FR2967781A1 - Determination du pouvoir thrombogene d'immunoglobulines humaines - Google Patents
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Abstract
Description
Claims (4)
- REVENDICATIONS1. Utilisation d'un kit comprenant les éléments suivants: - un échantillon de plasma sanguin humain, - des phospholipides, - du CaClz, et éventuellement - du facteur tissulaire humain, pour déterminer le pouvoir thrombogéne d'immunoglobulines humaines contenues dans un échantillon à tester, notamment biologiquement acceptable, lesdits éléments du kit et l'échantillon à tester formant un milieu réactionnel.
- 2. Utilisation d'un kit comprenant les éléments suivants: - un échantillon de plasma sanguin humain, - des phospholipides, - du CaClz, et éventuellement - du facteur tissulaire humain, pour déterminer le pouvoir thrombogéne lié à la présence du facteur XI et/ou du facteur IX, et/ou facteur XI activé et/ou du facteur IX activé dans un échantillon à tester, notamment biologiquement acceptable, lesdits éléments du kit et l'échantillon à tester formant un milieu réactionnel.
- 3. Utilisation d'un kit selon la revendication 1 ou 2, comprenant en outre un substrat fluorogénique.
- 4. Utilisation selon les revendications précédentes, d'un kit comprenant : - un plasma sanguin humain, dont le volume représente de 80% à 40%, notamment de 75% à 50%, particulièrement 53% du volume du milieu réactionnel. - des phospholipides humains, dont la concentration finale dans le milieu réactionnel est de 1 µM à 10 µM, particulièrement 4 µM, - du facteur tissulaire humain, dont la concentration finale dans le milieu réactionnel est de 0,05 pM à 10 pM, particulièrement 0,3 pM, - un tampon contenant du CaClz. . Utilisation selon les revendications précédentes, dans laquelle le ratio entre le volume du plasma sanguin et celui de l'échantillon à tester est de 8:1 à 2:1, particulièrement 4:1. 6. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, dans laquelle le facteur tissulaire 5 humain est d'origine plasmatique, d'origine recombinante, ou d'origine transgénique. 7. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, dans laquelle le plasma sanguin humain est un pool de plasmas sanguins humains frais ou congelé ou un plasma sanguin commercial calibré. 8. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, dans laquelle le plasma sanguin humain est dépourvu de facteur tissulaire. 9. Procédé de mesure du pouvoir thrombogéne d'immunoglobulines humainescontenues dans 15 un échantillon à tester notamment biologiquement acceptable, comprenant les étapes suivantes : a) le mélange d'un échantillon à tester avec un échantillon de plasma sanguin humain pour former un milieu réactionnel intermédiaire, b) l'ajout dans le milieu réactionnel intermédiaire obtenu à l'étape précédente d'un mélange 20 comprenant des phopholipides, et CaClz, et éventuellement le facteur tissulaire humain, pour former un milieu réactionnel; c) l'obtention d'un thrombinogramme en effectuant un test de génération de thrombine sur le milieu réactionnel obtenu à l'étape b) ; d) la comparaison d'au moins l'un des paramètres du thrombinogramme obtenu de l'étape c) à 25 un paramètre homologue obtenu à partir de thrombinogrammes standards établis sur la base d'une série de calibrateurs dont le pouvoir thrombogéne lié à la présence du facteur XI activé et/ou du facteur IX activé est connu et varie entre chaque calibrateur ; e) la déduction de l'étape d) du pouvoir thrombogéne d'immunoglobulines humaines contenues dans l'échantillon à tester. 30 10. Procédé selon la revendication 9, dans lequel le thrombinogramme standard est obtenu en effectuant un test de génération de thrombine sur un milieu réactionnel comprenant i) un calibrateur dont le pouvoir thrombogéne lié à la présence du facteur XI activé et/ou du facteur10IX activé est connu, ii) un plasma sanguin humain, iii) un mélange réactionnel comprenant des phopholipides et éventuellement le facteur tissulaire humain. 11. Procédé selon la revendication 9 ou 10, dans lequel la concentration finale du facteur 5 tissulaire humain dans le milieu réactionnel est de 0,05 pM à 10 pM, particulièrement 0,3 pM. 12. Procédé selon l'une des revendications 9 à 11, dans lequel la concentration finale des phospholipides humains dans le milieu réactionnel est de 1 µM à 10 µM, particulièrement 4 µM. 13. Procédé selon l'une des revendications 9 à 12, dans lequel le volume du plasma sanguin représente de 80% à 40%, notamment de 75% à 50%, particulièrement 53% du volume du milieu réactionnel. 15 14. Procédé selon l'une des revendications 9 à 13, dans lequel le ratio entre le volume du plasma sanguin et celui de l'échantillon est de 8:1 à 2:1, particulièrement 4:1. 15. Procédé selon l'une des revendications 9 à 14, dans lequel le thrombinogramme est obtenu par la méthode de la thromboélastographie ou la méthode de thrombinographie. 20 16. Procédé selon l'une des revendications 9 à 15, comprenant les étapes suivantes : a) le mélange d'un échantillon avec un plasma sanguin humain représentant 53% du volume du milieu réactionnel, dans lequel le ratio entre le volume du plasma sanguin et celui de l'échantillon est de 8 :1 à 2 :1, particulièrement 4 :1 pour former un milieu réactionnel 25 intermédiaire ; b) l'ajout dans le milieu réactionnel intermédiaire obtenu à l'étape précédente d'un mélange comprenant 4µM des phopholipides, et 3pM du facteur tissulaire humain et CaClz, pour former un milieu réactionnel; c) l'obtention d'un thrombinogramme par la mise en oeuvre de thrombinographie, en effectuant 30 un test de génération de thrombine sur le milieu réactionnel obtenu à l'étape b) ; d) la comparaison d'au moins l'un des paramètre du thrombinogramme obtenu à l'étape c) à un paramètre homologue obtenu à partir de thrombinogrammes standards établis sur la base d'une série de calibrateurs dont le pouvoir thrombogéne lié à la présence du facteur XI activé et/ou du facteur IX activé est connu et varie entre chaque calibrateur ; 10e) la déduction de l'étape d) du pouvoir thrombogéne lié à la présence du facteur XI activé et/ou du facteur IX activé dans l'échantillon.
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