FR2980793A1 - Nouveaux analogues de strigolactone et leur utilisation pour le traitement des plantes - Google Patents

Abstract

L'invention concerne un composé analogue de strigolactone de formule générale (I) : dans laquelle X représente un atome d'oxygène ou un atome de soufre, R et R , identiques ou différents, représentent chacun un atome d'hydrogène ou un radical hydrocarboné linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, en C1-C10, R et R ne représentant pas tous deux un atome d'hydrogène, et R représente un radical hydrocarboné linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, en C1-C10. Ce composé est utilisable pour le traitement des plantes supérieures en vue de contrôler leur croissance et leur architecture.

Description

La présente invention concerne de nouveaux composés analogues des strigolactones, une composition comportant de tels composés et leur utilisation pour le traitement des plantes supérieures, notamment en vue de contrôler leur ramification, par une inhibition sélective ou globale de la croissance de bourgeons sur la plante. Cette inhibition peut être temporaire, de manière à contrôler la période de développement de ces bourgeons, ou permanente, afin par exemple de favoriser la croissance d'autres parties de la plante au détriment de celle(s) inhibée(s). Les composés selon l'invention trouvent notamment des applications dans le domaine agricole, pour la culture de plantes, telles que des plantes alimentaires, des légumineuses, des plantes forestières, des plantes ornementales etc., pour lesquelles le contrôle du nombre de ramifications, du démarrage de bourgeons et/ou de la période de ramification peut améliorer le rendement et/ou la qualité de la production (taille du fruit, qualité du bois, etc.).

Par plantes supérieures, on entend les végétaux pluricellulaires, vasculaires, munis de racines et d'une partie aérienne. Par culture, on entend aussi bien la culture en champ, qu'en plantation pour les forêts, que la culture in vitro, hors sol ou autre. Les plantes cultivées, que ce soit pour leurs fleurs, leurs fruits, leurs graines ou pour leurs parties végétatives, font l'objet de nombreux contrôles et traitements, de manière à obtenir le meilleur rendement possible et la meilleure qualité. Ainsi par exemple, on essaie de maîtriser les périodes de floraison de manière à éviter que les bourgeons floraux soient initiés pendant les périodes de forts risques de gel. De même, lorsqu'on souhaite obtenir des fruits de gros calibre, ou plus généralement des plantes plus vigoureuses, on procède à une taille de la plante de manière à limiter le nombre de ramifications et ainsi le nombre d'organes « puits » que sont les fruits en période de grossissement ou les graines en cours de remplissage. L'utilisation d'engrais permet également d'optimiser les rendements.

De tels contrôles et traitements nécessitent une connaissance, outre de la plante elle-même, des conditions dans lesquelles elle est cultivée : nature du sol, climat, etc., notamment pour savoir quand et comment tailler les plantes. Par ailleurs, la taille est un procédé manuel fastidieux, coûteux nécessitant l'intervention de personnes qualifiées. Pour remédier à ces inconvénients, il a été proposé par l'art antérieur des procédés de traitement chimique des plantes pour contrôler leur croissance, par inhibition totale ou partielle, définitive ou temporaire, de la croissance des ramifications, de manière notamment à optimiser le rendement de ces plantes. En particulier, il a été proposé dans le document de brevet FR-A2 930 402 de mettre les plantes à traiter en contact avec une solution contenant une strigolactone, naturelle ou de synthèse, de manière à inhiber ou limiter la pousse de tout ou partie des ramifications.

Les strigolactones sont des hormones végétales de la famille des apocaroténoïdes. Elles sont principalement composées d'un squelette à quatre cycles dits A, B, C, D, plus précisément d'une lactone tricyclique ABC connectée par une liaison éther d'énol à un cycle butyrolactone dit cycle D. On connaît actuellement de nombreuses strigolactones naturelles, telles que la sorgolactone, le 5-désoxy-strigol, le strigol, l'orobanchol, le 2' epi-orobanchol, le solanacol, l'acétate d'orobanchyle ou l'acétate de strigyle, et des strigolactones de synthèse, telles que le GR24 ou le GR5. Des applications des strigolactones ont été décrites non seulement pour le contrôle de la croissance et de l'architecture des plantes supérieures, mais également pour induire la germination des graines de plantes parasites telles que les Orobanches. Afin d'éliminer de telles plantes parasites des sols agricoles, il est ainsi proposé de traiter lesdits sols avec des strigolactones, de manière à induire la germination des plantes parasites en l'absence de plantes hôtes indispensables à leur existence, ce qui entraîne leur mort.

