FR3050112A1 - Utilisation de l'acide fenofibrique dans le traitement des maladies hepatiques - Google Patents

Abstract

L'invention concerne une composition comprenant comme principe actif unique l'acide fénofibrique ou de l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables destinée à être utilisée dans le traitement des maladies hépatiques. Le domaine de l'invention concerne le traitement et la prévention de maladies hépatiques, telles que la stéatose hépatique non alcoolique (NAFLD), la stéatohépatite non alcoolique (NASH), les fibroses hépatiques ou les cirrhoses.

Description

DOMAINE TECHNIQUE

La présente invention concerne le traitement et la prévention de maladies hépatiques, telles que la stéatose hépatique non alcoolique (NAFLD), la stéato-hépatite non alcoolique (NASH), les fibroses hépatiques ou les cirrhoses. L’invention concerne plus particulièrement l’utilisation de l’acide fénofibrique dans le traitement et la prévention de la NASH.

Le foie est le second plus large organe du corps humain. Il exerce de nombreuses fonctions complexes dont : i) la défense contre les maladies et infections, ii) l'élimination des toxines du corps (poisons), comme l'alcool, iii) le contrôle des niveaux de cholestérol, iv) l’aide à la coagulation du sang, v) la libération de la bile qui décompose les graisses et aide à la digestion, et vi) le métabolisme des corps étrangers et particulièrement des médicaments administrés par voie orale.

Les maladies du foie ne causent généralement pas de signes ou de symptômes évidents jusqu'à ce qu'elles soient à un stade avancé et que le foie soit endommagé. Elles peuvent être héréditaires (génétiques), ou causées par une variété de facteurs qui endommagent le foie, tels que les virus et la consommation excessive d'alcool. L'obésité est aussi associée à des lésions hépatiques. Au fil du temps, les dommages peuvent provoquer une scarification du foie, ce qui peut conduire à une insuffisance hépatique susceptible de menacer le pronostic vital du patient. Les symptômes des maladies du foie sont la faiblesse et la fatigue, la perte de poids, des nausées, des vomissements et une coloration jaunâtre de la peau (jaunisse).

La stéatose hépatique non alcoolique (NAFLD) est l'accumulation de graisse dans les hépatocytes qui n’est pas due à la consommation d’alcool. Le foie contient un peu de graisse mais si plus de 5 à 10% du poids du foie est gras, il est alors appelé un foie « gras » : c’est la stéatose. La NAFLD tend à se développer chez les personnes en surpoids ou obèses ou qui ont le diabète, un taux élevé de cholestérol ou de triglycérides. Une perte de poids rapide et des mauvaises habitudes alimentaires peuvent également conduire à une stéatose hépatique non alcoolique (NAFLD.) Cependant, certaines personnes développent une NAFLD même si elles ne présentent pas de facteurs de risque identifiables.

La stéatose hépatique non alcoolique NAFLD n'entraîne souvent aucun symptôme. Lorsque les symptômes apparaissent, il peut s’agir de fatigue, de faiblesse, de perte de poids ou d'appétit, de nausées, de douleurs abdominales, de jaunissement de la peau et des yeux (jaunisse), de démangeaisons, d’une accumulation de liquide et d’un gonflement des jambes (œdème) et de l'abdomen (ascite), et aussi d’une confusion mentale.

La forme la plus grave de la stéatose hépatique non alcoolique est appelée la stéato-hépatite non alcoolique ou NASH. La stéato-hépatite non alcoolique provoque le gonflement du foie et l’endommage. Elle se développe chez les mêmes personnes à risque que pour la NAFLD bien que, là aussi, certaines personnes la contractent sans présenter de facteurs de risque.

La plupart des personnes ayant cette stéato-hépatite non alcoolique sont âgés entre 40 et 60 ans, et il s’agit plus de femmes que d’hommes. La stéato-hépatite ressemble à la maladie alcoolique du foie (AFLD), mais survient chez les personnes qui boivent peu ou généralement pas d'alcool. La progression de la NASH peut prendre des années. Le processus de la maladie peut s’arrêter et, dans certains cas, régresser de lui-même sans traitement spécifique. Par contre, le processus peut aussi insidieusement se détériorer, causant des cicatrices naissantes appelées « fibrose » qui s’accumulent dans le foie. Dès que la fibrose s’amplifie, la cirrhose se développe ; le foie devient sérieusement endommagé, durci, et incapable de fonctionner normalement.

Les stéatoses hépatiques et stéato-hépatites non alcooliques sont de plus en plus fréquentes, du fait d’un plus grand nombre d'adultes obèses. L'obésité contribue également au diabète et à un taux de cholestérol élevé, ce qui peut compliquer davantage la santé de quelqu'un souffrant de la NASH.

ETAT DE LA TECHNIQUE

Actuellement, il n'y a pas encore de traitements médicaux pour la stéatose hépatique non alcoolique et la stétato-hépatite non alcoolique. Seule une alimentation saine et de l'exercice physique régulier peuvent aider à prévenir des dommages du foie ou bien l'inverser, dans les premiers stades de la maladie.

Les causes de la maladie, même si elles sont fortement corrélées à l'obésité et à la consommation excessive de sucres sont, comme souvent dans les maladies métaboliques, multifactorielles. Les prédispositions génétique ou épigénétique sont évidentes et certains groupes ethniques sont nettement plus exposés que d’autres. L’association de plusieurs pathologies et troubles métaboliques telles que l’obésité, le diabète sucré, la cholestérolémie, la lipidémie, l’uricémie, l’hypertension contribuent à la formation du syndrome métabolique ou cardiométabolique dont l’expression hépatique est la NASH.

La stéato-hépatite non alcoolique NASH est une maladie complexe dont on ne commence qu’à peine à comprendre les contours et dont la définition tout comme les indices d’évolution de la maladie (scores NAS) sont susceptibles de changer avec l'évolution des connaissances scientifiques. Elle est la conséquence d'un trouble métabolique qui trouve son socle dans le foie « gras ».

