’un isolat du virus HCV, ou d’un variant synthétique dérivée de ladite séquence d’acides aminés du domaine transmembranaire et de l’ectodomaine d’une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C, sous réserve que ladite séquence d’acides aminés conserve les propriétés immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite C,
ladite protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C étant choisie parmi la protéine E1 du virus HCV de génotype 4a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 4a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 1a et la protéine E2 du virus HCV de génotype 3a. - Composition immunogène selon la revendication 1, dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence des particules caractérisées par la présence :
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée; et
- d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée.
- Composition immunogène selon la revendication 1, dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence des particules caractérisées par la présence :
B. d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée;
C. d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée; et
D. d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée. - Composition immunogène selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle ladite protéine native SHBVest choisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 2, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 2.
- Composition immunogène selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, dans laquelle :
# ladite protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétéeest choisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 18, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 18 ;
# ladite protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétéeest choisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 20, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 20 ;
# ladite protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétéeest choisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 22, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 22 ; et
# ladite protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétéeest choisie parmi les séquences ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 24, de préférence au moins 90% d’identité avec la séquence SEQ ID NO : 24. - Composition immunogène selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, dans laquelle ledit mélange est caractérisé :
# par la présence des particules caractérisées par la présence :- d’une protéine native SHBVde séquence SEQ ID NO : 2 et d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 18 ; et
- d’une protéine native SHBVde séquence SEQ ID NO : 2 et d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 20,
# des particules caractérisées par la présence :
B. d’une protéine native SHBVde séquence SEQ ID NO : 2 et d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 20 ;
C. d’une protéine native SHBVde séquence SEQ ID NO : 2 et d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 22 ; et
D. d’une protéine native SHBVde séquence SEQ ID NO : 2 et d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétéede séquence SEQ ID NO : 24. - Composition immunogène selon l’une quelconque des revendications 1 à 6, ladite composition comprenant de 5 µg à 50 µg, de préférence de 10 µg à 20 µg, dudit mélange de particules d’enveloppe sous-virales, chimères, immunogènes et non infectieuses.
- Composition immunogène selon l’une quelconque des revendications 1 à 7, ladite composition étant formulée pour être administrée par l’une des voies suivantes : sublinguale, buccale, intra-trachéale, intraoculaire, intra-nasale, pulmonaire intra-auriculaire, parentérale, rectale, topique, transdermique, sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse.
- Méthode de préparation de la composition immunogène selon l’une quelconque des revendications 1 à 8 comprenant au moins les étapes suivantes :
i. optionnellement, une étape de production d’au moins deux lignées cellulaires choisies parmi :- une lignée cellulaire capable de sécréter des particules d’enveloppe sous-virales caractérisées par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée;
- une lignée cellulaire capable de sécréter des particules d’enveloppe sous-virales caractérisées par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée;
- une lignée cellulaire capable de sécréter des particules d’enveloppe sous-virales caractérisées par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée; et
- une lignée cellulaire capable de sécréter des particules d’enveloppe sous-virales caractérisées par la présence d’une protéine native SHBVet d’une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée,
ii. une étape de culture desdites au moins deux lignées cellulaires d’intérêt pour la production des particules d’enveloppe sous-virales chimères, immunogènes non infectieuses d’intérêt ;
iii. une étape de purification des particules d’enveloppe sous-virales d’intérêt à partir du milieu de culture collecté pour obtenir une solution de chacune desdites particules d’enveloppe sous-virales d’intérêt ; et
iv. une étape de mélange desdites solutions de chacune desdites particules d’enveloppe sous-virales d’intérêt pour obtenir la composition immunogène selon l’une quelconque des revendications 1 à 8. - Composition immunogène comprenant un mélange d’acides nucléiques en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable, dans laquelle ledit mélange est caractérisé par la présence d’un acide nucléique codant une protéine native SHBVet d’au moins deux acides nucléiques choisis parmi :
- un acide nucléique codant une protéine fusion E1HCV 4a– SHBV délétée;
- un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 4a– SHBV délétée;
- un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 1a– SHBV délétée; et
- un acide nucléique codant une protéine fusion E2HCV 3a– SHBV délétée,
ladite protéine native SHBVétant la protéine S sauvage de l’antigène de surface d’un isolat du virus de l’hépatite B (HBV), et
lesdites protéines fusion E1HCV 4a– SHBV délétée, E2HCV 4a– SHBV délétée, E2HCV 1a– SHBV délétéeet E2HCV 3a– SHBV délétéeétant des protéines de fusion immunogènes chacune codée par un acide nucléique comprenant au moins les deux séquences suivantes :
#du côté 3’,
- une première séquence d’acides nucléiques codant pour la protéine S délétée de son domaine transmembranaire situé à son extrémité N-terminale, d’un isolat du virus de l’hépatite B ; ou
- d’une séquence d’acides nucléiques présentant une homologie d’au moins 91%, notamment d’au moins 93%, particulièrement d’au moins 95%, et plus particulièrement d’au moins 97%, avec ladite séquence d’acides nucléiques de la protéine S délétée en N-terminal, sous réserve que la protéine codée par ladite séquence d’acides nucléiques conserve la capacité à former des particules sous-virales non infectieuses, immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite B ; ou
- de la séquence d’acides nucléiques d’un variant naturel issue d’un autre isolat du virus HBV, ou d’un variant synthétique, dérivée d’une séquence d’acides nucléiques de ladite protéine S délétée en N-terminal, sous réserve que la protéine codée par ladite séquence d’acides nucléiques conserve la capacité à former des particules sous-virales non infectieuses, immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite B, et,
#du côté 5’ de la première séquence,
- une seconde séquence d’acides nucléiques codant pour le domaine transmembranaire et l’ectodomaine d’au moins une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C ; ou
- d’une séquence d’acides nucléiques présentant une homologie d’au moins 78%, notamment d’au moins 80%, particulièrement d’au moins 85%, et plus particulièrement d’au moins 90%, avec ladite séquence d’acides nucléiques codant pour le domaine transmembranaire et l’ectodomaine d’au moins une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C, sous réserve que la protéine codée par ladite séquence d’acides nucléiques conserve les propriétés immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite C ; ou
- de la séquence d’acides nucléiques d’un variant naturel issue d’un isolat du virus HCV, ou d’un variant synthétique, dérivée de ladite séquence d’acides nucléiques codant pour le domaine transmembranaire et l’ectodomaine d’au moins une protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C, sous réserve que la protéine codée par ladite séquence d’acides nucléiques conserve les propriétés immunogènes vis-à-vis du virus de l’hépatite C,
ladite protéine d’enveloppe d’un isolat du virus de l’hépatite C étant choisie parmi les séquences codant la protéine E1 du virus HCV de génotype 4a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 4a, la protéine E2 du virus HCV de génotype 1a et la protéine E2 du virus HCV de génotype 3a. - Composition immunogène selon l’une quelconque des revendications 1 à 8 et 10 pour son utilisation dans le traitement prophylactique et/ou thérapeutique, et/ou dans la prévention de l’hépatite C.
- Composition immunogène selon l’une quelconque des revendications 1 à 8 et 10 pour son utilisation dans le traitement prophylactique et/ou thérapeutique, et/ou dans la prévention de l’hépatite B.
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