Parmi les strigolactones, la molécule dite GR24, de formule : dans laquelle le cycle A est un cycle aromatique, et la molécule dite GR5, de formule : dépourvue de cycles A et B, ont été décrites par l'art antérieur comme particulièrement efficaces pour réprimer la ramification des plantes supérieures. La présente invention vise à améliorer les procédés de traitement des plantes proposés par l'art antérieur pour contrôler leur degré de ramification et accroître par ce biais le rendement et la qualité des productions végétales. A cet effet, il est proposé selon l'invention de nouveaux composés, analogues de synthèse des strigolactones, répondant à la formule générale (I) : 8 7 ' A 6 (I) 2' D 5 3 R3 R2 dans laquelle : X représente un atome d'oxygène ou un atome de soufre, R1 et R2, identiques ou différents, représentent chacun un atome d'hydrogène ou un radical hydrocarboné linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, en C1-C10, R1 et R2 ne représentant pas tous deux un atome d'hydrogène, et R3 représente un radical hydrocarboné linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, en C1-C10, Toute forme isomère de ces composés sur le carbone 02 (stéréo-isomères 2'a et 213) et tout mélange de telles formes isomères entre également dans le cadre de l'invention. A partir d'un mélange d'isomères, chaque isomère peut être obtenu par des méthodes classiques en elles-mêmes pour l'homme du métier. Il a été découvert par les présents inventeurs que ces analogues particuliers des strigolactones, inédits à ce jour, étaient particulièrement actifs pour la répression de la ramification des plantes, et notamment bien plus actifs que les strigolactones naturelles et les autres composés analogues synthétiques proposés par l'art antérieur, en particulier le GR24 et le GR5. En particulier, les présents inventeurs ont découvert que les analogues des strigolactones répondant à la formule (I) étaient capables d'inhiber le démarrage des bourgeons axillaires, notamment chez le pois (Pisum sativum L.), à une concentration bien inférieure à celle des strigolactones naturelles, et notamment au moins 10 fois inférieure à celle des analogues synthétiques GR24 et GR5. Ces composés conformes à l'invention agissent en outre en particulier au noeud 4 après traitement au noeud 3.

Les composés selon l'invention présentent également avantageusement une stabilité en milieu aqueux bien supérieure à celle des strigolactones naturelles, qui de manière inhérente sont instables dans l'eau, en particulier à pH supérieur à 7, mais aussi à celle du GR24 et du GR5. De manière particulièrement avantageuse, les composés selon l'invention n'agissent en outre que faiblement sur la germination des graines des plantes parasites, notamment du type orobanche. En particulier, ils présentent une activité respectivement 10 000 et 100 fois moins importante que les composés GR24 et GR5 pour la germination des graines d'orobanches rameuses (Phelipanche ramosa et Orobanche cumana). La pullulation de telles plantes parasites nuisibles s'avérant un problème de plus en plus présent tant dans les régions tempérées que dans les régions tropicales, on comprend aisément l'intérêt de disposer de moyens de traitement des cultures végétales ne favorisant pas la germination des graines de ces plantes parasites, contrairement aux strigolactones naturelles ou à la plupart de leurs analogues de synthèse décrits par l'art antérieur, qui quant à elles l'induisent. Selon une caractéristique préférée des composés selon l'invention, R3 représente un radical alkyle linéaire en C1-C10, de préférence un radical méthyle. R1 et R2 représentent en outre chacun de préférence un atome d'hydrogène ou un radical alkyle linéaire ou ramifié en C1-C10. De manière encore préférée, R1 représente un atome d'hydrogène et R2 représente un radical alkyle linéaire ou ramifié en Cl -C10, de préférence un radical méthyle. Préférentiellement, X représente un atome d'oxygène.

Un composé particulièrement préféré selon l'invention, le (3aR*,8bS*, E)-3-(MRS*)-3,4-diméthy1-5-oxo-2,5-dihydrofuran-2-yl)oxy) méthylène)-3,3a,4,8b-tétrahydro-2H-indeno[1,2-b]furan-2-one, répond à la formule (la) : dans laquelle X est un atome d'oxygène, R1 est un atome d'hydrogène, et R2 et R3 sont tous deux des radicaux méthyles. D'autres composés particuliers conformes à l'invention sont : - le (3aR*,8bS*,E)-3-(MRS*)-2,3,4-triméthy1-5-oxo-2,5-dihydro- furan-2-yl)oxy)méthylène)-3,3a,4,8b-tétrahydro-2H-indeno[1,2-b] furan-2-one, de formule (lb) : (lb) dans laquelle X est un atome d'oxygène, et R1, R2 et R3 sont tous trois des radicaux méthyles ; - le (3aR*,8bS*,E)-3-(MRS*)-3-buty1-4-méthy1-5-oxo-2,5-dihydro10 furan-2-yl)oxy)méthylène)-3,3a,4,8b-tétrahydro-2H-indeno[1,2-b] furan-2-one, de formule (Ic) : dans laquelle X est un atome d'oxygène, R1 est un atome d'hydrogène, R2 est un radical butyle et R3 est un radical méthyle ; - le (3aR*,8bS*,E)-3-(MRS*)-3-ethy1-4-méthyl-5-oxo-2,5-dihydro15 furan-2-yl)oxy)méthylène)-3,3a,4,8b-tétrahydro-2H-indeno[1,2-b] furan-2-one, de formule (Id) : (Id) dans laquelle X est un atome d'oxygène, R1 est un atome d'hydrogène, R2 est un radical éthyle et R3 est un radical méthyle. Les composés selon l'invention peuvent être obtenus par toute voie de synthèse adéquate. L'homme du métier saura en déterminer les étapes, les conditions opératoires et les précurseurs à mettre en oeuvre en fonction de la structure particulière du composé de formule générale (I) visé. Un procédé de synthèse des composés selon l'invention particulièrement préféré comprend, lorsque X est un atome d'oxygène, la réaction d'une lactone tricyclique avec un précurseur du cycle D adéquat, par exemple, pour le composé de formule (la), avec le 5-chloro-3,4-diméthy1-2(51-1)-furanone, en présence de carbonate de potassium, selon le schéma réactionnel général suivant : + OH Tout autre mode de synthèse que l'homme du métier saura identifier à partir de ses connaissances générales entre également dans le cadre de l'invention. Un autre aspect de l'invention est une composition comprenant un composé tel que défini ci-avant, utilisable en particulier pour le traitement des plantes supérieures en vue de contrôler leur croissance et leur architecture, plus particulièrement leur ramification.