En l'absence de traitements approuvés et efficaces, les laboratoires testent donc des nouveaux médicaments dont les stratégies et mécanismes d’action sont variés. Un certain nombre de projets sont en développement dont un résumé non exhaustif est donné ci-après :

La demande WO2015083164A (Galmed Pharmaceuticals) décrit des compositions pharmaceutiques de sels d’aramchol qui sont des amides conjugués d'acide arachidique et d'acide 3-aminocholique, appartenant à la famille des FABAC (molécules de synthèse d’acides gras et d’acide biliaire conjugués). Les FABAC sont connus pour être efficaces dans la réduction des taux de cholestérol dans le sang et le taux de lipides dans le foie (stéatose) mais aussi dans l'amélioration des paramètres métaboliques associés à la maladie du foie « gras » et la stéato-hépatite non alcoolique.

Dans cette demande, Galmed Pharmaceuticals décrit une sélection de nouveaux sels d’aramchol qui améliore leur solubilité et absorption, et donc, leur biodisponibilité. Les sels d’aramchol aminés, en particulier les sels de méglumine, de lysine et de trométhamine, ont été sélectionnés après une étude de perméabilité sur des rats. Cependant, la présente demande ne divulgue pas de résultat relatif à l’utilisation de sels aminés d’aramchol dans le traitement de la NAFLD et de la NASH.

La demande US2015/0374794A de Novo Nordisk se rapporte à un dérivé du glucagon utilisé dans le traitement du diabète et de la stéatose hépatique. Novo Nordisk a obtenu des résultats dans la régression de la NASH avec le médicament correspondant, Victoza®. Les résultats sont publiés dans une étude de 52 patients, mais les travaux ont été faits avec l'ancienne définition des paramètres de réversion de la NASH, qui accepte la suppression de la stéatose en tant que critère.

Intercept Pharmaceuticals, avec son médicament OCA (acide obéticholique), analogue et agoniste de choix du récepteur farnésoïde X (FXR), a démontré une action sur la stéatose, l'inflammation et la fibrose dans une étude de phase Mb « FLINT » (réalisée sur 283 patients), sans parvenir à un résultat significatif dans la réversion de la NASH.

Par ailleurs, l’acide obéticholique (OCA) n'a pas pu confirmer d’effets sur la NASH et la fibrose dans l'étude de phase Mb au Japon qui s’en suit, ce qui discrédite l'efficacité de la molécule dans le traitement de la NASH et de la fibrose. Par ailleurs, l’acide obéticholique a démontré de nombreux effets secondaires, dont un prurit important et en particulier une augmentation du cholestérol, ce qui n’est pas acceptable pour les patients présentant un risque cardiovasculaire. D’autres laboratoires ont une approche différente et visent l'inflammation et la ballonisation. Le brevet US9115073B2 met en évidence une molécule élaborée par Genfit, qui présente des propriétés agonistes intrinsèques des récepteurs activés par les proliférateurs de peroxysomes (en anglais, peroxisome proliferator-activated receptor - voir précisions peu après). Ces récepteurs sont des protéines de la superfamille des récepteurs nucléaires liant naturellement les lipides et agissant comme facteur de transcription des gènes cibles impliqués notamment dans le métabolisme et l'adipogenèse. Les propriétés agonistes de cette molécule en font un candidat pour le traitement de troubles métaboliques et / ou des maladies inflammatoires, et en particulier les maladies périphériques et centrales associées au syndrome métabolique, dont la stéato-hépatite non alcoolique.

Ce brevet a donné lieu à différentes études, notamment une étude clinique chez des patients atteints de la NASH. La sévérité de la NASH est évaluée suivant des critères histologiques donnant lieu à un indice/score NAS. Plus l’indice/score NAS est élevé plus l’expression histologique de la NASH est sévère. Lors de cette étude, la relation de causalité entre les effets métaboliques de la molécule et la réponse histologique n’a pas été évaluée. De plus, peu de différences ont été observées par comparaison au placebo dans les groupes de patients ayant un indice/score NAS inférieur à 4. D’autres médicaments expérimentaux ciblent seulement un stade avancé de fibrose et la cirrhose. Gilead Sciences étudie deux molécules (simtuzumab et GS-4997) pour le traitement de la NASH et de la cholangite sclérosante primitive (CSP/PSC). Le simtuzumab est un anti-corps monoclonal anti-LOXL2 testé dans le cadre d’une étude de phase Mb mais dont les résultats ne sont pas encore connus. Le GS-4997 quant à lui, un inhibiteur ASK1 (apoptosis signal-regulating kinase en anglais) est décrit dans les brevets US8440665B2 et US8927582 B2. La molécule est actuellement en cours d'évaluation dans une étude de phase II des patients atteints de la NASH et, de fibrose hépatique modérée à sévère. Des informations sont données dans la demande US 2015/0342943 Al pour le traitement des maladies du foie.

La demande WO2015143367 (Tobira Therapeutics) décrit un nouveau type de médicament, le cénicriviroc (ou CVC), un inhibiteur d'entrée du HIV qui bloque l’accès au récepteur CCR5, en tant que candidat pour le traitement de la NASH chez des sujets adultes atteints de fibrose du foie. L'étude de phase II (« CENTAUR ») est en cours de réalisation. Le cénicriviroc est administré par voie orale à 150 mg, de manière quotidienne le matin avec de la nourriture.

Le brevet US8658787 B2 (Galectin Therapeutics) se rapporte à une formulation de polysaccharide contenant du galactose, notamment le galacto-rhamnogalacturonate GR-MD-02. Dans l'étude de phase II, le GR-MD-02 est administré selon des doses jusqu'à 8 mg/kg /semaine. L'achèvement de l'étude n’est pas prévu avant 2018. La demande WO2015/ 175381 Al (Conatus Pharmaceuticals) traite des complications liées aux maladies chroniques du foie avec des inhibiteurs de caspases, comme remricassan. Conatus Pharmaceuticals indique que l'apoptose et l'activité caspase sont corrélées avec le stade de la cirrhose. Une étude clinique est en cours chez les patients atteints de cirrhose du foie afin de déterminer si des doses de 25mg d’emricassan pourraient avoir une utilité clinique en réduisant le taux d'apoptose chez les patients cirrhotiques, et ainsi potentiellement diminuer la progression de la maladie comme déterminée par des biomarqueurs.