Préférentiellement, la concentration en ledit composé dans cette composition est comprise entre 0,1 nM et 101.IM, préférentiellement entre 0,1 et 1000 nM, préférentiellement encore entre 1 et 100 nM. Un troisième aspect de l'invention est l'utilisation d'un composé tel que défini ci-avant, et/ou d'une composition le comprenant, pour le traitement d'une plante supérieure en vue de contrôler sa croissance et son architecture. Plus particulièrement, on place au contact de la plante une quantité adaptée d'un composé conforme à l'invention de manière à inhiber la formation d'au moins une ramification.

Par inhiber, on entend dans la présente description réprimer définitivement ou temporairement la croissance d'un bourgeon. Ainsi, selon l'invention, on peut supprimer une ramification en inhibant définitivement la croissance du bourgeon correspondant, ou mettre en dormance ledit bourgeon de manière à retarder dans le temps sa croissance.

Par ramification, on entend l'excroissance issue du bourgeon axillaire situé à l'aisselle des feuilles, que ce soit une branche, une fleur ou une inflorescence. L'inhibition peut être globale, c'est-à-dire toucher tous les bourgeons axillaires au moment du traitement de la plante, ou ciblée, c'est-à-dire ne toucher que des bourgeons spécifiquement visés par le traitement. Les plantes traitées peuvent aussi bien être cultivées en serres, qu'en champs, in vitro ou même hors sol. Une quantité adaptée s'entend d'une quantité au moins suffisante pour agir sur la croissance et l'architecture de la plante à traiter. Cette quantité est évaluée pour chaque cas particulier, en fonction notamment de la nature de la plante à traiter et du degré de contrôle de la ramification souhaité, par exemple selon que l'on souhaite inhiber définitivement ou temporairement la croissance du bourgeon.

Selon l'invention, on peut appliquer une composition comportant un composé conforme à l'invention sur une portion au moins partielle de la partie aérienne de la plante. Par exemple, on peut appliquer, par vaporisation ou par dépôt, ladite composition sur des bourgeons axillaires de la plante que l'on souhaite réprimer, de manière à contrôler la croissance des bourgeons ainsi traités, ou plus généralement sur la partie de la plante dont on souhaite contrôler la croissance. Il est autrement possible d'injecter la composition comprenant un composé conforme à l'invention dans une partie aérienne de ladite plante, par exemple au niveau des bourgeons même, ou des tiges portant les bourgeons à réprimer, de manière à contrôler la croissance de la plante située au-dessus de la zone d'injection. Dans un autre mode de mise en oeuvre, l'invention prévoit d'apporter une composition comprenant le composé conforme à l'invention par au moins une racine de ladite plante, de manière à contrôler la ramification et/ou la hauteur de la plante. Ceci peut-être réalisé par un enrichissement du sol en composé selon l'invention, de manière à diminuer de manière non sélective le nombre de tiges ou de freiner leur croissance. En effet, les inventeurs ont observé que le signal de répression SMS de la croissance des ramifications migre dans le sens racine - tige, ce qui laisse penser qu'il est véhiculé par la sève brute du xylème. Avantageusement, la concentration en composé conforme à l'invention dans la composition est au minimum de 0,1 nM et variera selon qu'on souhaite inhiber définitivement ou temporairement la croissance du bourgeon, la concentration étant en outre fonction de la nature de la plante à traiter. D'une manière générale, la concentration en composé dans la composition variera entre 0,1 nM et 10 1.1M, préférentiellement entre 0,1 et 1000 nM, préférentiellement encore entre 1 et 100 nM. De même, le nombre de jours de traitement peut varier en fonction de la plante, de son âge au moment du traitement, de l'effet définitif ou non souhaité, etc.

Les caractéristiques et avantages du procédé selon l'invention apparaîtront plus clairement à la lumière des exemples de mise en oeuvre ci-après, fournis à simple titre illustratif et nullement limitatifs de l'invention, avec l'appui des figures 1 à 7, dans lesquelles : - la figure 1 est une courbe illustrant les résultats d'une analyse de stabilité chimique en solution aqueuse (50 pg/mL de composé dans éthanol/eau : 1/4, pH 6,7, 21 °C), pour le composé (la) conforme à l'invention et le composé comparatif GR24, le % de composé non dégradé dans la solution étant représenté en fonction du temps ; - la figure 2 représente un graphe en barres montrant l'activité, exprimée en terme de longueur de bourgeon/ramification mesurée au noeud 3 8 jours après traitement au noeud 3, du composé (la) et des composés comparatifs GR24, GR5 et Comp. 3, à des doses comprises entre 1 nM et 11.1M, sur la répression de la ramification du mutant rmsl du pois ; - la figure 3 montre l'activité, exprimée en terme de longueur de bourgeon/ramification mesurée au noeud 3 10 jours après traitement au noeud 3, du composé (la) à des doses comprises entre 0,1 nM et 100 nM, sur la répression de la ramification du mutant rmsl du pois ; - la figure 4 représente un graphe en barres montrant l'activité, exprimée en terme de longueurs de bourgeon/ramification mesurée au noeud 3 et au noeud 4 8 jours après traitement au noeud 3, du composé (la) et du composé comparatif GR24 à une dose de 11.1M, sur la répression de la ramification du mutant rmsl du pois ; - la figure 5 est un graphe en barres illustrant les résultats, en termes de longueur des ramifications aux différents noeuds de la plante mesurée après 2 semaines de traitement, d'un test de culture hydroponique du mutant rmsl du pois, dans lequel le composé (la) ou le composé comparatif GR24 ont été ajoutés à une concentration de 31.IM dans le milieu de culture ; - la figure 6 représente les courbes dose-réponse (absorbance (A) 30 à 570 nm en fonction de la concentration du composé testé) obtenues pour le composé (la) et les composés comparatifs GR24, GR5 et Comp. 3 pour l'activité de stimulation de la germination des graines de Phelipanche ramosa ; - et la figure 7 montre la concentration EC50 déterminée pour chacun du composé (la) et des composés comparatifs GR24, GR5 et Comp. 3 5 sur la germination des graines de Phelipanche ramosa. EXEMPLE 1 - Synthèse d'un exemple de composé selon l'invention et d'exemples de composés comparatifs 1/ Matériel et méthodes 10 Les spectres infrarouge ont été enregistrés en film sur une fenêtre en diamant. Les données sont données en cm-1 (vv, cm-1). Les spectres RMN 1H et 13C ont été enregistrés sur des solutions dans CDCI3, en utilisant le solvant protique CHCI3 (8E1=7,24 ppm) ou CDCI3 (8c=77,23 ppm) comme référence interne et sont donnés en ppm. 15 Les spectres de masse ont été déterminés par ionisation par électro- nébulisation (ESI). Toutes les réactions ont été suivies par chromatographie sur couche mince (CCM) sur des plaques d'aluminium de 0,2 mm pré-enduites de gel de silice, en utilisant la lumière UV et une solution éthanolique à 5 % en acide 20 phosphomolybdique et la chaleur en tant qu'agent révélateur. La Flash-chromatographie a été réalisée sur gel de silice 60, 40-63 iim (400-230 mesh), avec l'acétate d'éthyle et l'heptane en tant qu'éluants. Les réactifs et solvants disponibles commercialement ont été purifiés et séchés lorsque nécessaire par des méthodes classiques. 25 Le tétrahydrofurane THF et l'éther diéthylique Et20 ont été purifiés par distillation sous azote, à partir de sodium / benzophénone.

Le diméthylformamide DMF et le dichlorométhane CH2C12 ont été séchés par distillation sur hydrure de calcium, l'acétone par distillation sur CaSO4 anhydre. Sauf indication contraire, tous les autres réactifs ont été obtenus à partir des sources commerciales et utilisés sans autre purification. 2/ Composé (la) Le composé répondant à la formule (la), le (3aR*,8bS*,E)-3-(MRS*)- 3,4-di méthy1-5-oxo-2,5-di hydrofuran-2-yl)oxy)méthylène)-3,3a,4,8b-tétrahydro2H-indeno[1,2-b] furan-2-one, a été synthétisé à partir du tricycle dit ABC obtenu par la méthode décrite dans Mangnus et al., 1992 : 0 Tricycle ABC OH et de 5-chloro-3,4-diméthy1-2(51-1)-furanone préparé selon la méthode de Canevet et al., 1978, en tant que précurseur du cycle D, selon le schéma réactionnel : Pour cela, 65 mg (0,321 mmol) de tricycle ABC, 118 mg (0,804 mmol) de 5-chloro-3,4-diméthy1-2(51-1)-furanone et 84 mg (0,611 mmol) de K2CO3 anhydre ont été dissous dans de l'acétone anhydre (6,6 mL). Le mélange réactionnel a été maintenu sous agitation pendant 18 h puis concentré sous pression réduite. Le résidu a été dissous dans l'acétate d'éthyle EtOAc (10 mL). La solution obtenue a été filtrée, et soumise à évaporation sous pression réduite, puis le concentré obtenu a été purifié par chromatographie sur gel de silice (EtOAc/heptane 3/7 à 1/1) pour obtenir le produit souhaité sous forme d'un mélange d'isomères C2,a et C2,I3, dans des proportions 1:1 (85 mg, rendement 84 %), sous forme d'huile incolore.