La demande de brevet WO2013/169648A concerne une composition pharmaceutique combinant plusieurs principes actifs, notamment un inhibiteur de DGAT1, en combinaison avec un médicament diminuant le taux de triglycérides dans le sang, et un ou plusieurs excipients. Cette demande évoque l’utilisation de l’acide fénofibrique en combinaison, comme molécule permettant de diminuer le taux de triglycéride. De plus, l’utilisation dans le cadre du traitement de la NAFLD est citée. Les principes actifs sont utilisés en combinaison, afin de cibler un maximum de mécanismes physiologiques visant à diminuer le taux de triglycéride dans le sang, aboutissant à une composition difficile à mettre en oeuvre, dont la réalisation est complexe et coûteuse. Enfin, DGAT1 catalyse la synthèse de triglycérides, son inhibition diminue donc la synthèse de triglycérides, l’inhibiteur de DGAT1 est associé à un médicament diminuant le taux de triglycérides dans le sang. La NAFLD correspond à une accumulation d’acide gras dans le foie. Une hypertriglycéridémie n’est qu’un phénomène associé à la maladie et une baisse de triglycéride dans le sang n’équivaut pas à une guérison de la maladie.

La demande de brevet EP2296659 concerne le traitement de l’obésité, le diabète de type 2, les maladies cardiaques et le cancer. Elle concerne une combinaison d’un inhibiteur de DGAT1 et d’un agoniste des PPAR-α. Cette demande évoque l’utilisation de l’acide fénofibrique en combinaison, et le traitement de la NASH et de la NAFLD. Cependant, aucune donnée, ni aucun résultat relatif à l’utilisation de la composition dans le cadre de la NASH ne sont donnés. La demande de brevet ne vise qu’à diminuer le taux de triglycéride dans le sang et à traiter la dyslipidémie, qui ne sont que des phénomènes périphériques à la majorité des maladies hépatiques (notamment l’obésité) et ne vise pas une méthode de traitement des maladies hépatiques, tel que la NAFLD ou la NASH.

En résumé, ces deux dernières demandes de brevet concernent la diminution des triglycérides dans le sang et le contrôle de la dyslipidémie qui sont des paramètres périphériques aux maladies hépatiques, mais n’apporte pas de solution aux lésions des cellules du foie.

Une conclusion sur ces traitements candidats permet de souligner que les principaux inconvénients de ces médicaments expérimentaux résident dans le fait qu'ils n’agissent que sur les conséquences de l'inflammation, et non sur leurs causes. Dès l'arrêt du traitement, les maladies du foie évoluent à nouveau. Cibler toutes les conséquences de l’inflammation, donne lieu à un traitement lourd des patients, et il existe le besoin d’un traitement simple, permettant le traitement des maladies hépatiques et notamment de la NASH et de l’ensemble des conséquences liées à cette pathologie. Le traitement doit être si possible simple d’administration, présenter un coût de fabrication avantageusement moindre. Plus encore, tous les médicaments existants ne sont encore qu’au stade de développement clinique et leurs effets sont actuellement discutables. Il existe donc le besoin d’une composition présentant des résultats satisfaisants dans le traitement de la NASH, et couvrant toutes les formes d’expressions de cette maladie, de la moins sévère à la plus sévère.

En conséquence, il existe actuellement un besoin non pourvu de médicaments suffisamment sûrs et efficaces, facile d’administration, économique dans sa fabrication, pour traiter ou prévenir les patients atteints de maladies hépatiques, telles que la stéatose hépatique non alcoolique, la stéato-hépatite non alcoolique, la fibrose hépatique ou la cirrhose.

Cependant, alors que la plupart des recherches sont axées sur des combinaisons de molécules ciblant un maximum de phénomènes physiologiques périphériques aux maladies hépatiques, la demanderesse a trouvé, de manière surprenante que l’utilisation de l'acide fénofibrique seul a un potentiel intéressant dans la prévention et le traitement de la stéatose hépatique non alcoolique NAFLD, de la stéato-hépatite non alcoolique NASH, de la fibrose hépatique et de la cirrhose. L'acide fénofibrique appartient à la famille des acides fibriques qui sont des acides carboxyliques amphiphiles caractérisés par la présence d'un groupe terminal carboxyle (COOH), avec des propriétés polaires et non polaires. A l’origine, la plupart des fibrates sont fabriqués et commercialisés en grande partie sous forme d'esters, tels que : le clofibrate, le fénofibrate. Les fibrates sont utilisés depuis 50 ans dans la thérapie de nombreuses formes de l'hypercholestérolémie, en association ou non avec des statines. Bien qu'ils en soient moins efficaces pour abaisser le taux de cholestérol LDL (mauvais cholestérol) et de triglycérides, la capacité des fibrates pour augmenter le taux de cholestérol HDL (bon cholestérol) et abaisser le niveau de triglycérides semble réduire la résistance à l'insuline lorsque la dyslipidémie est associée à d'autres caractéristiques du syndrome métabolique (hypertension et diabète de type 2). Par conséquent, ils sont utilisés dans de nombreuses hyperlipidémies. Les fibrates ne conviennent pas pour les patients présentant des niveaux faibles de HDL.

Il est connu depuis plusieurs années que les fibrates induisent la prolifération des peroxysomes chez les rongeurs. Ce procédé est lié à l'induction de la transcription de gènes impliqués dans la β-oxydation péroxysomale et est médié par des facteurs spécifiques de transcription, par conséquent appelés récepteurs activés par les proliférateurs de peroxysomes (peroxisome proliferator-activated receptors (PPAR)).

Les récepteurs activés par les proliférateurs de peroxysomes sont des membres de la superfamille des récepteurs d'hormones nucléaires, qui sont des facteurs de transcription transmettant des signaux qui proviennent de facteurs de lipides solubles (par exemple hormones, vitamines et acides gras) au génome. Les récepteurs nucléaires reconnaissent et se lient à l'ADN au niveau de l’élément de réponse (REs) et activent ou répriment l'expression d'un gène cible.

Les récepteurs activés par les proliférateurs de peroxysomes s’hétérodimérisent avec le récepteur rétinoïde X (RXR) et se lient aux éléments de réponses, dits éléments de réponse de proliférateur de peroxysomes (PPRE). À ce jour, il existe 3 différents gènes connus de récepteurs activés par les proliférateurs de peroxysomes : α, δ (également appelée β, NUC I, ou FAAR), et y.

Les récepteurs activés par les proliférateurs de peroxysomes affichent des profils d'expression distincts, ce qui suggère des différences fonctionnelles importantes. Le PPARa est principalement exprimé dans les tissus métabolisant des quantités élevées d'acides gras, tels que le foie, les reins, le cœur et le muscle. L'expression de PPAR-γ est élevé dans les tissus adipeux, où il déclenche la différenciation des adipocytes et induit l'expression de gènes critiques pour l'adipogénèse.