L'isomère cc pur (huile incolore) a été obtenu par séparation par chromatographie préparative sur couche mince (EtOAc/heptane 3/7). Pour l'isomère a : RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 8 7,44 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,39 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 7,30-7,16 (m, 3H), 5,90 (s, 1H), 5,89 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 5,22 (d, J = 1,9 Hz, 1H) 3,93-3,85 (m, 1H), 3,38 (dd, J = 17,0 et 9,4 Hz, 1H), 3,04 (ddd, J = 17,0, 3,4 Hz, 1H), 2,00-1,98 (m, 3H), 1,86-1,84 (m, 3H). RMN 13C (75 MHz, CDCI3): 8 171,4 (C), 170,8 (C), 152,3 (C), 151,2 (CH), 142,7 (C), 139,1 (C), 130,2 (CH), 128,8 (C), 127,7 (CH), 126,7 (CH), 125,3 (CH), 113,1 (C), 102,5 (CH), 86,1 (CH), 39,1 (CH), 37,6 (CH2), 11,6 (CH3), 8,9 (CH3). IR vma, (film): 3056, 2927, 2857, 1775, 1744, 1677, 1608 cm-1. HRMS (ESI). m/z calculé pour C18H1605Na [M + Na] : 335,0895, trouvé : 335,0899. 3/ Composé comparatif 1 - GR24 Le GR24 a été préparé selon la méthode connue en elle-même décrite dans Mangnus et al., 1992. 4/ Composé comparatif 2 - GR5 Le GR5 a été synthétisé selon la méthode connue en elle-même décrite dans Johnson et al., 1981. 5/ Composé comparatif 3 - Comp. 3 En tant que troisième composé comparatif, il a été synthétisé le (E)- 3,4-diméthy1-5-((2-oxodihydrofuran-3(21-1)-ylidène)méthoxy)furan-2(51-1) -one, de formule : 0 c'est-à-dire correspondant au composé (la) dépourvu du bicycle AB (soit un analogue du GR5, modifié sur le cycle D de la même manière que le composé (la)). Pour cela, 469 mg de tert-butoxyde de potassium (0,418 mmol) ont été ajoutés à un mélange de y-butyrolactone (300 mg, 0,28 mL, 3,48 mmol) et de formate d'éthyle (0,34 mL, 4,18 mmol, 10 équiv.) dans du THF (7,5 mL) à 0 °C sous atmosphère d'argon. Le mélange a été agité pendant 2 h puis refroidi à 78 °C. 562 mg (3,83 mmol) de (5-chloro-3,4-diméthy1-2(51-1)-furanone préparé selon la méthode de Canevet et al. (1978) ont été graduellement ajoutés. Le mélange réactionnel a ensuite été réchauffé à température ambiante et agité pendant 18 h, puis soumis à évaporation sous pression réduite, dilué avec CH2Cl2 (10 mL) et la phase organique lavée avec une solution aqueuse d'acide acétique (5 %, 10 mL). La phase aqueuse a été extraite avec CH2Cl2 (2 x 10 mL) et les phases organiques combinées soumises à évaporation sous pression réduite. Le produit brut a été purifié par chromatographie sur gel de silice (heptane/EtOAc 3/2 à 1/1) pour obtenir le composé souhaité (292 mg, rendement 37 %) sous forme de solide blanc.

Point de fusion : 93,4 - 93,8 °C (Heptane/EtOAc). RMN 1H (300 MHz, CDCI3) : 8 = 7,42 (t, J= 2,8 Hz, 1 H), 5,93 (s, 1 H), 4,35 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,88 (td, J = 7,5, 2,8 Hz, 2 H), 1,99 (t, J = 1,0 Hz, 1 H), 1,87 (t, J = 1,0 Hz, 1 H).

RMN 13C (75 MHz, CDCI3) : 8 = 171,9 (C), 170,9 (C), 152,5 (C), 150,0 (CH), 128,5 (C), 107,6 (CH), 102,3 (CH), 66,0 (CH2), 24,1 (CH2), 11,6 (CH2), 8,8 (CH2). IR vmax (film): 2987, 2923, 1771, 1748, 1685 cm-1. HRMS (ESI) m/z calculé pour Cii H1305 [M + Hl : 225,0763, trouvé : 10 225,0755. EXEMPLE 2 - Etude de stabilité en milieu aqueux La stabilité en milieu aqueux du mélange d'isomères a/13W13 (1:1) du composé (la) selon l'invention, et celle du GR24 en tant que composé 15 comparatif, ont été évaluées de la façon suivante. Chacun des composés a été dilué dans de l'acétone (1 mL), puis 50 pL de chacune de ces solutions ont été dilués avec de l'éthanol (175 pL) et de l'eau (750 pL) pour obtenir une concentration en composé de 50 pg/mL. Chacune de ces solutions aqueuses a été incubée à 21 °C dans des 20 fioles HPLC. De l'indanol (25 pL d'une solution à 1 mg/mL dans l'acétone) a été ajouté à chaque solution pour servir d'étalon interne. La dégradation des composés dans le temps a été suivie par analyse d'échantillons prélevés de ces solutions à différents intervalles de temps, par 25 Chromatographie Liquide Ultra Performance (UPLC) au moyen d'une colonne Acquity UPLC HSS C18 (1,8 pm, 2,1 x 50 mm), éluée tout d'abord par une solution d'acétonitrile à 5 % dans l'eau contenant 0,1 % d'acide formique, pendant 0,5 min, puis par un gradient de 5 % à 100 % d'acétonitrile dans l'eau contenant 0,1 % d'acide formique, pendant 6,5 min, et par 100 % d'acétonitrile contenant 0,1 % d'acide formique pendant 3 min. La colonne a été maintenue à une température de 40°C, avec un flux de 0,6 mL/min. Les composés élues de la colonne ont été détectés avec un détecteur à barrettes de photodiodes. La quantité relative de composé non dégradé dans chaque solution a été déterminée par comparaison avec l'étalon interne. Les résultats obtenus sont illustrés sur la courbe de la Figure 1, en % de composé non dégradé dans la solution en fonction du temps d'incubation.