Le PPAR-α est un facteur de transcription nucléaire (NTF), régulant potentiellement des centaines de gènes impliqués dans la dépense énergétique : lipide et synthèse des lipoprotéines et catabolisme, régulation d'acide gras et biologie de la paroi vasculaire.

Les ligands naturels pour les PPAR-α sont divers acides gras et dérivés comme l’acide 8(S) hydroxyéicosatétraénoïque, l’acide 8(S) hydroxyeicosapentaenoique et les leucotriènes B4, alors que les fibrates sont des ligands synthétiques des PPAR-a. Certains acides carboxyliques ont la capacité de stimuler les PPAR (α, y et δ).

Les fibrates n’ont cependant pas démontré à ce jour des propriétés sur les récepteurs sélectifs SPPARM, plus récemment identifiés et qui présentent entre autres des avantages cliniques supérieurs, notamment avec des effets secondaires moindres, comme cela a été observé sur la molécule K877 en développement de Kowa Pharmaceutical (« Sélective peroxisome proliferator-activated receptora modulators (SPPARMa): the next génération of peroxisome proliferator-activated receptor a-agonists » Fruchart ; Cardiovascular Diabetology 2013, 12:82). En revanche, la capacité des fibrates à inhiber la fonction plaquettaire est reconnue, réduisant ainsi les risques cardiovasculaires et thrombotiques (Arterioscler Thromb Vase Biol-2009-Ali-706-11).

Les fibrates peuvent également influencer d'autres facteurs de transcription nucléaires tels que les récepteurs LXR du foie et les ANGPTL qui jouent également un rôle clé dans la biologie des lipides. Le processus est extrêmement complexe et très spécifique des tissus ; cela dépend également de la présence ou de l'absence de plusieurs autres protéines qui servent de co-activateurs ou co-répresseurs de facteur de transcription nucléaire. Par exemple, dans le foie et non dans les macrophages, le fénofibrate est un antagoniste des LXR (important dans l'inhibition de la synthèse des triglycérides), tandis que l'acide fénofibrique (et non la forme ester) n'a pas la capacité antagoniste hépatique des LXR dans la synthèse des triglycérides mais, a en revanche une activité agoniste des LXR pour réguler le gène ABCA1 appartenant à la famille des transporteurs ABC et intervenant dans le transport du cholestérol.

Il existe donc des différences sur les activités agonistes intrinsèques des fibrates selon qu’il s’agit de l’acide ou de l’ester. A titre d’exemple, les esters comme le fénofibrate ne sont que des agonistes des PPARa et non des 2 autres isoformes, alors que le bézafibrate qui est un acide est un panagoniste des 3 isoformes PPAR α, β/δ et y (Grygiel-Gôrniak Nutrition Journal 2014, 13:17). Les rôles pharmacodynamiques sont donc reconnus comme étant différents selon qu’il y a estérification ou amidation du groupement carboxylique de la molécule de fib rate (Mol. and Cell. Bioch. Nov 2010, 344, 91-98).

Les fibrates les plus testés dans les essais cliniques et les plus prescrits à ce jour sont le gemfibrozil, le bézafibrate et le fénofibrate. Ils sont commercialisés sous différents noms de marque.

La demanderesse a trouvé, de manière fortuite que l’utilisation de l'acide fénofibrique seul a un potentiel intéressant dans la prévention des maladies hépatiques, notamment la NAFLD, la NASH, la cirrhose hépatique et la fibrose hépatique, mais également que contrairement au fénofibrate, l’acide fénofibrique présente l’avantage de ne pas avoir besoin de métabolisme hépatique pour modifier sa structure et exercer une activité agoniste des PPARa.

En effet, l’acide fénofibrique, ou l’un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, est théoriquement plus sûr que le fénofibrate car il ne nécessite pas d’activation hépatique.

Enfin, la demanderesse a trouvé que l’utilisation de l’acide fénofibrique seul, joue un rôle agoniste sur les PPARa, et grâce à ses activités pléiotropes, suffit à jouer un rôle bénéfique important dans les pathologies cardio métaboliques périphériques qui constituent le syndrome métabolique : - Obésité, - Insulino résistance, - Diabète type II, - Cholestérolémie, - Hypertriglycéridémie, - Hypertension, - Hyper uricémie (goutte), - Coagulation/agrégation plaquettaire, - Inflammation systémique, dont la NASH est l’expression au niveau hépatique. En effet, l’acide fénofibrique qui est un activateur sélectif des récepteurs PPARa est à ce titre le seul principe actif qui couvre la quasi-totalité des pathologies composant la NASH.

EXPOSE DE L’INVENTION

On rappelle tout d’abord que l’invention concerne une composition comprenant comme principe actif unique l’acide fénofibrique ou de l’un de ses sels pharmaceutiquement acceptables destinée à être utilisée dans le traitement des maladies hépatiques.

Avantageusement, le sel pharmaceutiquement acceptable d’acide fénofibrique consiste en un sel de choline

Le sel de choline améliore la solubilité aqueuse de l’acide fénofibrique, permettant dans le cas d’une administration buccale une absorption facilitée, et dans le cas d’une administration par voie intraveineuse l’obtention d’une solution plus facile à injecter. Avantageusement, la maladie hépatique consiste en une stéato hépatite non alcoolique.

Avantageusement, la maladie hépatique consiste en une stéatose hépatique non alcoolique.

Avantageusement, la maladie hépatique consiste en une fibrose hépatique.

Avantageusement, la maladie hépatique consiste en une cirrhose.

Avantageusement, le mode d’administration consiste en une administration par voie sublinguale. Avantageusement, le mode d’administration consiste en une administration par voie orale.

Avantageusement, le mode d’administration consiste en une administration par voie sous -cutanée.

Avantageusement, le mode d’administration consiste en une administration par voie intraveineuse.

Les modes d’administration par voies sublinguale, sous-cutanée et intraveineuse permettent de diminuer l’effet de premier passage.

Avantageusement, la forme médicamenteuse consiste en un anneau.

La forme en anneau présente l’avantage d’avoir une surface de contact plus importante.

Avantageusement, la forme médicamenteuse consiste en la forme d'anneau sublingual, de bâtonnet sublingual, d’anneau bucco-adhésif, de bâtonnet bucco-adhésif, d’anneau lyophilisée, d’anneau soluble, d’anneau orodispersible, d’anneau effervescent ou d'une solution buccale unidose.

Avantageusement, le profil de distribution de l’acide fénofibrique comporte des particules d’acide fénofibrique, au moins 50% des particules étant de tailles inférieures à 2000 nm et l'ensemble de particules étant inférieures à 5000 nm.

La micronisation de l’acide fénofibrique améliore sa solubilité et sa pénétration à travers les muqueuses.

Avantageusement, la forme médicamenteuse consiste en un anneau sublingual comportant des particules d’acide fénofibrique, au moins 50% des particules étant de tailles inférieures à 2000 nm et l'ensemble de particules étant inférieures à 5000 nm.

Avantageusement, la dose unitaire en acide fénofibrique administrée est comprise entre 10 et 110 mg.

Avantageusement, la dose unitaire en acide fénofibrique est comprise entre 10 et 50 mg.

Avantageusement, la dose journalière en acide fénofibrique est comprise entre 25 et 110 mg.

Avantageusement, la composition comporte au moins un excipient, notamment au moins un parmi les liants, les agents désintégrants, les diluants, les lubrifiants, les agents tensioactifs, les agents d’adhésion buccale, les activateurs/promoteurs d'absorption, les agents tampons, les agents d’écoulement, les colorants, les arômes, les édulcorants, les solvants ou agents conservateurs.

Suivant un autre aspect, l’invention concerne un procédé de préparation d’une composition comportant comme principe actif de l’acide fénofibrique caractérisé en ce que ce principe actif est mélangé avec des excipients, notamment des agents liants, par le procédé de granulation humide. Les grains formés sont ensuite séchés et calibrés, puis mélangés avec les excipients restants de la composition avant compression du mélange de poudre obtenu afin de présenter la forme voulue (par exemple, anneau, bâtonnet). L’invention concerne une utilisation d’une composition comprenant comme principe actif unique l’acide fénofibrique ou l’un de ses sels pharmaceutiquement acceptables pour l’obtention d’un médicament destiné à une utilisation dans traitement des maladies hépatiques, notamment la NAFLD, la NASH, la fibrose hépatique, la cirrhose. L’invention concerne une méthode de traitement des maladies hépatiques, notamment la NAFLD, la NASH, la fibrose hépatique, la cirrhose comprenant l’utilisation de l’acide fénofibrique comme principe actif unique.

BREVE DESCRIPTION DES FIGURES

La figure 1 est une courbe de solubilité en fonction du pH.

DESCRIPTION DETAILLEE

La présente invention se rapporte à l'utilisation de l'acide fénofibrique, ou l’un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, ou l’une de ses formes cristallines polymorphes, dans la préparation d'un médicament pour le traitement et la prévention des maladies hépatiques, en particulier la stétato-hépatite non alcoolique (NASH), la maladie du foie gras ou stéatose hépatique non alcoolique (NAFLD), les fibroses hépatiques, et les cirrhoses. L'invention concerne également l'utilisation de la 2- (4- (4-chlorobenzoyl) phénoxy) -2-méthylpropanoïque (C17H15CI04) (ci-dessous), parmi l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables ou l’une de ses formes polymorphes cristallines, pouvant être utilisés dans une composition pharmaceutique pour prévenir ou traiter les maladies du foie.

Par "sel pharmaceutiquement acceptable", on entend à titre d'exemple et de façon non exhaustive, les sels de : éthanolamine, meglumine, L-lysine, trométhamine, arginine, ornithine et choline.

Par "forme cristalline polymorphe", on comprend à titre d'exemple et de façon non exhaustive : la forme polymorphe I (point de fusion à 175°C), la forme polymorphe Il d’acide fénofibrique préparée notamment à partir d’une mise en suspension de fénofibrate dans de l’isopropanol (point de fusion d’environ 184°C).

La composition pharmaceutique de l'invention peut être administrée par voie orale, par les muqueuses, par voie parentérale ou topique. Selon un mode d’administration, la composition est administrée par voie entérale, tels que, par exemple, un anneau sublingual, un bâtonnet sécable sublingual, un anneau buccal adhésif ou un bâtonnet buccal adhésif, un anneau soluble, un anneau lyophilisé, un anneau effervescent, un anneau à désintégration orale rapide ou un liquide buccal unidose.

Selon un mode d’administration préféré, la composition est administrée par l’intermédiaire de la muqueuse buccale. Il existe trois catégories différentes de délivrance des médicaments dans la cavité buccale : sublinguale, buccale et l’administration locale/localisée. La muqueuse sublinguale est relativement perméable, donnant une absorption rapide et des biodisponibilités acceptables pour de nombreuses molécules actives ; elle est pratique, accessible, et généralement bien acceptée (Drug delivery via the mucous membranes of the oral cavity, J. Pharm Soi, 81:.. 1- 10, 1992). La muqueuse buccale est beaucoup moins perméable que la région sublinguale, mais présente les mêmes avantages, y compris de dérivation hépatique : pas d’effet de premier passage hépatique, de dégradation enzymatique dans la zone du tractus gastro-intestinal.

Une autre caractéristique de l'environnement de la cavité buccale est la présence de salive produite par les glandes salivaires. La salive est un fluide aqueux à 1% de matières organiques et inorganiques. Le pH salivaire varie de 5,5 à 7 selon le débit salivaire. Le volume salivaire quotidien est compris entre 0,5 et 2 litres selon les personnes et certains facteurs physiologiques (stress, ...etc). Le volume moyen, disponible pour hydrater et déliter les formes pharmaceutiques présentes dans la muqueuse buccale est d’environ 10 ml. L'administration locale aux tissus de la cavité buccale a un certain nombre d'applications, y compris le traitement des maux de dents, les maladies parodontales, les infections bactériennes et fongiques, aphtes et autres problèmes dentaires. Cependant, ce type d’administration n'a pas été testé sur les médicaments hypolipémiants comme les fibrates alors que l'effet de premier passage a été rapporté pour le fénofibrate (Bays HE, et al J Clin Lipidol 2008; 2:. 426-435), et donc sur les acides fibriques correspondants, insolubles dans l'eau, mais pour lesquels la solubilité augmente en fonction du pH dans des milieux tamponnés.