On y observe clairement que le composé (la) (a/Ra/13 (1:1)) présente une stabilité chimique en solution aqueuse bien supérieure à celle du GR24. EXEMPLE 3 - Etude de l'activité biologique sur l'inhibition de la ramification chez le pois Il a été utilisé à cet effet des mutants ramosus (rmsl) hyper-ramifiés du pois (Pisum sativum L.), connus pour présenter un nombre de ramifications très supérieur au nombre de ramifications chez le pois sauvage et notamment à tous les noeuds de la plante. D'une manière générale, chez le pois, les deux premières écailles sont considérées comme les deux premiers noeuds, le noeud cotylédonaire étant le noeud 0. Le mutant rmsl est un mutant de biosynthèse du signal dit SMS, réprimant la ramification de la plante. 1/ Expérience 1 - Test d'activité sur l'inhibition de la ramification Les mutants de pois rmsl (ccd8) décrits dans Beveridge et al. 1997, déficients en strigolactones, ont été utilisés pour le test (lignée M3T884 issue de la variété Térèse).

L'activité du composé (la) conforme à l'invention (a/13a/13 (1:1)) et des composés comparatifs GR24, GR5 et Comp. 3 a été évaluée à des doses comprises entre 1 nM et 1 1.1M, par traitement au noeud 3. Pour cela, il a été utilisé des solutions contenant le composé à tester 5 dans 1 % acétone, 4 % polyéthylène glycol 1450, 50 % éthanol. Il a été semé 24 plants par traitement (3 plants par pot de 2 L). 10 jours après semis, le traitement a été effectué sur le bourgeon axillaire au noeud 3, par application de 10 pl de chaque solution à tester directement sur le bourgeon, au moyen d'une micropipette. Les excroissances latérales aux 10 noeuds 1 et 2 ont été ôtées pour encourager la croissance des bourgeons axillaires aux noeuds supérieurs. Le démarrage des bourgeons axillaires au noeud 3 ou au noeud 4 a été mesuré 8 ou 10 jours après le traitement au moyen d'un pied à coulisse digital. Les résultats, exprimés en longueur de bourgeon/ramification 8 jours 15 après traitement par chaque composé, sont illustrés sur la Figure 2. Les témoins avant traitement (Jour 0) et après 8 jours sans traitement (Jour 8) sont également représentés sur cette figure. On y observe que le composé (la) présente une activité d'inhibition de la croissance des bourgeons nettement supérieure à celle des composés 20 comparatifs. Ce composé (la) conforme à l'invention est en outre actif à des concentrations aussi basses que 1 nM. Le composé (la) selon l'invention a également été testé à des doses moindres encore, allant jusqu'à 0,1 nM. Les résultats, exprimés en longueur de bourgeon/ramification 10 jours après traitement avec ce composé, sont illustrés 25 sur la Figure 3. Le témoin après 10 jours sans traitement (0 nM) est également représenté sur cette figure. On constate que la limite d'activité du composé (la) se situe entre 0,1 et 1 nM. L'effet au noeud 3 et au noeud 4, du traitement au noeud 3 par le composé (la) conforme à l'invention ou par le composé comparatif GR24, à une dose de 1 1.1M, a en outre été évalué par mesure des bourgeons 8 jours après traitement. Les résultats de ce test sont illustrés sur la Figure 4. Les résultats pour les témoins avant traitement (Jour 0) et au jour 8 sans traitement (0 nM) sont également représentés sur cette figure. On y observe que le composé (la) conforme à l'invention, au contraire du composé comparatif GR24, inhibe la croissance des bourgeons tant au noeud 3 qu'au noeud 4, après traitement au noeud 3. 2/ Expérience 2 - Culture hydroponique de pois Afin d'étudier plus avant les effets du composé (la) conforme à l'invention et du composé comparatif GR24 sur l'ensemble de la plante du mutant du pois rmsl, il a été mis en oeuvre une culture en milieu hydroponique à partir de semis de pois. Là encore, des mutants rmsl du pois (ccd8) ont été utilisés. La solution nutritive (milieu Coïc-Lesaint) a été préparée en ajoutant, dans 1000 L d'eau, les macronutriments suivants : HNO3 (0,28 L), (NH4)2HPO4 (120 g), Ca(NO3)2 (40 g), Mg(NO3)2 (140 g), KNO3 (550 g), (NH4)2M004 (0,05 g), H3B03 (15 g), MnSO4.H20 (2 g), ZnSO4.7H20 (1 g), CuSO4.5H20 (0,25 g), Sequestrene® (10 g) (solution Fe-EDTA). Les graines de pois ont été incubées dans du sable humide de rempotage à 24 °C pendant 6 jours, avec une humidité relative de 70 %. Les graines germées ont été placées dans un trou préconstitué dans le couvercle (35 trous / couvercle, diamètre 20 mm) d'un pot en chlorure de polyvinyle (PVC) contenant la solution de culture hydroponique ci-dessus (47 L, pH 5,8) et fixées avec une pièce de polystyrène à la jonction racine-pousse.