Les formulations destinées à être administrées par la voie de la muqueuse orale contiennent des agents promoteurs d’absorption et / ou des agents tampons, et / ou des agents tensio-actifs bien connus par l'homme du métier afin d'optimiser l'absorption buccale de médicaments. Une liste non exhaustive est donnée ici: 23-lauryl éther, aprotinine, azone, cyclodextrine, sulfate de dextrane, acide laurique, acide laurique et propylène glycol, lysophosphatidylcholine, menthol, méthoxysalicylate, oléate de méthyle, acide oléique, phosphatidylcholine, polyoxyethylene, polysorbate 80, EDTA sodique, glycocholate de sodium, glycodésoxycholate de sodium, laurylsulfate de sodium, salicylate de sodium, taurocholate de sodium, taurodésoxycholate de sodium, etc ....

Les formulations destinées à être administrées par la voie de la muqueuse buccale contiennent de l'acide fénofibrique micronisé afin d'améliorer sa solubilité dans la salive et sa pénétration à travers la muqueuse buccale (par voies paracellulaire et transcellulaire). La distribution de la taille des particules de l'acide fénofibrique micronisé est caractérisé en ce sens que plus de 50% des particules sont inférieures ou égales à 2000 nm, et toutes les particules ont une taille inférieure à 5000 nm.

Les particules sont mesurées à l’aide d’un granulomètre laser type Malvern ou équivalent, et une méthode validée par voie humide (mouillage avec un tensio-actif) est préférée. L'une des compositions pharmaceutiques préférées de l’invention est un anneau sublingual d'acide fénofibrique micronisé, où l’anneau est maintenu dans la cavité buccale, sous la langue, le temps que le médicament soit dissous et absorbé.

Les exemples suivants sont donnés pour illustrer l'invention et ne constituent en aucune manière une limitation de celle-ci.

EXEMPLES

EXEMPLE 1: Modèle cellulaire in vitro dans la NASH/NAFLD

La demanderesse a décidé d'explorer des approches in vitro pour tester l'acide fénofibrique en tant que médicament inhibiteur de progression de la stéatose hépatique/stéato-hépatite non alcoolique. Dans ce domaine, seules quelques données obtenues dans la NASH / NAFLD en utilisant des modèles cellulaires ont été publiés, alors que pour d’autres maladies du foie, les modèles et moyens de recherche sont plus nombreux et plus étudiés. En général, les cultures de cellules primaires et les lignées cellulaires immortalisées sont largement utilisées pour développer des modèles in vitro pour la recherche. Les cellules primaires immortalisées sont des cellules candidats sélectionnés pour l'étude in vitro en raison de leur phénotype stable, mais aussi à cause d’une méthode de culture simple et standardisée à mettre en œuvre.

Protocole expérimental

Les cellules humaines immortalisées ont été cultivées dans un milieu enrichi contenant des concentrations croissantes d'acide fénofibrique. L’objectif de l’étude a consisté à mesurer le taux de gouttelettes lipidiques intracellulaires. Toute la procédure de coloration est menée à température ambiante en protégeant les échantillons de la lumière directe. Les images ont été acquises avec un microscope à fluorescence. Résultats

La teneur en gouttelettes lipidiques intracellulaires a été déterminée par marquage. L'exposition des cellules à des concentrations μΜ d’acide fénofibrique pendant 24 h, induit une diminution de graisse dose-dépendante. Les images microscopiques montrent la présence d’une quantité et d’une taille significativement moindre de gouttelettes lipidiques cytoplasmiques. Cette tendance est d’autant plus notable à la concentration la plus élevée en acide fénofibrique où la quantité et la taille des gouttelettes ont augmenté par rapport à celle observée avec la dose plus faible. EXEMPLE 2: Modèle murin In Vivo de la stéato-hépatite non alcoolique

Au cours d'une expérience réalisée pour l'invention, il a été montré que l'acide fénofibrique affichait une activité pharmacologique lorsqu'administrée par voie orale dans un modèle murin validé de la NASH. La demanderesse a choisi un modèle murin utilisé et validé pour la stéato-hépatite non alcoolique (NASH) et le carcinome hépatocellulaire (HCC) car il est bien approprié pour étudier l'efficacité du candidat médicament qui présente une activité agoniste LXR, contrairement au fénofibrate (ester).

Protocole expérimental L'acide fénofibrique est étudié à 2 doses et administré par voie orale une fois par jour. Le contrôle positif est le telmisartan et le fénofibrate (ester) est retenu comme contrôle négatif (selon les articles de référence respectifs Liver Int. 2009 Aug;29(7):988-96 et Eur J Pharmacol. 2016 Feb 5;772:22-32).

Les souris mâles sont au nombre de 60 pour la partie curative de l'étude. Elles suivent le cycle de la lumière normale, et sont réparties dans des cages ventilées et enrichies, après une période d’une semaine d’acclimatation.

Les souris sont nourries en alimentation à haute teneur en graisses et d'eau du robinet enrichie en fructose. Les souris sont traitées avec les références ou avec la formulation à tester selon 2 doses, avec administration quotidienne par voie orale pendant 2 mois environ.

Les souris ne présentant pas une prise de poids suffisante ou des paramètres biochimiques conformes (ALT et AST), sont écartées pour la suite de l’étude et les souris incorporées dans la partie curative de l’étude sont randomisées. A différentes semaines de traitement, le sang est recueilli pour mesurer la glycémie, le taux d’insuline, de cholestérol total et de triglycérides, ainsi que les niveaux d’ALT et d’AST. Après la dernière collecte, les souris sont sacrifiées pour mesurer le cholestérol total hépatique, les triglycérides et les niveaux d'acides gras.

Des échantillons de foie sont également collectées pour une analyse histologique et le score/indice NAS. Résultats L'examen macroscopique et microscopique du foie a montré que l'administration orale de l’acide fénofibrique a empêché le développement de la stéatose hépatique. L’acide fénofibrique a aussi notablement réduit la concentration plasmatique d'ALT, qui est un marqueur de dysfonctionnement hépatique.

Au vu des résultats, la demanderesse a constaté que l'acide fénofibrique pourrait inhiber de manière significative l'augmentation du poids du foie et le taux de triglycérides. Par ailleurs, parmi les paramètres biochimiques, les niveaux d’ALT ont sensiblement diminué.