Le conteneur (dimensions : 60 cm x 40 cm x 26 cm) était opaque et contenait une solution de nutriments aérée. L'aération de cette solution a été réalisée par une pompe d'aquarium attachée à un tube perforé délivrant de petites bulles d'air de façon continue.

Les plantes ont été maintenues en serre (16 h jour / 8 h nuit) sous le rayonnement d'une lampe à sodium. La température a été réglée à 24 °C (jour) et 18 °C (nuit), avec une humidité relative de 70 %. La solution contenant le composé à tester dans l'acétone (4,7 mL, 30 mM, 141 iimol) a été ajoutée à la solution de culture hydroponique (47 L), de sorte à obtenir une concentration finale de 3 1.1M. Chaque plant a été cultivé sous les mêmes conditions durant 2 semaines. 2 semaines après le début du traitement, les longueurs des bourgeons latéraux (noeuds 1 à 6) ont été mesurées au moyen d'un pied à coulisse électronique. L'ajout de chaque composé à une concentration de 3 1.1M dans le milieu de culture a conduit, comme illustré sur la Figure 5, qui montre les résultats en terme de longueur de ramifications aux différents noeuds mesurée après 2 semaines de traitement, à une inhibition de la croissance des bourgeons aux noeuds 3, 4 et 5. Sur cette figure est également représenté le résultat obtenu pour le témoin après 2 semaines sans traitement (0 nM). L'effet inhibiteur a été détecté à des concentrations aussi basses que 100 nM. L'inhibition s'est avérée totale entre 1 et 31.IM aux noeuds 3 et 4. Le composé (la) conforme à l'invention s'est avéré être un meilleur inhibiteur que 20 le composé comparatif GR24. EXEMPLE 4 - Etude de l'activité biologique sur la germination des plantes parasites Le composé (la) conforme à l'invention et les composés comparatifs 25 GR24, GR5 et Comp. 3 ont été testés pour leur effet stimulant sur la germination de graines de Phelipanche ramosa pathovar C. Les composés à tester ont été dissous dans l'acétone à une concentration de 10 mmo1.111, puis le mélange a été dilué avec de l'eau pour obtenir une concentration de 1 mmol.1J1 (eau/acétone, v/v : 99/1). Des dilutions entre 1x10-3 mo11-1 et 1x10-16 mo11-1 ont été réalisées dans un mélange eau/acétone (v/v : 99/1). Des graines de Phelipanche ramosa (St Martin de Fraigneau, France, 2005) ont été stérilisées en surface suivant la méthode décrite dans Dos Santos et al., 2003, puis re-suspendues dans de l'eau stérile (10 g.111) et distribuées dans des plaques à 96 puits (50 pt, soit environ 100 graines par puits). Après un pré-conditionnement (7 jours, 21 °C, à l'obscurité, plaque scellée), le composé (la) ou les composés comparatifs GR24, GR5 et Comp. 3 ont été ajoutés et les volumes ont été ajustés à 100111_ avec de l'eau (eau/acétone, v/v : 999/1). Des témoins ont été réalisés sans composé à tester, avec eau/acétone (v/v : 999/1) et sans graines. Les plaques ont été incubées pour germination comme décrit 15 précédemment dans Dos Santos et al., 2003. Un test au bleu de thiazolyle (MTT) a été réalisé selon le protocole décrit dans Mossmann, 1983, avec une modification mineure du tampon de solubilisation (Triton® X-100 10 °/0, HCI 0,04 mo11-1 dans l'isopropanol). Pour chaque composé testé, les courbes dose-réponse (A=f(c), où 20 A est l'absorbance à 570 nm et c la concentration en composé testé (mo1.111)), et les valeurs de concentration EC50, ont été modélisées en utilisant une courbe à quatre paramètres calculés avec SigmaPlot® 10.0. Les concentrations induisant la moitié de la réponse maximale (EC50) ont été ensuite déterminées par ce modèle. 25 La Figure 6 montre les courbes dose-réponse obtenues pour chacun des composés testés. De façon générale, l'absorbance (A) est proportionnelle au taux de germination. La Figure 7 montre quant à elle les résultats obtenus en termes de concentration EC50, pour chacun de ces composés.