De plus, nous avons observé que l'acide fénofibrique pouvait inhiber de manière significative l'augmentation du score d'activité de la stéatose hépatique et les zones de fibrose. EXAMPLE 3: Etude In vitro de pénétration buccale L’un des modes préférés d’administration est la voie de la muqueuse buccale. Afin d'y parvenir, la demanderesse a préparé des solutions d’acide fénofibrique à partir d’échantillons remis par le fournisseur Harman Finochem (Inde). La pénétration in vitro de la formulation en acide fénofibrique est évaluée en utilisant des cellules de diffusion de type Franz à 37°C, système couramment utilisé pour évaluer la pénétration in vitro des composés à travers la peau, mais avec la muqueuse buccale comme membrane dans le cas présent.

Protocole expérimental

Préparation de la membrane :

La demanderesse a choisi un tissu buccal porcin parce qu'il a une morphologie non kératinisée, assez proche de l'épithélium buccal humain (Gandhi, R.B. and Robinson. Adv Drug Deli Rev, 13:43-74, 1994). Les membranes de la muqueuse buccale sont séparées en enlevant les tissus conjonctifs sous-jacents à l'aide des ciseaux chirurgicaux, pour faire en sorte que la membrane basale soit toujours présente. Les coupes de tissu ont donc une épaisseur d’au moins 500 pm et une superficie approximative d’environ 4 à 5 cm2. Chaque membrane utilisée est montée entre les compartiments donneur et receveur du système de cellules de Franz.

Préparation du système :

Le compartiment récepteur est rempli de tampon pH 7,4 à 37°C et le compartiment donneur de solution d’acide fénofibrique micronisé à 37°C de concentrations différentes (à partir de 0.2 mg/ml) avec un pH ajusté aussi à pH 7,4 ou une solution d’acide fénofibrique (0,5 mg / ml) dans des solutions tampon de pH différents (4,5, 6.0, 6,8 et 7.4). Des échantillons sont prélevés du compartiment récepteur à un intervalle prédéterminé de temps (2, 5, 10, 15, 30, 60, 90, 120, 150 et 180 minutes), remplacés par le même volume de tampon et par la suite analysés par méthode HPLC.

La quantité d’acide fénofibrique présente dans le compartiment donneur est déterminée en fonction du temps. Le coefficient de perméabilité (P) peut être calculé à partir de la partie linéaire des mesures effectuées sur les premiers temps (régression).

La voie de transport de l’acide fénofibrique est théoriquement la voie transcellulaire du fait de son caractère lipophile. La lipophilie est accrue aux pH élevés, ce qui conduit en théorie à une augmentation significative de la pénétration à travers la muqueuse buccale porcine en fonction du pH.

Rendement et extraction de l’actif présent dans la membrane :

La muqueuse utilisée dans le test est détachée de la cellule de diffusion après le dernier prélèvement. Elle est désagrégée à l’aide d’un mortier et d’un pilon puis le contenu est extrait avec une solution alcoolique puis passé au bain à ultrasons et refroidi si nécessaire. La couche organique est centrifugée pour séparer les composants cellulaires. L'extrait est dilué si nécessaire avant d’être analysé par HPLC pour déterminer le rendement global (quantité comportement Donneur = quantité compartiment Récepteur + quantité extrait de la membrane). Résultats :

La solubilité de l’acide fénofibrique augmente en fonction du pH et elle est la plus forte aux pH les plus proches de la neutralité. Les résultats montrent une pénétration notable de l’acide fénofibrique à travers la muqueuse buccale porcine, dès les premiers prélèvements, avec une cinétique plus rapide aux plus fortes concentrations et aux pHs élevés. Le rendement de l’étude est proche de 100 %, en tenant compte de la marge d’erreur analytique, par rapport à la concentration théorique initiale, ce qui permet de valider le test.

En conclusion, l’acide fénofibrique est rapidement absorbé à travers la muqueuse buccale dans les différentes conditions testées. La molécule est un bon candidat à une formulation avec absorption dans la cavité orale. EXEMPLE 4: Test de solubilité de différents sels d’acide fénofibrique

Cet exemple vise à déterminer les caractéristiques de solubilité de différentes formes cristallines et sels d’acide fénofibrique, en vue d’une administration par voie de la muqueuse buccale, afin de traiter ou prévenir les patients des maladies du foie, telles que les stéatoses hépatiques.

La cinétique de solubilisation est déterminée par la mise en excès d’échantillons d’acide fénofibrique dans une solution aqueuse tamponnée à pH 6.0, correspondant au pH salivaire. Les prélèvements sont réalisés au bout de 0.5, 1, 2, 4, 6, 12 et 24 heures. Ils sont analysés par HPLC après centrifugation et filtration des échantillons sur filtre PTFE 0.45 pm.

Les échantillons sont reçus de plusieurs fournisseurs Indiens et Chinois. La forme II de l’acide fénofibrique est obtenue à partir d’une mise en suspension de fénofibrate (ester) dans l’isopropanol.

Les résultats en termes de solubilité à saturation (après 24 heures d’agitation) sont mentionnés dans le tableau ci-dessous et sont exprimés selon les critères de la Pharmacopée Européenne en vigueur au moment des essais. Les points de fusion sont obtenus par DSC (pic endothermique, mesure d’onset).

Les résultats sont complétés par une étude de solubilité en phase aqueuse de l’acide fénofibrique en fonction du pH, seul ou associé en mélange binaire 50/50 à un tensio- actif, et comparés au fénofibrate. Le tableau ci-dessous résume les résultats et montre une solubilité meilleure aux pH les plus proches de la neutralité. (Voir figure 1)

EXEMPLE 5: Cinétique de dissolution de l’acide fénofibrique.

La demanderesse a étudié le profil de dissolution de plusieurs lots d’acide fénofibrique reçus de plusieurs fournisseurs. Les lots de matières premières comportent différentes caractéristiques granulométriques dont un grade standard (non micronisé) et plusieurs lots micronisés.

Les lots d’acide fénofibrique ont été préparés sous diverses formes pharmaceutiques en incluant les excipients suivants : hypromellose, concentré de protéines de lait, amidon de maïs, Lactose monohydrate (0.4 mg/50 mg de principe actif), lauryl sulfate de sodium en tant que tensio-actif, stéarate de magnésium, et talc en tant qu’agent d’écoulement nécessaire au cours de la fabrication.

Des tests de dissolution ont été réalisés sur la plupart des formulations dans des milieux tels que le tampon acétate à pH 6,0, un tampon phosphate à pH 4,5 et de l'eau purifiée. De même, les anneaux ont été testés dans les milieux gastriques simulant les conditions nourries et â jeun, avec apport d’enzymes (milieux dénommés respectivement FeSSIF et FaSSIF) ont été également testés après les doses de 50 et 100 mg. Le système USP type II à palettes a été retenu pour les essais avec 1000 ml de volume, 37°C et les prélèvements, réalisés à 0, 2, 5, 10, 15, 20, 30, 45 and 60 minutes ont été analyses par HPLC sans renouvellement des milieux. Résultats

Les résultats montrent que l’acide fénofibrique micronisé seul est totalement dissous après 60 minutes et la cinétique de dissolution est plus rapide pour le lot le plus fortement micronisé (100 % des particules inférieure à 5000 nm et > 53 % des particules inférieures à 2000 nm).

Pour les formulations galéniques, la cinétique de dissolution est la moins rapide pour la forme « comprimé » qui présente la surface d’échange spécifique la plus faible. A pH > 6,0, plus de 80 % de l’acide fénofibrique est dissous après 10 minutes sur les formes anneaux et bâtonnets, quels que soient les dosages testés.

Par ailleurs, dans les milieux simulant les conditions â jeun et nourrie, la cinétique de dissolution demeure tout aussi rapide. Dans les milieux FaSSIF et FeSSIF, plus de 80 % de l’acide fénofibrique est dissous après 10 minutes et la totalité après 30 minutes. Il n’y a pas de différences entre les deux milieux.

En conclusion, l’impact de la granulométrie de l’acide fénofibrique sur ses propriétés de dissolution a été démontré, avec une meilleure dissolution pour la forme la plus micronisée. Par ailleurs, les résultats démontrent que la dissolution est rapide et est fonction de la surface d’échange spécifique, qu’il n’y a pas de différence liée à la prise d’aliment car les résultats obtenus pour les milieux FaSSIF et FeSSIF sont similaires dans les formes pharmaceutiques étudiées.

Claims (17)

1. REVENDICATIONS

   1. Composition comprenant comme principe actif unique l’acide fénofibrique ou l’un de ses sels pharmaceutiquement acceptables destinée à être utilisée dans le traitement des maladies hépatiques.
2. 2. Composition destinée à être utilisée dans le traitement des maladies hépatiques selon la revendication 1 caractérisée en ce que le sel pharmaceutiquement acceptable d’acide fénofibrique consiste en un sel de choline.
3. 3. Composition destinée à être utilisée dans le traitement des maladies hépatiques selon l’une quelconque des revendications 1 à 2 caractérisée en ce que la maladie hépatique consiste en une stéato hépatite non alcoolique.
4. 4. Composition destinée à être utilisée dans le traitement des maladies hépatiques selon l’une quelconque des revendications 1 à 2 caractérisée en ce que la maladie hépatique consiste en une stéatose hépatique non alcoolique.
5. 5. Composition destinée à être utilisée dans le traitement des maladies hépatiques selon l’une quelconque des revendications 1 à 2 caractérisée en ce que la maladie hépatique consiste en une fibrose hépatique.
6. 6. Composition destinée à être utilisée dans le traitement des maladies hépatiques selon l’une quelconque des revendications 1 à 2 caractérisée en ce que la maladie hépatique consiste en une cirrhose.
7. 7. Composition destinée à être utilisée dans le traitement des maladies hépatiques selon l’une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce qu’elle est sous une forme adaptée pour une administration par voie sublinguale.
8. 8. Composition destinée à être utilisée dans le traitement des maladies hépatiques selon l’une quelconque des revendications 1 à 6 caractérisée en ce qu’elle est sous une forme adaptée pour une administration par voie entérale.
9. 9. Composition destinée à être utilisée dans le traitement des maladies hépatiques selon l’une quelconque des revendications 1 à 6 caractérisée en ce qu’elle est sous une forme adaptée pour une administration par voie sous -cutanée.
10. 10. Composition destinée à être utilisée dans le traitement des maladies hépatiques selon l’une quelconque des revendications 1 à 6 caractérisée en ce qu’elle est sous une forme adaptée pour une administration par voie intraveineuse.
11. 11. Composition destinée à être utilisée dans le traitement des maladies hépatiques selon l’une quelconque des revendications 1 à 8 caractérisée en ce que la forme médicamenteuse consiste en un anneau.
12. 12. Composition destinée à être utilisée dans le traitement des maladies hépatiques selon l’une quelconque des revendications 1 à 8 caractérisée en ce que la forme médicamenteuse consiste en la forme d'anneau sublingual, de bâtonnet sublingual, d’anneau bucco-adhésif, de bâtonnet bucco-adhésif, d’anneau lyophilisée, d’anneau soluble, d’anneau orodispersible, d’anneau effervescent ou d'une solution buccale unidose.
13. 13. Composition destinée à être utilisée dans le traitement des maladies hépatiques selon l’une quelconque des deux revendications précédentes caractérisée en ce que le profil de distribution de l’acide fénofibrique comporte des particules d’acide fénofibrique, au moins 50% des particules étant de tailles inférieures à 2000 nm et l'ensemble de particules étant inférieures à 5000 nm.
14. 14. Composition destinée à être utilisée dans le traitement des maladies hépatiques selon la revendication 7 caractérisée en ce que la forme médicamenteuse consiste en un anneau sublingual comportant des particules d’acide fénofibrique, au moins 50% des particules étant de tailles inférieures à 2000 nm et l'ensemble de particules étant inférieures à 5000 nm.
15. 15. Composition destinée à être utilisée dans le traitement des maladies hépatiques selon l’une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce que la dose unitaire en acide fénofibrique est comprise entre 10 et 110 mg.
16. 16. Composition destinée à être utilisée dans le traitement des maladies hépatiques selon l’une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce que la dose unitaire en acide fénofibrique est comprise entre 10 et 50 mg.
17. 17. Composition destinée à être utilisée dans le traitement des maladies hépatiques selon l’une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce qu’elle comporte au moins un excipient, notamment au moins un parmi les liants, les agents désintégrants, les diluants , les lubrifiants, les agents tensioactifs, les agents d’adhésion buccale, les activateurs/promoteurs d'absorption, les agents tampons, les agents d’écoulement, les colorants, les arômes, les édulcorants, les solvants ou agents conservateurs.