Il peut clairement être conclu des graphiques représentés sur ces figures que le composé (la) conforme à l'invention présente une activité biologique, en termes de stimulation de la germination des plantes parasites Phelipanche ramosa, qui est largement moindre que celle des composés comparatifs GR24 et GR5. L'ensemble des résultats ci-avant démontre que le composé selon l'invention répondant à la formule (la) possède une meilleure activité biologique pour le contrôle de la ramification que les strigolactones naturelles et les analogues synthétiques GR24 et GR5, ainsi qu'un meilleur comportement physico-chimique, en termes de stabilité en milieu aqueux, tout en étant plus facile à préparer que les analogues synthétiques de l'art antérieur. Ce composé selon l'invention permet de dissocier l'activité sur la ramification et celle sur la germination de l'orobanche.

La description ci-avant illustre clairement que par ses différentes caractéristiques et leurs avantages, la présente invention atteint les objectifs qu'elle s'était fixés. En particulier, elle fournit des composés analogues des strigolactones qui présentent une activité biologique particulièrement importante d'inhibition de la ramification chez les plantes supérieures, si bien que le traitement de telles plantes par ces composés permet de contrôler leur croissance et leur architecture de manière tout à fait optimale, au moyen qui plus est de faibles quantités de composé, en vue d'améliorer le rendement des cultures. Ces composés n'agissent en outre avantageusement que faiblement sur la germination des graines de plantes parasites.25 REFERENCES BIBILOGRAPHIQUES Beveridge et al. (1997) The rmsl mutant of pea has elevated indole-3-acetic acid levels and reduced root-sap zeatin riboside content but increased branching controlled by graft-transmissible signal(s). Plant Physiol. 115: 1251- 1258 Canevet et al. (1978) Friedel-Crafts Reaction of Aromatic Derivatives with 1,4- Dicarbony1-2,3-Ethylenic Compounds .2. Alkylations by Some 5-Hydroxy or 5- Chloro-2,5-Dihydro-2-Furannones - New Method for Synthesis of 1h-Indene-1- Carboxylic Acids. Tetrahedron 34: 1935-1942 Dos Santos et al. (2003) Defense gene expression analysis of Arabidopsis thaliana parasitized by Orobanche ramosa. Phytopathology 93: 451-457 Johnson et al. (1981) The Preparation of Synthetic Analogs of Strigol. Journal of the Chemical Society-Perkin Transactions 1: 1734-1743 Mangnus et al. (1992) lmproved Synthesis of Strigol Analog GR24 and Evaluation of the Biological-Activity of Its Diastereomers. J. Agric. Food Chem. 40: 1230-1235 Mosmann (1983) Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival Application to proliferation and cyto-toxicity assays. J. Immunol. Methods 65: 20 55-63

Claims (15)

1. REVENDICATIONS1. Composé de formule générale (I) : 0 X 0 0 (I) dans laquelle : X représente un atome d'oxygène ou un atome de soufre, R1 et R2, identiques ou différents, représentent chacun un atome d'hydrogène ou un radical hydrocarboné linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, en C1-C10, R1 et R2 ne représentant pas tous deux un atome d'hydrogène, et R3 représente un radical hydrocarboné linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, en C1-C10.
2. 2. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que R3 représente un radical alkyle linéaire en C1-C10, de préférence un radical méthyle.
3. 3. Composé selon l'une des revendications 1 à 2, caractérisé en ce 15 que R1 et R2 représentent chacun un atome d'hydrogène ou un radical alkyle linéaire ou ramifié en C1-C10.
4. 4. Composé selon la revendication 3, caractérisé en ce que R1 représente un atome d'hydrogène et R2 représente un radical alkyle linéaire ou ramifié en C1-C10.
5. 5. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que X représente un atome d'oxygène.
6. 6. Composé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par la formule (la) :
7. 7. Composition pour le traitement des plantes supérieures, comprenant un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6.
8. 8. Composition selon la revendication 7, caractérisée en ce que la concentration en ledit composé est comprise entre 0,1 et 1000 nM, de préférence entre 1 et 100 nM.
9. 9. Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 pour le traitement d'une plante supérieure en vue de contrôler la croissance et l'architecture de ladite plante.
10. 10. Utilisation selon la revendication 9, caractérisée en ce qu'on place 15 au contact de la plante une quantité adaptée dudit composé de manière à inhiber la formation d'au moins une ramification.
11. 11. Utilisation selon la revendication 10, caractérisée en ce qu'on applique une composition comprenant ledit composé sur une portion au moins partielle de la partie aérienne de la plante. 20
12. 12. Utilisation selon l'une des revendications 10 à 11, caractérisée en ce qu'on applique une composition comprenant ledit composé sur des bourgeons axillaires de la plante. 2 9 80793 25
13. 13. Utilisation selon la revendication 10, caractérisée en ce qu'on injecte une composition comprenant ledit composé dans une partie aérienne de ladite plante.
14. 14. Utilisation selon la revendication 10, caractérisée en ce qu'on 5 apporte une composition comprenant ledit composé par au moins une racine de ladite plante.
15. 15. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 11 à 14, caractérisée en ce que la concentration en ledit composé dans ladite composition est comprise entre 0,1 et 1000 nM, de préférence entre 1 et 10 100 nM.